KR20120104619A

KR20120104619A - 인자 ｖｉｉ 폴리펩티드의 액상 수성 약학적 조성물

Info

Publication number: KR20120104619A
Application number: KR1020127020292A
Authority: KR
Inventors: 마이클 벡 젠슨; 앤더스 클라스코브 피터센; 앤드류 네일 보울러
Original assignee: 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트
Priority date: 2003-08-14
Filing date: 2004-08-12
Publication date: 2012-09-21
Also published as: JP2007502252A; EP1656158B1; US20100056453A1; US8026214B2; NO20061185L; US8318904B2; MXPA06001698A; EP1656158A2; ZA200601250B; JP2012051893A; CN102872451A; CA2534028A1; US7732405B2; BRPI0413518A; AU2004264282B2; KR20060061829A; US20130084274A1; WO2005016365A3; IL173332A0; RU2006103281A

Abstract

본 발명은 인자 VII 폴리펩티드를 함유하는 화학적 및/또는 물리적 분해에 대해 안정한 액상 수성 약학 조성물, 그러한 조성물을 함유하는 작은병은 물론이고, 인자 VII-반응 증후군을 치료하는데 있어서 그러한 조성물의 사용에 관한 것이다. 주요 구체예는 적어도 0.01 mg/ml의 인자 VII 폴리펩티드 (i); pH를 약 4.0 내지 약 9.0의 범위에 유지시키기에 적합한 완충제 (ii); 및 -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 적어도 하나의 안정화제(iii), 예를 들어, 아르기닌과 같은 벤자미딘 화합물 및 구아니딘 화합물을 포함하는 액상 수성 약학 조성물로 나타낸다.

Description

인자 ＶＩＩ 폴리펩티드의 액상 수성 약학적 조성물{LIQUID, AQUEOUS PHARMACEUTICAL COMPOSITION OF FACTOR VII POLYPEPTIDES}

본 발명은 인자 VII 폴리펩티드를 함유하는 액상 수성 약학적 조성물, 및 제조 방법 및 그러한 조성물의 사용 방법은 물론이고, 그러한 조성물을 함유하는 용기, 및 인자 VII-반응 증후군의 치료에서 그러한 조성물의 사용에 관한 것이다. 보다 구체적으로는, 본 발명은 화학적 및/또는 물리적 분해에 대해 안정화된 액체 조성물에 관한 것이다.

인자 VII (FVII), 혈장 글리코단백질을 포함하는, 혈액 응고 과정에 수반된 다양한 인자들이 확인되었다. 응고는 혈관 벽의 손상 후에 순환하는 혈액에 노출되는 조직 인자 (TF)과, 총 FVII 단백질 질량의 약 1%에 해당하는 양으로 순환에 존재하는 FVIIa 사이에서 복합체의 형성에 의해 개시된다. FVII는 주로 FXa에 의해 그것의 두개의 사슬, 활성화 형태, FVIIa으로 분할되는 단일-사슬 효소원으로서 혈장에 존재한다. 재조합 활성화 인자 VIIa (rFVIIa)가 프로(pro)-지혈제로서 개발되었다. rFVIIa의 투여는 항체 형성으로 인해 다른 응고 인자 생성물로 치료될 수 없는, 출혈이 있는 혈우병 개체에서 신속하고 매우 효과적인 프로-지혈 반응을 제공한다. 또한 인자 VII 결핍을 갖는 개체 또는 정상 응고 시스템을 갖고 있지만 과도한 출혈을 경험하는 개체에서의 출혈은 성공적으로 FVIIa으로 치료될 수 있다.

저장과 운반 모두를 위해 적절한 인자 VIIa의 투여 형태를 가지는 것이 바람직하다. 이상적으로, 약물 제품은 액체로 저장되고 투여된다. 대안적으로는, 약물 제품은 감압하 동결건조되고, 즉, 냉동-건조되고, 그후 환자에게 사용하기 전에 적절한 희석제를 첨가함으로써 재구성된다. 이상적으로는, 약물 제품은 장기간 저장, 즉, 6개월이상 보존하기에 충분한 안정성을 가진다.

완성된 약물 제품을 액체로서 유지할 것인지 또는 냉동-건조할 것인지의 결정은 보통 그러한 형태에서 단백질 약물의 안정성에 근거한다. 단백질 안정성은 그중에서도 특히 이온 강도, pH, 온도, 냉동/해동의 반복된 주기, 및 전단력에의 노출과 같은 인자들에 의해 영향을 받을 수 있다. 활성 단백질은 예를 들어, 몇가지만 언급하면, 가수분해, 탈아미드화, 이성화, 및 산화를 포함하여, 화학적 불안정은 물론이고, 변성 및 응집 (둘다 가용성 및 불용성 응집체 형성)을 포함하는 물리적 불안정의 결과로서 없어질 수 있다. 단백질 제약의 안정성의 일반적인 리뷰를 위해서는, 예를 들어, Manning, etal., Pharmaceutical Research 6: 903-918 (1989)를 참고하라.

단백질 불안정의 가능한 발생이 널리 고려되지만, 특정한 단백질의 특정한 불안정성 문제를 예측하는 것은 불가능하다. 이들 불안정의 어떤 것은 낮아진 활성, 증가된 독성, 및/또는 증가된 면역원성을 갖는 단백질 부산물 또는 유도체의 형성을 초래할 수 있다. 사실, 단백질 침전은 막힌 주사기는 물론이고 혈전증, 투약 형태와 양의 비-균질성을 초래할 수 있다. 더나아가, 후-번역 변경, 예를 들어, N-말단에서 특정 글루탐산 잔기의 감마 카르복실화 및 카르보히드레이트 측쇄의 첨가는 저장할때 변경에 민감할 수 있는 잠재 부위를 제공한다. 또한, 인자 VIIa에 특이성은 자가촉매작용으로 인한 세린 프로테아제, 분절이 일어날 수 있다(효소 분해). 따라서, 단백질의 어떠한 조성의 안정성 및 효능이 그것의 안정성과 직접 관련된다. 액체 형태로 안정성을 유지하는 것은 분자 운동에 대한 크게 증가된 잠재력과 그로인해 분자 상호작용의 증가된 확률때문에 일반적으로 감압하 동결건조된 형태로 안정성을 유지하는 것과 다르다. 농축된 형태로 안정성을 유지하는 것은 또한 증가된 단백질 농도에서 응집체 형성을 위한 성향 때문에 상기와 다르다.

액체 조성물을 개발할때, 많은 인자들이 고려된다. 단기간, 즉, 6개월 미만, 액체 안정성은 일반적으로 변성과 응집과 같은 전체의 구조변화를 피하는 것에 의존한다. 이들 과정은 많은 단백질에 대해서 문헌에 기술되고, 안정화제의 많은 예가 존재한다. 하나의 단백질을 안정화하는데 효과적인 약제는 실제로 또다른것을 불안정하게 작용한다는 것이 잘 알려져있다. 일단 단백질이 전체 구조 변화에 대해서 안정해지면, 장기간(예를 들어, 6개월 이상) 안정성을 위한 액체 조성물은 그 단백질에 대해 특정한 분해의 타입으로부터 단백질을 더욱 안정화하는데 의존한다. 분해의 보다 특정한 타입은 예를 들어, 디술피드 결합 뒤섞임, 특정 잔기의 산화, 탈아미드화, 고리화를 포함할 수 있다. 비록 개별적인 분해 종을 정확하게 지적하는 것이 언제나 가능하지는 않지만, 특정한 부형제의 관심의 단백질을 유일하게 안정화하는 능력을 모니터링하기 위해 분석들은 미묘한 변화를 모니터하기 위해 개발된다.

조성물의 pH는 주사/주입 시에 생리학적으로 적절한 범위에 있는 것이 바람직하고, 그렇지않으면 환자의 고통과 불편함이 초래될 수 있다.

단백질 조성물의 일반적인 리뷰를 위해서는, 예를 들어, Cleland et al. : The development of stable protein compositions: A closer look at protein aggregation, deamidation and oxidation, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 1993, 10 (4): 307-377; and Wang et al., Parenteral compositions of proteins and peptides: Sta- bility and stabilizers, Journal of Parenteral Science and Technology 1988 (Supplement), 42 (2S)를 참조하라.

인자 VIIa은 몇가지 경로, 특히 응집 (이합체화), 산화, 및 자가용해 분할 (펩티드 백본의 클립핑)를 통해 분해한다. 더나아가, 침전이 일어날 수 있다. 이들 반응의 다수는 단백질로부터의 물의 제거에 의해 상당히 느려질 수 있다. 그러나, 인자 VIIa에 대한 수성 조성물의 개발은 제품의 사용을 임상적으로 간소화하는 것은 물론이고 재구성 오류를 제거하는 이점을 가지고, 그로인해 투약 정확도를 증가시키고, 그로인해 환자 순응도를 증가시킨다. 이상적으로는, 인자 VIIa의 조성은 넓은 범위의 단백질 농도에 걸쳐서 6개월 이상동안 안정해야한다. 이는 투여의 방법에 있어서 융통성을 허용한다. 일반적으로, 보다 고도로 농축된 형태는 더 낮은 부피의 투여를 허용하고, 이는 환자의 관점으로부터 매우 바람직하다. 액체 조성물은 투여 및 사용의 용이함에 대해서 냉동-건조된 생성물보다 많은 이점을 가질 수 있다.

오늘날, 유일하게 시중에서 입수가능한, 재조합으로 만들어진 FVII 폴리펩티드 조성물은 사용하기 전에 재구성되는 냉동-건조된 인자 FVIIa 생성물이다; 그것은 비교적 낮은 인자 VIIa 농도, 예를 들어, 약 0.6 mg/mL을 함유한다. NovoSeven^®(Novo Nordisk A/S, Denmark)의 물약병 (1.2 mg)은 1.2 mg 재조합 사람 인자 VIIa, 5.84 mgNaCl, 2.94 mg CaCl₂, 2H₂0, 2.64 mg 글리신글리신(GlyGly), 0. 14 mg 폴리소르베이트 80, 및 60.0 mg 만니톨을 함유하고; 그것은 주사 (WFI)를 위해 2.0 mL 물에 의해서 pH 5.5으로 재구성된다. 재구성될 때, 단백질 용액은 24 시간동안 사용하기에 안정하다. 따라서, 액체 사용할 준비가 되었거나-또는 농축된 인자 VII 생성물은 현재 어떤것도 시중에서 구입할 수 없다.

본 발명은 이제, -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 적어도 하나의 안정화제(iii)와 함께 액상, 수성 약학 조성물로 조제할때 인자 VII 또는 그것의 유사체("인자 VII 폴리펩티드")가 향상된 안정성을 나타내고 그로인해 실제 사용 전에 연장된 저장을 허용한다는 것을 발견하였다.

따라서, 본 발명의 하나의 관점은 다음을 포함하는 액상 수성 약학 조성물에 관한 것이다:

적어도 0.01 mg/ml의 인자 VII 폴리펩티드 (i)

pH를 약 4.0 내지 약 9.0의 범위에 유지시키기에 적합한 완충제 (ii); 및

-C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 적어도 하나의 안정화제(iii), 상기식에서

Z¹과 Z²는 독립적으로 -O-,-S-,-NR^H- 및 단일 결합으로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 R^H은 수소, C₁ _-4-알킬, 아릴 및 아릴메틸로 구성되는 군으로부터 선택되고, R¹과 R²는 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C₁ _-6-알킬, 선택적으로 치환된 C₂ _-6-알케닐, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로시클릴로 구성되는 군으로부터 선택되고, 또는

Z² 과 R²는 위에서 정의된 바와 같고 -C=N-Z¹-R¹ 는 헤테로환 고리의 일부를 형성하고, 또는

Z¹과 R¹은 위에서 정의된 바와 같고 -C-NH-Z²-R²는 헤테로환 고리의 일부를 형성하고, 또는

-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 는 헤테로환 고리를 형성하고 이때 -Z¹-R^l-R²-Z²-은 바이라디칼이다.

본 발명의 두번째 관점은 pH를 약 4.0 내지 약 9.0의 범위로 유지시키기에 적합한 완충제 (ii); 및 -C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 적어도 하나의 안정화제(iii)를 포함하는 용액중의 적어도 0.01 mg/ml의 농도로 인자 VII 폴리펩티드 (i)를 제공하는 단계를 포함하는, 인자 VII 폴리펩티드의 액상 수성 약학 조성물의 제조 방법에 관한 것이고, 상기식에서

본 발명의 세번째 관점은 약제로서 사용하기 위해 위에서 정의된 바와 같은 액상 수성 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 네번째 양태는 인자 VII-반응 증후군을 치료하기 위한 약제의 제조를 위해 위에서 정의된 바와 같이 액상 수성 약학 조성물의 사용에 관한 것이다.

본 발명의 다섯번째 관점은 위에서 정의된 바와 같은 액상 수성 약학 조성물의 효과적인 양을 그것을 필요로하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 인자 VII-반응 증후군을 치료하기 위한 방법에 관한 것이다.

본 발명의 여섯번째 관점은 위에서 정의된 바와 같은 액상 수성 약학 조성물 및 선택적으로 비활성 가스를 함유하는 기밀 용기에 관한 것이다.

따라서, 본 발명의 목적은 더나아가 효소 분해 또는 자가촉매작용 생성물과 같은 화학적 및/또는 물리적 분해 생성물의 허용가능한 제어를 제공하는 , 액상 수성 인자 VII 폴리펩티드 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

발명의 개요

적어도 0.01 mg/ml의 인자 VII 폴리펩티드 (i)

발명의 상세한 설명

위에서 언급한 바와 같이, 본 발명은 인자 VII 폴리펩티드를 포함하는, 신규 안정화 액상 수성 약학 조성물의 개발에 있다. 보다 구체적으로는, 액상 수성 약학 조성물은

적어도 0.01 mg/ml의 인자 VII 폴리펩티드 (i)

-C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 적어도 하나의 안정화제 (iii)를 포함하고, 상기식에서

Z² 과 R²는 위에서 정의된 바와 같고 -C=N-Z¹-R¹는 헤테로환 고리의 일부를 형성하고, 또는

용어 "C₁ _-6-알킬"은 1-6 탄소 원자를 가지고 선형 또는 분지형이 될 수 있는 비환식 및 환식 포화 탄화수소 잔기를 포함하려는 의도이다. 특정한 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, 씨클로프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 씨클로프로필메틸, n-펜틸, 이소펜틸, n-헥실, 등이다. 유사하게는, 용어 "C₁ _-4-알킬" 는 1- 4 탄소 원자를 가지고 선형 또는 분지형이 될 수 있는 비환식 및 환식 포화 탄화수소 잔기를 포함한다.

유사하게는, 용어 "C₂ _-6-알케닐"은 2-6 탄소 원자를 가지고 선형 또는 분지형이 될 수 있는 하나의 불포화 결합을 포함하는 비환식 및 환식 탄화수소 잔기를 포함하도록 의도된다. C₂ _-6-알케닐 기의 예는 비닐, 알릴, 부트-1-엔-1-일, 부트-2-엔-1-일, 펜트-1-엔-1-일, 및 헥스-1-엔-1-일이다.

C₁ _-6-알킬 및 C₂ _-6-알케닐 기와 연결하여 용어 "선택적으로 치환된"은 문제의 기가 히드록시,C₁ _-6-알콕시 (즉, C₁ _-6-알킬-옥시), C₂ _-6-알케닐옥시, 옥소 (케토 또는 알데히드 작용성을 형성하는), 아릴, 아릴옥시, 아릴카르보닐, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴옥시, 헤테로시클릴카르보닐, 아미노, 모노-및 디(C₁ _-6-알킬) 아미노, 할로겐으로 구성되는 군으로부터 선택된 기(들)로, 한번 또는 몇번, 바람직하게는 1-3 번 치환될 수 있고, 이때 어떠한 아릴과 헤테로시클릴은 구체적으로 아래에 기술된 바와 같이 선택적으로 치환된 아릴 및 헤테로시클릴을 위해 치환될 수 있다는 것을 나타내려는 의도이다.

"할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모, 및 요오도를 포함한다.

본원에서 사용될 때, 용어 "아릴"은 완전히 또는 부분적으로 페닐, 나프틸, 1,2, 3,4-테트라히드로나프틸, 안트라실, 페난트라실, 피레닐, 벤조피레닐, 플루오레닐 및 크산테닐와 같은 방향족 탄소고리식 고리 또는 고리 시스템을 의미하도록 의도되며, 그중에서 페닐이 바람직한 예이다.

용어 "헤테로시클릴"는 한개 이상의 탄소 원자가 헤테로원자, 예를 들어 질소 (=N-또는 -NH), 황(-S-), 및/또는 산소(-O-) 원자로 치환된, 포화, 부분적으로 불포화, 부분적으로 방향족 또는 완전히 방향족 탄소고리식 고리 또는 고리 시스템을 의미하도록 의도된다. 그러한 헤테로시클릴 기의 예는 옥사졸릴,옥사졸리닐, 옥사졸리디닐, 이속사졸릴, 이속사졸리닐, 이속사졸리디닐, 옥사디아졸릴, 옥사디아졸리닐, 옥사디아졸리디닐, 티아졸릴,이소티아졸릴, 피롤릴, 피롤리닐, 피롤리디닐, 이미다졸릴, 아미다졸리닐, 아미다졸리디닐, 피라졸릴, 피리디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 피페리디닐, 코우마릴,푸릴, 퀴놀릴, 벤조티아졸릴, 벤조트리아졸릴, 벤조디아졸릴, 벤즈옥소졸릴, 디아졸릴, 디아졸리닐, 디아졸리디닐, 트리아졸릴, 트리아졸리닐, 트리아졸리디닐, 테트라졸 등이다. 바람직한 헤테로시클릴 기는 이속사졸릴, 이속사졸리닐,옥사디아졸릴, 옥사디아졸리닐, 피롤릴, 피롤리닐, 디아졸릴, 디아졸리닐, 트리아졸릴, 트리아졸리닐, 이미다졸릴, 아미다졸리닐, 등과 같은 5-, 6-또는 7원 모노환식 기 이다.

용어 "헤테로환 고리"는 "헤테로시클릴" 하에서 정의된 것들에 대응하는 고리를 의미하도록 의도된다.

용어 "아릴","헤테로시클릴" 및 "헤테로환 고리"와 연결하여, 용어 "선택적으로 치환된"은 문제의 기가 히드록시 (그것이 에놀 시스템에 존재할때 호변체 케토 형태로 나타낼 수 있다), C₁ _-6-알킬,C₂ _-6-알케닐, 페닐, 벤질, C₁ _-6-알콕시, 옥소 (이것은 호변체 에놀 형태로 존재할 수 있음), 카르복시, C₁ _-6-알콕시카르보닐, C₁ _-6-알킬카르보닐, 아미노, 모노-및 디(C₁ _-6-알킬) 아미노, 디할로겐-C₁ _-4-알킬, 트리할로겐-C₁ _-4-알킬 및 할로겐으로부터 선택된 기(들)로, 한번 또는 몇번, 바람직하게는 1-3 번, 치환될 수 있다는 것을 나타내려는 의도이다. 치환기의 가장 전형적인 예는 히드록실,C₁ _-4-알킬, 페닐, 벤질, C₁ _-4-알콕시, 옥소, 아미노, 모노-및 디메틸아미노 및 할로겐이다.

R¹ 및 R²은 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C₁ _-6-알킬, 선택적으로 치환된 C₂ _-6-알케닐, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로시클릴로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다는 사실 이외에, 또한 -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R² 모티프의 일부는 헤테로환 고리의 일부가 될 수 있는 반면, 모티프의 다른 부분은 각각 Z¹,Z²,R¹ 및 R² 에 대해 정의된 의미를 가지는 것이 가능하다. 일부 흥미로운 구체예에서, -C=N-Z¹-R^l은 1,2-디아졸 고리, 이속사졸 고리, 1,2,4-트리아졸 고리, 및 1, 2, 4-옥사디아졸 고리로 구성되는 군으로부터 선택된 헤테로환 고리의 일부를 형성할 수 있고, 또는 -C-NH-Z²-R² 는 1, 2-디아졸린 고리, 이속사졸린 고리, 1,2, 4-트리아졸린 고리, 및 1,2, 4-옥사디아졸린 고리로 구성되는 군으로부터 선택된 헤테로환 고리의 일부를 형성할 수 있다. 그러한 헤테로환 고리는 위에서 기술된 바와 같이 치환될 수 있다.

일부 구체예에서, 적어도 하나의 R¹ 및 R²는 수소, 예를 들어 둘다 수소이다. 더 나아가, 전에 언급한 구체예와 조합될 수 있는 일부 구체예에서, Z¹와 Z² 중 적어도 하나는 단일 결합, 예를 들어 둘다 단일 결합이다. 특별한 구체예에서,R¹ 와 R²는 모두 수소이고, Z¹와 Z² 는 둘다 단일 결합이다.

-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 모티프가 안정화제(iii)의 안정화 효과에 특히 중요하고 믿어진다. 특히, -C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 모티프는 인자 VII 폴리펩티드에 대해서 기질의 아르기닌 부분을 흉내낸다고 믿어진다.

보다 특정한 구체예에서, 안정화제(iii)는 -C-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 아미딘 화합물 및 > N-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 구아니딘 화합물로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나이다.

일부 구체예에서, 안정화제(iii)는 모티프-C₆H₄-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R²을 포함하는 벤자미딘으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미딘 화합물이고, 이때 C₆H₄ 는 선택적으로 치환된 벤젠 고리를 나타내고, 이것의 벤자미딘 (R¹과 R²는 수소이고 Z¹과 Z²는 단일 결합이다)은 특정한 구체예를 구성한다.

그것의 다른 특정한 구체예에서, 벤자미딘은 모티프 > N-C₆H₄-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R²를 포함하고, 이때 C₆H₄는 선택적으로 치환된 벤젠 고리, 즉, o-아미노-벤자미딘, m-아미노-벤자미딘 또는 p-아미노-벤자미딘을 나타내고, 그것의 p-아미노-벤자미딘과 같은 p-아미노-벤자미딘은 현재 가장 전도유망하다.

p-아미노-벤자미딘의 더나아간 실례는 EP 1 162 194 Al에서 Aventis에 의해 개시된 것들, 특히 청구항 1-6 및 섹션 [0009]-[0052]에서 정의된 특정한 것들과, EP 1 270 551 Al에서, 특히 청구항 1 및 2 과 섹션[0010]-[0032]에서 정의된 것들을 참고하라.

또다른 구체예에서, 안정화제(iii)는 -CH₂-NH-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 구아니딘 화합물으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 구아니딘 화합물이다. 구아니딘 화합물의 예는 아르기닌, 아르기닌 유도체 및 적어도 하나의 아르기닌 잔기를 포함하는 2-5 아미노산 잔기의 펩티드로 구성되는 군으로부터 선택된 것들이다. 아르기닌은 특정한 구체예를 구성한다(실시예 부분 참조).

용어 "아르기닌 유도체"는 아르기닌 동족체, N-종말 작용화 아르기닌 (예를 들어 N-메틸화 및 N-아실화 (예를 들어아세틸화) 유도체), C-종말 작용화 아르기닌 (예를 들어 C-아미데이트화, C-알킬아미데이트화, 및 C-알킬화 유도체), 및 그것의 조합를 포함하도록 의도된다.

위에서 언급한 바와 같이, 안정화제의 하나의 결정적인 모티프는 -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R²이다. 안정화제의 다른 부분들은 또한 특히 안정화효과와 환자에 의한 내성의 최적화의 관점에서 중요할 수 있다. 전형적으로, 안정화제는 화학식 Y-C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R²을 가지며, 이때 Y는 유기 라디칼이다. 라디칼 Y는 전형적으로 안정화 효과의 효능을 향상시키기 위해서 선택된다. 또한, 라디칼 Y는 화학식 -C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R²의 한개 이상의 더 나아간 모티프를 포함할 수 있다.

안정화제의 분자량은 전형적으로 많아야 1000 Da, 이를테면 많아야 500 Da이다.

본 발명의 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심을 가질 수 있고 달리 지시되지 않으면, 분리된 입체이성체(광학 이성체), 순수한 또는 부분적으로 정화된 입체이성체 또는 그것의 라세미 혼합물이 본 발명의 범주에 포함되도록 의도된다.

안정화제 (또는 약제) (iii)의 농도는 전형적으로 적어도 1 μM이다. 바람직한 (또는 필요한) 농도는 전형적으로 선택된 안정화제 (또는 약제)에 의존하고, 보다 특별하게는 인자 VII 폴리펩티드에 대한 선택된 안정화제의 결합 친화력에 의존한다.

다른 구체예에서, 안정화제(iii)는 적어도 5 μM, 적어도 10 μM, 적어도 20 μM, 적어도 50 μM, 적어도 100 μM, 적어도 150 μM, 적어도 250 μM, 적어도 500 μM, 적어도 1 mM, 적어도 2 mM, 적어도 4 mM, 적어도 5 mM, 적어도 8 mM, 적어도 9 mM, 적어도 10 mM, 적어도 15 mM, 적어도 20 mM, 이를 테면 예를 들어 1-10000 μM, 10-10000 μM, 20-10000 μM, 50-10000 μM, 10-5000 μM, 10-2000 μM, 20-5000 μM, 20-2000 μM, 50-5000 μM, 0.1-100 mM, 0.1-75 mM, 0.1-50 mM, 0.1-10 mM, 0.2-75 mM, 0.2-50 mM, 0.2-20 mM, 0.5-75 mM, 또는 0.5-50 mM의 범위로 존재한다.

하나의 구체예에서, 안정화제(iii)는 벤자미딘이고 비록 치환된 벤자미딘이 그들이 더 낮은 농도로 첨가될 수 있다는 어떤 이유때문에 보다 효능이 있을 수 있다고 파악되지만, 상기 작용제의 농도는 적어도 1 mM, 이를테면 적어도 2 mM이다.

하나의 구체예에서, 안정화제(iii)는 벤자미딘이 아니다.

하나의 구체예에서, 안정화제(iii)는 아르기닌이고 상기 작용제의 농도는 적어도 10 mM, 이를테면 적어도 50 mM이다.

또다른 구체예에서, 안정화제(iii)는 p-아미노-벤자미딘이고 상기 작용제의 농도는 적어도 0.001mM이다.

또다른 구체예에서, 안정화제(iii)는 하기 화학식을 갖는 S-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-[1-(3-메톡시페닐)-에틸]-아세트아미드이고, 상기 작용제의 농도는 적어도 0.001 mM이다.

또다른 구체예에서, 안정화제(iii)는 하기의 화학식을 갖는 S-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-(1-페닐에틸)-아세트아미드이고, 상기 작용제의 농도는 적어도 0.001 mM이다.

또다른 구체예에서, 안정화제(iii)는 하기 화학식을 갖는 N-(3-브로모벤질)-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-아세트아미드이고, 상기 작용제의 농도는 적어도 0.001 mM이다.

다양한 구체예에서, 안정화제(iii)와 FVII 폴리펩티드 (약제(iii) : FVII)사이의 몰비는 : 0.1이상, 0.5이상, 1이상, 2이상, 5이상, 10이상, 25이상, 100이상, 250이상, 1000이상, 2500이상, 또는 5000이상, 이를테면, 예를 들어, 0.1-10000, 0.1-5000, 0.1-2500, 0. 1-1000, 0.1-250, 0.1-100, 0.1-25, 0.1-10, 0.5-10000, 0.5-5000, 0.5-2500, 0.5-1000, 0.5-250, 0.5-100, 0.5-25, 0.5-10, 1-10000, 1- 5000, 1-2500, 1-1000, 1-250, 1-100 ; 1-25 ; 1-10, 10-10000,10-5000, 10-250,1000-10000, 또는 1000-5000의 범위이다.

바람직한 농도는 전형적으로 선택된 안정화제 (또는 약제), 보다 명확하게는 선택된 약제의 인자 VII 폴리펩티드에 대한 결합 친화력에 의존한다.

비록 다른 활성 성분들이 인자 VII 폴리펩티드와 조합하여 포함될 수 있지만, 약학 조성물의 생물학적 효과는 주로 인자 VII 폴리펩티드의 존재의 탓이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인자 VII 폴리펩티드"는 야생형 인자 VII에 비해서 실질적으로 동일하거나 개선된 생물학적 활성을 나타내는 인자 VII의 변종은 물론이고, 야생형 인자 VII (즉, 미국 특허 No. 4, 784, 950에 개시된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드)를 포함한다. 용어 "인자 VII"는 단백질 가수분해로 가공되어 지정된 인자 VIIa이 될 수 있는 그들의 각각의 생활성 형태를 산출한 것들은 물론이고, 그들의 분할되지 않은 (효소원) 형태로 인자 VII 폴리펩티드를 포함하도록 의도된다. 전형적으로, 인자 VII는 잔기 152와 153 사이에서 분할되어 인자 VIIa를 수득한다. 용어 "인자 VII 폴리펩티드"는 또한 변종을 포함하여 폴리펩티드를 포함하고, 이때 인자 VIIa 생물학적 활성은 야생형 인자 VIIa의 활성에 비해 실질적으로 변형되거나 다소 감소된다. 이들 폴리펩티드는 제한없이, 폴리펩티드의 생활성을 변경하거나 분해시키는 특정한 아미노산 서열 변 경이 도입된 인자 VII 또는 인자 VIIa를 포함한다.

혈액 응고에서 인자 VIIa의 생물학적 활성은 (i) 조직 인자 (TF)에 결합하는 능력 및 (ii)인자 IX 또는 인자 X의 단백질분해 분할을 촉매하여 활성화 인자 IX 또는 X (각각, 인자 IXa 또는 Xa)을 제조하는 능력으로부터 유도된다.

본 발명의 목적을 위해서, 인자 VII 폴리펩티드의 생물학적 활성("인자 VII 생물학적 활성")은 혈액 응고를 촉진하는 제제의 능력을 측정함으로써 정량화될 수 있다, 참조, 본원에서 기술된 분석 4. 이 분석에서, 생물학적 활성은 제어 샘플에 비해 응고 시간에서의 감소로서 표현되고 1 유닛/mL 인자 VII 활성을 함유하는 모아진 사람 혈청 표준과 비교함으로써 "인자 VII 유닛"으로 전환된다. 대안으로서는, 인자 VIIa 생물학적 활성은 (i) 인자 VIIa 또는 인자 VII-관련된 폴리펩티드가 지질 막에 끼워넣은 TF 및 인자 X를 포함하는 시스템에서 활성화 인자 X (인자 Xa)를 제조하는 능력을 측정하고 (Persson etal., J. Biol. Chem. 272: 19919-19924,1997) ; (ii) 수성 시스템 ("시험관내 단백질 가수분해 분석", 하기 분석 2 참조)에서 인자 X 가수분해를 측정하고; (iii) 표면 플라스몬 공명 (Persson, FEBS Letts. 413: 359-363,1997)에 기반한 기계를 사용하여, 인자 VIIa 또는 인자 VII-관련된 폴리펩티드의 TF에의 물리적 결합을 측정하고; (iv) 인자 VIIa 및/또는 인자 VII-관련된 폴리펩티드에 의한 합성 기질의 가수분해를 측정하고("시험관내 가수분해 분석", 하기 분석 1 참조) ; 또는 (v)TF-독립적 시험관내 시스템에서 트롬빈의 발생을 측정함으로써 (하기 분석 3 참조) 정량될 수 있다.

야생형 인자 VIIa에 비해 실질적으로 동일하거나 개선된 생물학적 활성을 갖는 인자 VII 변종은 위에서 기술한 바와 같은 응고 분석 (분석 4), 단백질 가수분해 분석 (분석 2), 또는 TF 결합 분석 중의 하나 이상으로 시험할때 , 동일한 세포 타입에서 제조된 인자 VIIa의 특이적 활성의 적어도 약 25%, 이를테면, 예를 들어, 적어도 약 50%, 적어도 약 75%, 또는 적어도 약 90%을 나타내는 것을 포함한다. 야생형 인자 VIIa에 비해서 실질적으로 감소된 생물학적 활성을 갖는 인자 VII 변종은 위에서 기술한 바와 같은 응고 분석 (분석 4), 단백질 가수분해 분석 (분석 2), 또는 TF 결합 분석중의 하나로 시험될 때 동일한 세포 타입에서 제조된 야생형 인자 VIIa의 특이적 활성의 약 25% 미만 예를 들어, 약 10% 미만, 또는 5% 미만을 나타내는 것들이다. 야생형 인자 VII에 비해 실질적으로 변경된 생물학적 활성을 갖는 인자 VII 변종은 제한없이, TF-독립 인자 X 단백질 가수분해 활성를 나타내는 인자 VII 변종와, TF를 결합하지만 인자 X를 분할하지는 않는 것들을 포함한다.

야생형 인자 VII와 실질적으로 동일하거나 그보다 더 우수한 생물활성을 나타내거나, 또는, 대안으로서는, 야생형 인자 VII에 비해서 실질적으로 변경된 또는 감소된 생물활성을 나타내는, 인자 VII의 변종은 제한없이, 하나 이상의 아미노산의 삽입, 결손, 또는 치환에 의해 야생형 인자 VII의 서열과는 다른 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다.

야생형 인자 VII와 실질적으로 동일한 생물학적 활성을 갖는 인자 VII 변종의 비제한 예는 S52A-FVIIa, S60A-FVIIa (Lino et al., Arch. Biochem. Biophys. 352: 182-192,1998) ; 미국 특허 No. 5,580, 560에 개시된 바와 같은 증가된 단백질 가수분해 안정성을 나타내는 FVIIa 변종; 잔기 290와 291 사이에서 또는 잔기 315와 316사이에서 단백질가수분해로 분할된 인자 VIIa (Mollerup et al., Biotechnol. Bioeng. 48: 501-505,1995) ; 인자 VIIa의 산화된 형태 (Kornfelt et al., Arch. Biochem. Biophys. 363: 43-54,1999) ; PCT/DK02/00189에 개시된 바와 같은 FVII 변종 ; 및 WO 02/38162에서 개시된 바와 같이 증가된 단백질 가수분해 안정성을 나타내는 FVII 변종 (Scripps Research Institute); WO 99/20767에서 개시된 바와 같은 변경된 Gla-도메인을 갖고 강화된 막 결합을 나타내는 FVII 변종(University of Minnesota); 및 WO 01/58935에서 개시된 바와 같은 FVII 변종(Maxygen ApS)를 포함한다.

야생형 FVIIa과 비교하여 증가된 생물학적 활성을 갖는 인자 VII 변종의 비제한 예는 WO01/83725, WO 02/22776, WO 02/077218, WO 03/27147, WO 03/37932; WO 02/38162 (Scripps Research Institute)에서 개시된 FVII 변종; 및 JP 2001061479 (Chemo-Sero-Therapeutic Res Inst.)에서 개시된 바와 같이 강화된 활성을 갖는 FVIIa 변종을 포함한다.

야생형 인자 VII에 비해 실질적으로 감소된 또는 변경된 생물학적 활성을 갖는 인자 VII 변종의 비제한 예는 R152E-FVIIa (Wildgoose etal., Biochem 29: 3413-3420,1990)을 포함한다.

인자 VII 폴리펩티드의 예는 제한없이, 야생형 인자 VII, L305V-FVII,L305V/M306D/D309S-FVII, L305I-FVII, L305T-FVII, F374P-FVII,V158T/M298Q-FVII, V158D/E296V/M298Q-FVII,K337A-FVII, M298Q-FVII, V158D/M298Q-FVII, L305V/K337A-FVII, V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII,V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII,V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII, K157A- FVII, E296V-FVII, E296V/M298Q-FVII,V158D/E296V-FVII, V158D/M298K-FVII, andS336G-FVII, L305V/K337A-FVII,L305V/V158D-FVII, L305V/E296V-FVII, L305V/M298Q- FVII,L305V/V158T-FVII,L305V/K337A/V158T-FVII,L305V/K337A/M298Q-FVII, L305V/K337A/E296V-FVII,

S314E/L305V/V158D-FVII, S314E/L305V/E296V-FVII, S314E/L305V/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158T-FVII, S314E/L305V/K337A/V158T-FVII, S314E/L305V/K337A/M298Q-FVII, S314E/L305V/K337A/E296V-FVII, S314E/L305V/K337A/V158D-FVII, S314E/L305V/V158D/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158D/E296V-FVII, S314E/L305V/V158T/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158T/E296V-FVII, S314E/L305V/E296V/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII, S314E/L305V/Vl58T/E296V/K337A-FVII, S314E/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII, S314E/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, K316H/L305V/K337A-FVII, K316H/L305V/V158D-FVII, K316H/L305V/E296V-FVII, K316H/L305V/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158T-FVII, K316H/L305V/K337A/V158T-FVII, K316H/L305V/K337A/M298Q-FVII, K316H/L305V/K337A/E296V-FVII, K316H/L305V/K337A/V158D-FVII, K316H/L305V/V158D/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158D/E296V-FVII, K316H/L305V/V158T/M298Q-FVII, K316H/L305V/\/158T/E296V-FVII, K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII, K316H/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII, K316H/L305V/V158D/K337A/lV298Q-FVII, K316H/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, K316Q/L305V/V158D-FVII, K316Q/L305V/E296V-FVII, K316Q/L305V/V158T-FVII, K316Q/L305V/K337A/V158T-FVII, K316Q/L305V/K337A/M298Q-FVII, K316Q/L305V/K337A/E296V-FVII, K316Q/L305V/K337A/V158D-FVII, K316Q/L305V/V158D/E296V-FVII, K316Q/L305V/V158T/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T/E296V-FVII, K316Q/L305V/E296V/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII, K316Q/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII, K316Q/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/K337A-FVII, F374Y/V158D-FVII, F374Y/E296V-FVII, F374Y/M298Q-FVII, F374Y/V158T-FVII, F374Y/S314E-FVII, F374Y/L305V-FVII, F374Y/L305V/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158D-FVII, F374Y/L305V/E296V-FVII, F374Y/L305V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/V158T-FVII, F374Y/L305V/S314E-FVII, F374Y/K337A/S314E-FVII, F374Y/K337A/V158T-FVII,

F374Y/K337A/M298Q-FVII, F374Y/K337A/E296V-FVII, F374Y/K337A/V158D-FVII, F374Y/V158D/S314E-FVII, F374Y/V158D/M298Q-FVII, F374Y/V158D/E296V-FVII, F374Y/V158T/S314E-FVII, F374Y/V158T/M298Q-FVII, F374Y/V158T/E296V-FVII, F374Y/E296V/S314E-FVII, F374Y/S314E/M298Q-FVII, F374Y/E296V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/K337A/V158D-FVII, F374Y/L305V/K337A/E296V-FVII, F374Y/L305V/K337A/M298Q-FVII, F374Y/L305V/K337A/V158T-FVII, F374Y/L305V/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V-FVII, F374Y/L305V/V158D/M298Q-FVII, F374Y/L305V/V158D/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/E296V/V158T-FVII, F374Y/L305V/E296V/S314E-FVII, F374Y/L305V/M298Q/V158T-FVII, F374Y/L305V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158T/S314E-FVII, F374Y/K337A/S314E/V158T-FVII, F374Y/K337A/S314E/M298Q-FVII, F374Y/K337A/S314E/E296V-FVII, F374Y/K337A/5314E/V158D-FVII, F374Y/K337A/V158T/M298Q-FVII, F374Y/K337A/V158T/E296V-FVII, F374Y/K337A/M298Q/E296V-FVII, F374Y/K337A/M298Q/V158D-FVII, F374Y/K337A/E296V/V158D-FVII, F374Y/V158D/S314E/M298Q-FVII, F374Y/V158D/S314E/E296V-FVII, F374Y/V158T/S314E/EZ96V-FVIIt F374Y/V158T/M298Q/E296V-FVII, F374Y/E296V/S314E/M298Q-FVII, F374Y/L305V/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/K337A/S314E-FVII, F374Y/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/Vl58D/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/VI58D/E296V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/K337A/S314E-FVII, F374Y/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/Vl58D/E296V/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158D/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/S314E-FVII, F374Y/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/V158T/E296V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/V158T/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/V158T/E296V/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII, F374Y/L305V/V158T/M298Q/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158T/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158T/E296V/S314E-FVII, F374Y/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E- FVII, F374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/V158T/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T-FVII, F374Y/L305V/E296V/K337A/V158T/S314E-FVII,

K316H/L305V/E296V/M298Q-FVII,F374Y/L305V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII, F374Y/L305V/V158D/E296V/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII, F374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII,F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII, S52A-인자 VII, S60A-인자 VII;R152E-인자 VII, S344A-인자 VII, Gla 도메인이 부족한 인자 VIIa; 및 P11Q/K33E-FVII, T106N-FVII,K143N/N145T-FVII, V253N-FVII, R290N/A292T-FVII, G291N-FVII, R315N/V317T-FVII,K143N/N145T/R315N/V317T-FVII ; 및 233Thr 내지 240Asn의 아미노산 서열에서 치환, 첨가 또는 결손을 갖는 FVII, 304Arg 내지 329Cys의 아미노산 서열에서 치환, , 첨가 또는 결손을 갖는 FVII, 및 아미노산 서열 Ilel53-Arg223에서 치환, 결손, 또는 추가를 갖는 FVII을 포함한다.

일부 구체예에서, 인자 VII 폴리펩티드는 사람 인자 VIIa (hFVIIa), 바람직하게는 재조합으로 만들어진 사람 인자 VIIa(rhVIIa)이다.

다른 구체예에서, 인자 VII 폴리펩티드는 인자 VII 서열 변종이다.

일부 구체예에서, 인자 VII 폴리펩티드는 야생형 사람 인자 VII와는 다른 글리코실화를 가진다.

다양한 구체예에서, 예를 들어 인자 VII 폴리펩티드가 인자 VII-관련된 폴리펩티드 또는 인자 VII 서열 변종인 것들, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 "시험관내 단백질 가수분해 분석" (분석 2)으로 시험될 때, 인자 VII 폴리펩티드의 활성과 선천적인 사람 인자 VIla(야생형FVIIa)의 활성 사이의 비는 적어도 약 1.25, 바람직하게는 적어도 약 2.0, 또는 4.0, 가장 바람직하게는 적어도 약 8.0이다.

일부 구체예에서, 인자 VII 폴리펩티드는 인자 VII-관련된 폴리펩티드, 특히 변종이며, 이때 "시험관내 가수분해 분석" (하기 분석 1)으로 시험될 때 상기 인자 VII 폴리펩티드의 활성과 선천적인 사람 인자 VIIa (야생형FVIIa)의 활성 사이의 비가 적어도 약 1.25 이고; 다른 구체예에서, 비는 적어도 약 2.0이고 ; 더 나아간 구체예에서, 비는 적어도 약 4.0이다.

약학적 조성물에서, 종종 활성 성분의 농도는 단위 복용량의 적용은 환자에게 불필요한 불편을 초래하지 않도록 하는 것이 바람직하다. 따라서, 약 2-10 mL 이상의 단위 복용량은 종종 바람직하지 않다. 본 발명의 목적을 위해, 인자 VII 폴리펩티드의 농도는 따라서 적어도 0.01 mg/mL이다. 다른 구체예에서, 인자 VII 폴리펩티드는 0.01-20 mg/mL; 0.1-10 mg/mL; 0.5-5.0 mg/mL; 0.6-4.0 mg/mL;1.0-4.0 mg/mL; 0.1-5 mg/mL; 0.1-4.0 mg/mL; 0.1-2 mg/mL; 또는 0.1-1.5 mg/mL의 농도로 존재한다.

인자 VIIa 농도는 보통 43,000-56,000 IU 이상으로 나타나는 1 mg 과 함께, mg/mL 또는 IU/mL으로 편리하게 표현된다.

사람과 같은 포유동물에 직접 비경구 투여하기에 유용한 액상 수성 약학 조성물을 만들기 위해서, 정상적으로는 조성물의 pH 값은 약 4.0 내지 약 9.0과 같은적당한 한계 내에서 유지되는 것이 필요하다. 주어진 조건하에서 적절한 pH 값을 보장하기 위해서, 약학적 조성물은 또한 pH를 약 4.0 내지 약 9.0의 범위에 유지시키기에 적합한 완충제 (ii)를 포함한다.

용어 "완충제"는 약 4.0 내지 약 9.0의 허용가능한 범위에서 용액 pH를 유지하는 그러한 약제 또는 약제들의 조합을 포함한다.

하나의 구체예에서, 완충제 (ii)는 MES, PIPES, ACES, BES, TES, HEPES, 트리스, 히스티딘, 이미다졸, 글리신, 글리실글리신, 글리신아미드, 인산, 아세트산 (예를 들어 아세트산 나트륨), 락트산, 글루타르산, 시트르산, 타르타르산, 말산, 말레산, 및 숙신산의 산과 염으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 성분이다. 완충제는 두개 이상의 성분들의 혼합물을 포함할 수 있다는 것이 이해되어야 하고, 이때 혼합물은 명시된 범위에서 pH 값을 제공할 수 있다. 예로서 아세트산과 아세트산 나트륨, 등이 언급될 수 있다.

완충제의 농도는 용액의 바람직한 pH를 유지하기 위해 선택된다. 다양한 구체예에서, 완충제의 농도는 1-100 mM;1-50 mM;1-25 mM; 또는 2-20 mM이다.

하나의 구체예에서, 조성물의 pH는 약 4.0 내지 약 9.0 ; 이를테면 약 5.0 내지 약 9.0 ; 약 5.0 내지 약 8.0 ; 약 5.0 내지 약 7.5, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 6.5 ; 약 5.0 내지 약 6.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 약 5.5 내지 약 6.5; 약 6.0 내지 약 7.0 ; 약 6.0 내지 약 6.5 ; 약 6.3 내지 약 6.7, 또는 약 5.2 내지 약 5.7로 유지된다.

3가지 필수 성분들에 더하여, 액상수성 약학적 조성물은 조성물의 제조, 조제, 안정성 또는 투여에 유익한 추가의 성분들을 포함할 수 있다.

따라서, 약학적 조성물은 또한 비-이온성 계면활성제를 포함할 수 있다. 계면활성제(또한 세제로도 알려짐)는 일반적으로 공기/용액 계면 유발된 응력과 용액/표면 유발된 응력으로부터 단백질을 보호하는 약제들을 포함한다 (예를 들어 단백질 응집을 초래함).

비이온성 계면활성제의 전형적인 타입은 폴리소르베이트, 폴옥사머, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 폴리에틸렌/폴리프로필렌 블록 코폴리머, 폴리에틸렌글리콜 (PEG), 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, 및 폴리옥시에틸렌 피마자유로부터 선택된 적어도 하나이다.

비이온성 계면활성제의 실례는 Tween®, 폴리소르베이트20, 폴리- 소르베이트80, Brij-35 (폴리옥시에틸렌 도데실 에테르),폴옥사머 188, 폴옥사머 407, PEG8000, Pluronic® 폴리올, 폴리옥시-23-라우릴 에테르, Myrj 49, Solutol HS15, 및 Cremophor A이다.

하나의 구체예에서, 비이온성 계면활성제는 0.005- 2.0중량%의 양으로 존재한다.

또한 조성물은 조성물은 장성 변경제 (v)를 포함할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "장성 변경제"는 용액의 삼투질농도에 기여하는 약제를 포함한다. 장성 변경제(v)는 중성 염, 아미노산, 2-5 아미노산 잔기의 펩티드, 단당류, 이당류, 다당류, 및 당 알코올으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 약제를 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 두개 이상의 그러한 약제를 조합하여 포함한다.

"중성염"이란 수성 용액에 용해될 때 산도 염기도 아닌 염을 의미한다.

하나의 구체예에서, 적어도 하나의 장성 변경제 (v)는 나트륨 염, 칼륨 염, 칼슘 염 및 마그네슘 염, 이를테면 염화나트륨, 염화칼륨, 염화마그네슘, 아세트산 마그네슘, 마그네슘 글루코네이트, 및 마그네슘 레불레이트로 구성되는 군으로부터 선택된 중성 염이다.

더 나아간 구체예에서, 장성 변경제 (v)는 염화칼슘, 아세트산 칼슘, 염화마그네슘 및 아세트산 마그네슘로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상과 조합한 염화나트륨을 포함한다.

여전히 더 나아간 구체예에서, 장성 변경제 (v)는 염화나트륨, 수크로스, 글루코스, 및 만니톨로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나이다.

다른 구체예에서, 장성 변경제 (v)는 적어도 1 mM, 적어도 5 mM, 적어도 10 mM, 적어도 20 mM, 적어도 50 mM, 적어도 100 mM, 적어도 200 mM, 적어도 400 mM, 적어도 800 mM, 적어도 1000 mM, 적어도 1200 mM, 적어도 1500 mM, 적어도 1800 mM, 적어도 2000 mM, 또는 적어도 2200 mM의 농도로 존재한다.

일련의 구체예에서, 장성 변경제 (v)는 5-2200 mM, 이를테면 25-2200 mM, 50-2200 mM, 100-2200 mM, 200- 2200 mM, 400-2200 mM, 600-2200 mM, 800-2200 mM, 1000-2200 mM, 1200-2200 mM, 1400-2200 mM, 1600-2200 mM, 1800-2200 mM, 또는 2000-2200 mM; 5-1800 mM, 25- 1800 mM, 50-1800 mM, 100-1800 mM, 200-1800 mM, 400-1800 mM, 600-1800 mM,800-1800 mM, 1000-1800 mM, 1200-1800 mM, 1400-1800 mM, 1600-1800 mM; 5-1500 mM, 25-1400 mM, 50-1500 mM, 100-1500 mM, 200-1500 mM, 400-1500 mM, 600-1500 mM, 800-1500 mM, 1000-1500 mM, 1200-1500 mM; 5-1200 mM, 25-1200 mM, 50-1200 mM, 100-1200 mM, 200-1200 mM, 400-1200 mM, 600-1200 mM, 또는 800-1200 mM의 농도로 존재한다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 적어도 하나의 장성 변경제 (v)는 이온 강도 변경제 (v/a)이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "이온 강도 변경제"는 용액의 이온 강도에 기여하는 작용제를 포함한다. 작용제는, 이것으로 제한되지는 않지만, 중성 염, 아미노산, 2 내지 5 아미노산 잔기의 펩티드를 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 두개 이상의 그러한 약제를 조합하여 포함한다.

이온 강도 변경제 (v/a)의 바람직한 예는 이를테면 염화나트륨, 염화칼륨, 및 염화마그네슘과 같은 중성 염이다. 바람직한 작용제는 (v/a) 염화나트륨이다.

용어 "이온 강도"는 하기 식:

에 의해 정의되는 용액의 이온 강도(μ)이다 : 이때 p는 이온 강도이고, [i]는 이온의 밀리몰 농도이고, Zj는 그 이온의 전하(+ 또는 -)이다" (예를 들어, Solomon, Journal of Chemical Education, 78 (12) : 1691-92,2001 ; James Fritz and George Schenk: Quantitative Analytical Chemistry, 1979 참조).

본 발명의 다른 구체예에서, 조성물의 이온 강도는 적어도 50mM, 이를테면 적어도 75mM, 적어도 100mM, 적어도 150mM, 적어도 200mM, 적어도 250mM, 적어도 400mM, 적어도 500mM, 적어도 650mM, 적어도 800mM, 적어도 1000mM, 적어도 1200mM, 적어도 1600mM, 적어도 2000mM, 적어도 2400mM, 적어도 2800mM, 또는 적어도 3200mM이다.

일부 특정한 구체예에서, 장성 변경제 (v) 및 이온 강도 변경제 (v/a)의 총 농도는 어떠한 다른 성분들이 장성 및 이온 강도에 대해 가질 수 있는 효과에 의존하여, 1-1000mM의 범위, 이를테면 1-500 mM, 이를테면 1-300 mM, 또는 10-200 mM, 또는 20-150 mM; 또는 100-1000mM, 200-800mM 또는 500-800mM의 범위에 있다.

하나의 구체예에서, 조성물은 등장성이고; 또다른 것에서는, 그것은 고장성이다.

용어 "등장성"은 "혈청과의 등장성", 즉, 약 300± 50 밀리오스몰/kg에 있는 것을 의미한다. 장성은 투여에 앞서 용액의 삼투질농도의 측정을 의미한다. 용어 "고장성"은 이를 테면 300±50 밀리오스몰/kg 이상의 수준과 같은 혈청의 생리학적 수준 이상의 삼투질농도의 수준을 나타내는 의미이다.

또한, 본 발명의 특정한 구체예는 안정화제(iii)와, 나트륨 염 및 마그네슘 염으로 구성되는 군으로부터 선택된 꽤 높은 농도의 이온 강도 변경제(v/a)와의 조합에 관한 것이다. 이 구체예에서, 이온 강도 변경제 (v/a), 즉, 나트륨 염 및/또는 마그네슘 염은, 15-1000 mM의 농도, 이를테면 25-1000 mM, 50-1000 mM, 100-1000 mM, 200-1000 mM, 300-1000 mM, 400-1000 mM, 500- 1000 mM, 600-1000 mM, 700-1000 mM; 15-800 mM, 25-800 mM, 50-800 mM, 100-800 mM, 200-800 mM,300-800 mM, 400-800 mM, 500-800 mM; 15-600 mM, 25-600 mM, 50-600 mM, 100-600 mM, 200-600 mM, 300-600 mM; 15-400 mM, 25-400 mM, 50-400 mM, 또는 100-400 mM의 농도로 존재한다.

이들 구체예 내에서, 나트륨 염은 염화나트륨이 될 수 있고, 마그네슘 염은 염화마그네슘, 아세트산 마그네슘, 마그네슘 글루코네이트, 마그네슘 레불레이트, 및 강산의 마그네슘 염으로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다. 보다 특정한 구체예에서, 마그네슘 염은 염화나트륨과 조합하여 사용된다.

하나의 현재 바람직한 구체예에서, 조성물은 칼슘(Ca² ⁺)과 마그네슘(Mg² ⁺) 염, 예를 들어 염화칼슘, 아세트산 칼슘, 칼슘 글루코네이트, 칼슘 레불레이트, 염화마그네슘, 아세트산 마그네슘, 마그네슘 술페이트, 마그네슘 글루코네이트, 마그네슘 레불레이트, 강산의 마그네슘 염으로 구성되는 군으로부터 선택된 한개 이상의 염으로부터 선택된 한개 이상의 이온 강도 변경제를 포함한다.

그것의 하나의 구체예에서, 칼슘 (Ca² ⁺) 및/또는 마그네슘 (Mg² ⁺)은 적어도 약 0. 1 μM, 이를테면, 예를 들어 , 적어도 약 0. 5 μM, 적어도 약 1 μM, 적어도 약 5 μM, 적어도 약 10 μM, 적어도 약 50 μM, 적어도 약 100 μM, 적어도 약 1 mM, 적어도 약 2 mM, 적어도 약 5 mM, 또는 적어도 약 1OmM의 농도로 존재한다. 특정한 구체예에서 조성물은 적어도 2 mM Ca2+을 포함한다.

다양한 구체예에서, 칼슘 (Ca2+) 및/또는 마그네슘 이온 (Mg2+)과 FVII 폴리펩티드 사이의 몰비는 : 0.001-750 ; 0.001-250 ; 0.001-100 ; 0.001-10 ; 0.001-1. 0; 0.001-0. 5; 0.5-750 ; 0.5-250 ; 0.5-100 ; 0.5-10 ; 0.5-1. 0; 0.001-0. 4999; 0.005-0. 050이다.

본 발명의 한가지 구체예에서, 비-복합 칼슘 이온(Ca2+) 및/또는 마그네슘(Mg2+) 대 인자 VII 폴리펩티드의 몰비는 0.5보다 더 낮고, 예를 들어 0.005-0.050와 같은 0.001-0.499의 범위, 또는 0.000-0.050의 범위, 또는 약 0.000와 같은 0.000-0.499의 범위에 있다. 본 발명의 한가지 구체예에서, 비-복합 칼슘 이온(Ca² ⁺) 대 인자 VII 폴리펩티드의 몰비는 0.5보다 더 낮고, 예를 들어 0.005-0.050와 같은 0.001-0.499의 범위, 또는 0.000-0.050의 범위, 또는 약 0.000와 같은 0.000-0.499의 범위에 있다.

본원에 사용될 때, 용어 "비-복합 칼슘 및/또는 마그네슘 이온의 농도"는 칼슘 및/또는 마그네슘 이온의 총 농도와 칼슘/마그네슘 킬레이터에 결합된 칼슘 및/또는 마그네슘의 농도 사이의 차이를 의미하려는 의도이다. 이러한 관점에서, 칼슘 및/또는 마그네슘이 특정 조건하에서 인자 VII 폴리펩티드에 결합되거나, 또는 그것과 연합하지 않게 될 것으로 예상되지만, 인자 VII 폴리펩티드는 "칼슘/마그네슘 킬레이터"로 간주되지 않는다.

또다른 구체예에서, 비-복합 칼슘 및/또는 마그네슘 이온 대 인자 VII 폴리펩티드의 몰비는 0.5 이상이다. 또다른 구체예에서, 비-복합 칼슘 이온 대 인자 VII 폴리펩티드의 몰비는 0.5 이상이다.

본 발명의 한가지 구체예에서, 칼슘 이온(Ca² ⁺)과 인자 VII 폴리펩티드 사이의 낮은 상대 비를 얻기 위해서, 예를 들어, Ca2+ 및/또는 Mg2+ 를 제거하기에 적합한 조건하에서 이온-교환 재료와 조성물을 접촉시킴으로써 과잉의 칼슘 및/또는 마그네슘 이온을 제거하거나, 또는 (복합체) 과잉 칼슘 이온을 결합하기 위해 칼슘/마그네슘 킬레이터를 첨가하는 것이 필요하거나 바람직할 수 있다. 이는 조제화 단계를 선행하는 공정 단계로부터 용액 중의 칼슘 및/또는 마그네슘 이온과 인자 VII 폴리펩티드 사이의 비가 위에서 언급한 한도를 초과할때 특정하게 관련된다. "칼슘/마그네슘 킬레이터"의 예는 EDTA, 시트르산, NTA, DTPA, 타르타르산, 락트산, 말산, 숙신산, HIMDA, ADA 및 유사한 화합물을 포함한다.

더 나아간 구체예에서, 조성물은 항산화제 (vi)를 더욱 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 항산화제는 L-메티오닌, D-메티오닌, 메티오닌 유사체, 메티오닌-함유 펩티드, 메티오닌- 동족체, 아스코르브산, 시스테인, 호모시스테인, 글루타티온, 시스틴, 및 시스스타티오닌으로 구성되는 군으로부터 선택된다. 바람직한 구체예에서, 항산화제는 L-메티오닌이다.

항산화제의 농도는 전형적으로 0.1-5.0 mg/mL, 이를테면 0.1-4.0 mg/mL, 0.1-3.0 mg/mL, 0.1-2. 0 mg/ml, 또는 0.5-2.0 mg/mL이다.

특정한 구체예에서, 조성물은 항산화제를 포함하지 않는다; 대신에 산화에 대한 인자 VII 폴리펩티드의 감수성은 대기 공기의 배제에 의해 제어된다. 항산화제의 사용은 물론 또한 대기 공기의 배제와 함께 조합될 수 있다.

따라서, 본 발명은 또한 본원에서 정의된 바와 같은 액상 수성 약학 조성물, 그리고 선택적으로 비활성 가스를 함유하는 기밀 용기(예를 들어 물약병 또는 카트리지 (이를테면 펜 어플리케이터를 위한 카트리지))를 제공한다.

비활성 가스는 질소, 아르곤, 등으로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다. 용기는 (예를 들어 물약병 또는 카트리지) 전형적으로 유리 또는 플라스틱, 특히 선택적으로는 약학 조성물의 완전함의 보존하면서 침투를 허용하는 고무 중격(septum) 또는 다른 클로져 수단에 의해 밀폐된 유리로 만들어진다. 그것의 특정한 구체예에서, 조성물은 방부제 (vii)를 포함하지 않는다. 더나아간 구체예에서, 용기는 밀봉 백, 예를 들어 라미네이트와 같이 (예를 들어 금속 (알루미늄과 같은) 라미네이트 플라스틱 백) 밀봉 플라스틱 백에 둘러쌓인 물약병 또는 카트리지이다.

필수 성분들, 비이온성 계면활성제 (iv), 장성 변경제 (v) 및 선택적 항산화제 (vi)에 더하여, 약학 조성물은 더욱 방부제 (vii)를 포함할 수 있다.

방부제는 미생물 성장을 늦추고 그로인해 인자 VII 폴리펩티드의 "다중 사용" 패키징을 허용하기 위해 조성물에 포함될 수 있다. 방부제의 예는 페놀, 벤질 알코올, 오르토-크레졸, 메타-크레졸, 파라-크레졸, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤,벤즈알코늄 클로라이드, 및 벤제토늄 클로라이드를 포함한다. 방부제는 pH 범위와 방부제의 타입에 의존하여 정상적으로 0.1-20 mg/mL의 농도로 포함된다.

여전히 더 나아가, 조성물은 또한 탈아미드화 및 이성화를 억제할 수 있는 작용제를 포함할 수 있다.

한 구체예에서, 액상 수성 약학 조성물은 다음을 포함한다 :

0.1-20mg/mL의 인자 VII 폴리펩티드 (i);

pH를 약 4.0 내지 약 9.0의 범위에 유지시키기에 적합한 완충제 (ii) ;

적어도 5 μM의 농도로 모티프-C₆H₄-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R²를 포함하는 적어도 하나의 안정화제(iii) ;

비이온성 계면활성제 (iv); 및

적어도 5 mM의 농도로 적어도 하나의 장성 변경제 (v).

또다른 구체예에서, 액상 수성 약학 조성물은 다음을 포함한다:

0.1-10 mg/mL의 인자 VII 폴리펩티드 (i);

pH를 약 4. 0 내지 약 9.0의 범위로 유지하기에 적합한 완충제 (ii) ;

적어도 500 μM의 농도로 모티프-CH₂-NH-C(=N-Z^l-R¹)-NH-Z²-R² 를 포함하는 적어도 하나의 안정화제(iii);

비이온성 계면활성제 (iv); 및

적어도 5 mM의 농도로 적어도 하나의 장성 변경제 (v).

본원에서 사용된 바와 같이, "약"으로 명시된 pH 값은 ±0.1로 이해되고, 예를 들어 약 pH 8.0은 pH 8.0±0.1를 포함한다.

퍼센트는 용액에 용해된 고체와 용액 안에 혼합된 액체 둘다를 말하는 (중량/중량)이다. 예를 들어, Tween®에 대해서, 그것은 용액의 100% 스톡/중량의 중량이다.

본 발명에 따르는 조성물은 안정하고 바람직하게는 인자 VII 폴리펩티드의 사용할 준비가 된 조성물로서 유용하다. 더나아가, 본원에서 주어진 원리, 지침 및 특정한 구체예는 인자 VII 폴리펩티드, mutatis mutandis의 벌크 저장을 위해 동일하게 적용가능하다고 믿어진다. 조성물은 2℃ 내지 8℃의 범위의 온도에서 저장될 때, 전형적으로 적어도 6개월동안 바람직하게는 36 개월 이하 안정하다. 조성물은 2℃ 내지 8℃에서 적어도 6 개월동안 저장될 때 화학적으로 및/또는 물리적으로 안정하고, 특히 화학적으로 안정하다.

용어 "안정한"은 초기 샘플은 중쇄 분해 생성물을 전혀 포함하지 않는다고 가정하면서, (i) 2℃ 내지 8℃에서 6개월동안 저장한 후에 조성물은 1-단계 응고 분석 (분석 4)에 의해 측정될 때 적어도 50%의 그것의 초기 생물학적 활성을 보유하고, 또는 (ii) 2℃ 내지 8℃에서 6개월동안 저장한 후에, 중쇄 분해 생성물의 함량의 증가가 인자 VII 폴리펩티드의 초기 함량의 많아야 40% (w/w)라는 것을 나타내려는 의도이다.

용어 "초기 함량"은 조성물의 제조시에 조성물에 첨가된 인자 VII 폴리펩티드의 양과 관련된다.

한 구체예에서, 안정한 조성물은 2 내지 8℃에서 6 개월동안 저장한 후에 그것의 초기 활성의 적어도 70%, 이를테면 적어도 80%, 또는 적어도 85%, 또는 적어도 90%, 또는 적어도 95%를 보유한다.

본 발명의 다른 구체예에서, 안정한 조성물은 적어도 30일동안 이를테면 60 또는 90일동안 저장한 후에 본 명세서의 분석 4에서 기술된 바와 같이 1-단계 응고 분석에 의해 측정될 때 그것의 초기 생물학적 활성의 적어도 50%를 보유한다.

다양한 구체예에서 안정한 조성물에서 중쇄 분해 생성물의 함량의 증가는 인자 VII 폴리펩티드의 초기 함량의 약 30%(w/w) 미만, 약 25%(w/w) 미만, 약 20%(w/w) 미만, 약 15%(w/w) 미만, 약 10%(w/w) 미만, 약 5%(w/w) 미만, 또는 약 3%(w/w) 미만이다.

중쇄 분해 생성물의 함량을 결정하는 목적을 위해서, 역상 HPLC를 5μm 의 입자 크기 및 기공 크기 300Å를 갖는 독점적 4.5 x 250 mm 부틸-결합된 실리카 칼럼에서 수행되었다. 칼럼 온도:70℃. A-완충액: 0.1% v/v 트리플루오르아세트산. B-완충액 : 0.09% v/v 트리플루오르아세트산, 80% v/v 아세토니트릴. 칼럼은 X에서부터 (X+13) % B까지 30 분 후에 선형 구배로 용출되었다. X는 FVIIa가 대략 26 분의 체류 시간을 갖고 용출하도록 조절되었다. 유속: 1.0 mL/min. 검출: 214 nm. 로드: 25μg FVIIa.

용어 "물리적으로 안정적인"은 겉보기에 깨끗하게 남아있는 조성물을 나타내려는 의도이다. 조성물의 물리적 안정성은 다른 온도에서 다양한 시간 기간동안 조성물의 저장후에 시각적 검사 및 탁도에 의해서 평가된다. 조성물의 시각적 검사는 어두운 배경에서 예리하게 초점화된 광으로 수행된다. 조성물은 그것이 시각적 탁도를 나타낼때, 물리적으로 불안정한 것으로 분류된다.

용어, 인자 VII 폴리펩티드의 "물리적 안정성"은 분자의 어떠한 구조 변형 및 변성은 물론이고 인자 VII 폴리펩티드의 이량체, 올리고머 및 폴리머 형태에서 가용성 및/또는 가용성 응집체의 형성에 관한 것이다.

용어 "화학적 안정성"은 가속화된 조건에서 용액중에 저장할때 인자 VII 폴리펩티드에서 어떠한 화학적 변화의 형성에 관한 것을 의도한다. 인자 VII 폴리펩티드의 단편의 형성을 초래하는 효소의 분해는 물론이고 가수분해, 탈아미드화, 이성체화 및 산화가 예이다. 특히, 황-함유 아미노산은 대응하는 술폭시드의 형성과 함께 산화하는 경향이 있다.

용어 "화학적으로 안정한"은 1-단계 응고 분석에 의해 측정될 때(분석 4), 2 내지 8℃에서 6개월 동안 그것의 저장후에 초기 생물학적 활성의 적어도 50%을 보유하는 조성물을 나타내려는 의도이다.

또다른 구체예에서, 본 발명은 또한 pH를 약 4.0 내지 약 9.0의 범위에서 유지하기 위해 적합한 완충제 (ii); 및 -C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 적어도 하나의 안정화제(iii)를 포함하는 용액중에, 적어도 0. 01 mg/mL의 농도에서 인자 VII 폴리펩티드를 제공하는 단계를 포함하는, 인자 VII 폴리펩티드의 액상, 수성 약학 조성물의 제조 방법을 제공하고, 상기식에서

Z¹와 Z² 는 독립적으로 -O-,-S-,-NR^H-및 단일 결합으로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 R^H는 수소,C₁ _-4-알킬, 아릴 및 아릴메틸로 구성되는 군으로부터 선택되고, R¹과 R² 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C₁ _-6-알킬, 선택적으로 치환된 C_2-6-알케닐, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로시클릴로 구성되는 군으로부터 선택되고, 또는

Z² 및 R² 는 위에서 정의된 바와 같고 -C=N-Z¹-R^l 는 헤테로환 고리의 일부를 형성하고, 또는

Z¹과 R¹은 위에서 정의된 바와 같고 -C-NH-Z²-R² 는 헤테로환 고리의 일부를 형성하고, 또는

-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R²는 헤테로환 고리를 형성하고 이때 -Z¹-R^l-R²-Z²-는 바이라디칼이다.

사용 방법

이해되는 바와 같이, 본원에서 정의된 액상 수성 약학적 조성물은 의약품 업계에서 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 특히 약제로서 사용하기 위한, 보다 특정하게는 인자 VII-반응 증후군을 처리하기 위한 약제로서 사용하기 위한 본원에서 정의된 액상 수성 약학적 조성물을 제공한다.

결과적으로, 본 발명은 또한 인자 VII-반응 증후군을 치료하는 방법은 물론이고, 인자 VII-반응 증후군을 치료하기 위한 약제의 제조를 위해 본원에서 정의된 바와 같이 액상 수성 약학 조성물의 사용을 제공하며, 방법은 본원에서 정의된 바와 같은 효과적인 양의 액상 수성 약학 조성물을 그것을 필요로하는 사람에게 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 조제약은 예를 들어, 응고 인자 결핍 (예를 들어 혈우병 A, 혈우병 B, 응고 인자 XI 결핍, 응고 인자 VII 결핍)에 의해 ; 저혈소판증 또는 von Willebrand 병에 의해, 또는 응고 인자 저해제, 및 어떠한 원인으로부터 뇌외 출혈, 또는 과도한 출혈에 의해 유발된 것들을 포함하는 출혈 장애와 같은 어떠한 인자 VII-반응 증후군을 치료하는데 사용될 수 있다. 조제약은 또한 외과수술 또는 다른 외상과 관련하여 환자에게 또는 항응고제 치료법을 받고 있는 환자에게 투여될 수 있다.

용어 "유효량"은 원하는 반응을 달성하기 위해 복용량을 적정할 수 있는, 자격있는 개업의에 의해 결정될 효과적인 복용량이다. 용량의 고려를 위한 인자는 효능, 생체이용율, 원하는 약물동력학/약역학 프로파일, 치료의 조건, 환자-관련된 인자 (예를 들어 체중, 건강, 나이 등), 공동투여된 약물이 존재 (예를 들어, 항응고제), 투여의 시간, 또는 의학 개업의에게 알려진 다른 인자를 포함할 것이다.

용어 "치료"는 질병, 상태, 또는 장애를 퇴치는 목적을 위해, 대상 예를 들어 포유동물, 특히 사람의 관리와 케어로서 정의되고, 증상 또는 합병증의 개시를 방지하기 위한 인자 VII 폴리펩티드의 투여, 또는 증상 또는 합병증을 완화하는 것, 또는 질병, 상태, 또는 장애를 제거하는 것을 포함한다. 인자 VII 폴리펩티드를 함유하는 본 발명에 따르는 약학적 조성물은 그러한 치료를 필요로하는 대상에게 비경구 투여될 수 있다. 비경구 투여는 주사기, 선택적으로 펜형 주사기에 의해 피하, 근육내 또는 정맥내 주사에 의해 수행될 수 있다. 대안으로서는, 비경구 투여는 주입 펌프에 의해 수행될 수 있다.

중요한 구체예에서, 약학 조성물은 당업계에 알려진 방법에 따라 피하, 근육내 또는 정맥내 주사에 적합화된다.

실시예

실험

일반적인 방법

인자 VII 폴리펩티드의 생물학적 활성을 결정하기 위해 적합한 분석

본 발명에 따라 유용한 인자 VII 폴리펩티드는 간단한 예비 시험관내 시험으로서 수행될 수 있는 적절한 분석에 의해 선택될 수 있다. 따라서, 본 명세서는 인자 VII 폴리펩티드의 활성에 대한 간단한 시험을 개시한다 (제목 "시험관내 가수분해 분석").

시험관내 가수분해분석 (분석 1)

선천적인 (야생형) 인자 VIIa 및 인자 VII 폴리펩티드 (둘다 이후에 "인자 VIIa"라고 부름)는 특정한 활성에 대해서 분석될 수 있다. 그들은 또한 그들의 특정한 활성을 직접 비교하는 것과 병행하여 분석될 수 있다. 분석은 마이크로타이터 플레이트 (MaxiSorp, Nunc, Denmark)에서 수행된다. 색원체 기질 D-Ile-Pro-Arg-p-니트로아닐리드 (S-2288, Chromogenix, Sweden), 최종 농도 1 mM를 0.1 MNaCl, 5 mM CaCl₂ 및 1 mg/mL 소 혈청 알부민을 함유하는, 50 mM HEPES중의 인자 VIIa (최종 농도 100 nM), pH 7.4에 첨가한다. 405 nm에서의 흡광도는 SpectraMax 340 플레이트 판독기 (분자 Devices, USA)에서 연속적으로 측정된다. 20-분 배양 동안에 발전된 흡광도는, 효소를 함유하지 않는 빈 웰에서 흡광도의 삭감 후에, 인자 VII 폴리펩티드와 야생형 인자 VIIa 의 활성 사이의 비를 계산하기 위해 상용된다:

비 = (A405 nm 인자 VII 폴리펩티드)/ (A405 nm 인자 VIIa 야생형).

그위에 근거하여, 선천적인 인자 VIIa보다 더 낮은, 그것에 필적하는, 또는 더 높은 활성을 갖는 인자 VII 폴리펩티드, 이를테면, 예를 들어, 인자 VII 폴리펩티드의 활성과 선천적인 인자 VII (야생형 FVII)의 활성 사이의 비는 약 1. 0 대 1.0 이상인 인자 VII 폴리펩티드가 확인될 수 있다.

인자 VII 폴리펩티드의 활성은 또한 적절하게는 100-1000 nM의 농도에서, 인자 X ("시험관내 단백질 가수분해 분석")와 같은 생리학적 기질을 사용하여 측정될 수 있고, 여기에서 발생된 인자 Xa는 적절한 색원체 기질(예를 들면 S-2765)을 첨가한 후에 측정된다. 게다가, 활성 분석은 생리학적 온도에서 수행될 수 있다.

시험관내 단백질 가수분해 분석 (분석 2)

선천적인 (야생형) 인자 VIIa 및 인자 VII 폴리펩티드 (둘다 이후에 "인자 VIIa"라고 불림)는 그들의 특정한 활성을 직접 비교하는 것과 병행하여 분석된다. 분석이 마이크로타이터 플레이트 (MaxiSorp, Nunc, Denmark)에서 수행된다. 0.1 MNaCl, 5 mMCaCl₂ 및 1 mg/mL 소 혈청 알부민을 함유하는 100μL 50 mM HEPES, pH 7.4중의, 인자 VIIa (10 nM) 및 인자 X (0.8microM)는 15 분동안 배양된다. 인자 X 분할은 그후 0.1 MNaCl, 20 mM EDTA 및 1 mg/mL 소 혈청 알부민을 함유하는 50μL 50 mM HEPES, pH 7.4을 첨가함으로써 멈춰진다. 발생된 인자 Xa의 양은 색원체 기질 Z-D-Arg-Gly-Arg-p니트로아닐리드 (S-2765, Chromogenix, Sweden), 최종 농도 0.5 mM을 첨가함으로써 측정된다. 405 nm에서의 흡광도는 SpectraMax 340 플레이트 판독기 (분자 Devices, USA)에서 연속적으로 측정된다. FVIIa을 함유하지 않는 빈 웰에서의 흡광도를 뺀 후에, 10 분동안 발전된 흡광도는 인자 VII 폴리펩티드 와 야생형 인자 VIIa 의 단백질분해 활성 사이의 비를 계산하는데 사용된다 :

비율 = (A405 nm 인자 VII 폴리펩티드)/ (A405 nm 인자 VIIa 야생형).

거기에 근거하여, 선천적인 인자 VIIa보다 더 낮은, 그것에 필적하는, 또는 그보다 더 높은 활성을 갖는 인자 VII 폴리펩티드, 이를테면, 예를 들어, 인자 VII 폴리펩티드의 활성과 선천적인 인자 VII (야생형 FVII)의 활성 사이의 비가 약 1.0 대 약 1. 0인 인자 VII 폴리펩티드가 확인될 수 있다.

트롬빈 발생 분석 (분석 3)

인자 VIIa 또는 인자 VII 폴리펩티드가 트롬빈을 발생시키는 능력은 또한 생리학적 농도에서 모든 관련 응고 인자 및 저해제(혈우병 A 상태를 흉내낼때 인자 VIII를 뺌) 및 활성화 혈소판을 포함하는 분석 (분석 3) 에서 측정될 수 있다 (p. 543 in Monroe etal. (1997) Brit. J. Haematol. 99,542-547에서 기술된 바와 같음, 본원에서 참고문헌으로 포함됨).

1-단계 응고 분석 (분석 4)

인자 VII 폴리펩티드의 생물학적 활성은 또한 1-단계 응고 분석(분석 4)을 사용하여 특이적 활성("응고 활성") 에 대해서 분석될 수 있다. 이러한 목적을 위하여, 시험할 샘플을 50 mM PIPES-완충액 (pH 7.5), 0.1% BSA에 희석시키고 40 μl는 10 mM Ca² ⁺및 합성 인지질을 함유하는 40μl의 인자 VII 결핍 혈장과 80 μl의 사람 재조합 조직 인자로 배양한다. 응집 시간(응고 시간)을 측정하고 평행선 분석에서 참조 표준을 사용하여 표준 곡선과 비교한다.

인자 VII 폴리펩티드의 제조 및 정제

본 발명에 사용하기에 적절한 사람 정제된 인자 VIIa는 바람직하게는 예를 들어 Hagen etal., Proc.Natl. Acad. Sci. USA 83: 2412-2416, 1986에 의해 기술된 바와 같은, 또는 European Patent No. 0200 421 (ZymoGenetics, Inc.)에 의해 기술된 바와 같은 DNA 재조합 기술에 의해 만들어진다.

인자 VII는 또한 Broze and Maje-rus, J. Biot. Chem. 255 (4): 1242-1247, 1980 andHednerand Kisiei, J. Ciin. Invest. 71:1836-1841, 1983에 의해 기술된 방법에 의해 제조될 수 있다. 이들 방법은 검출가능한 양의 다른 혈액 응고 인자 없이 인자 VII를 산출한다. 훨씬 더욱 정제된 인자 VII 제조는 최종 정제 단계로서 추가의 겔 여과를 포함함으로써 얻어질 수 있다. 인자 VII 는 그후 공지된 수단에 의해, 예를 들어 인자 XIIa, IXa 또는 Xa와 같은 몇가지 다른혈장 단백질에 의해, 활성화 인자 VIIa 으로 전환된다. 대안으로서는, Bjoern et al. (Research 디s클로져, 269 September 1986, pp. 564-565)에 의해 기술된 바와 같이, 인자 VII 는 Mono Q^® (파마시아 파인 케미칼스) 등과 같은 이온-교환 크로마토그래피 칼럼을 통해서 그것을 통과시킴으로써, 또는 용액중에서 자동활성화에 의해 활성화될 수 있다.

인자 VII-관련된 폴리펩티드는 야생형 인자 VII의 변경에 의해 또는 재조합 기술에 의해 제조될 수 있다. 변경된 아미노산 서열을 갖는 인자 VII-관련된 폴리펩티드는 야생형 인자 VII와 비교할때, 아미노산 코돈을 바꿈으로써 또는 공지된 수단에 의해, 예를 들어 부위-특정한 돌연변이유발에 의해 천연 인자 VII를 인코딩하는 핵산에서 아미노산 코돈의 일부를 제거함으로써 야생형 인자 VII를 인코딩하는 핵산 서열을 수정함으로써 제조될 수 있다.

치환은 인자 VIIa 분자의 기능에 결정적인 영역 바깥에서 만들어질 수 있고 여전히 활성 폴리펩티드를 초래한다는 것이 당업자들에게 명백할 것이다. 인자 VII 폴리- 펩티드의 활성에 필수적이고 따라서 바람직하게는 치환되지 않는 아미노산 잔기는 부위-지시된 돌연변이유발 또는 알라닌-스캐닝 돌연변이유발과 같은 당업계에 공지된 과정에 따라서 확인될 수 있다(예를 들어, Cunningham and Wells, 1989, Science244 : 1081-1085을 참조하라). 나중의 기술에서, 돌연변이가 분자중의 모든 양으로 하전된 잔기에서, 도입되고 결과의 돌연변종 분자는 응고제, 각각 분자의 활성에 결정적인 아미노산 잔기를 확인하는 가교결합 활성에 대해서 시험된다. 기질-효소 상호작용의 부위는 또한 핵 자기 공명 분석, 결정학 또는 광친화력 라벨링과 같은 기술에 의해 결정될때 3차원 구조의 분석에 의해 결정될 수 있다(예를 들어, de Vos etal., 1992, Science 255: 306-312; Smith et al., 1992, Journal of Molecular Biology 224:899- 904; Wlodaver etal., 1992, FEBS Letters 309:59-64를 참고하라).

돌연변이를 핵산 서열 안으로 도입하여 하나의 뉴클레오티드를 또다른 뉴클레오티드로 교환하는 것은 당업계에 공지된 방법중 어느것을 사용하여, 부위-지시된 돌연변이유발에 의해 수행될 수 있다. 관심의 삽입체와 원하는 돌연변이를 함유하는 두개의 합성 프라이머와 함께 수퍼-코일된, 이중-가닥 DNA 벡터를 이용하는 과정이 특히 유용하다. 각각 벡터의 반대 스트랜드에 상보적인 올리고뉴클레오티드 프라이머는 Pfu DNA 폴리머라제에 의해서 온도 주기 동안에 연장된다. 프라이머의 혼합시에, 동요된 닉을 함유하는 돌연변이된 플라스미드가 발생된다. 온도 주기후에, 생성물을 메틸화 및 헤미-메틸화 DNA에 특이적인 DpnI로 처리하여 모체 DNA 템플릿을 소화시키고 돌연변이-함유 합성화 DNA를 선택한다. 예를 들어, 유전자 셔플링 또는 파지 디스플레이 기술과 같은 변종을 생성하고, 확인하고 분리시키기 위해 당업계에서 공지된 다른 과정이 또한 사용될 수 있다.

그들의 기원 세포로부터 폴리펩티드의 분리는 제한없이, 점착성 세포 배양으로부터의 원하는 생성물을 함유하는 세포 배양 배지의 제거; 부착하지 않은 세포를 제거하기 위한 원심분리 또는 여과 등을 포함하는, 당업계에 공지된 어떠한 방법에 의해 달성될 수 있다.

선택적으로, 인자 VII 폴리펩티드는 더욱 정제될 수 있다. 정제는 제한없이, 친화력 크로마토그래피, 이를 테면, 예를 들어, 항-인자 VII 항체 칼럼에서 (예를 들어, Wakabayashi etal., J. Biol. Chem. 261: 11097, 1986 ; and Thim etal., Biochem. 27 : 7785, 1988를 참조) ; 소수성 상호작용 크로마토그래피; 이온-교환 크로마토그래피; 크기 배제 크로마토그래피; 전기이동 과정 (예를 들어, 예비 등전위 초점화 (IEF), 미분 용해도 (예를 들어, 암모늄 술페이트 침전), 또는 추출 등을 포함하는, 당업계에 공지된 어떤 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 일반적으로, Scopes, Protein Purification, Springer-Verlag, New York, 1982; and Pro- tein Purification, J. C. Janson and Lars Ryden, editors, VCH Publishers, New York, 1989를 참조하라. 정제 후에, 제제는 바람직하게는 10중량%미만, 보다 바람직하게는 5%미만 그리고 가장 바람직하게는 1%미만의, 숙주 세포로부터 유도된 비-인자 VII 폴리펩티드를 함유한다.

인자 VII 폴리펩티드는 인자 XIIa 또는 트립신-형 특이성, 이를테면, 예를 들어, 인자 IXa, 칼리크레인, 인자Xa, 및 트롬빈을 갖는 다른 프로테아제를 사용하여, 단백질분해 분할에 의해 활성화될 수 있다. 예를 들어, Osterud et al., Biochem. 11: 2853 (1972) ; Tho- mas, U. S. Patent No. 4, 456, 591; and Hedner et al., J. Clin. Invest. 71 : 1836 (1983)을 참조하라. 대안으로서는, 인자 VII 폴리펩티드는 그것을 이온교환 크로마토그래피 칼럼, 이를테면 모노Q^® (Pharmacia) 등을 통해 통과시킴으로써 또는 용액중에 자동활성화에 의해 활성화될 수 있다. 결과의 활성화 인자 VII 폴리펩티드는 그후 조제화되고 본 출원에서 기술된 바와 같이 투여될 수 있다.

하기의 예는 본 발명의 실행을 예증한다. 이들 예는 예시의 목적으로 포함되며 청구된 발명의 범위를 어떠한 방식으로도 제한하려는 의도가 아니다.

작업예

하기 작업예에서 중쇄 분해 생성물의 함량은 다음에서 기술된 바와 같이 RP-HPLC에 의해 결정되었다:

역상 HPLC을 입자 크기 5μM와 기공 크기 300Å를 갖는 독점적 4.5x250 mm 부틸-결합된 실리카 칼럼에서 수행하였다. 칼럼 온도: 70℃. A-완충액: 0.1% v/v 트리플루오르아세트산. B-완충액: 0.09% v/v트리플루오르아세트산, 80% v/v 아세토니트릴. 칼럼은 30 분후에 X 내지 (X+13) % B의 선형 구배로 용출되었다. X는 FVIIa가 대략 26 분의 체류 시간을 갖고 용출하도록 조절되었다. 유속: 1.0 mL/min. 검출: 214 nm. 로드: 259 μg FVIIa.

하기 실시예에서는 본 명세서의 분석 4에서 본질적으로 기술된 바와 같은 1단계 응고 분석을 사용하여 응고 활성을 측정한다

실시예 1

벤자미딘의 rFVIIa의 안정성에 대한 효과를 연구하기 위해, 하기의 조제물을 제조하였다 :

제제 1:

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 아세트산나트륨

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

50 mM 벤자미딘

pH = 6.5

제제 2 :

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 아세트산나트륨

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

50 mM 벤자미딘

pH = 7.0

제제 3:

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 아세트산나트륨

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 6.5

제제 4:

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 아세트산나트륨

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 7.0

10 mM 히스티딘, 10 mM 아세트산나트륨과 50 mM 벤자미딘 (제제 1과 2에 대해서만)을, 위에서 언급한 농도로 글리실글리신, 염화나트륨 및 염화칼슘을 이미 함유하는 rFVIIa의 1.0 mg/mL 벌크 용액에 첨가함으로써 제제를 제조하였다. pH는 1 M 수산화나트륨과 1 M 염산으로 최종적으로 6.5 및 7.0으로 각각 조절되었다.

제제를 5℃와 30℃의 온도에서 저장하였고, 중쇄 분해 생성물의 형성을 위한 분석을 표에 나타낸 시점에서 수행하였다 (표 1).

표 1.

표 1 (계속)

표 1에서 볼 수 있듯이, 참조 제제에서(3 및 4) 5℃에서 저장 6개월 후에 중쇄 분해 생성물의 함량의 증가는 각각 34. 0% 및 57. 7%이었던 반면, 예증 조성물에서 (1 및 2) 중쇄 분해 생성물의 함량의 증가는 오직 1. 4% 및 4. 2%이었다. 5℃에서 14개월 저장 후에, 예증 조성물에서 (1 및 2) 중쇄 분해 생성물의 함량의 증가는 단지 3. 0% 및 8. 1%이었다.

중쇄 분해 생성물의 함량은 다음과 같이 RP-HPLC에 의해 결정된다:

역상 HPLC은 5μm의 입자 크기 및 기공 크기 300Å를 갖는 독점 4.5x250 mm 부틸-결합 실리카 칼럼에서 실행되었다. 칼럼 온도: 70℃. A-완충액: 0. 1% v/v 트리플루오로아세트산. B-완충액: 0. 09% v/v 트리플루오로아세트산, 80% v/v 아세토니트릴. 칼럼은 30분 후에 X 내지 (X+13) % B의 선형 구배를 갖고 용출되었다. FVIIa가 대략 26 분의 체류 시간으로 용출하도록 X가 조절된다. 유속: 1.0 mL/min. 검출: 214 nm. 로드: 25 μg FVIIa.

실시예 2

rFVIIa의 안정성에 대한 아르기닌의 효과를 조사하기 위해 하기 용액을 제조하였다:

제제 5:

1.0 mg/mL rFVIIa

25 mM HEPES

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 7.5

제제 6:

1.0 mg/mL rFVIIa

25 mM HEPES

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

200 mM 아르기닌

pH = 7.5

제제 7

1.0 mg/mL rFVIIa

20 mM 히스티딘

20 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 7.0

제제 8

1.0 mg/mL rFVIIa

50 mM 히스티딘

50 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

200 mM 아르기닌

pH = 7.0

제제 9

1.0 mg/mL rFVIIa

50 mM 히스티딘

50 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

400 mM 아르기닌

pH = 7.0

25 mM HEPES (용액 5와 6) 및 아르기닌 (용액 6,8 과 9)를 글리실글리신, 염화나트륨 및 염화칼슘을 위에서 언급한 농도로 이미 함유하는 rFVIIa의 1.0 mg/mL 벌크 용액에 첨가함으로써 제제를 제조하였다. pH는 마지막으로 1 M 수산화나트륨 및 1 M 염산으로 조절하였다.

제제를 5℃ 및 30℃의 온도에서 저장하였고, 중쇄 분해 생성물의 형성을 위한 분석을 표 2에 나타낸 시점에서 실시예 1에서와 같이 수행하였다.

표 2

* t = 3 일에서 분석됨, 0일 내지 3일에 약간의 증가가 예상된다

n. a.: 분석되지 않음

실시예 3

하기의 액상, 수성 약학적 조성물의 제제가 파악된다:

A)

rhFVIIa 1 mg/mL (대략 50, 000 IU/mL)

PIPES 15.12 mg/mL (50 mM)

벤자미딘 50 mM

폴록사머 188 0.5 mg/mL

염화나트륨 2.92 mg/mL (50 mM)

염화칼슘 2 H₂O 1.47 mg/mL (10 mM)

메티오닌 0.5 mg/mL

1 M NaOH/1 M HCl pH 6.5까지 첨가됨

B) rhFVIIa 1 mg/mL (대략 50,000 IU/mL)

PIPES 15.12 mg/mL (50 mM)

p-아미노벤자미딘 10 mM

폴록사머 188 0.5 mg/mL

염화나트륨 2.92 mg/mL (50 mM)

염화칼슘 2 H2O 1.47 mg/mL (10 mM)

메티오닌 0.5 mg/mL

1 M NaOH/1 M HCl pH 6.5까지 첨가됨

C)

rhFVIIa 1 mg/mL(대략 50,000 IU/mL)

PIPES 15.12 mg/mL (50 mM)

아르기닌 50 mM

폴록사머 188 0.5 mg/mL

염화나트륨 2.92 mg/mL (50 mM)

염화칼슘 2 H₂O 1.47 mg/mL (10 mM)

1 M NaOH/1 M HCl pH 6.5까지 첨가됨

D)

rhFVIIa 1 mg/mL (대략 50,000 IU/mL)

PIPES 15.12 mg/mL (50 mM)

아르기닌 100 mM

폴록사머 188 0.5 mg/mL

염화나트륨 2.92 mg/mL (50 mM)

염화칼슘 2 H₂O 1.47 mg/mL (10 mM)

1 M NaOH/1 M HCl pH 6.5까지 첨가됨

약학적 조성물 A-D은 이어서 질소 또는 아르곤으로 플러싱된 무균 유리병 또는 카트리지로 이동될 수 있고 그후에 기밀 알루미늄-라미네이트 플라스틱 백에 패킹될 수 있다.

실시예 4

rFVIIa의 안정성에 대한 벤자미딘의 효과를 조사하기 위해 제제를 제조하였다:

제제 1

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 6.5

제제 2

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

50 mM 벤자미딘

pH = 6.5

제제 3

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 7.5

제제 4

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

50 mM 벤자미딘

pH = 7. 5

10 mM 히스티딘과 50 mM 벤자미딘 (제제 2 와 4에 대해서만)을 글리실글리신, 염화나트륨 및 염화칼슘을 위에서 언급한 농도로 이미 함유하는 rFVIIa의 1.0 mg/mL 벌크 용액에 첨가함으로써 제제를 제조하였다. pH는 1 M 수산화나트륨 및 1 M 염산으로 최종적으로 각각 6.5와 7.5로 조절하였다.

제제를 5℃의 온도에서 저장하였고 표 1에 나타낸 시점에서 응고 활성에 대한 분석을 수행하였다:

[표 1]

실시예 5

rFVIIa의 안정성에 대한 다른 안정화제의 효과를 조사하기 위해 다음의 제제를 제조하였다:

제제 1

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 6.5

제제 2

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

5 mM p-아미노-벤자미딘

pH = 6.5

제제 3

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

0.5 mM S-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-[1-(3-메톡시페닐)-에틸]-아세트아미드

pH = 6.5

제제 4

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 7.5

제제 5

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

5 mM p-아미노-벤자미딘

pH = 7.5

제제 6

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 7.5

10 mM 히스티딘, 5 mM p-아미노-벤자미딘 (제제 2 및 5에 대해서) 및 0.5 mM S-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-[1-(3-메톡시페닐)-에틸]-아세트아미드 (제제 3 과 6에 대해서)을, 위에서 언급된 농도로 글리실글리신, 염화나트륨 및 염화칼슘을 이미 함유하는 rFVIIa 의 1.0 mg/mL 벌크 용액에 첨가함으로써 제제를 제조하였다. pH 는 1 M 수산화나트륨과 1 M 염산으로 최종적으로 6.5와 7.5로 각각 조절하였다.

제제를 5℃의 온도에서 저장하였고 응고 활성에 대한 분석 (표 1)과 중쇄 분해 (표 2)를 표에 나타낸 시점에서 수행하였다 :

[표 1]

[표 2]

실시예 6

rFVIIa의 안정성에 대한 벤자미딘과 N-(3-브로모벤질)-2-[3-(4- 카르밤이미도일페닐)-우레이도]-아세트아미드, HCl의 효과를 조사하기 위해서 다음의 제제를 제조하였다:

제제 1

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 6.5

제제 2

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

50 mM 벤자미딘

pH = 6.5

제제 3

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

50 μM N-(3-브로모벤질)-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-아세트아미드 HCl

pH = 6.5

제제 4

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

500 μM N-(3-브로모벤질)-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-아세트아미드 HCl

pH = 6.5

제제 5

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 7.5

제제 6

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

50 mM 벤자미딘

pH = 7.5

제제 7

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 7.5

제제 8

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 7. 5

10 mM 히스티딘, 50 mM 벤자미딘 (제제 2 및 6에 대해서) 및 50/500 μM N-(3-브로모벤질)-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-아세트아미드 HCl(제제 3,4 및 7,8에 대해서)을 위에서 언급된 농도로 글리실글리신, 염화나트륨 및 염화칼슘을 이미 함유하는 rFVIIa 의 1.0 mg/mL 벌크 용액에 첨가함으로써 제제를 제조하였다. pH 는 1 M 수산화나트륨과 1 M 염산으로 6.5 와 7.5으로 각각 최종적으로 조절하였다.

제제를 5℃와 30℃의 온도에서 저장하였고 표 1에 나타낸 시점에서 응고 활성에 대한 분석을 수행하였다 :

[표 1]

실시예 7

제제 1

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 6.5

제제 2

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

5 mM p-아미노-벤자미딘

pH = 6. 5

제제 3

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

0,05 mM S-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-[1-(3-메톡시페닐)-에틸]- 아세트아미드

pH = 6.5

제제 4

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

0,5 mM S-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-[1-(3-메톡시페닐)-에틸]-아세트아미드

pH = 6.5

제제 5

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 7.5

제제 6

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

5 mM p-아미노-벤자미딘

pH = 7.5

제제 7

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 7.5

제제 8

1.0 mg/mL rFVIIa

10 mM 히스티딘

10 mM 글리실글리신

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

pH = 7. 5

10 mM 히스티딘, 5 mM p-아미노-벤자미딘 (제제 2 및 6에 대해서)와 0,05/0, 5 mM S-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-[1-(3- 메톡시페닐)-에틸]-아세트아미드(제제 3,7 및 4,8에 대해서)를, 위에서 언급한 농도로 글리실글리신, 염화나트륨 및 염화칼슘을 이미 함유하는rFVIIa의 1.0 mg/mL 벌크 용액에 첨가함으로써 제제를 제조하였다. pH는 1 M 수산화나트륨과 1 M 염산으로 최종적으로 6.5와 7.5으로 각각 조절하였다.

제제를 5℃의 온도에서 저장하였고 표에 나타낸 시점에서 응고 활성에 대한 분석 (표 1)과 중쇄 분해 (표 2)을 수행하였다 :

[표 1]

[표 2]

실시예 8

rFVIIa의 안정성에 대한 S-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-[1-(3- 메톡시페닐)-에틸]-아세트아미드의 효과를 조사하기 위해 하기의 제제를 제조하였다:

제제 1

1.0 mg/mL rFVIIa

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

10 mM 글리실글리신

20 mM 히스티딘

0.5 mg/mL 메티오닌

5 mM S-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-[1-(3-메톡시페닐)-에틸]-아세트아미드

pH = 6. 0

제제 2

1.0 mg/mL rFVIIa

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

10 mM 글리실글리신

20 mM 히스티딘

0.5 mg/mL 메티오닌

pH = 6.5

제제 3

1.0 mg/mL rFVIIa

50 mM 염화나트륨

10 mM 염화칼슘

10 mM 글리실글리신

20 mM 히스티딘

0.5 mg/mL 메티오닌

pH = 7.5

20 mM 히스티딘, 5 mM S-2-[3-(4- 카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-[1-(3-메톡시페닐)-에틸]-아세트아미드 및 0.5 mg/mL 메티오닌을 위에서 언급한 농도로 글리실글리신, 염화나트륨 및 염화칼슘을 이미 함유하는 rFVIIa의 용액에 첨가함으로써 제제를 제조하였다. pH 는 1 M 수산화나트륨/염산으로 최종적으로 6.0, 6.5 및 7.5로 각각 조절하였다.

제제를 25℃의 온도에서 저장하였고 표에 나타낸 시점에서 응고 활성에 대한 분석 (표 1)과 중쇄 분해 (표 2)을 수행하였다:

[표 1]

S-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-[1-(3- 메톡시페닐)-에틸]-아세트아미드 없는 참조 제제는 하기의 응고 활성을 보여준다.

[표 2]

*: 참조 용액에 대한 시간 0 결과는 구할 수 없고, 이 때문에 저해제 물질을 함유하는 용액에 대해 대응하는 값을 나열한다.

Claims

적어도 0.01 mg/ml의 인자 VII 폴리펩티드 (i)
pH를 4.0 내지 9.0의 범위에 유지시키기에 적합한 완충제 (ii); 및
-C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 적어도 하나의 안정화제(iii)를 포함하는, 비경구 투여에 적합한 액상 수성 약학 조성물:
상기식에서
Z¹과 Z²는 독립적으로 -O-,-S-,-NR^H- 및 단일 결합으로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 R^H은 수소, C₁ _-4-알킬, 아릴 및 아릴메틸로 구성되는 군으로부터 선택되고, R¹과 R²는 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C₁ _-6-알킬, 선택적으로 치환된 C₂ _-6-알케닐, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로시클릴로 구성되는 군으로부터 선택되고,
상기 아릴은 완전 또는 부분적 방향족 탄소고리의 환 또는 환 시스템을 의미하고,
상기 헤테로시클릴은 한개 이상의 탄소 원자가 헤테로원자로 치환된, 포화, 부분적으로 불포화, 부분적으로 방향족 또는 완전히 방향족인 탄소고리의 환 또는 환 시스템을 의미하도록 의도되며, 또는
Z² 과 R²는 위에서 정의된 바와 같고 -C=N-Z¹-R¹ 는 헤테로 고리의 환의 일부를 형성하고, 또는
Z¹과 R¹은 위에서 정의된 바와 같고 -C-NH-Z²-R²는 헤테로 고리의 환의 일부를 형성하고, 또는
-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 는 헤테로 고리의 환을 형성하고 이때 -Z¹-R^l-R²-Z²-은 바이라디칼이고, 안정화제(iii)은 1μM 내지 100 μM 의 농도이고, 안정화제(iii)는 벤자미딘이 아니다.
제 1항에 있어서, R¹과 R² 중 적어도 하나는 수소인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, Z¹과 Z² 중 적어도 하나는 단일 결합인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, R¹과 R² 는 둘다 수소이고Z¹과 Z² 는 둘다 단일 결합인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 안정화제(iii)는 -C-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 아미딘 화합물 및 >N-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 구아니딘 화합물로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 5항에 있어서, 안정화제(iii)는 모티프-C₆H₄ _-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R²을 포함하는 벤자미딘으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미딘 화합물이고, 이때 C₆H₄ 는 선택적으로 치환된 벤젠 고리를 나타내는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 6항에 있어서, 벤자미딘은 모티프 >N-C₆H₄-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R²를 포함하고, 이때 C₆H₄는 선택적으로 치환된 벤젠 고리인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 5항에 있어서, 안정화제(iii)는 -CH₂-NH-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 구아니딘 화합물으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 구아니딘 화합물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 8항에 있어서, 구아니딘 화합물은 아르기닌, 아르기닌 유도체 및 적어도 하나의 아르기닌 잔기를 포함하는 2-5 아미노산 잔기의 펩티드로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 안정화제는 화학식 Y-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R²을 가지며, 이때 Y는 유기 라디칼인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 안정화제의 분자량은 많아야 1000 Da인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 안정화제(iii)의 농도는 적어도 1 μM인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 12항에 있어서, 안정화제(iii)는 벤자미딘이고, 상기 안정화제의 농도는 적어도 1 mM인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 12항에 있어서, 안정화제(iii)는 p-아미노-벤자미딘이고, 상기 안정화제의 농도는 적어도 0.001mM인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 12항에 있어서, 안정화제(iii)는 S-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-[1-(3-메톡시페닐)-에틸]-아세트아미드이고, 상기 안정화제의 농도는 적어도 0.001 mM인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 12항에 있어서, 안정화제(iii)는 S-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-N-(1-페닐에틸)-아세트아미드이고, 상기 안정화제의 농도는 적어도 0.001 mM인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 12항에 있어서, 안정화제(iii)는 N-(3-브로모벤질)-2-[3-(4-카르밤이미도일페닐)-우레이도]-아세트아미드이고, 상기 안정화제의 농도는 적어도 0.001 mM인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 12항에 있어서, 안정화제(iii)는 아르기닌이고, 상기 안정화제의 농도는 적어도 10 mM인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 인자 VII 폴리펩티드는 사람 인자 VIIa인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 인자 VII 폴리펩티드는 인자 VII 서열 변종인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 20항에 있어서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 "시험관내 단백질 가수분해 분석"(분석 2)으로 시험될 때, 인자 VII 폴리펩티드의 활성과 선천적인 사람 인자 VIla(야생형 FVIIa)의 활성 사이의 비는 적어도 1.25인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 인자 VII 폴리펩티드는 0.01-20 mg/mL의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 4.0 내지 8.0의 범위에 있는 pH 값을 가지는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 완충제(ii)는 MES, PIPES, ACES, BES, TES, HEPES, 트리스, 히스티딘, 이미다졸, 글리신, 글리실글리신, 글리신아미드, 인산, 아세트산, 락트산, 글루타르산, 시트르산, 타르타르산, 말산, 말레산, 및 숙신산의 산과 염으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나의 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 22항에 있어서, 완충제(ii)의 농도는 1-100 mM인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 비이온성 계면활성제(iv)를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 26항에 있어서, 비이온성 계면활성제(iv)는 폴리소르베이트, 폴옥사머, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 에틸렌/폴리프로필렌 블록 코폴리머, 및 폴리에틸렌글리콜(PEG)로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 26 항에 있어서, 비이온성 계면활성제(iv)의 농도는 0.005- 2중량%인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 장성 변경제(v)를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 29항에 있어서, 장성 변경제(v)는 중성 염, 아미노산, 2- 5 아미노산 잔기의 펩티드, 단당류, 이당류, 다당류, 및 당 알코올로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 30항에 있어서, 적어도 하나의 장성 변경제(v)는 나트륨 염, 칼륨 염, 칼슘 염, 및 마그네슘 염으로 구성되는 군으로부터 선택된 중성 염인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 30 항에 있어서, 장성 변경제(v)는 염화칼슘, 아세트산칼슘, 염화마그네슘 및 아세트산 마그네슘으로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 하나와 조합된 염화나트륨인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 29 항에 있어서, 장성 변경제(v)는 적어도 1 mM의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 29 항에 있어서, 적어도 하나의 장성 변경제(v)는 이온 강도 변경제(v/a)인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 적어도 50 mM의 이온 강도를 가지는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 300±50 밀리오스몰/kg의 삼투질농도를 가지는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 항산화제(vi)를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 37항에 있어서, 항산화제(vi)는 L-메티오닌, D-메티오닌, 메티오닌 유사체, 메티오닌-함유 펩티드, 메티오닌-동족체, 아스코르브산, 시스테인, 호모시스테인, 글루타티온, 시스틴, 및 시스스타티오닌으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 37 항에 있어서, 항산화제(vi)는 0.1-5.0 mg/mL의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서, 방부제(vii)를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 40항에 있어서, 방부제(vii)는 페놀, 벤질 알코올, 오르토-크레졸, 메타-크레졸, 파라-크레졸, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 벤즈알코늄 클로라이드, 및 벤제토늄 클로라이드로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서,
0.1-20 mg/mL의 인자 VII 폴리펩티드(i);
pH를 4.0 내지 9.0의 범위로 유지하기에 적합한 완충제(ii);
적어도 5 μM의 농도의 모티프-C₆H₄-C(=N-Z¹-R¹)-NH-Z²-R²를 포함하는 적어도 하나의 안정화제(iii);
비이온성 계면활성제(iv); 및
적어도 5 mM의 농도의 장성 변경제(v)
를 포함하는 것을 특징으로 하는 액상 수성 약학 조성물.
제 1 항에 있어서,
0.1-20 mg/mL의 인자 VII 폴리펩티드(i);
pH를 4.0 내지 9.0의 범위로 유지하기에 적합한 완충제(ii);
적어도 500 μM의 농도의 모티프-CH₂-NH-C(=N-Z^l-R¹)-NH-Z²-R²를 포함하는 적어도 하나의 안정화제(iii);
비이온성 계면활성제(iv); 및
적어도 5 mM의 농도의 적어도 하나의 장성 변경제(v)
를 포함하는 것을 특징으로 하는 액상 수성 약학 조성물.
제 1 항에 있어서, 피하, 근육내 또는 정맥내 주사로 이루어진 군으로부터 선택된 비경구 투여인 것을 특징으로 하는 조성물.
pH를 4.0 내지 9.0의 범위에 유지시키기에 적합한 완충제(ii); 및
-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R² 모티프를 포함하는 적어도 하나의 안정화제(iii)를 포함하는 용액중에, 적어도 0.01 mg/mL의 농도로 인자 VII 폴리펩티드(i)를 제공하는 단계를 포함하는, 비경구 투여에 적합한 인자 VII 폴리펩티드의 액상 수성 약학 조성물의 제조 방법:
상기식에서
Z¹와 Z² 는 독립적으로 -O-,-S-,-NR^H-및 단일 결합으로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 R^H는 수소,C₁ _-4-알킬, 아릴 및 아릴메틸로 구성되는 군으로부터 선택되고, R¹과 R² 는 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C₁ _-6-알킬, 선택적으로 치환된 C₂ _-6-알케닐, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로시클릴로 구성되는 군으로부터 선택되고,
상기 아릴은 완전 또는 부분적 방향족 탄소고리의 환 또는 환 시스템을 의미하고,
상기 헤테로시클릴은 한개 이상의 탄소 원자가 헤테로원자로 치환된, 포화, 부분적으로 불포화, 부분적으로 방향족 또는 완전히 방향족인 탄소고리의 환 또는 환 시스템을 의미하며, 또는
Z² 및 R² 는 위에서 정의된 바와 같고 -C=N-Z¹-R^l 는 헤테로 고리의 환의 일부를 형성하고, 또는
Z¹과 R¹은 위에서 정의된 바와 같고 -C-NH-Z²-R² 는 헤테로 고리의 환의 일부를 형성하고, 또는
-C(=N-Z¹-R^l)-NH-Z²-R²는 헤테로 고리의 환을 형성하고 이때 -Z¹-R¹-R²-Z²-는 바이라디칼이다.
약제로서 사용하기 위한 제 1항 내지 제 43항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 액상 수성 약학적 조성물.
제 37 항 내지 제 39 항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 액상 수성 약학 조성물 및 불활성 가스로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상을 함유하는 기밀 용기.
제 1항 내지 제 36 항 또는 제 40 항 내지 제 43 항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 액상 수성 약학 조성물 및 불활성 가스로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상을 함유하는 기밀 용기.