KR20070007082A

KR20070007082A - 내피 전구체 세포의 자극, 기관 재생, 및 말단 기관 손상의진행 완화를 위한 저용량 에리스로포이에틴의 용도

Info

Publication number: KR20070007082A
Application number: KR1020067016711A
Authority: KR
Inventors: 페르디난트 헤르만 발만; 헤르만 할러
Original assignee: 이피오플러스 게엠베하 운트 코. 카게
Priority date: 2004-01-23
Filing date: 2005-01-22
Publication date: 2007-01-12
Also published as: UA86400C2; AU2005205917A1; DE102004004509B4; CN101601857A; NO20063716L; JP2010235613A; SG149875A1; EP1711201A2; EA200601359A1; NZ548697A; US20070161552A1; AU2005205917B2; EP2156843A3; AU2010200621A1; DE102004063927A1; WO2005070450A2; WO2005070450A3; CA2554234A1; IL177017A0; WO2005070450A8

Abstract

본 발명은 내피 전구체 세포의 물리적 기동, 증식, 및 분화를 자극하고, 혈관형성을 자극하고, 내피 전구체 세포의 기능장애와 연계된 질병을 치료하고, 그리고 에리스로포이에틴과 내피 전구체 세포를 자극하기 위한 다른 적절한 약제를 포함하는 약제학적 조성물 및 이러한 질병의 치료를 위하여 사용되는 약제학적 조성물을 생산하기 위한 저용량 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다.

에리스로포이에틴, 저용량, 내피 전구체 세포, 기능장애, 자극.

Description

내피 전구체 세포의 자극, 기관 재생, 및 말단 기관 손상의 진행 완화를 위한 저용량 에리스로포이에틴의 용도{USE OF LOW-DOSE ERYTHROPOIETIN FOR STIMULATING ENDOTHELIAL PRECURSOR CELLS, REGENERATING ORGANS, AND SLOWING DOWN PROGRESSION OF END ORGAN DAMAGES}

본 발명은 내피 전구체 세포의 물리적 기동, 증식 및 분화의 자극, 혈관형성의 자극, 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병의 치료, 및 이러한 질병의 치료를 위한 약제학적 조성물뿐 아니라, 에리스로포이에틴과 함께 내피 전구체 세포의 자극 및 기관 보호, 기관 재생, 특히 새로운 혈관 및 조직의 형성, 및 기관 손상의 진행 완화를 위한 다른 적절한 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물의 생산을 위한, 특히 저용량의 에리스로포이에틴(EPO) 단독 또는 다른 화학적, 열적, 기계적 및 생물학적 약제와 조합된 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다.

본 발명은 또한, 미용 치료에, 그리고 이에 따라 인간 또는 동물 신체를 위한 "미용 관리" 면에서, 특히 유해한 환경 인자에 대하여 주름과 주름살을 예방 또는 감소시키고, 결합조직을 강화하고, 피부, 특히 얼굴 피부를 보호하고 팽팽하게 하기 위한, 바람직하게는 국소적으로 적용하기 위한, 그리고 메이크업 화운데이션으로서, 특히 독창적인 저용량의 에리스로포이에틴 및/또는 적절한 활성 성분의 용도와 관련된다. 또한, 에리스로포이에틴의 독창적인 국소 용도는 노화 반점의 형성 및 진행을 방해하고, 피부 조직을 정제하고, 피부 회춘 과정을 지지하고 모발 성장을 가속화한다.

본 발명은 또한 인간 또는 동물 신체에서 EPO의 24시간 주기 리듬에 적합한 방식으로 적용하기 위해 적합하게 고안된 약제학적 조성물의 생산을 위한, 에리스로포이에틴, 즉 EPO의, 바람직하게는 저용량, 바람직하게는 이하의 "EPO의 독창적인 용량" 부분에서 정의되는 용량의 용도와 관련된다. 인간에서, 내인성 에리스로포이에틴 생산은 늦은 오후에 최고 위상(하루중 최대값)을 가지며, 그래서 이 방식으로 최대 생물학적, 그리고 이에 따라 치료적 효과를 달성하기 위해서는, 앞서 정의된 본 발명에 따른 저용량 에리스로포이에틴의 투여는 아침, 특히 오전 6:00 내지 10:00시의 시기에 이루어지는 것이 바람직하다. 이 시기 중에, EPO는 단일 용량 또는 복수 용량으로 투여될 수 있다. 본 발명에 따르면, 단일 용량 또는 복수 용량으로서의 이러한 사용은, 특히 바람직하게는 본 발명의 교시에 따라 인용되는 모든 용도를 위해, 특히 인간 및 동물 신체 또는 세포의 미용 및 치료적 처치를 위해 제안된다.

본 발명에 따라, 에리스로포이에틴의 용도의 다른 태양에서는, 세포 치료를 위해 사용 가능한 조직 세포가 혈관계로 충분히 결합하면서 정착하는 것을 보장하기 위해, 생체외 저용량 에리스로포이에틴과 함께, 바람직하게는 저용량으로 미리 배양되거나, 또는 생체내에서 바람직하게는 본 발명에 따라 저용량 에리스로포이에틴의 전신 및 국소적 적용 이후, 내피 전구체 세포가 세포 치료에 유용한 다른 세포 군집과 함께 동시에 적용될 것이다.

따라서, 본 발명은 또한, 세포 치료에 사용 가능한 세포 군집이 혈관계로 충분히 결합하면서 정착하는 것을 증진시키기 위해, 세포 치료에 사용 가능한 적어도 하나의 세포 군집을 갖는 내피 전구체 세포의 적용 중, 바람직하게는 저용량의 에리스로포이에틴의, 바람직하게는 오전 06:00 내지 10:00시 시기의, 아침 적용을 위한 생체내 용도와도 관련된다. 본 발명은 또한, 세포 치료에 사용할 수 있는 세포 군집이 혈관계로 충분히 결합하면서 정착하는 것을 증진시키기 위해, 내피 전구체 세포 및 세포 치료에 사용할 수 있는 적어도 하나의 세포 군집과 함께 배양하기 위한 생체외, 바람직하게는 저용량의 에리스로포이에틴의 용도와도 관련된다.

본 발명은 또한, 내피 전구체 세포의 수 및 기능의 증가 및/또는 조직 손상의 재생 또는 진행의 완화를 위하여, 적어도 하나의 다른 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제, 특히 약물학적 활성 성분과 함께 순차적으로, 적시에 연속적 투여하는, 특히 질병의 예방 또는 치료를 위한 또는 이식 또는 주입 중 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 키트의 생산을 위한, 특히 저용량의 에리스로포이에틴의 용도와도 관련된다.

본 발명은 또한, 내피 전구체 세포의 수 및 기능의 증가 및/또는 조직 손상의 재생 또는 진행의 완화를 위하여, 에리스로포이에틴 및 적어도 하나의 다른 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제의 동시적 투여를 위한 에리스로포이에틴의 용도, 특히 질병의 예방 또는 치료를 위한 또는 이식 또는 주입 중 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 키트의 생산을 위한, 특히 저용량의 에리스로포이에틴의 용도와도 관련된다.

따라서, 본 발명은 이러한 방식으로 내피 전구체 세포의 수 및 기능의 증가 및/또는 조직 손상의 재생 또는 진행의 완화를 위하여, 저용량 에리스로포이에틴에 더하여, 바람직한 태양에서는 하나 이상의 다른 약물학적 활성 성분, 예를 들어 VEGF, GM-CSF, M-CSF, 트롬보포이에틴, SDF-1, SCF, NGF, PlGF, HMG 코리덕타제 저해제, ACE 저해제, AT-1 저해제 및 NO 공여제의, 바람직하게는 순차적, 적시의 연속적 또는 동시적 투여와 관련된다. 이와 관련하여, 본 발명에 따른 의도는 다음 경로에 영향을 준다: A) 골수 내에서 또는 줄기세포를 위한 특정 조직 적소에서 줄기세포 및/또는 내피 전구체 세포의 정량적 및 정성적 최적화; B) 골수 또는 다른 "줄기세포" 적소로부터 말초 혈액으로의 줄기세포 및/또는 내피 전구체 세포의 기동; C) 말초 혈액 및/또는 생체외 선택적 배양 조건 하에서, 바람직하게는 산소 농도 0.1% 내지 10%의 저산소 조건 하의 배양물에서, 줄기세포 및/또는 내피 전구체 세포의 정량적 및 정성적 최적화; D) 줄기세포 및/또는 내피 전구체 세포의 손상 부위로의 귀소; E) 줄기세포 및/또는 내피 전구체 세포의 표적 조직으로의 부착 및 이동; F) 내피 전구체 세포에 의한 혈관신생.

따라서, 본 발명은 또한, 이러한 방식으로 내피 전구체 세포의 수 및 기능의 증가 및/또는 조직 손상의 재생 또는 진행의 완화를 위하여, 필요시 하나 이상의 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제와 함께, 본 발명에 따른 저용량의 에리스로포이에틴의 생체내 및 생체외에서의 순차적, 적시의 연속적 또는 동시적 투여와 관련되는데, 임의적 및 바람직한 용도는 이상에서 언급한 바와 같이, 내인성 EPO 생산의 자연적 24시간 주기 리듬에 맞춘 방식으로, 또는 오전 6:00 내지 10:00 시 시기에 투여하기 적합하게 고안된 적용 제형으로 투여하는 것이다.

본 발명은 또한, a) 내피 전구체 세포의 기능장애를 갖는 환자, 및 b) 고혈압, 고콜레스테롤혈증, 비대칭 디메틸아르기닌(ADMA; asymmetric dimethylarginine) 농도의 증가, 인슐린 저항, 고호모시스테인혈증과 같은 적어도 하나의 심장혈관 위험 인자, 및 c) 좌심실 비대, 미세알부민뇨증, 인지 기능장애, 경동맥 내막의 두께 증가, 단백뇨증 또는 사구체 여과율(GFR)<80 ㎖/분, 특히 30, 바람직하게는 40 내지 80 ㎖/분과 같은 적어도 하나의 말단-기관 손상을 갖는 환자의 또는 환자를 위하여, 내피 전구체 세포의 물리적 기동, 증식 및 분화의 자극, 혈관형성의 자극, 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병의 치료, 및 에리스로포이에틴 및 내피 전구체 세포의 자극을 위한 다른 적절한 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물뿐 아니라 이러한 질병의 치료를 위한 약제학적 조성물의 생산을 위한, 본 발명에 따른 저용량의 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다. 바람직하게는, 본 발명은 오전 6:00 내지 10:00시 시기에 EPO의 적용을 수행하기 위하여 고안된 적절한 태양으로 a) 내지 c)에 정의된 상기 환자 그룹에 있어서의 저용량 EPO의 상기 적용과 관련된다.

혈관 내피는 혈관의 안을 덮는 세포의 층이다. 내피는 혈액이 다른 혈관 층으로부터 분리되도록 한다. 그러나, 내피는 단순히 수동적인 장벽이 아니고, 혈관 특성의 조절에 능동적으로 참여한다. 이 능력은 또한 내피-의존성 혈관확장으로 언급된다. 그 위치 때문에, 내피는 혈액동력학 스트레스 및 대사성 스트레스에 항상 노출된다. 고혈압, LDL 농도 상승, NO 합성효소의 내인성 저해제인 비대칭성 디메틸아르기닌 농도의 상승, 고콜레스테롤혈증, 사구체 여과율 30, 바람직하게는 40 내지 80 ㎖/분의 신장 기능 제한, 인슐린 저항 또는 고혈당과 같은 질병 상태에서 내피의 기능적 결함이 종종 발생하여 형태학상으로 검출 가능한 손상, 예를 들어 아테롬성 동맥경화성 플라크의 형성 및/또는 이어서 말단-기관 손상, 예를 들어 좌심실 비대, 미세알부민뇨증, 단백뇨증, 신경증 또는 미세순환 손상이 잠재적으로 뒤따른다. 변경되거나 감소된 내피 기능 또는 내피 기능장애의 매우 초기 신호가 내피-의존성 혈관확장의 감소이다.

관상혈관 심장 질환의 경우, 또는 관상혈관 심장 질환, 특히 고혈압, 제한된 신장 기능, 고지단백혈증, 고호모시스테인혈증, 인슐린 저항 또는 당뇨병 없이 위험 인자가 존재할 때에도, 내피 기능 장애는 NO(=EDRF)의 생산 감소 및 엔도텔린(endothelin) 생산 증가에서 명백하다. 엔도텔린의 높은 혈장 농도는 세포의 비정상적 유착, 염증, 혈관 종양 및 증증 혈관 협착을 야기한다. 내피 기능 장애는 ICAM-1 및 VCAM-1과 같은 부착 분자의 증가된 생산을 추가적인 특징으로 하는데, 이에 의해 혈소판 및 단핵구가 내피에 부착하는 정도가 증가한다. 이는 혈관 긴장의 증가를 야기한다. 따라서, 혈관수축, 부착, 응집, 응결, 아테롬성 동맥경화 및 아테롬성 혈전증에 유리한 불균형이 대부분의 다양한 시스템에서 발생한다. 정신적 스트레스조차도 상당한 내피 기능장애를 야기하는데, 이는 4 시간까지 길게 지속될 수 있다.

내피세포는 또한 새로운 혈관의 형성에도 참여한다. 혈관 형성은 배형성, 여 성의 생식 사이클, 상처 치료, 종양 성장 및 허혈 부위의 혈관신생과 같은 많은 과정에 중요하다. 원래, 생후 혈관 형성, 즉 출생 후의 혈관 형성은 주로 혈관신생 과정에서 기인한다. 혈관신생에 의해 이전에 존재하는 혈관계로부터 모세혈관의 발아에 의한 새로운 혈관의 발달이 이해될 수 있다. 혈관신생 동안, 혈관 주위의 기저막이 단백질 분해 효소에 의해 최초로 파괴되고, 혈관주위 공간의 세포외 기질이 조각난다. 이에 의해 방출된 혈관신생 자극은 이미 존재하는 분화된 내피 세포가 화학주성 자극을 향해 이동하도록 하는데, 이 과정 중에 이들은 동시에 분화되고 변이된다. 다음에 모세혈관-형태의 세포간극을 갖는 새로운 혈관 루프가 내피 세포의 첨가에 의해 형성된다. 이후 새로운 기저막의 합성이 개시된다.

그러나, 최근의 연구에서는, 성체 기관에서의 새로운 혈관의 형성이 혈관신생(angionenesis)뿐 아니라 혈관형성(vasculogenesis) 기전에도 의존한다는 것을 보여준다. 제자리에서 분화를 겪는 내피 전구체 세포로부터의 새로운 혈관의 형성이 혈관형성에 의해 이해된다. 혈관형성이 배형성에 제한된다는 믿음은 건강한 인간 및 동물의 말초혈액에서 내피 전구체 세포(EPC)의 검출에 의해 반박되었다. 동물 모델을 사용하여, 골수로부터 유래된 내피 전구체 세포가 혈관신생에 능동적으로 참여하는 것이 입증되었다. 또한 내피-특이적 항원을 발현하는 백혈구의 특이적 CD34-양성 서브그룹이 허혈 부위에 형성되는 것도 보여주었다. 더욱이, 성체 기관에서 혈관의 형성에 상당히 기여하는 내피 전구체 세포(EPC)가 CD133+ 및 CD34+ 세포로부터 생체외에서 얻어질 수 있었다(Asahara et al., Science, 275 (1997), 964-967; Crosby et al., Circ . Res., 87 (2000), 728-730; Gehling et al., Blood, 95 (2000), 3106-3112). 분리된 CD34+ 세포 또는 배양된 내피 전구체 세포의 주입이 당뇨병 마우스에서 혈류의 회복을 가속화하고(Schatteman et al., J. Clin. Invest., 106 (2000), 571-578), 생체내에서 혈관신생을 개선하는 것도 보여주었다(Asahara et al., Circ . Res., 85 (1999), 221-228; Crosby et al., Circ . Res., 87 (2000), 728-730; Murohara et al., J. Clin . Invest., 105 (2000), 1527-1536). 또한, CD34+ 세포에 의해 유도된 혈관신생이 심장 기능을 개선하는 것으로 나타났다(Kocher et al., Nat. Med ., 7 (2001), 430-436). CD34+ 세포 외에, CD34- 음성 단핵 혈구도 적절한 변환분화에 의해 내피 전구체 세포의 기원으로서 사용될 수 있다.

그러나, 내피 전구체 세포의 기동 및 분화의 기초가 되는 기전은 아직 완전히 설명되지 않는다. 분자생물학 및 세포생물학적 연구에서, 여러 사이토카인 및 혈관성 성장 인자가 골수에서 내피 전구체 세포의 기동에 자극 효과를 갖는 것으로 나타났다. 예를 들어, VEGF 및 GM-CSF와 같은 혈관신생촉진 인자는 내피 전구체 세포의 수를 증가시킬 수 있다는 것이 알려져 있다(Asahara et al., EMBO , J., 18 (1999), 3964-3972; Takahashi et al., Nat. Med ., 5 (1999), 434-438). VEGF (vascular endothelial growth factor)는 여러 이형으로 존재하고, 예를 들어 성장하는 내피 세포의 표면에 존재하는 두 개의 타이로신 키나아제 수용체인 VEGF-R1(flt-1) 및 VEGF-R2(flk-1)에 결합하는 단백질이다(Wernert et al., Angew . Chemie, 21 (1999), 3432-3435). VEGF 수용체의 활성화는 Ras-Raf-MAP 키나아제 경로를 경유하여 내피 세포 또는 내피 전구체 세포의 표면에 프로테이나제 및 특이적 인테그린의 발현을 야기하고, 최종적으로 혈관신생 자극을 향한 이들 세포의 이동 및 증식의 개시를 야기한다. GM-CSF(granulocyte-macrophage colony stimulating factor)는 지금까지 주로 호중구, 대식세포 및 호산구를 포함하는 백혈구의 자극을 위한 것으로 알려진 사이토카인이다. PlGF(placental growth factor)는 내피 전구체 세포의 기동을 자극하지만 이의 증식은 자극하지 않는 것으로 알려져 있다. Llevadot 등(J. Clin . Invest., 108 (2001), 399-405)의 연구로부터, 지질-저하 약물로 사용되고 관상혈관 질환의 질병율 및 사망율을 감소시키는 HMG-CoA 리덕타제 저해제, 특히 스타틴은 내피 전구체 세포를 기동할 수 있는 것으로 밝혀졌다. Dimmeler 등(J. Clin . Invest., 108 (2001), 391-397)은 아토르바스타틴 및 심바스타틴과 같은 스타틴이 말초혈액으로부터 분리된 단핵 세포 및 CD34+ 줄기세포에서 내피 전구체 세포의 생체외 및 생체내 분화를 유의적으로 개선시키는 것을 보여줄 수 있었다. 예를 들어, 스타틴으로 마우스를 치료하는 것은 분화된 내피 전구체 세포 수의 증가를 야기하고, 스타틴은 VEGF 만큼 강력한 효과를 나타내었다.

본 발명은, 특히 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질환의 치료, 및 내피 전구체 세포의 개선된 자극을 위한 수단 및 방법을 제공하고, 다른 조직의 보호 및 재생을 위한 방법 및 수단을 제공하는 기술적 문제에 기초한다.

본 발명은 인간 또는 동물 신체에서 내피 전구체 세포의 생리적 기동, 내피 전구체 세포의 증식, 내피 전구체 세포의 내피 세포로의 분화 및/또는 내피 전구체 세포의 혈관신생 또는 혈관형성 자극으로의 이동의 자극을 위해 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체가 특히 저용량으로 사용될 수 있다는 교시에 의해 이러한 기술적 문제를 해결한다. 본 발명에 따른 내피 전구체 세포의 기동 및/또는 분화의 자극은 화학적, 열적, 기계적 및 생물학적 약제에 의해 손상된 다른 조직의 재생 및 보호뿐 아니라, 생후 혈관신생, 특히 혈관형성을 증가시키고 내피 전구체 세포 및/또는 내피 세포의 기능장애와 관련된 질병을 시험하기 위한 중요한 신규 치료적 전략을 나타낸다.

본 발명은 또한 내피 전구체 세포 및/또는 내피 세포의 기능장애와 관련된 질병 또는 병리학적 상태의 치료를 위해, 저용량 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 사용을 교시하는 것에 의하여 이러한 기술적 문제를 해결한다.

또한, 본 발명은 각 조직 기능의 장애와 관련된 병리학적 상태 또는 질병 상태에 있는 다른 조직의 재생 및 보호를 위해, 저용량 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 사용을 교시하는 것에 의하여 이러한 기술적 문제를 해결한다.

기초가 되는 기술적 문제는 또한 저용량 에리스로포이에틴과 함께 하나 이상의 다른 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제를 순차적으로, 적시에 연속적 또는 동시에 투여하는 것에 의하여 해결된다.

따라서, 본 발명은 특히 다음 태양 A) 내지 K)의 각각 및/또는 조합과 관련된다:

A) 바람직하게는 질병의 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 용도, 여기에서 에리스로포이에틴 또는/및 약제학적 조성물은 오전 6:00 내지 10:00시 시기에 인간 또는 동물 신체에 아침 적용하도록 적합하게 고안된다.

B) 특히 질병의 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물의 생산을 위한, 바람직하게는 태양 A)와 조합된 에리스로포이에틴의 용도, 여기에서 저용량의 약제학적 조성물은 a) 적어도 하나의 내피 전구체 세포의 기능 장애, b) 고혈압, 고콜레스테롤혈증, 인슐린 저항, ADMA 농도 증가 또는 고호모시스테인혈증과 같은 적어도 하나의 심장혈관 위험 인자, 및 c) 좌심실 비대, 미세알부민뇨증, 인지 기능장애, 경동맥 내막의 두께 증가, 단백뇨증 또는 사구체 여과율<80 ㎖/분, 바람직하게는 30 내지 80 ㎖/분과 같은 적어도 하나의 말단-기관 손상을 나타내는 인간 또는 동물 환자의 예방 또는 치료를 위하여 적합하게 고안된다.

C) 인간 또는 동물 신체의 미용 치료, 특히 주름의 치료, 결합조직의 강화, 피부의 보호 및 팽팽하게 함, 유해 환경 작용에 대한 보호, 노화 반점의 치료, 재상피형성의 가속화, 모발 성장의 가속화를 위한, 그리고/또는 메이크업 파운데이션으로서, 바람직하게는 태양 A), B) 또는 A) 및 B)와 조합된 에리스로포이에틴의 용도.

D) 인간 또는 동물 신체의 미용 치료, 특히 주름의 치료, 결합조직의 강화, 피부의 보호 및 팽팽하게 함, 유해 환경 작용에 대한 보호, 노화 반점의 치료, 재상피형성의 가속화, 모발 성장의 가속화를 위한, 그리고/또는 메이크업 파운데이션으로서, 특히 국소 적용을 위한 미용 제제의 생산을 위한, 바람직하게는 태양 A), B) 또는 A) 및 B)와 조합된 에리스로포이에틴의 용도.

E) 인간 또는 동물 신체에서 조직 또는 맥관의 재생을 위해, 에리스로포이에틴 및 세포 치료에 사용 가능한 적어도 하나의 세포 군집과 내피 전구체 세포의 혼합물을 함유하는 약제학적 조성물의 생산을 위한, 바람직하게는 태양 A), B), C) 또는 D)의 하나 이상과 조합된, 에리스로포이에틴 및/또는 세포 치료에 사용 가능한 적어도 하나의 세포 군집과 내피 전구체 세포의 혼합물의 용도, 여기에서 혼합물은 적용 전에 생체외에서 에리스로포이에틴과 접촉하게 된다.

F) 인간 또는 동물 신체에서 조직 또는 맥관의 재생을 위해, 에리스로포이에틴 및/또는 세포 치료에 사용 가능한 적어도 하나의 세포 군집과 내피 전구체 세포의 혼합물을 함유하는 약제학적 조성물의 생산을 위한, 바람직하게는 태양 A), B), C), D) 또는 E)의 하나 이상과 조합된, 에리스로포이에틴 및/또는 세포 치료에 사용 가능한 적어도 하나의 세포 군집과 내피 전구체 세포의 혼합물의 용도, 여기에서 에리스로포이에틴은 혼합물 적용 전, 후 또는 동시에 인간 또는 동물 신체에 투여된다.

G) 질병의 예방 또는 치료를 위해, 에리스로포이에틴 및 적어도 하나의 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제를 함유하는 약제학적 조성물 또는 키트의 생산을 위한, 바람직하게는 A) 내지 F)에 따른 태양의 하나 이상과 조합된, 에리스로포이에틴 및/또는 적어도 하나의 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제, 특히 약물학적 활성 성분의 용도, 여기에서 약제학적 조성물 또는 키트는 에리스로포이에틴과 적어도 하나의 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제의 순차적, 적시의 연속적 또는 동시 적용을 위해 적합하게 고안된다. 따라서, 본 발명은 G)에서 상기 나타낸 방법으로 에리스로포이에틴을 사용하는 것과도 관련되는데, 여기에서 기계적 약제는 내부인공기관(endoprostheses), 바람직하게는 치아, 뼈 또는 인대/힘줄 대체를 위한 이식 지지물이다. 본 발명은 또한, G)에서 상기 나타낸 방법으로 에리스로포이에틴을 사용하는 것과도 관련되는데, 여기에서 생물학적 약제는 간, 신장, 심장, 췌장 또는 피부와 같은 고형 기관이다. 이와 관련하여, 모발 이식물도 생물학적 약제로서 이해될 것이다. 특히 바람직한 태양에서, 본 발명은 상기 형태의 생물학적 약제 또는 내부인공기관, 특히 치아, 치아 대체물, 치아 이식물, 뼈 대체물, 뼈 이식물, 예를 들어 고관절 인공기관, 인대/힘줄 대체물, 예를 들어 십자 인대의 이식 지지물의 이식 위치에 국소적 또는 전신적 적용을 위한 약제학적 조성물 또는 키트의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 용도와 관련되는데, 여기에서 에리스로포이에틴은 상기 생물학적 또는 기계적 약제, 즉 예를 들어 내부인공기관의 이식 전에, 예를 들어 이식 수 주일 전에 전신적 또는 국소적으로 적용되고, 이후 이식이 수행된다. 다른 태양에서, 상기 생물학적 약제 또는 내부인공기관과 같은 기계적 약제의 이식이 에리스로포이에틴의 사용과 동시에 수행되는 것도 제공된다. 다른 태양에서, 에리스로포이에틴이 상기 내부인공기관이나 기계적 또는 생물학적 약제의 이식 후 투여되는 것도 제공된다. 이들 태양에 따르면, 치아 또는 뼈 인공기관과 같은 이식물이 이식되는 조직 또는 신체 구조는 기동 또는 조정되어, 예를 들어 신체 구조로 성장하는 것에 의해, 생물학적 약제 또는 이식물과 같은 기계적 약제의 보다 양호하고 빠른 통합이 가능하게 된다.

H) A) 내지 G)의 태양의 하나 이상에 따른 에리스로포이에틴의 용도로서, 약제학적 조성물은 인간 또는 동물 신체에 적용 중 헤마토크릿의 어떠한 증가도 야기하지 않으며, 특히 에리스로포이에틴의 적용 전 헤마토크릿 값의 10% 보다 크지 않다.

I) 약제학적 조성물에서 A) 내지 H)의 태양의 하나 이상에 따른 에리스로포이에틴의 용도로서, 에리스로포이에틴은 상기 예방, 처치 또는 치료에 적합하게, 적혈구 생산을 활성화시킬 수 없는 저용량으로, 특히 주당 0.001 IU/체중 ㎏에서 주당 90, 특히 50 IU/체중 ㎏까지의 저용량으로 고안된다.

K) A) 내지 I)의 태양의 하나 이상에 따른 에리스로포이에틴의 용도, 여기에서 질병은 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 인슐린 저항, 내피-중개의 만성 염증성 질환, 세망내피세포증식을 포함하는 내피세포증식, 아테롬성 동맥경화증, 노화-관련된 심장혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 자간전증, 레이노드씨병, 간염, 간경화, 급성 또는 만성 간부전과 같은 간 질환, 뼈 및 연골 질환 또는 병변, 특히 위장관에서의 점막 질환 또는 병변, 크론씨병, 궤양성 대장염, 임신-유도성 고혈압, 만성 또는 급성 신부전, 특히 말기 신부전, 사구체 여과율 30 내지 80 ㎖/분의 신장 기능 제한, 미세알부민뇨증, 단백뇨증, ADMA 농도 증가와 관련된 상태 또는 상처 및 이의 후유증일 수 있다.

본 발명은 또한 에리스로포이에틴, 내피 전구체 세포 및 세포 치료에 사용 가능한 적어도 하나의 세포 군집을 포함하는 키트의 생산과도 관련되는데, 여기에서 에리스로포이에틴은 바람직하게는 저용량으로 존재한다.

본 발명에 따라, 놀랍게도 저용량 에리스로포이에틴 처치가 내피 전구체 세포의 생리적 기동을 야기한다는 것이 밝혀졌는데, 여기에서 순환하는 내피 전구체 세포의 수가 증가하고 이의 분화가 유도된다. 또한, 어떤 병리적 상황 하에서 일어나는 내피 전구체 세포의 기능적 결함이 보상된다. 본 발명에 따르면, 말기의 만성 신장 질환이 있는 환자에서 순환하는 줄기세포의 수는 건강한 대상에서와 같이 높지만, 이들 환자에서 이들은 내피 전구체 세포를 통해 내피 세포로 분화하는 능력을 잃었다. 따라서, 부착 능력이 있고 내피 세포 표현형을 나타내는 세포의 수는 건강한 대상과 비교하여 만성 신장 질환이 있는 환자에서 명백히 감소된다(de Groot et al., Kidney Int . 2004;66:641-6). 내피 전구체 세포의 이러한 기능 감소는 사구체 여과율 30, 바람직하게는 40 내지 80 ㎖/분의 중등도 신장 기능 제한에서 이미 나타날 수 있다. 본 발명에 따르면, 순환하는 줄기세포의 수는, 이들 환자뿐 아니라 건강한 신장을 갖는 환자 및/또는 대상에서도, 본 발명에 따른 저용량 에리스로포이에틴 처치 후 50% 이상 유의적으로 상승한다. 특히, 내피 표현형을 나타내는 세포의 수가 극적으로 증가한다. 기능적 세포 배양 시험에 의해 설명된 바와 같이, 만성 신장 질환을 갖는 환자에서 내피 전구체 세포의 손상된 부착 능력은 사구체 여과율 30, 바람직하게는 40 내지 80 ㎖/분으로 특징지어지는데, 저용량 에리스로포이에틴 처치에 의해 3 배만큼 증가한다. 건강한 신장을 갖는 대상 및/또는 환자에서는 2 내지 3 배만큼 증가한다. 분화 중인 내피 전구체 세포 및 내피 세포의 부착 능력은 새로운 조직 및/또는 맥관의 형성을 위한 기본적인 선행조건의 하나이다. 이러한 방식으로 에리스로포이에틴은 조직 또는 기관에서 혈관신생, 특히 혈관형성을 유도할 수 있는데, 특수한 예로서 신장이 있으며, 여기에서 대응하는 혈관형성 또는 혈관신생 자극이 방출된다.

본 발명에 따라, 저용량 에리스로포이에틴은 사람 또는 동물 신체, 특히 성체 기관에서 내피 전구체 세포의 생리적 기동, 내피 전구체 세포의 증식, 내피 전구체 세포의 내피 세포로의 분화 및/또는 내피 전구체 세포의 혈관형성 또는 혈관신생 자극으로의 이동을 자극하는 데 사용될 수 있다. 본 발명에 따라, 저용량 에리스로포이에틴은 병리적 혈관 변화가 존재하는 조직 또는 기관에서 혈관형성에 의해 새로운 혈관의 형성을 자극하는 데 유리하게 채용될 수 있다. 또한, 내피 조직의 형성도 저용량 에리스로포이에틴에 의한 내피 전구체 세포의 자극에 의해 유도될 수 있다. 본 발명에 따라, 저용량 에리스로포이에틴은 또한 내피 전구체 세포 및/또는 내피 세포의 기능장애와 관련된 인간 또는 동물 신체의 질병을 치료하는 데 채용될 수 있다. 이러한 기능장애를 나타내는 환자 집단은 보통 고혈압, 고콜레스테롤혈증, 인슐린 저항, 고호모시스테인혈증, ADMA 농도 증가와 같은 심장혈관 위험 인자, 및 좌심실 비대, 미세알부민뇨증, 단백뇨증 또는 사구체 여과율(GFR) 30, 바람직하게는 40 내지 80 ㎖/분 등의 말단 기관 손상을 갖는다.

본 발명은 또한 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제의 작용에 의해 그 기능이 위협받는 조직의 보호 및 재생을 위한 저용량 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다. 본 발명에 따라, 저용량 에리스로포이에틴의 국소적 적용은 이미 존재하는 피부, 특히 얼굴 피부의 주름의 예방 및 감소, 피부의 보호 및 노화 반점의 감소와도 관련된다. 본 발명에 따라, 저용량 에리스로포이에틴 또는 유도체의 이러한 사용은 하나 이상의 다른 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제와 순차적으로, 적시에 연속적 또는 동시에 일어날 수 있다. 본 발명에 따르면, 이러한 방식으로 최대 생물학적 효과를 얻기 위해, 저용량 에리스로포이에틴은 그의 24시간 주기 리듬에 적합화된 방식으로 치료적으로 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 바람직한 태양에서, 이러한 방식으로 세포 치료 가능한 조직 세포가 혈관계와 충분히 결합하면서 정착하는 것을 보장하기 위해, 내피 전구체 세포는 생체외에서 저용량 에리스로포이에틴과 함께 예비 배양 및/또는 생체내에서 저용량 에리스로포이에틴의 국소적 및 전신적 적용 후 세포 치료에 사용 가능한 다른 세포 군집과 동시에 적용된다.

본 발명과 관련하여, "에리스로포이에틴(erythropoietin)" 또는 "EPO"는 적절히 고용량에서 적혈구모세포를 통해 적혈구로의 줄기세포의 성장, 분화 및 성숙을 제어하는 물질로 이해될 것이다.

에리스로포이에틴은 166 아미노산, 3 개의 글리코실화 위치 및 약 34,000 Da의 분자량을 갖는 당단백질이다. 적혈구 전구체 세포의 EPO-유도된 분화 중, 글로빈 합성이 유도되고, 헴 복합체의 합성이 증가되고 페리틴 수용체의 수가 증가된다. 이에 의해, 세포는 더 많은 철을 수집하고 기능적 헤모글로빈을 합성할 수 있다. 성숙 적혈구에서는, 헤모글로빈이 산소와 결합한다. 따라서, 적혈구 및 그 안에 함유된 헤모글로빈은 유기체에 산소를 공급하는 데 핵심적인 역할을 한다. 이들 과정은 적혈구 전구체 세포의 세포 표면에서 적절한 수용체와 EPO의 상호작용을 통해 개시된다(Graber and Krantz, Ann. Rev. Med. 29 (1978), 51-56).

여기에서 사용된 용어 "에리스로포이에틴(erythropoietin)"은 모든 기원의 EPO, 특히 인간 또는 동물 EPO를 포함한다. 여기에 사용되는 용어는 천연적으로 존재하는, 즉 야생형 EPO 뿐 아니라, 야생형 에리스로포이에틴의 생물학적 작용을 나타내는 한, 그 유도체, 유사체, 변경체, 변형체, 변이체 등을 포함한다.

본 발명과 관련하여, "유도체(derivatives)"는 기본적인 에리스로포이에틴 구조를 유지하면서 하나 이상의 원자 또는 분자 그룹 또는 잔기의 치환, 특히 에틸렌글리콜과 같은 당 사슬의 치환에 의하여 얻어지고, 그리고/또는 그 아미노산 서열이 적어도 하나의 위치에서 천연적으로 존재하는 인간 또는 동물 에리스로포이에틴 단백질과 다르지만 본질적으로 아미노산 수준 및 동등한 생물학적 활성에서 높은 정도의 상동성을 갖는 에리스로포이에틴의 기능적 균등체 또는 유도체로 이해될 것이다. 본 발명에서 채용될 수 있는 에리스로포이에틴 유도체는, 예를 들어 WO 94/25055, EP 0148605 B1 또는 WO 95/05465로부터 알려진다.

"상동성(homology)"은 특히 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 특히 바람직하게는 90%, 95%, 97% 및 99% 이상의 서열 동등성을 의미한다. 따라서, 본 분야에서 당업자에게 알려진 "상동성"이라는 용어는 둘 또는 그보다 많은 폴리펩티드 분자 사이의 관계 정도를 의미한다. 이것은 서열 사이의 일치에 의해 결정된다. 이러한 일치는 동등한 일치 또는 아미노산의 보존적 교체를 의미할 수도 있다.

본 발명에 따르면, "유도체(derivative)"라는 용어는 융합 단백질도 포함하는데, 여기에서 다른 단백질의 기능적 영역은 N-말단부 또는 C-말단부에 존재한다. 본 발명의 하나의 태양에서 이러한 다른 단백질은, 예를 들어 GM-CSF, VEGF, PlGF, 스타틴 또는 내피 전구체 세포에 대한 자극 작용을 갖는 다른 인자일 수 있다. 본 발명의 또 다른 태양에서 다른 단백질은 또한 분화된 내피 세포에 대한 자극 작용을 갖는 인자, 예를 들어 안지오제닌(angiogenin), VEGF(vascular endothelial growth factor) 또는 bFGF(basic fibroblast growth factor)일 수 있다. bFGF 및 VEGF에 대해서는, 이들 성장 인자가 내피 세포에 대한 강력한 유사분열촉진 및 화학주성 활성을 나타내는 것이 알려져 있다.

에리스로포이에틴 유도체와 천연 에리스로포이에틴 간의 차이는, 예를 들어 에리스로포이에틴 아미노산 서열을 코딩하는 염기서열의 재조합 및/또는 염기 교환, 부가, 삽입, 치환, 결실과 같은 변이를 통해 일어날 수 있다. 본 발명에 따르면, (EPO-) 알파, (EPO-) 베타, Aranesp(darbepoetin alfa) 또는 CERA(continuous erythropoietin receptor antagonist; 연속적 에리스로포이에틴 수용체 길항제)가 바람직하게 에리스로포이에틴으로 사용된다. 명백하게, 이러한 차이는 다른 유기체로부터의 서열 또는 천연적으로 변이된 서열과 같은 천연적으로 존재하는 서열 변화이거나, 또는 화학적 약제 및/또는 물리적 약제와 같은 본 분야에 알려진 통상적인 수단을 사용하여 에리스로포이에틴을 코딩하는 핵산 서열로 선택적으로 도입된 변이일 수도 있다. 본 발명과 관련하여, "유도체(derivative)"라는 용어는 변이된 에리스로포이에틴 분자, 즉 에리스로포이에틴 변이체도 포함한다.

본 발명에 따르면, 에리스로포이에틴의 펩티드 또는 단백질 유사체도 사용될 수 있다. 본 발명과 관련하여, "유사체(analogs)"라는 용어는 에리스로포이에틴 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 갖지는 않지만 에리스로포이에틴과 매우 닮은 3-차원 구조를 가져, 상응하는 생물학적 활성을 갖는 화합물을 포함한다. 에리스로포이에틴 유사체는, 예를 들어 적절한 구조에서 에리스로포이에틴의 수용체 결합에 책임이 있는 아미노산 잔기를 함유하고, 따라서 에리스로포이에틴 결합 영역의 본질적인 표면 특성을 가장할 수 있는 화합물일 수 있다. 이러한 형태의 화합물은, 예를 들어 Wrighton et al., Science, 273 (1996), 458에 기재되어 있다. 본 발명에 따라 사용되는 EPO는 여러 가지 방법, 예를 들어 인간 요로부터 또는 재생불량성 빈혈 환자의 요 또는 혈장(혈청을 포함하는)으로부터 분리하는 것에 의해 생산될 수 있다(Miyake et al., J.B.C. 252 (1977), 5558). 하나의 예로서, 인간 EPO는 인간 신장 종양 세포의 조직 배양물로부터(JA 미심사된 출원 55790/1979), 인간 EPO를 생산하는 능력을 갖는 인간 림프아세포로부터(JA 미심사된 출원 40411/1982), 그리고 인간 세포주의 세포 융합에 의해 얻어지는 융합세포 배양물로부터 얻어질 수 있다. EPO는 또한, 예를 들어 박테리아, 효모, 또는 식물, 동물 또는 인간 세포주에서, 적절한 EPO의 아미노산 서열을 코딩하는 적절한 DNA 또는 RNA를 사용하여 유전공학에 의해 원하는 단백질을 생산하도록 하는 유전공학적 방법에 의하여 생산될 수도 있다. 이러한 방법은 예를 들어 EP 0148605 B2 또는 EP 0205564 B2 및 EP 0411678 B1에 기재되어 있다.

본 발명은 특히, 인간 또는 동물 신체, 특히 성체 기관에서, 내피 전구체 세포의 생리적 기동, 내피 전구체 세포의 증식, 내피 전구체 세포의 내피 세포로의 분화 및/또는 내피 전구체 세포의 혈관형성 또는 혈관신생 자극으로의 이동을 자극하기 위한 저용량 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도에 관련된다.

본 발명은 또한 저용량 에리스로포이에틴 및, 내피 전구체 세포의 기능 및 수를 증가시키고 기관 보호 및 재생에 관련된 저용량 에리스로포이에틴의 효과를 강화시키는 적어도 하나의 다른 적절한 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제 또는 활성 성분, 특히 약물학적 활성 성분의 순차적 사용과 관련된다.

또한, 본 발명은 이러한 방식으로 내피 전구체 세포의 수 및 기능의 증가 및/또는 조직 손상의 재생 또는 진행의 완화를 위하여, 저용량 에리스로포이에틴에 더하여, 바람직한 태양에서는 하나 이상의 다른 약물학적 활성 성분, 예를 들어 VEGF, GM-CSF, M-CSF, 트롬보포이에틴, SCF, SDF-1, NGF, PlGF, HMG 코리덕타제 저해제, ACE 저해제, AT-1 저해제 및 NO 공여제의, 바람직하게는 순차적인, 적시의 연속적 또는 동시적 투여와 관련된다. 이와 관련하여, 본 발명에 따른 의도는 다음 경로에 영향을 준다: A) 골수 내에서 또는 줄기세포를 위한 특정 조직 적소에서 줄기세포 및/또는 내피 전구체 세포의 정량적 및 정성적 최적화; B) 골수 또는 다른 "줄기세포" 적소로부터 말초 혈액으로의 줄기세포 및/또는 내피 전구체 세포의 기동; C) 말초 혈액 및/또는 생체외 선택적 배양 조건 하에서, 바람직하게는 산소 농도 0.1% 내지 10%의 저산소 조건 하 배양물에서, 줄기세포 및/또는 내피 전구체 세포의 정량적 및 정성적 최적화; D) 줄기세포 및/또는 내피 전구체 세포의 손상 부위로의 귀소; E) 줄기세포 및/또는 내피 전구체 세포의 표적 조직으로의 부착 및 이동; F) 내피 전구체 세포에 의한 혈관신생.

따라서, 본 발명은 생체외 저용량 에리스로포이에틴과 함께 예비 배양 및/또는 생체내 저용량 에리스로포이에틴의 전신적 및 국소적 적용 후, 내피 전구체 세포 및 세포 치료에 이용 가능한 하나 이상의 세포 군집, 특히 간세포, 근육세포, 심근세포 또는 섬 이식체의 동시 또는 다른 시기의 적용과 관련되며, 이에 따라 세포 치료에 사용되는 이들 세포 군집의 수용체의 기능, 정착, 혈관화 및 혈액 순환과의 연결을 증진 및 가속화한다.

본 발명은, 특히 유해한 환경 인자에 대하여 주름과 주름살을 예방 또는 적시에 감소시키고, 결합조직을 강화하고, 피부, 특히 얼굴 피부를 보호하고 팽팽하게 하기 위한, 그리고 메이크업 화운데이션으로서, 특히 저용량의 에리스로포이에틴 또는 "미용 관리" 면에서 국소 적용을 위한 적절한 활성 성분의 용도와 관련된다. 또한, 에리스로포이에틴의 국소 용도는 노화 반점의 형성 및 진행을 방해하고, 피부 조직을 정제하고, 피부 회춘 과정, 특히 재상피화를 지지한다. 더욱이, 에리스로포이에틴은 모발 성장을 가속화한다.

본 발명은 에리스로포이에틴의 24시간 주기 내인성 리듬에 적합화된 방식으로 적용하기 위해 적합하게 고안된 약제학적 조성물의 생산을 위한 저용량 에리스로포이에틴의 용도와도 관련된다. 내인성 에리스로포이에틴 생산은 늦은 오후에 최고 위상(하루중 최대값)을 가지며, 그래서 이 방식으로 최대 생물학적, 치료적 또는 미용 효과를 달성하기 위해서, 저용량 에리스로포이에틴의 투여는 아침, 특히 오전 6:00 내지 10:00시에 이루어지는 것이 바람직하다.

본 발명은 a) 내피 전구체 세포의 기능장애를 갖는 환자, 및 b) 고혈압, 고콜레스테롤혈증, 인슐린 저항, 고호모시스테인혈증, ADMA 농도의 증가와 같은 적어도 하나의 심장혈관 위험 인자, 및 c) 좌심실 비대, 미세알부민뇨증, 인지 기능장애, 경동맥 내막의 두께 증가, 단백뇨증 또는 사구체 여과율(GFR)<80 ㎖/분, 특히 30, 바람직하게는 40 내지 80 ㎖/분과 같은 적어도 하나의 말단-기관 손상을 갖는 환자에서, 내피 전구체 세포의 물리적 기동, 및/또는 증식 및 분화의 자극, 및/또는 혈관형성의 자극, 및/또는 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병의 치료, 및/또는 에리스로포이에틴 및 내피 전구체 세포의 자극을 위한 다른 적절한 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물 및 이러한 질병의 치료를 위한 약제학적 조성물의 생산을 위한, 저용량 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다.

바람직한 태양에서, 본 발명은 또한 이러한 방식으로 내피 전구체 세포의 수 및 기능의 증가 및/또는 조직 손상의 재생 또는 진행의 완화를 초래하기 위한, 하나 이상의 다른 화학적, 열적, 기계적 및 생물학적 약제뿐 아니라 저용량 에리스로포이에틴의 순차적인, 적시의 연속적 또는 동시 투여와 관련된다. 이러한 기계적 약제는 내부인공기관, 바람직하게는 치아, 뼈 또는 인대/힘줄 대체를 위한 이식 지지물이다. 또한, 생물학적 약제는 간, 신장, 심장, 췌장 또는 피부와 같은 고형 기관이거나, 모발 이식물일 수 있다. 따라서, 본 발명은 내부인공기관과 같은 기계적 약제 또는 동시에, 이어서 또는 앞서 이식되는 생물학적 약제가 주위 신체 구조로 성장하거나 보다 양호하고 신속하고 효과적으로 통합될 수 있도록, 특히 저용량의 EPO가 사용되는 것을 제공한다. 따라서, 본 발명은 또한 생물학적 약제 또는 내부인공기관이 주위 신체 구조, 특히 치아, 치아 대체물, 치아 이식물, 또는 뼈 대체물, 뼈 이식물, 특히 고관절 인공기관 또는 인대/힘줄 대체물, 특히 십자 인대와 같은 다른 내부 인공기관으로 통합되는 것을 개선, 특히 촉진 또는 가속화하기 위한 약제학적 조성물 또는 키트의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다. 이와 관련하여, 필요에 따라, 에리스로포이에틴이 세포 치료에 적합한 세포 군집 및/또는 내피 전구체 세포와 함께 사용되도록 제공될 수 있다. 상기 언급된 생물학적 또는 기계적 약제가 환자의 표적 구조, 특히 표적 조직, 표적 뼈 또는 표적 연골로 통합되는 것을 개선, 특히 촉진 또는 가속화하기 위한 약제학적 조성물 또는 키트의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 용도에서, 사용되는 기계적 약제가 예를 들어 철, 세라믹, 플라스틱 또는 다른 매트릭스 물질로 만들어지는 다른 태양이 제공될 수 있다. 또한, 골생성 가능성을 갖는 세포인 골아세포, 혈소판, 혈구 또는 유사한 약제가 본 발명에서 세포 치료에 적절한 세포 군집으로서 사용될 수 있다. 다른 바람직한 태양에서, 특히 사용된 기계적 약제가 피브린 아교와 같은 유기 접착제와 함께 약제학적 조성물 또는 약제학적 키트에 함유되는 것이 제공될 수 있다.

본 발명과 관련하여, "내피 전구체 세포(endothelial progenitor cells; EPC)"는 혈류 내에서 순환하고 내피 세포로 분화하는 능력을 갖는 세포로 이해될 것이다. 배 발생 중에 존재하는 내피 전구체 세포는 혈관아세포(angioblasts)이다. 성체 유기체 중에 존재하는 내피 전구체 세포는 혈관아세포-유사 세포로서, 말초 혈액으로부터 분리되는 CD34+ 줄기세포 및/또는 단핵세포, 특히 CD34+ 내지 CD45+ 단핵구로부터 얻어질 수 있다.

본 발명과 관련하여, "기동(mobilization)" 또는 "생리적 기동(physiological mobilization)"은 성장인자에 의해 줄기세포 및/또는 전구체 세포를 골수 또는 다른 "줄기세포" 적소로부터 활성화시키는 과정으로 이해될 것으로, 여기에서 줄기세포 또는 전구체 세포는 혈류, 특히 말초 혈액으로 들어간다.

본 발명과 관련하여, "증식(proliferation)"은 더 커지고 이어서 둘 이상의 딸세포로 분할하게 되는 세포의 능력으로 이해될 것이다. 따라서, 내피 전구체 세포의 EPO-중개 자극은 특히 내피 전구체 세포의 수 및 이에 따른 분할 행동에 관련된다.

본 발명과 관련하여, 내피 전구체 세포의 "분화(differentiation)"는 골수 또는 특이적 조직 적소로부터 유래된 단핵구 세포의 내피 전구체 세포를 경유한 내피 세포로의 발달로 이해될 것이다. "내피 세포(endothelial cells)"는 내피, 즉 혈관 및 장액성 공동의 단층 세포 내벽을 형성하는 세포로 이해될 것이다. 내피 세포는 혈관 활성 물질, 예를 들어 EDRF(endothelial derived relaxing factor)와 같은 혈관확장 물질 또는 엔도텔린과 같은 수축성 물질, 혈액응고의 저해 또는 활성화를 위한 인자 및 혈관 투과율의 조절을 위한 인자를 분비하는 것을 특징으로 한다. 내피 세포는 또한 내피하 결합조직의 성분, 특히 타입 Ⅳ 및 Ⅴ 콜라겐, 라미닌, 피브로넥틴 및 트롬보스폰딘과 같은 세포 부착 단백질, 예를 들어 평활근 세포를 위한 성장인자, 및 새로운 혈관의 형성을 위한 인자를 합성한다.

본 발명과 관련하여, 내피 전구체 세포의 "이동(migration)"은 혈류에 존재하는 내피 전구체 세포가 혈관형성 또는 혈관신생 자극으로 이동하고 혈관형성 또는 혈관신생 자극 영역에서 농축되는 사실로 이해될 것이다. "혈관형성 자극(vasculogenic stimulus)"은 내피 전구체 세포에 특이적으로 작용하고 화학적 자극이 발생한 신체에서 그 위치로 이의 이동을 초래하는, 인간 또는 동물 신체의 조직 또는 혈관에서의 화학적 자극으로 이해될 것이다. 이러한 방식으로, 혈관형성 과정은 혈관형성 자극에 의해 유도된다. "혈관신생 자극(angiogenic stimulus)"은 분화된 내피 전구체 세포에 특이적으로 작용하고 화학적 자극이 발생한 신체에서 그 위치로 이의 이동을 초래하는, 인간 또는 동물 신체의 조직 또는 혈관에서의 화학적 자극으로 이해될 것이다. 이러한 방식으로, 혈관신생의 유도가 혈관신생 자극에 의해 유도된다.

본 발명의 다른 태양에서, 분화 중인 내피 전구체 세포의 부착 능력을 증가시키기 위한 저용량 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도가 제공된다. 본 발명에 따르면, 에리스로포이에틴은 특히 내피 전구체 세포의 부착 능력, 즉 세포-대-세포 부착을 개선시키기 위하여 사용된다. 분화중인 내피 전구체 세포 또는 분화된 내피 세포의 부착은 새로운 혈관 또는 새로운 내피 조직의 형성을 위한 기본적인 선행조건의 하나이다. 세포 부착은 단백질 분자에 의해 중개된다.

본 발명은 또한 새로운 혈관 형성의 자극, 특히 혈관형성의 자극을 위한 저용량 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다. 본 발명과 관련하여, "혈관형성(vasculogenesis)"은 그 자리에서 분화 중인 내피 전구체 세포로부터 새로운 혈관의 형성으로 이해될 것이다. 따라서, 본 발명에 따라, 저용량 에리스로포이에틴의 사용에 의해 내피 전구체 세포가 손상된 혈관 영역을 복구하기 위한 새로운 혈관의 국소적 형성 또는 새로운 혈관의 형성에 증가된 정도로 참가할 수 있는 것이 보장된다. 따라서, 본 발명에 따라, 저용량 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 사용이 새로운 혈관의 국소적 형성을 통한 손상된 혈관 영역의 교체 및/또는 새로운 혈관의 형성을 촉진할 것이다.

본 발명의 다른 태양에서, 내피 조직의 형성을 위해 내피 전구체 세포를 자극하기 위한 저용량 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도가 제공된다.

본 발명의 특히 바람직한 태양에서, 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 인간 또는 동물 신체의 병리적 상태 또는 질병, 또는 이의 후유증의 치료를 위한 저용량 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도가 제공된다.

본 발명과 관련하여, "질병(diseases)", "병리적 상태(pathological states)" 또는 "질환(disorders)"은 기관 또는 전체 유기체에서 생명 과정의 손상이, 주관적인 경험으로 또는 객관적으로 검출 가능한 물리적, 감정적 또는 정신적 변화를 야기하는 것으로 이해될 것이다. 본 발명에 따르면, 이들 질병은 특히 내피 전구체 세포의 기능장애, 즉 이들 세포의 이러한 기능장애의 결과 또는 이들 세포에 의해 중개되는 질병과 관련된다. 또한, 본 발명에 따르면, "질병(diseases)", "병리적 상태(pathological states)" 또는 "질환(disorders)"은 저용량 에리스로포이에틴 또는 적절한 활성 성분의 투여에 의해 그 진행이 저지되거나, 특히 완화될 수 있는, 기관 또는 전체 유기체에서의 생명 과정의 손상으로 이해될 것이다. "후유증(sequelae)"은 1차적 임상적 상태에 더하여 일어나는 2차적 질병, 즉 2차적 질환으로 이해될 것이다.

본 발명과 관련하여, 내피 전구체 세포의 "기능장애(dysfunction)"는 이들 세포의 대사 활동, 자극에 대한 반응, 이동성, 분할 행동 또는 분화 행동과 같은 본질적인 세포 기능의 손상으로 이해될 것이다. 내피 전구체 세포의 기능장애는, 예를 들어 이들 세포가 전혀 증식하지 못하거나 또는 부적절하게만 증식하는 것을 의미할 수 있다. 내피 전구체 세포의 증식은 에리스로포이에틴의 사용에 의해 자극되므로, 내피 전구체 세포 및 이미 분화된 내피 세포 양자의 불완전한 분할 행동은 내피 전구체 세포 또는 내피 세포 수의 증가에 의하여 보상될 수 있다. 내피 전구체 세포의 기능장애는, 예를 들어 이들 세포가 내피 세포로 분화하는 능력의 손상으로 이루어질 수 있다. 내피 전구체 세포의 기능장애는 또한 이들의 손상된 부착 능력 및/또는 혈관신생 또는 혈관형성 자극으로 이동하는 이들의 손상된 능력에 의해 야기될 수도 있다. 이러한 내피 전구체 세포의 기능장애는, 예를 들어 새로운 내피 조직의 형성 및/또는 혈관형성의 손상 또는 방해를 야기할 수 있다. 내피 전구체 세포의 기능장애는 또한, 예를 들어 고혈압, 고지단백혈증, ADMA 혈중농도의 증가, 요독증 또는 당뇨병에 기인하는 병인을 가질 수도 있다. 내피 전구체 세포의 기능장애는, 예를 들어 L-아르기닌으로부터 NO 합성효소(NOS)에 의한 NO(=EDRF)의 생산 감소, 엔도텔린 생산 증가 및/또는 ICAM-1 및 VCAM-1과 같은 부착 분자의 생산 증가로 입증될 수 있다.

본 발명에 따르면, 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병은 특히 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 인슐린 저항, 혈관 염증과 같은 내피-중개의 만성 염증성 질환, 세망내피증식증을 포함하는 내피증식증, 아테롬성 동맥경화증, 노화-관련된 심장혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 레이노드씨병, 자간전증, 임신-유도된 고혈압, 만성 또는 급성 신부전, 특히 말기 신부전, 사구체 여과율 30 내지 80 ㎖/분, 바람직하게는 40 내지 80 ㎖/분의 신장 기능 제한, 미세알부민뇨증, 단백뇨증, ADMA 농도 상승, 상처 치유 및 이의 후유증이다.

"고콜레스테롤혈증(hypercholesterolemia)"은 혈중 콜레스테롤의 증가된 농도를 특징으로 한다. 1차적 고콜레스테롤혈증의 훨씬 빈번한 형태는 다인자(polygenic) 고콜레스테롤혈증이다. 2차적 고콜레스테롤혈증은 당뇨병, 신증후군, 갑상선기능저하 및 간성 질환에서 일어난다.

"당뇨병(diabetes mellitus)"은 다른 병인 및 증상을 갖는 포도당 대사 손상의 여러 형태를 포함한다. 특히, AGE-RAGE 시스템이 혈관계와 관련된 당뇨병 합병증의 발생에 책임이 있다. AGEs(advanced glycation end products)는 단백질 또는 지질의 환원당, 예를 들어 포도당과의 지속적인 노출로 이어지는 일련의 복잡한 반응에 의해 형성된다. AGEs의 형성은 정상적인 노화 과정 중에 당뇨병 및 알쯔하이머병에서 증가된 양으로 일어난다. AGEs의 결합은 산화적 스트레스, NF-κB 전사 인자의 활성화 및 이에 따른 내피세포 항상성의 손상을 야기한다.

"인슐린 저항(insulin resistance)"은 인슐린의 생리적 신호 캐스케이드를 무시하는, 여러 신체 세포에서 신호 전달의 손상으로 이해될 것이다. 따라서, 이 병에 걸린 환자는 정상적인 포도당 대사가 결핍된다.

"내피-중개의 만성 염증성 질환(endothelium-mediated chronic inflammatory disorders)"은 유해 자극에 대한 유기체 및 그 조직의 방어 반응에 의하여 야기되는 인간 또는 동물 신체의 질환 또는 상태로서, 여기에서 어떤 신호 분자는 내피 세포의 특성을 변화시키는데, 그 결과 다른 세포 형태의 활성화와 상호 작용하여 백혈구가 내피 세포에 부착 유지되어 최종적으로 조직에 침투하여 이의 염증을 야기한다. 내피-중개의 염증의 한 예는 백혈구 혈관염이다. 내피-중개의 염증 사건의 활성화에서 중심 역할은 NF-κB 전사 인자에 의해 수행된다. 내피 세포-중개의 만성 염증의 발달을 야기하는 다른 시스템은 AGE-RAGE 시스템이다.

"내피증식증(endotheliosis)"은 비-혈소판감소성 자반병 중의 퇴행성 및 증식성 내피 변화로 이해될 것이다. "세망내피증식증(reticuloendotheliosis)"은 망상조직, 세망증, 망내계조직증 및 핸드-슐러-크리스챤병(Hand-Schuller-Christian disease)과 같은 망내계조직 시스템의 질병으로 이해될 것이다.

"레이노드씨병(Raynaud's disease)"은 보통 손가락의 동맥에서 일시적으로 일어나는 혈관수축에 의한 허혈 상태, 즉 혈관성 경련으로 이해될 것이다. 1차적 레이노드씨병은 사지의 말초 부위에 공급되는 작은 혈관의 순수하게 기능적인 손상인 한편, 2차적 레이노드씨병은 혈관 염증과 같은 다른 질병을 수반한다.

"자간전증(preeclampsia)"은, 명백히 태반으로부터의 내피속성 물질에 의해 야기되는 모체 기관의 내피성 및 혈관성 질병이다. 자간전증은 많은 기관의 기능적 손상을 야기하고 다양한 증상으로 나타날 수 있는 복합시스템 질환이다. 이 질환에서 전형적인 순환 손상은 증가된 혈관 저항으로부터 기인하는데, 심한 정도가 국소적으로 변화할 수 있다. 자간전증에서는 내피 기능장애가 병인의 중심 요소임이 확인되었다.

본 발명과 관련하여, "신부전(renal failure)"은 정상적으로는 요에 함유되는 물질을 분비하는 신장의 능력 제한으로 이해될 것이다. 진행된 단계에서, 전해질, 물 및 산-염기 평형을 조절하는 능력도 소실된다. 말기 신부전은 신장의 분비 및 내분비 기능의 붕괴를 특징으로 한다.

본 발명에 따르면, 신부전은 급성 신부전일 수 있는데, 이는 급성 신장 기능부전, 쇼크 신장 또는 쇼크 무뇨증이라고도 불리운다. 급성 신부전은 보통 가역적인 신장 손상의 결과로 인한, 신장 분비 기능의 갑작스러운 부분적 또는 전체적 손실을 특징으로 한다. 그 원인은 혈액손실(외상 과다, 위장관 또는 분만 후 출혈, 심장, 혈관, 복부 또는 전립선의 주요 수술 과정), 쇼크(심근경색, 색전증), 중증 감염(패혈증, 복막염, 담낭염), 용혈(용혈성-요독 증상, 발작성 헤모글로빈뇨증, 수혈 반응), 근변성(크러쉬(crush) 증상, 횡문근융해증, 근염, 화상), 물 및 전해질 손실(다량 구토, 설사, 과도 발한, 장폐색증, 급성 췌장염)으로 인한 혈액량 감소, 저혈압 및 탈수로 인한 저관류일 수 있다. 다른 원인은 외인성 독소, 예를 들어 아닐린, 글리콜 화합물, 메탄올 등, 또는 내인성 독소, 예를 들어 미오글로빈 및 옥살레이트와 같은 신장독소일 수 있다. 급성 신부전의 다른 원인은 신장 질환, 예를 들어 염증성 신장병 또는 신장 이식에 따른 거부 반응이다. 급성 신부전은 또한 요의 흐름의 폐색에 따른 요 저류에 의해 야기될 수 있다. 본 발명에서, 바람직하게는 저용량의 에리스로포이에틴으로 급성 신부전을 치료하는 것은, 본 발명에 따라 급성 신부전의 예방 또는 적어도 진행의 축소를 야기한다.

본 발명에 따르면, 신부전은 또한 만성 신부전일 수 있다. 만성 신부전의 원인은 혈관성, 사구체성 및 세뇨관간질성 신장 질환, 감염 및 선천성 또는 후천성 구조적 결함일 수 있다. 만성 신부전의 원인은 만성 사구체장애, 만성 신우신염, 무통성 신장병, 폐색성 요로병증, 아테롬성 동맥경화증을 포함한다. 만성 신부전의 말기 단계는 요독증이다. 본 발명에 따른 저용량 에리스로포이에틴의 만성 신부전 치료는 본 발명에 따라 만성 신부전의 진행의 축소를 야기한다.

특히, 본 발명은 급성 또는 만성 신부전의 경우에, 신장 조직에 대한 손상의 예방, 감소 또는 완화 및/또는 손상된 신장 조직의 재생을 위한 약물의 생산을 위한, 바람직하게는 저용량의 EPO의 용도와 관련된다.

본 발명에 따르면, 신장 기능 제한은 사구체 여과율이 이미 80 ㎖/분 보다 낮게 저하된 상태로 이해될 것이다. 따라서, 신장 기능 제한은 사구체성, 세뇨관간질성 및 혈관성 신장 질환의 초기 단계와 관련된다.

본 발명에 따른 저용량 에리스로포이에틴의 신장 기능 제한의 치료는 본 발명에 따라 초기 신장 조직 및/또는 기능 손상의 재생 또는 진행의 축소를 야기한다.

본 발명과 관련하여, "미세알부민뇨증(microalbuminuria)"은 환자가 24 시간당 30 ㎎을 초과하여 요중 알부민의 비생리학적 분비를 나타내는 임상 상태로 이해될 것이다. 이와 같이 증가된 알부민 분비는 신장 기능 악화 개시의 초기 신호이고, 신장에서의 첫 번째 병리적 전환 과정의 결과로 신장 구성의 구조적 변화를 수반한다.

본 발명과 관련하여, "단백뇨(proteinuria)"는 환자가 24 시간당 150 ㎎을 초과하여 요중 단백질의 비생리학적 분비를 나타내는 임상 상태로 이해될 것이다. 이와 같이 요를 통한 증가된 단백질 분비(>150 ㎎, 24 시간당)는 병리적인 것으로 간주되어 추가의 의학적 검사 및 치료가 요구된다.

본 발명과 관련하여, "고 ADMA 농도(high ADMA levels)"는 환자가 1.3 μmol/ℓ를 초과하는 높은 ADMA 혈중 농도를 나타내는 임상 상태로 이해될 것이다. 이와 같이 증가된 ADMA 농도는 내피 기능장애와 관련되며, 이 분자의 분해 및 분비 과정에서 대사적 기능장애의 결과이다.

본 발명과 관련하여, "상처 치유(wound healing)"는 파괴된 조직의 재생 및 상처 봉합, 특히 새로운 결합 조직 및 모세혈관의 형성을 위한 생리적 과정으로 이해될 것이다. 상처 치유는 1차적 상처 치유(1차 치유)일 수 있으며, 이는 양호한 혈액 공급을 갖고 필요시 근접한 상처 가장자리 사이에 새로운 결합 조직의 최소 형성으로부터 야기되는, 깨끗한 상처의 경우 신속하고 합병증 없는 봉합 및 대체로 완전 회복을 특징으로 한다. 보다 벌어진 상처 가장자리, 특히 부서지거나 괴사된 상처 가장자리를 갖는 상처 및 상처 감염의 경우, 지연된 2차적 상처 치유(2차 치유)가 일어난다. 이 경우, 세균성 염증의 결과로 조직 손상이 육아조직으로 채워지게 되고, 흉터 조직이 더 광범위하게 형성된다. 가장자리로부터 시작되는 상피화는 상처 치유의 완결을 나타낸다. 이러한 상처 치유는 잠복기, 증식기 및 보수기로 알려진 3 개의 상으로 나누어진다. 잠복기는 특히 상처가 생긴 후 첫 번째 수 시간인, 딱지가 형성되는 삼출기, 그리고 상처가 생긴 후 1 내지 3 일간의 시기로 확장되는, 이화적 자기분해가 일어나는 흡수기로 나누어진다. 증식기는 섬유모세포에 의한 콜라겐의 생산을 갖는 동화적 보수를 특징으로 하고, 상처가 생긴 후 4 내지 7 일에 일어난다. 보수기는 상처가 생긴 후 8 일째에 시작되고, 육아조직이 흉터로 변형되는 것을 특징으로 한다.

본 발명과 관련하여, "상처(wound)"는 기계적 손상 또는 물리적으로 관련된 세포 손상에 의해 야기되는, 물질의 손실이 있거나 없는 신체 조직의 연속성 파괴로 이해될 것이다. 본 발명의 의미 내에서, 상처는 질병으로도 간주된다. 상처의 종류에는 기계적 상처, 열적 상처, 화학적 상처, 방사선-관련된 상처 및 질병-관련된 상처가 있다. 기계적 상처는 외부 폭력에 의하여 야기되고 특히 절상 및 자상, 타박상, 열상 및 찰과상, 스크래치 및 물린 상처 및 돌출 상처로서 일어난다. 열적 상처는 특히 열 또는 냉기에 대한 노출에 의해 야기된다. 화학적 상처는 특히 산 또는 알칼리에 화상을 입는 것에 의해 야기된다. 방사선-관련된 상처는, 예를 들어 화학선 및 이온화 방사선에 노출되는 것에 의해 야기된다. 질병과 관련하여 일어나는 상처는 특히 울혈-관련 상처, 외상성 상처, 당뇨병성 상처 등이 있다. 본 발명에 따르면, 특히 저용량 에리스로포이에틴이 상처 치유를 위해, 바람직하게는 국소적으로 또는 정맥내 투여될 것이다.

본 발명은 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 인슐린 저항, 내피-중개의 만성 염증성 질환, 세망내피증식증을 포함하는 내피증식증, 아테롬성 동맥경화증, 노화-관련된 심장혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 자간전증, 레이노드씨병, 간염, 간경화, 급성 또는 만성 간부전과 같은 간 질환, 뼈 및 연골 질환 또는 병변, 특히 위장관에서의 점막 질환 또는 병변, 크론씨병, 궤양성 대장염, 임신-유도된 고혈압, 만성 또는 급성 신부전, 특히 말기 신부전, 사구체 여과율<80 ㎖/분, 특히 30 내지 80 ㎖/분, 바람직하게는 40 내지 80 ㎖/분의 신장 기능 제한, 미세알부민뇨증, 단백뇨증, ADMA 농도 상승 또는 상처 및 이의 후유증의 치료를 위한 저용량 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다.

본 발명에 따라, 에리스로포이에틴은 상기 질병, 특히 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병의 상태를 치료하거나, 이러한 상태를 예방, 이러한 질병의 진행을 저지 및/또는 이러한 질병의 증상을 경감시키기 위해 충분한 치료적으로 유효한 양으로 환자에게 투여될 것이다. 환자에게 투여되는 양은 많은 인자, 특히 환자의 연령, 체중 및 성별, 질환의 중증도 등에 의존한다.

"독창적인 EPO의 용량"

본 발명에 따르면, 본 교시의 모든 용도, 방법 및 조성물에서 에리스로포이에틴은 신장성 빈혈의 치료에 사용되는 것으로 알려진 양보다 적은 소량으로 사용되는 것이 바람직하다. 본 교시의 의미 내에서, 소량 또는 저용량은, 기능장애의 심한 정도에 따라, 그리고 신장 기능에 따라, 특히 생체내, 즉 환자당, EPO 용량 1 내지 2000, 바람직하게는 20 내지 2000 유닛(IU; international units)/week, 바람직하게는 20 내지 1500 IU/week 용량, 특히 20 내지 1000 IU/week 용량, 특히 20 내지 950 IU/week 용량, 특히 20 내지 900 IU/week 용량, 특히 20 내지 850 IU/week 용량, 특히 20 내지 800 IU/week 용량, 특히 20 내지 750 IU/week 용량, 특히 20 내지 700 IU/week 용량, 특히 20 내지 650 IU/week 용량, 특히 20 내지 600 IU/week 용량, 특히 20 내지 550 IU/week 용량, 특히 20 내지 500 IU/week 용량, 특히 20 내지 450 IU/week 용량, 특히 20 내지 400 IU/week 용량, 특히 20 내지 350 IU/week 용량, 특히 20 내지 300 IU/week 용량, 특히 20 내지 250 IU/week 용량, 특히 20 내지 200 IU/week 용량, 특히 20 내지 150 IU/week 용량으로 이해될 것이다. 본 발명에 따라, 1 내지 450, 바람직하게는 1 내지 9 IU/week 용량도 사용될 것이다. 본 발명에 따라 제공되는 상기 용량 전체, 예를 들어 환자당 1 내지 2000 IU/week 용량, 특히 예를 들어 환자당 500 내지 2000 IU/week 용량은 적혈구 증가 이하 용량, 즉 헤마토크릿의 증가를 야기하지 않는 용량, 특히 EPO 치료 전의 헤마토크릿과 비교하여 헤마토크릿에서 10%, 특히 5%, 바람직하게는 2% 이상의 증가를 야기하지 않는 용량이다. 본 발명에 따라 제공되는 적혈구 증가 이하 용량은 1주일 용량 약 1 내지 90 유닛(IU) EPO/체중 ㎏, 특히 1 내지 45, 특히 1 내지 30 IU EPO/체중 ㎏, 특히 1 내지 20 IU EPO/체중 ㎏, 특히 1 내지 15 IU EPO/체중 ㎏, 특히 1 내지 10 IU EPO/체중 ㎏, 특히 1 내지 4 IU EPO/체중 ㎏에 해당하거나, 또는 Aranesp의 동등한 1주일 용량 0.001 내지 0.4 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.3 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.25 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.2 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.15 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.1 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.09 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.08 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.07 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.06 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.05 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.04 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.03 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.02 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.01 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.009 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.008 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.007 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.006 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.005 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.004 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.003 ㎍/체중 ㎏, 0.001 내지 0.002 ㎍/체중 ㎏에 해당한다. Aranesp는 이중 PEG화된 EPO이다.

본 발명에 따라, 본 교시의 모든 용도, 방법 및 조성물에서 에리스로포이에틴은 소량, 신장성 빈혈의 치료에 사용되는 것으로 알려진 용량보다 소량으로 사용되는 것이 특히 바람직하다. 본 교시의 의미 내에서, 소량 또는 저용량은, 기능장애의 심한 정도에 따라, 그리고 신장 기능에 따라, 특히 생체내, 즉 환자당, EPO 용량 0.001 내지 90, 바람직하게는 0.001 내지 50 유닛(IU; international units)/체중 ㎏/1 주일, 특히 0.05 내지 45 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 40 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 35 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 33 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 31 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 29 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 27 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 25 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 23 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 21 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 20 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 19 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 17 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 15 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 13 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 11 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 9 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 7 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 5 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 3 IU/㎏/week 용량, 특히 0.05 내지 1 IU/㎏/week 용량으로 이해될 것이다. 본 발명에 따라, 0.001 내지 20, 바람직하게는 0.05 내지 10 IU/㎏/week 용량도 사용될 것이다. 본 발명에 따라 제공되는 상기 용량 전체, 예를 들어 환자당 0.01 내지 90 유닛(IU)/㎏/week 용량, 특히 예를 들어 환자당 0.01 내지 50 IU/㎏/week 용량은 적혈구 증가 이하 용량, 즉 헤마토크릿의 증가를 야기하지 않는 용량, 특히 EPO 치료 전의 헤마토크릿과 비교하여 헤마토크릿에서 10%, 특히 5%, 바람직하게는 2% 이상의 증가를 야기하지 않는 용량이다. 본 발명에 따라 제공되는 적혈구 증가 이하 용량은 1주일 용량 약 0.001 내지 90 유닛(IU) EPO/체중 ㎏, 특히 0.001 내지 50, 특히 0.001 내지 45 IU EPO/체중 ㎏, 특히 1 내지 15 IU EPO/체중 ㎏, 특히 1 내지 10 IU EPO/체중 ㎏, 특히 1 내지 4 IU EPO/체중 ㎏에 해당하거나, 또는 Aranesp의 동등한 1주일 용량 0.000005 내지 0.45 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.250 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.225 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.2 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.175 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.165 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.155 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.145 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.135 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.125 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.115 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.105 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.095 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.085 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.075 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.065 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.055 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.045 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.035 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.025 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.015 ㎍/체중 ㎏, 0.00025 내지 0.005 ㎍/체중 ㎏에 해당한다. Aranesp는 이중 PEG화된 EPO이다. 신장성 빈혈의 치료에 보통 사용되는 초기 용량 90 내지 150 IU/체중 ㎏/week(보통 4000 내지 8000 IU/week으로 시작하지만 치료 결과가 불만족스러우면 훨신 높아짐)와 비교하여, 상기 언급된 소량 - 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병 또는 병리학적 상태의 치료를 위해 본 발명에 따라 제공되는, 예를 들어 환자당 0.001 내지 90 유닛/㎏/week 용량, 및 특히 예를 들어 환자당 0.001 내지 50 유닛/㎏/week 용량 - 은 극히 낮다.

달리 특정되지 않는 한, 1 주일에 수 회의 개별 용량으로 분할, 즉 복수 용량으로 투여될 수 있다 하더라도, 인용된 용량은 매주 투여되는 1-회 용량이다.

특히 바람직한 본 발명의 태양은, 상기 "독창적인 EPO의 용량" 제목 하의 부분에 정의된, 저용량 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의, 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병 또는 병리 상태의 치료를 위한 약물로서, 또는 약제학적 조성물의 생산을 위한 활성 성분으로서의 용도와 관련된다.

본 발명에 따르면, "활성 성분(active ingredient)"은, 표적 분자 또는 표적 세포 또는 표적 조직에 접촉하여 조직, 기관 또는 유기체의 특정 기능에 다른 방식으로 영향을 주는 내인성 또는 외인성 물질로 이해될 것이다. 따라서, 본 발명에 따르면, 본 발명의 약제학적 조성물의 활성 성분으로서의 에리스로포이에틴은 내피 전구체 세포와 접촉하면, 내피 전구체 세포의 기능장애가 보상되고 이들 기능장애의 결과로서 나타나는 질병들이 효과적으로 제어, 경감 또는 완화되거나, 또는 이들 질병이 효과적으로 예방될 수 있는 방식으로, 인간 또는 동물 기관에서 이의 증식, 분화 및/또는 이동 행동에 영향을 줄 것이다. 저용량 에리스로포이에틴의 사용은 다른 기관 및 기관계에서 기능적 제한의 진행의 완화 및 기관 재생을 야기할 것이다.

본 발명과 관련하여, "약제학적 조성물(pharmaceutical composition)" 및 "약물(drug)"은 진단, 치료 및/또는 예방 목적으로 사용되는 혼합물, 즉 인간 또는 동물 신체의 건강을 회복시키거나 촉진하는 혼합물로 이해될 것으로, 이 혼합물은 치료적 효과를 가져오는 적어도 하나의 천연 또는 합성에 의해 생산된 활성 성분을 포함한다. 약제학적 조성물은 고형물이거나 액체 혼합물일 수 있다. 예를 들어, 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 성분을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 본 분야에서 보통 사용되는 첨가물, 예를 들어 안정화제, 마무리제(finishing agent), 방출제, 붕해제, 유화제 또는 약제학적 조성물의 생산에 보통 사용되는 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에 따르면, 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 인슐린 저항, 혈관 감염과 같은 내피-중개의 만성 염증성 질환, 세망내피증식증을 포함하는 내피증식증, 아테롬성 동맥경화증, 노화-관련된 심장혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 레이노드씨병, 간염, 간경화, 급성 또는 만성 간부전과 같은 간 질환, 뼈 및 연골 질환 또는 병변, 특히 위장관에서의 점막 질환 또는 병변, 크론씨병, 궤양성 대장염, 자간전증, 임신-유도된 고혈압, 만성 또는 급성 신부전, 특히 말기 신부전, 사구체 여과율<80 ㎖/분, 특히 30, 바람직하게는 40 내지 80 ㎖/분의 신장 기능 제한, 미세알부민뇨증, 단백뇨증, ADMA 농도 상승 또는 상처 및 이의 후유증의 치료를 위한 약물의 생산을 위한 활성 성분으로서, 바람직하게는 저용량의 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도가 특히 제공된다.

본 발명의 약제학적 조성물은 국소적 및 전신적 투여 양쪽에 적절할 수 있다.

본 발명의 바람직한 태양에서, 약제학적 조성물은 비경구, 특히 정맥내, 근육내, 피부내 또는 피하 투여를 위해 사용될 것이다. 바람직하게는, 에리스로포이에틴-함유 약물은 주사 또는 주입의 형태를 갖는다.

다른 용도에서, 에리스로포이에틴-함유 약제학적 조성물은 경구로 투여될 것이다. 예를 들어, 에리스로포이에틴-함유 약물은 액제, 현탁제 또는 유제와 같은 액체 제형, 또는 정제와 같은 고체 제형으로 투여된다.

다른 용도에서, 약제학적 조성물은 경폐 투여(pulmonary administration) 또는 흡입에 적합할 것이다. 따라서, 본 발명에 따르면, 에리스로포이에틴은 환자의 폐에 직접 치료적으로 유효한 방식으로 투여될 것이다. 에리스로포이에틴의 이러한 투여 방식은 주사를 실시할 필요 없이 환자에게 에리스로포이에틴 용량의 신속한 전달을 허용한다. 폐를 통한 에리스로포이에틴의 흡수에 의해, 상당한 양의 에리스로포이에틴이 폐를 경유하여 혈류로 전달될 수 있어, 혈류에서 에리스로포이에틴 농도 상승을 야기한다. 본 발명의 바람직한 태양에서, 폐를 통해 흡수되는 약제학적 조성물은 수성 또는 비수성 용액이거나 건조 분말이다. 폐 경로에 의해 투여되는 에리스로포이에틴-함유 약물이 건조 분말의 형태일 때, 상기 분말은 바람직하게는 에리스로포이에틴-함유 입자를 포함하는데, 여기에서 입자는 10 ㎛ 보다 작은 직경을 가져서, 약물이 환자의 폐의 말단 영역까지 도달하도록 한다. 특히 바람직한 본 발명의 태양에서, 폐 경로에 의해 투여되는 약물은 에어졸 형태일 것이다.

본 발명의 특히 바람직한 태양은 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병의 치료를 위한 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 용도와 관련되는데, 여기에서 약제학적 조성물은 활성 성분으로서 에리스로포이에틴뿐 아니라, 내피 전구체 세포를 자극하기 위한 적어도 하나의 다른 추가 활성 성분을 포함한다.

다른 활성 성분은 바람직하게는 특히 골수 또는 "다른 줄기세포" 적소로부터 내피 전구체 세포의 생리적 기동을 자극하는 활성 성분이다. 그러나, 본 발명에 따르면, 다른 활성 성분은 또한 내피 전구체 세포의 분할 행동, 즉 증식을 자극하는 활성 성분일 수 있다. 그러나, 본 발명에 따르면, 다른 활성 성분이 특히 내피 전구체 세포의 분화 행동 및/또는 이동 행동을 자극할 가능성도 존재한다. 특히 바람직하게는, 내피 전구체 세포를 자극하는 다른 활성 성분은 VEGF, PlGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제, 특히 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 스타틴, 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 ACE 저해제, 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사르탄(olmesartan)과 같은 AT-1 차단제, 및/또는 NO 공여체, 특히 L-아르기닌이다.

본 발명에 따르면, 적어도 하나의 다른 활성 성분은 특히 분화된 내피 세포를 자극, 즉 이의 증식 및/또는 이동을 자극하지만, 내피 전구체 세포는 아니다. 특히 바람직하게는, 이는 bFGF(basic fibroblast growth factor) 또는 안지오제닌(angiogenin)일 것이다.

본 발명의 다른 태양은 내피 전구체 세포의 자극, 특히 내피 세포로의 분화, 증식, 기동 및/또는 혈관형성 또는 혈관신생 자극을 향한 이동의 자극을 위한 약제학적 조성물의 생산을 위한 활성 성분으로서의 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체의 용도와 관련된다. 본 발명에 따르면, 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체는, 특히 성체 인간 또는 동물 유기체에서, 혈관형성 및/또는 내피 형성의 자극을 위한 약제학적 조성물의 생산을 위한 활성 성분으로서 사용될 것이다.

따라서, 본 발명은 또한 내피 전구체 세포의 자극, 특히 이의 내피 세포로의 분화, 증식, 기동 및/또는 혈관형성 또는 혈관신생 자극을 향한 이동의 자극, 혈관형성 및/또는 내피 형성의 자극 및 내피 전구체 세포 및/또는 내피 세포의 기능장애와 관련된 인간 또는 동물 신체의 질병의 치료를 위한 약제학적 조성물과 관련된다. 특히, 본 발명은 활성 성분으로서 에리스로포이에틴 및 내피 전구체 세포 및/또는 분화된 내피 세포의 자극을 위한 적어도 하나의 다른 활성 성분을 함유하는 약제학적 조성물 또는 약물과 관련된다. 바람직한 태양에서, 본 발명은 에리스로포이에틴과 함께, VEGF, PlGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제, 특히 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 스타틴, 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 ACE 저해제, 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사르탄(olmesartan)과 같은 AT-1 차단제, NO 공여체, 특히 L-아르기닌, bFGF 및 안지오제닌을 포함하는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물과 관련된다.

본 발명의 다른 바람직한 태양은 이식 가능한 내피 세포 제제의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다. 본 발명에 따르면, 특히 본 태양에서 내피 세포는 에리스로포이에틴의 존재 중에 내피 전구체 세포의 배양에 의해 생체외에서 생산되고 수용체 유기체, 특히 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병에 걸린 유기체로 이식될 것이다. 예를 들어, 단핵세포(MNC; mononuclear cells)는 밀도 구배 원심분리에 의하여 혈액으로부터 분리되고 적절한 배지에서 생체외 배양될 수 있다. 단핵세포의 분리 및 생체외 배양 방법은, 예를 들어 문헌(Asahara, Science, 275 (1997), 964-967; Dimmeler et al., J. Clin . Invest., 108 (2001), 391-397 및 Llevadot et al., J. Clin . Invest., 108 (2001) 399-405)에 기술되어 있다. 다음에 단핵세포는 에리스로포이에틴의 존재 중에서 더욱 배양되어, MNCs 중에 함유되어 있는 내피 전구체 세포의 증식 및 분화 행동을 자극하고, 특히 분화된 부착 내피 세포의 수를 증가시키게 된다. 본 발명에 따라, MNCs는 에리스로포이에틴 및 내피 전구체 세포의 증식 및 분화를 자극하는 적어도 하나의 다른 물질의 존재 중에서 배양될 것이다. 특히 바람직하게는, 다른 물질로서 VEGF, PlGF, GM-CSF, L-아르기닌과 같은 NO 공여체, 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 ACE 저해제, 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사르탄(olmesartan)과 같은 AT-1 차단제, 또는 스타틴, 특히 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 HMG-CoA 리덕타제 저해제가 사용된다.

본 발명의 다른 바람직한 태양에서, 이러한 방식으로 세포 치료에 사용 가능한 조직 세포가 혈관계에 충분한 결합으로 정착하는 것이 보장되도록 하기 위해, 내피 전구체 세포는, 간세포, 근세포, 심근세포 또는 섬 세포와 같은 세포 치료에 사용 가능한 다른 세포 군집과 동시에, 저용량 에리스로포이에틴과 함께 미리 생체외 배양 및/또는 저용량 에리스로포이에틴의 생체내 국소 및 전신 적용 후, 해당 환자에 적용된다.

본 발명의 다른 바람직한 태양은 또한 이식 표적 부위와 같은 환자 신체의 어떤 부위를 기동하고, 내피 전구체 세포의 기능 및 수를 증가 및/또는 조직 손상의 진행 완화 또는 재생을 초래하기 위하여, 저용량 에리스로포이에틴 및 하나 이상의 다른 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제의 순차적, 적시의 연속적 또는 동시 투여를 위한 키트 또는 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다. 이러한 기계적 약제는, 예를 들어 내부인공기관, 바람직하게는 치아, 뼈 또는 인대/힘줄 대체물을 위한 이식 지지체일 수 있다. 또한, 생물학적 약제는 간, 신장, 심장, 췌장 또는 피부와 같은 고형 기관, 또는 모발 이식물일 수 있다. 따라서, 본 발명은, 동시에, 이어서, 또는 미리 이식되는 생물학적 약제 또는 내부인공기관과 같은 기계적 약제가 성장하거나 주위 신체 구조로 보다 효과적으로, 양호하고, 신속하게 통합되도록, 특히 저용량의 EPO가 사용될 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 생물학적 약제 또는 내부인공기관이 주위 신체 구조, 특히 치아, 치아 대체물, 치아 임플란트 또는 뼈 대체물, 뼈 임플란트, 특히 고관절 인공기관과 같은 다른 내부인공기관 또는 십자근 인대와 같은 인대/힘줄 대체물로의 통합을 개선, 특히 촉진 및/또는 가속화하기 위한 키트 또는 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다. 이와 관련하여, 필요에 따라, 에리스로포이에틴은 세포 치료에 적합한 세포 군집 및/또는 내피 전구체 세포와 함께 사용될 것이다. 생물학적 또는 기계적 약제가 환자의 표적 구조, 특히 표적 조직, 표적 뼈 또는 표적 연골로의 통합을 개선, 특히 촉진 및/또는 가속화하기 위한 키트 또는 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 상기 용도에서, 사용되는 기계적 약제가 예를 들어 철, 세라믹, 플라스틱 또는 다른 재료로 만들어지는 것이 다른 바람직한 태양에서 제공될 수 있다. 또한, 조골세포, 골형성 잠재력을 갖는 세포, 혈소판, 혈구 또는 유사한 약제가 세포 치료에 적합한 세포 군집으로서 본 발명에서 사용될 수 있다. 다른 바람직한 태양에서, 특히 사용되는 기계적 약제는 피브린 아교와 같은 유기 접착제와 함께 약제학적 조성물 또는 약제학적 키트 내에 포함될 수 있다.

본 발명의 다른 바람직한 태양에서는, "미용 관리" 면에서, 특히 유해한 환경 인자에 대하여 주름과 주름살을 예방 또는 적절히 감소시키고, 결합조직을 강화하고, 피부, 특히 얼굴 피부를 보호하고 팽팽하게 하기 위한 국소 적용을 위한, 그리고 메이크업 화운데이션으로서, 에리스로포이에틴 또는 적절한 활성 성분의 용도가 제공된다. 에리스로포이에틴의 국소 적용은 노화 반점의 형성 및 진행을 방해하고, 피부 조직을 정제하고, 바람직하게는 가속화된 재상피형성에 의해 피부 회춘 과정을 지지하고, 모발 성장을 지지한다.

적용의 다른 형태에서, 24 시간 주기 리듬에 적합화된 방식의 저용량 에리스로포이에틴의 투여가 제공된다. 내인성 에리스로포이에틴 생산은 늦은 오후에 그 최고 위상(하루중 최대값)을 가지며, 그래서 이 방식으로 최대 생물학적 효과를 달성하기 위해, 저용량 에리스로포이에틴의 투여는 아침, 특히 오전 6:00 내지 10:00시의 시기에 이루어지는 것이 바람직하다.

본 발명의 다른 태양에서, 이식되는 기관 또는 조직의 전처리 및/또는 후속 처리를 위한 저용량 에리스로포이에틴의 용도가 제공된다. 이 경우, 이식물은 이식 전, 바람직하게는 직전에, 아직 공여 유기체 내에 있는 동안 저용량 에리스로포이에틴으로 처리된다. 수용 유기체도 이식 진행 시기부터 저용량 에리스로포이에틴으로 처리될 수 있다. 본 발명에 따르면, 이식 직전 및 이식 후, 이식되는 조직 또는 기관의 이러한 에리스로포이에틴 처리에 의해, 신체로 이식이 일어난 후 이식체에서 유도된 혈관형성에 의해 새로운 혈관이 신속하게 형성되고, 이들 새롭게 형성된 혈관이 수용 유기체의 혈관계에 신속하게 연결될 것이 보장된다. 내피의 형성도 이러한 방식으로 신속하게 달성된다. 따라서, 기관 또는 조직 이식물을 이와 같이 저용량 에리스로포이에틴으로 처리하는 것은, 이들 시스템의 신체에서의 보다 신속한 성장을 달성하고, 이에 의해 거부 위험이 상당히 감소된다. 또한, 저용량 에리스로포이에틴의 투여에 의해 기관 재생이 자극된다.

본 발명의 다른 태양에서, 기관 또는 조직 이식물은 이식 전에 내피 전구체 세포를 자극하는 적어도 하나의 다른 인자와 조합된 저용량 에리스로포이에틴으로 처리될 것이다. 이 인자는 바람직하게는 VEGF, PlGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제, 예를 들어 스타틴, 특히 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴, 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 ACE 저해제, 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사르탄(olmesartan)과 같은 AT-1 차단제, 또는 NO 공여체, 특히 L-아르기닌을 포함하는 그룹으로부터 선택된 물질이다. 다른 태양에서, 기관 또는 조직 이식물은 이식 전에 에리스로포이에틴뿐 아니라 분화된 내피 세포의 증식 및 이동을 자극하는 다른 물질로 처리될 것이다. 특히 바람직하게는, 이 물질은 안지오제닌 또는 bFGF이다. 다른 태양에서, 기관 또는 조직 이식물의 에리스로포이에틴 전처리는, 필요에 따라 생체외 확장된 분리된 내피 전구체 세포를 사용하여 실시될 것이다.

본 발명의 특히 바람직한 다른 태양에서, 저용량 에리스로포이에틴은 주입 가능(implantable)하거나 이식 가능한(transplantable), 세포-함유 생체외 기관 또는 조직을 생산하기 위해 사용될 것이다. 본 발명에 따르면, 특히 수용 유기체의 신체에 존재하는 내피 전구체 세포를, 특히 이의 생리적 기동, 이동, 증식 및 분화를 자극하기 위해, 생체외에서 생산된 기관 또는 조직이 이식 또는 주입 전 저용량 에리스로포이에틴으로 생체외 처리될 것이다. 생체외 기관 또는 조직의 이식 또는 주입 후, 수용 유기체는 바람직하게는 본 발명에 따른 양의 저용량 에리스로포이에틴으로 더욱 처리된다. 이식 또는 주입에 앞서 에리스로포이에틴으로 생체외 기관 또는 조직을 처리하는 것에 의해, 그리고 필요에 따라 수용 유기체를 에리스로포이에틴으로 후속-처리하는 것에 의해, 본 발명에 따라 신체로 이식 또는 주입이 일어난 후 생체외 기관 또는 조직계에서 유도된 혈관형성에 의해 새로운 혈관이 신속하게 형성되고, 이들 새롭게 형성된 혈관이 수용 유기체의 혈관계에 신속하게 연결될 것이 보장된다. 내피의 신속한 형성 및 이에 따른 재상피화도 이러한 방식으로 신속하게 달성된다. 따라서, 생체외 기관 또는 조직 이식 시스템을 이와 같이 저용량 에리스로포이에틴으로 처리하는 것은, 이들 시스템의 신체에서의 보다 신속한 성장을 달성하고, 이에 의해 거부 위험을 상당히 감소시키고, 또한 이식물을 보호하는 작용도 한다.

"생체외 기관 또는 조직계(in-vitro organ or tissue system)"는 한정된 배양 조건 하에서 한정된 세포 및/또는 한정된 조직을 사용하여 생체외 생산된 이식 가능하거나 주입 가능한 세포-함유 조직 또는 기관으로 이해될 것이다. "주입 가능한 생체외 기관 또는 조직계(implantable in-vitro organ or tissue system)"는 세포뿐 아니라 외인성 물질도 포함하는 시스템으로 이해될 것이다. "이식 가능한 생체외 기관 또는 조직계(transplantable in-vitro organ or tissue system)"는 특히 동일 또는 다른 개체의 세포, 조직 또는 기관뿐 아니라 내인성 물질도 포함하는 시스템으로 이해될 것이다. 생체외 기관 또는 조직은, 특히 이들의 구조가 대체될 천연의 기관 또는 조직의 그것과 대체로 일치하여, 생체내에서 대체된 천연 기관 또는 조직의 기능을 맡도록 한다는 사실을 특징으로 한다.

본 발명의 하나의 태양에서, 이식 또는 주입 전, 생체외 기관 또는 조직계가 내피 전구체 세포를 자극하는 적어도 하나의 다른 인자와 조합된 에리스로포이에틴으로 처리될 것이다. 이 인자는 바람직하게는 VEGF, PlGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제, 특히 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴, 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 ACE 저해제, 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사르탄(olmesartan)과 같은 AT-1 차단제, 및 NO 공여체를 포함하는 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 물질이다. 다른 태양에서, 이식 또는 주입 전, 생체외 기관 또는 조직계는 에리스로포이에틴뿐 아니라 분화된 내피 세포의 증식 및 이동을 자극하는 다른 물질로 처리될 것이다. 특히 바람직하게는, 이 물질은 안지오제닌 또는 bFGF이다. 다른 태양에서, 생체외 기관 또는 조직계는, 필요에 따라 생체외 확장된 분리된 내피 전구체 세포를 추가로 함유할 것이다.

본 발명의 다른 바람직한 태양은 혈관의 인공기관 또는 심장 판막의 생산을 위한 저용량 에리스로포이에틴의 용도와 관련되는데, 여기에서 혈관의 인공기관이나 심장 판막은 신체, 특히 인간 신체로 삽입 전 에리스로포이에틴으로 코팅된다. 이와 같이 혈관의 인공기관이나 심장 판막을 에리스로포이에틴으로 코팅하는 것에 의해, 수용 유기체의 신체에서 내피 전구체 세포 자극이 보장된다. 특히, 이들의 내피 세포로의 분화, 증식 및 삽입된 혈관의 인공기관이나 심장 판막으로의 이들의 이동이 자극될 것이다. 이러한 방식으로 생산된 혈관의 인공기관이나 심장 판막이 신체로 도입된 후, 이러한 신체는 특히 본 발명에 따른 용량의 에리스로포이에틴으로 더욱 처리될 수 있다. 이에 의해, 삽입된 혈관의 인공기관에서 보다 신속하게 내피층이 형성되고, 신체의 관련 영역으로의 성장이 보다 신속하게 일어난다. 바람직한 태양에서, 필요에 따라 생체외 확장된 분리된 내피 전구체 세포는 혈관의 인공기관 및 심장 판막을 코팅하기 위해 추가로 사용된다.

본 발명은 또한 다음을 포함하는, 생체외 내피 세포 형성의 자극 방법과 관련된다:

a) 밀도 구배 원심분리에 의해 혈액으로부터 내피 전구체 세포를 포함하는 세포 군집의 분리,

b) 세포 배지에서 내피 전구체 세포를 포함하는 분리된 세포 군집의 배양, 그리고

c) 저용량 에리스로포이에틴의 존재 중에 세포 군집의 배양.

본 발명에 따라, 세포 군집의 배양은 내피 전구체 세포를 자극하는 다른 물질의 존재 중에 실시될 수 있다.

본 발명은 또한 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병의 치료 방법과 관련되는데, 여기에서 "독창적인 EPO의 용량" 제목 하의 부분에서 설명된 소량의 에리스로포이에틴은, 단독 또는 적어도 하나의 다른 화학적, 열적, 기계적 및 생물학적 약제와 조합되어 이러한 질병에 걸린 환자에게 투여된다. 본 발명의 방법은 특히, 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 인슐린 저항, 혈관 감염과 같은 내피-중개의 만성 염증성 질환, 세망내피증식증을 포함하는 내피증식증, 아테롬성 동맥경화증, 노화-관련된 심장혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 레이노드씨병, 간염, 간경화, 급성 또는 만성 간부전과 같은 간 질환, 뼈 및 연골 질환 또는 병변, 특히 위장관에서의 점막 질환 또는 병변, 크론씨병, 궤양성 대장염, 자간전증, 임신-유도된 고혈압, 만성 또는 급성 신부전, 특히 말기 신부전, 사구체 여과율<80 ㎖/분, 특히 30 내지 80 ㎖/분, 바람직하게는 40 내지 80 ㎖/분의 신장 기능 제한, 미세알부민뇨증, 단백뇨증, ADMA 농도 상승 또는 상처 및 이의 후유증과 같은 인간 신체의 질병을 치료하는 데 적절하다.

내피전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병의 치료를 위한 본 발명 방법의 바람직한 태양에서, 에리스로포이에틴뿐 아니라 VEGF, PlGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제, ACE 저해제, AT-1 차단제 및 NO 공여체를 포함하는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 활성 성분이 환자에게 투여될 것이다. 바람직하게는, 투여되는 HMG-CoA 리덕타제 저해제는 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 스타틴일 것이다. 투여되는 ACE 저해제는 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 활성 성분일 것이다. 투여되는 AT-1 차단제는 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사르탄(olmesartan)과 같은 활성 성분일 것이다. 투여되는 NO 공여체는 바람직하게는 L-아르기닌일 것이다.

내피전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병의 치료를 위한 본 발명 방법의 다른 바람직한 태양에서, 내피 전구체 세포는 인간 유기체의 혈액으로부터 분리되고, 저용량 에리스로포이에틴을 사용하여 생체외에서 확장되고, 내피 세포로 분화된 후, 분화된 내피 세포 또는 분화 중인 내피 전구체 세포가 정제 및 분리되고, 다음에 내피 전구체 세포 및/또는 내피 세포의 기능장애로 인해 손상된 환자의 신체 영역, 조직 또는 기관으로 선택적으로 이식되어 그 안의 새로운 내피의 국소적 형성을 유도할 것이다. 이러한 방식으로, 환자의 손상된 신체 영역, 조직 및/또는 기관은 더욱 선택적이고 신속하게 치료될 수 있다. 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병의 치료를 위한 본 발명 방법의 태양은 다음 단계를 포함한다:

b) 세포 배지에서 내피 전구체 세포를 포함하는 세포 군집의 배양,

c) 내피 전구체 세포의 증식 및/또는 이의 내피 세포로의 분화를 자극하기 위해 저용량 에리스로포이에틴의 존재 중에 내피 전구체 세포를 포함하는 세포 군집의 배양,

d) 분화된 내피 세포의 분리 및 정제, 그리고

e) 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병을 갖는 신체로 분화된 내피 세포의 이식.

분화된 내피 세포를 신체로 이식한 후, 이러한 신체는, 특히 본 발명에 따라 제공되는 저용량, 즉 "독창적인 EPO의 용량" 제목 하의 부분에 정의된 용량, 예를 들어 0.001 내지 90 IU/㎏/week 또는 20 내지 2000 IU/week의 에리스로포이에틴으로 더욱 처리될 수 있다.

본 발명에 따르면, 내피 전구체 세포를 포함하는 세포 군집은 VEGF, PlGF, GM-CSF, HMG-CoA 리덕타제 저해제, ACE 저해제, AT-1 차단제 및 NO 공여체를 포함하는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 활성 성분의 존재 중에 생체외 배양될 수 있다. 바람직하게는, 배양을 위해 사용되는 HMG-CoA 리덕타제 저해제는 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 스타틴이고, ACE 저해제는 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 물질이고, AT-1 차단제는 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사르탄(olmesartan)과 같은 물질일 것이다.

본 발명에 따르면, 내피 전구체 세포를 포함하는 세포 군집은, 이 방식으로 내피 전구체 세포의 수 및 기능을 증가 및/또는 조직 손상의 진행 완화 또는 재생을 초래하기 위해, 저용량 에리스로포이에틴과 하나 이상의 다른 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제의 순차적, 적시의 연속적 또는 동시 투여 처리될 수 있다.

본 발명의 다른 바람직한 태양은 다음을 포함하는, 혈관 질환의 치료 방법과 관련된다:

c) 내피 전구체 세포의 증식 및/또는 이의 내피 세포로의 분화를 자극하기 위해 에리스로포이에틴의 존재 중에 내피 전구체 세포를 포함하는 세포 군집의 배양,

d) 분화된 내피 세포의 분리 및 정제, 그리고

e) 혈관 질환을 갖는 신체로 내피 세포의 이식.

혈관 질환을 갖는 신체로 내피 세포의 이식 후, 이러한 신체는, 특히 본 발명에 따라 제공되는 저용량, 즉 "독창적인 EPO의 용량" 제목 하의 부분에 정의된 용량, 예를 들어 0.001 내지 90 유닛/㎏/week 또는 20 내지 2000 IU/week의 에리스로포이에틴으로 더욱 처리될 수 있다.

본 발명에 따르면, 내피 전구체 세포를 포함하는 세포 군집을 VEGF, PlGF, GM-CSF, ACE 저해제, AT-1 차단제 및/또는 HMG-CoA 리덕타제 저해제를 포함하는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 활성 성분의 존재 중에 배양하는 것이 가능하다. 바람직하게는, 배양을 위해 사용되는 ACE 저해제는 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 물질이고, AT-1 차단제는 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사르탄(olmesartan)과 같은 물질이고, 배양을 위해 사용되는 HMG-CoA 리덕타제 저해제는 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 스타틴일 것이다.

본 발명에 따르면, 내피 전구체 세포를 포함하는 세포 군집은, 이 방식으로 내피 전구체 세포의 수 및 기능을 증가 및/또는 조직 손상의 진행 완화 또는 재생을 초래하기 위해, 저용량 에리스로포이에틴과 하나 이상의 다른 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제의 순차적, 적시의 연속적 또는 동시 투여 처리될 수 있다. 이러한 기계적 약제는 내부인공기관, 바람직하게는 치아, 뼈 또는 인대/힘줄 대체물을 위한 이식 지지체일 수 있다. 또한, 생물학적 약제는 간, 신장, 심장, 췌장 또는 피부와 같은 고형 기관, 또는 모발 이식물일 수 있다. 따라서, 본 발명은, 동시에, 이어서, 또는 미리 이식되는 생물학적 약제 또는 내부인공기관과 같은 기계적 약제가 성장하거나 주위 신체 구조로 보다 효과적으로, 양호하고, 신속하게 통합되도록, 특히 저용량의 EPO가 사용될 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 생물학적 약제 또는 내부 인공기관이 주위 신체 구조, 특히 치아, 치아 대체물, 치아 임플란트 또는 뼈 대체물, 뼈 임플란트, 특히 고관절 인공기관과 같은 다른 내부인공기관 또는 십자근 인대와 같은 인대/힘줄 대체물로의 통합을 개선, 특히 촉진 및/또는 가속화하기 위한 키트 또는 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 용도와 관련된다. 바람직한 태양에서, 에리스로포이에틴은 세포 치료에 적합한 세포 군집 및/또는 내피 전구체 세포와 함께 사용될 것이다. 생물학적 또는 기계적 약제가 환자의 표적 구조, 특히 표적 조직, 표적 뼈 또는 표적 연골로의 통합을 개선, 특히 촉진 및/또는 가속화하기 위한 키트 또는 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 상기 용도에서, 사용되는 기계적 약제가 예를 들어 철, 세라믹, 플라스틱 또는 다른 재료로 만들어지는 것이 다른 바람직한 태양에서 제공될 수 있다. 또한, 조골세포, 골형성 잠재력을 갖는 세포, 혈소판, 혈구 또는 유사한 약제가 세포 치료에 적합한 세포 군집으로서 본 발명에 사용될 수 있다. 다른 바람직한 태양에서, 특히 사용되는 기계적 약제는 피브린 아교와 같은 유기 접착제와 함께 약제학적 조성물 또는 약제학적 키트 내에 포함될 것이다.

따라서, 혈관 질환의 치료를 위한 본 발명의 방법은, 내피 전구체 세포가 인간 유기체의 혈액으로부터 분리되고, 저용량 에리스로포이에틴을 사용하여 생체외 확장되고, 내피 세포로 분화된 후, 분화된 내피 세포 또는 분화 중인 내피 전구체 세포가 정제 및 분리되고, 다음에 손상된 혈관 또는 허혈 영역으로 선택적으로 이식되어, 그 안에서 국소적 혈관신생을 유도할 것을 제공한다. 이러한 방식으로, 손상된 혈관 또는 허혈 조직은 보다 선택적이고 신속하게 치료될 수 있다. 혈관 질환의 치료를 위한 본 발명의 방법은 허혈, 특히 대뇌 허혈, 사지의 허혈성 질환, 뇌졸증, 급성 동맥 폐색, 동맥 폐색성 질환, 레이노드씨병 및 맥각중독과 같은 혈관 질환의 치료에 특히 적합하다.

본 발명의 다른 유리한 태양은 종속 청구항에 구체화되어 있다. 본 발명은 이하의 도면 및 실시예에 기초하여 더욱 구체적으로 설명될 것이다.

도 1은 순환하는 CD34+ 줄기세포(cSC)의 FACS 분석 결과를 보여준다. (A-D): 환자 샘플; (E-F): 아이소타입 대조군. cSC는 CD34 표지의 추가 발현에 의해(B 및 F), 특징적인 낮은 내지 중등도의 CD45 항원 발현에 의해(C 및 G), 그리고 특징적인 광 산란 특성에 의해(D 및 H) 확인되었다. cSC 절대수는 100,000 단핵구 및 임파구 당 계산되었다.

도 2는 유동세포분석에 의한 순환 줄기세포의 정량 분석을 보여준다. 이 도 면은 0, 2, 4, 6 및 8 주 후, rhEPO(재조합 인간 에리스로포이에틴)를 사용한 에리스로포이에틴 처리의 시간-의존성 효과를 보여준다. n=11이고, 값은 평균값±표준편차에 해당한다. 중간값은 선으로 보여준다.

*: 2 주째 비교에서 p<0.01; ψ: 4 주째 비교에서 p<0.05; #: 8 주째 비교에서 p<0.05.

도 3은 배양된 내피 전구체 세포(EPC)의 정량분석을 보여준다. 이 도면은 rhEPO 처리가 EPCs의 상대적 수를 증가시키는 것을 보여준다. EPCs는 신장 환자를 rhEPO로 처리하기 전과, 환자를 rhEPO로 처리하고 2, 4, 6 및 8 주 후에 분리되었으며, 이의 부착 능력 및 두 개의 표지 acLDL-Dil 및 UEA-1 FITC에 의해 특성화되었다. n=11이고, 값은 평균값±표준편차에 해당한다. 중간값은 선으로 보여준다.

*: 처리 전 시기와 비교하여 p<0.01; #: 처리 전 시기와 비교하여 p<0.001.

도 4는 배양된 내피 전구체 세포(EPC)의 정량분석을 보여준다. 이 도면은 rhEPO 치료의 개시 전 EPCs의 절대적 수가 동등한 연령 및 성별의 건강한 대상과 비교하여 유의적으로 감소된 것을 보여준다. 따라서 신장성 빈혈 환자는 대조군 대상과 비교하여 현저한 EPC 기능장애를 나타낸다. 이렇게 감소된 기능적 EPC 수는 신장성 빈혈에 대한 rhEPO 치료 개시 8 주 후 보상되었다. EPCs는 신장 환자를 rhEPO로 처리하기 전과, 환자를 rhEPO로 처리하고 2, 4, 6 및 8 주 후에 분리되었으며, 이의 부착 능력 및 두 개의 표지 acLDL-Dil 및 UEA-1 FITC에 의해 특성화되었다. n=11. 나타낸 실시예는 8 주 이후 경과 및 모든 대조군이다. 절대 수는 한편에 개별 수로 나타낸다. 또한, 박스 플롯이 나타난다(평균값 및 90번째/75번째/50 번째/25번째 및 10번째 백분위수). EPCs가 분리되고 유사하게 특성화된 동등한 연령 및 성별의 대상(n=11)이 건강한 대조군 역할을 하였다.

도 5는 건강한 젊은 대상에서 배양된 내피 전구체 세포(EPC)의 정량분석을 보여준다. 이 도면은 rhEPO 치료(1 주당 체중 ㎏당 에포에틴 베타(epoetin beta) 30 IU)가 EPCs의 상대적 수를 증가시키는 것을 보여준다. EPCs는 대상을 rhEPO로 치료하기 전과, 환자를 rhEPO로 치료하고 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7 주 후에 분리되었으며, 이의 부착 능력 및 두 개의 표지 acLDL-Dil 및 UEA-1 FITC에 의해 특성화되었다. n=4이고, 값은 평균값±표준편차에 해당한다.

도 6은 배양된 내피 전구체 세포(EPC)의 정량분석을 보여준다. 대표 사진은 요독증 환자에서 EPC의 절대수는 동등한 연령 및 성별의 건강한 대상과 비교하여 유의적으로 감소되었다(윗줄=생체내). 그러므로, 제한된 신장 기능을 갖는 환자는 대조군 대상과 비교하여 현저한 EPC 기능장애를 나타낸다. 건강한 대상의 내피 전구체 세포가 요독증 환자의 혈청과 함께 배양되면, 그 또는 그녀의 내피 전구체 세포의 분화능은 감소된다(아랫줄=생체외). 따라서, 이로부터 유래된 요독증을 갖는 제한된 신장 기능은 내피 전구체 세포의 기능장애를 야기한다.

도 7은 제한된 신장 기능을 갖는 요독증 환자 46인 대 동등한 연령 및 성별의 대상 46인에서, 배양된 내피 전구체 세포(EPC)의 정량분석을 박스 플롯 형태로 나타내어 보여준다(90번째/75번째/50번째/25번째 및 10번째 백분위수 및 평균값). 요독증 환자에서 내피 전구체 세포의 수는 건강한 대상과 비교하여 유의적으로 감소된다. 따라서, 제한된 신장 기능을 갖는 환자는 대조군 대상과 비교하여 현저한 EPC 기능장애를 보여준다.

도 8은 상처 치유에 대한 에리스로포이에틴의 효과를 보여준다. 이 도면은 조직 펀치를 사용하여 마우스에게 가한 표준화된 피부 상처를 에리스로포이에틴으로 처리할 때, 7 내지 8 일 후 이미 완전히 봉합된 것을 보여준다. 대조적으로, 상처를 생리적 염 용액(생리식염수)로 처리할 때, 13 내지 14 일 후까지도 완전히 봉합되지 않았다. 에리스로포이에틴 또는 생리식염수 처리는 피부 상처를 가하기 7 일 전에 시작되었다. 재조합 인간 에리스로포이에틴은 주당 1 회 s.c.(피하) 주사로 투여되었다(0.1 ㎍/㎏ Aranesp)(각 그룹당 n=5).

도 9는 에리스로포이에틴이 급성 신부전(acute renal insufficiency) 후 신장 기능의 손실을 감소시키는 것을 보여준다. 스프라그 돌리 래트(250 내지 300 g)가 연구에 포함되었다. 래트는 케타민(120 ㎎/㎏) 및 Rompun(10 ㎎/㎏)으로 마취시켰다. 한 실험 그룹은 급성 신부전의 유도 전날 체중 ㎏ 당 Aranesp 0.1 ㎍을 1 회 투여받았다. 비교를 위해, 한 그룹의 실험 동물이 사용되었는데, 이들 각각은 동시에 생리식염수 s.c. 주사를 받았다. 우측 신장 동맥에 동맥 클램프를 적용하여, 신장으로의 혈류를 45 분 동안 차단하였다. 이 시기 동안, 좌측 신장적출술이 시행되었다. 다른 대조군에는 모조 수술이 시행되었다. 이 과정에서, 복부를 개방하여 좌측 신장 동맥을 노출시켰지만 혈액 공급은 차단하지 않고 반대쪽 우측 신장을 제거하였다. 모든 동물은 60 분 동안 마취시키고 수술 24 시간 후 치사시켰다. 생리식염수로 처리된 동물에서, 45-분 허혈에 이어지는 남은 우측 신장의 재관류는 신장 기능의 대량 급성 손실을 야기하였다. 이는 허혈 및 재관류 24 시간 후 혈청 크레 아티닌 농도가 허혈 및 재관류 전보다 7 배 높다는 사실에 반영된다(p<0.05). 대조적으로, 에리스로포이에틴 유사체 Aranesp로 처리된 동물들은 허혈 및 재관류에 의한 손상 유도 1 일 후의 혈청 크레아티닌 농도에서 단지 4 배 증가를 나타내었다. 좌측 신장적출술 및 우측 신장에 모조 수술을 받은 동물에서 저류 수준에서의 증가는 발견되지 않았다. 이 도면은 허혈-재관류(IR) 손상 전 및 그 24 시간 후 EPO-처리된 동물(IR+EPO), NaCl-처리된 동물(IR) 및 모조-수술 받은 동물(sham OP)의 혈청에서의 크레아티닌 농도를 보여준다. 도면으로부터, 허혈-재관류 손상 24 시간 후 혈청 크레아티닌 농도는 Aranesp 처리 없는 대조군(NaCl 처리)과 비교하여 Aranesp 처리된 동물에서 거의 절반인 것이 명백하다.

도 10은 만성 신부전의 유도 후 Aranesp 또는 NaCl 중 하나로 처리된 두 실험동물의 Kaplan-Mayer 생존 곡선을 보여준다. 8 주령의 스프라그 돌리 래트가 이 연구에 포함되었다. 래트를 케타민(120 ㎎/㎏) 및 Rompun(10 ㎎/㎏)으로 마취시켰다. 0 일째에 이들의 우측 신장을 제거하고 조직 검사를 위해 즉시 포르말린으로 고정하였다. 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극부에 공급되는 대상 동맥을 결찰하였다. 이에 의해 해당하는 신장 영역에 신장 경색이 발생하고, 신장의 중간 1/3만이 기능하게 되었다. 1 주일에 1 회 래트들은 Aranesp(0.1 ㎍/㎏ 체중) 또는 NaCl을 s.c.로 투여받았다. 에리스로포이에틴 유사체 Aranesp로 처리된 동물은 생리식염수로 처리된 동물과 비교하여 유의적인 생존 이점을 나타내었다(p=0.027; log rank test).

Aranesp 또는 NaCl 중 하나로 처리되고 그 Kaplan-Mayer 생존 곡선이 도 10 에 도시된 두 실험 그룹에서, 도 11 내지 18은 만성 신부전 유도 5 주 후의 광학 현미경 신장 절편을 보여준다.

도 11은 만성 신부전의 유도 직후에 시작하여, 6 주 동안 주당 1 회 NaCl 처리 후의 만성 신부전 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거 및 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극부에 공급하는 대상 동맥의 결찰에 의해 야기되었다. 이 도면은 동맥내막염이 있는 Fahr의 악성 신경화증으로 알려진 심한 고혈압 손상과 관련된 특징적인 어니언스킨-유사 혈관벽 증식을 갖는 중간-크기의 전 사구체 동맥을 보여준다.

도 12는 만성 신부전의 유도 직후에 시작하여, 6 주 동안 주당 1 회 NaCl 처리 후의 만성 신부전 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거 및 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극부에 공급하는 대상 동맥의 결찰에 의해 야기되었다. 이 도면은 증식성 FSGS(우측 사구체)로 알려진 장미색 병소-대상 사구체경화증(florid focal-segmental glomerulosclerosis)을 보여준다. 다른 사구체(좌측)는 루프 뇌회의 허혈성 붕괴를 나타낸다. 심한 내피 손상이 있는 작은 혈관이 사진의 아래 부분에 보인다. 관찰된 조직학적 변화는 고혈압성 기관 손상 또는 5/6 신장적출에 따른 과부하 신장병과 관련된 변화에 해당한다.

도 13은 만성 신부전의 유도 직후에 시작하여, 6 주 동안 주당 1 회 NaCl 처리 후의 만성 신부전 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거 및 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극부에 공급하는 대 상 동맥의 결찰에 의해 야기되었다. 이 도면은 사구체의 거의 완전한 경화 또는 파괴와 함께, 관련된 구심성 소동맥의 보상성 확대 및 현저한 초자질변성 또는 섬유소 모양 괴사를 보여준다.

도 14는 만성 신부전의 유도 직후에 시작하여, 6 주 동안 주당 1 회 NaCl 처리 후의 만성 신부전 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거 및 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극부에 공급하는 대상 동맥의 결찰에 의해 야기되었다. 이 도면은 특징적인 어니언스킨-유사 혈관벽 증식을 갖는 작은 전 사구체 동맥 및 악성 신경화증으로 알려진 심한 고혈압성 손상과 관련된 벽 괴사를 보여준다(우측 사진 참조). 정상적(아직까지는) 비손상된 소동맥이 우측에 보인다.

도 15는 만성 신부전의 유도 직후에 시작하여, 6 주 동안 주당 1 회 Aranesp (EPO) 처리(체중 ㎏ 당 Aranesp 0.1 ㎍) 후의 만성 신부전 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거 및 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극부에 공급하는 대상 동맥의 결찰에 의해 야기되었다. 이 도면은 섬세한 구심성 혈관을 갖는 정상적인 사구체를 보여준다. 세관간질에서 어떠한 병리학적 신호도 관찰되지 않았다.

도 16은 만성 신부전의 유도 직후에 시작하여, 6 주 동안 주당 1 회 Aranesp (EPO) 처리(체중 ㎏ 당 Aranesp 0.1 ㎍) 후의 만성 신부전 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거 및 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극부에 공급하는 대상 동맥의 결찰에 의해 야기되었다. 이 도면은 섬세한 구심성 혈관을 갖는 정상적인 사구체를 보여준다(배율 630X). 세관간질에서 어떠한 병리학적 신호도 관찰되지 않았다.

도 17은 만성 신부전의 유도 직후에 시작하여, 6 주 동안 주당 1 회 Aranesp (EPO) 처리(체중 ㎏ 당 Aranesp 0.1 ㎍) 후의 만성 신부전 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거 및 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극부에 공급하는 대상 동맥의 결찰에 의해 야기되었다. 이 도면은 섬세한 구심성 혈관을 갖는 정상적인 사구체를 보여준다. 세관간질에서 어떠한 병리학적 신호도 관찰되지 않았다.

도 18은 만성 신부전의 유도 직후에 시작하여, 6 주 동안 주당 1 회 Aranesp (EPO) 처리(체중 ㎏ 당 Aranesp 0.1 ㎍) 후의 만성 신부전 스프라그-돌리 래트에서의 조직학적 변화를 보여준다. 만성 신부전은 우측 신장의 제거 및 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극부에 공급하는 대상 동맥의 결찰에 의해 야기되었다. 이 도면은 섬세한 구심성 혈관을 갖는 정상적인 사구체를 보여준다(배율 630X). 세관간질에서 어떠한 병리학적 신호도 관찰되지 않았다.

도 19는 상처-치유 과정에서 EPO의 효과를 보여준다.

실시예 1

신장성 빈혈 환자에서 EPO의 효과

말기 신장 질환(사망 전에 일어나는 신부전; 크레아티닌 클리어런스<35 ㎖/분)의 결과로 인한 신장성 빈혈(Hb<10.5 g/㎗) 환자에서 에리스로포이에틴의 효과 를 조사하였다. 11 환자에 적어도 8 주의 기간 동안 평균 5000 IU의 rhEPO(재조합 인간 에리스로포이에틴)의 1 주일 용량으로 에리스로포이에틴을 정맥내 또는 피하 투여하였다. 에리스로포이에틴 치료 후, 환자의 혈액 중 내피 전구체 세포를 20 주의 기간이 넘게 조사하여, 내피 전구체 세포를 유동 세포분석법으로 수 및 분화 상태에 대하여 분석하고 0, 2, 4, 6 및 8 주 후 배양시험을 하였다.

순환하는 말초 혈액 줄기세포(CPBSC)는 CD34 항원 및 CD45 항원 양자를 발현하는 세포의 작은 군집을 나타낸다. ISHAGE 지침서에 기초한 시험이 유동 세포분석법에 의해 CPBSC의 수를 결정하기 위해 개발되었다(Sutherland et al., J. Hematother., 5 (1996), 213-226). 이 시험을 사용하여, CD34 및 CD45 세포의 발현 패턴과 줄기세포의 형태학 양쪽을 결정하였다. 이 방식으로, ㎕ 당 CPBSC의 절대수 및 CPBSC의 내용을 전체 백혈구 수의 백분율로서 결정하였다.

도 1은 ISHAGE 지침서에 기초한 순환하는 CD34+ 줄기세포의 FACS 분석 결과를 보여준다.

도 2는 8 주 기간을 넘어 FACS 분석에 의해 측정된 CD34+ 줄기세포의 수를 보여준다.

세포 배양 시험

Asahara, Science, 275 (1997), 964-967에 기술된 방법에 따라 인간 혈액 샘플로부터 Ficoll 밀도 원심분리에 의해 말초혈액 단핵세포(PBMCs)를 분리하였다. 세포를 피브로넥틴과 함께 배양 플레이트 상에서 평판 배양하고 EC 기초 배지에 유지하였다. EC 기초 배지는 EBM-2 기초 배지(Clonetics Co.) 및 EGM-2 Quots(hEGF; GA-100(겐타마이신, 암포테리신-B) FBS, VEGF, hFGF-B(w/헤파린), R3-IGF-1, 아스코르빈산, 헤파린)로 구성된다. 배양 4 일 후, 플레이트를 세척하여 비부착된 세포를 제거하였다. 남은 부착된 세포를 트립신으로 처리하고 다시 한번 평판 배양하였다. 이후에 이들을 3 일 더 배양하였다. 분리 7 일 후 두 개의 다른 내피 표지에 대한 양성 염색에 의해 내피 표현형을 갖는 세포를 확인하였다. 이들은 Dil-표지된 아세틸화된 저밀도 리포프로테인(acLDL-Dil) 및 울렉스 에우로파에우스 아글루티닌-1(Ulex europaeus aglutinin-1; UEA-1)이다. 이 조사의 결과를 도 3에 나타낸다.

결과는 에리스로포이에틴이 내피 전구체 세포를 기동하고 순환하는 내피 전구체 세포의 수를 증가시킬 수 있음을 보여준다. 과정 중, 신장성 빈혈과 같은 어떤 병리적 상태에서 일어나는 기능적 결함이 보상된다. 이들 결과는 도 4에 나타낸다.

유동 세포분석법에 의해, 말기 신장질환을 갖는 환자에서 순환하는 CD34+ 줄기세포의 수는 건강한 대상의 혈액 중 순환하는 CD34+ 줄기세포의 수와 일치한다. 에리스로포이에틴 치료가 개시된 후, 혈류 중의 CD34+ 줄기세포의 수는 50% 이상 유의적으로 증가한다. 세포 배양 분석을 사용하는 것에 의해, 에리스로포이에틴 치료 후 내피 표현형을 나타내는 세포의 수가 극적으로 증가한다. 하나의 기능적 세포 배양 시험에서, 내피 전구체 세포의 크게 손상된 능력이 3 배 이상으로 증가되었다.

실시예 2

rhEPO 의 전신적 사용을 통한 개선된 상처 치유

FVB/N 마우스를 이소플로란(isoflorane)으로 흡입 마취에 의해 마취하였다. 두 개의 뒷다리 상의 모피를 탈모 로션으로 제거하고 70% 알콜로 소독하였다. 멸균 4 ㎜ 일회용 생검 조직 펀치를 사용하여 각 마우스의 우측 옆구리에 피부 상처를 내었다. 반대쪽은 내부 대조군으로 하였다. 수술후 페니실린 G 항생제 커버(20,000 유닛/㎏)를 1 회 투여하였다. 전체 조사 기간을 통해, 재조합 인간 에리스로포이에틴 유사체 Aranesp(0.1 ㎍/㎏ 체중)의 피하 주사를 전체 조사 기간 동안 주당 1 회 적용하였다. 조직 펀치 제거 7 일 전에 치료를 개시하였다. 결과는 도 8에 나타낸다. 이들은 EPO의 투여가 상처-치유 과정을 상당히 가속화하는 것을 보여준다. 도 19는 상처 치유에 대한 에리스로포이에틴의 효과를 보여준다. 이 도면은 조직 펀치를 사용하여 마우스에게 가한 표준화된 피부 상처를 저용량 에리스로포이에틴(20 IU EPO/㎏/week)으로 처리할 때, 7 내지 8 일 후 이미 완전히 봉합된 것을 보여준다. 대조적으로, 상처를 생리적 염 용액(생리식염수)으로 처리할 때, 13 내지 14 일 후까지도 완전히 봉합되지 않았다. 고용량 에리스로포이에틴(200 IU EPO/㎏/week)으로 실험 동물을 처리한 경우, 대조군과 비교하여 상처 치유의 가속화는 관찰되지 않았다. 고용량 에리스로포이에틴으로 처리된 실험동물 둘은 관찰 기간 동안 폐사하였다. 에리스로포이에틴 또는 생리식염수 처리는 수술 당일에 피부 상처를 가한 후 개시하였다. 재조합 인간 에리스로포이에틴은 주당 1 회 s.c.(피하) 주사로 투여되었다(20 IU/㎏ EPO 또는 200 IU/㎏ EPO)(각 그룹당 n=5).

실시예 3

에리스로포이에틴 처리를 통한 만성 신부전의 진행 감소

8 주령 스프라그-돌리 래트를 케타민(120 ㎎/㎏) 및 Rompun(10 ㎎/㎏)으로 마취시켰다. 0 일째에 이들의 우측 신장을 제거하고 조직 검사를 위해 즉시 포르말린으로 고정하였다. 좌측 신장의 상부 및 하부 신장 극부에 공급되는 대상 동맥을 결찰하였다. 이에 의해 해당하는 신장 영역에 신장 경색이 발생하고, 신장의 중간 1/3만이 기능하게 되었다. 1 주일에 1 회 래트들은 에리스로포이에틴 유사체 Aranesp를 0.1 ㎍/㎏ 체중의 용량으로, 또는 대조 목적으로서 NaCl을 s.c. 주사로 투여받았다.

도 10은 양쪽 실험 그룹에서 Kaplan-Mayer 생존 곡선을 보여준다. Aranesp로 처리된 동물은 생리식염수로 처리된 동물과 비교하여 명확히 개선된 생존을 보여준다.

도 15 내지 18은 에리스로포이에틴 처리 후 신장 조직이 아무런 병리적 변화를 나타내지 않는 반면, NaCl 처리 후 심한 병리적 변화가 보이는 것을 보여준다(도 8 내지 11과 비교). Aranesp 처리된 동물에서 생리식염수 처리된 동물보다 명백히 더 큰 혈관 밀도(CD31)가 관찰될 수 있음을 조직학적 조사에서 밝혔다(데이타는 보이지 않음).

실시예 4

급성 신부전의 진행 감소

체중 250 내지 300 g의 스프라그-돌리 래트가 이 조사에 사용되었다. 한 실험 그룹은 급성 신부전의 유도 전날 Aranesp를 0.1 ㎍/㎏ 체중의 용량으로 1 회 투여받았다. 래트는 케타민(120 ㎎/㎏) 및 Rompun(10 ㎎/㎏)으로 마취시켰다. 비교를 위해, 한 그룹의 실험 동물이 사용되었는데, 이들 각각은 동시에 생리식염수 s.c. 주사를 받았다. 우측 신장 동맥에 동맥 클램프를 적용하여, 신장으로의 혈류를 45 분 동안 차단하였다. 이 시기 동안, 좌측 신장적출술이 시행되었다. 다른 대조군에는 모조 수술이 시행되었다. 이 과정에서, 복부를 개방하여 좌측 신장 동맥을 노출시켰지만 혈액 공급은 차단하지 않고 반대쪽 우측 신장을 제거하였다. 모든 동물은 60 분 동안 마취시키고 수술 24 시간 후 치사시켰다.

생리식염수로 처리된 동물에서, 45-분 허혈에 이어지는 남은 우측 신장의 재관류는 신장 기능의 대량 급성 손실을 야기하였다. 이는 혈청 크레아티닌 농도가 7 배만큼 증가한다는 사실에 반영된다(p<0.05). 대조적으로, 에리스로포이에틴 유사체 Aranesp로 처리된 동물들은 허혈 및 재관류에 의한 손상 유도 1 일 후의 혈청 크레아티닌 농도에서 단지 4 배 증가를 나타내었다. 좌측 신장적출술 및 우측 신장에 모조 수술을 받은 동물에서 저류 수준에서의 증가는 발견되지 않았다. 결과는 도 9에 나타낸다.

실시예 5

제한된 신장 기능을 갖는 환자에서 내피 전구체 세포의 감소된 분화능

내피 전구체 세포의 분화 상태를, 요독증 환자 46 인과 이와 동등한 연령 및 성별의 건강한 대조군 대상 46인에서의 배양 시험에 의해 분석하였다. 이 분화 분석에서 놀랍게도 내피 전구체 세포의 수는 건강한 대조군과 비교하여 요독증 환자에서 유의적으로 감소된 것이 발견되었다(도 7). 건강한 대상의 단핵세포가 요독증 환자 혈청의 존재 중에 분리 및 배양되면, 이들 세포의 내피 전구체 세포로의 분화 능은 유사하게 감소된다(도 6).

실시예 6

건강한 대상에서 내피 전구체 세포의 분화능의 자극

4 인의 건강한 젊은 남성에게, 8 주의 기간 동안 1 주당 1 회 체중 ㎏당 에포에틴 베타(epoetin beta) 30 IU를 처리하였다. 이들의 내피 전구체 세포의 분화능은, rhEPO로 대상을 처리하기 전과 rhEPO로 대상을 처리하고 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7 주 후에, 이들의 부착 능력 및 두 개의 표지 acLDL 및 UEA에 기초하여 배양 시험에서 결정하였다. 50% 보다 큰 상대적 증가가 EPCs에서 관찰되었다.

Claims

질병의 예방 또는 치료를 위한, 주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏, 바람직하게는 주당 0.05 내지 50 IU/체중 ㎏의 용량을 함유하는 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴 및/또는 유도체의 용도로서, 여기에서, 이 용량의 에리스로포이에틴은 a) 적어도 하나의 내피 전구체 세포의 기능장애, b) 고혈압, 고콜레스테롤혈증, 비대칭 디메틸아르기닌(ADMA; asymmetric dimethylarginine) 농도의 증가, 증가된 인슐린 저항 또는 고호모시스테인혈증과 같은 적어도 하나의 심장혈관 위험 인자, 및 c) 좌심실 비대, 미세알부민뇨증, 인지 기능장애, 경동맥 내막의 두께 증가, 단백뇨증 또는 사구체 여과율<80 ㎖/분, 바람직하게는 30 내지 80 ㎖/분과 같은 적어도 하나의 말단-기관 손상을 나타내는 인간 또는 동물 환자의 예방 또는 치료에 적합하게 고안된 용도.
주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏, 바람직하게는 주당 0.05 내지 50 IU/체중 ㎏의 용량을 함유하는 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴 및/또는 유도체의 용도로서, 여기에서, 이 용량의 에리스로포이에틴은 인간 또는 동물 신체의 미용 치료를 위해, 특히 주름의 치료, 결합조직의 강화, 피부의 보호 및 팽팽하게 함, 유해 환경 작용에 대한 보호, 노화 반점의 치료, 재상피형성의 가속화, 모발 성장의 가속화를 위해, 그리고/또는 메이크업 파운데이션으로서 적합하게 고안된 용도.
특히 국소 적용을 위한 화장료 제제의 생산을 위한, 주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏, 바람직하게는 주당 0.05 내지 50 IU/체중 ㎏의 용량을 함유하는 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴 및/또는 유도체의 용도로서, 여기에서, 이 용량의 에리스로포이에틴은 인간 또는 동물 신체의 미용 치료를 위해, 특히 주름의 치료, 결합조직의 강화, 피부의 보호 및 팽팽하게 함, 유해 환경 작용에 대한 보호, 노화 반점의 치료, 재상피형성의 가속화, 모발 성장의 가속화를 위해, 그리고/또는 메이크업 파운데이션으로서 적합하게 고안된 용도.
주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏, 바람직하게는 주당 0.05 내지 50 IU/체중 ㎏의 용량 및/또는 세포 치료에 사용 가능한 적어도 하나의 세포 군집과 내피 전구체 세포의 혼합물을 함유하는 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴 및/또는 유도체의 용도로서, 여기에서, 이 용량의 에리스로포이에틴은 인간 또는 동물 신체에서 조직 또는 맥관의 재생을 위해 적합하게 고안되고, 혼합물은 적용 전에 생체외에서 에리스로포이에틴과 접촉하게 되는 용도.
주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏, 바람직하게는 주당 0.05 내지 50 IU/체중 ㎏의 용량 및/또는 세포 치료에 사용 가능한 적어도 하나의 세포 군집과 내피 전구체 세포의 혼합물을 함유하는 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴 및/또는 유도체의 용도로서, 여기에서, 이 용량의 에리스로포이에틴은 인간 또는 동 물 신체에서 조직 또는 맥관의 재생을 위해 적합하게 고안되고, 에리스로포이에틴은 혼합물의 적용 전, 후 또는 동시에 투여되는 용도.
질병의 예방 또는 치료를 위한, 하기 용량의 에리스로포이에틴 및 적어도 하나의 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제를 함유하는 약제학적 조성물 또는 키트의 생산을 위한, 주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏, 바람직하게는 주당 0.05 내지 50 IU/체중 ㎏의 용량 및/또는 적어도 하나의 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제, 특히 약물학적 활성 성분을 함유하는 약제학적 조성물 또는 키트의 생산을 위한 에리스로포이에틴 및/또는 유도체의 용도로서, 이 용량의 에리스로포이에틴은 적어도 하나의 화학적, 열적, 기계적 또는 생물학적 약제와 함께 에리스로포이에틴의 순차적, 적시의 연속적 또는 동시 적용을 위해 적합하게 고안된 용도.
제 6 항에 있어서, 기계적 약제는 내부인공기관(endoprostheses), 바람직하게는 치아, 뼈 또는 인대/힘줄 대체를 위한 이식 지지물인 용도.
제 6 항에 있어서, 생물학적 약제는 간, 신장, 심장, 췌장, 피부 또는 모발 이식물과 같은 고형 기관인 용도.
주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏, 바람직하게는 주당 0.05 내지 50 IU/체중 ㎏의 용량을 함유하는 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴 및/또는 유도체의 용도로서, 여기에서, 이 용량의 에리스로포이에틴은 질병의 예방 또는 치료를 위해 적합하게 고안되고, 질병은 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 인슐린 저항, 내피-중개의 만성 염증성 질환, 세망내피세포증식을 포함하는 내피세포증식, 아테롬성 동맥경화증, 노화-관련된 심장혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 자간전증, 레이노드씨병, 간염, 간경화, 급성 또는 만성 간부전과 같은 간 질환, 뼈 및 연골 질환 또는 병변, 특히 위장관에서의 점막 질환 또는 병변, 크론씨병, 궤양성 대장염, 임신-유도성 고혈압, 만성 또는 급성 신부전, 특히 말기 신부전, 사구체 여과율 30 내지 80 ㎖/분의 신장 기능 제한, 미세알부민뇨증, 단백뇨증, 또는 상처 및 이의 후유증인 용도.
에리스로포이에틴, 내피 전구체 세포 및 세포 치료에 사용 가능한 적어도 하나의 세포 군집을 함유하는 키트의 생산을 위한, 주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏, 바람직하게는 주당 0.05 내지 50 IU/체중 ㎏의 용량을 함유하는 약제학적 조성물의 생산을 위한 에리스로포이에틴 및/또는 유도체의 용도로서, 여기에서, 에리스로포이에틴은 바람직하게는 저용량으로 존재하는 용도.
제 1 항 내지 제 10 항의 어느 한 항에 있어서, 약제학적 조성물은 내피 전구체 세포의 생리적 기동, 내피 전구체 세포의 증식, 내피 전구체 세포의 내피 세포로의 분화 및/또는 내피 전구체 세포의 혈관신생 또는 혈관형성 자극으로의 이동의 자극을 위해 사용되는 용도.
제 1 항 내지 제 11 항의 어느 한 항에 있어서, 분화 중인 내피 전구체 세포의 부착 능력이 증가하는 용도.
제 1 항 내지 제 12 항의 어느 한 항에 있어서, 내피 전구체 세포의 자극이 내피 조직의 형성을 야기하는 용도.
제 1 항 내지 제 13 항의 어느 한 항에 있어서, 내피 전구체 세포의 자극이 새로운 혈관의 형성을 야기하는 용도.
내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 인간 또는 동물 신체의 질병 또는 병리적 상태의 치료를 위한, 주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏의 저용량 에리스로포이에틴의 용도.
제 15 항에 있어서, 내피 전구체 세포의 기능장애가 이들의 손상된 증식 능력, 이들의 손상된 내피 세포로의 분화 능력, 이들의 손상된 부착 능력 및/또는 이들의 손상된 혈관형성 또는 혈관신생 자극으로의 이동 능력으로 구성되는 용도.
제 15 항 또는 제 16 항에 있어서, 내피 전구체 세포의 기능장애가 내피 조직 및/또는 혈관의 형성을 손상 또는 방해하는 용도.
제 15 항 내지 제 17 항의 어느 한 항에 있어서, 내피 전구체 세포의 기능장애가 병원성 원인을 갖는 용도.
제 15 항 내지 제 18 항의 어느 한 항에 있어서, 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병 또는 병리적 상태가 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 인슐린 저항, 내피-중개의 만성 염증성 질환, 세망내피세포증식을 포함하는 내피세포증식, 아테롬성 동맥경화증, 노화-관련된 심장혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 자간전증, 레이노드씨병, 간염, 간경화, 급성 또는 만성 간부전과 같은 간 질환, 뼈 및 연골 질환 또는 병변, 특히 위장관에서의 점막 질환 또는 병변, 크론씨병, 궤양성 대장염, 임신-유도성 고혈압, 만성 또는 급성 신부전, 특히 말기 신부전, 사구체 여과율 30 내지 80 ㎖/분의 신장 기능 제한, 미세알부민뇨증, 단백뇨증, ADMA 농도 증가 또는 상처 및/또는 이의 후유증인 용도.
고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 인슐린 저항, 내피-중개의 만성 염증성 질환, 세망내피세포증식을 포함하는 내피세포증식, 아테롬성 동맥경화증, 노화-관련된 심장혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 자간전증, 레이노드씨병, 간염, 간경화, 급성 또는 만성 간부전과 같은 간 질환, 뼈 및 연골 질환 또는 병변, 특히 위장관에서의 점막 질환 또는 병변, 크론씨병, 궤양성 대장염, 임신-유도성 고혈압, 만성 또는 급성 신부전, 특히 말기 신부전, 사구체 여과율 30 내지 80 ㎖/분의 신장 기능 제 한, 미세알부민뇨증, 단백뇨증, ADMA 농도 증가 또는 상처 및/또는 이의 후유증의 치료를 위한, 저용량, 특히 주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏의 에리스로포이에틴의 용도.
제 1 항 내지 제 20 항의 어느 한 항에 있어서, 에리스로포이에틴이 주당 0.001 내지 90 유닛/체중 ㎏의 용량으로 각 환자에게 투여되는 용도.
제 21 항에 있어서, 에리스로포이에틴이 0.05 내지 50 유닛/체중 ㎏/week의 용량으로 각 환자에게 투여되는 용도.
제 1 항 내지 제 22 항의 어느 한 항에 있어서, 약제학적 조성물이 비경구, 특히 정맥내, 근육내, 피부내 또는 피하 및 국소 투여에 적합한 용도.
제 23 항에 있어서, 약제학적 조성물이 주사 또는 주입의 형태를 갖는 용도.
제 1 항 내지 제 22 항의 어느 한 항에 있어서, 약제학적 조성물이 경폐 투여(pulmonary administration)에 적합한 용도.
제 25 항에 있어서, 약제학적 조성물이 수성 용액, 비수성 용액 또는 분말의 형태를 갖는 용도.
제 25 항 또는 제 26 항에 있어서, 약제학적 조성물이 에어졸의 형태를 갖는 용도.
제 1 항 내지 제 22 항의 어느 한 항에 있어서, 약제학적 조성물이 경구 투여에 적합한 용도.
제 28 항에 있어서, 약제학적 조성물이 액제, 현탁제, 유제 또는 정제의 형태를 갖는 용도.
제 1 항 내지 제 29 항의 어느 한 항에 있어서, 약제학적 조성물이 내피 전구체 세포의 자극을 위한 적어도 하나의 다른 활성 성분을 포함하는 용도.
제 30 항에 있어서, 다른 활성 성분은 VEGF, PlGF, GM-CSF, ACE 저해제, AT-1 차단제, HMG-CoA 리덕타제 저해제 및/또는 NO 공여체인 용도.
제 31 항에 있어서, HMG-CoA 리덕타제 저해제는 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 스타틴이고, ACE 저해제는 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 활성성분이고, 그리고/또는 AT-1 차단제는 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사 르탄(olmesartan)과 같은 활성성분인 용도.
이식 가능한 내피 제제의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 용도.
제 33 항에 있어서, 내피 세포가 저용량, 즉 0.001 내지 90 IU/㎏/week의 에리스로포이에틴의 존재 중에 내피 전구체 세포의 배양에 의해 생체외 생산되는 용도.
제 33 항 또는 제 34 항에 있어서, 내피 전구체 세포의 배양이 VEGF, PlGF, GM-CSF, 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 ACE 저해제, 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사르탄(olmesartan)과 같은 AT-1 차단제, 특히 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 HMG-CoA 리덕타제 저해제, 및 특히 L-아르기닌과 같은 NO 공여체를 포함하는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 활성성분의 존재 중에 일어나는 용도.
조직 또는 기관 이식물의 전처리 및/또는 후속처리를 위한 저용량, 즉 0.001 내지 90 IU/㎏/week의 에리스로포이에틴의 용도.
제 36 항에 있어서, 조직 또는 기관 이식물의 전처리가 분리된 내피 전구체 세포를 사용하여 실시되는 용도.
주입 가능 또는 이식 가능한, 세포-함유, 생체외 기관 또는 조직 시스템의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 용도로서, 여기에서 생체외 기관 또는 조직 시스템은 혈관형성 및/또는 내피 형성을 유도하기 위해, 이식 또는 주입 전에 에리스로포이에틴으로 처리되는 용도.
제 38 항에 있어서, 생체외 기관 또는 조직 시스템이 내피 전구체 세포를 포함하는 용도.
혈관의 인공기관 또는 심장 판막의 생산을 위한 에리스로포이에틴의 용도로서, 여기에서 혈관의 인공기관 또는 심장 판막은 에리스로포이에틴으로 코팅되는 용도.
제 40 항에 있어서, 혈관의 인공기관 또는 심장 판막의 코팅은 내피 전구체 세포를 포함하는 용도.
제 1 항 내지 제 41 항의 어느 한 항에 따른 용도로서, 에리스로포이에틴은 인간 또는 동물 에리스로포이에틴인 용도.
제 42 항에 있어서, 에리스로포이에틴은 에리스로포이에틴의 유도체, 유사체, 변형체 또는 변이체인 용도.
제 42 항 또는 제 43 항에 있어서, 에리스로포이에틴은 인간 요로부터, 재생불량성 빈혈 환자의 요 또는 혈장으로부터, 인간 신장 종양 세포의 조직 배양물로부터, 인간 에리스로포이에틴을 생산하는 능력을 갖는 인간 림프아세포로부터, 또는 인간 또는 동물 세포주의 세포 융합에 의해 얻어지는 융합세포 배양물로부터 분리되는 용도.
제 42 항 또는 제 43 항에 있어서, 에리스로포이에틴은 DNA 재조합 기술에 의해 생산된 에리스로포이에틴인 용도.
활성성분으로서, 바람직하게는 저용량, 특히 주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏의 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체, 유사체, 변형체 또는 변이체와 함께 VEGF, PlGF, GM-CSF, 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 ACE 저해제, 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사르탄(olmesartan)과 같은 AT-1 차단제, HMG-CoA 리덕타제 저해제 및 NO 공여체를 포함하는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 활성성분을 포함하는, 내피 전구체 세포의 자극, 내피 조직 형성의 자극, 혈관형성의 자극 및/또는 내피 전구체 세포의 기능장애와 관련된 질병 또는 병리적 상태의 치료 를 위한 약제학적 조성물.
활성성분으로서, 바람직하게는 저용량, 특히 주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏의 에리스로포이에틴 및/또는 이의 유도체, 유사체, 변형체 또는 변이체를 포함하는, 고콜레스테롤혈증, 당뇨병, 인슐린 저항, 내피-중개의 만성 염증성 질환, 세망내피세포증식을 포함하는 내피세포증식, 아테롬성 동맥경화증, 노화-관련된 심장혈관 질환, 사지의 허혈성 질환, 자간전증, 레이노드씨병, 간염, 간경화, 급성 또는 만성 간부전과 같은 간 질환, 뼈 및 연골 질환 또는 병변, 인대 및 힘줄 질환 또는 병변, 특히 위장관에서의 점막 질환 또는 병변, 크론씨병, 궤양성 대장염, 임신-유도성 고혈압, 만성 또는 급성 신부전, 특히 말기 신부전, 사구체 여과율 30 내지 80 ㎖/분의 신장 기능 제한, 미세알부민뇨증, 단백뇨증, ADMA 농도 증가 또는 상처 및 이의 후유증의 예방 및/또는 치료를 위한 약제학적 조성물.
제 47 항에 있어서, VEGF, PlGF, GM-CSF, 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 ACE 저해제, 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사르탄(olmesartan)과 같은 AT-1 차단제, HMG-CoA 리덕타제 저해제 및 NO 공여체를 포함하는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 다른 활성성분을 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
제 46 항 또는 제 47 항에 있어서, HMG-CoA 리덕타제 저해제는 심바스타틴, 메바스타틴 또는 아토르바스타틴과 같은 스타틴이고, ACE 저해제는 에날라프릴(enalapril), 라미프릴(ramipril) 또는 트란돌라프릴(trandolapril)과 같은 활성성분이고, 그리고/또는 AT-1 차단제는 이르베사르탄(irbesartan), 로르사르탄(lorsartan) 또는 올메사르탄(olmesartan)과 같은 활성성분인 약제학적 조성물.
제 46 항 또는 제 47 항에 있어서, NO 공여체는 L-아르기닌인 약제학적 조성물.
질병의 예방 또는 치료를 위한 약제학적 조성물의 생산을 위한 제 1 항 내지 제 50 항의 어느 한 항에 따른 에리스로포이에틴의 용도로서, 여기에서 에리스로포이에틴 또는/및 약제학적 조성물은 오전 6:00시 내지 10:00시의 시기에 인간 또는 동물 신체에 아침 적용하도록 적합하게 고안된 용도.
에리스로포이에틴, 내피 전구체 세포 및 세포 치료에 적용 가능한 적어도 하나의 세포 군집을 함유하는 키트로서, 여기에서 에리스로포이에틴은 바람직하게는 저용량으로 존재하는 키트.
인간 또는 동물 신체의 질병의 예방 또는 치료를 위한, 주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏, 바람직하게는 주당 0.05 내지 50 IU/체중 ㎏의 용량을 함유하는 약제학적 조성물 또는 키트의 생산을 위한 에리스로포이에틴 및/또는 유도체의 용도로 서, 여기에서, 상기 저용량의 에리스로포이에틴은 기계적 또는 생물학적 약제, 특히 내부인공기관, 특히 임플란트, 예를 들어 치아 임플란트, 치아 대체물, 뼈 임플란트, 뼈 대체물, 특히 관절 인공기관, 특히 십자 인대와 같은 인대/힘줄 대체물, 또는 고형 기관이 내부인공기관 주위의 신체 구조 또는 임플란트로의 통합을 개선, 특히 촉진 및/또는 가속화하기 위해 적합하게 고안된 용도.
제 53 항에 있어서, 약제학적 조성물 또는 키트는 세포 치료제, 특히 내피 전구체 세포 및/또는 조직 및 맥관의 재생을 위해 세포 치료에 사용 가능한 다른 세포 군집을 추가로 포함하는 용도.
제 53 항 또는 제 54 항에 있어서, 내부인공기관이 철, 세라믹, 플라스틱 또는 다른 매트릭스 물질로 만들어지는 용도.
주당 0.001 내지 90 IU/체중 ㎏, 바람직하게는 주당 0.05 내지 50 IU/체중 ㎏의 용량의 에리스로포이에틴, 내부인공기관 및 필요에 따라 세포 치료제, 바람직하게는 내피 전구체 세포 또는 세포 치료에 사용 가능한 다른 세포 군집을 포함하는 키트.