KR20070001880A

KR20070001880A - Ｂαｆｆ 길항제를 위한 치료 섭생법

Info

Publication number: KR20070001880A
Application number: KR1020067009866A
Authority: KR
Inventors: 수잔 칼레드; 삼바시바 라오
Original assignee: 바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드
Priority date: 2003-10-20
Filing date: 2004-10-20
Publication date: 2007-01-04
Also published as: US20150098953A1; US20110110950A1; JP2014062124A; US20070269443A1; MXPA06004301A; BRPI0415709A; ZA200603123B; JP2011116794A; CA2543093A1; JP2007509064A; US7850967B2; AU2004285455A1; US20130230538A1; EP1675609A1; IL175025A0; RU2006117324A; WO2005042009A1; US9387237B2; US8828948B2; CN1897966A

Abstract

면역학적 질환 및 관련 질환의 치료를 위한 BAFF 길항제의 투여를 위한 치료 섭생법이 기재되어 있다. 이 요법은 BAFF 길항제의 단기 투여 과정 후 다음 투여 회차 전의 연장된 비-치료 기간을 수반한다.

BAFF, 자가면역, 길항제

Description

ＢΑＦＦ 길항제를 위한 치료 섭생법 {THERAPEUTIC REGIMENS FOR BAFF ANTAGONISTS}

본원은 참고로 본 명세서에서 인용하는, 2003년 10월 20일에 출원된 미국 가출원 제60/512,880호에 대한 우선권을 주장한다.

본 발명은 일반적으로 면역 및 관련 질환을 치료하는 데 사용되는 치료 섭생법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 BAFF (TNF 과에 속하는 B 세포 활성화 인자)의 길항제를 사용하여 자가면역 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.

B 세포는 후천성 면역에서 중심 역할을 한다. 이들 세포는 외래 항원 (Ag)에 대해 신속하게 유도된 항체 (Ab) 반응을 개시하고 Ag 제시 세포로서 작용하는 독특한 능력을 보유한다. B 세포 항상성 및 자가-면역내성 상태를 유지하기 위해, 성숙하여 말초 기관으로 이동하는 B 세포 전구체의 연속적인 풀 (pool)을 생성하는 것뿐 아니라, 자가반응성 B 세포를 제거하기 위한 음성 선별의 과정을 유지할 필요가 있다. B 세포 발달 과정에서의 이상조절 (dysregulation)은 B 세포 발달에서 방해가 될 수 있고, 따라서 면역결핍, 또는 반대로, 자가면역을 유도하는 자가-반응성 B 세포의 탈출 및 증식을 초래할 수 있다.

친화성이 높고 체세포 과돌연변이를 가진 자가항체의 생성은 자가면역 증상의 특징 중 하나이다. 자가항체는 심각한 조직 손상 (예를 들어, 루프스 신염) 또는 혈액 성분의 손실 (예를 들어, 면역 출혈성 혈소판감소성 자반증에서와 같은 경우)을 초래할 수 있다. 자가면역 질환에 대한 주된 치료 섭생법은 장기 (long-term) 사용시 유해한 부작용을 나타내는 광범위한 면역억제제를 사용한다.

B 세포 생존 및 성숙 인자인 BAFF (TALL-1, THANK, BLyS, zTNF4, and TNFSF13B로도 공지되어 있음)의 최근 발견은 자가반응성 B 세포 기능에 대한 표적화된 조정 방법을 개발할 수 있는 유일한 기회를 제공한다. 후천성 면역에 있어서 BAFF의 역할은 BAFF가 B 세포 성장 인자로서 첫번째로 기재된 이후로 급속히 밝혀져 왔다. BAFF (엑세스 번호 AAD25356)는 예를 들어, 문헌 [Schneider et al (1999) J. Exp. Med., 189: 1697-1710; PCT 공개 WO99/12964 및 미국 특허 출원제09/911,777호]에 기재되어 있다. 연구는 BAFF의 정상 수준이 전신 홍반성 루푸스 및 류마티스성 관절염과 같은 자가면역 질환의 발병에 기여할 수 있음을 나타낸다. 이를 검토하기 위해서는 예를 들어, 문헌 [Mackay et al. (2002) Nature Reviews: Immunology, 2: 465-475; Kalled et al. (2003) Expert Opin. Ther. Targets, 7(1): 115-23]을 참조한다.

BAFF는 B 세포의 동시자극 [문헌 (Moore et al. (1999) Science, 285: 260-263; Schneider et al. (1999) J. Exp. Med., 189: 1747-1756; Mukhopadhyay et al. (1999) J. Biol. Chem., 274: 15978-15981)]; 증가된 B 세포 증식 [문헌 (Moore et al. (1999) Science, 285: 260-263)]; 및 정상적으로 결실된 B 세포의 증가된 생존 [문헌 (Khare et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. , 97: 3370-3375; Gross et al. (2000) Nature, 404: 995-999; Mackay et al. (1999) J. Exp. Med., 190: 1697-1710)]에 관여하고 있다. BAFF에 대한 세 가지 동족 수용체 즉, (1) B 세포 성숙 항원 (BCMA; 엑세스 번호 S43486; Gross et al. (2000) Nature, 404: 995-999; PCT 공개 WO01/12812; 미국 특허 출원 제10/077,137호); (2) 막횡단 활성화제 및 시클로필린 리간드 인터액터 (interactor) (TACI; 엑세스 번호 AAP57629; Gross et al., supra); 및 (3) 가장 최근에는 BAFFR (BR3로도 불림; 엑세스 번호 AF373846; Thompson et al. (2001) Science, 293: 2108-2111)가 확인되어 있다. BAFFR은 BAFF (Thompson et al., supra)에 대해 특이적인 3가지 수용체 중 하나일 뿐이다. BCMA 및 TACI는 BAFF에 결합하지 않을 뿐만 아니라 또 다른 TNF 과 리간드인 APRIL에도 결합하지 않는다 (Yu et al. (2000) Nat. Immunol., 1: 252-256; Wu et al. (2000) J. Biol. Chem. , 275: 35478-35485; Rennert et al. (2000) J. Exp. Med., 192: 1677-1684; PCT 공개 WO 01/24811; 미국 특허 출원 제10/115,192호).

BAFF가 B-세포 생존 및 성숙에 필요한 인자로서 명백히 확인되어 있지만, B 세포 항상성에서의 APRIL의 역할은 잘 이해되지 않은 상태로 남아있다. APRIL은 본래 시험관내 및 생체내에서 종양 세포의 생장을 자극하는 것으로 밝혀져 있었다 (Hahne et al. (1998) J. Exp. Med., 188: 1185-1190). 최근 보고는 APRIL이 시험관 내에서 일차 B 및 T 세포의 보조자극제로서도 작용할 수 있고 시험관 내에서 말초 혈액 B 세포에 의한 IgM 생성을 자극할 수 있다는 것을 입증하였다 (Yu et al. (2000) Nat. Immunol., 1: 252-256; Marsters et al. (2000) Curr. Biol., 10: 785-788). BAFF 처럼 APRIL의 생체내 투여는 B-세포 집단의 증식 및 활성화된 T 세포의 비율에서의 증가로 인한 비장비대를 초래하는데 (Yu et al. (2000) Nat. Immunol., 1: 252-256), 이는 APRIL이 림포계 항상성에 관여할 수 있음을 암시한다. APRIL-형질전환 마우스를 사용하여 얻은 데이타에 기초할 때, APRIL은 T-세포-비의존성 타입 2 (TI-2) 체액성 반응에서 일정 역할을 하는 것으로 보인다 (Stein et al. (2002) J. Clin. Invest., 109 (12): 1587-1598). 또한, A/WySnJ 마우스를 사용하여 얻은 데이타는 APRIL이 B 세포 발달 및 기능에 필요하지 않음을 입증한다 (Thompson et al., supra).

BAFF 수용체의 가용성 형태는 이의 세포외 도메인을 이뮤노글로불린의 Fc 부위에 융합시킴으로써 만든다. TACI 또는 BCMA (TACI-Fc 또는 BCMA-Fc)의 이러한 가용성 형태로 정상 마우스를 치료하면 B 세포 수가 감소되고 체액성 반응이 결핍된다 (Shu et al. (1999) J. Leukoc. Biol., 65: 680-683; Yan et al. (2000) Nat. Immunol., 1: 37-41; Xia et al. (2000) J. Exp. Med. , 192:137-143; Wang et al. (2001) Nat. Immunol., 2: 632-637; Yu et al. (2000) Nat. immunol., 1: 252-256). 예를 들어, B 세포 및 T 세포 둘 다를 수반하는 자가면역 질환인 류마티스성 관절염에 대한 마우스 모델에서, TACI-Fc는 염증을 실질적으로 억제하고 질환의 진행을 늦춘다 (Wang et al. (2001) Nat. Immunol., 2 (7): 632-637). BAFF-결핍 마우스가 TACI-Fc-처리 마우스 또는 BCMA-Fc-처리 마우스의 표현형 (성숙 B 세포의 거의 완전한 손실 및 심각하게 손상된 체액성 반응)과 유사한 표현형을 가지기 때 문에, 상기 효과는 BAFF 격리에 기인한 것으로 생각된다 (Schiemann et al. (2001) Science, 293: 2111-2114; Gross et al. (2001) Immunity, 15 : 289-302). TACI-Ig를 사용한 NZBWF1의 5-주 치료가 치료 후 12주에서 SLE 증상의 완화를 일으킨다 하더라도, 자가항체의 감소는 전혀 관찰되지 않았는데, 이는 보다 긴 치료 과정이 필요하다는 것을 의미한다 (Gross et al. (2000) Nature, 404 (6781): 995-999).

최근에, BAFFR-Fc 및 BAFF 항체를 비롯한 BAFF-특이적 작용제가 자가면역 및 기타 질환의 치료용으로 개발되었다 [예를 들어, 미국 특허 출원 제09/911,777호; 제10/380,703호; 제10/045,574호; 및 제60/458,707호, 및 문헌 (Kalled et al. (2003) Expert Opin. Ther. Targets, 7(1): 115-23)을 참조함]. 일단 BAFF-특이적 작용제의 투여가 중단되고 이 작용제가 혈류로부터 제거되면, 병원성 B 세포의 회복을 비롯한 처리-전 수준으로의 B 세포의 재구성이 약 8주 내에 발생하는 것으로 예측된다 [예를 들어, 문헌 (Porpiglia et al. (2003) Clin. Immunol., 107: 90-97; Berardi et al. (1997) Blood, 89: 3554-3564; Hiramatsu et al. (2003) Blood, 102:873-880)을 참조함]. 결과적으로, 8주 미만의 간격으로 이들 약물을 빈번하게 투여하여 치료 효과를 유지할 필요가 있다.

그러므로, 새로운 치료 방법이 면역 및 관련 질환의 치료에 여전히 필요하다.

발명의 개요

본 발명은 면역학적 질환의 효과적인 치료가 치료적 유효량의 BAFF 길항제의 단기 투여 후, 다음 투여 회차 전에 연장된 기간 동안 상기 길항제의 투여를 일시 적으로 중단함으로써 달성될 수 있다는 발견으로부터 기인한 것이다.

본 발명은 경증의 SLE 내지 중증의 SLE을 앓는 신염 SNF1 마우스에게 BAFFR-Fc를 단기 4-주 동안 투여하면 장기 (6월 이상)의 임상 효과가 나타난다는 놀라운 발견에 부분적으로 기초한 것이다. B 세포 회복이 BAFFR-Fc의 다음 투여를 초래한다고 하더라도, 새로 등장한 B 세포는 실질적으로 병원성을 띠지 않는다. 본 발명은 또한 SNF1 마우스에서의 BAFFR-Fc의 단기 투여의 임상 효과가 동일 모델에서 TACI-Fc의 투여시 관찰된 임상 효과와 비교할 때 훨씬 더 현저하고 오래 지속된다는 발견 및 입증에 기초한 것이다.

본 발명은 포유동물에서 면역학적 질환 및 관련 질환, 특히 자가면역 질환을 치료하는 방법을 제공하고, 포유동물에서 자가항체 생성을 억제하는 방법 및/또는 병원성 B 세포 집단의 발생을 억제하는 방법을 포함한다 (그러나, 이에 제한되지 않음). 또한, 본 발명은 신장 섬유증을 치료하는 방법 및/또는 예컨대, 가압 여과, 선택적 재흡수, 세뇨관 분비 및 전신 혈압 조절과 같은 신장 기능을 개선하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 심장 염증을 감소시키는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법에서 사용되는 투여 방법 및 조성물도 제공된다.

특정 실시양태에서, 자가면역 질환을 앓는 환자를 치료하는 방법은,

(a) 치료적 유효량의 BAFF (TNF 과에 속하는 B 세포 활성화 인자) 길항제를 1회 이상 또는 N 주 미만의 1 이상의 간격으로 상기 환자에게 투여하는 단계;

(b) 단계 (a)의 투여를 N 주 이상 동안 일시적으로 중단하는 단계; 및

(c) 단계 (a) 및 (b)를 1회 이상 반복하는 단계

를 포함하는데, 여기서 N은 8, 9, 10, 11, 또는 12이다.

일부 실시양태에서, BAFF 길항제는 가용성 BAFF 수용체 (예를 들어, BAFFR, BCMA, 또는 TACI), 항-BAFF 항체, 또는 항-BAFF 수용체 항체이다. 특정 실시양태에서, BAFF 길항제는 예를 들어, 가용성 BAFFR와 같은 BAFF-특이적 길항제이다.

본 발명의 추가 측면은 부분적으로 하기 설명에 기재될 것이고, 부분적으로는 하기 설명으로부터 이해될 것이고, 또는 본 발명의 실시에 의해 알 수 있을 것이다.

서열의 간단한 설명

서열 번호 1은 인간 BAFFR의 아미노산 서열 (진뱅크 액세스 번호 AF373846)이다. 이 서열에 대한 특별한 특징은 서열 목록에 기재되어 있다: 잔기 1 - 없음 또는 임의의 아미노산; 잔기 2 - 메티오닌, 없음, 또는 임의의 아미노산; 잔기 21 - 발린 (야생형), 아스파라긴, 또는 다른 아미노산; 잔기 28 - 리신 (야생형), 프롤린, 또는 다른 아미노산; 잔기 47 - 없음, 임의의 아미노산 또는 알라닌.

서열 번호 3은 신호 서열 (아미노산 1-22) 및 인간 IgG1 Fc 부위 (아미노산 95-321)를 포함하는, 인간 BAFFR-Fc 융합 단백질의 아미노산 서열이다. 이 서열에 대한 특별한 특징은 서열 목록에 기재되어 있다: 잔기 41 - 발린 (야생형), 아스파라긴, 또는 다른 아미노산; 잔기 48 - 리신 (야생형), 프롤린 또는 다른 아미노산; 잔기 67 - 없음, 임의의 아미노산, 또는 알라닌.

서열 번호 2는 뮤린 BAFFR (진뱅크 엑세스 번호 Q96RJ3)의 아미노산 서열이다.

서열 번호 4는 신호 서열 (아미노산 1-22) 및 뮤린 IgG1 Fc 부위 (아미노산 88-316)을 포함하는, 뮤린 BAFFR-Fc 융합 단백질의 아미노산 서열이다.

서열 번호 5는 BAFFR로부터 유도된 BAFF-결합 펩티드의 아미노산 서열이다.

서열 번호 6은 미국 특허 출원 제60/458,707호에 기재된 ABAFFR에서의 최소 결실을 가진 아미노산 서열이다.

도 1A-1D는 B 세포에 대한 바이오틴-항-B220 mAb 및 T 세포에 대한 항-CD3을 사용한 파라핀-포매 신장 절편 상에서의 면역조직화학법으로 평가하였을 때 BAFFR-Fc의 단기 치료가 SNF1 마우스의 신장에서 신장 림프구 침윤을 억제한다는 것을 입증한다 (50x 확대). 도 1A 및 1B는 각각 9 및 50주 연령의 비-치료 마우스로부터 얻은 대표적인 신장 절편을 보여준다. 23주의 연령 때에 시작하여 4주 동안 계속하여 주 당 2회씩 200 ㎍의 뮤린 BAFFR-Fc 또는 200 ㎍의 mIgG1를 두 개의 마우스 군에게 투여하고, 각각 50주 또는 51주의 연령 때에 희생시켰다. 도 1C 및 1D는 BAFFR-Fc로 처리된 마우스 및 mIgG1으로 처리된 마우스 각각으로부터 얻은 대표적인 신장 절편을 보여준다.

도 2A-2D는 B 세포에 대한 바이오틴-항-B220 mAb 및 T 세포에 대한 항-CD3을 사용한 파라핀-포매 장간막 림프절 (MLN) 절편 상에서의 면역조직화학법으로 평가하였을 때 BAFFR-Fc의 단기 치료가 SNF1 마우스에서 림프절병증을 억제한다는 것을 입증한다 (50x 확대). 도 2A 및 2B는 연령이 각각 9주 및 50주인 비-치료 마우스로부터 얻은 대표적인 MLN 절편을 보여준다. 23주의 연령 때에 시작하여 4주 동안 계속하여 주 당 2회씩 200 ㎍의 뮤린 BAFFR-Fc 또는 200 ㎍의 mIgG1를 두 개의 마우스 군에게 투여하고, 각각 50주 또는 51주의 연령 때에 희생시켰다. 도 2C 및 2D는 BAFFR-Fc로 처리된 마우스 및 mIgG1으로 처리된 마우스 각각으로부터 얻은 대표적인 신장 절편을 보여준다.

본 발명이 보다 용이하게 이해될 수 있도록 하기 위해, 일부 용어를 먼저 정의한다. 다른 정의는 상세한 설명 전체에 기재되어 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 "항체"는 이뮤노글로불린 또는 이의 일부를 지칭하고, 공급원, 생성 방법, 및 기타 특성과 관계없이 항원-결합 부위를 포함하는 임의의 폴리펩티드를 포괄한다. 이 용어는 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 단일특이적 항체, 다중특이적 항체, 비-특이적 항체, 인간화 항체, 단일쇄 항체, 키메라 항체, 합성 항체, 재조합 항체, 하이브리드 항체, 돌연변이 항체, 및 CDR-그래프트 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 용어 "항원-결합 도메인"은 항원의 일부 또는 전부에 특이적으로 결합하거나 상보적인 영역을 포함하는 항체 분자의 일부를 말한다. 항원이 큰 경우, 항체는 항원의 특정 일부에만 결합할 수 있다. "에피토프" 또는 "항원성 결정부위"는 항체의 항원-결합 도메인과의 특이적 상호작용을 담당하는 항원 분자의 일부이다. 항원-결합 도메인은 1 이상의 항체 가변 도메인 (예를 들어, V_H 도메인을 구성하는 소위 Fd 항체 단편)에 의해 제공될 수 있다. 항원-결합 도메인은 항체의 경쇄 가변 영역 (V_L) 및 항체의 중쇄 가변 영역 (V_H)를 포함한다. 용어 "항-BAFF 항체" 및 "BAFF에 대해 유도된 항체"는 BAFF의 적어도 한 에피토프에 특이적으로 결합하는 임의의 항체를 말한다.

용어 "BAFF"는 면역 세포에서의 발현 및 B 세포 생존 인자로서의 역할을 특징으로 하는 B 세포-활성화 인자를 말한다. BAFF의 특징은 문헌 (Mackay et al. (2002) Nature Reviews: Immunology 2: 465-475 and in Gavin et al. (2003) J. Biol. Chem., 278 (40): 38220-8)에 요약되어 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "BAFF 길항제"는 일반적으로 BAFF의 생물학적 활성을 직접적으로 하향조절하는 임의의 화합물을 말한다. 분자는 BAFF, BAFF 유전자, BAFF 전사체 또는 BAFF 수용체와 상호작용함으로써 BAFF의 생물학적 활성을 "직접적으로 하향조절한다." 예를 들어, BAFF 길항제는 BAFF에 결합하여 BAFF의 활성을 중화시킬 수 있고; BAFF의 발현 수준을 감소시킬 수 있고; BAFF의 안정성에 영향을 줄 수 있고; 가용성 형태로의 BAFF의 막-결합 형태의 단백질분해 절단에 영향을 줄 수 있고; 1종 이상의 수용체와 BAFF의 결합을 방해할 수 있고; 또는 BAFF 수용체의 세포내 신호전달을 방해할 수 있다. BAFF 길항제는 단백질성 분자 (예를 들어, 항체, 수용체 융합 단백질, 펩티드) 또는 비-단백질성 분자 (예를 들어, 유기 소분자 (500 Da))일 수 있다. BAFF 길항제의 생물학적 활성을 중화시키는 것을 평가하는 방법은 당분야에 공지되어 있다.

용어 "BAFFR"은 달리 명시하지 않는 한, BAFF에 결합할 수 있는 수용체로서 BCMA 또는 TACI가 아닌 BAFF에 대한 야생형 또는 돌연변이 수용체의 적어도 일부를 포함하는 단백질을 말한다. 인간 BAFFR의 BAFF-결합 도메인이 서열 번호 1의 아미노산 27 내지 32을 포함한다는 것은 입증되어 있다. BAFFR은 PCT 공개 WO 02/24909 및 미국 특허 출원 제10/380,703호 및 제60/458,707호에 더 기재되어 있고, 인간 BAFFR (서열 번호 1; 엑세스 번호 AAD25356; 서열 번호 1의 아미노산 47은 일부 이소형 (isoform)에는 존재하지 않음) 및 뮤린 BAFFR (서열 번호 3; 엑세스 번호 Q96RJ3)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 또한, "BAFFR"은 자연 발생 돌연변이체, 예를 들어, 서열 번호 2의 아미노산 67에 해당하는 서열 번호 1의 아미노산 47에서 알라닌을 보유하는 스플라이스 변이체뿐만 아니라, BAFFR의 기능성 돌연변이 형태, 예컨대, 적어도 서열 번호 1의 아미노산 21 및 28에서 돌연변이를 가진 인간 BAFFR (예를 들어, V21N 및 L28P)를 말한다. 용어 "BAFFR-Fc" 및 "BAFFR-Ig"는 BAFFR과 항체 불변 영역 서열, 예를 들어, Fc 부위를 포함하는 융합 단백질을 말한다.

용어 "BAFF-특이적 길항제"는 (1) 예를 들어, 1종 이상의 BAFF 수용체를 경쟁적으로 방해함으로써 생체내 또는 시험관내에서 BAFF의 효과를 중화시키는 능력을 가지고, (2) 생리학적 조건 하에서 BAFF와 상대적으로 안정한 결합체를 우선적으로 형성하나 예를 들어, APRIL과 같은 TNF 과의 다른 리간드와는 안정한 결합체를 형성하지 못하는 화합물을 말한다. 전형적으로, BAFF에 대한 친화력 상수 Ka는 10⁶ M^-1보다 높고, 바람직하게는 10⁸ M^-1보다 높으나, 또 다른 TNF 과의 리간드에 대한 친화력은 10⁶ M^-1보다 낮고, 바람직하게는 10⁵ M^-1보다 낮다. 당업자는 특정한 조건 하에서 상호작용의 Ka가 상대적으로 낮을 수 있다 하더라도 친화력은 낮지만 결합력 (avidity)은 높은 결합 또한 특이적일 수 있음을 인식한다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 BAFF의 이소형에 대한 BAFF-특이적 길항제의 친화력 상수 Ka는 바람직하게는 10⁶ M^-1, 10⁷ M^-1, 10⁸ M^-1, 10⁹ M^-1, 10¹⁰ M^-1, 10¹¹ M^-1 또는 10¹² M^-1보다 더 크다.

어구 "실질적으로 동일한"은 해당 아미노산 서열이 주어진 서열과 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 이상 동일한 것을 의미한다. 예를 들어, 이러한 서열은 다양한 종으로부터 유래된 변이체일 수 있거나, 절단, 결실, 아미노산 치환 또는 부가에 의해 주어진 서열로부터 유도될 수 있다. 두 가지 아미노산 서열 사이의 동일성(%)은 예를 들어, 문헌 [Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol., 215: 403-410, the algorithm of Needleman et al. (1970) J. Mol. Biol., 48: 444-453, or the algorithm of Meyers et al. (1988) Comput. Appl. Biosci., 4: 11-17]에 기재된 기본적 국소 정렬 수단 (BLAST)과 같은 표준 정렬 알고리즘으로 측정할 수 있다. 이러한 알고리즘은 BLASTN, BLASTP, 및 "BLAST 2 서열" 프로그램 (www. ncbi. nim. nih. gov/BLAST) 내로 도입된다. 이러한 프로그램을 이용하는 경우, 디폴트 파라미터를 사용할 수 있다. 예를 들어, 뉴클레오티드 서열의 경우, "BLAST 2 서열"에 대해 하기 셋팅을 사용할 수 있다: 프로그램 BLASTN, 매치 (match)에 대한 리워드 (reward) - 2, 미스매치에 대한 페널티 - 2, 오픈 갭 및 확장 갭 페널티 5 및 2 각각, 갭 X_드롭오프 50, 기대치 10, 워드 크기 11, 필터 ON. 아미노산 서열의 경우, "BLAST 2 서열"에 대해 하기 셋팅을 사용할 수 있다: 프로그램 BLASTP, 매트릭스 BLOSUM62, 오픈 갭 및 확장 갭 페널티 11 및 1 각각, 갭 X_드롭프 50, 기대치 10, 워드 크기 3, 필터 ON.

용어 "면역학적 질환"은 면역 반응이 비정상인 질환 및 증상을 말한다. 비정상적 반응은 (a) 예를 들어, T 세포 또는 B 세포와 같은 면역 세포의 비정상적 증식, 성숙, 생존, 분화 또는 기능으로 인한 것일 수 있다. 면역학적 질환의 예에는 류마티스성 관절염 (RA), 천식, 건선, 다발성 경화증 (MS), 염증성 장 질환 (IBD), 크론병, 전신 홍반성 루프스 (SLE), 타입 I 당뇨병, 웨게너 육아종증, 이식 거부, 이식편-대-숙주 질환 (GVHD), 과증식성 면역 질환, 자가면역 질환, B 세포 암, 면역조절, 항체-매개 병증 (예컨대, ITCP, 중증근육무력증 등), 쇼그렌 증후군이 포함되나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 조성물 및 방법을 사용하여 치료할 수 있는 질환에는 PCT 공개 WO 02/24909 및 미국 특허 출원 제09/911,777호; 제10/380,703호; 제10/045,574호; 및 제60/458,707호에 기재된 질환이 포함되나 이에 한정되지 않는다.

본 명세서에서 사용된 용어 "치료적" 및 이의 동족어는 일정 질환의 임상적 증상의 완화 또는 소정의 생물학적 효과의 발생을 말한다. 소정의 효과의 예에는 감소된 B 세포 과다증식; 감소된 자가항체 역가; 감소된 병원성 B 세포 집단; 감소된 심장 염증; 신장 기능의 개선 (예를 들어, 가압 여과, 선택적 재흡수, 세뇨관 분비 및 전신 혈압 조절), 신장 섬유증의 느린 진행, 감소된 신장 림프구의 침윤; 감소된 림프절병증 등이 포함된다. 당분야에 공지되고(되거나) 본 명세서에 기재된 방법을 이용하여 효과를 측정할 수 있다.

용어 "병원성 B 세포"는 질환 발병에 기여하는 자가항체를 생산하는 B 세포를 말한다.

본 발명은 부분적으로, 경미한 SLE 내지 심각한 전신 홍반성 루프스 (SLE)를 앓는 신염 SNF1 마우스에게 BAFFR-Fc를 단기 4-주 동안 투여하면 장기 (6월 이상)의 임상 효과가 나타난다는 놀라운 발견에 기초한 것이다. SNF1 마우스 내의 BAFFR-Fc의 짧은 순환 반감기 (3.7일) 때문에, 일단 BAFFR-Fc 투여가 중단되고 BAFFR-Fc가 혈류로부터 제거되면 B 세포 재구성이 약 8주 내에 일어날 것으로 예측된다. 본 발명을 유도하는 실험에서, B 세포 회복은 BAFFR-Fc의 투여 후에 일어난다. 그러나, 새로 등장한 B 세포는 실질적으로 비-병원성을 띠는 것으로 밝혀졌다. 또한, 본 발명은 SNF1 마우스에서의 BAFFR-Fc의 단기 투여의 임상 효과가 동일 모델에서 TACI-Fc와 비교할 때 훨씬 더 현저하고 오래 지속된다는 발견 및 입증에 기초한 것이다.

본 발명의 방법, 이 방법에서 사용되는 조성물, 및 본 발명의 다른 측면은 아래에 상세히 기재되어 있다.

방법

본 발명은 BAFF 길항제의 단기 투여 과정 후 다음 투여 회차 전의 연장된 비-치료 기간을 수반하는 치료 섭생법을 제공한다.

한 측면에서, 본 발명은 면역학적 질환 또는 관련 질환을 앓는 환자를 치료하는 치료 섭생법을 제공한다. 이 치료 섭생법은

(c) 단계 (a) 및 (b)를 1회 이상 반복하는 단계

를 포함하는데, 여기서 N은 8, 9, 10, 11, 또는 12이다.

추가 실시양태에서, 단계 (a)의 투여는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7주의 간격을 포함한다. 단계 (a)에서, BAFF 길항제는 예를 들어, 주 당 2, 3, 4, 5, 6 또는 7회, 매주마다, 2주마다, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12주 마다 투여될 수 있다. 단계 (a)의 투여 기간에서, 순차적인 투여 사이의 간격 및 투여량은 다를 수 있다. 예를 들면, 단계 (a)의 투여 기간에서, BAFF 길항제는 첫 주에 2회 투여될 수 있고, 3주 동안 중단되고, 1회 투여되고, 다음 5주 동안 중단된 후, 주 당 매일 투여된다. 다양한 실시양태에서, 투여는 단계 (b)에서와 같이 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48주 동안, 또는 50, 80, 110, 140, 180, 210, 260 또는 300주일 수 있으나 이에 한정되지 않는 장기간 동안 일시적으로 중단된다.

한 측면에서, 본 발명은 포유동물에서 면역학적 질환 또는 관련 질환, 특히 자가면역 질환을 치료하는 방법을 제공하고, 자가항체 역가 (예를 들어, 항-ssDNA, 항-Sm, 항-RNP 및 항-Ro와 같은 항-핵 항체)를 감소시키는 방법을 포함한다 (그러나, 이에 제한되지 않음).

또 다른 측면에서, 본 발명은 신장 섬유증을 치료하는 방법 및/또는 예를 들어, 가압 여과, 선택적 재흡수, 신장 기능, 세뇨관 분비 및 전신 혈압 조절과 같은 신장 기능을 개선시키는 방법도 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 심장 염증을 완화시키는 방법도 제공한다.

추가로, 본 발명은 면역 질환을 앓는 환자에서 병원성 B 세포 집단을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, B 세포의 병원성 집단은 IgM^-IgD⁺인 B 세포로 구성된다. B 세포 집단은 당분야에 공지되고(되거나) 실시예에 기재된 방법을 이용하여 예를 들어, CD45 (Kincade et al. (1981) J. Immunol., 127: 2262-2268) 또는 CD19 [예를 들어, 문헌 (Krop et al. (1996) Eur. J. Immunol., 26: 238-242)을 참조함]의 B220 이소형 및 각각의 이소타입 항-이뮤노글로불린 항체와 같은 통상적으로 사용되는 B 세포 마커에 대한 항체를 사용하여 측정할 수 있다.

본 발명의 조성물은 약학적으로 허용가능한 임의의 방식으로 투여될 수 있다. "투여"는 임의의 구체적 전달 시스템에 한정되지 않고 제한 없이 (피하, 정맥내, 골수내, 동맥내, 근육내 또는 복강내 주사를 비롯한) 비경구, 직장, 국소, 경피, 또는 경구 (예를 들어, 캡슐제, 현탁액제, 정제) 투여를 포함할 수 있다. 개체에의 투여는 단일 투여 또는 반복 투여 방식으로, 그리고 임의의 다양한 생리학적 허용 염의 형태로, 그리고(또는) 약학 조성물의 일부로서 허용가능한 약학적 담체 및/또는 첨가체와 함께 일어날 수 있다 (상술되어 있음). 생리학적으로 허용가능한 염 형태 및 표준 약학적 제형화 기술 및 부형제는 당업자에게 잘 공지되어 있다 [문헌 (Physicians' Desk Reference (PDR) 2003, 57th ed., Medical Economics Company, 2002; and Remington: The Science and Practice of Pharmacy, eds. Gennado etal., 20th ed, Lippincott, Williams & Wilkins, 2000)을 참조함].

개체에 대한 길항제의 투여는 유전자 요법에 의해 달성될 수도 있는데, 이 경우 상기 길항제를 코딩하는 핵산 서열을 환자에게 생체내 투여하거나, 시험관내에서 세포에 투여한 다음, 이 세포를 환자에게 도입하고, 상기 핵산에 의해 코딩된 생성물을 발현시켜 길항제 (예를 들어, 안티센스 RNA, 가용성 BAFF 수용체)를 생성한다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 방법을 이용하여 치료받는 환자는 경증, 중증 또는 중증의 질환을 앓는다. 다양한 실시양태에서, 환자는 면역학적 질환을 앓는 환자이고(이거나) 신부전이 발병될 위험이 증가되어 있는 환자이다. 상기 치료는 24-시간의 기간 당 1, 1.2, 1.5, 1.7, 2.0 g을 초과하는 단백뇨증 및/또는 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 mg/dl 또는 그 이상의 혈청 크레아티닌 농도를 가진 환자에게 특히 유용할 수 있다. 다른 증상에는 97, 90, 80, 70, 60 (남성) 및 88, 80, 70, 60 (여성) ㎖/분보다 낮은 크레아틴 클리어란스 수준, 20, 25, 30 mg/dl 또는 그 이상의 혈액 우레아, 및/또는 신장 영상 (예를 들어, MRI, 초음파) 또는 신장 생검에 의해 표시된 증상이 포함된다. 다른 증상에는 혈청 중의 항-핵 항체 (예를 들어, 항-ssDNA, 항-Sm,항-RNP, 및 항-Ro)의 비정상 역가, 또는 700, 1000, 1250, 1500, 2000 세포/㎕를 초과하는 비정상 말초 혈액 B 세포 (예를 들어, CD19+) 총수가 포함된다. 이들 파라미터를 평가하기 위한 시험은 실시예에 기재되거나 문헌 [Jacobs et al. (eds.) (2002) Laboratory test handbook: Concise with disease index (2nd ed.) Husson, OH, Lexi-Comp]에 기재된 바와 같이 당분야에 공지된 방법을 이용하여 수행할 수 있다.

본 발명의 방법은 예를 들어, B 세포 또는 T 세포와 같은 면역 세포의 비정상적 증식, 성숙, 생존, 분화 또는 기능이 있는 면역학적 질환을 앓는 환자를 치료하는 데 이용할 수도 있다. 본 발명의 방법은 혈장 세포 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 또는 급성 림프구성 백혈병과 같은 전구-B 세포 또는 B 세포 백혈병, 골수종 (예를 들어, 다발성 골수종, 혈장 세포 골수종, 내피 골수종, 및 거대 세포 골수종), 및 림프종 (예를 들어, 비-호치킨 림프종), 버키트 림프종, 비-버키트 림프종, 소포 림프종, 급성 림프모구백혈병, 거대 세포 림프종 (예를 들어, 면역모구림프종), 자장자리 구역 림프종, 외투막 세포 림프종, 소림프구 림프종, 기타 B 세포 림프종, 막성신병증과 같은 질환과 관련된 사구체신염, IgA 신병증 (버거병). IgM 신병증, 굿파스쳐 (Goodpasture) 질환, 감염후 사구체신염, 메산지오증식성 질환, 만성 림프성 백혈병, 및 미세변화 신염 증후군, 2차 사구체신염, 혈관염, 신우신염, 신장석회증, 신석증, 만성 또는 급성 간질 신염, 고혈압성 맥관 또는 대맥관 질환 (신장 동맥 협착증 또는 폐색 및 콜레스테롤 색전증 또는 신장 색전증을 포함함), 신장 또는 비뇨기 종양, 다발성 골수종, 림프종, 경쇄 신경병증, 아밀로이드증, 천식 및 기타 만성 기도 질환, 예를 들어, 기관지염 및 폐기종, 인슐린 의존성 당뇨병, 및 크론병의 치료에 유용할 수 있다. 본 발명의 방법은 이펙터 T 세포 반응을 억제하거나 중화시키는 데 이용할 수도 있고, 면역억제를 필요로 하는 증상, 예를 들어, 이식편-대-숙주 질환 및 이식 거부, 만성 염증성 질환을 치료하는 데 이용할 수 있고, 특히 관절통, 종창 및 폐혈 쇼크를 완화하는 데 이용할 수도 있다.

본 발명의 방법에서, 길항제는 활성 화합물 단독으로서 투여되거나, 다른 화합물 또는 조성물과 함께 투여된다. 달리 명시하지 않는 한, 투여되는 길항제의 양은 증상의 심각도 및 질환의 진행에 따라 대략 1 ㎍/kg 내지 250 mg/kg이다. 가장 일반적으로는, 항체 또는 이뮤노글로불린 융합 단백질은 느린 정맥내 (IV) 관주에 의해 약 0.1-10 mg/kg의 투여량으로 매주 투여됨으로써 외래 환자에게 투여된다. 길항제의 적절한 치료적 유효량은 치료하는 임상의에 의해 선택되고 대략 1 ㎍/kg 내지 100 mg/kg, 1 ㎍/kg 내지 50 mg/kg, 1 ㎍/kg 내지 20 mg/kg, 1 ㎍/kg 내지 10 mg/kg, 1 ㎍/kg 내지 1 mg/kg, 10 ㎍/kg 내지 1 mg/kg, 10 ㎍/kg 내지 100 ㎍/kg, 100 ㎍/kg 내지 1 mg/kg, 또는 500 ㎍/kg 내지 5 mg/kg이다. 별법으로, 실시예에 기재되거나 문헌 [Physicians' Desk Reference (PDR) 2003, 57th ed., Medical Economics Company, 2002]에서 유사한 약물에 대해 기재된 구체적인 투여량을 사용할 수 있다.

조성물

본 발명의 방법에서 사용되는 BAFF 길항제에는 BAFF에 대해 유도된 항체, 1종 이상의 BAFF 수용체의 1종 이상의 이소형에 대해 유도된 항체, 및 BAFF 수용체의 가용성 형태가 포함되나, 이에 한정되지 않는다.

BAFF 수용체에는 BAFFR, BCMA 및 TACI가 포함된다. 일부 실시양태에서, BAFF 길항제는 BAFF-특이적 길항제 (예를 들어, BAFFR)이지만, 다른 일부 실시양태에서, BAFF 길항제는 BAFF 이외의 TNF 과 리간드에도 결합할 수 있다 (예를 들어, APRIL에도 결합하는 BCMA 및 TACT). 일부 실시양태에서, BAFF 길항제는 BAFF가 그의 수용체에 결합하는 것을 방해하는 항체이다. BAFF에 대해 유도된 항체 및 BAFF 수용체에 대해 유도된 항체는 이미 기재되어 있다. 이러한 항체의 생성은 당업자에게 잘 공지되어 있다 [예를 들어, 문헌 (Antibody Engineering, ed. Borrebaeck, 2nd ed. , Oxford University Press, 1995)을 참조함]. 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 항체의 예에는 PCT 공개 WO99/12964 및 미국 특허 출원 제09/911,777호에 기재된 것, 및 항-BAFF 항체 림포스타트-B^(상표명) (Human Genome Sciences, Rockville, MD)가 포함된다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 항체는 BAFF 또는 BAFFR 이외에, BAFF 또는 BAFFR 각각과 실질적으로 동일한 또 다른 단백질에 특이적으로 결합할 수 있다. 추가 실시양태에서, 항체는 BCMA 및/또는 TACI에 대해 유도된다. 임의의 척추동물 종으로부터 유래된 비-인간 항체의 인간화된 형태 및 유도체도 인간에 사용하기 위한 것으로서 고려된다

본 발명의 방법에서 사용하기 위한 항체의 다른 예에는 하이브리도마 클론 #2.1 (ATCC 번호 PTA-3689로서 기탁됨) 또는 클론 #9.1 (ATCC 번호 PTA-3688으로서 기탁됨)에 의해 생산된 마우스 모노클로날 항체, 또는 이의 완전한 인간 유도체가 포함된다.

BAFF 수용체 융합 단백질의 가용성 형태는 BAFFR의 BAFF-결합 도메인, BCMA 및/또는 TACI를 포함할 수 있다. BAFF-결합 도메인은 세포외 도메인 (ECD), 즉 단백질을 발현하는 세포의 외부에 정상적으로 존재하는 단백질의 일부 내에 위치한다. 일부 실시양태에서, 가용성 BAFFR은 서열 CHWDLLRHWVC (서열 번호 5) (Kayagaki et al. (2002) Immunity, 10: 515-524), 또는 이 서열을 포함하는 폴리펩티드를 가진 이황화-결합 펩티드이다. 또 다른 실시양태에서, 가용성 BAFFR은 서열 번호 1의 아미노산 27 내지 32 또는 18 내지 43을 포함하는 폴리펩티드이다.

일부 실시양태에서, BAFF 수용체의 가용성 형태는 BAFFR-Fc에서와 같이 이뮤노글로불린의 불변 영역에 융합된 BAFF 수용체의 BAFF-결합 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, BAFFR-Ig는 Ig의 Fc 부위에 융합된 서열 번호 1의 잔기 3 내지 73을 포함한다. 예시적 실시양태에서, BAFFR-Fc는 서열 번호 2 (인간) 또는 서열 번호 4 (뮤린)을 포함한다. 일부 실시양태에서, BAFFR은 서열 번호 1의 아미노산 51부터 시작하는 C-말단 결실을 가진 인간 BAFFR이고, 상기 결실은 변화된 O-결합 글리코실화 패턴 (예를 들어, 미국 특허 출원 제60/458,707호에 기재된 △BAFFR)을 초래한다. 몇몇 실시양태에서, 가용성 BAFFR은 적어도 서열 번호 6의 서열 (서열 번호 1의 아미노산 51-57에 상응함)을 결여하고 있는 △BAFFR을 포함한다.

BAFFR의 BAFF-결합 도메인은 서열 번호 1의 아미노산 8 내지 아미노산 50, 아미노산 13 내지 아미노산 50, 아미노산 13 내지 아미노산 43, 또는 아미노산 18 내지 아미노산 43을 포함한다. 일부 실시양태에서, BAFF-결합 도메인은 하기 서열이 BAFF에 결합하는 능력을 보유하는 한 절단되거나 돌연변이된 서열을 비롯하여 서열 번호 1의 아미노산 2 내지 아미노산 63 또는 서열 번호 3의 아미노산 2 내지 아미노산 62와 동일하거나 실질적으로 동일하다. 예시적 실시양태에서, BAFFR은 서열 번호 3의 아미노산 2 내지 아미노산 66에 기재된 뮤린 서열이다. 다른 실시양태에서, BAFFR은 서열 번호 1의 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50개의 인접 아미노산을 포함한다.

일부 실시양태에서, 이뮤노글로불린의 불변 영역은 힌지 영역과 함께 또는 힌지 영역 없이 CH1, CH2 또는 CH3 불변 영역 중 어느 하나, 또는 Fc 부위 (CH2 또는 CH3를 포함함) 전부를 포함한다. 구체적인 실시양태에서, 제2 아미노산 서열은 IgG의 Fc 부위로부터 유래된다. 관련 실시양태에서, Fc 부위는 IgG1, IgG4 또는 또 다른 IgG 이소형으로부터 유래된다. 예시적인 실시양태에서, 이뮤노글로불린의 불변 영역은 서열 번호 3의 아미노산 95 내지 아미노산 321 또는 서열 번호 4의 아미노산 88 내지 아미노산 316의 서열을 포함한다. 제2 아미노산 서열은 인간 IgG1의 Fc 부위를 포함할 수 있고, 여기서 Fc는 이펙터 기능을 최소화하도록 변형된다. 이러한 변형에는 Fc 수용체 결합과 같은 이펙터 기능을 변화시킬 수 있는 특정한 아미노산 잔기를 변화시키는 것 (Lund et al. (1991) J. Immun., 147: 2657-2662 and Morgan et al. (1995) Immunology, 86:319-324), 또는 불변 영역이 유래된 종을 변화시키는 것이 포함된다. 이뮤노글로불린은 중쇄의 CH2 영역에서 이펙터 기능, 즉 Fc 수용체 결합 및 보체 활성화를 감소시키는 돌연변이를 가질 수 있다. 예를 들어, 이뮤노글로불린은 미국 특허 제5,624,821호 및 제5,648,260호에 기재된 것과 같은 돌연변이를 가질 수 있다. 예를 들면, IgG1 또는 IgG2 중쇄에 있어서 이러한 돌연변이를 IgG1 또는 IgG2의 전장 서열에서의 아미노산 234 및 237에 해당하는 아미노산 잔기에서 만들어질 수 있다. 항체 및 이뮤노글로불린-수용체 융합 단백질은 이뮤노글로불린의 두 개 중쇄 사이의 이황화 결합을 안정화시키는 돌연변이, 예를 들어, 문헌 [Angal et al. (1993) Mol. Immunol., 30:105-108]에 개시된 바와 같은 IgG4의 힌지 영역에서의 돌연변이를 가질 수도 있다.

특정 실시양태에서, BAFF-결합 도메인은 링커 서열과 함께 또는 링커 서열 없이 C-말단 또는 N-말단에 융합되거나, 이뮤노글로불린의 불변 영역의 C-말단 또는 N-말단에 융합된다. 링커의 정확한 길이 및 서열과, 연결된 서열에 대한 이의 배향은 다양할 수 있다. 예를 들어, 링커는 하나 이상의 Gly-Ser을 포함할 수 있다. 링커의 길이는 2개, 10개, 20개, 30개 또는 그 이상의 개수의 아미노산일 수 있고, 용해도, 길이 및 입체 분리, 면역원성 등과 같은 소정의 특성을 기초로 하여 선택된다. 당업자는 임의의 단백질 서열 중 특정 아미노산이 단백질의 활성에 악영향을 주지 않으면서 다른 아미노산으로 치환될 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, BAFF 수용체의 생물학적 활성 또는 용도의 뚜렷한 손실이 없는 한 본 발명의 BAFF 수용체의 아미노산 서열 또는 상기 수용체를 코딩하는 DNA 서열에서 다양한 변이가 만들어질 수 있다는 것이 예측된다.

BAFF 수용체의 유도체 및 동족체의 용도 또한 본 발명의 범위 내에 있다. 상기 유도체 또는 동족체는 기능적 활성, 즉 야생형 BAFFR의 리간드-결합 도메인과 관련된 1종 이상의 활성을 나타낼 수 있어야 한다. 이러한 결합 능력을 보유하거나 BAFF의 생물학적 활성을 억제하는 유도체 또는 동족체는 당분야에 공지된 방법 및/또는 실시예에 기재된 방법으로 제조되어 시험될 수 있다. 상기 유도체 및 동족체의 제조 방법에는 재조합 및 합성 방법이 포함된다 [예를 들어, 문헌 (Maniatis (1990) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, and Bodansky et al. (1995) The Practice of Peptide Synthesis, 2nd ed., Spring Verlag, Berlin, Germany)를 참조함].

하기 실시예는 본 발명의 예시적 실시양태를 제공한다. 대표적인 절차를 마우스에서 수행하였지만, 당업자는 이 절차가 인간 환자에서 임상적으로 실행될 수 있는 파라미터 내에서 성공적으로 수행할 수 있음을 인식할 것이다. 당업자는 본 발명의 기술사상 또는 범위를 변화시키지 않으면서 수행될 수 있는 다수의 변형 및 변이를 인식할 것이다. 이러한 변형 및 변이는 본 발명의 범위 내에 포함된다. 실시예는 본 발명을 어떠한 방식으로든지 제한하지 않는다.

실시예

하기 실시예에 기재된 대표적인 절차 및 실험에 사용된 재료 및 방법은 하기와 같다.

마우스

암컷 (SWR x NZB) F1(SNF1) 마우스를 예를 들어, 문헌 [Gavalchin et al. (1987) J. Immunol., 138: 138-148; Datta et al. 1989 Clin. Immunol. Immunopathol., 51: 141-56]에 이미 기재된 바와 같이 번식시키고 유지시켰다.

단백질 시약

뮤린 Ig-k 유전자로부터 유래된 신호 서열을 보유하는 Not1 + Aat2 단편, 뮤린 뮤린 BAFFR (엑세스 번호 AF373847)의 아미노산 2 내지 아미노산 66을 코딩하는 서열을 보유하는 Aat2 + Sal1 단편, 및 뮤린 IgG1의 아미노산 226 내지 아미노산 478 (카바트 넘버링 시스템)을 코딩하는 서열을 보유하는 Sal+Not1 단편을 CH269으로 불리는, pCEP4 (Invitrogen, Carlsbad, CA)의 변형 버젼 (EBNA-1 유전자를 보유하지 않음)의 Not1 부위 내에 라이게이션시켜 BAFFR-mulgGl (BAFFR-Fc)을 보유하는 발현 벡터를 작제하였다. 제조자의 프로토콜 (Invitrogen)에 따라 리포펙타민(상표명)을 사용하여 상기 벡터를 EBNA-1 유전자가 함유된 293 세포 내로 형질감염시켰다. 이 형질감염된 세포를 10% 태아 소 혈청 (FCS), 2 mM 글루타민, 100 U/㎖의 페니실린, 100 ㎍/㎖의 스트렙토마이신 및 250 ㎍/㎖의 G418로 보충된 둘베코스 변형 이글스 배지 [Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM)]에서 유지시켰다. 여러 주 동안 4-7주마다 배지를 회수하였다. 조절된 배지를 염 농도 및 pH가 높은 완충제 (1.5 M 글리신 pH 8.9, 3 M NaCl) 3배 부피로 희석하여 단백질 A에 대한 mBAFFR-mIgG의 친화력을 증가시켰다. BAFFR-Fc 단백질은 친화 크로마토그래피 (단백질 A) 후 크기 배제 크로마토그래피로 정제하였다. MOPC21 하이브리도마에 의해 생산된 마우스 IgG1 (mIgG1)을 유사한 방식으로 정제하여 음성 대조구로 사용하였다.

처리 프로토콜

신염이 확립된 (30-100 mg/dL의 단백뇨) 23주 연령의 암컷 SNF1 마우스 20마리를 군 당 10마리 마우스로 구성된 2개의 군으로 나누었다. 4주 동안 계속하여 주 당 2회씩 마우스 BAFFR-Fc 200 ㎍을 한 군에게 제공하고 mIgG1 200 ㎍을 다른 군에게 제공한 후, 질환의 진행을 모니터링하였다. 죽어가는 마우스를 안락사시키고, 분석을 위한 조직 및 혈액 샘플을 채취한 후 희생시켰다. 혈액은 자가항체 측정용 혈청을 얻기 위해 일정한 간격을 두고 후방-안와 누 (retro-orbital sinus)를 통해서도 채취하였다. 연구 말기에, 신장, 심장 및 장간막 림프절 (MLN)을 10%의 중성 완충 식염수 중에 넣고 조직 분석을 위해 파라핀 블록 내로 포매하였다. 비장을 채취하여 유세포분류 (flow cytometry)에 사용하였다.

유세포 분류

기계적 파괴를 이용하여 비장단핵구로 구성된 단일 세포 현탁액을 얻었다. 적혈구를 염화암모늄 용액 중에서 용해시킨 후 세포를 3회 세정하고, 100-마이크론 필터를 통해 여과하고, 혈구계를 이용하여 세포 수를 세었다. 문헌 [Thompson et al. (2001) Science, 293: 2108-2111]에 기재된 바와 같이, 비장단핵구를 형광크롬이 컨쥬게이팅된 항-B220 mAb로 염색하여 B 림프구를 검출하였다.

조직학

B 세포에 대한 항-B220 mAb 및 T 세포에 대한 래트 항-CD3 mAb를 사용한 후 바이오티닐화 토끼 항-래트 및 아비딘-바이오틴-HRP 용액을 사용하여 림프구 침윤에 대해 파라핀-포매 장간막 림프절 (MLN) 및 신장 절편을 평가하고, 기질 DAB (Vector Laboratories, Burlingame, CA)를 사용하여 가시화하였다. 마송 삼색 염색 (Mason's trichrome stain) 및 바이오틴-표지 항-평활근 액틴으로 신장을 염색한 후 스트렙타비딘-HRP와 함께 인큐베이션하고, DAB 기질로 가시화하였다. 슬라이드를 마이어 헤마톡실린 (Mayer's hematoxylin)으로 대비염색하였다. H & E - 염색 심장 조직을 검사하여 심장 염증을 평가하였다.

신장 및 심장 질환의 평가

알부스틱스 (Albustix^TM) (Bayer Corp. , Research Triangle Park, NC)를 사용하여 매주 각 마우스의 소변을 모니터링하여 단백뇨를 측정하였다. H & E - 염색 신장 절편을 조직 검사에 사용하여, 사구체 세포과다, 확장, 코누스 (crescent), 혈관사이 비대, 루프, 섬유소성 괴사 및 유리질; 간질 경화증, 침윤물 및 혈관염; 및 세관 혈관염, 위축증 및 캐스트에 대해 평가하였다. 심장 조직을 혈관 및 심장 염증, 및 심장 액포형성에 대해 검사하였다. 조사되는 구조의 수반율 (%)을 기준으로 0-4+ 등급을 매겼는데, 여기서 0은 0% 수반율이고 4+는 100% 수율이다.

ELISA

혈청 항-ssDNA 항체를 검출하는 데 사용된 ELISA 분석을 문헌 [Kalled et al. (1998) J.immune)., 160: 2158-2165]에 기재된 바와 같이 수행하였다.

실시예 1: 생존율을 증가시키는 BAFFR - Fc 의 단기 투여

표 1에 기재된 바와 같이, BAFFR-Fc의 단기 치료는 mIgG 대조구-처리 마우스와 비교할 때 생존율을 현저히 상승시켰다. 49주 연령에서, 모든 BAFFR-Fc-처리 마우스는 생존한 반면, 30%의 대조구 마우스만이 생존하였다.

연령 (주)	생존율
	처리
	BAFFR-Fc	mIgG
23	100	100
29	100	100
30	100	90
31	100	90
32	100	80
33	100	70
34	100	30
49	100	30

실시예 2: 신염의 진행을 감소시키는 BAFFR - Fc 의 단기 투여

일정한 간격을 두고 단백뇨 측정을 함으로써 신장 기능을 평가하였다. 표 2에 기재된 바와 같이, 중증 신염 (300 ㎎/dL 이상의 단백뇨)으로의 질환의 진행은 mIgG-처리 대조구 마우스와 비교할 때 BAFFR-Fc-처리 마우스에서 상당히 감소되었다. 49주 연령에서, 모든 대조구 마우스는 중증 신염을 발병시킨 반면, 이 연령에서 중증 신염을 앓는 BAFFR-Fc-처리 동물은 전혀 없었다. 별개의 실험에서, 4주 동안 주 당 2회씩 200 ㎍의 인간 IgG 또는 인간 TACI-Fc (BAFF 및 APRIL 둘 다에 결합하는 수용체-Fc 융합 단백질)을 SNF1 마우스에 처리하였다. TACI-Fc 투여가 초기에 중증 신염의 발병을 다소 감소시켰을지라도, 결국 모든 TACI-Fc-처리 마우스가 대조구와 유사하게 중증 신염을 발병시켰다 (표 2).

연령 (주)	중증 신염의 발병률 (%)
	처리
	BAFFR-Fc	mIgG	인간 TACI-Fc	인간 IgG
23	0	0	0	0
27	0	30	34	60
30	0	70	60	80
36	0	90	100	100
49	0	100	100	100

조직학적 방법으로 신장 질환을 더 평가하였다. 재료 및 방법 단락에 기재된 개별 질환 파라미터의 스코어를 합하여 신장 질환에 대해 H & E 염색 신장 절편을 평가하였다. 표 3에 기재된 바와 같이, BAFFR-Fc-처리 마우스는 mIgG-처리 또는 비처리 대조구와 비교할 때 누적 질환 스코어를 현저하게 감소시켰고, BAFFR-Fc-처리 마우스의 스코어는 질환 발병 전에 어린 SNF1 마우스의 스코어에 더 가까웠다.

연령	누적 신장 질환 스코어 (평균 ± SD)
연령	BAFFR-Fc	비-처리	mIgG
9 49-51	6.3±2.5 (n=10)	1±0 (n=3)¹ 24.3±8.6 (n=4)	23.9±8.6 (n=7)

¹n은 분석에 사용된 마우스의 수를 나타낸다.

SLE-신염에서, 신장 섬유증이 종종 발생하고, 섬유아세포 및 장간막 세포에 의한 세포외 매트릭스 (ECM) 단백질, 평활근 액틴 (ASMA) 및 콜라겐의 분비에 의해 매개될 수 있다. 신장에서의 감소된 ASMA (표 4) 및 콜라겐 (표 5) 축적에 의해 관찰된 바와 같이, ECM 생성은 비-처리 SNF1 마우스 및 mIgG-처리 SNF1 마우스와 비교할 때 BAFFR-Fc로 처리된 마우스에서 현저하게 감소되었다 (p < 0.05, 스튜던트 t 검정). 9-주된 어린 SNF1 마우스를 질환-전 대조구로서 사용하였다.

연령 (주)	콜라겐 축적을 나타내는 사구체 (%)¹ (평균±SD)
연령 (주)	BAFFR-Fc	비-처리	mIgG
9 49-51	3.3 ± 8.8 (n=10)	0 (n=3) 48.2 ± 36.2 (n=4)	68.8 ± 33.2 (n=7)

¹ 각 마우스에 대해 70-111개의 사구체를 검사하였다.

연령 (주)	ASMA 생성을 나타내는 사구체 (%)¹ (평균±SD)
연령 (주)	BAFFR-Fc	비-처리	mIgG
9 49-51	8.5 ± 10.9 (n=10)	0 (n=3) 57.5 ± 29.5 (n=4)	68.5 ± 32.1 (n=7)

¹ 각 마우스에 대해 70-111개의 사구체를 검사하였다.

건강한 신장은 림프구 다발을 보유하지 않는다. 그러나, SLE-신염의 모델에서 수반되는 질환뿐만 아니라, 인간 질환에서는 B 및 T 세포를 비롯한 백혈구가 신장 내로 침윤하여 소낭 모양과 유사한 구조를 형성한다. 그러므로, T 세포 및 B 세포 침윤물의 존재에 대해 신장 절편을 검사하였다. 비-처리 마우스 (도 1B) 및 mIgG-처리 마우스 (도 1D)에서, 2차 림프 조직의 백색 속질 영역과 유사한 T 세포 및 B 세포 침윤물로 된 큰 영역이 신장 전체에서 관찰되었다. 반대로, 단기 BAFFR-Fc 치료를 제공받은 마우스의 신장에서 (도 1C), B 세포뿐만 아니라 T 세포의 침윤이 현저하게 감소되었다 (도 1). 9주 된 건강한 (질환-전) SNF1 마우스에서는 B 또는 T 세포가 거의 관찰되지 않았거나 전혀 관찰되지 않았다 (도 1A).

실시예 3: 심장 염증을 억제하는 BAFFR - Fc 의 단기 투여

혈관 및 심장 염증, 및 심장 액포형성에 대해 H & E - 염색 파라핀 심장 절편을 검사하였다. 표 6에 기재된 바와 같이, BAFFR-Fc를 제공받은 SNF1 마우스는 mIgG-처리 마우스 및 비-처리 대조구 마우스와 비교할 때 전체적으로 현저히 감소된 심장 스코어를 나타내었다.

연령 (주)	심장 스코어 (평균±SD)
연령 (주)	BAFFR-Fc	비-처리	mIgG
9 49-51	1.2 ± 0.4 (n=10)	0 (n=3)¹ 2.5 ± 1.1 (n=4)	4.7 ± 1.9 (n=3)

¹n은 분석에 사용된 마우스의 수를 나타낸다.

실시예 4: B 세포 과다증식을 방해하는 BAFFR - Fc 의 단기 투여

4주 동안 계속하여 주 당 1회씩 BAFFR-Fc 100 ㎍을 사용하여 정상 BALB/c 마우스에서의 BAFF 억제 연구를 기초로 할 때, 말초 B 세포 수는 BAFFR-Fc의 마지막 투여 후 약 9주 내에 완전히 회복되는 것으로 알려져 있다 (데이타는 기재되지 않음). SNF1 마우스에서의 비장 B 세포의 수는 BAFFR-Fc 또는 mIgG의 마지막 투여 후 26-28주에서 측정하였다. 표 7에 기재된 바와 같이, 단기의 BAFFR-Fc 치료를 받은 SNF1 마우스에서는 비-처리 대조구 마우스 또는 mIgG-처리 대조구 마우스보다 비장 B 세포 수가 현저히 감소되었다 (p < 0.05, 스튜던츠 검정). 시간의 경과에 따라, 대조구 마우스는 심각한 비장 B 세포 과다증식을 발생시켰다. 반대로, BAFFR-Fc-처리 마우스는 장기의 효과를 나타내었는데, 연구의 말기에 비장 B 세포 총수는 9주 된 SNF1 질환-전 마우스의 총수와 B 세포가 증식되기 시작한 20주 된 SNF1 마우스의 총수 사이였다.

연령 (주)	비장 B 세포의 수 (x10⁶)
연령 (주)	BAFFR-Fc	비-처리	mlgG
9 20 49-51	77.4±41.7 (n=10)	34.3±9 (n=3) 123 (n=1) 197.4±62 (n=4)	141±70.6 (n=3)

또한, MLN에서의 B 세포 및 T 세포 조직화의 면역조직화학적 분석은 비-처리 마우스 (도 2B) 및 mIgG-처리 마우스 (도 2D)에서는 림프절병증을 야기하는 과도한 B 세포 증식이 있음을 입증하였다. 반대로, BAFFR-Fc-처리 마우스는 B 세포 과다증식을 나타내지 않았고 (도 2C) 질환 발병 전의 어린 SNF1 마우스와 유사하게 보였다 (도 2A)

실시예 5: 자가항체 생성의 증가를 억제하는 BAFFR - Fc 의 단기 투여

일정한 간격을 두고, ELISA 포맷을 이용하여 순환하는 항-ssDNA 항체에 대해 SNF1 마우스로부터 얻은 혈청을 분석하였다. 치료 개시시점부터 37주 연령까지 시간의 경과에 따라 항-ssDNA 농도의 변화를 조사하였을 때, mIgG-처리 마우스에서는 항-ssDNA 농도의 현저한 변화 (증가)가 있으나 [스튜던트-뉴만-컬스 (Student-Newman-Keul)방법], BAFFR-Fc를 제공받은 마우스에서는 자가항체 농도의 현저한 변화가 전혀 없다 (표 8). 이는 BAFFR-Fc를 사용한 BAFF의 방해가 자가항체 생성을 억제하고, 이것은 BAFFR-Fc-처리 마우스에서 감소된 발병에 기여할 수 있다. 주목할만한 것으로서, BAFFR-Fc의 마지막 투여량이 투여된 후 대조구 10주 (37주 연령)에 비하여 자가항체 농도가 감소된 상태로 유지되었다.

연령 (주)	항-ssDNA (㎍/㎖)
	처리
	BAFFR-Fc (n=10)	mIgG (n=10)
23 29 37	0.1¹ 0.4 0.7	0.15 1.1 24.3

¹ 값은 기하 평균을 반영한다.

실시예 6: IgM ^- IgD ⁺ B 세포의 비율을 감소시키는 BAFFR - Fc 의 단기 투여

연구 말기에, B220⁺ B 세포에 대한 염색을 기초로 할 때 BAFFR-Fc-처리 마우스와 mIgG-처리 마우스는 혈액 중의 총 B 세포 비율이 유사하였다. 그러나, 특정한 B 세포 서브세트를 조사하였을 때, BAFFR-Fc-처리 마우스는 IgM^-IgD⁺ B 세포의 비율에서 통계학적으로 유의한 감소 (p < 0.01, 스튜던츠 t 검정)를 나타내었다 (표 9). BAFFR-Fc-처리 마우스에서 말초 B 세포의 일반적인 재구성, IgM^-IgD⁺ B 세포에서의 선택적인 현저한 감소 및 장기 효능은 BAFFR-Fc가 아마도 병원성을 나타낼 상기 B 세포에서 장기 감소를 일으킨다는 것을 암시한다.

	혈액 B 세포 (%) (평균±SD)
	BAFFR-Fc¹	mIgG¹
IgM^-IgD⁺ B 세포	8.7±5.0	44.9±7.3
총 B220⁺ B 세포	47.3±9.3	49.6±8.6

¹ 마우스는 분석시 49-51주 된 것이었다.

본 명세서는 이 명세서에서 인용된 참조문헌의 기술에 비추어 가장 철저히 이해된다. 본 명세서 내의 실시양태는 본 발명의 실시양태의 설명을 제공하는 것이지 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 간주되서는 안된다. 당업자는 많은 다른 실시양태가 본 발명에 포함된다는 것을 용이하게 인식할 것이다. 본 명세서에서 인용된 모든 공개문헌 및 특허와 서열은 이 인용으로써 그 전체가 본 명세서에 포함되는 것으로 한다. 인용에 의해 포함된 재료가 어느 정도 본 명세서와 모순되거나 불일치하더라도, 본 명세서는 임의의 상기 재료를 대신할 것이다. 본 명세서 내의 임의의 참고문헌의 인용은 이러한 참고문헌이 본 발명에 대해 선행한다는 것을 인정하는 것이 아니다.

달리 명시하지 않은 한 하기 사항이 적용된다: 성분의 양을 표시하는 모든 숫자, 세포 배양, 처리 조건, 및 특허청구범위를 포함한 본 명세서에서 사용된 기타 등등은 모든 경우에서 용어 "약"에 의해 변화될 수 있는 것으로서 이해해야 하고; 일련의 요소 전에 기재된 용어 "적어도"는 모든 요소를 일렬로 언급하는 것으로 이해해야 한다. 당업자는 단지 통상의 실험을 이용하여 본 명세서에 기재된 발명의 특정 실시양태와 등가의 많은 실시양태를 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가의 실시양태는 하기 특허청구범위에 포함되는 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> Biogen Idec MA Inc. Kalled, Susan Rao, Sambasiva <120> Therapeutic regimens for BAFF antagonists <130> 08201.0042-00304 <150> 60/512,880 <151> 2003-10-20 <160> 6 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 186 <212> PRT <213> Human <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> None, or any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Methionine, none, or any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> valine (wild type), asparagine, or another amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28)..(28) <223> lysine (wild type), proline, or another amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(47) <223> None, any amino acid, or alanine <400> 1 Xaa Xaa Arg Arg Gly Pro Arg Ser Leu Arg Gly Arg Asp Ala Pro Ala 1 5 10 15 Pro Thr Pro Cys Xaa Pro Ala Glu Cys Phe Asp Xaa Leu Val Arg His 20 25 30 Cys Val Ala Cys Gly Leu Leu Arg Thr Pro Arg Pro Lys Pro Xaa Ala 35 40 45 Gly Ala Ser Ser Pro Ala Pro Arg Thr Ala Leu Gln Pro Gln Glu Ser 50 55 60 Val Gly Ala Gly Ala Gly Glu Ala Ala Leu Pro Leu Pro Gly Leu Leu 65 70 75 80 Phe Gly Ala Pro Ala Leu Leu Gly Leu Ala Leu Val Leu Ala Leu Val 85 90 95 Leu Val Gly Leu Val Ser Trp Arg Arg Arg Gln Arg Arg Leu Arg Gly 100 105 110 Ala Ser Ser Ala Glu Ala Pro Asp Gly Asp Lys Asp Ala Pro Glu Pro 115 120 125 Leu Asp Lys Val Ile Ile Leu Ser Pro Gly Ile Ser Asp Ala Thr Ala 130 135 140 Pro Ala Trp Pro Pro Pro Gly Glu Asp Pro Gly Thr Thr Pro Pro Gly 145 150 155 160 His Ser Val Pro Val Pro Ala Thr Glu Leu Gly Ser Thr Glu Leu Val 165 170 175 Thr Thr Lys Thr Ala Gly Pro Glu Gln Gln 180 185 <210> 2 <211> 321 <212> PRT <213> Human <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> Valine, aspragine, or another amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> Lysine (wild type), proline, or another amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (67)..(67) <223> none, any amino acid, or alanine <400> 2 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Asp Val Arg Arg Gly Pro Arg Ser Leu Arg Gly Arg 20 25 30 Asp Ala Pro Ala Pro Thr Pro Cys Xaa Pro Ala Glu Cys Phe Asp Xaa 35 40 45 Leu Val Arg His Cys Val Ala Cys Gly Leu Leu Arg Thr Pro Arg Pro 50 55 60 Lys Pro Xaa Ala Gly Ala Ser Ser Pro Ala Pro Arg Thr Ala Leu Gln 65 70 75 80 Pro Gln Glu Ser Val Gly Ala Gly Ala Gly Glu Ala Ala Val Asp Lys 85 90 95 Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 100 105 110 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 115 120 125 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 130 135 140 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 145 150 155 160 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 165 170 175 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 180 185 190 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 195 200 205 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 210 215 220 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 225 230 235 240 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 245 250 255 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 260 265 270 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 275 280 285 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 290 295 300 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 305 310 315 320 Lys <210> 3 <211> 175 <212> PRT <213> murine <400> 3 Met Gly Ala Arg Arg Leu Arg Val Arg Ser Gln Arg Ser Arg Asp Ser 1 5 10 15 Ser Val Pro Thr Gln Cys Asn Gln Thr Glu Cys Phe Asp Pro Leu Val 20 25 30 Arg Asn Cys Val Ser Cys Glu Leu Phe His Thr Pro Asp Thr Gly His 35 40 45 Thr Ser Ser Leu Glu Pro Gly Thr Ala Leu Gln Pro Gln Glu Gly Ser 50 55 60 Ala Leu Arg Pro Asp Val Ala Leu Leu Val Gly Ala Pro Ala Leu Leu 65 70 75 80 Gly Leu Ile Leu Ala Leu Thr Leu Val Gly Leu Val Ser Leu Val Ser 85 90 95 Trp Arg Trp Arg Gln Gln Leu Arg Thr Ala Ser Pro Asp Thr Ser Glu 100 105 110 Gly Val Gln Gln Glu Ser Leu Glu Asn Val Phe Val Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Thr Pro His Ala Ser Ala Pro Thr Trp Pro Pro Leu Lys Glu Asp Ala 130 135 140 Asp Ser Ala Leu Pro Arg His Ser Val Pro Val Pro Ala Thr Glu Leu 145 150 155 160 Gly Ser Thr Glu Leu Val Thr Thr Lys Thr Ala Gly Pro Glu Gln 165 170 175 <210> 4 <211> 316 <212> PRT <213> Murine <400> 4 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Asp Val Gly Ala Arg Arg Leu Arg Val Arg Ser Gln 20 25 30 Arg Ser Arg Asp Ser Ser Val Pro Thr Gln Cys Asn Gln Thr Glu Cys 35 40 45 Phe Asp Pro Leu Val Arg Asn Cys Val Ser Cys Glu Leu Phe His Thr 50 55 60 Pro Asp Thr Gly His Thr Ser Ser Leu Glu Pro Gly Thr Ala Leu Gln 65 70 75 80 Pro Gln Glu Gly Ser Ala Leu Val Asp Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys 85 90 95 Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe 100 105 110 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val 115 120 125 Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe 130 135 140 Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro 145 150 155 160 Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro 165 170 175 Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val 180 185 190 Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr 195 200 205 Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys 210 215 220 Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp 225 230 235 240 Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro 245 250 255 Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser 260 265 270 Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala 275 280 285 Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His 290 295 300 His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 305 310 315 <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Peptide <400> 5 Cys His Trp Asp Leu Leu Arg His Trp Val Cys 1 5 10 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> human <400> 6 Ser Ser Pro Ala Pro Arg Thr 1 5

Claims

(a) 치료적 유효량의 BAFF (TNF 과에 속하는 B 세포 활성화 인자) 길항제를 1회 이상 또는 N 주 미만의 1 이상의 간격으로 면역학적 질환을 앓는 환자에게 투여하는 단계;

(b) 단계 (a)의 투여를 N 주 이상 동안 일시적으로 중단하는 단계; 및

(c) 단계 (a) 및 (b)를 1회 이상 반복하는 단계

를 포함하는, 상기 면역학적 질환을 앓는 환자를 치료하는 방법 (여기서, N은 8, 9, 10, 11 또는 12임).
제1항에 있어서, 단계 (a)의 투여는 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주 또는 7주의 간격을 포함하는 것인 방법.
제1항에 있어서, BAFF 길항제는 단계 (a)에서 주 당 2회, 3회, 4회, 5회, 6회 또는 7회 투여하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 투여는 단계 (b)에서 12주, 18주, 24주, 30주, 36주, 42주, 또는 48주 이상의 기간 동안 중단하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 치료 개시시에 환자는

(i) 24-시간 이상의 기간 당 1 g의 단백뇨;

(ii) 약 1 ㎎/dl 이상의 혈청 크레아티닌 농도;

(iii) 97 ㎖/분 이하의 크레아티닌 클리어란스 (clearance) 수준;

(iv) 20 ㎎/dl 이상의 혈중 우레아;

(v) 혈청 중의 자가항체의 비정상적 역가 (titer); 및

(vi) 700 세포/㎕의 말초 혈액 B 세포 수

중 1 이상을 갖는 것인 방법.
제5항에 있어서, 환자는 인간인 것인 방법.
제1항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 자가항체 역가를 억제하기에 충분한 것인 방법.
제1항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 B 세포 과다증식을 감소시키기에 충분한 것인 방법.
제1항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 심장 염증을 감소시키기에 충분한 것인 방법.
제1항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 신장 기능을 개선시키기에 충분한 것인 방법.
제10항에 있어서, 신장 기능은 가압 여과, 선택적 재흡수, 세뇨관 분비 및 전신 혈압 조절 중 1 이상인 것인 방법.
제1항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 신장 섬유증의 진행을 감소시키기에 충분한 것인 방법.
제1항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 신장에서 림프구 침윤을 감소시키기에 충분한 것인 방법.
제1항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 림프절병증을 감소시키기에 충분한 것인 방법.
제1항에 있어서, 면역학적 질환은 자가면역 질환인 것인 방법.
제15항에 있어서, 자가면역 질환은 전신 홍반성 루프스인 것인 방법.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 약제는 림포스타트-B⁽ ^TM ⁾ (LymphoStat-B^TM)인 것인 방법.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, BAFF 길항제는 BAFF-특이적 길항제인 것인 방법.
제18항에 있어서, BAFF 길항제는 가용성 BAFF 수용체, 항-BAFF 항체 및 항-BAFFR 항체로 구성된 군으로부터 선택된 것인 방법.
제19항에 있어서, BAFF 수용체는 BAFFR, BCMA (B 세포 성숙화 항원) 및 TACI (막횡단 (transmembrane) 활성화제 및 시클로필린 리간드 인터렉터)로 구성된 군으로부터 선택된 것인 방법.
제20항에 있어서, 가용성 BAFFR은 서열 번호 5의 펩티드를 포함하는 것인 방법.
제19항에 있어서, 가용성 BAFF 수용체는 BAFFR의 BAFF-결합 도메인을 포함하는 것인 방법.
제20항에 있어서, 가용성 BAFFR은 인간의 것인 방법.
제20항에 있어서, 가용성 BAFFR은 서열 번호 6의 서열을 결여하고 있는 것인 방법.
제22항에 있어서, BAFFR의 BAFF-결합 도메인은

(a) 서열 번호 1의 아미노산 27 내지 아미노산 32;

(b) 서열 번호 1의 아미노산 18 내지 아미노산 43;

(c) 서열 번호 1의 아미노산 13 내지 아미노산 50;

(d) 서열 번호 1의 아미노산 3 내지 아미노산 73; 또는

(e) 서열 번호 3의 아미노산 2 내지 아미노산 62

에 기재된 아미노산 서열을 갖는 것인 방법.
제22항에 있어서, BAFFR의 BAFF-결합 도메인은 이뮤노글로불린의 불변 영역에 융합된 것인 방법.
제26항에 있어서, 이뮤노글로불린은 IgG₁ 또는 IgG₄인 것인 방법.
제26항에 있어서, 이뮤노글로불린의 불변 영역은 Fc 부위를 포함하는 것인 방법.
제28항에 있어서, BAFFR-Fc는 (a) 서열 번호 2에 기재된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호 4에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
자가면역 질환을 앓는 환자를 치료하는 방법으로서,

(a) 치료적 유효량의 BAFF-특이적 길항제를 1회 이상 또는 N 주 미만의 1 이상의 간격으로 상기 환자에게 투여하는 단계;

(b) 단계 (a)의 투여를 N 주 이상 동안 일시적으로 중단하는 단계; 및

(c) 단계 (a) 및 (b)를 1회 이상 반복하는 단계

를 포함하여, 자가면역 질환을 치료하는 방법 (여기서, N은 8, 9, 10, 11 또는 12임).
자가항체 역가를 감소시키는 방법으로서,

(a) 치료적 유효량의 BAFF-특이적 길항제를 1회 이상 또는 N 주 미만의 1 이상의 간격으로 상기 환자에게 투여하는 단계;

(b) 단계 (a)의 투여를 N 주 이상 동안 일시적으로 중단하는 단계; 및

(c) 단계 (a) 및 (b)를 1회 이상 반복하는 단계

를 포함하여, 자가항체 역가를 감소시키는 방법 (여기서, N은 8, 9, 10, 11 또는 12임).
병원성 B 세포의 발생을 억제하는 방법으로서,

(a) 치료적 유효량의 BAFF (TNF 과에 속하는 B 세포 활성화 인자) 길항제를 1회 이상 또는 N 주 미만의 1 이상의 간격으로 상기 환자에게 투여하는 단계;

(b) 단계 (a)의 투여를 N 주 이상 동안 일시적으로 중단하는 단계; 및

(c) 단계 (a) 및 (b)를 1회 이상 반복하는 단계

를 포함하여, 병원성 B 세포의 발생을 억제시키는 방법 (여기서, N은 8, 9, 10, 11 또는 12임).
제32항에 있어서, 병원성 B 세포는 IgM^-IgD⁺인 것인 방법.
제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, BAFF-특이적 길항제는 BAFFR의 가용성 형태인 것인 방법.
제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, BAFF-특이적 길항제는 항-BAFF-항체인 것인 방법.
면역학적 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 BAFF 길항제의 용도로서, 치료 섭생법은

(a) 치료적 유효량의 BAFF (TNF 과에 속하는 B 세포 활성화 인자) 길항제를 1회 이상 또는 N 주 미만의 1 이상의 간격으로 투여하는 단계;

(b) 단계 (a)의 투여를 N 주 이상 동안 일시적으로 중단하는 단계; 및

(c) 단계 (a) 및 (b)를 1회 이상 반복하는 단계

를 포함하는 것인 용도 (여기서, N은 8, 9, 10, 11 또는 12임).
제36항에 있어서, 단계 (a)의 투여는 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주 또는 7주의 간격을 포함하는 것인 용도.
제36항에 있어서, BAFF 길항제는 단계 (a)에서 주 당 2회, 3회, 4회, 5회, 6회 또는 7회 투여되는 것인 용도.
제36항에 있어서, 투여는 단계 (b)에서 12주, 18주, 24주, 30주, 36주, 42주, 또는 48주 이상의 기간 동안 중단되는 것인 용도.
제36항에 있어서, 치료 개시시에 환자는

(i) 24-시간 이상의 기간 당 1 g의 단백뇨;

(ii) 약 1 ㎎/dl 이상의 혈청 크레아티닌 농도;

(iii) 97 ㎖/분 이하의 크레아티닌 클리어란스 수준;

(iv) 20 ㎎/dl 이상의 혈중 우레아;

(v) 혈청 중의 자가항체의 비정상적 역가; 및

(vi) 700 세포/㎕의 말초 혈액 B 세포 수

중 1 이상을 갖는 것인 용도.
제40항에 있어서, 환자는 인간인 것인 용도.
제36항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 자가항체 역가를 억제하기에 충분한 것인 용도.
제36항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 B 세포 과다증식을 감소시키기에 충분한 것인 용도.
제36항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 심장 염증을 감소시키기에 충분한 것인 용도.
제36항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 신장 기능을 개선시키기에 충분한 것인 용도.
제45항에 있어서, 신장 기능은 가압 여과, 선택적 재흡수, 세뇨관 분비 및 전신 혈압 조절 중 1 이상인 것인 용도.
제36항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 신장 섬유증의 진행을 감소시키기에 충분한 것인 용도.
제36항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 신장에서 림프구 침윤을 감소시키기에 충분한 것인 용도.
제36항에 있어서, BAFF 길항제의 치료적 유효량은 림프절병증을 감소시키기에 충분한 것인 용도.
제36항에 있어서, 면역학적 질환은 자가면역 질환인 것인 용도.
제50항에 있어서, 자가면역 질환은 전신 홍반성 루프스인 것인 용도.
제36항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 약제는 림포스타트-B⁽ ^TM ⁾인 것인 용도.
제36항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, BAFF 길항제는 BAFF-특이적 길항제인 것인 용도.
제53항에 있어서, BAFF 길항제는 가용성 BAFF 수용체, 항-BAFF 항체 및 항-BAFFR 항체로 구성된 군으로부터 선택된 것인 용도.
제54항에 있어서, 가용성 BAFF 수용체는 BAFFR, BCMA (B 세포 성숙화 항원) 및 TACI (막횡단 활성화제 및 시클로필린 리간드 인터렉터)로 구성된 군으로부터 선택된 것인 용도.
제55항에 있어서, BAFFR은 서열 번호 5의 펩티드를 포함하는 것인 용도.
제54항에 있어서, 가용성 BAFF 수용체는 BAFFR의 BAFF-결합 도메인을 포함하는 것인 용도.
제55항에 있어서, BAFFR은 인간의 것인 용도.
제55항에 있어서, BAFFR은 서열 번호 6의 서열을 결여하고 있는 용도.
제57항에 있어서, BAFFR의 BAFF-결합 도메인은

(a) 서열 번호 1의 아미노산 27 내지 아미노산 32;

(b) 서열 번호 1의 아미노산 18 내지 아미노산 43;

(c) 서열 번호 1의 아미노산 13 내지 아미노산 50;

(d) 서열 번호 1의 아미노산 3 내지 아미노산 73; 또는

(e) 서열 번호 3의 아미노산 2 내지 아미노산 62

에 기재된 아미노산 서열을 갖는 것인 용도.
제57항에 있어서, BAFFR의 BAFF-결합 도메인은 이뮤노글로불린의 불변 영역에 융합된 것인 용도.
제61항에 있어서, 이뮤노글로불린은 IgG₁ 또는 IgG₄인 것인 용도.
제61항에 있어서, 이뮤노글로불린의 불변 영역은 Fc 부위를 포함하는 것인 용도.
제63항에 있어서, BAFFR-Fc는 (a) 서열 번호 2에 기재된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호 4에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 것인 용도.
자가면역 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 BAFF-특이적 길항제의 용도로서, 치료 섭생법은

(a) 치료적 유효량의 BAFF-특이적 길항제를 1회 이상 또는 N 주 미만의 1 이상의 간격으로 환자에게 투여하는 단계;

(b) 단계 (a)의 투여를 N 주 이상 동안 일시적으로 중단하는 단계; 및

(c) 단계 (a) 및 (b)를 1회 이상 반복하는 단계

를 포함하여 자가면역 질환을 치료하는 것인 용도 (여기서, N은 8, 9, 10, 11 또는 12임).
자가항체 역가를 감소시키는 약제의 제조를 위한 BAFF-특이적 길항제의 용도로서, 치료 섭생법은

(a) 치료적 유효량의 BAFF-특이적 길항제를 1회 이상 또는 N 주 미만의 1 이상의 간격으로 환자에게 투여하는 단계;

(b) 단계 (a)의 투여를 N 주 이상 동안 일시적으로 중단하는 단계; 및

(c) 단계 (a) 및 (b)를 1회 이상 반복하는 단계

를 포함하여 자가항체 역가를 감소시키는 것인 용도 (여기서, N은 8, 9, 10, 11 또는 12임).
병원성 B 세포의 발생을 억제하시키는 약제의 제조를 위한 BAFF-특이적 길항제의 용도로서, 치료 섭생법은

(a) 치료적 유효량의 BAFF-특이적 길항제를 1회 이상 또는 N 주 미만의 1 이상의 간격으로 환자에게 투여하는 단계;

(b) 단계 (a)의 투여를 N 주 이상 동안 일시적으로 중단하는 단계; 및

(c) 단계 (a) 및 (b)를 1회 이상 반복하는 단계

를 포함하여 병원성 B 세포의 발생을 억제하는 것인 용도 (여기서, N은 8, 9, 10, 11 또는 12임).
제67항에 있어서, 병원성 B 세포는 IgM^-IgD⁺인 것인 용도.
제65항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, BAFF-특이적 길항제는 BAFFR의 가용성 형태인 것인 용도.
제65항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, BAFF-특이적 길항제는 항-BAFF-항체인 것인 용도.