KR20050087817A

KR20050087817A - 치료제

Info

Publication number: KR20050087817A
Application number: KR1020057009861A
Authority: KR
Inventors: 히로무 오노기; 가츠미 스기야마; 히로아키 사가와; 이쿠노신 가토
Original assignee: 다카라 바이오 가부시키가이샤
Priority date: 2002-12-05
Filing date: 2003-12-05
Publication date: 2005-08-31
Also published as: US20060051316A1; TW200505470A; EP1570845A1; AU2003289290A1; CA2508309A1; JPWO2004050078A1; WO2004050078A1

Abstract

본 발명은 (a) 산성 당, (b) 폴리아크릴산, (c) 클로로겐산 및 (d) 클로로겐산의 산화 처리물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 화합물, 또는 조류 유래의 추출물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는, 뼈형성 단백질 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환의 치료제 또는 예방제; 뼈형성 단백질 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제; 뼈형성 단백질 생성 증강용 또는 뼈형성 촉진용 식품, 음료 또는 사료를 제공한다.

Description

치료제 {REMEDY}

본 발명은 뼈형성 단백질 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환, 예를 들어 골다공증이나 골절 등의 치료 또는 예방에 유용한 의약, 식품, 음료 또는 사료에 관한 것이다.

뼈조직에서는 항상 뼈형성과 뼈흡수가 일정한 밸런스를 유지하면서 반복되고 있고, 이 활동이 뼈강도나 혈중의 칼슘 농도를 조절하고 있다. 뼈형성에는 골아세포가, 뼈흡수에는 파골세포가 중심적인 역할을 담당하고 있고, 뼈형성과 뼈흡수의 밸런스가 어떠한 요인으로 무너졌을 때에 골다공증이 야기되는 것으로 알려져 있다. 골다공증은 에스트로겐의 분비 저하를 요인으로 하는 폐경후 골다공증과, 가령(加齡)을 요인으로 하는 노인성 골다공증으로 크게 구별되지만, 이러한 것들 이외에도 당뇨병이나 갑상선 기능 항진증 등의 내분비ㆍ대사 질환이나 스테로이드 등의 약제 투여, 소화기ㆍ간 질환, 비타민 C 결핍, 부동성, 난소 적출, 관절 류머티즘 등을 요인으로 하는 속발성 골다공증도 알려져 있다.

현 시점에서, 골다공증의 치료약으로서는 에스트로겐제, 칼시토닌, 비스포스포네이트 등의 주로 뼈흡수를 저해함으로써 뼈의 양적 감소를 억제하는 약제가 사용되고 있다. 그러나, 에스트로겐제 치료에서는 유방암이나 자궁암, 심질환의 리스크가 높아지는 등 부작용이 강하고, 칼시토닌에서는 약제의 내성이 생기기 쉽고, 경구 투여가 불가능하고, 비스포스포네이트는 흡수율이 나쁘고, 잔류성이 높아 뼈대사의 과도한 불활성화를 초래한다는 결점이 있다. 또한, 뼈대사를 활성화시킬 목적으로 비타민 D₃ 제제가 사용되고 있지만, 다른 약제에 비하여 치료 효과가 낮은 데 비해, 고칼슘증 등의 부작용이 크다. 이들 종래의 골다공증의 치료약은 이미 진행된 뼈의 결실을 원상태로 회복시킬 수 없어, 진정한 골다공증의 치료제로서 충분한 것이라고는 말하기 어렵다.

뼈형성과 밀접하게 관계하는 세포는 골아세포이다. 골아세포는 연골세포, 근육세포, 지방세포, 힘줄세포 등과 공통의 간엽계 줄기세포를 기원으로 하고 있고, 분화 과정에서 전(前)골아세포를 거쳐 성숙 골아세포가 된다. 골아세포는 성숙 과정에서 뼈의 구성 성분인 콜라겐을 비롯한 대량의 세포외 매트릭스를 생산하고, 또한 알칼리성 포스파타제를 발현하여 인산칼슘의 매트릭스에 대한 침착을 야기한다. 일부의 골아세포는 이렇게 하여 석회화된 매트릭스 속에 매립되고, 나아가 뼈세포로 분화한다.

인간의 뼈의 양은 20∼30세에 최대를 나타내고 이후부터는 점차 감소된다. 가령과 함께 뼈조직 중의 골아세포수는 감소되고, 또한 간엽계 줄기세포로부터의 골아세포로의 분화능도 저하된다. 반면, 같은 간엽계 줄기세포를 유래로 하는 지방세포수가 가령과 함께 증식된다고도 알려져 있다. 따라서 뼈의 성장기에 골아세포, 뼈세포의 양을 높여 두는 것이나, 노년기나 폐경후에 있어서 간엽계 줄기세포로부터의 골아세포로의 분화를 보다 선택적으로 촉진시켜 뼈형성을 높이는 것은 골다공증의 예방, 치료의 관점에서 보더라도 유효하다고 생각된다.

최근 들어, 뼈의 형성을 촉진하는 약제가 개발되고 있고, 벤조피란 유도체 (예를 들어, 일본 공개특허공보 평7-291983호 참조.), 페닐치환 히드록시시클로펜테논 유연체 (예를 들어, 일본 공개특허공보 평11-43460호 참조.), 프로스타글란딘 A1 유연체 (예를 들어, 일본 공개특허공보 평11-43461호 참조.), 벤조티에핀 유도체 (예를 들어, 일본 공개특허공보 2000-109480호 참조.), 크로몬 유도체 (예를 들어, 일본 공개특허공보 2001-139571호 참조.) 에 의한 뼈형성 촉진 작용이 개시되어 있다. 그러나, 유효성, 안전성의 평가가 아직 충분하지 못하여 실용 단계에는 이르지 못하고 있다.

뼈기질 중에 뼈형성을 유도하는 단백성 인자가 함유되어 있는 것이 발견되어, 뼈형성 단백질 (bone morphogenetic protein, 이하, BMP 라고 하는 경우가 있다) 로 명명되었다. 그 본체는 오랫동안 밝혀지지 않았었지만, 4종의 BMP 유전자가 클로닝된 것을 계기로 현재에는 수십종의 분자종이 종(種)을 초월하여 널리 동물에게 존재한다는 것이 밝혀졌다. BMP 는 전골아세포에 작용하여, 알칼리성 포스파타제 활성, 부갑상선 호르몬에 대한 응답성, 오스테오칼신 생성, 콜라겐 합성 등을 상승시켜 골아세포로의 분화를 유도한다. BMP 는 다분화능을 갖는 미분화 간엽계 세포의 분화 단계에 따라 연골세포, 골아세포, 지방세포로 분화되는 것을 배분한다. BMP 는 근아세포의 근육으로의 분화를 억제하고, 골아세포로의 분화로 변환시킨다. 또한, BMP 에는 골아세포로부터의 인슐린양 증식 인자 등의 2차적 증식 인자의 유도 활성이 알려져 있다. BMP 를 담체와 함께 피하 또는 근육 내에 투여함으로써 뼈형성이 유도된다. 재조합 인체 BMP 중 BMP-2, -4, -5, -6, -7 에는 단독으로 뼈형성을 유도하는 활성이 관찰되고 있다. 그 중에서도 재조합 인체 BMP-2 는 강력한 뼈형성 활성을 갖고, 래트, 양, 개, 원숭이 등의 뼈결손 모델에 있어서 결손 조직을 회복하는 것이 알려져 있다. 또한, BMP-4, -5 에는 골절 치유 과정에 대한 관여가, BMP-6 에는 연골내 골화에 대한 관여가 보고되어 있고, BMP-12 에는 인대, 힘줄 형성 활성이, BMP-13 에는 연골 형성 활성이 있는 것이 알려져 있다. 또한, 노령 동물이나 고령자에서는 뼈기질 중의 BMP 량의 저하나, 골아세포의 BMP 에 대한 감수성의 저하가 관찰되는 점에서, BMP 의 노인성 골다공증에 대한 관련성이 지적되고 있다.

BMP 는 뼈형성 뿐만 아니라, 발생 과정에서도 중요한 기능을 담당하고 있고, BMP-2, -4, -7, -8, -11 등은 배복축 형성이나 중배엽 형성, 심장 형성, 신장 형성, 눈 형성, 정자 형성 등에 관여하고 있다. BMP 의 녹아웃 동물은 치사 또는 중증의 장애를 나타낸다. 이와 같이 BMP 는 생체에 필수이며 다채로운 생리 활성을 갖고 있는 것이 알려져 있다.

BMP 는 상기 각종 작용을 나타낸다는 점에서, BMP 자체를 직접, 단백 제제로서 골다공증이나 골절 치료 등에 이용하는 시도도 이루어지고 있다. 그러나, BMP 는 단백질이므로, 투여 방법의 제한이나 내성의 출현 등이 문제가 된다. 또한 BMP 의 수용체는 많은 조직에 널리 발현되고 있으므로, 전신 투여한 경우에는 뼈 이외의 조직에 영향을 미칠 우려가 있다. 이러한 결점 때문에, BMP 자체를 치료약으로 실용화하는 데에는 여러 가지 제약이 따른다. 그러나, BMP 를 밖으로부터 투여하지 않고, 원하는 조직 부위에서 임의로 BMP 의 생성을 증강시킬 수 있다면, 골다공증이나 골절 등, BMP 생성 증강을 필요로 하는 질환의 치료, 예방에 유효할 것으로 생각된다. 최근, 2개의 방향족계를 포함하는 특정 화합물 (예를 들어, 국제 공개 제97/15308호 팜플렛 참조.) 나 네바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴 및 심바스타틴 등의 스타틴계 화합물 (예를 들어, 국제 공개 제98/25460호 팜플렛 참조.) 이 BMP-2 생성 증강 활성을 갖는 것이 개시되어 있다. 또한 헬리오크산틴 (예를 들어, 일본 공개특허공보 평8-245386호 참조.) 이나 축합 티오펜 유도체 (예를 들어, 일본 공개특허공보 평9-151132호 참조.) 에 BMP 의 작용을 증강하는 활성이 있는 것이 개시되어 있다. 단, 이들에 관해서는 안전성, 유효성의 평가가 아직 충분하지 못하여 실용 단계에는 이르지 못하고 있다.

최근, BMP 를 뼈재생 의료에 이용하는 개발이 행해지고 있고, BMP 와 담체의 복합체를 임플랜트재와 조합하여 골절 개소에 매립함으로써 치료 효과를 얻고자 하는 시도도 이루어지고 있다. 그러나, 대량의 BMP 를 생체 내에 가져오게 되기 때문에, 안전성, 경제성의 면에서도 문제가 생긴다. BMP 대신에, BMP 의 생성을 증강하거나, 뼈형성을 촉진하는 물질을 사용함으로써 그 결점을 회피할 수 있다고 생각되지만, 아직 실용에 충분한 수단은 알려져 있지 않다.

이와 같이, 뼈형성을 촉진하거나, BMP 생성을 증강함으로써, 그것들이 관련되는 여러 질환의 치료 또는 예방이 가능해질 것으로 생각되지만, 독성이나 부작용을 나타내지 않고 원하는 바에 따라 적절히 BMP 생성 증강을 수행할 수 있는 물질, 수단 등은 아직 알려져 있지 않다.

도 1 은 개다시마 유래 푸코이단의 DEAE-셀룰로파인 A-800 칼럼 용출 패턴을 나타내는 도면이다.

발명을 실시하기 위한 최선의 형태

본 명세서에 있어서, 「BMP 생성 증강 작용」 및 「BMP 생성 증강 활성」 은 각각 BMP 생성 증강을 가져오는 것 및 BMP 생성을 증강하는 기능을 말하지만, 그 의미를 특별히 엄밀하게 구별하는 것은 아니다. 「증강」 에는 본 발명에 관한 유효 성분의 작용 전에 비하여, 작용 후에 있어서 목적 물질의 양이 증가한다는 태양과 함께, 본 발명에 관한 유효 성분을 작용시킴으로써 목적 물질을 생기시킨다는 태양 (유도) 을 포함한다. 또한 본 명세서에서, 유효 성분으로 언급한 모든 물질을 단독으로 또는 2종 이상 혼합하여 본 발명에 사용할 수 있다.

본 발명에 사용되는 유효 성분으로서는 (a) 산성 당, (b) 폴리아크릴산, (c) 클로로겐산 및 (d) 클로로겐산의 산화 처리물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 화합물이 사용된다. 산성 당으로서는 산성기를 갖는 당이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 산성 다당, 산성 올리고당, 산성 단당 및 그들의 분해물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당을 사용할 수 있다.

산성 다당으로서는 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 가지면 되고 특별히 한정되지 않지만, 조류 유래의 산성 다당, 동물 유래의 산성 다당, 어류 유래의 산성 다당, 식물 유래의 산성 다당, 미생물 유래의 산성 다당, 합성 산성 다당이 예시된다.

조류 유래의 산성 다당으로서는 예를 들어 갈조류 유래의 황산화 다당, 예를 들어 황산화푸코스 함유 다당, 예를 들어 푸코이단, 황산화푸코갈락탄 (G-푸코이단), 황산화푸코글루쿠로노만난, 글루쿠로노자일로푸칸, 사르가섬, 글루쿠로노만노갈락탄, 자일로푸코글루쿠로난, 아스코피란, 글루쿠로노갈락토푸칸, 황산화글루쿠로노푸칸을 들 수 있다.

상기 기재된 원료로서는 예를 들어 개다시마, 참다시마, 가늘게 썬 다시마, 모자반, 큰실말, 오키나와 큰실말, 미역, 쿠로메, 대황, 감태, 레소니아, 니그레센스, 아스코피람 노도삼 등의 다시마목, 나가모츠모목, 모자반목 등의 갈조류를 사용할 수 있다.

또한, 조류 유래의 산성 다당으로서는 홍조류 유래의 산성 다당, 예를 들어 마쿠사 (Gelidium elegans), 꼬시래기, 자이언트 켈프, 푸테로쿠라디아 카피라세아 유래의 산성 다당이나 카라기난 λ, 카라기난 κ, 카라기난 ι 등을 사용할 수 있다. 또한 남조류 유래의 산성 다당, 예를 들어 스피루리나 유래의 산성 다당, 녹조류 유래의 산성 다당, 예를 들어 클로렐라 유래의 산성 다당을 사용할 수 있다. 또한, 조류 유래의 라무난황산도 본 발명의 산성 다당으로서 사용할 수 있다. 또한 인산화다당류, 예를 들어 핵산도 본원 발명의 산성 다당에 포함된다.

본 발명에 사용하는 산성 다당으로서, 예를 들어 황산화푸코스 함유 다당인 상기 푸코이단이 예시되지만, 황산화푸코스를 구성 성분으로 하는 다당으로 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 것이면 그 유래는 특별히 한정되지 않고, 자피 동물, 예를 들어 해삼, 성게, 불가사리 등 유래의 푸코이단을 사용해도 된다. 푸코이단을 함유하는 해삼으로서는 예를 들어 일본 공개특허공보 평4-91027호에 기재된 해삼이 있고, 당해 공보에 기재된 방법으로 해삼으로부터 푸코이단을 조제할 수 있다.

예를 들어 개다시마로부터 푸코이단을 조제하고, 그 푸코이단을 글루쿠론산 함유 푸코이단 (U-푸코이단이라고 함) 과 글루쿠론산 비함유 푸코이단 (F-푸코이단이라고 함) 으로 분리할 수 있고, 본 발명의 유효 성분으로서 각각의 푸코이단을 사용할 수 있다. 또한 개다시마로부터 황산화푸코갈락탄를 조제하여 사용할 수 있다.

U-푸코이단 및 F-푸코이단은 개다시마로부터 푸코이단을 조제한 후, 음이온 교환 수지, 계면 활성제 등을 사용하여 분리된다. 개다시마 유래의 U-푸코이단 및 F-푸코이단의 존재비 (중량비) 는 약 1:2 이고, U-푸코이단은 푸코스, 만노스, 갈락토스, 글루쿠론산 등을 포함하여 황산 함량은 약 20중량%, F-푸코이단은 푸코스와 갈락토스를 포함하여, 황산 함량은 약 50중량%, 분자량은 양 물질 모두 약 20만을 중심으로 분포되어 있다 (제18회 당질 심포지움 요지집, 제159페이지, 1996년).

예를 들어 개다시마로부터 조제한 푸코이단 용액을 DEAE-셀룰로파인 A-800 칼럼에 어플라이한 후, NaCl 함유 완충액으로 농도 구배법에 의해 용출시킴으로써, U-푸코이단와 F-푸코이단으로 분리할 수 있다. 도 1 에 그 일례를 도시한다. 즉 도 1 은 U-푸코이단와 F-푸코이단의 분리를 나타내는 도면이고, 도면 중 앞 피크가 U-푸코이단, 뒷 피크가 F-푸코이단이다.

기타, 본 발명에 사용되는 푸코이단으로서는 모자반 유래 푸코이단, 큰실말 유래 푸코이단, 오키나와 큰실말 유래 푸코이단, 미역 유래 푸코이단, 레소니아 유래 푸코이단, 아스코피람 유래 푸코이단, 다른 조류 유래의 푸코이단도 각각 공지된 방법으로 조제하여 본 발명에 사용할 수 있다.

또한, 어류 유래의 산성 다당으로서는 예를 들어, 연골 어류, 예를 들어, 상어 유래의 콘드로이틴 황산을, 식물 유래의 산성 다당으로서는 예를 들어, 사과, 레몬, 귤 등 유래의 펙틴산이나 펙틴 등을, 미생물 유래의 산성 다당으로서는 예를 들어, 대장균 유래의 콜로민산, 고초균 유래의 테이칸, 효모 유래의 포스포만난, 포스포갈락탄을, 동물 유래의 산성 다당으로서는 예를 들어, 헤파린, 저분자 헤파린, 콘드로이틴 황산, 헤파란 황산, 콘드로이틴, 케라탄 황산, 히알루론산, 폴리리보스인산 등을, 각각 들 수 있다.

본 발명에 사용되는 합성 산성 다당으로서는 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 지금까지 의약품으로서 사용되어 온 산성 다당을 사용하는 것이 바람직하다. 당해 합성 산성 다당으로서는 합성 황산화 다당, 예를 들어 덱스트란 황산나트륨이 예시된다. 당해 화합물은 Leuconostoc mesenteroides van Tieghem 에 의한 자당의 발효에 의해서 생산된 덱스트란의 부분 분해물을 황산화하여 얻은 황산에스테르의 나트륨염이다.

또한, 본 발명에 있어서 합성 황산화 다당으로서, 예를 들어 덱스트란, 덱스트란 황산, 덱스트린, 시클로덱스트린, 셀룰로스, 전분, 만난, 자일란, 알긴산, 펙틴, 펙틴산, 푸락탄, 아라비난, 키틴, 풀루란, 자일로글루칸, 스타치 등의 황산화물을 사용할 수 있다. 또한 예를 들어, 리보푸라난 황산, 자일로푸라난 황산, 렌티난 황산, 가드란 황산, 만노피라난 황산 등의 합성 황산화 다당이나 팔미토일기를 갖는 리보푸라난 황산 등의 합성 황산화알킬다당을 사용할 수 있다. 합성 황산화알킬다당에 포함되는 알킬기의 구성은 특별히 한정되지 않고, 그 탄소수로서는 통상 1∼50정도이면 된다. 또한 황산화 다당이나 그 분해물을 황산화함으로써, 고황산화 황산화 다당 또는 고황산화 분해물을 조제할 수 있다. 이들 황산화 다당, 고황산화 황산화 다당, 고황산화 분해물은 각각 공지된 방법으로 조제하면 되고, 그 분해물도 공지된 방법으로 조제하여 본 발명에 사용할 수 있다. 또한 시판 중인 덱스트란 황산, 황산화셀룰로스도 사용할 수 있고, 그들 합성 황산화 다당 등의 염 등을 사용해도 된다.

본 발명에 산성 다당으로서 황산화 다당을 사용한 경우, 황산화 다당의 황산 함량 (혹은 황산기 수) 은 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 발현하면 특별한 한정은 없다. 또, 산성 다당의 분해물은 올리고당, 단당도 포함하여, 예를 들어 푸코스-2-황산, 글루코스-2-황산을 사용할 수 있다. 이들 황산화 단당, 황산화 올리고당, 황산화 다당은 그들의 일반적인 합성법에 의해 조제해도 되고, 조제물, 정제물을 본 발명에 사용할 수도 있다. 또 본 발명에 있어서 올리고당이란 단당이 2개∼10개의 범위로 이어진 당 화합물, 다당이란 단당이 11개 이상 이어진 당 화합물로 정의한다.

또한 본 발명의 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 산성 다당의 분해물, 예를 들어 황산화 다당, 푸코이단의 분해물은 효소학적 방법, 화학적 방법, 물리적 방법 등의 공지된 방법으로 조제하여, 원하는 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 분해물을 선택하여 사용할 수 있다.

또, 분해물이란 분해 대상으로 하는 산성 다당에 따라 달라지기도 하지만, 산성 다당을 분해하여 얻은, 대략 분자량이 바람직하게는 200∼10만, 보다 바람직하게는 1000∼3만의 범위의 것을 가리킨다.

본 발명에서 사용하는 산성 다당의 분해물의 바람직한 조제 방법으로서는 산 분해법이 있고, 당해 산성 다당을 산 분해함으로써 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 분해물을 조제할 수 있다.

본 발명에서 사용하는 산성 다당의 산 분해 조건은 뼈형성 촉진 작용 또는 BMP 생성 증강 작용을 갖는 분해물 (이하, 본 발명의 분해물이라 함) 이 생성되는 조건이면 특별히 한정되지 않는다.

예를 들어 산성 다당을 산수용액 등에 용해 또는 현탁하여 반응시킴으로써, 본 발명의 분해물이 생성된다. 또한, 반응시에 가열함으로써, 본 발명의 분해물의 생성에 필요한 시간이 단축된다.

산성 다당을 용해 또는 현탁하는 산의 종류는 특별히 한정되지 않지만, 염산, 황산, 질산 등의 무기염, 시트르산, 포름산, 아세트산, 락트산, 말산, 아스코르브산 등의 유기산, 또한 양이온 교환 수지, 양이온 교환 섬유, 양이온 교환막 등의 고체산을 사용할 수 있다.

산의 농도도 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 0.0001∼5 규정, 보다 바람직하게는 0.01∼1 규정 정도의 농도로 사용할 수 있다. 또한, 반응 온도도 특별히 한정되지 않지만 바람직하게는 0∼200℃, 보다 바람직하게는 20∼130℃ 로 설정하면 된다.

또한, 반응 시간도 특별히 한정하는 것은 아니지만, 바람직하게는 수초 간∼수일 간으로 설정하면 된다. 산의 종류와 농도, 반응 온도 및 반응 시간은 본 발명에 사용하는 분해물의 생성량, 분해물의 중합도에 따라 적절히 선택하면 된다. 예를 들어, 푸코이단의 분해물의 제조에 있어서는 시트르산, 락트산, 말산 등의 유기산을 사용하고, 산의 농도는 수십mM∼수M, 가열 온도는 50∼110℃, 바람직하게는 70∼95℃, 가열 시간은 수분간∼24시간의 범위에서 적절히 선택함으로써, 본 발명의 분해물을 조제할 수 있다. 푸코이단의 산분해물로서는 개다시마 유래 푸코이단의 산분해물이 예시되고, 당해 분해물은 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 식물 섬유로서 사용할 수 있다.

본 발명의 분해물은 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 지표로 하여 분획할 수 있고, 예를 들어 산분해물을 겔여과법, 분자량 분획막에 의하는 분획법 등에 의해 분자량 분획할 수 있다.

겔여과법의 예로서는 셀룰로파인 GCL-300 을 사용하여, 예를 들어 분자량 25000 초과, 분자량 25000∼10000 초과, 분자량 10000∼5000 초과, 분자량 5000 이하 등의 임의의 분자량 획분을 조제할 수 있고, 셀룰로파인 GCL-25 를 사용하여, 예를 들어 분자량 5000 이하의 획분을 분자량 5000∼3000 초과, 분자량 3000∼2000 초과, 분자량 2000∼1000 초과, 분자량 1000∼500 초과, 분자량 500 이하 등의 임의의 분자량 획분으로 조제할 수 있다.

또한, 한외 여과막을 사용하여 공업적으로 분자량 분획을 행할 수 있고, 예를 들어 다이셀사 제조 FE10-FUSO382 를 사용함으로써 분자량 30000 이하의 획분을, 동 FE-FUS-T653 을 사용함으로써 분자량 6000 이하의 획분을 조제할 수 있다. 또한 나노필터막을 사용함으로써 분자량 500 이하의 획분을 얻을 수도 있고, 이들 겔여과법, 분자량 분획법을 조합함으로써 임의의 분자량 획분을 조제할 수 있다.

본 발명에서 사용할 수 있는 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 산성 다당의 분해물, 예를 들어 푸코이단의 분해물로서는 하기 식 (1) 로 표현되는 화합물

(식 중, R 은 H 또는 SO₃H 이고, R 의 적어도 1개는 SO₃H 이다.)

하기 식 (2) 로 표현되는 화합물,

(식 중, R 은 OH 또는 OSO₃H 이고, R 의 적어도 1개는 OSO₃H 이다.)

하기 식 (3) 으로 표현되는 화합물,

이 예시되고, 이들 화합물은 일본 공개특허공보 2003-199596, 국제 공개 제97/26896호 팜플렛, 국제 공개 제00/50464호 팜플렛에 기재된 방법으로 조제할 수 있다. 본 명세서에 있어서, 화합물의 식 중, 「ㆍH」 는 당의 아노머 탄소에 결합한 α 위치 또는 β 위치에 있는 수소원자를 나타낸다. 또, 식 (1), 식 (2), 식 (3) 으로 표현되는 화합물의 반복 구조를 갖는 황산화 다당, 및 올리고당도 본 발명의 BMP 생성 증강 작용을 갖는 황산화당으로서 사용할 수 있다.

또한 개다시마 유래 푸코이단을 유기산 존재 하에서 가열 처리함으로써 글루쿠론산과 만노스의 중합체를 얻을 수 있고, 이 중합체도 본 발명의 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 산성 다당으로서 사용할 수 있다. 또한 가열 처리 조건, 가열 시간을 조정함으로써 임의의 중합도의 중합체를 조제할 수 있다.

산성 올리고당으로서는 바람직하게는 황산화 올리고당을 들 수 있고, 또한 산성 단당으로서는 바람직하게는 황산화 단당을 들 수 있다. 이러한 황산화 올리고당 또는 황산화 단당은 시판 중인 것을 사용할 수 있는 것 이외에, 여러 가지의 올리고당, 단당을 원료로 하여 공지된 방법으로 황산화하여 조제할 수 있다. 또한, 이들의 염도 바람직하게 사용할 수 있다. 이들은 각각 단독으로 또는 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다. 또한, 산성 올리고당, 또는 산성 단당의 분해물로서는 상기 산성 다당의 분해물과 동일하게 얻을 수 있다. 산성 단당으로서는 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖고 있으면 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 황산화글루코스, 황산화갈락토스, 황산화자일로스, 황산화2-데옥시-글루코스, 황산화탈로스 및 황산화만노스가 예시된다. 또한 황산화 다당, 황산화 올리고당, 황산화 단당의 지방산 유도체 등도 본 발명의 산성 다당, 산성 올리고당, 산성 단당에 포함된다.

본 발명에서 사용되는 산성 당에는 그 염도 포함된다. 본 발명에서 사용되는 산성 당의 염으로서는 예를 들어, 알칼리금속염, 알칼리 토금속염, 유기염기 등과의 염이 예시된다. 또한 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 암모늄, 또는 디에탄올아민, 에틸렌디아민 등과의 염을 들 수 있다. 이들 염은 예를 들어 본 발명에서 사용되는 산성 당의, 황산기나 카르복실기를 공지된 방법에 의해 염으로 변환함으로써 얻어진다. 이러한 염으로서는 약리학적으로 허용되는 염이 바람직하다.

본 발명에 있어서는 산성 당으로서, 산성 다당, 산성 올리고당, 산성 단당 및 그들의 분해물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 화합물, 보다 구체적으로는 푸코이단, 헤파린, 덱스트란 황산, 콘드로이틴 황산 (특히 콘드로이틴 황산 B), 펙틴산, 스피루리나 유래 산성 다당, 푸코이단 분해물, 카라기난 λ, 카라기난 κ, 카라기난 ι, 저분자 헤파린, 헤파란 황산, 케라탄 황산, 알긴산, 펙틴, 히알루론산 및 클로렐라 유래 산성 다당으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 화합물이 바람직하게 사용된다. 그 중에서도, 푸코이단, 그 분해물인 상기 식 (1) 로 표현되는 화합물, 스피루리나 유래 산성 다당, 클로렐라 유래 산성 다당은 모두 오랜 식경험이 있는 해조류로부터 얻어지는 것이기 때문에, 안전성이 높고, 부작용 우려도 없어, 당연히 경구에 의한 섭취가 가능하다. 특히 개다시마 유래의 푸코이단은 BMP-2 생성 증강 활성도 높고, 안전성도 높은 점에서, 본 발명에 가장 바람직하게 사용할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 폴리아크릴산으로서는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 시판 중인 것을 사용할 수 있고, 그 분자량에 관해서도 본 발명의 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖고 있으면 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 평균 분자량이 5000∼1000000 인 것을 사용할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 클로로겐산으로서는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 시판 중인 것이나 또는 각종 식물로부터 공지된 방법으로 조제하여 사용할 수 있다. 클로로겐산은 꼭두서니과 또는 국화과, 가지과 식물 등, 여러 가지의 쌍자엽 식물의 과실이나 잎에 함유되어 있는 성분이고, 어느 식물로부터 조제한 클로로겐산이라도 본 발명의 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖고 있으면 본 발명에 사용할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 클로로겐산의 산화 처리물로서는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 상기 클로로겐산을 산화 반응시킴으로써 얻어지는 처리물을 사용할 수 있다. 산화 반응으로서는 예를 들어 클로로겐산을, 산소와의 접촉에 의한 산화, 산화제에 의한 산화, 산화 효소에 의한 산화, 전기적 산화 등의 공정에 제공함으로써 실시한다. 모두 공지된 방법에 따라 실시할 수 있다. 예를 들어, 산소와의 접촉에 의해 산화시키는 경우, 수용액 중에 용해시킨 클로로겐산에 대하여, 펌프를 통해서 공기를 보내줌으로써 실시할 수 있다. 산화제에 의한 산화는 산화제로서 바람직하게는 과산화수소, 오존, 은, 구리, 철, 니켈, 망간, 코발트, 크롬 등을 사용하여 실시할 수 있다. 산화 효소에 의한 산화는 산화 효소로서 바람직하게는 티로시나제, 페르옥시다제 등을 사용하여 실시할 수 있다. 또, 산화 효소에 의한 산화에는 상기 예시하는 산화 효소를 포함한 미생물에 의한 산화도 포함된다. 또한, 전기적으로 산화시키는 경우, 예를 들어, 백금, 산화납, 탄소, 그래파이트, 산화백금 등을 전극에 사용하는 양극 산화 반응에 의해 산화시킬 수 있다.

산화 처리에 의해 얻어지는 조성물의 구조는 밝혀지지 않았지만, 클로로겐산이 단순히 산화되어, 또는 중합되어 폴리머로서 존재하고 있는 것 등이 추측된다.

이들의 유효 성분은 단독으로 또는 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다. 또한, 이들 예시되는 산성 다당의 분해물이나 염도 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 나타내는 한, 특별한 한정없이 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, 조류 유래의 추출물로서는 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖고 있으면 특별히 한정되지 않고, 갈조류, 남조류, 홍조류, 녹조류 등, 상기 산성 다당의 원료가 되는 조류이면 특별한 한정없이 사용할 수 있다. 특히 바람직하게는 개다시마 등의 갈조류나, 클로렐라, 스피루리나를 사용할 수 있다. 본 발명에 있어서, 추출물이란 추출 용매를 사용하여 추출 조작하는 공정을 거쳐 얻어지는 물질을 가리킨다. 추출은 공지된 추출 방법에 의해 이하와 같이 실시할 수 있다. 예를 들어 원료를 분쇄 또는 가늘게 자른 후, 용매를 사용하여 뱃치식 또는 연속식으로 추출을 실시할 수 있다. 추출물을 얻을 때의 추출 용매로서는 특별히 한정되지 않고, 물, 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 이소프로필알코올 등의 알코올류, 아세톤, 메틸에틸케톤 등의 케톤류, 아세트산메틸, 아세트산에틸 등의 친수성 또는 친유성의 용매를 들 수 있고, 원하는 바에 따라 단독으로, 또는 적절히 혼합액으로 하여 사용할 수 있다. 또한, 바람직하게는 칼슘염의 수용액을 용매로서 사용할 수 있다. 추출 용매의 양은 적절히 결정하면 되지만, 통상 원료에 대하여, 바람직하게는 중량으로 0.1∼100배량의 추출 용매를 사용하면 된다. 추출 온도도 적절히 목적에 따라 결정하면 되지만, 물 추출의 경우에는 통상, 바람직하게는 4∼130℃, 보다 바람직하게는 25∼100℃ 이다. 또한, 용매 중에 에탄올이 함유되는 경우에는 4∼60℃ 의 범위가 바람직하다. 추출 시간도 추출 효율을 고려하여 결정하면 되지만, 통상 바람직하게는 수초 간∼수일 간, 보다 바람직하게는 5분간∼24시간의 범위가 되도록, 원료, 추출 용매, 추출 온도를 설정하는 것이 바람직하다. 추출시의 압력은 특별히 한정되지 않고 원하는 바에 따라 적절히 결정할 수 있지만, 예를 들어 상압이나 가압이나 흡인 여과 등에 의한 감압이어도 된다. 추출 조작은 예를 들어, 교반하면서 또는 정치하여 실시하면 되고, 또한 원하는 바에 따라 수회 반복해도 된다. 이상의 조작에 의해, 조류 유래의 추출물 (이하, 본 발명의 추출물이라고 하는 경우가 있다.) 이 얻어진다. 추출물은 원하는 바에 따라, 여과, 원심 분리, 농축, 한외 여과, 분자 체 등의 처리를 실시하여, BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 성분이 농축된 추출물을 조제할 수 있다. 또, 본 발명에 있어서, 유효 성분으로서 사용하고자 하는 상기 산성 당 등, 조류 유래의 추출물이나 농축 추출물의 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용은 후술하는 실시예 1 또는 6 에 기재된 방법에 의해 간편히 측정할 수 있다. 또, 본 발명에서는 서로 다른 추출법으로 얻어진 추출물을 2종 이상 함유시켜 사용할 수도 있다.

또한, 본 발명에서는 조류 유래의 추출물을 공지된 방법으로 분획함으로써 얻어지는 획분이나, 분획 조작을 복수회 반복함으로써 얻어지는 획분도 본 발명의 추출물에 포함된다. 상기 분획 수단으로서는 추출, 분별 침전, 칼럼 크로마토그래피, 박층 크로마토그래피 등을 들 수 있다. 얻어진 획분의 정제를, BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 지표로 하여 더욱 진행시킴으로써, BMP 생성 증강 물질 또는 뼈형성 촉진 물질을 단리할 수도 있다.

본 발명에 있어서, 조류 유래의 추출물의 형상으로서는 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖고 있으면 특별히 한정되지 않고, 분말상, 고체상, 액상의 어느 형상이어도 된다. 또한, 당해 임의의 형상을 갖는 추출물의 처리물을 공지된 방법으로 조립하여 입상의 고형물로 하여, 본 발명의 조류 유래의 추출물로서 사용할 수 있다. 조립 방법으로서는 특별히 한정되지 않지만, 전동 조립, 교반 조립, 유도층 조립, 기류 조립, 압출 조립, 압축 성형 조립, 해쇄 조립, 분사 조립 또는 분무 조립 등이 예시된다. 분말상의 당해 추출물을 액체, 예를 들어 물이나 알코올 등에 용해하여 액상으로 하여 본 발명의 추출물로서 사용할 수도 있다.

본 발명의 추출물로서는 조류 그 자체와 비교하여 BMP 생성 증강 물질 또는 뼈형성 촉진 물질을, 예를 들어 산성 다당, 산성 올리고당, 산성 단당, 또는 그들의 분해물을 고농도 및/또는 고순도로 함유하는 것이 특히 바람직하다. 여기서 고농도란, 원료인 조류의 단위 중량당 BMP 생성 증강 물질 또는 뼈형성 촉진 물질 중량보다 본 발명의 추출물의 단위 중량당 BMP 생성 증강 물질 또는 뼈형성 촉진 물질 중량이 많은 것을 의미한다. 또한, 고순도란, 원료인 조류와 비교하여 당해 물질의 BMP 생성 증강 물질 또는 뼈형성 촉진 물질의 함유율이 높은 것을 의미한다.

본 발명에 관한 유효 성분에는 후술하는 바와 같이 특별히 독성은 관찰되지 않는다. 또한, 부작용 발생의 우려도 없다. 그러므로, 안전하고 또한 적절하게 질환을 치료 또는 예방할 수 있다. 따라서, 당해 유효 성분을 함유하여 이루어지는 본 발명의 치료제, 예방제, 식품, 음료 또는 사료는 BMP 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환의 치료 또는 예방에 유효하다.

본 발명에 있어서, BMP 로서는 예를 들어 BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6, BMP-7, BMP-8, BMP-9, BMP-10, BMP-11, BMP-12, BMP-13, BMP-14, BMP-15 등이 예시되고, 특히 바람직하게는 BMP-2, BMP-4 또는 BMP-7 이 예시된다. 또한, BMP 생성 증강 작용의 유무에 관해서는 특별히 한정되지 않지만, 후술하는 실시예 1 에 기재된 방법에 따라 간편하게 측정할 수 있다.

BMP 는 뼈, 연골, 인대, 힘줄 등의 형성을 강하게 촉진하는 인자이고, 전골아세포에 작용하여 골아세포로의 분화를 촉진하고, 뼈의 발생, 성장, 리모델링, 골절의 치유 과정에 관여하고 있는 것으로 생각되고 있다. 또한, BMP 는 미분화 간엽계 세포에 작용하여, 분화 단계에 따라 연골아세포, 골아세포, 지방세포로 분화되는 것을 배분함으로써, 널리 간엽계 유래 세포의 성숙과 증식에 관여하고 있다. 또한, BMP 는 개체의 발생 과정에서도, 배복축 형성이나 중배엽 형성 등에 중요한 기능을 담당하고 있다. BMP 중에서도 BMP-2, -4, -7 은 특히 뼈형성 활성이 강하고, 재조합 인체 BMP-2 는 뼈결손 동물에게 작용하여 뼈결손을 회복할 수 있다.

BMP 는 감수성을 갖는 세포에 한하여 작용하는 선택성이 높은 단백질이다. 또한, BMP 에 의한 미분화 간엽계 세포에서 골아세포로의 분화 방향은 특이성이 높아, 골아세포 이외의 원하지 않는 세포로 분화되는 일은 없다. 따라서, BMP 생성 증강 작용을 갖는 본 발명의 유효 성분은 부작용 우려가 없어, 의약이나 기능성 식품 소재로서 매우 유용하다.

본 발명에 있어서 뼈형성 촉진 작용이란, 뼈나 연골의 형성 작용을 촉진하는 것이면 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 간엽계 줄기세포로부터 골아세포로의 분화 촉진 작용, 미분화 간엽계 세포로부터 골아세포로의 분화 촉진 작용, 전골아세포로부터 골아세포로의 분화 촉진 작용, 뼈기질의 형성 촉진 작용, 뼈기질의 석회화 작용, 골아세포로부터 뼈세포로의 분화 촉진 작용, 연골내 골화 유도 작용 등이 예시된다. 또한, 뼈형성 촉진 작용의 유무에 관해서는 특별히 한정되지 않지만, 후술하는 실시예 6 에 기재된 방법에 의해, 예를 들어 간엽계 줄기세포로부터 골아세포로의 분화 촉진 작용으로서 간편히 측정할 수 있다. 여기서, 「촉진」 에는「유도」를 포함시킨다.

본 발명에 있어서, BMP 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환으로서는 예를 들어, 골다공증 (예를 들어, 만성 골다공증, 폐경 후의 호르몬 밸런스 이상에 의해 발생되는 골다공증, 당뇨병이나 스테로이드제 등의 부작용에 동반되는 속발성 골다공증 등), 골절, 재골절, 뼈결손, 뼈형성 부전증, 뼈연화증, 뼈 베체트병, 경직성 척수염, 만성 관절 류머티즘, 변형성 관절염, 연골이 관여하는 변형성 관절증, 치주병, 치주 질환에 있어서의 치주 조직 결손, 치근ㆍ치조 결손, 악제(顎堤) 형성, 구개열의 수복이 예시된다.

본 발명의 치료제는 BMP 생성 증강 또는 뼈형성을 촉진할 수 있는 점에서, 상기한 바와 같은 질환에 대하여 치료 효과를 발휘할 수 있다. 또한, 본 발명의 예방제는 본 발명의 유효 성분의 작용에 의해, 뼈, 연골이나 치아를 강하게 하는 점에서, 상기한 바와 같은 질환에 대하여 예방 효과를 발휘할 수 있다.

또한, 본 발명의 치료제 또는 예방제는 다발성 골수종, 폐암, 유방암 등의 외과 수술 후의 뼈조직 수복제로서 사용할 수도 있다. 또한, 본 발명의 치료제 또는 예방제는 재생 의료 분야에서의 뼈재생 목적으로도 사용할 수 있다. 구체적으로는 본 발명의 치료제 또는 예방제는 인공 뼈나 인공 치근의 활성화ㆍ안정화에 사용할 수 있고, 또한 질환을 갖기 전의, 또는 질환을 갖는 환자의 생체 내에서 세포를 취하고, 체외에서 본 발명의 치료제 또는 예방제를 작용시켜 재생뼈 조직을 형성시킨 후, 다시 환자의 생체 내로 되돌릴 수도 있다.

본 발명의 치료제 또는 예방제로서는 본 발명에 관한 상기 유효 성분을 공지된 의약용 담체와 조합하여 제제화한 것을 들 수 있다. 예를 들어, 뼈의 흡수를 저해하는 약제, 예를 들어 에스트로겐, 칼시토닌, 활성형 비타민 D₃, 비스포스포네이트 등과 함께 사용할 수 있다.

본 발명의 치료제 또는 예방제는 통상, 상기 유효 성분을 약학적으로 허용할 수 있는 액상 또는 고체상의 담체와 배합함으로써 제조되고, 원하는 바에 따라 용제, 분산제, 유화제, 완충제, 안정제, 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제 등을 첨가하여, 정제, 과립제, 산제, 분말제, 캡슐제 등의 고형제, 통상적인 액제, 현탁제, 유제 등의 액제로 할 수 있다. 또한, 사용 전에 적당한 담체의 첨가에 의해서 액상으로 할 수 있는 건조품이나, 기타, 외용제로 할 수도 있다.

의약용 담체는 치료제 또는 예방제의 투여 형태 및 제형에 따라 선택할 수 있다. 고체 조성물로 이루어지는 경구제로 하는 경우에는 정제, 환제, 캡슐제, 산제, 세립제, 과립제 등으로 할 수 있고, 예를 들어, 전분, 젖당, 백당, 만니톨, 카르복시메틸셀룰로스, 옥수수 녹말, 무기염 등이 이용된다. 또한 경구제의 조제시에는 추가로 결합제, 붕괴제, 계면 활성제, 윤택제, 유동성 촉진제, 교미제, 착색제, 향료 등을 배합할 수도 있다. 예를 들어, 정제 또는 환제로 하는 경우에는 원하는 바에 따라 자당, 젤라틴, 히드록시프로필셀룰로스 등의 당의 또는 위 용해성 또는 장 용해성 물질의 필름으로 피복해도 된다. 액체 조성물로 이루어지는 경구제로 하는 경우에는 약리학적으로 허용되는 유탁제, 용액제, 현탁제, 시럽제 등으로 할 수 있고, 예를 들어, 정제수, 에탄올 등이 담체로서 이용된다. 또한, 추가로 원하는 바에 따라 습윤제, 현탁제와 같은 보조제, 감미제, 풍미제, 방부제 등을 첨가해도 된다.

한편, 비경구제로 하는 경우에는 통상적인 방법에 따라서 본 발명의 상기 유효 성분을 희석제로서의 주사용 증류수, 생리 식염수, 포도당 수용액, 주사용 식물유, 참기름, 낙화생유, 대두유, 옥수수유, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜 등에 용해 내지 현탁시키고, 원하는 바에 따라, 살균제, 안정제, 등장화제, 무통화제 등을 첨가함으로써 조제할 수 있다. 또한, 고체 조성물을 제조하여, 사용 전에 무균수 또는 무균의 주사용 용매에 용해하여 사용할 수도 있다.

외용제로서는 경피 투여용 또는 경점막 (구강 내, 비강 내) 투여용의, 고체, 반고체상 또는 액상의 제제가 포함된다. 또한, 좌제 등도 포함된다. 예를 들어, 유제, 로션제 등의 유탁제, 외용 팅크제, 경점막 투여용 액제 등의 액상 제제, 유성 연고, 친수성 연고 등의 연고제, 필름제, 테이프제, 파프제 등의 경피 투여용 또는 경점막 투여용 부착제 등으로 할 수 있다.

이상의 각종 제제는 각각 공지된 의약용 담체 등을 이용하여, 적절히 통상적인 방법에 의해 제조할 수 있다. 또한, 이러한 제제에 있어서의 유효 성분의 함유량은 그 투여 형태, 투여 방법 등을 고려하여, 바람직하게는 후술하는 투여량 범위에서 당해 유효 성분을 투여할 수 있는 양이면 특별히 한정되지 않는다. 본 발명의 유효 성분의 함유량으로서는 통상, 0.0001중량% 이상, 바람직하게는 0.001∼80중량%, 보다 바람직하게는 0.01∼70중량% 정도이다. 또, 본 명세서에 있어서, 유효 성분으로서 본 발명의 추출물을 사용하는 경우의 의약, 식품, 음료 또는 사료 중의 함유량, 및 유효 성분의 투여량에 관해서는 모두 본 발명의 추출물의 건조 중량 환산으로 나타내는 것으로 한다.

본 발명의 치료제 또는 예방제는 제제 형태에 따른 적당한 투여 경로로 투여된다. 투여 방법도 특별히 한정되지 않고, 내용, 외용 및 주사를 이용할 수 있다. 주사제는 예를 들어 정맥 내, 근육 내, 피하, 피내 등에 투여할 수 있고, 외용제에서는 예를 들어, 좌제를 그 알맞은 투여 방법에 의해 투여하면 된다.

본 발명의 치료제 또는 예방제로서의 투여량은 그 제제 형태, 투여 방법, 사용 목적 및 당해 치료제 또는 예방제의 투여 대상인 환자의 연령, 체중, 증상에 따라 적절히 설정되며 일정하지 않다. 일반적으로는 제제 중에 함유되는 상기 유효 성분의 투여량으로, 예를 들어 유효 성분으로서 개다시마 유래 푸코이단을 사용하는 경우, 특별히 한정되지 않지만, 인간 (예를 들어 성인) 1일당 0.0001μg∼2000 mg/kg 체중, 바람직하게는 0.001μg∼1000mg/kg 체중, 보다 바람직하게는 0.01μg∼100mg/kg 체중이다. 물론 투여량은 여러 가지의 조건에 따라서 변동되기 때문에, 상기 투여량보다 적은 양으로 충분한 경우도 있고, 또는 범위를 넘게 필요한 경우도 있다. 투여는 원하는 투여량 범위 내에서, 하루에 1회, 또는 수회로 나누어 행해도 된다. 투여 기간도 특별히 한정되지 않는다. 또한, 본 발명의 치료제 또는 예방제는 그대로 경구투여 하는 것 이외에, 임의 음식품에 첨가하여 일상적으로 섭취시킬 수도 있다.

또한, 본 발명은 상기 유효 성분을 포함하는 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제를 제공할 수도 있다. 당해 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제로서는 상기 유효 성분 자체일 수도 있고, 또한 상기 유효 성분을 포함하는 조성물일 수도 있다. BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제는 예를 들어, 상기 유효 성분을 당해 유효 성분과 같은 용도로 사용가능한 다른 성분 등과 배합하여, 상기 치료제 또는 예방제의 제조 방법에 준하여 통상 사용되는 시약의 형태로 제조하면 된다. 이러한 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제에 있어서의 상기 유효 성분의 함유량은 당해 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제의 투여 방법, 사용 목적 등을 고려하여, 본 발명의 원하는 효과가 발현될 수 있는 양이면 되고, 특별히 한정되지 않는다. 본 발명의 유효 성분의 함유량으로서는 통상 0.01∼100중량% 정도이다. 또한, 그 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제의 사용량도, 본 발명의 원하는 효과가 발현될 수 있으면 특별히 한정되지 않는다. 특히, 생체에 투여하여 사용하는 경우에는 바람직하게는 상기 치료제 또는 예방제에 있어서의 유효 성분의 투여량 범위 내에서 유효 성분을 투여할 수 있는 양으로 사용하면 된다. 본 발명의 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제는 BMP 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환에 있어서 유용하다.

또한, 본 발명의 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제는 임플랜트에 함유시켜 사용할 수 있다. 그럼으로써, 예를 들어 골절에 있어서는 당해 임플랜트를 사용함으로써, 뼈접합을 촉진시키고, 그러므로 골절의 치유 또는 임플랜트와 뼈조직의 통합을 가속시킬 수 있다. 또, 여기서 임플랜트란, 외과 수술 과정에서 체내에 적어도 부분적으로 도입되는 기구를 의미하며, 관절, 뼈, 치아, 인대 또는 힘줄 등의 절단이나 손상에 대하여 사용되는 것이다. 또한, 임플랜트는 체내에 영구적으로 남아 있어도 되고, 또한 생물에 의해서 재흡수되어도 된다. 여기서, 본 발명의 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제는 임플랜트의 내부에 함유시켜도 되고, 또한 임플랜트 표면에 코팅하여 함유시켜도 된다. 임플랜트에 있어서의 본 발명의 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제의 함유량으로서는 특별히 한정되지 않지만, 통상 0.01∼80중량% 정도이다.

또한, 본 발명의 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제는 치약에 함유시켜 사용할 수도 있다. 당해 치약은 본 발명의 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용에 의해, 치아의 재석회화를 촉진시킬 수 있다. 치약에 있어서의 본 발명의 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제의 함유량으로서는 특별히 한정되지 않지만, 통상 0.01∼80중량% 정도이다.

또한, 당해 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제는 뼈에 관여하는 질환에 대한 약품의 스크리닝에도 유용하다. 또한 BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제는 뼈의 물리적 변화에 관한 기능 연구에도 유용하다.

또한, 본 발명은 상기 유효 성분을 함유하여 이루어지는 BMP 생성 증강용 또는 뼈형성 촉진용 식품, 음료 또는 사료를 제공한다. 여기서, 함유란, 함유, 첨가 및/또는 희석을 의미한다. 본 발명의 식품, 음료 또는 사료는 그 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용에 의해, BMP 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환의 증상 개선, 예방에 매우 유용하다. 따라서, 본 발명의 식품 또는 음료는 뼈의 건강이 우려되는 분이나 골밀도가 우려되는 분이 섭취하기에 매우 적합하다.

또, 본 명세서에 있어서의 식품, 음료 또는 사료에 있어서, 「함유」 란 식품, 음료 또는 사료 중에 본 발명에서 사용되는 유효 성분이 포함된다는 태양을, 「첨가」 란 식품, 음료 또는 사료의 원료에, 본 발명에서 사용되는 유효 성분을 첨가한다는 태양을, 「희석」 이란 본 발명에서 사용되는 유효 성분에, 식품, 음료 또는 사료의 원료를 첨가한다는 태양을 말하는 것이다.

본 발명의 식품, 음료 또는 사료의 제조법에 특별한 한정은 없다. 예를 들어, 배합, 조리, 가공 등은 일반적인 식품, 음료 또는 사료의 제조법에 따르면 되고, 그들의 제조법에 의해 제조할 수 있고, 얻어진 식품, 음료 또는 사료에 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 본 발명에 관한 상기 유효 성분이 함유되어 있으면 된다.

본 발명의 식품 또는 음료로서는 특별히 한정되지 않고, 예를 들어, 본 발명에 관한 상기 유효 성분이 함유되어 이루어지는, 곡물 가공품 (밀가루 가공품, 전분류 가공품, 프리믹스 가공품, 국수류, 마카로니류, 빵류, 팥소류, 메밀국수류, 밀기울, 미펀, 하루사메, 포장떡 등), 유지 가공품 (가소성 유지, 튀김기름, 샐러드유, 마요네즈류, 드레싱 등), 대두 가공품 (두부류, 된장, 낫토 등), 식육 가공품 (햄, 베이컨, 프레스햄, 소시지 등), 수산제품 (냉동 어육 연제품, 어묵, 치쿠와, 반달형 어묵, 사츠마아게, 츠미레, 하치 어묵, 어육 햄, 소시지, 가다랭이포, 어란 가공품, 수산 통조림, 조림 등), 유제품 (원료유, 크림, 요구르트, 버터, 치즈, 연유, 분유, 아이스크림 등), 야채ㆍ과실 가공품 (페이스트류, 잼류, 절임류, 과실 음료, 야채 음료, 믹스 음료 등), 과자류 (검, 사탕, 초컬릿, 비스켓류, 과자빵류, 케이크, 떡과자, 미과류 등), 알코올 음료 (일본주, 중국주, 와인, 위스키, 소주, 보드카, 브랜디, 진, 럼주, 맥주, 청량 알코올 음료, 과실주, 리큐르 등), 기호 음료 (녹차, 홍차, 우롱차, 커피, 청량 음료, 유산 음료 등), 조미료 (간장, 소스, 식초, 미림 등), 통조림ㆍ병조림ㆍ봉지조림 식품 (소고기 덮밥, 솥밥, 팥 찰밥, 카레, 그 밖의 각종 조리된 식품), 반건조 또는 농축 식품 (리버 페이스트, 그 밖의 스프레드, 메밀국수ㆍ우동 국물, 농축 스프류), 건조 식품 (즉석 국수류, 즉석 카레, 인스턴트 커피, 분말 쥬스, 분말 스프, 즉석 된장국, 조리된 식품, 조리된 음료, 조리된 스프 등), 냉동 식품 (스키야키, 계란찜, 장어구이, 햄버거 스테이크, 슈우마이, 만두, 각종 스틱, 후르츠 칵테일 등), 고형 식품, 액체 식품 (스프 등), 향신료류 등의 농산ㆍ임산 가공품, 축산 가공품, 수산 가공품 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 식품으로서, 특히 검, 사탕류 등이 바람직하다. 이러한 식품은 입안에서 일정 시간 저작(咀嚼)된다는 점에서, 그것들에 본 발명의 유효 성분이 함유되어 있으면, 본 발명의 유효 성분에 의해 나타나는 효과, 예를 들어 치주 조직의 재생 효과, 치아의 재석회화 촉진 효과를 보다 효과적으로 발현시킬 수 있다.

본 발명의 식품 또는 음료에는 상기 유효 성분이 단독 또는 복수 함유, 첨가 및/또는 희석되어 있고, 그 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 발현하기 위한 필요량이 포함되어 있으면 특별히 그 형상은 한정되지 않고, 타블렛상, 과립상, 캡슐상 등과 같은 형상의 경구적으로 섭취가능한 형상물도 포함된다.

본 발명의 식품 또는 음료 중의 상기 유효 성분의 함유량은 특별히 한정되지 않고, 그 관능과 활성 발현의 관점에서 적절히 선택할 수 있지만, 예를 들어 유효 성분으로서 개다시마 유래 푸코이단을 사용하는 경우, 특별히 한정되지 않지만, 식품 100중량% 당 0.0001중량% 이상, 바람직하게는 0.001∼50중량%, 보다 바람직하게는 0.006∼10중량% 이고, 음료 100중량% 당 0.0001중량% 이상, 바람직하게는 0.001∼50중량%, 보다 바람직하게는 0.006∼10중량% 이다. 또한 본 발명의 식품 또는 음료는 바람직하게는 그들에 함유되는 유효 성분이, 예를 들어 개다시마 유래 푸코이단을 유효 성분으로 한 경우, 인간 (예를 들어 성인) 1일당 0.0001μg∼2000mg/kg 체중, 바람직하게는 0.001μg∼1000mg/kg 체중, 보다 바람직하게는 0.01μg∼100mg/kg 체중이 되도록 섭취하면 된다. 물론 섭취량은 여러 가지의 조건에 따라서 변동되므로, 상기 섭취량보다 적은 양으로 충분한 경우도 있고, 또는 범위를 넘게 필요한 경우도 있다.

또한, 본 발명은 상기 유효 성분을 함유, 첨가 및/또는 희석하여 이루어지는, BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 생물용 사료를 제공하는 것이고, 또한 별도의 일 태양으로서, 상기 유효 성분을 생물에게 투여하는 것을 특징으로 하는 생물의 사육 방법도 제공한다. 또한, 본 발명의 별도의 일 태양으로서, 상기 유효 성분을 함유하는 것을 특징으로 하는 생물 사육용 제가 제공된다.

이들 발명에 있어서, 생물이란 예를 들어 양식 동물, 애완 동물 등이고, 양식 동물로서는 가축, 실험 동물, 가금, 어류, 갑각류 또는 조개류가 예시된다. 사료로서는 몸상태의 유지 및/또는 개선용 사료가 예시된다. 생물 사육용 제로서는 침지용 제, 사료 첨가제, 음료용 첨가제가 예시된다.

이들 발명에 의하면, 그들을 적용하는 상기 예시한 바와 같은 생물에 있어서, 본 발명에 사용되는 상기 유효 성분의 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용에 기초하여, 본 발명의 상기 치료제 또는 예방제에 의한 것과 동일한 효과의 발현을 기대할 수 있다. 즉, 당해 생물에 있어서의 뼈형성 단백질 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환의 치료 또는 예방 효과 등이 발휘된다.

본 발명에 사용되는 상기 유효 성분은 통상, 예를 들어 개다시마 유래 푸코이단을 유효 성분으로 한 경우, 대상 생물 1일당 0.0001μg∼2000mg/kg 체중, 바람직하게는 0.001μg∼1000mg/kg 체중, 보다 바람직하게는 0.01μg∼100mg/kg 체중으로 섭취시키면 된다. 물론 투여량은 여러 가지의 조건, 예를 들어 본 발명의 추출물을 사용한 경우, 사용한 용매의 사용량 등에 따라서도 변동되기 때문에, 상기 투여량보다 적은 양으로 충분한 경우도 있고, 또는 범위를 넘게 필요한 경우도 있다. 투여는 예를 들어, 당해 유효 성분을 대상 생물에게 제공하는 인공 배합 사료의 원료 중에 첨가 혼합해 두거나, 인공 배합 사료의 분말 원료와 혼합한 후, 그 밖의 원료에 추가로 첨가 혼합하여 사용함으로써 사용할 수 있다. 또한, 상기 유효 성분의 사료 중의 함유량은 특별히 한정되지 않고, 목적에 따라서 적절히 설정하면 되지만, 예를 들어 유효 성분으로서 개다시마 유래 푸코이단을 사용하는 경우, 특별히 한정되지 않지만, 사료 100중량% 당 0.0001중량% 이상, 바람직하게는 0.001∼50중량%, 보다 바람직하게는 0.006∼10중량% 이다.

본 발명의 사료의 제조법에 특별한 한정은 없고, 또한 배합도 일반적인 사료에 준하는 것이면 되고, 제조된 사료 중에 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 본 발명에 관한 상기 유효 성분이 포함되어 있으면 된다.

본 발명을 적용할 수 있는 생물로서는 한정은 없지만, 양식 동물로서는 말, 소, 돼지, 양, 염소, 낙타, 라마 등의 가축, 마우스, 래트, 몰모트, 토끼 등의 실험 동물, 닭, 집오리, 칠면조, 타조 등의 가금, 애완 동물로서는 개, 고양이 등을 들 수 있고, 널리 적용할 수 있다.

BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 본 발명에 사용되는 상기 유효 성분을 포함하여 이루어지는 사료를 섭취시키는 것, 또는 BMP 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 본 발명에 사용되는 상기 유효 성분의 함유액 (예를 들어, 침지용 제를 첨가한 수욕 등) 에 대상 생물을 침지함으로써, 가축, 실험 동물, 가금, 애완 동물 등의 몸상태를 양호하게 유지하거나, 또는 개선시키거나 할 수 있다. 이들은 본 발명의 생물의 사육 방법의 일 태양을 이룬다.

본 발명에서 사용되는 상기 유효 성분은 그 작용 발현에 있어서의 유효량을 투여하더라도 독성은 관찰되지 않는다. 예를 들어 경구 투여의 경우, 개다시마 유래 푸코이단을 1g/kg 체중으로 마우스에게 단회 투여하더라도 사망예는 관찰되지 않는다. 또한, 상기 유효 성분은 래트에 경구 투여에 있어서 1g/kg 체중을 경구 단회 투여하더라도 사망예는 관찰되지 않는다.

발명의 개시

본 발명의 목적은 간편히 섭취가능한, 식품 소재, 의약품 소재로서 적합한 뼈형성 단백질 생성 증강 작용 또는 뼈형성 촉진 작용을 갖는 조성물을 개발하여, 당해 조성물을 사용한, 의약, 식품, 음료 또는 사료를 제공하는 데에 있다.

즉, 본 발명은

〔1〕 (a) 산성 당, (b) 폴리아크릴산, (c) 클로로겐산 및 (d) 클로로겐산의 산화 처리물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 화합물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 뼈형성 단백질 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환의 치료제 또는 예방제,

〔2〕 산성 당이 산성 다당, 산성 올리고당, 산성 단당 및 그들의 분해물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당인 상기 〔1〕 에 기재된 치료제 또는 예방제,

〔3〕 산성 당이 푸코이단, 헤파린, 덱스트란 황산, 콘드로이틴 황산 B, 펙틴산, 스피루리나 유래 산성 다당, 푸코이단 분해물, 카라기난 λ, 카라기난 κ, 카라기난 ι, 저분자 헤파린, 헤파란 황산 및 클로렐라 유래 산성 다당으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당인 상기 〔1〕에 기재된 치료제 또는 예방제,

〔4〕 (a) 산성 당, (b) 폴리아크릴산, (c) 클로로겐산 및 (d) 클로로겐산의 산화 처리물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 화합물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 뼈형성 단백질 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제,

〔5〕 산성 당이 산성 다당, 산성 올리고당, 산성 단당 및 그들의 분해물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당인 상기 〔4〕 에 기재된 뼈형성 단백질 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제,

〔6〕 산성 당이 푸코이단, 헤파린, 덱스트란 황산, 콘드로이틴 황산 B, 펙틴산, 스피루리나 유래 산성 다당, 푸코이단 분해물, 카라기난 λ, 카라기난 κ, 카라기난 ι, 저분자 헤파린, 헤파란 황산 및 클로렐라 유래 산성 다당으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당인 상기 〔4〕 에 기재된 뼈형성 단백질 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제,

〔7〕 (a) 산성 당, (b) 폴리아크릴산, (c) 클로로겐산 및 (d) 클로로겐산의 산화 처리물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 화합물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 뼈형성 단백질 생성 증강용 또는 뼈형성 촉진용 식품, 음료 또는 사료,

〔8〕 산성 당이 산성 다당, 산성 올리고당, 산성 단당 및 그들의 분해물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당인 상기 〔7〕 에 기재된 뼈형성 단백질 생성 증강용 또는 뼈형성 촉진용 식품, 음료 또는 사료,

〔9〕 산성 당이 푸코이단, 헤파린, 덱스트란 황산, 콘드로이틴 황산 B, 펙틴산, 스피루리나 유래 산성 다당, 푸코이단 분해물, 카라기난 λ, 카라기난 κ, 카라기난 ι, 저분자 헤파린, 헤파란 황산 및 클로렐라 유래 산성 다당으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당인 상기 〔7〕 에 기재된 뼈형성 단백질 생성 증강용 또는 뼈형성 촉진용 식품, 음료 또는 사료,

〔10〕 조류(藻類) 유래의 추출물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 뼈형성 단백질 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환의 치료제 또는 예방제,

〔11〕 조류 유래의 추출물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 뼈형성 단백질 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제, 및

〔12〕 조류 유래의 추출물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 뼈형성 단백질 생성 증강용 또는 뼈형성 촉진용 식품, 음료 또는 사료에 관한 것이다.

이하, 실시예를 들어, 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하겠지만, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다. 또, 실시예에 있어서의 % 는 특별한 언급이 없는 한 중량% 를 의미한다.

참고예 1

(1) 개다시마를 충분 건조 후, 건조물 20㎏ 을 자유 분쇄기 (나라 기계 제작소 제) 에 의해 분쇄하였다. 수도물 900리터에 염화칼슘 2수화물 (닛폰 소다사 제) 7.3kg 을 용해하고, 이어서 개다시마 분쇄물 20kg 을 혼합하였다. 액온 12℃ 로부터 액온 90℃ 가 될 때까지 수증기를 불어넣어 40분간 승온시키고, 이어서 교반 하 90∼95℃ 에서 1시간 보온하고, 이어서 냉각시켜 냉각물 1100리터를 얻었다. 이어서 고액 분리 장치 (웨스트팔리아 세퍼레이터사 제 CNA 형) 를 사용하여 냉각물을 고액 분리하고, 약 900리터의 고액 분리 상청액을 조제하였다. 고액 분리 상청액 360리터를 다이셀사 제 FE10-FC-FUS 0382 (분획 분자량 3만) 를 사용하여 20리터까지 농축하였다. 이어서 수도물을 20리터 첨가하고, 또한 20리터까지 농축시키는 조작을 5회 실시하고, 탈염 처리하여, 개다시마 유래의 추출액 25리터를 조제하였다. 그 추출액 1리터를 동결 건조시켜 개다시마 유래 푸코이단 건조물 13g 을 얻었다.

(2) 참고예 1-(1) 에 기재된 푸코이단 건조물 7g 을, 50mM 의 염화나트륨과 10% 의 에탄올을 포함하는 20mM 의 이미다졸 완충액 (pH 8.0) 700ml 에 용해하고, 원심 분리에 의해 불용물을 제거하였다. DEAE-셀룰로파인 A-800 칼럼 (φ11.4cm×48cm) 을 동 완충액으로 평형화하고, 원심 분리 상청을 어플라이 후, 동 완충액으로 씻고, 염화나트륨 50mM 로부터 1.95M 의 농도 구배에 의해 용출시켰다 (1 프랙션: 250ml). 페놀황산법 및 카르바졸 황산법으로, 총 당량 및 우론산 함량을 구하고, 용출 순으로 프랙션 43∼49, 프랙션 50∼55, 프랙션 56∼67 의 획분을 얻었다. 다음으로, 이들 획분을 전기 투석에 의해 탈염 후 동결 건조시키고, 프랙션 43∼49 로부터 I 획분 (340mg), 프랙션 50∼55 로부터 II 획분 (870mg), 프랙션 56∼67 로부터 III 획분 (2.64g) 을 각각 조제하였다. 도 1 에 개다시마 유래 푸코이단의 DEAE-셀룰로파인 A-800 칼럼 용출 패턴을 나타낸다. 도 1 에 있어서 세로축은 카르바졸황산법에서의 530nm 의 흡광도 (도면 중 검은 동그라미), 페놀황산법에서의 480nm 의 흡광도 (도면 중 흰 동그라미), 및 전도도 (mS/cm: 도면 중 흰 사각), 가로축은 프랙션 번호를 나타낸다.

참고예 2

(1) 알테로모나스 sp. SN-1009 (CCRC 910070) 를, 글루코스 0.25%, 펩톤 1.0%, 효모 엑기스 0.05% 를 포함하는 인공 해수 (자마린 래버러토리사 제) pH 8.2 로 이루어지는 배지 600ml 를 분주하여 살균한 (120℃, 20분간) 2 리터의 삼각 플라스크에 접종하고, 25℃ 에서 26시간 배양하여 종(種)배양액으로 하였다. 펩톤 1.0%, 효모 엑기스 0.02%, 하기 참고예 2-(2) 에 기재된 황산화 다당 0.2%, 및 기포 제거제 (신에츠 카가쿠 공업사 제 KM70) 0.01% 를 포함하는 인공 해수 pH 8.0 으로 이루어지는 배지 20리터를 30리터 용량의 발효기 (jar fermentor) 에 넣어 120℃, 20분간 살균하였다. 냉각 후, 상기 종배양액 600ml 를 접종하고, 24℃ 에서 24시간, 매분 10리터의 통기량과 매분 250회전의 교반 속도의 조건으로 배양하였다. 배양 종료 후, 배양액을 원심 분리하여 균체 및 배양 상청을 얻었다. 얻어진 배양 상청을 배제 분자량 1만의 홀로파이버를 장착시킨 한외 여과기에 의해 농축 후 85% 포화 황산암모늄 염석하고, 발생된 침전을 원심 분리에 의해 모아, 십분의 일 농도의 인공 해수를 포함하는 20mM 의 트리스-염산 완충액 (pH 8.2) 에 대하여 충분히 투석하여 600ml 의 황산화 다당에 선택적으로 작용하는 엔도형 황산화 다당 분해 효소액을 조제하였다.

(2) 건조시킨 개다시마 2kg 을 직경 1mm 의 스크린을 장착시킨 커터밀 (마스코 산업사 제) 에 의해 분쇄하고, 얻어진 다시마의 칩을 20리터의 80% 에탄올 중에 현탁하고, 25℃ 에서 3시간 교반하고, 여과지로 여과 후, 잔류물을 충분히 세정하였다. 얻어진 잔류물을, 95℃ 로 가온한 40리터의 50mM 의 염화나트륨을 포함하는 20mM 인산나트륨 완충액 pH 6.5 에 현탁하고, 때때로 교반하면서 95℃ 에서 2시간 처리하여 황산화 다당을 추출하였다. 추출액 중의 현탁물을 여과하여 여과액을 조제한 후, 여과 잔류물을 3.5리터의 100mM 염화나트륨에 의해 세정하고, 추가로 여과액을 얻었다. 양 여과액을 합친 후, 30℃ 까지 온도를 낮추고, 3000U 의 알긴산리아제 (나가세 생화학 공업사 제) 를 첨가 후, 에탄올을 4리터 첨가하여 25℃ 에서 24시간 교반하였다. 다음으로 원심 분리하고, 얻어진 상청을 배제 분자량 10만의 홀로파이버를 구비한 한외 여과기에 의해 4리터로 농축하고, 또한 10% 의 에탄올을 포함하는 100mM 의 염화나트륨에 의해, 착색성 물질이 여과되지 않게 될 때까지 한외 여과를 계속하였다. 비여과액 속에 생긴 침전은 원심 분리에 의해 제거하고, 이 상청을 5℃ 까지 온도를 낮추고, 0.5N 염산에 의해 pH 를 2.0 으로 한 후, 발생된 단백질 등의 침전을 원심 분리에 의해 제거하고, 얻어진 상청을 신속하게 1N 수산화 나트륨에 의해 pH 를 8.0 으로 하였다. 다음으로, 배제 분자량 10만의 홀로파이버를 장착시킨 한외 여과기에 의해 한외 여과하고, 20mM 염화나트륨 pH 8.0 에 의해 완전히 용매 치환 후, 다시 pH 를 8.0 으로 하여 원심 분리 후, 동결 건조시켜, 약 95g 의 황산화 다당을 조제하였다.

(3) 건조시킨 개다시마 2kg 을 직경 1mm 의 스크린을 장착시킨 커터밀에 의해 분쇄하고, 얻어진 다시마의 칩을 20리터의 80% 에탄올 중에 현탁하고, 25℃ 에서 3시간 교반하고, 여과지로 여과 후, 잔류물을 충분히 세정하였다. 얻어진 잔류물을, 30ml 의 상기 참고예 2-(1) 에서 조제한 엔도형 황산화 다당 분해 효소액, 10% 의 에탄올, 100mM 의 염화나트륨, 50mM 의 염화칼슘, 및 50mM 의 이미다졸을 포함하는 20리터의 완충액 (pH 8.2) 에 현탁하고, 25℃ 에서 48시간 교반하였다. 이 현탁액을 그물코 직경 32μm 의 스테인리스 철망으로 여과하고, 잔류물을 50mM 의 염화칼슘을 포함하는 10% 의 에탄올로 세정하였다. 또한 그 잔류물을 10리터의 50mM 염화칼슘을 포함하는 10% 의 에탄올 속에 현탁하고, 3시간 교반 후, 스테인리스 철망으로 여과, 세정하였다. 또한 그 잔류물을 동 조건으로 현탁 후, 16시간 교반하고, 직경 32μm 의 스테인리스 철망으로 여과, 세정하였다. 이렇게 하여 얻어진 여과액 및 세정액을 모아, 배제 분자량 3000 의 홀로파이버를 장착시킨 한외 여과기에 의해 한외 여과하고, 여과액과 비여과액으로 분리하였다. 이 여과액을 로터리 증발기로 약 3리터로 농축 후, 원심 분리하여 상청을 얻었다. 얻어진 상청을 배제 분자량 300 의 막을 장착시킨 전기 투석기에 의해 탈염하고, 이 용액에 0.1M 가 되도록 아세트산칼슘을 첨가하고, 발생된 침전을 원심 분리에 의해 제거하였다. 이 상청을 미리 50mM 의 아세트산칼슘에 의해 평형화시킨 DEAE-셀룰로파인 (수지량 4리터) 에 제공하여, 50mM 의 아세트산칼슘 및 50mM 의 염화나트륨으로 충분히 세정 후, 50mM∼800mM 의 염화나트륨의 그래디언트에 의해 용출시켰다. 이 때의 분취량은 1개당 500ml 로 행하였다. 분취한 획분을 셀룰로스아세테이트막 전기 영동법 [애널리티컬 바이오케미스트리 (Analytical Biochemistry), 제37권, 제197∼202페이지 (1970)] 에 의해 분석한 바 염화나트륨 농도가 약 0.4M 로 용출되는 황산화당 (프랙션 넘버 63 부근) 이 균일하였다. 그래서, 우선 프랙션 넘버 63 의 액을 150ml 로 농축 후, 농도가 4M 이 되도록 염화나트륨을 첨가하고, 미리 4M 의 염화나트륨에 의해 평형화한 phenyl-셀룰로파인 (수지량 200ml) 에 제공하여, 4M 의 염화나트륨에 의해 충분히 세정하였다. 비흡착성의 황산화당 획분을 모아, 배제 분자량 300 의 막을 장착시킨 전기 투석기에 의해 탈염하여 탈염액 505ml 를 얻었다. 얻어진 탈염액 중 40ml 를 10% 의 에탄올을 포함하는 0.2M 의 염화나트륨에 의해서 평형화시킨 셀룰로파인 GCL-90 의 칼럼 (4.1cm×87cm) 에 제공하여, 겔여과를 행하였다. 분취는 1프랙션당 9.2ml 로 행하였다. 전체 프랙션에 대해 총 당량의 분석을 페놀황산법 〔애널리티컬 케미스트리 (Analytical Chemistry), 제28권, 제350페이지 (1956)〕 에 의해 행하였다.

이 결과, 황산화당은 1개의 피크를 형성하였으므로, 그 피크의 중앙 부분, 프랙션 넘버 63∼70 를 모아, 배제 분자량 300 의 막을 장착시킨 전기 투석기에 의해 탈염 후, 동결 건조시켜, 112mg 의 하기 식 (4) 로 표현되는 화합물의 건조품을 얻었다. 이하, 그 화합물을 7-12SFd-F 라고 한다.

참고예 3

건조 스피루리나 분말 (발매: (주) 스피루리나 연구소) 20g 을 호모지나이저 (닛폰세이키사 제) 에 넣고, 400ml 의 아세톤을 첨가하여, 8000rpm, 10분간 호모지나이즈하였다. 호모지네이트를 여과지로 여과하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 상기 조작과 동일하게 아세톤 세정을 3회 반복하여 아세톤 세정 잔류물을 얻었다. 아세톤 세정 잔류물을 아세톤 세정과 동일하게, 90% 에탄올로 4회, 80% 에탄올로 4회 세정하여 에탄올 세정 잔류물을 얻었다. 에탄올 세정 잔류물에 600ml 의 100mM 의 염화나트륨과 10% 에탄올을 포함하는 30mM 의 인산 완충액 (pH 7.0) 을 첨가하여 실온에서 18시간 교반하였다. 이 혼합물을 10000rpm 으로 40분간 원심 분리하여 상청을 얻었다. 상청에 혼입된 불용물을 여과지로 여과하여 조추출물 (여과액) 을 얻었다. 얻어진 조추출물을 배제 분자량 1만의 홀로파이버를 장착시킨 한외 여과 장치로 300ml 까지 농축시킨 후, 2리터의 10% 에탄올을 포함하는 100mM 염화나트륨을 첨가하면서 한외 여과하였다. 그 후, 10% 에탄올 및 50mM 의 염화나트륨을 포함하는 10mM 이미다졸-염산 완충액 (pH 7.0) 에 용매 치환하고, 스피루리나 고분자 획분을 240ml 얻었다.

스피루리나 고분자 획분을 10% 에탄올 및 50mM 염화나트륨을 포함하는 10mM 이미다졸-염산 완충액 (pH 7.0) 으로 평형화한 DEAE-셀룰로파인 A-800 칼럼 (φ3x14.2cm) 에 첨가하고, 같은 완충액 360ml 로 칼럼을 세정한 후, 0.05M (200ml) 부터 2M (200ml) 까지의 염화나트륨의 그래디언트에 의해 용출시켰다. 용출액은 1개당 10ml 로 분획하였다. 용출 획분 중, 프랙션 No.14 로부터 30 까지를 스피루리나 산성 다당 획분-I (SSP-I), 프랙션 No.69 부터 77 까지를 스피루리나산성 다당 획분-II (SSP-II), 프랙션 No.78 부터 83 까지를 스피루리나 산성 다당 획분-III (SSP-III), 프랙션 No.84 부터 99 까지를 스피루리나 산성 다당 획분-IV (SSP-IV) 라고 각각 명명하였다. SSP-I, SSP-II, SSP-III 및 SSP-IV 를 증류수에 대하여 충분히 투석하고 동결 건조시킨 바, 각각 200mg, 260mg, 100mg 및 60mg 이었다.

참고예 4

건조 클로렐라 분말 20g 을 호모지나이저 (닛폰세이키사 제) 에 넣고, 400ml 의 아세톤을 첨가하여, 8000rpm, 10분간 호모지나이즈하였다. 호모지네이트를 여과지로 여과하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 이상의 조작과 같이 아세톤 세정을 3회 반복하여 아세톤 세정 잔류물을 얻었다. 아세톤 세정 잔류물을 아세톤 세정과 동일하게, 90% 에탄올로 4회, 80% 에탄올로 4회 세정하여, 에탄올 세정 잔류물을 얻었다.

에탄올 세정 잔류물에 600ml 의 100mM 의 염화나트륨과 10% 에탄올을 포함하는 30mM 의 인산 완충액 (pH 7.0) 을 첨가하여 실온에서 18시간 교반하였다. 이 혼합물을 10000rpm 으로 40분간 원심 분리하여 상청을 얻었다. 상청에 혼입된 불용물을 여과지로 여과하여 조추출물 (여과액) 을 얻었다. 얻어진 조추출물을 배제 분자량 1만의 홀로파이버를 장착시킨 한외 여과 장치로 310ml 까지 농축한 후, 3리터의 10% 에탄올을 포함하는 100mM 염화나트륨을 첨가하면서 한외 여과하였다. 그 후, 10% 에탄올 및 50mM 의 염화나트륨을 포함하는 10mM 이미다졸-염산 완충액 (pH 7.0) 으로 용매 치환하여 클로렐라 고분자 획분을 203ml 얻었다.

클로렐라 고분자 획분을 10% 에탄올 및 50mM 염화나트륨을 포함하는 10mM 이미다졸-염산 완충액 (pH 7.0) 으로 평형화한 DEAE-셀룰로파인 A-800 칼럼 (φ3x14.2cm) 에 첨가하고, 동일한 완충액 297ml 로 칼럼을 세정한 후, 0.05M (200ml) 부터 2M (200ml) 까지의 염화나트륨의 그래디언트에 의해 용출시켰다. 용출액은 1개당 10ml 로 분획하였다. 용출 분획 중, 프랙션 No. 63 부터 68 까지를 클로렐라 황산화 다당 획분-I (CPS-I) 이라고 명명하고, 프랙션 No. 69 부터 75 까지를 클로렐라 황산화 다당 획분-II (CPS-II) 이라고 명명하였다. CSP-I 및 CSP-II 를 증류수에 대하여 충분히 투석하고, 동결 건조시킨 바, 각각 140mg 및 200mg 이었다.

참고예 5

클로로겐산을 100mM 의 농도가 되도록 100mM 탄산나트륨 완충액 (pH 9) 에 용해하였다. 이 용액에 12시간, 페리스타 펌프를 통하여 공기를 보내줌으로써 클로로겐산의 산화 처리물을 조제하였다.

실시예 1

인간 골육종 세포주 HuO9 를 10% 소 태아 혈청 (바이오 위타카사 제) 을 포함하는 DMEM 배지 (바이오 위타카사 제) 에 1×10⁵ 세포/ml 가 되도록 현탁하고, 96웰 플레이트에 0.1ml 씩 뿌려 무균적으로 배양하였다. 2일간 배양 후, 새로운 배지에 바꿔 놓았다. 이것에 참고예 1-(1) 에서 얻어진 개다시마 유래 푸코이단을 시료로서 첨가하여 48시간 배양하였다. 다음으로, 배양액 중의 뼈형성 단백질-2 (BMP-2) 의 농도를 엔자임 이뮤노 어세이법 (BMP-2 Immunoassay: GT 사 제) 으로 측정하였다. 대조는 시료 무첨가로 하고, 이 세포 배양액 중의 BMP-2 농도 (세포의 BMP-2 생성량) 를 100% 로 하여, BMP-2 생성 증강 활성을 나타내었다. 시료의 첨가량은 표 1 에 나타내는 바와 같이 하였다. 그 결과, 참고예 1-(1) 에서 얻어진 개다시마 유래 푸코이단이 농도 의존적으로 BMP-2 의 생성을 증강하는 것이 밝혀졌다. 표 1 에 그 결과를 나타낸다.

개다시마 유래 푸코이단의 BMP-2 생성 증강 작용
첨가량(μg/ml)	BMP-2 생성 증강 활성(%)
05001000	1002203.02259.6
단, 대조의 BMP-2생성량은 0.120ng/ml 이었다.

실시예 2

참고예 1-(1) 에서 조제한 개다시마 유래 푸코이단, 참고예 1-(2) 에서 조제한 푸코이단 I 획분, 푸코이단 II 획분, 푸코이단 III 획분, 참고예 2-(3) 에서 조제한 7-12SFd-F, 참고예 3 에서 조제한 스피루리나 산성 다당 획분 SSP-I, III, IV 및 헤파린 (와코쥰야쿠사 제), 덱스트란 황산 (시그마사 제), 콘드로이틴 황산 B (생화학 공업사 제), 펙틴산 (나카라이테스크사 제) 의 BMP-2 생성 증강 활성을 실시예 1 과 동일한 방법으로 조사하였다. 시료의 첨가량은 표 2, 3 에 나타내는 바와 같이 하였다. 그 결과, 개다시마 유래 푸코이단, 푸코이단 I 획분, 푸코이단 II 획분, 푸코이단 III 획분, 7-12 SFd-F, 스피루리나 산성 다당 획분 SSP-I, III, IV, 헤파린, 덱스트란 황산, 콘드로이틴 황산 B, 펙틴산이 농도 의존적으로 BMP-2 의 생성을 증강하는 것이 밝혀졌다. 표 2, 3 에 그 결과를 나타낸다.

시료명	첨가량 (μg/ml)	BMP-2 생성 증강 활성 (%)
개다시마 유래 푸코이단	10100	16742072
푸코이단 I 획분	10100	11041391
푸코이단 II 획분	10100	13411578
푸코이단 III 획분	10100	10641596
SSP-I	10100	378.91811
SSP-III	100	504.4
SSS-IV	10100	12571779
헤파린	10100	435.11339
덱스트란 황산	10100	27892984
단, 개다시마 유래 푸코이단, 푸코이단 I 획분, 푸코이단 II 획분, 푸코이단 III 획분, SSP-I, III, IV, 헤파린, 덱스트란 황산의 대조의 BMP-2 생성량은 0.110ng/ml 이었다.

시료명	첨가량 (μg/ml)	BMP-2 생성 증강 활성 (%)
7-12 SFd-F	5001000	302.5620.6
콘드로이틴 황산 B	5001000	524.5846.2
펙틴산	5001000	220.3242.1
단, 7-12 SFd-F 의 대조의 BMP-2 생성량은 0.201ng/ml, 콘드로이틴 황산 B, 펙틴산의 대조의 BMP-2 생성량은 0.130ng/ml 이었다.

실시예 3

카라기난 λ (시그마사 제), 카라기난 κ (시그마사 제), 카라기난 ι (시그마사 제), 저분자 헤파린 (CELSUS LABORATORIES사 제) 의 BMP-2 생성 증강 활성을 실시예 1 과 동일한 방법으로 조사하였다. 시료의 첨가량은 표 4 에 나타내는 바와 같이 하였다. 그 결과, 카라기난 λ, 카라기난 κ, 카라기난 ι, 저분자 헤파린이 농도 의존적으로 BMP-2 의 생성을 증강하는 것이 밝혀졌다. 표 4 에 그 결과를 나타낸다.

시료명	첨가량 (μg/ml)	BMP-2 생성 증강 활성 (%)
카라기난 λ	10100	359.6485.5
카라기난 κ	10100	219.3263.3
카라기난 ι	10100	201.2517.5
저분자 헤파린	1001000	390.0807.1
단, 카라기난 λ, 카라기난 κ, 카라기난 ι 의 대조의 BMP-2 생성량은 0.083ng/ml, 저분자 헤파린의 대조의 BMP-2 생성량은 0.070ng/ml 이었다.

실시예 4

폴리아크릴산 (평균 분자량 5000, 250000, 1000000: 와코쥰야쿠사 제) 의 BMP-2 생성 증강 활성을 실시예 1 과 동일한 방법으로 조사하였다. 시료의 첨가량은 표 5 에 나타내는 바와 같이 하였다. 그 결과, 폴리아크릴산 (평균 분자량 5000, 250000, 1000000) 이 농도 의존적으로 BMP-2 의 생성을 증강하는 것이 밝혀졌다. 표 5 에 그 결과를 나타낸다.

시료명	첨가량 (μg/ml)	BMP-2 생성 증강 활성 (%)
폴리아크릴산(평균 분자량 5000)	10100	191.3321.7
폴리아크릴산(평균 분자량 250000)	10100	310.9426.1
폴리아크릴산(평균 분자량 1000000)	10100	328.3371.7
단, 대조의 BMP-2 생성량은 0.046ng/ml 이었다.

실시예 5

클로로겐산 (토쿄 화성공업사 제) 과 참고예 5 에서 조제한 클로로겐산의 산화 처리물의 BMP-2 생성 증강 활성을 실시예 1 과 동일한 방법으로 조사하였다. 시료의 첨가량은 표 6 에 나타내는 바와 같이 하였다. 그 결과, 클로로겐산, 클로로겐산의 산화 처리물이 농도 의존적으로 BMP-2 의 생성을 증강하는 것이 밝혀졌다. 표 6 에 그 결과를 나타낸다.

시료명	첨가량 (μg/ml)	BMP-2 생성 증강 활성 (%)
클로로겐산	88.6177.2	319.5320.4
클로로겐산의 산화 처리물	88.6177.2	612.2839.0
단, 대조의 BMP-2 생성량은 0.041ng/ml 이었다.

실시예 6

마우스 배아세포주 C3H10T1/2 를 10% 소 태아 혈청을 포함하는 DMEM 배지에 3×10⁴ 세포/ml 가 되도록 현탁하고, 96웰 플레이트에 0.1ml씩 뿌려 무균적으로 배양하였다. 3일간 배양 후, 새로운 배지에 바꿔 놓았다. 이것에 헤파란 황산, 참고예 4 에서 얻어진 클로렐라 황산화 다당 획분 CSP-I, CSP-II 를 시료로서 첨가하여 7일간 배양하였다. 계속해서, C3H10T1/2 세포의 골아세포로의 분화를 알칼리성 포스파타제 활성의 세포에서의 증가를 지표로 하여 측정하였다. 세포를 PBS 로 1회 세정하고, 반응 기질액 (100mM 디에탄올아민 완충액 pH 10.0, 2mM 염화마그네슘, 1mM p-니트로페닐인산) 100μl 를 첨가하여 37℃ 에서 30분간 반응시켰다. 다음으로, 0.2N 의 수산화 나트륨 100μl 를 첨가하여 반응을 정지시키고, 유리된 p-니트로페놀량을 흡광도 405nm 로 측정하였다. 대조는 시료 무첨가로 하고, 대조의 알칼리성 포스파타제 활성을 100% 로 하여, 시료를 첨가한 경우의 알칼리성 포스파타제 활성을 나타냈다. 이러한 활성은 골아세포로의 분화 유도 활성을 나타낸다. 시료의 첨가량은 표 7 에 나타내는 바와 같이 하였다. 실험은 2번 연속 실시하여 그 평균치를 채용하였다. 그 결과, 헤파란 황산, CSP-I, CSP-II 가 농도 의존적으로 골아세포로의 분화를 유도하는 것이 밝혀졌다. 표 7 에 그 결과를 나타낸다.

시료명	첨가량 (μg/ml)	알칼리성 포스파타제 활성 (%)
헤파란 황산	10100	132.2178.0
CSP-I	10100	154.2228.0
CSP-II	10100	113.6164.4

본 발명에 의해, (a) 산성 당, (b) 폴리아크릴산, (c) 클로로겐산 및 (d) 클로로겐산의 산화 처리물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 화합물을, 또는 조류 유래의 추출물을 유효 성분으로서 함유하는 BMP 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환의 치료용 또는 예방용 의약, BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제, BMP 생성 증강용 또는 뼈형성 촉진용 식품, 음료 또는 사료가 제공된다. 그 의약은 골다공증이나 골절 등의 뼈에 관련되는 질환의 치료제 또는 예방제로서 유용하다. 또한, BMP 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제는 골절 치료나 치아의 치료에 사용되는 임플랜트나 치약의 성분으로서 사용할 수 있다. 또한, 당해 제는 뼈의 기능 연구, 뼈에 관여하는 질환에 대한 약품의 스크리닝에도 유용하다. 또한, 그 식품 또는 음료는 일상의 음식품으로서 섭취함으로써, BMP 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환의 증상 개선 등이 가능해진다.

Claims

(a) 산성 당, (b) 폴리아크릴산, (c) 클로로겐산 및 (d) 클로로겐산의 산화 처리물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 화합물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 뼈형성 단백질 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환의 치료제 또는 예방제.
제 1 항에 있어서, 산성 당이 산성 다당, 산성 올리고당, 산성 단당 및 그들의 분해물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당인 치료제 또는 예방제.
제 1 항에 있어서, 산성 당이 푸코이단, 헤파린, 덱스트란 황산, 콘드로이틴 황산 B, 펙틴산, 스피루리나 유래 산성 다당, 푸코이단 분해물, 카라기난 λ, 카라기난 κ, 카라기난 ι, 저분자 헤파린, 헤파란 황산 및 클로렐라 유래 산성 다당으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당인 치료제 또는 예방제.
(a) 산성 당, (b) 폴리아크릴산, (c) 클로로겐산 및 (d) 클로로겐산의 산화 처리물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 화합물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 뼈형성 단백질 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제.
제 4 항에 있어서, 산성 당이 산성 다당, 산성 올리고당, 산성 단당 및 그들의 분해물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당인 뼈형성 단백질 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제.
제 4 항에 있어서, 산성 당이 푸코이단, 헤파린, 덱스트란 황산, 콘드로이틴 황산 B, 펙틴산, 스피루리나 유래 산성 다당, 푸코이단 분해물, 카라기난 λ, 카라기난 κ, 카라기난 ι, 저분자 헤파린, 헤파란 황산 및 클로렐라 유래 산성 다당으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당인 뼈형성 단백질 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제.
(a) 산성 당, (b) 폴리아크릴산, (c) 클로로겐산 및 (d) 클로로겐산의 산화 처리물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 화합물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 뼈형성 단백질 생성 증강용 또는 뼈형성 촉진용 식품, 음료 또는 사료.
제 7 항에 있어서, 산성 당이 산성 다당, 산성 올리고당, 산성 단당 및 그들의 분해물로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당인 뼈형성 단백질 생성 증강용 또는 뼈형성 촉진용 식품, 음료 또는 사료.
제 7 항에 있어서, 산성 당이 푸코이단, 헤파린, 덱스트란 황산, 콘드로이틴 황산 B, 펙틴산, 스피루리나 유래 산성 다당, 푸코이단 분해물, 카라기난 λ, 카라기난 κ, 카라기난 ι, 저분자 헤파린, 헤파란 황산 및 클로렐라 유래 산성 다당으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 산성 당인 뼈형성 단백질 생성 증강용 또는 뼈형성 촉진용 식품, 음료 또는 사료.
조류 유래의 추출물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 뼈형성 단백질 생성 증강 또는 뼈형성 촉진을 요하는 질환의 치료제 또는 예방제.
조류 유래의 추출물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 뼈형성 단백질 생성 증강제 또는 뼈형성 촉진제.
조류 유래의 추출물을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 뼈형성 단백질 생성 증강용 또는 뼈형성 촉진용 식품, 음료 또는 사료.