KR20010072093A

KR20010072093A - 항암 활성을 갖는 약제의 제조에서 ｌ-카르니틴 및 그의알카노일 유도체의 용도

Info

Publication number: KR20010072093A
Application number: KR1020017001228A
Authority: KR
Inventors: 카바쟈클라우디오; 피사노클라우디오; 베시로다나
Original assignee: 알도 파시; 시그마타우 인두스트리에 파르마슈티케 리우니테 에스.피.에이.
Priority date: 1998-07-30
Filing date: 1999-07-27
Publication date: 2001-07-31
Also published as: AU764807B2; US20090137619A1; CA2338638A1; WO2000006134A2; EP1100589A2; WO2000006134A3; JP4703851B2; EP1100589B1; US6610699B2; US20090143464A1; ATE287278T1; JP2010254717A; KR100645980B1; JP2002521428A; PT1100589E; US20010044465A1; HK1035677A1; CA2338638C; ES2235499T3; DE69923322T2

Abstract

본 발명은 종양의 치료에 유용한 약제의 제조에서 하기 화학식 I의 알카노일 L-카르니틴의 용도에 관한 것이다:

화학식 I

상기 식에서,

R 및 X^-는 상세한 설명에 정의된 바와 같다.

특히 본 발명은 치료 지수가 개선되고 전형적인 항암 화학요법의 부작용이 감소된, 종양의 치료를 위한 알카노일 L-카르니틴 및 항암제의 복합물에 관한 것이다.

Description

항암 활성을 갖는 약제의 제조에서 Ｌ-카르니틴 및 그의 알카노일 유도체의 용도{Use of L-carnitine and its alkanoyl derivatives in the preparation of medicaments with anticancer activity}

인간의 치료에 항암제를 사용하는 것이 환자의 생명을 위협할 수도 있는 다수의 독성 효과 또는 부작용들을 야기시킴은 널리 알려져 있다. 실제로, 이러한 합병증들은 상기 약제의 용량을 감소시키게 되며, 때로는 상기 치료 자체를 중단하게 할 수도 있다.

많은 경우에 상기 용량의 감소 또는 치료의 중단은 병의 재발에 유리하며 그 결과가 때로는 환자에게 치명적이기 때문에 개인의 일반적인 건강 상태를 나빠지게 하는 원인이 된다.

병원 시설 및 종양 환자의 가족들에게 매우 중요하고도 강렬하게 느껴지는 또 다른 면은 치료 중인 환자의 “삶의 질의 개선”에 대한 개념이다.

암에 대한 정기적인 다중화학요법 하의 환자들은 체중이 상당히 감소되기 쉽다는 것도 또한 널리 알려져 있다.

인간의 치료에 사용되는 항암제의 수 및 중요성이 증가함에 따라, 독성 효과 또는 부작용들의 발생으로 상기 항암제에 대한 제한이 계속됨은 상기 문제가 여전히 상당한 관심사임을 의미한다.

따라서, 인간의 치료에 사용되는 항암제에 의해 야기되는 독성 효과 또는 부작용들을 실질적으로 감소시킬 수 있는 새로운 약제, 또는 다양한 약제들의 새로운 적합한 조합의 발견이 몹시 요구되고 있다.

앞서 L-카르니틴을 항암제들과 함께 사용하는 것은 이미 공지되어 있다.

실험적인 동물 모델에서, 독소루비신만으로 처리된 래트가 상기 물질을 L-카르니틴과 함께 처리한 래트의 그룹 보다 훨씬 더 체중 손실이 큰 것으로 나타났다(Senekowitsch R, Lohninger A, Kriegel H., Staniek H., Krieglsteiner HP., Kaiser E. Protective effects of carnitine on adriamycin toxicity to heart. In: Kaiser E., Lohninger A., (eds.), Carnitine: its role in lung and heart disorders: 126-137. Karger, Basel-New York, 1987).

미국 특허 제 4,713,370 호에는 카르니틴을 세포증식 억제제, 예를 들어 다우노마이신, N-아세틸-다우노마이신 및 다우노마이신 옥심과 함께 사용하여 이들 화합물의 심장 독성을 감소시킴이 개시되어 있다. 미국 특허 제 4,267,163 호에는 카르니틴을 세포증식 억제제, 예를 들어 아드리아마이신, 아드리아마이신-1,4-옥타노에이트, 4'-에피-아드리아마이신, 아드리아마이신 베타-아노머 및 4'-에피-아드리아마이신 감마-아노머를 함께 사용하여 이들 화합물의 심장 독성을 감소시킴이 개시되어 있다. 미국 특허 제 4,751,242 호에는 말초 신경병증의 치료를 위한 아세틸 L-카르니틴의 용도가 개시되어 있다.

다른 연구들은 안트라사이클린-유발된 심장 독성에 대한 카르니틴의 보호 효과에 대한 평가를 다루었다(Neri B., Comparini T., Milani A., Torcia M., Clin. Trial J. 20, 98-103, 1983; De Leonardis V., De Scalzi M., Neri B., et al., Int. J. Clin. Pharm. Res. 70, 307-311, 1987).

상기 인용된 특허 및 참고문헌들은 항암제들의 독성 또는 부작용들을 감소시키고자 많은 노력들이 수행되었음을 입증하고 있으나, 상기 심각한 문제를 만족스러운 방식으로 해결하고 있지 못하다.

카르보플라틴은 시스플라틴의 구조 동족체이며 그와 관련된 신독성은 시스플라틴의 신독성보다 작지만 결코 무시할만한 것은 아니다.

빈크리스틴은 특히 면역 계의 수준에서 독성 효과를 갖는 널리 알려진 항암제이다.

탁솔은 탁수스 브레비폴리아(Taxus brevifolia)의 나무 껍질로부터 처음 단리된 항암 성질을 갖는 천연 추출물이며, 인체에서 신경독성과 골수독성을 가짐이 입증되었다. 이는 백금 요법에 내성인 종양의 치료에 사용되나, 말초 신경 계에서 보다 큰 누적 독성을 생성시킨다. 또한 탁솔은 치료된 대상자에서 호중구 감소증을 유발시키는 것으로 확인되었다(Rowinsky et al.; Semin. Oncol.(1993년 8월 20일(4 suppl 3), 1-15; Onetto et al., J. Natl. Cancer Inst. Monogr.(1993);(15): 131-9).

블레오마이신은 전형적으로 고환암, 림프종 및 다른 유형의 종양이 있는 어린 환자들에게 사용된다. 블레오마이신의 폐독성은 폐포 상피 장벽의 파괴, 및 후속적인 섬유아세포의 폐포내 증식 및 세포외 매트릭스 성분들의 침착을 특징으로 한다(Karam H et al.; Cell Biol. Toxicol(1998년 2월); 14(1): 13-22). 2 형 폐포세포는 손상되거나 상실된 상피를 재생시킬 수 없다.

약리학적 치료법의 일반적인 문제들 중 하나는 약제들의 치료 지수, 즉 독성 용량 또는 어쨌든 부작용을 발생시키는 용량에 대한 치료 유효량의 비이다.

의료 집단은 환자가 항암 화학요법의 경우에 특별히 견디기 힘든 치료에 직면할 수 있게 하고, 동시에 허용가능한 삶의 질을 보존케 하는 치료 섭생이 필요함을 여전히 인지하고 있다. 이러한 고려사항들은 또한 예를 들어 소위 애완 동물이라 칭하는 동물들의 치료에도 적용된다.

상기 용량의 당연한 감소 성향, 및 따라서 환자에게 무리한 약제의 빈번한 복용 없이 치료학적으로 유용한 투여에 적합한 약제 형태의 사용은 각 항암제에 전형적인 최소 유효 투여량과 상반된다.

발명의 요약

놀랍게도, 하기 정의되는 바와 같은 항암제와 L-카르니틴 또는 알카노일 L-카르니틴의 통합된(co-ordinated) 사용(이 용어는 하기에 정확하게 정의될 것이다)은 상기 항암제의 활성에 대해 예상 밖의 상승효과를 발휘하는 것으로 밝혀졌다.

본 발명에서, 또한 전적으로 예상 밖의 방식으로, 치료 유효량의 항암제, 특히 탁솔, 카르보플라틴, 블레오마이신 및 빈크리스틴과 해독량의 L-카르니틴 또는 알카노일 L-카르니틴(여기에서 선형 또는 분지된 알카노일은 탄소수 2 내지 8을 갖는다), 또는 이들의 약리학적으로 허용가능한 염들 중 하나의 통합된 사용은 상기 항암제의 독성 및 부작용에 대해 상기 항암제의 효능을 감소시키지 않으면서 효능있는 보호 효과를 제공하며, 따라서 특히, 인간이든 동물이든, 치료 대상자의 삶의 질을 상당히 개선시키고 생명 자체를 연장시키는 것으로 밝혀졌다.

또한, 상기 통합된 사용은 종양 전이에 대해 억제 효과를 갖는 것으로 밝혀졌다.

따라서, 본 발명의 하나의 목적은 함께 사용되는 항암제의 활성에 대해 상승 효과를 생성시킴을 특징으로 하는, 상기 항암제를 포함하는 약제의 제조를 위한 하기 화학식 I 화합물의 용도이다:

상기 식에서,

R은 수소, 또는 탄소수 2 내지 8의 알카노일 그룹이고,

X^-는 약학적으로 허용가능한 염의 음이온을 나타낸다.

본 발명의 목적은 또한 상기 약제에서 항암제의 부작용을 상당히 감소시킴에 따른 화학식 I 화합물의 통합된 용도이다.

본 발명의 추가의 목적은 전이를 억제시키는데 유용한 약제의 제조에서 화학식 I 화합물의 용도이다.

본 발명의 더욱 또 다른 목적은 항암제와 화학식 I 화합물의 복합물 및 관련된 약학 조성물이다.

널리 알려진 알카노일 L-카르니틴의 독성 또는 부작용의 결여는 독성 또는 부작용, 예를 들어 체중 손실, 심장, 신장 및 중추 신경계 손상, 말초 신경계 손상, 특히 탁솔에 의해 야기되는 신경병증 또는 호중구 감소증, 또는 블레오마이신에 의해 유발된 폐 손상의 예방 또는 치료를 위한 상기 화합물의 사용을 장기적인 치료 기간 동안에도 특별히 안전하게 만든다.

본 발명의 수행은 또한 치료 환자의 삶의 질의 개선에 기여하며; 필요한 것은 오직 말초 신경병증, 호중구 감소증, 호흡기 합병증 또는 상기 약제에 의해 유발된 체중 손실에 기인한 쇠약화에 의해 야기되는 신체적 고통을 생각하는 것이다.

본 발명의 상기 및 다른 목적들을 본 발명의 실시태양 및 실시예에 상세히 개시할 것이다.

본 발명에서, “종양 억제”, “항암” 및 “증식 억제”란 용어는 필수적으로 동의어로서 이해해야 한다.

본 발명은 종양의 치료에 유용한 약제의 제조에서, 특히 종양의 치료를 위한 항암제와 협력하는 L-카르니틴 및 알카노일 L-카르니틴의 용도에 관한 것이다.

본 발명에서, 상기 화합물들의 “통합된 사용”이 의미하는 것은 (i) L-카르니틴 또는 알카노일 L-카르니틴 또는 그의 약리학적으로 허용가능한 염들 중 하나의 공동-투여, 즉 실질적으로 동시적이거나 연속적인 투여, 또는 (ii) 임의의 약학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 비히클 이외에, 상기 유효 성분들을 함께 혼합물로 포함하는 조성물의 투여 중 어느 것이나 무방하다.

따라서 본 발명은 화학식 I의 L-카르니틴 또는 알카노일 L-카르니틴 또는 그의 약리학적으로 허용가능한 염들 중 하나와 항암제의 투여, 및 상기 2 개의 유효 성분들을 혼합물로 포함하는, 조절된 방출 형태를 포함한 경구, 비 경구 또는 비내 투여될 수 있는 약학 조성물 모두를 포함한다. 바람직하게는, 상기 알카노일 L-카르니틴은 아세틸 L-카르니틴(이후부터는 ALC 또는 Alcar로 줄여 씀), 프로피오닐 L-카르니틴(이후부터는 PLC로 줄여 씀), 부티릴 L-카르니틴, 발레릴 L-카르니틴 및 이소발레릴 L-카르니틴으로 이루어진 그룹 중에서 선택되거나, 또는 이들의 약리학적으로 허용가능한 염들 중 하나이다. 바람직한 것들은 아세틸 L-카르니틴, 프로피오닐 L-카르니틴 및 부티릴 L-카르니틴이다.

본 발명의 하기 상세한 설명으로부터 명백하지만, 항암제, 예를 들어 탁솔, 아세틸 L-카르니틴 및 프로피오닐 L-카르니틴의 통합된 사용, 또는 블레오마이신과 아세틸 L-카르니틴, 또는 추가로 가능하게는, 아세틸 L-카르니틴과 탁솔 또는 카르보플라틴 또는 빈크리스틴의 통합된 사용을 또한 고려할 수 있다. 이들 모든 실시태양에서, L-카르니틴을 상기 통합된 용도에 사용할 수 있다.

공동-투여는 또한 L-카르니틴 또는 상기 알카노일 L-카르니틴들 중 하나, 또는 그의 약리학적으로 허용가능한 염들 중 하나와 항암제의 독특한 투여 형태를 포함하는, 환자의 상태를 근거로 주치의에 의해 정해진 투여 섭생에 따른 상기 유효 성분들의 통합된 동시적이거나 시간-지정된 복용에 대한 설명서가 첨부된 패키지 또는 제품을 의미한다.

L-카르니틴 또는 알카노일 L-카르니틴의 약리학적으로 허용가능한 염이 의미하는 것은 독성 또는 부작용을 생성시키지 않는 산과 상기 화합물과의 임의의 염이다. 이들 산은 약리학자들 및 약학 기술분야의 전문가들에게 잘 알려져 있다.

L-카르니틴 또는 알카노일 L-카르니틴의 약리학적으로 허용가능한 염들의 예로 클로라이드; 브로마이드; 요오다이드; 아스파테이트; 산 아스파테이트; 시트레이트; 산 시트레이트; 타르트레이트; 산 타르트레이트; 포스페이트; 산 포스페이트; 푸마레이트; 산 푸마레이트; 글리세로포스페이트; 글루코스 포스페이트; 락테이트; 말리에이트; 산 말리에이트; 뮤케이트; 오로테이트; 옥살레이트; 산 옥살레이트; 설페이트; 산 설페이트; 트리클로로아세테이트; 트리플루오로아세테이트; 메탄 설포네이트; 파모에이트 및 산 파모에이트가 있으나 이들로 제한되는 것은 아니다.

L-카르니틴 또는 알카노일 L-카르니틴의 임상적인 용도로 바람직한 1 일 투여형은 0.1 내지 3 g, 바람직하게는 0.5 내지 3 g의 L-카르니틴 또는 알카노일 L-카르니틴, 바람직하게는 아세틸 또는 프로피오닐 L-카르니틴을 포함하는 조성물이다.

본 발명은 상기 언급된 항암제들에 의해 야기되는 독성 또는 부작용들, 예를들어 체중 손실, 심장, 신장 및 중추 신경계 손상, 말초 신경계 손상, 말초 신경병증 및 특히 골수억제 및 폐 손상의 예방 또는 치료에 유용하다.

실질적인 보호 효과가 의미하는 것은 상기 부작용을 통계학적으로 의미 있는 정도로 예방, 감소 또는 제거하는 것이다.

본 발명의 실시태양은 또한 금기로 인해 치료를 중단할 필요 없이 정해진 치료 프로토콜의 유지 또는 화학요법제의 투여량 증가 가능성으로 인한 치료 성공률의 증가 덕분에 환자를 치유하고 그의 생명을 연장시키는데 기여한다.

본 발명에 의해 얻어지는 추가의 잇점은 치료 대상자의 삶의 질과 관련되며; 실제로, 이미 언급한 바와 같이, 말초 신경병증 또는 체중 손실로 인한 쇠약화에 의해 야기되는 신체적인 고통의 제거 또는 감소는 환자의 자족 능력에 도움을 준다. 경제적인 관점에서, 환자를 돌보기 위한 병원 시설이나 가족들이 부담하는 비용이 명백하게 절감된다.

골수억제는 예를 들어 유방, 난소, 폐(작은 세포 및 기타), 두부 및 경부의 다양한 종양들의 치료에 사용되는 화학요법제인 탁솔의 투여 결과로서 나타날 수 있는 독성 부작용들 중 하나이다(Slichenmeyer and Von Hoff: J. Clin. Pharmacol. (1990), 30, 770-778). 또한 상업적인 약제 형태(TAXOL(등록상표), Bristol Myers Squibb)의 탁솔에 대해 채택된 비히클은 상업적으로 크레모포어(Cremophor)(등록상표) EL로서 공지된 폴리에톡시화된 피마자유의 유도체로, 개 및 인간 대상자에서 히스타민 분비 및 과민증성 반응을 유발시킬 수 있다(Slichenmeyer and Von Hoff: 동일한 문헌; Bury et al.: Allergy(1992), 47, 624-629; Hershkoviz etal.: J. Leukoc. Biol. (1994), 56, 495-501; Inokuma et al.: J. Vet. Med. Sci.(1994), 56, 45-49). 시판되는 약을 크레모포어(등록상표) EL 비히클과 함께 사용한다는 사실에 비추어, 치료에 사용되는 제제와 관련된 골수독성의 문제가 쟁점화되었었다.

증식성 질병의 과정 중에 접하게되는 가장 심각한 문제들 중 하나는 종양의 전이성 유포로, 이는 때때로 1 차 종양의 치료를 쓸모없게 만들 정도로 진행되며 그 자체가 사망의 원인이 되기도 한다.

본 발명의 첫 번째 바람직한 실시태양에서, 탁솔, 카르보플라틴 또는 빈크리스틴과 같은 항암제와 결합된 L-카르니틴은 치료 대상자의 생존을 확실히 연장시킨다.

본 발명의 두 번째 실시태양에서, 아세틸 L-카르니틴은 탁솔-유발된 부작용들, 예를 들어 말초 신경병증, 골수억제 및 체중 손실에 대해 놀라울 정도의 보호 활성을 나타내었다.

본 발명의 세 번째 실시태양에서, 아세틸 L-카르니틴은 특히 폐암에서 탁솔과 동시에 투여되는 경우 놀라운 전이방지 활성을 나타내었다.

본 발명의 또 다른 바람직한 실시태양에 따라, 프로피오닐 L-카르니틴은 탁솔과 결합 시 놀라운 상승 효과를 나타내었다.

탁솔은 상기 화합물을 3, 4 회 주입한 후에 중증 호중구 감소증을 최저로 유발시키는 것으로 밝혀졌다.

ALC를 본 발명에 따라 사용하는 경우, 상기 약물의 항암 작용에 어떠한 불리한 영향도 미치지 않았다.

ALC를 편의상 경구 투여할 수 있으나, 이러한 이유로 당해 분야의 전문가가 권장할만한 것으로 보이는 다른 투여 경로들, 특히 상기 전문가가 정하는 대로 주사에 의해 예를 들어 동일한 주입 바이알로 항암제와 함께 동시에 또는 연속적으로 투여하는 것을 제외시키지 않는다.

또, 프로피오닐 L-카르니틴(PLC)은 탁솔의 치료 활성과 상승효과를 나타내었다.

따라서, 보호제로서 아세틸 L-카르니틴, 상승작용제로서 프로피오닐 L-카르니틴 및 탁솔을, 별도의 투여 형으로 또는 일부 방식으로 결합된 3 원 복합물로 제공하는 것이 분명히 유리하다. 이러한 복합물은 또한 본 발명에 따른 결합의 결과로서 상승효과를 나타내거나 또는 실질적으로 부작용을 감소시키는 다른 항암제들을 포함한다. 또한 L-카르니틴을 상기 언급한 복합물에 가하는 것이 이로울 수도 있다.

본 발명의 한 가지 특정한 목적은 치료 유효량의 탁솔을 보호량의 아세틸 L-카르니틴 및 상승작용량의 프로피오닐 L-카르니틴과 함께 약학적으로 허용가능한 비히클 및/또는 부형제와의 혼합물로 포함하는 약학 조성물이다.

다른 실시태양에서, 보호제로서 아세틸 L-카르니틴과 블레오마이신의 2 원 복합물을 제공하는 것이 임의의 경우에 유리하다.

산업적인 적용성과 관련된 태양에 관해서, 본 발명은 또한 그의 가능한 실시태양들 중 하나로 a) 치료 유효량의 항암제를 포함하는 약학 조성물; b) 상기 항암제와 상승효과를 생성시키기에 적합한 양의, 상기 정의된 바와 같은 하나 이상의 알카노일 L-카르니틴을 포함하는 약학 조성물; c) 상기 항암제의 부작용에 대해 실질적인 보호 작용을 생성시키기에 적합한 양의, 상기 정의된 바와 같은 하나 이상의 알카노일 L-카르니틴 및/또는 L-카르니틴을 포함하는 약학 복합물을 함유하는 키트를 제공한다. 본 발명에 따른 키트는 또한 a) 치료 유효량의 항암제를 포함하는 약학 조성물; b) 상기 항암제와 상승효과를 생성시키기에 적합한 양의 하나 이상의 알카노일 L-카르니틴을 포함하는 약학 조성물의 형태로 존재할 수도 있다. 한편으로, 본 발명에 따른 키트는 또한 a) 치료 유효량의 항암제를 포함하는 약학 조성물; 및 b) 상기 항암제의 부작용에 대해 실질적인 보호 작용을 생성시키기에 적합한 양의 하나 이상의 알카노일 L-카르니틴 및/또는 L-카르니틴을 포함하는 약학 조성물의 형태로 존재할 수도 있다.

상기 언급한 키트에 대한 특정한 예에서는 항암제로서 카르보플라틴, 빈크리스틴, 탁솔 및 블레오마이신을 언급한다.

이제, 상기 바람직한 실시태양을 참고로 항암제로서 탁솔, 실질적인 보호제로서 아세틸 L-카르니틴 및 실질적인 상승작용제로서 프로피오닐 L-카르니틴을 사용하여 본 발명을 수행하는 방식을 개시할 것이다.

당해 분야의 전문가는 종사하는 분야의 일반적인 지식으로 실험적인 프로토콜을 완성할 수 있으며, 필요에 따라 인접 분야에 의뢰할 수도 있을 것임은 물론이다.

L-카르니틴 또는 그의 유도체와 상기 언급된 항암제와의 결합에 의해 수득된뜻밖의 놀라운 보호 효과를 입증하기에 적합한 가장 의미 있는 실험들에 대한 결과를 하기에 나타낸다.

실시예 1

항암제로 처리된 래트의 생존 시간 변화

본 실험의 목적은 쥐 실험 모델에서 생존 시간의 증가로서 나타낸, L-카르니틴에 의해 유발된 보호 효과를 입증 및 평가하는 것이다.

3 개월된 10 마리의 수컷 위스타 래트(Charles River)의 그룹들을 사용하여, 22 ± 2 ℃, 50 ± 15%의 상대 습도 및 12 시간 명암 주기로 수용하고, 물과 먹이를 “마음껏” 공급하였다.

사용된 물질은 L-카르니틴, 탁솔, 카르보플라틴 및 빈크리스틴이었다.

래트를 각각 LD₃₀, LD₅₀및 LD₈₀에 상응하는 투여량의 항암제로 정맥내(i.v.) 처리하였다.

L-카르니틴 200 ㎎/㎏을 하루에 한번 피하 투여하는 처리를 항암제 투여 전 8 일째에 시작하여 추가로 14 일간 속행하였다.

처리 직전에 꼬리 상의 연속적인 번호로 확인된 래트의 치사율을 항암제 투여 후 14 일간 매일 감시하였으며; 실험 데이터를 윌콕슨과 로그-랭크 시험(Wilcoxon and Log-Rank test)을 사용하여 평가하고 상기 실험 데이터의 평가에서 얻어진 통계학적 유의수준을 하기 표 1에 나타내었다.

유의 수준은 복합물 대 각 대조군(동일한 투여량으로 항암제만을 포함)을 지칭한다.

표 1에 나타낸 결과들은 L-카르니틴과 항암제로 처리된 그룹들의 생존 시간의 상당한 연장을 나타낸다.

표 1에 나타낸 통계학적 분석의 결과는 2 개의 "p"값을 나타낸다. 처음 것은 윌콕슨 시험을 사용하여 계산한 것이고; 두 번째 것(즉 괄호안의 "p"값)은 로그-랭크 시험을 사용하여 계산한 것이다.

상기 2 개의 시험들, 즉 윌콕슨과 로그-랭크 시험의 결과들 간의 불일치는 윌콕슨 시험이 생존 곡선의 첫 번째 부분에서 차이를 탐지하는데 보다 유력하고, 로그-랭크 시험은 두 번째 부분에서 보다 유력하다는 점에 기인한다.

수행된 실험에서, 생존 시간들 간의 차이는 주로 상기 곡선의 첫 번째 부분에서 발생한다.

낮은 투여량들간의 비교에서 통계학적 유의수준의 부족은 낮은 사망 수치로 인해 상기 시험들이 그룹들 간의 차이를 탐지하는데 매우 유력하지 못하다는 사실로 설명될 수 있다.

실시예 2

탁솔-유발된 말초 신경병증의 실험 모델에 대한 아세틸 L-카르니틴의 보호 효과

본 연구의 목적은 꼬리 상에서 H 반사에 의해 측정된, 감각 신경 전달 속도(SNCV)를 측정함으로써 탁솔을 2 개의 상이한 투여량(16 ㎎/㎏ 및 8 ㎎/㎏)으로 투여하기 1 주일 전에 투여된 아세틸 L-카르니틴의 보호 성질을 입증하고 평가하는 것이다.

3 개월된 암컷 위스타 래트(Charles River)를 사용하였으며, 22 ± 2 ℃, 50 ± 15%의 상대 습도 및 12 시간 명암 주기로 수용하였다.

처리 직전에 꼬리 상의 연속적인 번호로 래트를 확인하였고 물과 먹이를 “마음껏” 공급하였다.

사용된 물질은 아세틸 L-카르니틴과 탁솔이었다.

하기의 실험 그룹들을 형성하였다:

1. 대조군

2. 모의 그룹(탁솔액 용매를 투여한 그룹)

3. 탁솔 16 ㎎/㎏

4. 아세틸 L-카르니틴+탁솔 16 ㎎/㎏

5. 탁솔 18 ㎎/㎏

6. 아세틸 L-카르니틴+탁솔 8 ㎎/㎏

하기의 처리 스케줄을 사용하였다: 모의 그룹 동물들에게 탁솔액 용매(크레모포어/에탄올)를 복강내(i.p.)로 투여하였으며; 탁솔을 5 주간 1 주일에 한번 복강내 투여하였고; L-카르니틴 200 ㎎/㎏을, 처음 탁솔 투여 1 주일 전에 시작하여 추가로 4 주간(총 5 주) 계속해서 위관으로 하루에 한번 경구(os) 투여하였다.

하기의 방법을 사용하였다: 0.45 할로탄, 질소 초급 산화물 및 산소로 구성된 기상 혼합물로 마취시킨 동물들을 자극 대역에서 털을 뽑아 작업대에 놓았다. 오트 바이오메디카 페이지즈(Ote Biomedica Phasis) II 근전도 검사법을 사용하여 감각 반응들을 기록하고 자극하였다. 동물들의 체온에 따른 신경 전달 속도에 대한 문헌 보고에 비추어, 실험 전체를 통해 체온을 일정하게 유지시키는 것(동물들에 대해 BM 70002-유형 온도조절기(Biomedica Mangoni)의 도움으로 직장 탐침을 사용하여 측정하였다)이 필요하였다.

감각 섬유 전달 속도를 100 마이크로초의 지속 기간을 갖는 한계 치와 동일한 자극 강도로 강철 고리 유형 자극 및 측정 전극(길이 46 ㎝, Modelec 디지털 고리 전극)을 사용하여 꼬리 상에서 측정하였다.

300 개의 반응들에 대한 평균 값을 잠재 값으로 하였다.

감각 신경 전달 속도(ms로 표시)를 근위(가장 근접한) 및 원위(등뼈로부터 가장 먼) 자극에 의해 생성된 파동의 잠재성의 차이(ms로 나타냄)에 대한 2 개의자극 지점들간의 거리(㎜로 표시)의 비로서 계산하였다.

상기 속도를 기본 조건(임의의 투여 전) 및 처리 5 주 후 모두에서 모든 동물 그룹들에서 측정하였다.

결과를 평균±표준 편차로서 나타내며; 유의수준을 독립적인 데이터 및 짝을 이룬 데이터 모두에 대해 p<0.05의 통계학적 유의 수준 컷-오프로 "t"-시험을 사용하여 평가하였다.

꼬리 신경 상에서 측정된 감각 신경 전달 속도 데이터를 하기 표 2에 나타낸다.

기본 조건에서, 모든 동물 그룹들은 대등한 신경 전달 값들을 제공한다.

5 주 측정치는 기본 조건에 비해 모든 동물들에서 감각 신경 전달 속도가 통계학적으로 상당히 증가(p<0.01)했음을 보인다.

탁솔 용매(모의 그룹)의 처리는 대조군과 비교 시 신경 전달 속도 값을 변경시키지 않았다. 탁솔의 투여로 대조군에 비해 감각 신경 전달 속도의 상당한 감소(P<0.01)가 유발되었으며; 이러한 감소는 투여량-의존적이었다: 16 ㎎/㎏의 투여량에서 -17% 및 8 ㎎/㎏의 투여량에서 -9%.

아세틸 L-카르니틴의 처리는 두 그룹 모두에서 감각 신경 전달 속도를 통계학적으로 상당히 증가시켰다(p<0.01): 16 ㎎/㎏의 탁솔 그룹에 대해 9% 및 8 ㎎/㎏의 탁솔 그룹에 대해 5%.

상기 얻어진 결과들을 근거로, 아세틸 L-카르니틴이 탁솔-유발된 신경독성에 대해 통계학적으로 상당한 보호를 제공할 수 있음을 알 것이다.

실시예 3

탁솔-유발된 체중 손실에 대한 아세틸 L-카르니틴의 보호 효과

선행 실험 모델에서 사용된 동물들의 체중을 처리 출발 전(기본 값) 및 처리 끝에서 측정하였다.

하기 표 3에 나타낸 데이터는 탁솔 처리에 의해 야기된 체중 손실에 대해 아세틸 L-카르니틴에 의해 발휘된 상당한 뜻밖의 보호 효과를 입증한다.

실시예 4

탁솔-유발된 호중구 감소증에 대한 아세틸 L-카르니틴의 보호 효과

본 발명의 발명자들에 의해 탁솔의 호중구 감소 효과가 3-4 회 주입 후에 최하점에 도달함을 확인하였다.

순환 호중구의 양 및 종양 성장 모두에 대한 탁솔과 함께 사용된 ALC의 작용을 평가하기 위해서, 탁솔만으로 처리된 동물들과 쥐의 유방 암(L-MM3)을 접종시킨 동물들 모두에 대한 ALC-유발된 보호 정도를 평가하고, 종양 성장을 ALC와 탁솔,또는 ALC만으로 처리된 동물들에서 평가하였다. 탁솔 처리는 다형핵형성(polymorphonucleate)의 상당한 감소를 야기시켰다. 탁솔 처리와 결합된 아세틸 L-카르니틴의 투여는 항암제에 의해 유발된 호중구 과립구의 감소를 현저하게 방지할 수 있는 것으로 나타났다. 종양 성장에 관해서, 탁솔은 호중구 과립구의 평가에 사용된 것과 동일한 스케줄에 따라 주입될 때 L-MM3의 성장(상기 종양의 크기가 대략 2 ㎝에 도달할 때까지 감시되었다)을 현저하게 억제하는 것으로 밝혀졌다. 14 일간의 탁솔과 ALC의 결합된 처리는 탁솔의 항암 작용에 영향을 미치지 않았다.

결론적으로, 상기 종양 모델에서도 또한, 탁솔은 중증 호중구 감소증을 야기시켰으며, 상기 유형의 골수 독성이 발생하는 기간에 걸쳐 연속적으로 투여된 ALC는 다형핵형성에서 탁솔-유발된 감소를 방지할 수 있었다. 동시에, ALC의 작용은 탁솔의 항암 활성에 영향을 미치지 않았다.

실시예 5

마우스의 호중구 감소증에 대한 탁솔과 아세틸 L-카르니틴(ALC)의 결합 투여(복강내) 효과

굿 레보라토리 프랙티스(Good Laboratory Practice, GLP)에 따라 수행된 연구에서, 탁솔-유발된 호중구 감소증에 대한 탁솔과 결합된 아세틸 L-카르니틴(ALC)의 작용을 평가하기 위해서, 동물들을 ALC와 탁솔, 및 탁솔 또는 ALC만으로 처리하였다. 상기 모델에서, 순환 호중구의 양을 측정하였다.

탁솔은 3 회 주입 후 단지 6 시간 내에 호중구 과립구를 상당히 감소시키는 것으로 밝혀졌으며, 따라서 중증 호중구 감소증은 3-4 회 주입 후에 최저로 발생한다.

주입용 제제를 위해 물에 용해시킨 아세틸 L-카르니틴 분자내 염(멸균 앰플)을 사용하였다. 각각의 ALC 앰플을 주입용으로 물 4 ㎖에 용해시켰다(용액 O). (O) 2 ㎖을 피하 투여용으로 10 ㎎/㎖이 만들어지도록 멸균 PBS(Sigma)로 25 ㎖이 되게 하고; (O) 0.8 ㎖을 경구 투여용으로 2 ㎎/㎖이 만들어지도록 PBS로 50 ㎖이 되게 하였다(100 ㎎/㎏/50 ㎖).

탁솔(paclitaxel(INDENA))을 칭량하고, 미리 제조된 특정한 비히클(에탄올로 1:1 희석시킨 크레모포어(등록상표) EL(BASF))에 용해시키고 광 차단 하에 +4 ℃에서 보관하였다. 사용 시에, 12 ㎎/㎖ 용액을 인산염 완충 염수(PBS)(SIGMA)로 1:4 희석시키고 복강내 주입하였다(30 ㎎/㎏/10 ㎖).

필수적인 실험 지시 사항들을 하기에 나타낸다:

동물: 18 내지 20 g 중량의 암컷 BALB/c 마우스(Harlan)

동물 수용 조건: 우리 당 4 내지 5 마리의 마우스; 온도 22 ± 2 ℃; 상대 습도 55 ± 15%; 공기 교환 15 내지 20/시간; 12 시간의 명암 주기(명 주기, 오전 7.00 시에서 오후 7.00 시); 스테인레스 강 창살의 뚜껑이 있는 마크롤론 우리(26.7 x 20.7 x 14 ㎝); 먼지를 제거하고 멸균시킨 옥수수 속대 부스러기 깔짚.

음식물: 4RF21 사료(회사명: Mucedola), 먹이와 물을 “마음껏” 공급함.

동물 집단의 랜덤화는 무작위적이다. 즉 동물 수용 수행원은 마우스를 상자에서 우리로 한번에 옮겨 하나의 우리를 완성한다. 두 번째 단계로, 상기 수행원은 모든 마우스를 일시적으로 확인하고, 이들의 중량을 측정하고, 그룹들 간에 상당한 중량 차이가 존재하는 경우, 동물들을 하나의 우리에서 다른 우리로 이동시켜, 우리 당 동물의 수가 변하지 않게 유지시켜 하나의 우리와 또 다른 우리간에 대등한 전체 중량을 갖게 한다. 각각의 우리를 해당 그룹의 수, 처리 유형(주입된 물질 및/또는 물질들, 투여량, 투여 경로)이 있는 카드로 표시한다. 각각의 동물을 지워지지 않는 잉크로 꼬리에 씌어진 1 내지 5의 번호로 확인한다.

동물 중량: 마우스를 처리 시작 전, 및 처리 5일 또는 7일 및 11 일째에 중량 측정한다.

동물들을 상기 분자들로 1 일에서부터 10 일까지 처리하고; 탁솔 또는 비히클을 2 일 마다, 즉 5, 7, 9 및 11 일에 투여하였다.

그룹은 1) 블랭크; 2) 비히클 + PBS; 3) 탁솔; 4) 탁솔 + ALC; 5) ALC; 6) ALC + 비히클이다. 동물들을 최종 탁솔 주입 후 6 시간 째에 죽였다.

탁솔 또는 비히클로 최종 처리한 후 6 시간째에 혈액과 골수 샘플을 취하였다. 마우스를 CO₂로 마취시키고; 역-안와 다발로부터 혈액을 취하고(혈액 0.5 ㎖/마우스) 비스터 헤파린(5000 U/㎖) 10 ㎕를 함유하는 에펜도르프 시험관에 넣었다. 동물들을 경부 탈구에 의해 죽였다. 나중에, 골수 샘플을 취하였다.

마우스 당 하나의 혈액 샘플과 하나의 골수 샘플을 다양한 시간으로 취한다.

혈구수 측정

WBC(백혈구) 수를 세기 전에, 델콘(Delcon)에서 공급된 EMACHECK 혈액 샘플 변수(인간 검사)를 측정함으로써 장비를 검사한다.

상기 장비를 작동 매뉴얼에 제공된 지시사항에 따라 사용한다. 혈액(25 ㎕)을 희석기로부터 취하여 비이커에서 등장성 용액(PLTA 염수, 델콘)으로 10 ㎖의 부피로 만든다(희석비 1:400)(용액 A). 희석기에 용액 A 100 ㎕를 취하여 또 다른 비이커에서 10 ㎖(희석비 1:100)로 만든다(용액 B). 용액 A에 3 방울의 융균제(Emosol, 델콘)를 가하고, 상기 용액을 적혈구가 융균되고 HGB(헤모글로빈)가 방출되도록 손으로 혼합하고 대략 2 분간 방치시킨다. 융균제를 함유하는 용액 A를 WBC 및 헤모글로빈(HGB) 판독에 사용한다. 용액 B는 RBC와 혈소판(PLT) 판독에 사용한다.

각 샘플에 대해 이중 판독을 수행하고, 하나의 샘플과 다음 샘플 사이에서, 상기 장비를 등장액으로 세척한다.

즉석 슈퍼프로스트 플러스 슬라이드(Superfrost plus slide, Mensel-Glaser)(25 x 75 x 1 ㎜)를 채택한다. 혈액(8 ㎕)을 상기 슬라이드의 우측에 놓고; 45°각으로 놓인 또 다른 슬라이드를 상기 2 개의 슬라이드들 간의 접촉 선을 따라 급속히 퍼지는 혈액 방울과 접촉하게 될 때까지 상기 혈액의 좌측으로 잡아당기고; 상기 슬라이드를 얇은 혈액 막이 얻어지도록 부드럽고 빨리 앞으로 이동시킨다. 상기 슬라이드를 공기 중에서 건조되도록 방치시키고, 첨부된 지시사항에 따라 디프-퀵(Diff-Quick, DADE) 염료로 염색하고 공기 중에서 다시 건조시킨다.

상기 슬라이드들을 히스토레몬 용액(Carlo Erba)에 2 초 간 침지시키고; 한 방울의 합성 봉입제(Shandon)를 상기 슬라이드의 중심에 놓고 상기 두 슬라이드들 간에 기포가 형성되지 않도록 주의하면서 커버 슬라이드를 상기 위에 놓아 전체 혈액 표본을 덮는다. 상기 슬라이드들을 건조시키고, 이어서 한 방울의 삼나무 오일을 상기 슬라이드 위에 떨어뜨린 후에 광학 현미경을 사용하여 WBC의 수를 100 까지 센다.

혈구계를 사용하여 평가한 WBC/㎖의 양에 백혈구 식의 상응하는 호중구 과립구의 퍼센트 값을 곱한다. 100으로 나눈 상기 변수를 호중구/혈액 ㎜³의 값으로 나타낸다.

하기는 통상적인 변수 값들에 관한 것이다: 혈구계로 측정한 WBC에 대해서, 18000/㎜³이하의 값; 슬라이드 상에서 수를 센 호중구 퍼센트에 대해서, 18% 이하의 값; 계산된 절대 호중구에 대해서, 1800 이하의 값.

데이터는 평균±표준 오차로 나타낸다. 상이한 그룹들에 대해 수득된 호중구 과립구 값들간의 비교를 ANOVA를 사용하여 수행한다. 비정상적인 값들에 대해서는 딕손(Dixon) 시험을 수행한다.

탁솔 처리(총 4 회로, 매 2 일 마다 30 ㎎/㎏ 복강내 투여)는 상기 약제의 최종 주입 후 6 시간 째에 현저한 호중구 감소증을 야기시켰다(블랭크에 비해 호중구 과립구 -90%, p<0.001). 아세틸 L-카르니틴(100 ㎎/㎏)의 경구 또는 피하투여는 탁솔-유발된 손상에 대해 다형핵형성을 8 내지 43%(피하)(경구: -23%) 보호하는 것으로 밝혀졌다(표 4).

또 다른 실험에서, ALC+탁솔의 결합은, 탁솔만을 투여한 후에 얻어진 98% 감소에 비해, 호중구를 73% 감소시켰다. ALC 또는 비히클+ALC의 투여는 상기 비히클만으로 처리되거나 또는 비처리된 동물(블랭크)에 비해 호중구 수를 변화시키지 않았다(표 4).

최종 탁솔 투여 후 3 일째에, 호중구 과립구는 회복(비히클에 대해 -64%)되기 시작했으나, 그 효과는 ALC+탁솔(비히클에 대해 -26%) 결합에 의한 처리에서 훨씬 더 현저하다. 이 경우에도 역시 ALC 또는 비히클+ALC의 투여는 비히클만으로 처리되거나 또는 비처리된 동물(블랭크)에 비해 호중구 수를 변화시키지 않았다(표 5).

하루씩 걸러서 4 회 투여된 탁솔은 중증 호중구 감소증을 유발시킨다. ALC의 경구 투여는 탁솔의 손상 효과에 대해 현저한 보호를 제공할 수 있다.

실시예 6

마우스의 호중구 감소증에 대한 탁솔과 아세틸 L-카르니틴(ALC)의 결합 투여(정맥내) 효과

필수적으로, 탁솔 투여 경로를 제외하고(이 경우 정맥 내 투여), 즉 실제적인 임상 적용 조건 하에서 실시예 5를 반복 수행하였다.

실험 스케줄 및 측정은 선행 실시예에 개시된 바와 동일하였다.

결과를 표 6 및 7에 나타낸다.

이들 결과는 경구 투여된 ALC의 보호 효과를 입증한다.

실시예 7

L-MM3 유방 암종이 있는 마우스의 호중구 감소증에 대한 탁솔과 아세틸 L-카르니틴(ALC)의 결합 투여 효과 및 항암 작용의 평가

굿 레보라토리 프랙티스(GLP)에 따라 수행된 연구에서, 종양 성장에 대한 탁솔과 결합된 아세틸 L-카르니틴(ALC)의 작용을 평가하기 위해서, Balb/c 마우스에게 쥐의 유방 암(L-MM3)을 접종하고 상기 동물을 ALC+탁솔 및 탁솔 또는 ALC만으로 처리하였다. 또한, 상기 종양 모델에서, 순환 호중구의 양을 측정하였다.

주입용 제제를 위해 물에 용해시킨 아세틸 L-카르니틴 분자내 염(멸균 앰플)을 사용하였다. 각각의 ALC 앰플을 주입용으로 물 4 ㎖에 용해시켰다(용액 O). (O) 0.8 ㎖을 경구 투여를 위해 멸균 PBS(Sigma)로 50 ㎖이 되게 하였다(100 ㎎/㎏/50 ㎖).

필수적인 실험 지시 사항들을 하기에 나타낸다:

동물: 18 내지 20 g 중량의 암컷 BALB/c 마우스(Harlan) 120 마리

동물 수용 조건: 우리 당 5 마리의 마우스; 온도 22 ± 2 ℃; 상대 습도 55 ± 15%; 공기 교환 15 내지 20/시간; 12 시간의 명암 주기(명 주기, 오전 7.00 시에서 오후 7.00 시); 스테인레스 강 창살의 뚜껑이 있는 마크롤론 우리(26.7 x 20.7 x 14 ㎝); 먼지를 제거하고 멸균시킨 옥수수 속대 부스러기 깔짚.

동물 집단의 랜덤화는 무작위적이다. 즉 동물 수용 수행원은 마우스를 상자에서 우리로 한번에 옮겨 하나의 우리를 완성한다. 두 번째 단계로, 상기 수행원은 모든 마우스를 일시적으로 확인하고, 이들의 중량을 측정하고, 그룹들 간에 상당한 중량 차이가 존재하는 경우, 동물들을 하나의 우리에서 다른 우리로 이동시켜 우리 당 동물의 수가 변하지 않게 유지시킨다. 각각의 우리를 해당 그룹의 수, 처리 유형(주입된 물질 및/또는 물질들, 투여량, 투여 경로)이 있는 카드로 표시한다. 각각의 동물을 지워지지 않는 잉크로 꼬리에 씌어진 1 내지 5의 번호로 확인한다.

동물 중량: 마우스를 처리 시작 전 및 최종 탁솔 주입 일에 중량 측정한다.

처리 스케줄 1: Balb/c 기원의 이식성 쥐 유방 암 세포(L-MM3)를 5% CO₂가습 배양기에서 플라스틱 플라스크 중에서 5% 열-불활성화시킨 FCS, L-글루타민 2 mM 및 젠타마이신 80 ㎍/㎖을 함유하는 DMEM 배지에서 37 ℃에서 증식시켰다. 접종 시, 세포들을 트립신-EDTA로 분리시키고 PBS 없이 동일한 배지에 재현탁시켰다.

마취시키지 않은 암컷 Balb/c 마우스에게 DMEM 0.2 ㎖ 중의 4 x 10⁵세포를 옆구리에서 피하 주입하였다.

종양 접종 후 4 일 째에, 호중구 감소증을 평가하기 위해서 동물들을 하기스케줄에 따라 상기 분자들로 처리하였다.

이어서 ALC를 10 일 동안 투여하고; 동물들을 6 시간 후에 죽였다.

각각 15 마리의 마우스로 이루어진 실험 그룹들은 하기와 같다:

처리 스케줄 2: 각각 15 마리의 마우스로 이루어진 상기 언급한 바와 동일한 실험 그룹들(상이한 우리 번호를 가짐)을 생존율 및 종양 크기를 평가하기 위해서 하기와 같이 처리한다.

ALC 투여를 14 일간 지속하고(그룹 16,17,18) 종양이 대략 2 ㎝의 크기에 도달할 때까지 그 크기를 측정한다. 동물들을 100 일간 살려둔다.

처리 및 희생 표

종양 크기(길이 및 폭)를 종양을 측정할 수 있는 시간부터 캘리퍼스로 일주일에 2 회 측정한다. 종양 크기를 ㎝로 나타내며, 식 √(길이 x 폭)에 따라 평가한다.

종양 측정 스케줄

혈액 및 골수 세포를 첫 번째 처리 스케줄 동물들에 대해서 취한다. 이들을 죽이는 날에, 마우스를 CO₂로 마취시키고; 역-안와 다발로부터 혈액을 취하고(혈액 0.5 ㎖/마우스) 비스터 헤파린(5000 U/㎖) 10 ㎕를 함유하는 에펜도르프 시험관에 넣었다. 동물들을 경부 탈구에 의해 죽였다. 나중에, 골수 샘플을 취하였다.

혈구수 측정

WBC 수를 세기 전에, 델콘에서 공급된 EMACHECK 혈액 샘플 변수(인간 검사)를 측정함으로써 장비를 검사한다.

즉석 슈퍼프로스트 플러스 슬라이드(Mensel-Glaser)(25 x 75 x 1 ㎜)를 채택한다. 혈액(8 ㎕)을 상기 슬라이드의 우측에 놓고; 45°각으로 놓인 또 다른 슬라이드를 상기 2 개의 슬라이드들 간의 접촉 선을 따라 급속히 퍼지는 혈액 방울과 접촉하게 될 때까지 상기 혈액의 좌측으로 잡아당기고; 상기 슬라이드를 얇은 혈액 막이 얻어지도록 부드럽고 빨리 앞으로 이동시킨다. 상기 슬라이드를 공기 중에서 건조되도록 방치시키고, 첨부된 지시사항에 따라 디프-퀵(DADE) 염료로염색하고 공기 중에서 다시 건조시킨다.

상이한 그룹들 간에 수득된 호중구 과립구 값들의 비교는 ANOVA를 사용하여 수행한다. 종양 크기를 짝을 이루지 않은 데이터에 대해서 비-파라메트릭 만 휘트니(Mann Whitney) 시험을 사용하여 비교한다.

탁솔 처리(총 4 회로, 매 2 일 마다 30 ㎎/㎏ 복강내 투여)는 L-MM3 쥐 유방 세포를 접종시킨 마우스에서 다형핵형성을 현저하게 감소시켰다(비히클에 대해 -93%, p<0.0001). 탁솔 처리와 결합된 아세틸 L-카르니틴의 경구 투여(10 일 간 하루에 한번 100 ㎎/㎏)는 호중구 과립구의 탁솔-유발된 감소를 현저하게 방해할 수 있는 것으로 나타났다(335/㎜³대 65/㎜³, "p<0.01)(표 8).

호중구 과립구의 평가에 사용된 바와 동일한 스케줄에 따라 주입된 탁솔(총4 회로, 매 2 일 마다 30 ㎎/㎏ 복강내 투여)은 L-MM3 종양 성장(종양 크기가 대조군에서 대략 2 ㎝에 도달할 때까지 감시하였다)을 현저하게 억제하는 것으로 밝혀졌다(0.56 ㎝ 대 1.8 ㎝, p<0.0001). 14 일간 경구 투여된 ALC(하루에 한번 100 ㎎/㎏) + 탁솔(총 4 회로, 매 2 일 마다 30 ㎎/㎏ 복강내 투여)의 결합된 처리는 탁솔의 항암 활성에 영향을 미치지 않았다.

결론적으로, 상기 종양 모델에서도 역시, 탁솔은 중증 호중구 감소증을 야기시켰으며, 상기 유형의 골수 독성이 일어난 기간에 걸쳐 연속적으로 투여된 ALC는 다형핵형성에서 상기 탁솔-유발된 감소를 방지할 수 있었다. 동시에, ALC의 작용은 탁솔의 항암 활성에 영향을 미치지 않았다.

M109 쥐 폐암에서 탁솔의 항암 작용에 대한 아세틸 L-카르니틴(ALC)의 효과에 대한평가

탁솔은 난소, 유방 및 폐암, 및 다른 유형의 암의 치료에 효과적임이 입증되었다(Rowinsky, E.K., 및 R.C. Donehower(1991); Pharmacol. Ther. 52:35). 상기 화합물의 항암 작용은 주로 튜불린 단량체의 미소관들의 해중합을 억제하는 능력과 관련되며(Schiff, P.B., J. Fant 및 S.B. Horwitz. 1979. Nature); 이러한 효과는 세포 주기의 G₂/M 기, 즉 DNA 합성이 완료되는 중간기의 최종 단계와 후속적인 세포 분열 또는 유사분열 기간 사이의 세포 증식을 차단하며, 이에 의해 세포에서 상기 과정에 전형적인 일련의 사건들이 시작된다. 더욱이 탁솔은 다른 화학요법제들처럼 신경병증 및 골수 억제와 같은 부작용들과 관련된다.

비히클만으로 처리된 동물 그룹들 및 경구 투여된 아세틸 L-카르니틴과 함께 탁솔로 처리된 동물 그룹들에서 수득된 통계학적 데이터의 비교 시, 상기 후자 그룹에서 모든 관찰 기간 내내 통계학적으로 현저한 종양 덩어리의 감소가 발견되었다. 대조적으로, 비히클만으로 처리된 그룹과, 비히클과 아세틸 L-카르니틴으로 함께 처리된 그룹의 비교는 어떠한 관찰 시기에도 통계학적으로 현저한 종양 덩어리 성장의 차이가 나타나지 않았다. 탁솔로 처리된 그룹과 탁솔 및 아세틸 L-카르니틴으로 함께 처리된 그룹들간의 비교와 관련된 데이터의 분석은 종양 중량의 현저한 차이를 보이지 않았다. 전이 수에 대한 분석에 관해서, 수득된 데이터는 탁솔로 처리된 그룹, 탁솔과 아세틸 L-카르니틴으로 처리된 그룹 및 비히클과 아세틸 L-카르니틴으로 처리된 그룹은 비히클만으로 처리된 그룹에 비해 상기 수의감소가 통계학적으로 현저함을 보였다. 특히, 탁솔로 처리된 마우스 또는 탁솔과 아세틸 L-카르니틴으로 함께 처리된 마우스는 또한 비히클만으로 처리된 그룹 또는 비히클과 아세틸 L-카르니틴으로 함께 처리된 그룹에 비해 전이 직경의 감소를 보였다. 따라서, 본 발명자들은 하기의 테이터 분석을 근거로, 아세틸 L-카르니틴이 종양 덩어리의 억제와 관련하여 탁솔의 항암 작용을 방해하지 않음을 진술할 수 있다. 또한, 아세틸 L-카르니틴은 폐 전이의 형성에 대해 현저한 억제 효과를 보였다.

하기의 실시예는 본 발명의 상기 추가의 태양을 예시한다.

실시예 8

M109 폐암이 있는 마우스에서 탁솔의 항암 작용에 대한 아세틸 L-카르니틴(ALC)의 효과에 대한 평가

굿 레보라토리 프랙티스(GLP)에 따라 수행된 연구에서, 종양 성장에 대한 탁솔과 결합된 아세틸 L-카르니틴(ALC)의 작용을 평가하기 위해서, Balb/c 마우스에게 쥐의 유방 암(L-MM3)을 접종하고 상기 동물을 ALC+탁솔과 탁솔 또는 ALC만으로 처리하였다. 또한, 상기 종양 모델에서, 순환 호중구의 양을 측정하였다.

주입용 제제를 위해 물에 용해시킨 아세틸 L-카르니틴 분자내 염(멸균 앰플, 0.5 g)을 사용하였다.

각각의 ALC 앰플을 제공된 용매 4 ㎖에 용해시켰다(용액 O). 정확하게 하기 위해서, 용액 O 1.6 ㎖을 멸균 완충액(PBS, Sigma P-4417)으로 40 ㎖이 되게하고 이어서 경구 투여하였다(100 ㎎/㎏/20 ㎖).

탁솔(paclitaxel(INDENA), 코드번호 3926570)을 칭량하고, 특정한 비히클(에탄올로 1:1 희석시킨 크레모포어(등록상표) EL(BASF))에 용해시키고 광 차단 하에 +4 ℃에서 보관하였다. 사용 시에, 12 ㎎/㎖ 용액을 인산염 완충 염수(PBS)(SIGMA)로 1:4 희석시키고 복강내 주입하였다(30 ㎎/㎏/10 ㎖).

동물: 18 g 중량의 암컷 BALB/c 마우스(Harlan) 60 마리

랜덤화: 동물 집단에서 무작위적임.

동물 중량: 마우스의 중량을 처리 시작 전 및 실험이 끝날때까지 1 주일에 한번 측정한다.

M109 종양 세포를 충실성 종양으로부터 단리하였다.

문헌[Kedar E., B. Ikejiri, G.D. Bannard 및 R.B. Herberman, Eur. J. Cancer Clin. Oncol. 18; 991: 1982]에 개시된 공정을 변형시켜 수행한다. 한 마리의 Balb/c 마우스(공여자)를 경부 탈구에 의해 죽이고, 그의 등을 변성된 알콜로 세척한 후에, 등 피부를 2 개의 부분으로 종방향 절개하고 분리시켜 종양 덩어리를 제거하였다. 상기 덩어리를 멸균 거즈 상에 놓고, 여기에서 상기로부터결합 조직 유착물, 및 괴사 및 출혈 부분을 제거하였다. 연구용 조직을 pH 7.2에서 Ca⁺⁺및 Mg⁺⁺를 갖는 PBS(Gibco)를 함유하는 플레이트에 놓고, 냉각시키고, 2 내지 3 ㎜ 크기의 조각으로 분쇄하고, 트립신(III 유형, 10000 U/단백질 ㎎, Sigma-Aldrich) 2 ㎎/㎖, 콜라게나제(I-S 유형, 180 U/고체 ㎎, Sigma) 2 ㎎/㎖, DNA아제(I 유형, 1548 U/단백질 ㎎, Sigma) 0.2 ㎎/㎖ 및 젠타마이신(Sigma) 25 ㎍/㎖을 함유하는, pH 7.2의 Ca⁺⁺및 Mg⁺⁺를 갖는 PBS 용액에 재현탁(종양 g 당 용액 15 ㎖)시키고, 일정하게 교반하면서 15 분간 37 ℃에서 배양시켰다. 이어서 세포 현탁액을 포터(B. Braun)의 도움으로 2 분간 균질화시키고, 37 ℃에서 10 분간 배양하고, 21 번 멸균 바늘을 갖는 주사기로 수회 부드럽게 흡기시켰다. 4 ℃에서 유지된, 10% FBS(Eurobio)를 함유하는 RPMI-1640(Eurobio) 30 ㎖을 첨가한 후에, 세포 현탁액을 멸균 거즈 상에서 여과하고 이어서 700 g에서 10 분간 원심분리시켰다. 세포 펠릿을 10% FBS 및 DNA아제(Sigma) 0.2 ㎎/㎖을 함유하는 RPMI-1640에 서서히 재현탁시키고 700 g에서 10 분간 원심분리시켰다. 상기 펠릿을 RPMI-1640으로 연속적으로 2 회 세척하고; 마지막 세척의 끝에서 상기 펠릿을 세포 농도를 정하기 위한 셈을 수행하기 위해서 RPMI-1640에 서서히 재현탁시켰다.

현미경 하에서의 세포수 측정: 세포 수를 트리판-블루 바이탈 염색 제외 시험에 의해 측정하고; 종양 세포를 생존 세포와 죽은 세포를 구분할 수 있게하는 0.4% 트리판-블루(Sigma) 바이탈 염료로 적절히 희석한다. 수를 셀 세포를 함유하는 희석액을 서서히 교반하고, 10 ㎕를 회수하여 버커(Burker) 챔버를 만드는데 사용하였다. 서로 이중 선으로 한계를 정한 16 개의 작은 사각형(4 x 4)을 포함하는, 삼중 선으로 범위를 정한 사각형 그리드를 사용하였다. 생존 세포들(반투명으로 보임)과 죽은 세포들(염료가 혼입되어 있어, 청색으로 보임)은 모두 중간 선과 삼중 선에 의해 형성된 사각형의 내부, 또는 선 자체 상에 위치하는 것으로 나타났다. 이러한 조작을 추가로 3 개의 사각형에 대해 반복수행하고, 그 후에 각 사각형에서 측정된 세포 수의 합을 계산하며 상기 4 개의 사각형에서 취한 판독치로부터 산술 평균을 정하였다. 생존 세포의 산술 평균에, 사용된 희석 인자와 상기 수 측정에 사용된 챔버의 유형에 대해 특이적인 힘의 인자(10⁴)를 곱하여, 1 ㎖ 중에 함유된 생존 세포의 수를 수득하였다. 전체 세포의 산술 평균에 대한 생존 세포의 산술 평균 비에 100을 곱하여 세포 생존율로 나타낸다.

접종 조건: 대략 18 g 중량의 마취되지 않은 Balb/c 마우스(Harlan) 60 마리에 우측 뒷다리에 RPMI-1640(Sigma) 0.1 ㎖ 중의 3 x 10⁵M109 폐암 세포를 근육내 주입하였다.

처리 스케줄: 각각 15 마리의 Balb/c 마우스로 이루어진 실험 연구 그룹들의 종양 크기를 평가하기 위해서, 3 x 10⁵M109 폐암 세포를 접종하고, 연구중인 분자들을 지정된 시간으로 투여하였다. ALC를 4 일에서부터 17 일까지 100 ㎎/㎏의 투여량으로 경구 투여하였다. 모액으로부터 PBS로 1:4로 희석된 비히클을 8,10,12 및 14 일째에 복강내 투여하였다. 탁솔을 하기 스케줄에 개시된 바와같이 8,10,12 및 14 일째에 30 ㎎/㎏의 투여량으로 복강내 투여하였다:

동물들을 M109 쥐 폐암 세포 접종 후 22 일까지 계속 관찰하고, 이어서 죽이고 전이 수를 측정하기 위해서 폐를 회수하였다.

처리 표:

종양 처리 스케줄:

종양 측정: 종양을 촉지 되자마자 1 주일에 3 회 캘리퍼스로 측정하였다. 종양 덩어리를 하기 식에 따라 2 개의 치수 측정치(길이 및 폭, ㎜)를 기준으로 계산한다:

(길이 x 폭²)/2=종양 부피(㎜³)

통상적으로 종양 밀도를 1로 간주하는 경우, 결과는 ㎜³으로 나타낸 종양 부피는 ㎎으로 나타낸 종양의 중량과 같다이다.

폐 전이 수의 측정: M109 쥐 폐암 접종 후 22 일째에, 연구 동물들을 경부 탈구에 의해 죽였다. 이어서 상기 동물들의 폐를 회수하고 하기 조성의 뷰인(Bouin) 용액 5 ㎖ 중에서 대략 5 내지 7 일간 보관하였다: 포화된 피크르산 용액(Merck) 71% 및 10% 포름알데히드(Fluka) 24%. 폐 전이가 분명해졌을 때, 그 수를 세었다.

종양 크기 및 폐 전이의 수에 대한 데이터의 통계학적 분석을 짝을 이루지 않은 데이터에 대해 비-파라메트릭 만-휘트니 시험을 사용하여 수행하였다.

상기 다양한 연구 동물 그룹들에서 얻은 데이터의 분석은 비히클만으로 처리된 그룹의 마우스에 비해 복강내 투여된 탁솔 30 ㎎/㎏으로 처리된 마우스 그룹에서 종양 덩어리의 성장 억제를 보였다(표 9). 이러한 현상은 단지 상기 약제를 처음 투여한 후에 이미 나타났으며, 탁솔로 처리된 그룹과 비히클만으로 처리된 그룹간의 종양 중량의 차이는 p<0.01로 통계학적으로 현저한 것으로 나타났다. 2 차 투여 후에, 관찰된 종양 덩어리의 감소가 비히클만으로 처리된 그룹에 비해 통계학적 유의수준 차(p<0.0001)로 유지되며, 이러한 종양 덩어리의 억제는 후속의 투여 후에도 유지된다. 30 ㎎/㎏의 투여량으로 복강내 투여된 탁솔과 100 ㎎/㎏의 투여량으로 경구 투여된 아세틸 L-카르니틴으로 함께 처리된 동물 그룹들은 이미 상기 첫 번째 처리 후에 비히클 단독 처리에 비해 p<0.05의 유의수준으로 종양 덩어리 성장 감소를 나타낸다. 이러한 경향은 또한 후속적인 투여 후에도 유지된다. 종일 상기 분석 수행 시, 비히클과 아세틸 L-카르니틴으로 함께 처리된 그룹은 비히클만으로 처리된 그룹에 비해 종양 덩어리 성장에 매우 현저한 차이를 보이지 않았다. 더욱 또한, 탁솔만으로 처리된 그룹과 탁솔+아세틸 L-카르니틴으로 함께 처리된 그룹들 간의 비교는 어떠한 분석 일에도 종양 덩어리 크기에 있어서 통계학적으로 현저한 차이를 나타내지 않았다. 따라서 본 발명자들은 하기의 테이터 분석을 근거로 아세틸 L-카르니틴이 종양 덩어리 억제의 면에서 탁솔의 항암 작용을 방해하지 않음을 진술할 수 있다.

실험의 끝에서, 전이 수의 분석에 관해, 수득된 데이터는 비히클만으로 처리된 그룹에 비해, 탁솔로 처리된 그룹, 탁솔과 아세틸 L-카르니틴으로 함께 처리된 그룹, 및 비히클과 아세틸 L-카르니틴으로 함께 처리된 그룹에서 상기 전이 수가 통계학적으로 현저한 감소를 나타낸다. 특히, 탁솔 또는 탁솔과 아세틸 L-카르니틴으로 함께 처리된 마우스는 또한 비히클만으로 또는 비히클+아세틸 L-카르니틴으로 처리된 그룹에 비해 전이 직경의 감소를 나타냈다(표 10). 수득된 데이터의 분석을 근거로, 아세틸 L-카르니틴이 폐 전이의 형성에 대해 가벼운 억제 효과를 가짐을 제시할 수 있다.

ALC는 탁솔의 치료 효과를 방해하지 않으며 이러한 태양은 또한 하기 실시예에 예시된 바와 같이 인간 종양 모델에서도 평가되었다.

실시예 9

인간 종양 모델에서 탁솔의 항암 활성에 대한 아세틸 L-카르니틴(ALC) 처리의 영향에 대한 연구

털없는 마우스에 이식된, LOVO 인간 결장암의 세포 배양액을 사용하였다.

상기 종양을 마우스의 양쪽 옆구리에 고형 단편으로 접종하였다.

상기 접종된 종양들을 캘리퍼스로 측정하고 평균 종양 중량이 100 ㎎에 도달했을 때(7 일), 동물들을 각각 하기 스케줄에 따라 5 마리씩 4 그룹으로 분할하였다:

그룹 1 대조군

그룹 2 탁솔

그룹 3 ALC

그룹 4 탁솔+ALC

같은 날에, ALC 처리를 개시하고 연속해서 18 일간(qdx 18)(그룹 3 및 4) 속행하였다. ALC를 25 ㎖/㎏의 투여 부피를 갖는 100 ㎎/㎏의 투여량으로 투여하였다.

탁솔(54 ㎎/㎏/15 ㎖/㎏)을 4 일 간격으로(q4dx4; 10,14,18,22 일) 총 4 회의 투여로 이루어진 스케줄에 따라 정맥내 투여하였다(그룹 2 및 4).

처리하는 동안 및 격주로 다음 3 주간, 종양을 측정하고 다양한 처리에 의해 수득된 종양 부피 억제를 계산하였다(TVI%, 100-(처리된 종양의 평균 중량/대조용 종양의 평균 중량 x 100)으로 계산함).

탁솔 처리는 종양 성장을 억제시켰다(TVI=88%). ALC 처리는 종양 성장에 영향을 미치지 않았으며, 이는 대조용 종양의 경우와 유사하였다. 탁솔+ALC의 결합된 처리는 탁솔만으로 처리된 효능과 거의 동일한 항암 효능(TVI=90%)을 나타냈으며, 이는 ALC가 탁솔의 세포파괴 활성을 방해하지 않음을 입증한다.

실시예 10

블레오마이신-유발된 폐 독성에 대한 아세틸 L-카르니틴(ALC) 처리의 영향에 대한 연구

중량 120 g의 햄스터를 도관내(IT)로 블레오마이신(1 단위)으로 또는 동일한 부피의 염수로 처리하였다. 또한, 상기 동물들을 블레오마이신 점적 직전에 복강내로 ALC(200 ㎎/㎏) 또는 염수로 예비-처리한 다음, 1 주일간 매일 주입하였다. 상기 동물들을 조직 샘플을 취하기 전에 3 주간 회복시켰다. 조직 샘플을 취할 때(22 일째), 각 동물의 하나의 폐를 조직 검사를 위해 준비하고 다른 폐는 하이드록시프롤린의 정량적인 측정을 위해서 준비하였다.

실험 그룹들을 하기와 같이 편성하였다:

1. 염수/염수로의 예비 처리(IT)

2. 염수/블레오마이신으로의 예비 처리(IT)

3. ALC/염수로의 예비 처리(IT)

4. ALC/블레오마이신으로의 예비 처리(IT)

3 개의 실험을 총 41 마리의 동물로 수행하였다.

폐를 PBS(pH 7) 중의 10% 포름알데히드로 생체 외에서 20 ㎝의 H₂O를 취입시켜 고정시키고, 파라핀에 묻고, 얇은 조각으로 만들고, 헤마톡실린/에오신으로 염색하였다. 폐엽의 부분-각각 상부, 중간 및 하부-과 유사한 배향을 갖는 조각들을 검사하여 염증성 침윤물, 부종, 및 간극 및 폐포내 섬유증의 존재 및 정도를확인하였다.

염수를 투여하거나 ALC/염수를 IT로 예비 처리한 폐는 정상적인 폐포 구조를 나타냈다. 블레오마이신(IT)으로 처리되거나 염수만으로 예비 처리된 동물들은 치밀한 섬유증, 폐포 무기폐 및 부종을 나타냈다. ALC로 예비 처리된 동물에서는 다수의 섬유성 영역들이 존재했으나, 덜 치밀한 허탈 영역으로 보다 얇게 보였다.

하이드록시프롤린(콜라겐의 주요 구성성분들 중 하나) 함량을 공지된 베스너(Woessner) 방법을 사용하여 측정하였다. 폐 샘플들을 균질화시키고, NaOH로 가수분해시키고, 이어서 에를리히(Erlich) 알데히드 시약을 가하기 전에 산화되도록 방치시켰다. 각 샘플의 이중 분액들을 분광광도 측정법에 의해 분석하고 정제된 하이드록시프롤린에 의해 수득된 표준 측정 곡선과 비교하였다. 하이드록시프롤린 함량(HYP)을 ㎎/폐로 나타낸다.

비처리된 햄스터 또는 ALC 만으로 처리된 햄스터는 정상적인 허용치에 필적할만한 HYP 수준을 나타내었다. 블레오마이신으로 처리된 동물들은 섬유화 반응 중에 증가된 콜라겐의 침착과 일치하는 HYP의 증가를 나타내었다. 그러나, ALC로 처리된 동물들은 블레오마이신으로 처리된 동물들에 비해 HYP의 감소를 나타내었으며, 이는 섬유화 반응의 개선과 일치한다.

ALC는 블레오마이신으로 처리된 동물에서 섬유화 반응을 감소시킨다.

실시예 11

생체내에서 프로피오닐 L-카르니틴(PLC) 존재 하의 탁솔의 항암 활성의 증가

세포 배양액 및 종양 접종 조건:

5% CO₂가습 대기 하에서 플라스틱 플라스크 중에서 37 ℃에서 배양한 L-MM3 쥐 유방암 세포의 세포 배양액을 사용하였다. 상기 세포들을 10% FCS가 보충된 DMEM 중에서 2 mM L-글루타민 및 80 ㎍/㎖의 젠타마이신의 존재 하에서 증식시켰다. 트립신-EDTA를 사용하여 지수 증식기의 융합이하 세포들을 수거하고, DMEM에 재현탁시켰다. 이어서 이를 20 g 중량의 암컷 Balb/c 마우스에게 4 x 10⁵밀도로 피하 주입하였다.

종양 측정 방법

종양을 촉지 되자마자 1 주일에 3 회 캘리퍼스로 측정하였다. 종양 덩어리를 하기 식에 따라 2 개의 치수 측정치(길이 및 폭, ㎜)를 기준으로 계산한다:

(길이 x 폭²)/2=종양 부피(㎜³)

탁솔 제조 방법

사용된 약제: 탁솔(paclitaxel INDENA). 상기 약제를 칭량하고, 특정한 비히클(12 ㎎/㎖)에 용해시키고, +4 ℃에서 보관하고, 빛을 차단시켰다. 사용 시에, 상기를 인산염 완충 염수(PBS, SIGMA)로 1:4로 희석하고 주입하였다.

약제 비히클: 크레모포어 EL(BASF).

크레모포어를 에탄올로 1:1 희석하고 빛을 차단하여 보관하였다. 처리 일에 상기를 PBS로 1:4 희석하였다.

동물들을 선택하고 선행 실시예들에 개시된 바와 같이 처리하였다.

처리 조건

스케줄 A): 마우스를 하기 스케줄에 따라 탁솔 30 ㎎/㎏을 복강내로, PLC 100 ㎎/㎏을 피하로 처리하였다.

A)

B)

상기 두 처리 스케줄에서, 대조군, 탁솔 및 PLC 그룹을 동일한 세포 수로 접종하였다.

또한, 탁솔 처리, 및 동시에 탁솔만으로 처리된 그룹과 탁솔+PLC로 처리된 그룹 모두에 대해 동일한 공정을 제공하였다.

처리 스케줄 A)에서 PLC 처리는 단독으로 수행하든지 또는 탁솔과 함께 수행하든지 간에 종양 접종 후 12 일째에 시작하여 24 일째에 끝내고; 처리 스케줄 B)에서는 상기 처리를 종양 접종 후 5 일째에 시작하여 상기 실험의 끝, 즉 59 일째에 종료한다.

결과

실험 A)

종양을 갖는 동물/전체 동물 수

종양 크기

짝을 이루지 않은 데이터에 대해서 비-파라메트릭 만-휘트니 시험을 적용할 때, 모든 관찰 시에 탁솔+PLC 그룹 대 대조군 그룹에서 p<0.003의 유의 수준 차이가 나타났고, 오직 최종 관찰 시(46 일째)에만 상기 유의 수준이 p<0.034로 떨어졌다. 46 일째의 탁솔 그룹에 대한 값들은 대조군 그룹의 값들과 현저하게 상이하지 않았음을 주목해야 한다.

실험 B)

종양을 갖는 동물/전체 동물 수

종양 크기

윌콕슨 통계 시험을 상기 실험에 적용하여, 오직 대조군만이 탁솔+PLC 그룹과 p<0.05로 현저하게 상이한 것으로 밝혀졌다.

상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 화학식 I의 화합물은 항암제와 협력하여치료 지수가 개선되고 전형적인 항암 화학요법의 부작용이 감소되어, 종양의 치료에 유용하게 사용할 수 있다.

Claims

항암제를 포함하는 약제의 제조를 위한 하기 화학식 I 화합물의 용도로, 상기 화합물이 상기 항암제의 활성과 상승효과를 생성시킴을 특징으로 하는 용도:

화학식 I

상기 식에서,

R은 수소, 또는 탄소수 2 내지 8의 알카노일 그룹이고,

X^-는 약학적으로 허용가능한 염의 음이온을 나타낸다.
제 1 항에 있어서, R이 프로피오닐인 용도.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 항암제가 탁솔인 용도.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 항암제가 블레오마이신인 용도.
전이의 감소에 유효한 약제의 제조를 위한 하기 화학식 I 화합물의 용도:

화학식 I

상기 식에서,

R은 수소, 또는 탄소수 2 내지 8의 알카노일 그룹이고,

X^-는 약학적으로 허용가능한 염의 음이온을 나타낸다.
제 5 항에 있어서, 처리되는 종양이 폐 종양인 용도.
제 5 항 또는 제 6 항에 있어서, R이 아세틸 그룹인 용도.
탁솔, 카르보플라틴, 블레오마이신 및 빈크리스틴으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 항암제를 포함하는 약제의 제조를 위한 제 1 항에 따른 화합물의 용도, 특히 아세틸 L-카르니틴 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염들 중 하나의 용도로, 상기 약제에 상기 항암제의 전형적인 부작용이 실질적으로 없음을 특징으로 하는 용도.
제 8 항에 있어서, 항암제가 탁솔인 용도.
제 8 항에 있어서, 항암제가 블레오마이신인 용도.
제 8 항 또는 제 9 항에 있어서, 부작용이 호중구 감소증인 용도.
제 8 항 또는 제 9 항에 있어서, 부작용이 말초 신경병증인 용도.
제 8 항 또는 제 10 항에 있어서, 부작용이 폐 손상인 용도.
탁솔, 아세틸 L-카르니틴 및 프로피오닐 L-카르니틴, 및 임의로 L-카르니틴을 포함하는 복합물.
항암 활성을 갖는 약제의 제조를 위한 제 14 항에 따른 복합물의 용도로, 상기 약제가 상승 작용을 발휘하고 부작용이 실질적으로 없거나 또는 단지 제한된 부작용만을 나타냄을 특징으로 하는 용도.
제 14 항에 따른 복합물을 약학적으로 허용가능한 비히클 및/또는 부형제와의 혼합물로 포함하는 약학 조성물.
제 16 항에 있어서, 치료 유효량의 탁솔을 보호량의 아세틸 L-카르니틴 및 상승작용량의 프로피오닐 L-카르니틴 및 임의로 L-카르니틴과 함께 약학적으로 허용가능한 비히클 및/또는 부형제와의 혼합물로 포함하는 약학 조성물.
블레오마이신 및 아세틸 L-카르니틴, 및 임의로 L-카르니틴을 포함하는 복합물.
항암 활성을 갖는 약제의 제조를 위한 제 18 항에 따른 복합물의 용도로, 상기 약제가 부작용이 실질적으로 없거나 또는 단지 제한된 부작용만을 나타냄을 특징으로 하는 용도.
제 18 항에 따른 복합물을 약학적으로 허용가능한 비히클 및/또는 부형제와의 혼합물로 포함하는 약학 조성물.
제 20 항에 있어서, 치료 유효량의 블레오마이신을 보호량의 아세틸 L-카르니틴과 함께 약학적으로 허용가능한 비히클 및/또는 부형제와의 혼합물로 포함하는 약학 조성물.
a) 치료 유효량의 항암제를 포함하는 약학 조성물;

b) 상기 항암제와 상승효과를 생성시키기에 적합한 양의 제 1 항에 따른 하나 이상의 화합물을 포함하는 약학 조성물;

c) 상기 항암제의 부작용에 대해 실질적으로 보호 작용을 생성시키기에 적합한 양의 제 1 항에 따른 하나 이상의 화합물을 포함하는 약학 조성물

을 포함하는 키트.

<청구항 22>

a) 치료 유효량의 항암제를 포함하는 약학 조성물;

b) 상기 항암제와 상승효과를 생성시키기에 적합한 양의 제 1 항에 따른 하나 이상의 화합물을 포함하는 약학 조성물

을 포함하는 키트.
a) 치료 유효량의 항암제를 포함하는 약학 조성물;

b) 상기 항암제의 부작용에 대해 실질적으로 보호 작용을 생성시키기에 적합한 양의 제 1 항에 따른 하나 이상의 화합물을 포함하는 약학 조성물

을 포함하는 키트.
유효 성분으로서, 탁솔, 카르보플라틴 및 빈크리스틴으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 치료 유효량의 항암제 및 해독량의 제 1 항에 따른 하나 이상의 화합물 또는 그의 약리학적으로 허용가능한 염들 중 하나를 포함하는 약학 조성물.
제 24 항에 있어서, 알카노일 L-카르니틴이 아세틸 L-카르니틴, 프로피오닐 L-카르니틴, 부티릴 L-카르니틴, 발레릴 L-카르니틴 및 이소발레릴 L-카르니틴으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 조성물.
제 24 항에 있어서, L-카르니틴 또는 알카노일 L-카르니틴의 약리학적으로 허용가능한 염이 클로라이드, 브로마이드, 오로테이트, 산 아스파테이트, 산 시트레이트, 산 포스페이트, 푸마레이트 및 산 푸마레이트, 말리에이트 및 산 말리에이트, 산 옥살레이트, 산 설페이트, 글루코스 포스페이트, 타르트레이트 및 산 타르트레이트로 이루어진 그룹 중에서 선택된 조성물.
탁솔, 블레오마이신, 카르보플라틴 및 빈크리스틴으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 치료 유효량의 항암제 및 해독량의 L-카르니틴 또는 알카노일 L-카르니틴(여기에서 선형 또는 분지된 알카노일은 탄소수 2 내지 8을 갖는다), 또는 이들의 약리학적으로 허용가능한 염들 중 하나의, 항암 효능을 보존함과 동시에 상기 항암제에 의해 유발된 독성을 감소시키기 위한 통합된 용도.
제 27 항에 있어서, 투여가 연속적인 용도.
제 28 항에 있어서, 항암제 및 L-카르니틴 또는 알카노일 L-카르니틴의 투여가 실질적으로 동시적인 용도.
약제의 동시적인 통합된 복용 또는 예정된 투여 섭생에 따른 복용을 위한 설명서가 첨부된, 제 16 항, 제 17 항, 제 20 항, 제 21 항, 제 22 항, 제 24 항, 제 25 항 및 제 26 항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물을 포함하는 제품.