KR102591955B1 - 증강된 fviii 보인자 기능 대체 활성을 갖는 이중특이성 항체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은, ACE910(Emicizumab)의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 향상시키는 경쇄의 아미노산 치환, FVIII 보인자 기능 대체 활성을 나타내는 신규 경쇄, 및 신규 경쇄를 갖는 이중특이성 항체의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 향상시키는 중쇄의 아미노산 치환을 제공한다.

Description

증강된 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 갖는 이중특이성 항체
본 발명은, 증강된 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 갖는 항체, 그와 같은 항체를 유효 성분으로서 함유하는 약학적 제제, 및 상기 항체를 제조하는 방법 등에 관한 것이다. 보다 구체적으로는 ACE910(Emicizumab)보다도 높은 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 갖는 이중특이성 항체에 관한 것이다.
혈우병 A는 선천성의 혈액 응고 제 VIII 인자(FVIII)의 기능 저하 또는 결손에 의한 출혈 이상증이다. 혈우병 A 환자의 출혈에 대해서는, FVIII 제제가 통상 투여된다(on-demand 투여). 또한, 근년에는, 출혈 이벤트를 막기 위해서, 예방적으로 FVIII 제제가 투여된다(비특허문헌 1, 2)(예방 투여). FVIII 제제의 혈중 반감기는 약 12∼16시간 정도이다. 그러므로, 계속적인 예방을 위해서는, 주에 3회, FVIII 제제가 환자에게 투여된다(비특허문헌 3, 4). 또한, on-demand 투여에 있어서는, 재출혈을 막기 위해, FVIII 제제를 필요에 따라 일정 간격으로 추가 투여한다. 또한, FVIII 제제의 투여는 정맥내에 실시된다. 따라서, FVIII 제제와 비교해서 투여의 부담이 적은 약제가 강하게 요구되고 있었다.
때때로, FVIII에 대한 항체(인히비터)가 혈우병 환자에게 발생한다. 인히비터는 FVIII 제제의 효과를 상쇄한다. 인히비터가 발생한 환자(인히비터 환자)의 출혈에 대해서는, 바이패스 제제가 투여된다. 그들의 작용 기서는 FVIII의 기능, 즉 활성화 혈액 응고 제 IX 인자(FIXa)에 의한 혈액 응고 제 X 인자(FX)의 활성화를 촉매하는 기능에 비의존이다. 그 때문에, 바이패스 제제가 출혈을 충분히 멈출 수 없는 경우가 있다. 따라서, 인히비터의 존재에 좌우되지 않고, FVIII의 기능을 대체하는 약제가 강하게 요구되고 있었다.
이들 과제를 해결하는 수단으로서, FVIII의 기능을 대체하는 이중특이성 항체 및 그의 사용이 보고되어 있다(특허문헌 1, 2, 3 및 4). FIXa와 FX에 대한 이중특이성 항체는, 양 인자를 근방에 위치하게 하는 것에 의해서, FVIII 보인자 기능 대체의 활성을 발휘하여, FVIII의 기능을 대체하는 것이 가능하다(비특허문헌 5). 한편, FIXa와 FX에 대한 이중특이성 항체의 FVIII 보인자 기능 대체 활성은 비색 정량법을 이용한 FIXa에 의한 FX 활성화 반응 시험, 및 혈우병 A 혈장을 이용한 트롬빈 생성 시험으로부터 산출된 활성을 가리킨다. 해당 항체의 FVIII 보인자 기능 대체 활성은 FIXa와 FX에 대한 친화성을 최적화하는 것에 의해 향상시킬 수 있는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 6). 또한, 해당 항체의 FVIII 보인자 기능 대체 활성은 IgG의 아이소타입, 다이설파이드 결합 패턴, 힌지 영역의 아미노산 서열, Fc 영역의 당쇄의 유무에 의해 영향을 받는 것이 알려져 있다(비특허문헌 7). 해당 항체 중 하나이고, 높은 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 갖는 ACE910(Emicizumab)은 원숭이 혈우병 모델에서 지혈 효과를 발휘하는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 8, 9). 또 ACE910(Emicizumab)은 정상인을 대상으로 한 임상 시험에 있어서, 우수한 약물 동태(긴 반감기)와 인용성이 확인되고(비특허문헌 10), 인히비터 비보유, 보유의 혈우병 A의 환자를 대상으로 한 임상 시험에 있어서, ACE910(Emicizumab)의 투여 전과 비교해서, ACE910(Emicizumab) 투여에 의해 현저한 출혈 횟수의 억제가 확인되었다(비특허문헌 11).
이와 같이 임상 시험에 있어서 출혈 횟수의 억제 효과가 확인된 ACE910(Emicizumab)이지만, FVIII 결핍 혈장을 이용한 in vitro 트롬빈 생성 시험에서의 최대 트롬빈 생성량(Peak height)에 있어서의 ACE910(Emicizumab)에 의한 개선 효과는, 정상 레벨의 100U/dL의 FVIII 활성과 비교해서 낮기 때문에(비특허문헌 8), 더한층의 약효의 증강이 요망됨과 함께, 비(比)활성 향상에 의한 가일층의 투여량의 감소 등이 가능한 이중특이성 항체가 요구되고 있다.
ACE910(Emicizumab)은 동물 면역으로부터 취득된 항FIX 항체 및/또는 항FIXa 항체, 및 항FX 항체를 인간화하는 것에 의해 얻어진 hBS1을 리드 항체로 하고, 리드 항체에 다수의 아미노산 치환을 도입함으로써 다면적으로 최적화된 이중특이성 항체이며, 높은 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 갖지만(비특허문헌 6, 특허문헌 4), 약효의 증강이나 비활성 향상을 위해서는, ACE910(Emicizumab)보다도 높은 최대 활성(FVIII 보인자 기능 대체 활성의 최대 활성)을 갖고, 또한 ACE910(Emicizumab)보다도 낮은 농도에서 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 발휘할 수 있는 FVIII 기능 대체의 이중특이성 항체가 필요하다. 그러나, 지금까지 최대 활성 및 농도의 관점에서 ACE910(Emicizumab)보다도 높은 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 갖는 이중특이성 항체는 보고되어 있지 않다.
WO 2005/035754 WO 2005/035756 WO 2006/109592 WO 2012/067176
Blood 58, 1-13(1981) Nature 312, 330-337(1984) Nature 312, 337-342(1984) Biochim.Biophys.Acta 871, 268-278(1986) Nat Med. 2012 Oct;18(10):1570-4. PLoS One. 2013;8(2):e57479. MAbs. 2015;7(1):120-8. J Thromb Haemost. 2014 Feb;12(2):206-213. Blood. 2014 Nov 13;124(20):3165-71. Blood. 2016 Mar 31;127(13):1633-1641 New Eng J Med 2016 May 26;374(21):2044-2053
본 발명은 상기와 같은 상황에 비추어 이루어진 것으로, FVIII 보인자 기능 대체 활성이 증강된 항체, 그와 같은 항체를 유효 성분으로서 함유하는 약학적 제제, 그들의 제조 방법 등을 제공하는 것을 목적으로 한다. 보다 구체적으로는 ACE910(Emicizumab)보다도 높은 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 갖는 이중특이성 항체를 제작하기 위한 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 부위의 변이 혹은 ACE910(Emicizumab)과는 상이한 신규 경쇄의 CDR 서열, 및 동 변이 혹은 동 CDR 서열을 갖는 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체, 당해 항체의 제조 방법, 당해 항체를 유효 성분으로서 포함하는 약학적 제제, 또는 당해 약학적 제제에 의한 혈우병 A의 치료 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해, ACE910(Emicizumab)의 경쇄 가변 영역의 다양한 부위에 아미노산 치환을 도입한 변이체를 제작한 바, FVIII 보인자 기능 대체 활성을 증강하는 아미노산 치환을 발견하는 것에 성공했다. 또한, 인간 항체 라이브러리로부터 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 갖는 ACE910과는 상이한 서열을 갖는 신규 경쇄를 취득하는 것에 성공하고, 해당 경쇄에 있어서 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 증강하는 아미노산 치환을 발견하는 것에 성공했다. 또한 해당 경쇄를 이용한 이중특이성 항체의 중쇄 가변 영역의 다양한 부위에 아미노산 치환을 도입한 변이체를 제작한 바, FVIII 보인자 기능 대체 활성을 증강하는 아미노산 치환을 발견하는 것에 성공했다. 본 발명은 이와 같은 지견에 기초하는 것으로, 구체적으로는 하기 〔1〕∼〔12〕를 제공하는 것이다.
〔1〕 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드.
〔2〕 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체.
〔3〕 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 3 폴리펩타이드 및 제 4 폴리펩타이드 중 어느 한쪽의 폴리펩타이드는 서열번호: 47에 기재된 항체 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 포함하고, 다른 쪽의 폴리펩타이드는 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, 다른 쪽의 폴리펩타이드는 Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체.
〔4〕 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드.
〔5〕 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체.
〔6〕 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, N52, T52a, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드.
〔7〕 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, N52, T52a, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체.
〔8〕 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 3 폴리펩타이드는 서열번호: 42에 기재된 항체 경쇄의 아미노산 서열, 제 4 폴리펩타이드는 서열번호: 44에 기재된 항체 경쇄의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, 제 1 폴리펩타이드는 Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체.
〔9〕 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄의 아미노산 서열, 제 3 폴리펩타이드는 서열번호: 43에 기재된 항체 경쇄의 아미노산 서열, 제 4 폴리펩타이드는 서열번호: 44에 기재된 항체 경쇄의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, 제 2 폴리펩타이드는 Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, T52a, N52, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체.
〔10〕 항체 경쇄로서, 하기 (a1) 내지 (a6), (b1) 내지 (b23) 및 (c1) 내지 (c3)으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄.
(a1) 서열번호: 13에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNK131)
(a2) 서열번호: 14에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNK284)
(a3) 서열번호: 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNK315)
(a4) 서열번호: 16에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNL182)
(a5) 서열번호: 17에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNL492)
(a6) 서열번호: 18에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNL576)
(b1) 서열번호: 19에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK131)
(b2) 서열번호: 20에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK163)
(b3) 서열번호: 21에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK252)
(b4) 서열번호: 22에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK263)
(b5) 서열번호: 23에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK339)
(b6) 서열번호: 24에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK348)
(b7) 서열번호: 25에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK351)
(b8) 서열번호: 26에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK360)
(b9) 서열번호: 27에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK378)
(b10) 서열번호: 28에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK382)
(b11) 서열번호: 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL036)
(b12) 서열번호: 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL072)
(b13) 서열번호: 31에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL095)
(b14) 서열번호: 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL176)
(b15) 서열번호: 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL208)
(b16) 서열번호: 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL224)
(b17) 서열번호: 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL260)
(b18) 서열번호: 36에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL056)
(b19) 서열번호: 37에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL059)
(b20) 서열번호: 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL226)
(b21) 서열번호: 39에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL250)
(b22) 서열번호: 40에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL263)
(b23) 서열번호: 41에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL281)
(c1) 서열번호: 42에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QAL187)
(c2) 서열번호: 43에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QAL201)
(c3) 서열번호: 44에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JYL280)
〔11〕 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드(d)와 제 3 폴리펩타이드(f)가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드(e)와 제 4 폴리펩타이드(g)가 쌍을 형성하고, 각각의 폴리펩타이드가 이하에 기재된 폴리펩타이드인 항체.
(d) 제 1 폴리펩타이드는 (d1) 또는 (d2)이다.
(d1) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인, 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드
(d2) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드.
(e) 제 2 폴리펩타이드는 (e1) 또는 (e2)이다.
(e1) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드
(e2) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, T52a, N52, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드.
(f) 제 3 폴리펩타이드는 (f1), (f2) 또는 (f3)이다.
(f1) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인, 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드
(f2) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드.
(f3) 〔10〕에 기재된 (a1) 내지 (a6), 및 (c1)∼(c2) 중 어느 하나에 기재된 폴리펩타이드
(g) 제 4 폴리펩타이드는 (g1), (g2) 또는 (g3)이다.
(g1) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인, 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드
(g2) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드.
(g3) 〔10〕에 기재된 (b1) 내지 (b23), 및 (c3) 중 어느 하나에 기재된 폴리펩타이드.
〔12〕 Emicizumab 개변체를 제조하는 방법으로서, 이하의 공정(a)를 포함하는, 방법.
(a) 이하의 (i)∼(iii) 중 하나 이상에 의해 치환하는 공정으로서, 여기에서, 번호 매김은 Kabat 번호 매김 시스템에 따르는, 공정;
(i) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인에 있어서, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산에 있어서의 치환
(ii) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산에 있어서의 치환
(iii) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, T52a, N52, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산에 있어서의 치환
〔13〕 Emicizumab 개변체를 단리하는 방법으로서, 이하의 공정(a)∼(c)를 포함하는, 방법.
(a) 이하의 (i)∼(iii) 중 하나 이상에 의해 Emicizumab 개변체를 산생하는 공정으로서, 여기에서, 번호 매김은 Kabat 번호 매김 시스템에 따르는, 공정;
(i) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인에 있어서, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산에 있어서의 치환
(ii) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산에 있어서의 치환
(iii) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, T52a, N52, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산에 있어서의 치환
(b) (a)에 있어서 산생된 해당 개변체의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 측정하는 공정; 및
(c) Emicizumab과 비교해서 FVIII 보인자 기능 대체 활성이 향상된 Emicizumab 개변체를 선택하는 공정
을 포함하는, 방법.
더욱이 하기 〔14〕∼〔26〕을 제공하는 것이다.
〔14〕 항체인, 〔1〕, 〔4〕 및 〔6〕 중 어느 하나에 기재된 폴리펩타이드.
〔15〕 인간화 항체 또는 인간 항체인, 〔2〕, 〔3〕, 〔5〕, 〔7〕∼〔9〕, 〔11〕 및 〔14〕 중 어느 하나에 기재된 항체.
〔16〕 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 다이아보디, 선상 항체, 단쇄 항체 분자 및 항체 단편으로 형성된 다중특이성 항체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 항체인, 〔2〕, 〔3〕, 〔5〕, 〔7〕∼〔9〕, 〔11〕, 〔14〕 및 〔15〕 중 어느 하나에 기재된 항체.
〔17〕 〔2〕, 〔3〕, 〔5〕, 〔7〕∼〔9〕, 〔11〕 및 〔14〕∼〔16〕 중 어느 하나에 기재된 항체를 코드하는 핵산.
〔18〕 〔17〕에 기재된 핵산이 삽입된 벡터.
〔19〕 〔17〕에 기재된 핵산 또는 〔18〕에 기재된 벡터를 포함하는 세포.
〔20〕 〔2〕, 〔3〕, 〔5〕, 〔7〕∼〔9〕, 〔11〕 및 〔14〕∼〔16〕 중 어느 하나에 기재된 항체 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 약학적 제제.
〔21〕 출혈, 출혈을 수반하는 질환, 또는 출혈에 기인하는 질환의 예방 및/또는 치료에 이용되는 약학적 제제로서, 해당 질환이, 혈액 응고 제 VIII 인자 및/또는 활성화 혈액 응고 제 VIII 인자의 활성의 저하 내지 결손에 의해 발증 및/또는 진전하는 질환인, 〔20〕에 기재된 약학적 제제.
〔22〕 혈액 응고 제 VIII 인자 및/또는 활성화 혈액 응고 제 VIII 인자의 활성의 저하 내지 결손에 의해 발증 및/또는 진전하는 질환이, 혈우병 A인, 〔21〕에 기재된 약학적 제제.
〔23〕 혈액 응고 제 VIII 인자 및/또는 활성화 혈액 응고 제 VIII 인자의 활성의 저하 내지 결손에 의해 발증 및/또는 진전하는 질환이, 혈액 응고 제 VIII 인자 및/또는 활성화 혈액 응고 제 VIII 인자에 대한 인히비터가 출현하고 있는 질환인, 〔22〕에 기재된 약학적 제제.
〔24〕 혈액 응고 제 VIII 인자 및/또는 활성화 혈액 응고 제 VIII 인자의 활성의 저하 내지 결손에 의해 발증 및/또는 진전하는 질환이, 후천성 혈우병인, 〔21〕에 기재된 약학적 제제.
〔25〕 혈액 응고 제 VIII 인자 및/또는 활성화 혈액 응고 제 VIII 인자의 활성의 저하 내지 결손에 의해 발증 및/또는 진전하는 질환이, 폰 빌레브란트병인, 〔21〕에 기재된 약학적 제제.
〔26〕 적어도 〔2〕, 〔3〕, 〔5〕, 〔7〕∼〔9〕, 〔11〕 및 〔14〕∼〔16〕 중 어느 하나에 기재된 항체를 포함하는, 출혈, 출혈을 수반하는 질환 또는 출혈에 기인하는 질환을 예방 및/또는 치료하는 방법에 이용하기 위한 치료 용품의 상용(商用) 패키지.
도 1은 신규 L쇄를 갖는 이중특이성 항체의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 나타내는 그래프이다.
도 2는 Q499/QAL201//J327/JYL280 및 Q499/L404//J327/L404의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 나타내는 그래프이다.
본 명세서에서 용어 「항체」는 가장 넓은 의미로 사용되고, 원하는 항원 결합 활성을 나타내는 한은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중특이성 항체(예를 들면, 이중특이성 항체) 및 항체 단편을 포함하는, 여러 가지의 항체 구조를 포함한다.
「항체 단편」은, 완전 항체가 결합하는 항원에 결합하는 당해 완전 항체의 일부분을 포함하는, 당해 완전 항체 이외의 분자를 말한다. 항체 단편의 예는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 다이아보디; 선상 항체; 단쇄 항체 분자(예를 들면, scFv); 및 항체 단편으로 형성된 다중특이성 항체를 포함한다.
항체의 「클래스」는 항체의 중쇄에 구비되는 정상 도메인 또는 정상 영역의 타입을 말한다. 항체에는 5개의 주요한 클래스가 있다: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이다. 그리고, 이 중 몇 가지는 서브클래스(아이소타입)로 더 나누어져도 된다. 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2이다. 상이한 클래스의 면역글로불린에 대응하는 중쇄 정상 도메인을 각각 α, δ, ε, γ 및 μ라고 부른다.
어떤 제(예를 들면, 약학적 제제)의 「유효량」은, 원하는 치료적 또는 예방적 결과를 달성하기 위해서 유효한, 필요한 용량에 있어서의 및 필요한 기간에 걸친 양을 말한다.
본 명세서에서 용어 「Fc 영역」은 적어도 정상 영역의 일부분을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C 말단 영역을 정의하기 위해서 이용된다. 이 용어는 천연형 서열의 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 일 태양에 있어서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226으로부터, 또는 Pro230으로부터, 중쇄의 카복실 말단까지 연장된다. 단, Fc 영역의 C 말단의 라이신(Lys447) 또는 글라이신-라이신(Gly446-Lys447)은 존재하고 있어도 하고 있지 않아도 된다. 본 명세서에서는 특별히 특정하지 않는 한, Fc 영역 또는 정상 영역 중의 아미노산 잔기의 번호 매김은, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD 1991에 기재된 EU 넘버링 시스템(EU 인덱스라고도 불림)에 따른다.
「프레임워크」 또는 「FR」은 초가변 영역(HVR) 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 말한다. 가변 도메인의 FR은 통상 4개의 FR 도메인: FR1, FR2, FR3 및 FR4로 이루어진다. 그에 따라서, HVR 및 FR의 서열은 통상 다음의 순서로 VH(또는 VL)에 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
용어 「전장 항체」, 「완전 항체」 및 「전부 항체」는, 본 명세서에서는 상호 교환 가능하게 이용되고, 천연형 항체 구조에 실질적으로 유사한 구조를 갖거나, 또는 본 명세서에서 정의하는 Fc 영역을 포함하는 중쇄를 갖는 항체를 말한다.
용어 「숙주 세포」, 「숙주 세포주」 및 「숙주 세포 배양물」은 상호 교환 가능하게 이용되고, 외래 핵산이 도입된 세포(그와 같은 세포의 자손을 포함함)를 말한다. 숙주 세포는 「형질 전환체」 및 「형질 전환 세포」를 포함하고, 이것에는 초대의 형질 전환 세포 및 계대수에 상관없이 그 세포에서 유래하는 자손을 포함한다. 자손은 친세포와 핵산의 내용에 있어서 완전히 동일하지 않아도 되고, 변이를 포함하고 있어도 된다. 오리지날의 형질 전환 세포가 스크리닝되거나 또는 선택되었을 때에 이용된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 변이체 자손도 본 명세서에서는 포함된다.
「인간 항체」는 인간 혹은 인간 세포에 의해 산생된 항체 또는 인간 항체 레퍼토리 혹은 다른 인간 항체 코드 서열을 이용하는 비인간 공급원에서 유래하는 항체의 아미노산 서열에 대응하는 아미노산 서열을 구비하는 항체이다. 이 인간 항체의 정의는 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 명확히 제외하는 것이다.
「인간화」 항체는 비인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 말한다. 어떤 태양에서는 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로는 2개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함하고, 당해 가변 영역에 있어서는, 모든 또는 실질적으로 모든 HVR(예를 들면 CDR)은 비인간 항체의 것에 대응하고, 또한 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 항체의 것에 대응한다. 인간화 항체는, 임의로, 인간 항체에서 유래하는 항체 정상 영역의 적어도 일부분을 포함해도 된다. 항체(예를 들면, 비인간 항체)의 「인간화된 형태」는 인간화를 거친 항체를 말한다.
본 명세서에서 이용되는 용어 「초가변 영역」 또는 「HVR」은, 서열에 있어서 초가변이고(「상보성 결정 영역」 또는 「CDR」(complementarity determining region)), 및/또는 구조적으로 정해진 루프(「초가변 루프」)를 형성하고, 및/또는 항원 접촉 잔기(「항원 접촉」)를 포함하는, 항체의 가변 도메인의 각 영역을 말한다. 통상, 항체는 6개의 HVR을 포함한다: VH에 3개(H1, H2, H3) 및 VL에 3개(L1, L2, L3)이다. 본 명세서에서의 예시적인 HVR은 이하의 것을 포함한다:
(a) 아미노산 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3)인 곳에서 생기는 초가변 루프(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987));
(b) 아미노산 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (H2) 및 95-102 (H3)인 곳에서 생기는 CDR(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991));
(c) 아미노산 잔기 27c-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (H2) 및 93-101 (H3)인 곳에서 생기는 항원 접촉(MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)); 및
(d) HVR 아미노산 잔기 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (H2), 93-102 (H3) 및 94-102 (H3)을 포함하는, (a), (b) 및/또는 (c)의 조합.
특별히 나타내지 않는 한, HVR 잔기 및 가변 도메인 중의 다른 잔기(예를 들면, FR 잔기)는, 본 명세서에서는 상기의 Kabat 등에 따라 번호 매겨진다.
「단리된」 항체는 그 원래의 환경의 성분으로부터 분리된 것이다. 몇 가지의 태양에 있어서, 항체는, 예를 들면, 전기영동(예를 들면, SDS-PAGE, 등전점 분리법(isoelectric focusing: IEF), 캐필러리 전기영동) 또는 크로마토그래프(예를 들면, 이온 교환 또는 역상 HPLC)로 측정하여, 95% 또는 99%를 초과하는 순도까지 정제된다. 항체의 순도의 평가를 위한 방법의 총설로서, 예를 들면, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)을 참조.
「단리된」 핵산은 그 원래의 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 말한다. 단리된 핵산은 그 핵산 분자를 통상 포함하는 세포 중에 포함된 핵산 분자를 포함하지만, 그 핵산 분자는 염색체 밖에 존재하고 있거나 또는 본래의 염색체 상의 위치와는 상이한 염색체 상의 위치에 존재하고 있다.
본 명세서에서 말하는 용어 「모노클로날 항체」는 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 얻어지는 항체를 말한다. 즉, 그 집단을 구성하는 개개의 항체는, 생길 수 있는 변이 항체(예를 들면, 자연히 생기는 변이를 포함하는 변이 항체, 또는 모노클로날 항체 조제물의 제조 중에 발생하는 변이 항체. 그와 같은 변이체는 통상 약간량 존재하고 있다)를 제외하고, 동일하고 및/또는 동일한 에피토프에 결합한다. 상이한 결정기(에피토프)에 대한 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 폴리클로날 항체 조제물과는 대조적으로, 모노클로날 항체 조제물의 각 모노클로날 항체는, 항원 상의 단일한 결정기에 대한 것이다. 따라서, 수식어 「모노클로날」은 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 얻어지는 것이라는 항체의 특징을 나타내고, 어떠한 특정한 방법에 의한 항체의 제조를 요구하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들면, 본 발명에 따라서 이용되는 모노클로날 항체는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 하이브리도마법, 재조합 DNA법, 파지 디스플레이법, 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 포함한 트랜스제닉 동물을 이용하는 방법을 포함하는 다양한 수법에 의해 작성되어 되고, 모노클로날 항체를 제작하기 위한 그와 같은 방법 및 다른 예시적인 방법은 본 명세서에 기재되어 있다.
「천연형 항체」는 천연에 생기는 다양한 구조를 수반하는 면역글로불린 분자를 말한다. 예를 들면, 천연형 IgG 항체는 다이설파이드 결합되어 있는 2개의 동일한 경쇄와 2개의 동일한 중쇄로 구성되는 약 150,000돌턴의 헤테로사량체 당 단백질이다. N 말단으로부터 C 말단을 향해서, 각 중쇄는 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인이라고도 불리는 가변 영역(VH)을 갖고, 거기에 3개의 정상 도메인(CH1, CH2 및 CH3)이 이어진다. 마찬가지로, N 말단으로부터 C 말단을 향해서, 각 경쇄는 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인이라고도 불리는 가변 영역(VL)을 갖고, 거기에 정상 경쇄(CL) 도메인이 이어진다. 항체의 경쇄는 그 정상 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 카파(κ) 및 람다(λ)로 불리는 2개의 타입 중 1개에 귀속되어도 된다.
용어 「첨부 문서」는 치료 용품의 상용 패키지에 통상 포함되고, 그와 같은 치료 용품의 사용에 관한, 적응증, 용법, 용량, 투여 방법, 병용 요법, 금기 및/또는 경고에 대한 정보를 포함하는 사용 설명서를 말하기 위해서 이용된다.
용어 「약학적 제제」는 그 중에 포함된 유효 성분의 생물학적 활성이 효과를 발휘할 수 있는 형태에 있는 조제물로서, 또한 제제가 투여되는 피험체에 허용할 수 없을 정도로 독성이 있는 추가의 요소를 포함하고 있지 않은 조제물을 말한다.
「약학적으로 허용되는 담체」는 피험체에 대해서 무독한, 약학적 제제 중의 유효 성분 이외의 성분을 말한다. 약학적으로 허용되는 담체는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 완충액, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함한다.
본 명세서에서 말하는 용어 「FIX」, 「FIXa」 및 「FX」는 특별히 나타내지 않는 한, 영장류(예를 들면, 인간) 및 설치류(예를 들면, 마우스 및 래트) 등의 포유동물을 포함하는, 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연형 FIX, FIXa 및 FX를 말한다. 이 용어는, 「전장」의 프로세싱을 받고 있지 않은 FIX, FIXa 및 FX도, 세포 중에서의 프로세싱의 결과 생기는 어떠한 형태의 FIX, FIXa 및 FX도 포함한다. 이 용어는 또한, 자연히 생기는 FIX, FIXa 및 FX의 변이체, 예를 들면 스플라이스 변이체나 대립 유전자 변이체도 포함한다.
본 명세서에서 이용되는 「치료」(및 그의 문법상의 파생어, 예를 들면 「치료한다」, 「치료하는 것」 등)는 치료되는 개체의 자연 경과를 개변하는 것을 기도(企圖)한 임상적 개입을 의미하고, 예방을 위해서도, 임상적 병태의 경과 동안에도 실시될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 질환의 발생 또는 재발의 방지, 증상의 경감, 질환에 의한 임의의 직접적 또는 간접적인 병리적 영향의 감약, 전이의 방지, 질환의 진행 속도의 저감, 질환 상태의 회복 또는 완화, 및 관해(寬解) 또는 개선된 예후를 포함한다. 몇 가지의 태양에 있어서, 본 발명의 항체는 질환의 발증을 늦추거나, 또는 질환의 진행을 늦게 하기 위해서 이용된다.
용어 「가변 영역」 또는 「가변 도메인」은 항체를 항원에 결합시키는 것에 관여하는, 항체의 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 말한다. 천연형 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인(각각 VH 및 VL)은, 통상, 각 도메인이 4개의 보존된 프레임워크 영역 (FR) 및 3개의 초가변 영역(HVR)을 포함하는 유사한 구조를 갖는다. (예를 들면, Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007) 참조.) 1개의 VH 또는 VL 도메인으로 항원 결합특이성을 주기에 충분할 것이다. 또, 어떤 특정한 항원에 결합하는 항체는 당해 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 각각 VL 또는 VH 도메인의 상보적 라이브러리를 스크리닝해서 단리되어도 된다. 예를 들면 Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991) 참조.
본 명세서에서 이용되는 용어 「벡터」는 그것이 연결된 다른 1개의 핵산을 증가시킬 수 있는 핵산 분자를 말한다. 이 용어는 자기 복제 핵산 구조로서의 벡터, 및 그것이 도입된 숙주 세포의 게놈 중에 집어넣어지는 벡터를 포함한다. 어떤 벡터는 자신이 동작적으로 연결된 핵산의 발현을 초래할 수 있다. 그와 같은 벡터는, 본 명세서에서는 「발현 벡터」라고도 칭해진다.
FIX 및/또는 FIXa, 및 FX의 쌍방에 결합하여, FVIII의 기능을 대체하는 이중특이성 항체인 Emicizumab(ACE910)은 이하에 기재한 대로이다. 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열번호: 1, 2, 3(Q499의 H쇄 CDR)에 기재된 H쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열번호: 4, 5, 6(J327의 H쇄 CDR)에 기재된 H쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열번호: 7, 8, 9(L404의 L쇄CDR)에 기재된 L쇄CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k).
더 구체적으로는, 상기 이중특이성 항체는, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 및 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열번호: 47에 기재된 항체 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 포함하는 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)이다.
더 구체적으로는, 상기 이중특이성 항체는, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드가 서열번호: 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 제 2 폴리펩타이드가 서열번호: 11에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 H쇄, 및 제 3 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 서열번호: 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 공통 L쇄로 이루어지는 이중특이성 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)이다.
이와 같은 항체는, 예를 들면 WO2005/035756, WO2006/109592, WO2012/067176 등에 기재된 방법에 따라 취득할 수 있다. 이하, 본 명세서에서는 Emicizumab과 ACE910은 동의이다.
일 국면에 있어서, 본 발명에 있어서의 「Emicizumab 개변체」란, Emizicumab의 중쇄 가변 영역 혹은 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 중 적어도 하나 이상이 Emizicumab의 아미노산 서열과 상이한 폴리펩타이드 혹은 항체를 의미하고, 본 발명의 목적을 달성할 수 있는 범위에서 모든 개변체가 포함된다. 하나의 태양으로서, 개변체의 일부의 중쇄 혹은 경쇄의 가변 영역 모두가 Emicizumab의 가변 영역과 상이하더라도, 본 발명의 개변체에 포함할 수 있다.
예를 들면 Emicizumab 개변체란 이하에 예시하는 폴리펩타이드 및 항체이지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.
일 국면에 있어서, 본 발명은, 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드를 제공한다.
다른 국면에 있어서, 본 발명은, FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체를 제공한다.
다른 국면에 있어서, 본 발명은, FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 3 폴리펩타이드 및 제 4 폴리펩타이드 중 어느 한쪽의 폴리펩타이드는 서열번호: 47에 기재된 항체 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 포함하고, 다른 쪽의 폴리펩타이드는 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, 다른 쪽의 폴리펩타이드는 Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체를 제공한다.
다른 국면에 있어서, 본 발명은, 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드를 제공한다.
다른 국면에 있어서, 본 발명은, FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체를 제공한다.
다른 국면에 있어서, 본 발명은, 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, N52, T52a, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드를 제공한다.
다른 국면에 있어서, 본 발명은, FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, N52, T52a, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체를 제공한다.
다른 국면에 있어서, 본 발명은, FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 3 폴리펩타이드는 서열번호: 42에 기재된 항체 경쇄의 아미노산 서열, 제 4 폴리펩타이드는 서열번호: 44에 기재된 항체 경쇄의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, 제 1 폴리펩타이드는 Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체를 제공한다.
다른 국면에 있어서, 본 발명은, FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄의 아미노산 서열, 제 3 폴리펩타이드는 서열번호: 43에 기재된 항체 경쇄의 아미노산 서열, 제 4 폴리펩타이드는 서열번호: 44에 기재된 항체 경쇄의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, 제 2 폴리펩타이드는 Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, T52a, N52, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체를 제공한다.
다른 국면에 있어서, 본 발명은, 항체 경쇄로서, 하기 (a1) 내지 (a6) 및 (b1) 내지 (b23)으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 신규 항체 경쇄를 제공한다. 당해 경쇄는, Emicizumab에 포함되는 공통 경쇄를 대체하는 경쇄로서 사용할 수 있다. 하기 (a1) 내지 (a6)의 경쇄는 FIX 및/또는 FIXa와 결합하는 경쇄이고, 하기 (b1) 내지 (b23)의 L쇄는 FX와 결합하는 경쇄의 일례이다.
(a1) 서열번호: 13에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNK131)
(a2) 서열번호: 14에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNK284)
(a3) 서열번호: 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNK315)
(a4) 서열번호: 16에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNL182)
(a5) 서열번호: 17에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNL492)
(a6) 서열번호: 18에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNL576)
(b1) 서열번호: 19에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK131)
(b2) 서열번호: 20에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK163)
(b3) 서열번호: 21에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK252)
(b4) 서열번호: 22에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK263)
(b5) 서열번호: 23에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK339)
(b6) 서열번호: 24에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK348)
(b7) 서열번호: 25에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK351)
(b8) 서열번호: 26에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK360)
(b9) 서열번호: 27에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK378)
(b10) 서열번호: 28에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK382)
(b11) 서열번호: 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL036)
(b12) 서열번호: 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL072)
(b13) 서열번호: 31에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL095)
(b14) 서열번호: 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL176)
(b15) 서열번호: 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL208)
(b16) 서열번호: 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL224)
(b17) 서열번호: 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL260)
(b18) 서열번호: 36에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL056)
(b19) 서열번호: 37에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL059)
(b20) 서열번호: 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL226)
(b21) 서열번호: 39에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL250)
(b22) 서열번호: 40에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL263)
(b23) 서열번호: 41에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL281)
특정한 태양에 있어서, 본 발명은, 상기 (a1) 내지 (a6) 및 (b1) 내지 (b23)의 항체 L쇄의 변이체를 제공한다.
일 태양에 있어서, 본 발명은, 이하의 항체 L쇄 변이체를 제공한다.
(c1) 서열번호: 13에 기재된 항체 경쇄의 변이체로서 서열번호: 42에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄(QAL187)
(c2) 서열번호: 13에 기재된 항체 경쇄의 변이체로서 서열번호: 43에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 L쇄(QAL201)
(c3) 서열번호: 31에 기재된 항체 경쇄의 변이체로서 서열번호: 44에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 L쇄(JYL280)
다른 국면에 있어서, 본 발명은, FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드(d)와 제 3 폴리펩타이드(f)가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드(e)와 제 4 폴리펩타이드(g)가 쌍을 형성하고, 각각의 폴리펩타이드가 이하에 기재된 폴리펩타이드인 항체를 제공한다.
(d) 제 1 폴리펩타이드는 (d1) 또는 (d2)이다.
(d1) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인, 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드
(d2) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드.
(e) 제 2 폴리펩타이드는 (e1) 또는 (e2)이다.
(e1) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인, 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드
(e2) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, T52a, N52, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드.
(f) 제 3 폴리펩타이드는 (f1), (f2) 또는 (f3)이다.
(f1) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인, 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드
(f2) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드.
(f3) 본 명세서에 기재된 (a1) 내지 (a6), 및 (c1)∼(c2) 중 어느 하나에 기재된 폴리펩타이드
(g) 제 4 폴리펩타이드는 (g1), (g2) 또는 (g3)이다.
(g1) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인, 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드
(g2) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드.
(g3) 본 명세서에 기재된 (b1) 내지 (b23), 및 (c3) 중 어느 하나에 기재된 폴리펩타이드.
일 국면에 있어서, 본 발명은, 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인에 있어서의 하기 위치에 있어서의 아미노산 잔기, 혹은 서열번호: 47에 기재된 항체 경쇄 가변 도메인에 있어서의 하기 위치에 있어서의 아미노산 잔기 중 적어도 하나 이상이, 이하에 기재된 아미노산 잔기 중 어느 것인, 폴리펩타이드 혹은 항체를 제공한다.
상기 폴리펩타이드 혹은 항체에 있어서, 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인과 상이한 아미노산 잔기, 혹은 서열번호: 47에 기재된 항체 경쇄 가변 도메인과 상이한 아미노산 잔기의 수는 하나 이상이면 되고, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20이고, 더 바람직하게는 21 이상이다. 한편, 치환 위치는 Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨지는 위치를 나타낸다.
K24: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, R, F, W, Y
A25: I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
S26: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
R27: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, W, Y
N28: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
I29: A, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
E30: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, Y
R31: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, W, Y
Q32: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
L33: A, I, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
A34: I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
Q50: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
A51: I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
S52: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
R53: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, W, Y
K54: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, R, F, W, Y
E55: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, Y
S56: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
Q89: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
Q90: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
Y91: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W
S92: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
D93: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, Y
P94: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
P95: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
L96: A, I, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
T97: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, D, E, H, K, R, F, W, Y
일 국면에 있어서, 본 발명은, 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서의 하기 위치에 있어서의 아미노산 잔기, 혹은 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서의 하기 위치에 있어서의 아미노산 잔기 중 적어도 하나 이상이, 이하에 기재된 아미노산 잔기 중 어느 것인, 폴리펩타이드 혹은 항체를 제공한다.
상기 폴리펩타이드 혹은 항체에 있어서, 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인과 상이한 아미노산 잔기, 혹은 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인과 상이한 아미노산 잔기의 수는 하나 이상이면 되고, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20이고, 더 바람직하게는 21 이상이다. 한편, 치환 위치는 Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨지는 위치를 나타낸다.
Y31: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W
Y32: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W
D33: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, Y
I34: A, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
Q35: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
S50: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
I51: A, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
S52: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
P52a: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
S53: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
G54: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
Q55: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
S56: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
T57: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, D, E, H, K, R, F, W, Y
Y58: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W
Y59: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W
R60: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, W, Y
R61: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, W, Y
E62: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, Y
V63: A, I, L, M, P, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
K64: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, R, F, W, Y
G65: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
R95: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, W, Y
T96: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, D, E, H, K, R, F, W, Y
G97: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
R98: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, W, Y
E99: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, Y
Y100: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W
G100a: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
G100b: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
G100c: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
W100d: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, Y
Y100e: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W
F100f: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, W, Y
D101: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, Y
Y102: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W
일 국면에 있어서, 본 발명은, 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서의 하기 위치에 있어서의 아미노산 잔기, 혹은 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서의 하기 위치에 있어서의 아미노산 잔기 중 적어도 하나 이상이, 이하에 기재된 아미노산 잔기 중 어느 것인, 폴리펩타이드 혹은 항체를 제공한다.
상기 폴리펩타이드 혹은 항체에 있어서, 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인과 상이한 아미노산 잔기, 혹은 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인과 상이한 아미노산 잔기의 수는 하나 이상이면 되고, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20이고, 더 바람직하게는 21 이상이다. 한편, 치환 위치는 Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨지는 위치를 나타낸다.
D31: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, Y
N32: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
N33: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
M34: A, I, L, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
D35: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, Y
D50: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, Y
I51: A, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
N52: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
T52a: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, D, E, H, K, R, F, W, Y
R53: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, W, Y
S54: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
G55: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
G56: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
S57: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
I58: A, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
Y59: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W
N60: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
E61: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, Y
E62: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, Y
F63: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, W, Y
Q64: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
D65: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, Y
R95: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, W, Y
K96: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, R, F, W, Y
S97: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
Y98: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W
G99: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
Y100: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W
Y100a: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W
L100b: A, I, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, Y
D101: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, Y
E102: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, Y
일 태양에 있어서, 본 발명은, FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 4 폴리펩타이드는 서열번호: 47에 기재된 항체 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 3 폴리펩타이드는 상기 (a1) 내지 (a6)으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄를 포함하는, 항체를 제공한다.
다른 태양에 있어서, 본 발명은, FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 3 폴리펩타이드는 서열번호: 47에 기재된 항체 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 4 폴리펩타이드는 상기 (b1) 내지 (b23)으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄를 포함하는, 항체를 제공한다.
특정한 태양에 있어서, 본 발명은, 본 명세서에서 제공되는 폴리펩타이드 및 항체의 변이체를 제공한다.
특정한 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 변이체에는, 아미노산 서열 중의 아미노산 잔기의 결실, 및/또는 아미노산 서열 중에의 아미노산 잔기의 삽입, 및/또는 아미노산 서열 중의 아미노산 잔기의 치환이 행해진 변이체가 포함된다. 최종 구축물이 향상된 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 구비하는 것을 전제로, 결실, 삽입, 및 치환의 임의의 조합이, 최종 구축물에 이르기 위해서 행해질 수 있다.
A. 예시적 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체
이하에 본 명세서에서 제공되는 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체(이하, 간단히 「항FIX(a)/FX 이중특이성 항체」라고 함)의 예를 기재하지만, 이하는 본 명세서에서 제공되는 다른 항체 및 폴리펩타이드에도 마찬가지로 들어맞는다. 한편, 본 명세서에 있어서, FIX(a)는 FIX 및/또는 FIXa를 의미한다.
1. 항체 단편
특정한 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 및 scFv 단편, 및 후술하는 다른 단편을 포함한다. 특정한 항체 단편에 대한 총설로서, Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)을 참조. scFv 단편의 총설로서, 예를 들면, Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); 게다가, WO93/16185; 및 미국 특허 제5,571,894호 및 제5,587,458호를 참조. 샐비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 인비보(in vivo)에 있어서의 반감기가 길어진 Fab 및 F(ab')2 단편에 대한 논설로서, 미국 특허 제5,869,046호를 참조.
다이아보디는 2가 또는 이중특이적이어도 되는, 항원 결합 부위를 2개 수반하는 항체 단편이다. 예를 들면, EP404,097호; WO1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993) 참조. 트라이아보디(triabody)나 테트라보디(tetrabody)도, Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)에 기재되어 있다.
싱글 도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 모두 또는 일부분, 또는 경쇄 가변 도메인의 모두 또는 일부분을 포함하는 항체 단편이다. 특정한 태양에 있어서, 싱글 도메인 항체는 인간 싱글 도메인 항체이다(Domantis, Inc., Waltham, MA; 예를 들면, 미국 특허 제6,248,516호 B1 참조).
항체 단편은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 본 명세서에 기재된, 완전 항체의 단백질 분해적 소화, 재조합 숙주 세포(예를 들면, 대장균 (E. coli) 또는 파지)에 의한 산생을 포함하는, 여러 가지의 수법에 의해 만들 수 있다.
2. 인간 항체
특정한 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당해 기술 분야에 있어서 알려진 여러 가지의 수법에 의해 제조될 수 있다. 인간 항체는 van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)에 개설되어 있다.
인간 항체는, 항원 챌린지(부하)에 응답하여 완전 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 수반하는 완전 항체를 산생하도록 개변된 트랜스제닉 동물에 면역원을 투여하는 것에 의해, 조제되어도 된다. 그와 같은 동물은, 전형적으로는 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부분을 포함하고, 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부분은, 내인성의 면역글로불린 유전자좌를 치환하거나, 또는 염색체 외에 혹은 당해 동물의 염색체 내에 랜덤으로 편입된 상태로 존재한다. 그와 같은 트랜스제닉 마우스에 있어서, 내인성의 면역글로불린 유전자좌는 통상 불활성화되어 있다. 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 얻는 방법의 총설로서, Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)를 참조. 또한, 예를 들면, XENOMOUSE(상표) 기술을 기재한 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,584호; HUMAB(등록상표) 기술을 기재한 미국 특허 제5,770,429호; K-M MOUSE(등록상표) 기술을 기재한 미국 특허 제7,041,870호; 및 VELOCIMOUSE(등록상표) 기술을 기재한 미국 특허출원 공개 제2007/0061900호를 아울러 참조. 이와 같은 동물에 의해 생성된 완전 항체로부터의 인간 가변 영역은, 예를 들면, 상이한 인간 정상 영역과 조합하는 등 해서, 더 수식되어도 된다.
인간 항체는 하이브리도마에 기초한 방법으로도 만들 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 제조를 위한, 인간 미엘로마 및 마우스-인간 헤테로미엘로마 세포주는, 이미 기술되어 있다. (예를 들면, Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991) 참조.) 인간 B 세포 하이브리도마 기술을 통해서 생성된 인간 항체도 Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)에 기술되어 있다. 추가적인 방법으로서는, 예를 들면, 미국 특허 제7,189,826호(하이브리도마 세포주로부터의 모노클로날 인간 IgM 항체의 제조를 기재) 및 Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)(인간-인간 하이브리도마를 기재)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술(트리오마 기술)도 Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)에 기재되어 있다.
인간 항체는 인간 유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리하는 것으로도 생성할 수 있다. 이와 같은 가변 도메인 서열은 다음에 원하는 인간 정상 도메인과 조합할 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하는 수법을 이하에 기술한다.
3. 라이브러리 유래 항체
본 발명의 항체는, 원하는 1개 또는 복수의 활성을 수반하는 항체에 대하여 콤비나토리얼 라이브러리를 스크리닝하는 것에 의해 단리해도 된다. 예를 들면, 파지 디스플레이 라이브러리의 생성이나, 원하는 결합 특성을 구비하는 항체에 대하여 그와 같은 라이브러리를 스크리닝하기 위한, 다양한 방법이 당해 기술 분야에 있어서 알려져 있다. 그와 같은 방법은, Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)에서 총설되어 있고, 또 예를 들면, McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34):12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)에 기재되어 있다.
특정한 파지 디스플레이법에 있어서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는, 폴리머라제 연쇄 반응(polymerase chain reaction: PCR)에 의해 각각에 클로닝되고, 무작위로 파지 라이브러리 중에서 재결합되고, 당해 파지 라이브러리는, Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)에 기술되어 있는 바와 같이 해서, 항원 결합 파지에 대하여 스크리닝될 수 있다. 파지는, 전형적으로는 단쇄 Fv (scFv) 단편으로서 또는 Fab 단편으로서 중 어느 것으로 항체 단편을 제시한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축하는 것을 필요로 하지 않고서, 면역원에 대한 고(高)어피니티 항체를 제공한다. 혹은, Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)에 기재되듯이, 나이브 레퍼토리를 (예를 들면, 인간으로부터) 클로닝하여, 면역화하는 일 없이, 광범위한 비자기 및 자기 항원에의 항체의 단일의 공급원을 제공할 수도 있다. 마지막으로, 나이브 라이브러리는, Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)에 기재되듯이, 줄기세포로부터 재편성 전의 V-유전자 세그먼트를 클로닝하고, 초가변 CDR3 영역을 코드하고 또한 인비트로(in vitro)에서 재구성을 달성하기 위한 무작위 서열을 포함한 PCR 프라이머를 이용하는 것에 의해, 합성적으로 만들 수도 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재한 특허문헌은, 예를 들면: 미국 특허 제5,750,373호, 및 미국 특허출원 공개 제2005/0079574호, 제2005/0119455호, 제2005/0266000호, 제2007/0117126호, 제2007/0160598호, 제2007/0237764호, 제2007/0292936호 및 제2009/0002360호를 포함한다.
인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본 명세서에서는 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주한다.
다중특이성 항체를 제작하기 위한 수법은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 페어의 재조합 공발현(Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983), WO93/08829, 및 Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991) 참조), 및 knob-in-hole 기술(예를 들면, 미국 특허 제5,731,168호 참조)을 포함한다. 다중특이성 항체는, Fc 헤테로이량체 분자를 제작하기 위해서 정전 스티어링 효과(electrostatic steering effects)를 조작하는 것(WO2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교하는 것(미국 특허 제4,676,980호 및 Brennan et al., Science, 229: 81 (1985) 참조); 류신 지퍼를 이용하여 2개의 특이성을 갖는 항체를 작성하는 것(Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992) 참조); 「다이아보디」 기술을 이용하여 이중특이성 항체 단편을 제작하는 것(Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993) 참조); 및 단쇄 Fv (scFv) 이량체를 이용하는 것(Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994) 참조); 및 예를 들면 Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)에 기재되듯이 삼중특이성 항체를 조제하는 것에 의해 제작해도 된다.
a) 치환, 삽입, 및 결실 변이체
특정한 태양에 있어서, 1개 또는 복수의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환적 변이도입의 목적 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환을 표 1의 「바람직한 치환」의 표제 아래에 나타낸다. 보다 실질적인 변경을 표 1의 「예시적인 치환」의 표제 아래에 제공함과 함께, 아미노산 측쇄의 클래스에 언급하면서 아래에서 상세히 기술한다. 아미노산 치환은 목적하는 항체에 도입되어도 되고, 산물은, 예를 들면, 유지/개선된 항원 결합성, 감소한 면역원성, 또는 개선된 FVIII 보인자 기능 대체 활성, ADCC 또는 CDC 등의, 원하는 활성에 대하여 스크리닝되어도 된다.
Figure 112019018994274-pct00001
아미노산은 공통의 측쇄 특성에 의해 군으로 나눌 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, 메티오닌(Met), 알라닌(Ala), 발린(Val), 류신(Leu), 아이소류신(Ile);
(2) 중성의 친수성: 시스테인(Cys), 세린(Ser), 트레오닌(Thr), 아스파라긴(Asn), 글루타민(Gln);
(3) 산성: 아스파르트산(Asp), 글루탐산(Glu);
(4) 염기성: 히스티딘(His), 라이신(Lys), 아르기닌(Arg);
(5) 쇄 배향에 영향을 주는 잔기: 글라이신(Gly), 프롤린(Pro);
(6) 방향족성: 트립토판(Trp), 타이로신(Tyr), 페닐알라닌(Phe).
비보존적 치환은 이들 클래스 중 1개의 멤버를 다른 클래스의 것으로 교환하는 것을 말한다.
치환 변이체의 1개의 타입은 친항체(예를 들면, 인간화 또는 인간 항체)의 1개 또는 복수의 초가변 영역 잔기의 치환을 포함한다. 통상, 그 결과로서 생겨, 가일층의 연구를 위해서 선택된 변이체는, 친항체와 비교해서 특정한 생물학적 특성에 있어서의 수식(예를 들면, 개선)(예를 들면, 증가한 FVIII 보인자 기능 대체 활성이나 어피니티, 감소한 면역원성)을 갖거나, 및/또는 친항체의 특정한 생물학적 특성을 실질적으로 유지하고 있을 것이다.
특정한 태양에 있어서, 치환, 삽입, 또는 결실은, 그와 같은 개변이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 1개 또는 복수의 HVR 내에서 행해질 수 있다. 예를 들면, FVIII 보인자 기능 대체 활성을 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 개변(예를 들면, 본 명세서에서 제공되는 것과 같은 보존적 치환)이 HVR에 있어서 행해질 수 있다.
변이도입을 위해서 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역을 동정하는 데 유용한 방법은, Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085에 의해 기재되는, 「알라닌 스캐닝 변이도입」이라고 불리는 것이다. 이 방법에 있어서, 1잔기 또는 1군의 표적 잔기(예를 들면, 하전 잔기, 예를 들면 아르기닌, 아스파르트산, 히스티딘, 라이신 및 글루탐산)가 동정되고, 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(예를 들면, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 치환되어, 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받는지 어떤지가 결정된다. 이 초기 치환에 대해서 기능적 감수성을 나타낸 아미노산 위치에 추가적인 치환이 도입될 수 있다. 혹은 또는 그에 더하여, 항체와 항원 사이의 접촉점을 동정하기 위해서, 항원 항체 복합체의 결정 구조를 해석해도 된다. 그와 같은 접촉 잔기 및 근린의 잔기를 치환 후보로서 표적화해도 되고, 또는 치환 후보로부터 제외해도 된다. 변이체는 그들이 원하는 특성을 포함하는지 어떤지를 결정하기 위해서 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열의 삽입은, 서열 내부에의 단일 또는 복수의 아미노산 잔기의 삽입과 마찬가지로, 아미노 말단 및/또는 카복실 말단에 있어서의 1잔기 내지 100잔기 이상을 포함하는 폴리펩타이드의 길이의 범위에서의 융합도 포함한다. 말단의 삽입의 예는 N 말단에 메티오닐 잔기를 수반하는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 N- 또는 C-말단에 효소(예를 들면, ADEPT를 위한) 또는 항체의 혈장 반감기를 증가시키는 폴리펩타이드를 융합시킨 것을 포함한다.
b) 글리코실화 변이체
특정한 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가시키거나 또는 감소시키도록 개변되어 있다. 항체에의 글리코실화 부위의 추가 또는 삭제는, 1개 또는 복수의 글리코실화 부위를 만들어 내거나 또는 제거하도록 아미노산 서열을 개변하는 것에 의해, 간편히 달성 가능하다.
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 거기에 부가되는 탄수화물이 개변되어도 된다. 포유동물 세포에 의해 산생되는 천연형 항체는, 전형적으로는 분지된 2분기의 올리고당을 포함하고, 당해 올리고당은 통상 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 N-링키지에 의해 부가되어 있다. 예를 들면, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997) 참조. 올리고당은, 예를 들면, 만노스, N-아세틸글루코사민(GlcNAc), 갈락토스 및 시알산 등의 여러 가지의 탄수화물, 또한 2분기의 올리고당 구조의 「줄기」 중의 GlcNAc에 부가된 푸코스를 포함한다. 몇 가지의 태양에 있어서, 본 발명의 항체 중의 올리고당의 수식은 특정한 개선된 특성을 수반하는 항체 변이체를 만들어 내기 위해서 행해져도 된다.
일 태양에 있어서, Fc 영역에 (직접적 또는 간접적으로) 부가된 푸코스를 결여한 탄수화물 구조체를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들면, 그와 같은 항체에 있어서의 푸코스의 양은 1%∼80%, 1%∼65%, 5%∼65% 또는 20%∼40%일 수 있다. 푸코스의 양은, 예를 들면 WO2008/077546에 기재되듯이 MALDI-TOF 질량 분석에 의해 측정되는, Asn297에 부가된 모든 당 구조체(예를 들면, 복합, 하이브리드 및 고(高)만노스 구조체)의 합에 대한, Asn297에 있어서의 당쇄 내의 푸코스의 평균량을 계산하는 것에 의해 결정된다. Asn297은 Fc 영역의 297위 부근에 위치하는 아스파라긴 잔기를 나타낸다(Fc 영역 잔기의 EU 넘버링). 그러나, 복수의 항체간의 근소한 서열의 다양성에 기인하여, Asn297은 297위의 ±3 아미노산 상류 또는 하류, 즉 294위∼300위 사이에 위치하는 경우도 있을 수 있다. 그와 같은 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능이 있을 수 있다. 예를 들면, 미국 특허출원 공개 제2003/0157108호(Presta, L.); 제2004/0093621호(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)를 참조. 「탈푸코실화」 또는 「푸코스 결손」 항체 변이체에 관한 간행물의 예는, US2003/0157108; WO2000/61739; WO2001/29246; US2003/0115614; US2002/0164328; US2004/0093621; US2004/0132140; US2004/0110704; US2004/0110282; US2004/0109865; WO2003/085119; WO2003/084570; WO2005/035586; WO2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)를 포함한다. 탈푸코실화 항체를 산생할 수 있는 세포주의 예는, 단백질의 푸코실화를 결여한 Lec13 CHO 세포(Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 미국 특허출원 공개 제US2003/0157108호 A1, Presta, L; 및 WO2004/056312A1, Adams et al., 특히 실시예 11) 및 녹아웃 세포주, 예를 들면 알파-1,6-푸코실트랜스페라아제 유전자 FUT8 녹아웃 CHO 세포(예를 들면, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 및 WO2003/085107을 참조)를 포함한다.
예를 들면 항체의 Fc 영역에 부가된 이분지형 올리고당이 GlcNAc에 의해 이분되어 있는, 이분된 올리고당을 갖는 항체 변이체가 추가로 제공된다. 그와 같은 항체 변이체는 감소한 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 그와 같은 항체 변이체의 예는, 예를 들면, WO2003/011878(Jean-Mairet et al.); 미국 특허 제6,602,684호(Umana et al.); 및 US2005/0123546(Umana et al.)에 기재되어 있다. Fc 영역에 부가된 올리고당 중에 적어도 1개의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체도 제공된다. 그와 같은 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 그와 같은 항체 변이체는, 예를 들면, WO1997/30087(Patel et al.); WO1998/58964(Raju, S.); 및 WO1999/22764(Raju, S.)에 기재되어 있다.
c) Fc 영역 변이체
특정한 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체의 Fc 영역에 1개 또는 복수의 아미노산 수식을 도입하고, 그에 의해 Fc 영역 변이체를 생성해도 된다. Fc 영역 변이체는 1개 또는 복수의 아미노산 포지션인 곳에서 아미노산 수식(예를 들면, 치환)을 포함하는, 인간 Fc 영역 서열(예를 들면, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 Fc 영역)을 포함해도 된다.
특정한 태양에 있어서, 모두는 아니지만 몇 가지의 이펙터 기능을 구비하는 항체 변이체도 본 발명의 고려 내이고, 당해 이펙터 기능은, 항체를, 그 인비보에서의 반감기가 중요하지만, 특정한 이펙터 기능(보체 및 ADCC 등)은 불요 또는 유해인 경우의 적용에 바람직한 후보로 하는 것이다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/결핍을 확인하기 위해서, 인비트로 및/또는 인비보의 세포상해 측정을 행할 수 있다. 예를 들면, Fc 수용체(FcR) 결합 측정은, 항체가 FcγR 결합성을 결여하는(따라서 ADCC 활성을 결여할 개연성이 높은) 한편으로 FcRn 결합능을 유지하는 것을 확인하기 위해서 행해질 수 있다. ADCC를 매개하는 프라이머리 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하지만, 한편 단구는 FcγRI, FcγRII, FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포 상의 FcR의 발현은, Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)의 제464페이지의 Table 3에 정리되어 있다. 목적하는 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 인비트로 측정법(어세이)의 비한정적인 예는, 미국 특허 제5,500,362호(예를 들면, Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986) 참조) 및 Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 미국 특허 제5,821,337호(Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987) 참조)에 기재되어 있다. 혹은, 비방사성의 측정법을 이용해도 된다(예를 들면, ACT1(상표) non-radioactive cytotoxicity assay for flow cytometry(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA); 및 CytoTox 96(등록상표) non-radioactive cytotoxicity assays법(Promega, Madison, WI) 참조). 이와 같은 측정법에 유용한 이펙터 세포는 말초혈 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cell: PBMC) 및 자연살해(natural killer: NK) 세포를 포함한다. 혹은 또는 그에 더하여, 목적하는 분자의 ADCC 활성은, 예를 들면, Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)에 기재되는 것과 같은 동물 모델에 있어서, 인비보에서 평가되어도 된다. 또한, 항체가 C1q에 결합할 수 없는 것, 따라 CDC 활성을 결여하는 것을 확인하기 위해서, C1q 결합 측정을 행해도 된다. 예를 들면, WO2006/029879 및 WO2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조. 또한, 보체 활성화를 평가하기 위해서, CDC 측정을 행해도 된다(예를 들면, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004) 참조). 또, FcRn 결합성 및 인비보에서의 클리어런스/반감기의 결정도 당해 기술 분야에 있어서 알려진 방법을 이용하여 행할 수 있다(예를 들면 Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006) 참조).
감소한 이펙터 기능을 수반하는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 1개 또는 복수의 치환을 수반하는 것을 포함한다(미국 특허 제6,737,056호). 이와 같은 Fc 변이체는 잔기 265 및 297의 알라닌으로의 치환을 수반하는 이른바 「DANA」 Fc 변이체(미국 특허 제7,332,581호)를 포함하는, 아미노산 포지션 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상의 치환을 수반하는 Fc 변이체를 포함한다.
FcRs에 대한 증가 또는 감소한 결합성을 수반하는 특정한 항체 변이체가 기술되어 있다. (미국 특허 제6,737,056호; WO2004/056312, 및 Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)을 참조.)
몇 가지의 태양에 있어서, 예를 들면 미국 특허 제6,194,551호, WO99/51642, 및 Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)에 기재되듯이, 개변된(즉, 증가했거나 감소한 것 중 어느 하나인) C1q 결합성 및/또는 보체 의존성 세포상해 (CDC)를 초래하는 개변이 Fc 영역에서 이루어진다.
증가한 반감기, 및 신생아형 Fc 수용체(FcRn: 모체의 IgG류를 태아에 이행시키는 역할을 담당한다(Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)))에 대한 증가한 결합성을 수반하는 항체가, 미국 특허출원 공개 제2005/0014934호 A1(Hinton et al.)에 기재되어 있다. 이들 항체는 Fc 영역의 FcRn에 대한 결합성을 증가시키는 1개 또는 복수의 치환을 그 중에 수반하는 Fc 영역을 포함한다. 이와 같은 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424, 428, 434 또는 436 중 1개 또는 복수의 곳에서의 치환(예를 들면, Fc 영역 잔기 434의 치환(미국 특허 제7,371,826호))을 수반하는 것을 포함한다.
또한, 류마토이드 인자에 대한 결합이 억제된 Fc 영역 변이체를 본 발명의 항체에 이용할 수 있고, 이와 같은 변이체는 WO2013/046704에 기재되어 있으며, 예를 들면 Q438R/S440E, Q438R/S440D, Q438K/S440E 또는 Q438K/S440D로 표시되는 변이의 조합을 쌍방의 H쇄에 갖는 변이체를 들 수 있다.
또한, FcRn에 대한 결합이 증강하고, 류마토이드 인자에 대한 결합이 억제된 Fc 영역 변이체를 본 발명의 항체에 사용할 수 있다. 보다 구체적으로는, 이하의 a)∼f) 중 어느 하나에 나타내는 변이의 조합을 쌍방의 H쇄에 갖는 Fc 영역 변이체를 들 수 있다.
a) N434A/Y436T/Q438R/S440E
b) N434A/Y436V/Q438R/S440E
c) M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E
d) M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440E
e) M428L/N434A/Q438R/S440E
f) N434A/Q438R/S440E
Fc 영역 변이체의 다른 예에 대해서는, Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); 미국 특허 제5,648,260호; 미국 특허 제5,624,821호; 및 WO94/29351도 참조.
d) 항체 유도체
특정한 태양에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체는, 당해 기술 분야에 있어서 알려져 있고 또한 용이하게 입수 가능한 추가의 비단백질 부분을 포함하도록, 더 수식되어도 된다. 항체의 유도체화에 적합한 부분은, 이것으로 한정되는 것은 아니지만, 수용성 폴리머를 포함한다. 수용성 폴리머의 비한정적인 예는, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 폴리에틸렌 글라이콜(PEG), 에틸렌 글라이콜/프로필렌 글라이콜의 코폴리머, 카복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리바이닐 알코올, 폴리바이닐피롤리돈, 폴리-1,3-다이옥솔레인, 폴리-1,3,6-트라이옥세인, 에틸렌/무수 말레산 코폴리머, 폴리아미노산(호모폴리머 또는 랜덤 코폴리머의 어느 것이나), 및 덱스트란 또는 폴리(n-바이닐피롤리돈)폴리에틸렌 글라이콜, 폴리프로필렌 글라이콜 호모폴리머, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 코폴리머, 폴리옥시에틸화 폴리올류(예를 들면 글리세롤), 폴리바이닐 알코올, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 폴리에틸렌 글라이콜 프로피온알데하이드는, 그의 물에 대한 안정성 때문에, 제조에 있어서 유리할 것이다. 폴리머는 어떠한 분자량이어도 되고, 분지되어 있어도 되어 있지 않아도 된다. 항체에 부가되는 폴리머의 수에는 폭이 있어도 되고, 1개 이상의 폴리머가 부가된다면 그들은 동일한 분자여도 되고, 상이한 분자여도 된다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 폴리머의 수 및/또는 타입은, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 개선되어야 할 항체의 특정한 특성 또는 기능, 항체 유도체가 규정된 조건하에서의 요법에 사용되는지 아닌지 등에 대한 고려에 기초하여, 결정할 수 있다.
B. 재조합의 방법 및 구성
예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호에 기재되는 대로, 항체는 재조합의 방법이나 구성을 이용하여 제조할 수 있다. 일 태양에 있어서, 본 명세서에 기재된 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체를 코드하는, 단리된 핵산이 제공된다. 그와 같은 핵산은 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열(예를 들면, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 코드해도 된다. 추가적인 태양에 있어서, 이와 같은 핵산을 포함하는 1개 또는 복수의 벡터(예를 들면, 발현 벡터)가 제공된다. 추가적인 태양에 있어서, 이와 같은 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 이와 같은 태양의 하나에서는, 숙주 세포는, (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코드하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 코드하는 핵산을 포함하는 제 1 벡터와 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코드하는 핵산을 포함하는 제 2 벡터를 포함한다(예를 들면, 형질 전환되어 있다). 일 태양에 있어서, 숙주 세포는, 진핵성이다(예를 들면, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포) 또는 림프계의 세포(예를 들면, Y0, NS0, Sp2/0 세포)). 일 태양에 있어서, 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 발현에 적합한 조건하에서, 전술대로 당해 항체를 코드하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 것, 및 임의로, 당해 항체를 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 회수하는 것을 포함하는, 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체를 제작하는 방법이 제공된다.
항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 재조합 제조를 위해서, (예를 들면, 전술한 것 등의) 항체를 코드하는 핵산을 단리하고, 추가적인 클로닝 및/또는 숙주 세포 중에서의 발현을 위해서, 1개 또는 복수의 벡터에 삽입한다. 그와 같은 핵산은 종래의 순서를 이용하여 용이하게 단리 및 서열 결정될 것이다(예를 들면, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코드하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 이용함으로써).
항체를 코드하는 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본 명세서에 기재된 원핵 세포 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들면, 항체는, 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요시되지 않는 경우는, 세균으로 제조해도 된다. 세균에서의 항체 단편 및 폴리펩타이드의 발현에 관해서, 예를 들면, 미국 특허 제5,648,237호, 제5,789,199호 및 제5,840,523호를 참조. (게다가, 대장균에 있어서의 항체 단편의 발현에 대하여 기재한 Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248(B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254도 참조.) 발현 후, 항체는 세균 세포 페이스트로부터 가용성 프랙션 중에 단리되어도 되고, 또한 더 정제할 수 있다.
원핵생물에 더하여, 부분적이거나 또는 완전한 인간의 글리코실화 패턴을 수반하는 항체의 산생을 초래하는, 글리코실화 경로가 「인간화」되어 있는 균류 및 효모의 주(株)를 포함하는, 사상균 또는 효모 등의 진핵성의 미생물은, 항체 코드 벡터의 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004) 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)을 참조.
다세포 생물(무척추 생물 및 척추 생물)에서 유래하는 것도 또한, 글리코실화된 항체의 발현을 위해서 적합한 숙주 세포이다. 무척추 생물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 곤충 세포와의 접합, 특히 Spodoptera frugiperda 세포의 형질 전환에 이용되는 수많은 바큘로바이러스주가 동정되어 있다.
식물 세포 배양물도 숙주로서 이용할 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 제5,959,177호, 제6,040,498호, 제6,420,548호, 제7,125,978호 및 제6,417,429호(트랜스제닉 식물로 항체를 산생하기 위한 PLANTIBODIES(상표) 기술을 기재)를 참조.
척추동물 세포도 또한 숙주로서 사용할 수 있다. 예를 들면, 부유 상태에서 증식하도록 적응된 포유동물 세포주는 유용할 것이다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는, SV40으로 형질 전환된 원숭이 신장 CV1주(COS-7); 인간 태아성 신장주(Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977) 등에 기재된 293 또는 293 세포); 새끼 햄스터 신장 세포(BHK); 마우스 서톨리 세포(Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980) 등에 기재된 TM4 세포); 원숭이 신장 세포(CV1); 아프리카녹색원숭이 신장 세포(VERO-76); 인간 자궁경부암 세포(HELA); 개 신장 세포(MDCK); Buffalo계 래트 간 세포(BRL 3A); 인간 폐 세포(W138); 인간 간 세포(Hep G2); 마우스 유암(MMT 060562); TRI 세포(예를 들면, Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)에 기재); MRC5 세포; 및 FS4 세포 등이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는, DHFR-CHO 세포(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))를 포함하는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포; 및 Y0, NS0 및 Sp2/0 등의 미엘로마 세포주를 포함한다. 항체 산생에 적합한 특정한 포유동물 숙주 세포주의 총설로서, 예를 들면, Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)을 참조.
C. 측정법(어세이)
본 명세서에서 제공되는 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체는, 당해 기술 분야에 있어서 알려져 있는 여러 가지의 측정법에 의해, 동정되거나, 스크리닝되거나, 또는 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성에 대하여 밝혀져도 된다.
1. 결합 측정법 및 그 밖의 측정법
일 국면에 있어서, 본 발명의 항체는, 예를 들면 ELISA, 웨스턴 블롯 등의 공지된 방법에 의해서, 그의 항원 결합 활성에 관해서 시험된다.
2. 활성 측정법
일 국면에 있어서, 생물학적 활성을 갖는 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 그것을 동정하기 위한 측정법이 제공된다. 생물학적 활성은, 예를 들면, FVIII 보인자 기능 대체 활성을 포함해도 된다. 또한, 이와 같은 생물학적 활성을 인비보 및/또는 인비트로에서 갖는 항체가 제공된다.
특정한 태양에 있어서, 본 발명의 항체는 이와 같은 생물학적 활성에 대하여 시험된다.
본 발명에 있어서 「FVIII 보인자 기능 대체 활성」, 「FVIII 대체 활성」 및 「FVIII의 기능을 대체하는 활성」은 동의로 이용되고, FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하여, FX의 활성화를 촉진하는(FXa 산생을 촉진하는) 활성을 의미한다.
본 발명에 있어서의 「FVIII 보인자 기능 대체 활성」은, 예를 들면, 비색 정량법을 이용한 FIXa에 의한 FX 활성화 반응 시험, 및 혈우병 A 혈장을 이용한 트롬빈 생성 시험으로부터 산출된 활성을 의미한다. 보다 구체적으로는, 본 발명의 항체와, 예를 들면, FIXa, FX, 합성 기질 S-2222(FXa의 합성 기질), 인지질로 이루어지는 측정계로 평가하는 것에 의해 확인할 수 있다. 본 측정계는 혈우병 A 증례에 있어서의 질환의 중증도 및 임상 증상과 상관성을 나타낸다(Rosen S, Andersson M, Blomba‥ck M et al. Clinical applications of a chromogenic substrate method for determination of FVIII activity. Thromb Haemost 1985; 54: 811-23).
D. 약학적 제제
본 명세서에 기재된 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 약학적 제제는, 원하는 순도를 갖는 항체를, 1개 또는 복수의 임의의 약학적으로 허용되는 담체(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))와 혼합하는 것에 의해, 동결 건조 제제 또는 수용액의 형태로 조제된다. 약학적으로 허용되는 담체는, 대체로, 이용될 때의 용량 및 농도에서는 레시피언트에 대해서 비독성이고, 이들로 한정되는 것은 아니지만, 이하의 것을 포함한다: 인산염, 시트르산염 및 다른 유기산 등의 완충액; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는, 항산화제; 보존료(옥타데실다이메틸벤질 염화 암모늄; 염화 헥사메토늄; 염화 벤잘코늄; 염화 벤제토늄; 페놀, 뷰틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤 등의 알킬 파라벤; 카테콜; 레조시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸 등); 저분자(약 10잔기 미만) 폴리펩타이드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린 등의 단백질; 폴리바이닐피롤리돈 등의 친수성 폴리머; 글라이신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신 등의 아미노산; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는, 단당, 이당, 및 다른 탄수화물; EDTA 등의 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 소비톨 등의, 설탕류; 나트륨 등의 염 형성 대이온류; 금속 착체(예를 들면, Zn-단백질 착체); 및/또는 폴리에틸렌 글라이콜 (PEG) 등의 비이온계 표면 활성제. 본 명세서의 예시적인 약학적으로 허용되는 담체는, 추가로 가용성 중성 활성형 히알루로니다아제 당 단백질(sHASEGP)(예를 들면, rHuPH20 (HYLENEX(등록상표), Baxter International, Inc.) 등의 인간 가용성 PH-20 히알루로니다아제 당 단백질) 등의 간질성 약제 분산제를 포함한다. 특정한 예시적 sHASEGP 및 그의 사용 방법은(rHuPH20을 포함함), 미국 특허출원 공개 제2005/0260186호 및 제2006/0104968호에 기재되어 있다. 일 국면에 있어서, sHASEGP는 콘드로이티나제 등의 1개 또는 복수의 추가적인 글리코사미노글리카나제와 조합된다.
유효 성분은, 예를 들면 액적 형성(코아세르베이션) 수법에 의해 또는 계면 중합에 의해 조제된 마이크로캡슐(각각 예를 들면, 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴 마이크로캡슐, 및 폴리(메타크릴산 메틸) 마이크로캡슐)에 편입되어도 되고, 콜로이드상 약제 송달 시스템(예를 들면, 리포솜, 알부민 소구체, 마이크로에멀션, 나노입자, 및 나노캡슐)에 편입되어도 되고, 매크로에멀션에 편입되어도 된다. 이와 같은 수법은 Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)에 개시되어 있다.
서방성 제제를 조제해도 된다. 서방성 제제의 적합한 예는, 항체를 포함한 고체 소수성 폴리머의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 당해 매트릭스는 예를 들면 필름 또는 마이크로캡슐 등의 조형품의 형태이다.
생체내(in vivo) 투여를 위해서 사용되는 제제는 통상 무균이다. 무균 상태는, 예를 들면 멸균 여과막을 통과시켜 여과하는 것 등에 의해, 용이하게 달성된다.
E. 치료적 방법 및 치료용 조성물
본 명세서에서 제공되는 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체 모두, 치료적인 방법에 있어서 사용되어도 된다.
일 국면에 있어서, 의약품으로서의 사용을 위한, 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체가 제공된다. 추가적인 국면에 있어서, 출혈, 출혈을 수반하는 질환, 또는 출혈에 기인하는 질환의 치료에 있어서의 사용을 위한, 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체가 제공된다. 특정한 태양에 있어서, 치료 방법에 있어서의 사용을 위한, 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체가 제공된다. 특정한 태양에 있어서, 본 발명은, 출혈, 출혈을 수반하는 질환, 또는 출혈에 기인하는 질환을 갖는 개체를 치료하는 방법으로서, 당해 개체에 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 유효량을 투여하는 공정을 포함하는 방법에 있어서의 사용을 위한, 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체를 제공한다. 이와 같은 태양의 하나에 있어서, 방법은, 당해 개체에 적어도 1개의 (예를 들면 후술하는 것과 같은) 추가 치료제의 유효량을 투여하는 공정을 더 포함한다. 추가적인 태양에 있어서, 본 발명은, FVIII 기능의 대체에 있어서의 사용을 위한 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체를 제공한다. 특정한 태양에 있어서, 본 발명은, 개체에 있어서 FVIII의 기능을 대체하는 방법으로서, FVIII의 기능을 대체하기 위해서 당해 개체에 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 유효량을 투여하는 공정을 포함하는 방법에 있어서의 사용을 위한, 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체를 제공한다. 상기 태양의 임의의 것에 의한 「개체」는, 적합하게는 인간이다.
본 발명에 있어서의 항체의 하나의 태양으로서는, 보인자 FVIII을 대체하는 기능을 갖기 때문에, 본 발명의 항체는, 해당 보인자의 활성(기능) 저하에 기인하는 질병에 대해서, 유효한 약제가 될 것이 기대된다. 상기 질병으로서, 예를 들면, 출혈, 출혈을 수반하는 질환, 또는 출혈에 기인하는 질환 등을 들 수 있고, 바람직하게는 FVIII 및/또는 활성화 혈액 응고 제 VIII 인자(FVIIIa)의 활성의 저하 내지 결손에 의해 발증 및/또는 진전하는 질환이다. 이와 같은 질환으로서는, 예를 들면 혈우병 A, FVIII/FVIIIa에 대한 인히비터가 출현하고 있는 질환, 후천성 혈우병, 폰 빌레브란트병 등을 들 수 있지만, 이들 질환으로 특별히 제한되지 않는다.
추가적인 국면에 있어서, 본 발명은 의약품의 제조 또는 조제에 있어서의 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 사용을 제공한다. 일 태양에 있어서, 의약품은, 출혈, 출혈을 수반하는 질환, 또는 출혈에 기인하는 질환의 치료를 위한 것이다. 추가적인 태양에 있어서, 의약품은, 출혈, 출혈을 수반하는 질환, 또는 출혈에 기인하는 질환을 치료하는 방법으로서, 출혈, 출혈을 수반하는 질환, 또는 출혈에 기인하는 질환을 갖는 개체에 의약품의 유효량을 투여하는 공정을 포함하는 방법에 있어서의 사용을 위한 것이다. 이와 같은 태양의 하나에 있어서, 방법은, 당해 개체에 적어도 1개의 (예를 들면 후술하는 것과 같은) 추가 치료제의 유효량을 투여하는 공정을 더 포함한다. 추가적인 태양에 있어서, 의약품은, FVIII 기능의 대체를 위한 것이다. 추가적인 태양에 있어서, 의약품은, 개체에 있어서 FVIII 기능을 대체하는 방법으로서, FVIII 기능을 대체하기 위해서 당해 개체에 의약품의 유효량을 투여하는 공정을 포함하는 방법에 있어서의 사용을 위한 것이다. 상기 태양의 임의의 것에 의한 「개체」는, 인간이어도 된다.
추가적인 국면에 있어서, 본 발명은 출혈, 출혈을 수반하는 질환, 또는 출혈에 기인하는 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 일 태양에 있어서, 방법은, 그와 같은 출혈, 출혈을 수반하는 질환, 또는 출혈에 기인하는 질환을 갖는 개체에 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 유효량을 투여하는 공정을 포함한다. 그와 같은 태양의 하나에 있어서, 방법은, 당해 개체에 적어도 1개의 (후술하는 것과 같은) 추가 치료제의 유효량을 투여하는 공정을 더 포함한다. 상기 태양의 임의의 것에 의한 「개체」는, 인간이어도 된다.
추가적인 국면에 있어서, 본 발명은 개체에 있어서 FVIII 기능을 대체하기 위한 방법을 제공한다. 일 태양에 있어서, 방법은, FVIII 기능을 대체하기 위해서 개체에 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 유효량을 투여하는 공정을 포함한다. 일 태양에 있어서, 「개체」는, 인간이다.
추가적인 국면에 있어서, 본 발명은 본 명세서에서 제공되는 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 임의의 것을 포함하는 약학적 제제를 제공한다(예를 들면 전술한 치료적 방법의 임의의 것에 있어서의 사용을 위함). 일 태양에 있어서, 약학적 제제는, 본 명세서에서 제공되는 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 임의의 것과 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 다른 태양에 있어서, 약학적 제제는, 본 명세서에서 제공되는 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 임의의 것과, 적어도 1개의 (예를 들면 후술하는 것과 같은) 추가 치료제를 포함한다.
본 발명의 항체는, 요법에 있어서, 단독 또는 다른 제와의 조합의 어느 쪽도 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 항체는, 적어도 1개의 추가의 치료제와 동시 투여되어도 된다. 특정한 태양에 있어서, 추가 치료제는 FVIII 제제이다.
전술한 바와 같은 병용 요법은 병용 투여(2개 이상의 치료제가 동일 또는 각각의 제제에 포함됨) 및 개별 투여를 포함하고, 개별 투여의 경우, 본 발명의 항체의 투여가 추가 치료제의 투여에 앞서서, 동시에, 및/또는 이어서 행해질 수 있다. 일 태양에 있어서, 항FIX(a)/FX 이중특이성 항체의 투여 및 추가 치료제의 투여는, 서로 약 1개월 이내, 또는 약 1, 2 또는 3주간 이내, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일 이내에 행해진다.
본 발명의 항체(및 임의의 추가 치료제)는, 비경구 투여, 폐내 투여 및 경비 투여, 또한 국소적 처치를 위해서 요망되는 경우는 병소내 투여를 포함하는, 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 투약은 투여가 단기인지 장기인지에 일부 따라서, 예를 들면, 정맥내 주사 또는 피하 주사 등의 주사에 의하는 등, 임의의 적합한 경로에 의해 행해질 수 있다. 이들로 한정되는 것은 아니지만, 단회 투여 또는 여러 가지의 시점에 걸친 반복 투여, 볼러스 투여, 및 펄스 주입을 포함하는, 여러 가지의 투약 스케줄이 본 명세서의 고려 내이다.
본 발명의 항체는 우량 의료 규범(good medical practice)에 일치한 방식으로 제제화되고, 투약되고, 또한 투여된다. 이 관점에서 고려되어야 할 팩터는, 치료되고 있는 그 특정한 장애, 치료되고 있는 그 특정한 포유동물, 개개의 환자의 임상 증상, 장애의 원인, 제를 송달하는 부위, 투여 방법, 투여의 스케줄, 및 의료 종사자에게 공지된 다른 팩터를 포함한다. 항체는, 반드시 그렇지 않아도 되지만, 임의로, 문제의 장애를 예방하거나 또는 치료하기 위해서 실제로 사용되고 있는 1개 또는 복수의 제와 함께, 제제화된다. 그와 같은 다른 제의 유효량은 제제 중에 존재하는 항체의 양, 장애 또는 치료의 타입, 및 위에서 논한 다른 팩터에 의존한다. 이들은 통상, 본 명세서에서 기술한 것과 동일한 용량 및 투여 경로로, 또는 본 명세서에서 기술한 용량의 약 1 내지 99%로, 또는 경험적/임상적으로 적절하다고 판단되는 임의의 용량 및 임의의 경로로, 사용된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해서, 본 발명의 항체의 적절한 용량(단독으로 이용될 때 또는 1개 또는 복수의 다른 추가 치료제와 함께 이용될 때)은, 치료되는 질환의 타입, 항체의 타입, 질환의 중증도 및 경과, 항체가 예방적 목적으로 투여되는 것인지 치료적 목적으로 투여되는 것인지, 약력, 환자의 임상력 및 항체에 대한 응답, 및 주치의의 재량에 의존할 것이다. 항체는, 환자에 대해서, 1회로, 또는 일련의 처치에 걸쳐서, 적합하게 투여된다. 질환의 타입 및 중증도에 따라서, 예를 들면, 1회 또는 복수회의 각각의 투여에 의해도 연속 주입에 의해도, 약 1μg/kg으로부터 15mg/kg(예를 들면, 0.1mg/kg∼10mg/kg)의 항체가, 환자에 대한 투여를 위한 최초의 후보 용량이 될 수 있다. 하나의 전형적인 1일 용량은, 전술한 팩터에 의존해서, 약 1μg/kg으로부터 100mg/kg 이상까지, 폭이 있어도 된다. 수일 또는 보다 장기에 걸친 반복의 투여의 경우, 상황에 따라, 치료는 통상 질환 증상의 원하는 억제가 일어날 때까지 유지된다. 항체의 하나의 예시적인 용량은, 약 0.05mg/kg 내지 약 10mg/kg의 범위 내이다. 따라서, 약 0.5mg/kg, 2.0mg/kg, 4.0mg/kg 또는 10mg/kg의 하나 또는 복수의 용량(또는 이들의 임의의 조합)이 환자에게 투여되어도 된다. 이와 같은 용량은, 단속적으로, 예를 들면 1주간마다 또는 3주간마다(예를 들면, 환자가 약 2로부터 약 20, 또는 예를 들면 약 6용량의 항체를 받도록) 투여되어도 된다. 높은 초회 부하 용량 후에, 1회 또는 복수회의 저용량이 투여되어도 된다. 이 요법의 경과는 종래의 수법 및 측정법에 의해서, 용이하게 모니터링된다.
F. 제품
본 발명의 다른 국면에 있어서, 전술한 장애의 치료, 예방, 및/또는 진단에 유용한 기재를 포함한 제품이 제공된다. 제품은 용기, 및 당해 용기 상의 라벨 또는 당해 용기에 부속되는 첨부 문서를 포함한다. 바람직한 용기로서는, 예를 들면, 보틀, 바이알, 시린지, IV 용액 백(bag) 등이 포함된다. 용기류는 유리나 플라스틱 등의 다양한 재료로 형성되어 있어도 된다. 용기는 조성물을 단체로 유지하고 있어도 되고, 증상의 치료, 예방, 및/또는 진단을 위해서 유효한 다른 조성물과 조합하여 유지해도 되고, 또한 무균적인 액세스 포트를 갖고 있어도 된다(예를 들면, 용기는 피하 주사침에 의해 꿰뚫을 수 있는 스토퍼를 갖는 정맥내 투여용 용액 백 또는 바이알이어도 된다). 조성물 중의 적어도 1개의 유효 성분은 본 발명의 항체이다. 라벨 또는 첨부 문서는 조성물이 선택된 증상을 치료하기 위해서 사용되는 것인 것을 나타낸다. 또 제품은, (a) 제 1 용기로서, 그 안에 담겨진 본 발명의 항체를 포함하는 조성물을 수반하는 제 1 용기; 및 (b) 제 2 용기로서, 그 안에 담겨진 추가적인 세포상해제 또는 그 이외로 치료적인 제를 포함하는 조성물을 수반하는 제 2 용기를 포함해도 된다. 본 발명의 이 태양에 있어서의 제품은, 조성물이 특정한 증상을 치료하기 위해서 사용될 수 있다는 것을 나타내는 첨부 문서를 추가로 포함해도 된다. 혹은 또는 그에 더하여, 제품은 주사용 제균수(BWFI), 인산 완충 생리 식염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액 등의 약학적으로 허용되는 완충액을 포함하는, 제 2 (또는 제 3) 용기를 추가로 포함해도 된다. 다른 완충액, 희석제, 필터, 침 및 시린지 등의, 다른 상업적 관점 또는 유저의 입장에서 바람직한 기재를 추가로 포함해도 된다.
일 국면에 있어서, 본 발명은, Emicizumab 개변체를 제조하는 방법으로서, 이하의 공정(a)를 포함하는 방법이다.
(a) 이하의 (i)∼(iii) 중 하나 이상에 의해 치환하는 공정으로서, 여기에서, 번호 매김은 Kabat 번호 매김 시스템에 따르는, 공정;
(i) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인에 있어서, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산에 있어서의 치환
(ii) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산에 있어서의 치환
(iii) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, T52a, N52, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산에 있어서의 치환.
상기 치환하는 개소는 1 이상이면 되고, 또한 (i)과 (ii)의 조합, (i)과 (iii)의 조합, (ii)와 (iii)의 조합, (i)과 (ii)와 (iii)의 조합이어도 된다.
일 국면에 있어서, 본 발명은, Emicizumab 개변체를 단리하는 방법으로서, 이하의 공정(a)∼(c)를 포함하는 방법이다.
(a) 이하의 (i)∼(iii) 중 하나 이상에 의해 Emicizumab 개변체를 산생하는 공정으로서, 여기에서, 번호 매김은 Kabat 번호 매김 시스템에 따르는, 공정;
(i) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인에 있어서, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산에 있어서의 치환
(ii) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산에 있어서의 치환
(iii) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, T52a, N52, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산에 있어서의 치환
(b) (a)에 있어서 산생된 해당 개변 항체의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 측정하는 공정; 및
(c) Emicizumab과 비교해서 FVIII 보인자 기능 대체 활성이 향상된 Emicizumab 개변 항체를 선택하는 공정.
상기 치환하는 개소는 1 이상이면 되고, 또한 (i)과 (ii)의 조합, (i)과 (iii)의 조합, (ii)와 (iii)의 조합, (i)과 (ii)와 (iii)의 조합이어도 된다.
실시예
이하는 본 발명의 방법 및 조성물의 실시예이다. 전술한 일반적인 기재에 비추어, 여러 가지의 다른 태양이 실시될 수 있다는 것이 이해될 것이다.
전술한 발명은, 명확한 이해를 도울 목적 하에, 실례 및 예시를 이용하여 상세히 기재했지만, 본 명세서에 있어서의 기재 및 예시는, 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 명세서에서 인용한 모든 특허문헌 및 과학문헌의 개시는, 그 전체에 걸쳐서, 참조에 의해 명시적으로 본 명세서에 포함된다.
〔실시예 1〕 FVIII 보인자 기능 대체 활성이 향상되는 개변 항체의 스크리닝
ACE910은, FVIII 보인자 기능 대체 활성을 나타내는 항FIX(a) 및 항FX로 이루어지는 인간화 IgG4 항체이고, FIX(a) 및 FX 각각을 인식하는 2종류의 중쇄(Q499 및 J327)와 공통 L쇄(L404)로 구성된다(중쇄 서열번호: 45 및 46, 경쇄 서열번호: 47). 본 발명자들은, 변이도입을 위한 PCR 등의 당업자 공지의 방법에 의해, L404에 대해서 아미노산 개변을 망라적으로 도입하고, 대규모로 FVIII 보인자 기능 대체 활성의 스크리닝을 실시함으로써, ACE910의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 향상시키는 L쇄의 아미노산 치환을 발견했다.
ACE910의 항FIX(a) 항체측(중쇄 서열번호: 45, 경쇄 서열번호: 47)의 L쇄를 L404(서열번호: 47)에 고정하고, ACE910의 항FX 항체측(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 47)의 L쇄는 L404의 전체 CDR을 시스테인을 제외한 아미노산으로 개변한 치환체를 제작했다. 또한, 항FX 항체측(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 47)의 L쇄를 ACE910의 L404에 고정하고, 항FIX(a) 항체측의 L쇄는 L404의 전체 CDR을 시스테인을 제외한 아미노산으로 개변한 치환체를 제작했다. 이중특이성 항체의 발현 및 정제는 당업자 공지의 방법으로 실시했다.
정제된 각종 이중특이성 항체를 이용하여 당업자 공지의 방법에 의해 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 평가했다. 구체적으로는, 이하의 방법으로 측정했다. 반응은 모두 실온에서 행해졌다. 0.1% 소 혈청 알부민을 포함하는 트리스 완충 생리 식염수(이하, TBSB라고 칭함)로 희석한 항체 용액 5μL를, 600ng/mL의 Human Factor IXa beta(Enzyme Research Laboratories) 5μL와 혼합한 후, 384웰 플레이트 중에서 실온에서 30분 인큐베이션했다. 이 혼합액 중의 효소 반응은 24.7μg/mL의 Human Factor X(Enzyme Research Laboratories) 5μL를 첨가하여 개시시키고, 4분 후, 0.5M EDTA 5μL를 첨가하여 정지시켰다. 발색 반응은 발색 기질 용액(S-2222, SEKISUI MEDICAL) 5μL를 첨가하는 것에 의해, 개시시켰다. 30분간의 발색 반응 후, 405nm의 흡광도 변화는 SpectraMax 340PC384(Molecular Devices)를 이용하여 측정했다.
그 결과, 이하의 표 2에 나타내는 몇 가지의 아미노산 치환이 친항체인 ACE910에 대해서 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 향상시키는 것이 가능한 것이 분명해졌다. 표 2에는 변이 개소의 Kabat numbering(좌단의 「position」열에 기재된 숫자), ACE910에 있어서의 아미노산(왼쪽으로부터 2번째 열에 기재된 아미노산(한 문자 표기)), 변이 후의 아미노산(최상단의 행에 기재된 아미노산(한 문자 표기)), ACE910(정제 항체)에 대한 비활성을 산출하고, ACE910(배양 상청)의 비활성값으로 보정했다(표 중의 각 수치). 표 2의 (-)는 항체의 발현량이 낮았던 것을 나타내고, "/"는 그 자신과 동일한 아미노산이기 때문에 제작하고 있지 않은 것을 나타낸다.
Figure 112019018994274-pct00002
〔실시예 2〕 ACE910의 각 H쇄에 적합한 신규 L쇄의 취득
실시예 1에서 나타낸 바와 같이, ACE910의 공통 L쇄인 L404에 대해서 아미노산 개변을 망라적으로 가하는 것에 의해, FVIII 보인자 기능 대체 활성을 향상시킬 수 있었다. 한편, ACE910의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 향상시키는 방법으로서, 항FIX(a) 항체 및 항FX 항체의 각각의 H쇄(Q499 및 J327)에 대해서 공통 L쇄와는 완전히 상이한 서열을 갖는 신규 L쇄를 인간 항체 라이브러리로부터 취득하는 방법이 생각되었다.
본 발명자들은, 당업자 공지의 방법, 구체적으로는, (Biochemical and Biophysical Research Communications, (2000), 275, 2, 553-557) 등을 참조하여, ACE910 항체의 L쇄 부분을 인간 L쇄 라이브러리로 치환한 라이브러리를 새롭게 제작 후, 비오틴 표지 인간 FIXa 혹은 비오틴 표지 인간 FX에 대해서 패닝 조작을 실시하여, FVIII 보인자 기능 대체 활성을 갖는 신규 L쇄를 가진 항체를 취득하는 것에 성공했다.
그 결과, FVIII 보인자 기능 대체 활성을 갖는 이중특이성 항체로서, 항인간 FIX(a) 항체 L쇄로서 QNK131(중쇄 서열번호: 45, 경쇄 서열번호: 13), QNK284(중쇄 서열번호: 45, 경쇄 서열번호: 14), QNK315(중쇄 서열번호: 45, 경쇄 서열번호: 15), QNL182(중쇄 서열번호: 45, 경쇄 서열번호: 16), QNL492(중쇄 서열번호: 45, 경쇄 서열번호: 17), QNL576(중쇄 서열번호: 45, 경쇄 서열번호: 18), 항인간 FX 항체 L쇄로서, JNK131(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 19), JNK163(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 20), JNK252(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 21), JNK263(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 22), JNK339(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 23), JNK348(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 24), JNK351(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 25), JNK360(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 26), JNK378(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 27), JNK382(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 28), JNL036(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 29), JNL072(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 30), JNL095(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 31), JNL176(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 32), JNL208(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 33), JNL224(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 34), JNL260(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 35), JNL056(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 36), JNL059(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 37), JNL226(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 38), JNL250(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 39), JNL263(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 40), JNL281(중쇄 서열번호: 46, 경쇄 서열번호: 41)을 발견했다.
이들 신규 L쇄를 갖는 각종 이중특이성 항체를 당업자 공지의 방법으로 발현, 정제했다. 조제한 항체를 표 3에 나타낸다(클론명, 중쇄 서열번호, 항FIX(a) 경쇄 서열번호 또는 항FX 경쇄 서열번호를 나타낸다). 한편, 신규 L쇄는 한쪽에만 사용하고, 다른 쪽은 ACE910의 공통 L쇄인 L404를 이용했다. 정제된 각종 이중특이성 항체의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 측정한 결과를 도 1에 나타낸다. 어느 신규 L쇄를 갖는 이중특이성 항체도 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 갖는 것이 확인되었다.
Figure 112019018994274-pct00003
〔실시예 3〕 신규 L쇄를 갖는 이중특이성 항체의 개변체 제작
실시예 2에 있어서 취득한 신규 L쇄를 갖는 이중특이성 항체의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 향상시키기 위해서, 항FIX(a) 항체의 신규 L쇄인 QNK131(경쇄 서열번호: 13)에 대해서 아미노산 치환 개변을 도입하여, QAL187(경쇄 서열번호: 42), QAL201(경쇄 서열번호: 43)을 취득했다. 마찬가지로, 항FX 항체의 신규 L쇄인 JNL095(경쇄 서열번호: 31)에 대해서 아미노산 치환 개변을 도입하여, JYL280(경쇄 서열번호: 44)을 취득했다. 일례로서, 중쇄 Q499와 경쇄 QAL201로 이루어지는 항FIX(a) 항체, 및 중쇄 J327과 경쇄 JYL280으로 이루어지는 항FX 항체로 구성되는 이중특이성 항체(Q499/QAL201//J327/JYL280)를 당업자 공지의 방법으로 발현, 정제하고, FVIII 보인자 기능 대체 활성을 측정한 결과를 도 2에 나타낸다.
〔실시예 4〕 신규 L쇄를 갖는 이중특이성 항체의 H쇄의 개변체 제작
FVIII 보인자 기능 대체 활성이 향상된 신규 L쇄(항FIX(a) 항체는 QAL187, 항FX 항체는 JYL280)를 이용하여, Q499 및 J327에 대해서, 아미노산 변이를 망라적으로 도입하고, 대규모로 FVIII 보인자 기능 대체 활성의 스크리닝을 실시함으로써, FVIII 보인자 기능 대체 활성을 향상시키는 아미노산 치환을 발견했다.
항FIX(a) 항체측의 중쇄와 경쇄를 각각 Q499 및 QAL201에 고정하고, 항FX 항체측의 경쇄를 JYL280에 고정하여, J327의 전체 CDR을 시스테인을 제외한 아미노산으로 개변한 치환체를 제작했다. 항FX 항체측의 중쇄와 경쇄를 각각 J327 및 JYL280에 고정하고, 항FIX(a) 항체측의 경쇄를 QAL187에 고정하여, Q499의 전체 CDR에 대해서 시스테인을 제외한 전체 아미노산으로의 치환체를 제작했다. 이중특이성 항체의 발현 및 정제는 당업자 공지의 방법으로 실시했다.
정제된 각종 이중특이성 항체를 이용하여 당업자 공지의 방법에 의해 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 평가했다.
그 결과, 이하의 표 4에 나타내는 몇 가지의 아미노산 치환이 친이중특이성 항체인 Q499/QAL187//J327/JYL280 혹은 Q499/QAL201//J327/JYL280에 대해서 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 향상시키는 것이 가능한 것이 분명해졌다. 표 4에는 변이 개소의 Kabat numbering(좌단의 「position」열에 기재된 숫자), 친항체에 있어서의 아미노산(왼쪽으로부터 2번째 열에 기재된 아미노산(한 문자 표기)), 변이 후의 아미노산(최상단의 행에 기재된 아미노산(한 문자 표기)), ACE910(정제 항체)에 대한 비활성을 나타냈다(표 중의 각 수치). 표 4의 (-)는 항체의 발현량이 낮았던 것을 나타내고, "/"는 그 자신과 동일한 아미노산이기 때문에 제작하고 있지 않은 것을 나타낸다.
Figure 112019018994274-pct00004
본 발명에 의해, ACE910(Emicizumab)의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 향상시키는 경쇄의 아미노산 치환, FVIII 보인자 기능 대체 활성을 나타내는 신규 경쇄, 및 신규 경쇄를 갖는 이중특이성 항체의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 향상시키는 중쇄의 아미노산 치환이 발견되었다. 이들 아미노산 치환이나 신규 경쇄는 ACE910(Emicizumab)보다도 우수한 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 갖는 이중특이성 항체의 창제에 유용하다.
SEQUENCE LISTING <110> CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA <120> BISPECIFIC ANTIBODIES HAVING THE INCREASED ACTIVITY OF FUNCTIONALLY SUBSTITUTING FOR FVIII <130> C1-A1609P <150> JP 2016-150769 <151> 2016-07-29 <160> 47 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 1 Tyr Tyr Asp Ile Gln 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 2 Ser Ile Ser Pro Ser Gly Gln Ser Thr Tyr Tyr Arg Arg Glu Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 3 Arg Thr Gly Arg Glu Tyr Gly Gly Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 4 Asp Asn Asn Met Asp 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized 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Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Ala Val 85 90 95 Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Val 100 105 <210> 32 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 32 Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ala Pro Gly Gln Arg 1 5 10 15 Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn His Leu 20 25 30 Val Ser Trp His Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Asn Asp Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Asp Ile Thr Gly Leu Gln Thr 65 70 75 80 Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Ala Ser Leu Arg 85 90 95 Ala Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 33 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 33 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Val Ser Cys Asn Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Thr Gly 20 25 30 Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Ile 35 40 45 Val Ile Phe Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Val Ile Ala Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Ser 85 90 95 Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 34 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 34 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Arg Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ile Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ala 85 90 95 Ser Ser Phe Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 35 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 35 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Asn Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Ala Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Val Pro Lys Val Leu 35 40 45 Ile Ser Asp Asn Asp Gln Arg Ser Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Arg Met 85 90 95 Arg Gly Phe Val Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 36 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 36 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 37 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 37 Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Arg Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Arg 20 25 30 Ala Val Ser Trp Tyr Gln His Val Pro Gly Lys Pro Pro Arg Leu Ile 35 40 45 Val Tyr His Asp Asp Val Leu Ser Ser Gly Val Ser Gly Arg Phe Ser 50 55 60 Ala Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Ala Trp Asp Ala Arg Leu 85 90 95 Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 38 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 38 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 39 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 39 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Thr Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Thr Ser 85 90 95 Gly Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 40 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 40 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Arg 85 90 95 Arg Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 41 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 41 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Phe Tyr 20 25 30 Lys Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Ser 85 90 95 Asn Thr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 42 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 42 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 43 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 43 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Arg Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 44 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 44 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Val Ser Val Ser Val Ala Arg Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Thr Ile Thr Cys Glu Gly Asn His Ile Gly Asp Lys His Val 20 25 30 His Trp Tyr His Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Ile Leu Val Met Phe 35 40 45 Arg Asp Ala Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Leu Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Tyr Thr 85 90 95 Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Val 100 105 <210> 45 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 45 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr 20 25 30 Asp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Pro Ser Gly Gln Ser Thr Tyr Tyr Arg Arg Glu Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Thr Gly Arg Glu Tyr Gly Gly Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 46 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 46 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn 20 25 30 Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Thr Arg Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Glu Glu Phe 50 55 60 Gln Asp Arg Val Ile Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr His Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Lys Ser Tyr Gly Tyr Tyr Leu Asp Glu Trp Gly Glu Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 47 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 47 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asn Ile Glu Arg Gln 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Glu Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gln Ala Ser Arg Lys Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asp Pro Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105

Claims (13)

  1. FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 3 폴리펩타이드 및 제 4 폴리펩타이드 중 어느 한쪽의 폴리펩타이드는 서열번호: 47에 기재된 항체 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 포함하고, 다른 쪽의 폴리펩타이드는 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, 다른 쪽의 폴리펩타이드는 Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이 하기 아미노산 중 어느 하나로 치환되어 있는, 항체:
    K24: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, R, W, 또는 Y;
    A25: I, L, M, P, V, G, N, S, T, F, 또는 W;
    S26: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    R27: A, L, M, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, W, 또는 Y;
    N28: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    I29: A, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, R, 또는 F;
    E30: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    R31: Q, S, 또는 K;
    Q32: A, L, M, V, G, N, S, E, H, K, R, W, 또는 Y;
    L33: A, I, M, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, 또는 F;
    A34: I, V, G, Q, S, 또는 T;
    Q50: A, I, L, M, V, G, S, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    A51: I, M, V, G, S, 또는 T;
    S52: A, I, L, V, G, N, T, D, H, R, F, W, 또는 Y;
    R53: I, L, M, K, F, 또는 Y;
    K54: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, H, R, F, W, 또는 Y;
    E55: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, H, K, R, F, 또는 Y;
    S56: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    Q89: A, M, V, S, T, E, 또는 Y;
    Q90: H;
    S92: I, N, H, K, 또는 R;
    D93: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    P94: A, I, L, M, V, S, H, 또는 Y;
    P95: G 또는 K;
    L96: A, I, M, P, G, Q, S, T, F, 또는 W; 및
    T97: I, V, G, Q, S, 또는 K.
  2. FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 3 폴리펩타이드는 서열번호: 42에 기재된 항체 경쇄의 아미노산 서열, 제 4 폴리펩타이드는 서열번호: 44에 기재된 항체 경쇄의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, 제 1 폴리펩타이드는 Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, Y31, Y32, D33, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체.
  3. FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄의 아미노산 서열, 제 3 폴리펩타이드는 서열번호: 43에 기재된 항체 경쇄의 아미노산 서열, 제 4 폴리펩타이드는 서열번호: 44에 기재된 항체 경쇄의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하고, 여기에서, 제 2 폴리펩타이드는 Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, T52a, N52, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 항체.
  4. FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 4 폴리펩타이드는 서열번호: 47에 기재된 항체 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 3 폴리펩타이드는 하기 (a1) 내지 (a6), (c1) 및 (c2)로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄를 포함하는, 항체.
    (a1) 서열번호: 13에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNK131)
    (a2) 서열번호: 14에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNK284)
    (a3) 서열번호: 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNK315)
    (a4) 서열번호: 16에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNL182)
    (a5) 서열번호: 17에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNL492)
    (a6) 서열번호: 18에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QNL576)
    (c1) 서열번호: 42에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QAL187)
    (c2) 서열번호: 43에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QAL201)
  5. FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 3 폴리펩타이드는 서열번호: 47에 기재된 항체 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 4 폴리펩타이드는 하기 (b1) 내지 (b23) 및 (c3)으로부터 선택되는 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄를 포함하는, 항체.
    (b1) 서열번호: 19에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK131)
    (b2) 서열번호: 20에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK163)
    (b3) 서열번호: 21에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK252)
    (b4) 서열번호: 22에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK263)
    (b5) 서열번호: 23에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK339)
    (b6) 서열번호: 24에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK348)
    (b7) 서열번호: 25에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK351)
    (b8) 서열번호: 26에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK360)
    (b9) 서열번호: 27에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK378)
    (b10) 서열번호: 28에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNK382)
    (b11) 서열번호: 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL036)
    (b12) 서열번호: 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL072)
    (b13) 서열번호: 31에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL095)
    (b14) 서열번호: 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL176)
    (b15) 서열번호: 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL208)
    (b16) 서열번호: 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL224)
    (b17) 서열번호: 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL260)
    (b18) 서열번호: 36에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL056)
    (b19) 서열번호: 37에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL059)
    (b20) 서열번호: 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL226)
    (b21) 서열번호: 39에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL250)
    (b22) 서열번호: 40에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL263)
    (b23) 서열번호: 41에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JNL281)
    (c3) 서열번호: 44에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JYL280)
  6. FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드와 제 3 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 1 폴리펩타이드는 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열, 제 2 폴리펩타이드는 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 도메인의 아미노산 서열을 각각 포함하고, 제 3 폴리펩타이드는 하기 (c1) 또는 (c2)의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄를 포함하고, 제 4 폴리펩타이드는 하기 (c3)의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄를 포함하는, 항체.
    (c1) 서열번호: 42에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QAL187)
    (c2) 서열번호: 43에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(QAL201)
    (c3) 서열번호: 44에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄(JYL280)
  7. FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 이중특이성 항체로서, 제 1 폴리펩타이드(d)와 제 3 폴리펩타이드(f)가 쌍을 형성하고, 제 2 폴리펩타이드(e)와 제 4 폴리펩타이드(g)가 쌍을 형성하고, 각각의 폴리펩타이드가 이하에 기재된 폴리펩타이드인 항체.
    (d) 제 1 폴리펩타이드는 (d1) 또는 (d2)이다:
    (d1) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인, 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드;
    (d2) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 45에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, Y31, Y32, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이 하기 아미노산 중 어느 하나로 치환되어 있는, 폴리펩타이드:
    Y31: S, H, 또는 W;
    Y32: I, V, N, Q, T, D, K, 또는 F;
    I34: A, L, M, G, Q, T, E, K, F, 또는 W;
    Q35: I, L, P, V, G, S, T, 또는 K;
    S50: A, I, M, G, N, D, F, W, 또는 Y;
    I51: V;
    S52: A, I, V, G, N, Q, D, H, F, W, 또는 Y;
    P52a: G, Q, 또는 Y;
    S53: G, T, 또는 H;
    G54: A 또는 S;
    Q55: G, H, 또는 R;
    S56: L, M, G, D, H, R, 또는 Y;
    T57: A, I, L, M, V, Q, S, E, H, K, F, W, 또는 Y;
    Y58: I, L, V, N, T, D, H, K, F, 또는 W;
    Y59: M, V, E, 또는 F;
    R60: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, H, K, 또는 F;
    R61: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, H, F, 또는 W;
    E62: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, 또는 W;
    V63: A, I, L, M, P, T, H, F, 또는 Y;
    K64: A, I, L, M, V, G, Q, S, T, H, R, 또는 Y;
    G65: A, I, L, M, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    R95: Q 또는 K;
    T96: A, M, V, N, Q, S, D, E, H, F, W, 또는 Y;
    G97: P, N, S, D, E, H, W, 또는 Y;
    R98: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, W, 또는 Y;
    E99: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    Y100: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W;
    G100a: A, I, L, M, N, S, T, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    G100b: A, I, N, S, T, D, 또는 E;
    G100c: N;
    W100d: H, F, 또는 Y;
    Y100e: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, 또는 W;
    F100f: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, 또는 E;
    D101: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y; 및
    Y102: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W,
    (e) 제 2 폴리펩타이드는 (e1) 또는 (e2)이다:
    (e1) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드;
    (e2) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 46에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 중쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, T52a, N52, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이 하기 아미노산 중 어느 하나로 치환되어 있는, 폴리펩타이드:
    D31: I, L, M, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    N32: A, M, V, G, Q, S, T, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    N33: I, L, M, V, G, Q, S, 또는 K;
    M34: A, I, L, V, T, H, F, W, 또는 Y;
    D35: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, E, H, F, W, 또는 Y;
    D50: A, V, G, N, Q, S, T, 또는 E;
    I51: A, L, M, V, G, Q, S, T, K, F, 또는 Y;
    N52: A, S, 또는 H;
    T52a: A, I, L, M, P, V, G, S, F, 또는 W;
    R53: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, D, E, H, K, F, W, 또는 Y;
    S54: A, I, L, M, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    G55: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    G56: A, I, L, M, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    S57: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, H, 또는 W;
    I58: A, L, M, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    Y59: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W
    N60: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    E61: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    E62: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    F63: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, D, E, H, K, R, W, 또는 Y;
    Q64: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    D65: A, L, M, P, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    R95: L, M, V, H, 또는 K;
    K96: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, H, R, F, W, 또는 Y;
    S97: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, F, W, 또는 Y;
    Y98: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, H, K, R, F, 또는 W;
    G99: A, M, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    Y100: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W;
    Y100a: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W;
    L100b: A, I, M, V, N, Q, S, T, D, H, F, W, 또는 Y;
    D101: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, 또는 R; 및
    E102: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, 또는 Y,
    (f) 제 3 폴리펩타이드는 (f1), (f2) 또는 (f3)이다:
    (f1) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인, 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드;
    (f2) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드;
    (f3) 제 4 항에 기재된 (a1) 내지 (a6), (c1) 및 (c2) 중 어느 하나에 기재된 폴리펩타이드,
    (g) 제 4 폴리펩타이드는 (g1), (g2) 또는 (g3)이다:
    (g1) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인, 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드;
    (g2) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인 혹은 서열번호: 47에 기재된 아미노산 서열을 갖는 항체 경쇄 가변 도메인을 포함하는 폴리펩타이드로서, Kabat 번호 매김 시스템에 따라 번호 매겨진, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, Y91, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산이, 시스테인 이외의 임의의 아미노산으로 치환되어 있는, 폴리펩타이드;
    (g3) 제 5 항에 기재된 (b1) 내지 (b23), 및 (c3) 중 어느 하나에 기재된 폴리펩타이드,
    단, 상기 이중특이성 항체는, 제 2 폴리펩타이드와 제 4 폴리펩타이드가 쌍을 형성하고, 제 1 폴리펩타이드가 서열번호: 45에 기재된 항체 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 H 쇄로 이루어지고, 제 2 폴리펩타이드가 서열번호: 46에 기재된 항체 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 H 쇄로 이루어지고, 제 3 폴리펩타이드 및 제 4 폴리펩타이드가 서열번호: 47에 기재된 항체 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 공통 L 쇄로 각각 이루어지는 이중특이성 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)는 아니다.
  8. Emicizumab 개변체를 제조하는 방법으로서, 이하의 공정(a)를 포함하는, 방법.
    (a) 이하의 (i)∼(iii) 중 하나 이상에 의해 치환하는 공정으로서, 여기에서, 번호 매김은 Kabat 번호 매김 시스템에 따르는, 공정;
    (i) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인에 있어서, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산의 하기 아미노산 중 어느 하나로의 치환:
    K24: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, R, W, 또는 Y;
    A25: I, L, M, P, V, G, N, S, T, F, 또는 W;
    S26: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    R27: A, L, M, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, W, 또는 Y;
    N28: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    I29: A, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, R, 또는 F;
    E30: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    R31: Q, S, 또는 K;
    Q32: A, L, M, V, G, N, S, E, H, K, R, W, 또는 Y;
    L33: A, I, M, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, 또는 F;
    A34: I, V, G, Q, S, 또는 T;
    Q50: A, I, L, M, V, G, S, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    A51: I, M, V, G, S, 또는 T;
    S52: A, I, L, V, G, N, T, D, H, R, F, W, 또는 Y;
    R53: I, L, M, K, F, 또는 Y;
    K54: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, H, R, F, W, 또는 Y;
    E55: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, H, K, R, F, 또는 Y;
    S56: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    Q89: A, M, V, S, T, E, 또는 Y;
    Q90: H;
    S92: I, N, H, K, 또는 R;
    D93: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    P94: A, I, L, M, V, S, H, 또는 Y;
    P95: G 또는 K;
    L96: A, I, M, P, G, Q, S, T, F, 또는 W; 및
    T97: I, V, G, Q, S, 또는 K;
    (ii) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서, Y31, Y32, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산의 하기 아미노산 중 어느 하나로의 치환:
    Y31: S, H, 또는 W;
    Y32: I, V, N, Q, T, D, K, 또는 F;
    I34: A, L, M, G, Q, T, E, K, F, 또는 W;
    Q35: I, L, P, V, G, S, T, 또는 K;
    S50: A, I, M, G, N, D, F, W, 또는 Y;
    I51: V;
    S52: A, I, V, G, N, Q, D, H, F, W, 또는 Y;
    P52a: G, Q, 또는 Y;
    S53: G, T, 또는 H;
    G54: A 또는 S;
    Q55: G, H, 또는 R;
    S56: L, M, G, D, H, R, 또는 Y;
    T57: A, I, L, M, V, Q, S, E, H, K, F, W, 또는 Y;
    Y58: I, L, V, N, T, D, H, K, F, 또는 W;
    Y59: M, V, E, 또는 F;
    R60: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, H, K, 또는 F;
    R61: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, H, F, 또는 W;
    E62: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, 또는 W;
    V63: A, I, L, M, P, T, H, F, 또는 Y;
    K64: A, I, L, M, V, G, Q, S, T, H, R, 또는 Y;
    G65: A, I, L, M, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    R95: Q 또는 K;
    T96: A, M, V, N, Q, S, D, E, H, F, W, 또는 Y;
    G97: P, N, S, D, E, H, W, 또는 Y;
    R98: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, W, 또는 Y;
    E99: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    Y100: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W;
    G100a: A, I, L, M, N, S, T, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    G100b: A, I, N, S, T, D, 또는 E;
    G100c: N;
    W100d: H, F, 또는 Y;
    Y100e: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, 또는 W;
    F100f: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, 또는 E;
    D101: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y; 및
    Y102: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W;
    (iii) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, T52a, N52, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산의 하기 아미노산 중 어느 하나로의 치환:
    D31: I, L, M, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    N32: A, M, V, G, Q, S, T, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    N33: I, L, M, V, G, Q, S, 또는 K;
    M34: A, I, L, V, T, H, F, W, 또는 Y;
    D35: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, E, H, F, W, 또는 Y;
    D50: A, V, G, N, Q, S, T, 또는 E;
    I51: A, L, M, V, G, Q, S, T, K, F, 또는 Y;
    N52: A, S, 또는 H;
    T52a: A, I, L, M, P, V, G, S, F, 또는 W;
    R53: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, D, E, H, K, F, W, 또는 Y;
    S54: A, I, L, M, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    G55: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    G56: A, I, L, M, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    S57: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, H, 또는 W;
    I58: A, L, M, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    Y59: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W
    N60: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    E61: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    E62: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    F63: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, D, E, H, K, R, W, 또는 Y;
    Q64: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    D65: A, L, M, P, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    R95: L, M, V, H, 또는 K;
    K96: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, H, R, F, W, 또는 Y;
    S97: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, F, W, 또는 Y;
    Y98: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, H, K, R, F, 또는 W;
    G99: A, M, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    Y100: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W;
    Y100a: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W;
    L100b: A, I, M, V, N, Q, S, T, D, H, F, W, 또는 Y;
    D101: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, 또는 R; 및
    E102: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, 또는 Y
  9. Emicizumab 개변체를 단리하는 방법으로서, 이하의 공정(a)∼(c)를 포함하는, 방법.
    (a) 이하의 (i)∼(iii) 중 하나 이상에 의해 Emicizumab 개변체를 산생하는 공정으로서, 여기에서, 번호 매김은 Kabat 번호 매김 시스템에 따르는, 공정;
    (i) 서열번호: 7, 8, 9에 기재된 경쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 가변 도메인에 있어서, K24, A25, S26, R27, N28, I29, E30, R31, Q32, L33, A34, Q50, A51, S52, R53, K54, E55, S56, Q89, Q90, S92, D93, P94, P95, L96 및 T97로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산의 하기 아미노산 중 어느 하나로의 치환:
    K24: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, R, W, 또는 Y;
    A25: I, L, M, P, V, G, N, S, T, F, 또는 W;
    S26: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    R27: A, L, M, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, W, 또는 Y;
    N28: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    I29: A, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, R, 또는 F;
    E30: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    R31: Q, S, 또는 K;
    Q32: A, L, M, V, G, N, S, E, H, K, R, W, 또는 Y;
    L33: A, I, M, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, 또는 F;
    A34: I, V, G, Q, S, 또는 T;
    Q50: A, I, L, M, V, G, S, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    A51: I, M, V, G, S, 또는 T;
    S52: A, I, L, V, G, N, T, D, H, R, F, W, 또는 Y;
    R53: I, L, M, K, F, 또는 Y;
    K54: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, H, R, F, W, 또는 Y;
    E55: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, H, K, R, F, 또는 Y;
    S56: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    Q89: A, M, V, S, T, E, 또는 Y;
    Q90: H;
    S92: I, N, H, K, 또는 R;
    D93: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    P94: A, I, L, M, V, S, H, 또는 Y;
    P95: G 또는 K;
    L96: A, I, M, P, G, Q, S, T, F, 또는 W; 및
    T97: I, V, G, Q, S, 또는 K;
    (ii) 서열번호: 1, 2, 3에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서, Y31, Y32, I34, Q35, S50, I51, S52, P52a, S53, G54, Q55, S56, T57, Y58, Y59, R60, R61, E62, V63, K64, G65, R95, T96, G97, R98, E99, Y100, G100a, G100b, G100c, W100d, Y100e, F100f, D101 및 Y102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산의 하기 아미노산 중 어느 하나로의 치환:
    Y31: S, H, 또는 W;
    Y32: I, V, N, Q, T, D, K, 또는 F;
    I34: A, L, M, G, Q, T, E, K, F, 또는 W;
    Q35: I, L, P, V, G, S, T, 또는 K;
    S50: A, I, M, G, N, D, F, W, 또는 Y;
    I51: V;
    S52: A, I, V, G, N, Q, D, H, F, W, 또는 Y;
    P52a: G, Q, 또는 Y;
    S53: G, T, 또는 H;
    G54: A 또는 S;
    Q55: G, H, 또는 R;
    S56: L, M, G, D, H, R, 또는 Y;
    T57: A, I, L, M, V, Q, S, E, H, K, F, W, 또는 Y;
    Y58: I, L, V, N, T, D, H, K, F, 또는 W;
    Y59: M, V, E, 또는 F;
    R60: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, H, K, 또는 F;
    R61: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, H, F, 또는 W;
    E62: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, 또는 W;
    V63: A, I, L, M, P, T, H, F, 또는 Y;
    K64: A, I, L, M, V, G, Q, S, T, H, R, 또는 Y;
    G65: A, I, L, M, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    R95: Q 또는 K;
    T96: A, M, V, N, Q, S, D, E, H, F, W, 또는 Y;
    G97: P, N, S, D, E, H, W, 또는 Y;
    R98: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, W, 또는 Y;
    E99: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    Y100: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W;
    G100a: A, I, L, M, N, S, T, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    G100b: A, I, N, S, T, D, 또는 E;
    G100c: N;
    W100d: H, F, 또는 Y;
    Y100e: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, F, 또는 W;
    F100f: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, 또는 E;
    D101: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y; 및
    Y102: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W;
    (iii) 서열번호: 4, 5, 6에 기재된 중쇄 CDR1, 2, 3의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 가변 도메인에 있어서, D31, N32, N33, M34, D35, D50, I51, T52a, N52, R53, S54, G55, G56, S57, I58, Y59, N60, E61, E62, F63, Q64, D65, R95, K96, S97, Y98, G99, Y100, Y100a, L100b, D101 및 E102로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 아미노산의 하기 아미노산 중 어느 하나로의 치환:
    D31: I, L, M, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    N32: A, M, V, G, Q, S, T, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    N33: I, L, M, V, G, Q, S, 또는 K;
    M34: A, I, L, V, T, H, F, W, 또는 Y;
    D35: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, E, H, F, W, 또는 Y;
    D50: A, V, G, N, Q, S, T, 또는 E;
    I51: A, L, M, V, G, Q, S, T, K, F, 또는 Y;
    N52: A, S, 또는 H;
    T52a: A, I, L, M, P, V, G, S, F, 또는 W;
    R53: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, D, E, H, K, F, W, 또는 Y;
    S54: A, I, L, M, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    G55: A, I, L, M, P, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    G56: A, I, L, M, V, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    S57: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, H, 또는 W;
    I58: A, L, M, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    Y59: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W
    N60: A, I, L, M, P, V, G, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    E61: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    E62: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    F63: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, D, E, H, K, R, W, 또는 Y;
    Q64: A, I, L, M, P, V, G, N, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    D65: A, L, M, P, G, N, Q, S, T, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    R95: L, M, V, H, 또는 K;
    K96: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, H, R, F, W, 또는 Y;
    S97: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, T, D, E, H, K, F, W, 또는 Y;
    Y98: A, I, L, M, V, G, N, Q, S, T, H, K, R, F, 또는 W;
    G99: A, M, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    Y100: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W;
    Y100a: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, E, H, K, R, F, 또는 W;
    L100b: A, I, M, V, N, Q, S, T, D, H, F, W, 또는 Y;
    D101: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, E, H, K, 또는 R; 및
    E102: A, I, L, M, P, V, G, N, Q, S, T, D, H, K, R, F, W, 또는 Y;
    (b) (a)에 있어서 산생된 해당 개변체의 FVIII 보인자 기능 대체 활성을 측정하는 공정; 및
    (c) Emicizumab과 비교해서 FVIII 보인자 기능 대체 활성이 향상된 Emicizumab 개변체를 선택하는 공정
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