KR102522832B1

KR102522832B1 - 호흡기 세포융합 바이러스 （ｒｓｖ）의 복제에 대하여 저해 활성을 갖는 피페리딘 치환된 피라졸로［１，５―ａ］피리미딘 유도체

Info

Publication number: KR102522832B1
Application number: KR1020177014525A
Authority: KR
Inventors: 압델라 타리; 산드린느 마리 헬렌 벤데빌르; 팀 휴고 마리아 욘커스; 피에르 쟝-마리 베르나르 라보이송; 사무엘 도미니크 데민; 릴리 후; 루드빅 파울 쿠이만스
Original assignee: 얀센 사이언시즈 아일랜드 언리미티드 컴퍼니
Priority date: 2014-12-08
Filing date: 2015-12-07
Publication date: 2023-04-17
Also published as: ZA201703899B; MX2017007429A; SG11201704397VA; AU2015359624B2; US20170349591A1; EA032081B1; WO2016091774A1; CA2963051A1; EP3230287A1; KR20170090424A; CN107001377A; JP6628930B1; MX368162B; ES2704740T3; US9981976B2; AU2015359624A1; EA201791274A1; JP2017537118A; CA2963051C; CN107001377B

Abstract

본 발명은 항바이러스 활성을 갖는, 특히, 호흡기 세포융합 바이러스 (respiratory syncytial virus; RSV)의 복제에 대하여 저해 활성을 갖는 하기 화학식 I:
[화학식 I]

의 신규한 치환 이환식 피라졸로 피리미딘 화합물에 관한 것이다. 추가로 본 발명은 그러한 신규 화합물의 제법, 이러한 화합물을 포함하는 조성물, 및 호흡기 세포융합 바이러스 감염의 치료에서 사용하기 위한 화합물에 관한 것이다.

Description

호흡기 세포융합 바이러스 （ＲＳＶ）의 복제에 대하여 저해 활성을 갖는 피페리딘 치환된 피라졸로［１，５―Ａ］피리미딘 유도체{PIPERIDINE SUBSTITUTED PYRAZOLO[1,5-A]PYRIMIDINE DERIVATIVES WITH INHIBITORY ACTIVITY ON THE REPLICATION OF THE RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS (RSV)}

본 발명은 항바이러스 활성을 갖는, 특히, 호흡기 세포융합 바이러스 (respiratory syncytial virus; RSV)의 복제에 대하여 저해 활성을 갖는 신규한 치환 이환식 피라졸로 피리미딘 화합물에 관한 것이다. 추가로 본 발명은 그러한 신규 화합물의 제법, 이러한 화합물을 포함하는 조성물, 및 호흡기 세포융합 바이러스 감염의 치료에서 사용하기 위한 화합물에 관한 것이다.

인간 RSV 또는 호흡기 세포융합 바이러스는 소 RSV 바이러스와 함께 파라믹소바이러스과 (family of Paramyxoviridae), 뉴모바이러스 아과 (subfamily pneumoviridae)의 구성원인 거대 RNA 바이러스이다. 인간 RSV는 전세계의 모든 연령층의 사람에 있어서 소정 스펙트럼의 기도 질환에 책임이 있다. 이는 영유아기 및 소아기 동안 하기도 질병의 주요 원인이다. 모든 영유아의 절반 이상이 그들 생애의 첫 해에 RSV에 직면하고, 거의 모두 그의 첫 2년 내에 RSV에 직면한다. 학동기전 아동에 있어서의 감염은 여러 해 동안 지속되는 폐 손상을 야기할 수 있고, 그 후 생애에서 만성 폐질환 (만성 천명(chronic wheezing), 천식)의 원인이 될 수도 있다. 학동기 아동 및 성인은 RSV 감염시 종종 (악성) 감기를 앓는다. 노년기에 있어서, 민감성이 다시 증가하며, 고령자에서 RSV는 다수의 폐렴 발생에 연루되어 유의한 사망률을 초래하였다.

주어진 하위군 (subgroup)으로부터의 바이러스에 의한 감염은 다음의 겨울철에, 동일 하위군으로부터의 RSV 단리물에 의한 후속적인 감염을 방지하지 못한다. 단지 2가지 하위유형 (subtype), A 및 B의 존재에도 불구하고, 이와 같이 RSV의 재감염이 일반적이다.

오늘날, 단지 3가지의 약물이 RSV 감염에 대한 사용용으로 인가되었다. 첫 번째의 것은 입원한 아동에 있어서 중증 RSV 감염에 대한 에어로졸 치료제를 제공하는 뉴클레오시드 유사체인 리바비린 (ribavirin)이다. 에어로졸 투여 경로, 독성 (최기성(teratogenicity)의 위험), 비용 및 고도 가변성 효능이 그의 사용을 제한한다. 다클론 및 단클론 항체 면역자극제인 다른 두 약물, 레스피감 (RespiGam)^® 및 시나기스 (Synagis)^® (팔리비주맙 (palivizumab))를 예방적인 방식으로 사용하고자 한다. 이들 둘 모두는 매우 고가이며, 비경구 투여를 필요로 한다.

안전하고 효과적인 RSV 백신을 개발하려는 다른 시도는 지금까지 모두 실패로 끝났다. 불활성화된 백신은 질환을 방지하지 못했으며, 사실 일부의 경우에는 후속적인 감염 동안 질환을 증강시켰다. 생명을 약화시킨 백신이 시도되어 왔으며, 이때 성공은 제한적이었다. 분명히, RSV 복제에 대항하여 효력이 있고 비독성이며 투여가 용이한 약물에 대한 필요가 있다. 경구 투여될 수 있는, RSV 복제에 대항하는 약물을 제공하는 것이 특히 바람직하다.

항-RSV 활성을 나타내는 화합물이 국제 공개 제2011/163518호, 국제 공개 제2013/096681호 및 국제 공개 제2013/158776호에 개시되어 있다.

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 (이의 임의의 입체화학적 이성체 형태를 포함함), 또는 이의 제약상 허용가능한 산 부가염에 관한 것이다:

[화학식 I]

여기서,

R¹은 수소, 히드록시, C_1- ₄알킬, 모노- 또는 디(C_1-4알킬)아미노, 또는 헤테로시클릴¹이며;

R²는 수소 또는 C₁ _- ₄알킬이고;

R³은 C_1- ₄알킬, 할로, C_3- ₆시클로알킬, 모노- 또는 디(C_1-4알킬)아미노, 또는 헤테로시클릴²이며;

R⁴는 수소, C_1- ₆알킬, 히드록시, 또는 할로이고;

헤테로시클릴¹은 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 또는 모르폴리닐이며, 각각의 헤테로시클릴¹은 C_1- ₄알킬, 히드록시, 할로, 폴리할로C₁ _- ₄알킬, C_1-4알킬옥시카르보닐, 아미노, C₁ _- ₄알킬아미노카르보닐, 또는 C_1- ₄알킬술포닐로부터 선택되는 1개 또는 2개의 치환체로 임의로 치환되고;

헤테로시클릴²는 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 또는 모르폴리닐이며, 각각의 헤테로시클릴²는 C_1- ₄알킬, 히드록시, 할로, 폴리할로C₁ _- ₄알킬, C_1-4알킬옥시카르보닐, 아미노, C_1- ₄알킬옥시카르보닐아미노, 또는 C_1- ₄알킬술포닐로부터 선택되는 1개 또는 2개의 치환체로 임의로 치환되고;

Het는 푸라닐, 티오페닐, 피라졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 시놀리닐, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 1,5-나프티리디닐, 1,6-나프티리디닐, 1,7-나프티리디닐, 1,8-나프티리디닐, 피리도[2,3-d]피리미디닐, 피리도[3,2-d]피리미디닐, 9H-퓨리닐, 티아졸로[5,4-d]피리미디닐, 7H-피롤로[2,3-d]피리미디닐, 옥사졸로[5,4-d]피리미디닐, 티에노[2,3-d]피리미디닐, 또는 티에노[3,2-d]피리미디닐로부터 선택되며, 각각의 Het는 할로, C_1- ₄알킬, C_1- ₄알킬옥시, C_1- ₄알킬티오, 히드록시, 아미노, 모노- 또는 디(C_1- ₄알킬)아미노, 히드록시카르보닐, C_1- ₄알킬옥시카르보닐, C_1- ₄알킬술포닐아미노, 아미노카르보닐, 트리플루오로메틸, C_1- ₄알킬옥시카르보닐아미노, 디(C_1-4알킬옥시카르보닐)아미노, C_1- ₄알킬술포닐아미노카르보닐, C_1- ₄알킬아미노카르보닐, C_1- ₄알킬옥시C₁ _-6알킬옥시카르보닐아미노, 디(C_1-4알킬)아미노술포닐아미노카르보닐, C_3- ₆시클로알킬술포닐아미노카르보닐, HO-NH-(C=NH)-; 각각 임의로 1개 또는 2개의 C_1- ₄알킬로 치환된 옥사졸릴 또는 트리아졸릴로부터 각각 독립적으로 선택되는 1개, 2개 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된다.

전술한 정의에서 사용되는 바와 같이,

- 할로는 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 총칭하며;

- C_1- ₄알킬은 탄소 원자수가 1 내지 4인 직쇄 및 분지쇄 포화 탄화수소 라디칼, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 1-메틸-에틸, 2-메틸프로필 등을 정의하며;

- C_1- ₆알킬은 C_1- ₄알킬 및 탄소 원자수가 5 또는 6인 이의 더 고도한 동족체, 예를 들어 2-메틸-부틸, 펜틸, 헥실 등을 포함함을 의미하며;

- C_3- ₆시클로알킬은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 및 시클로헥실을 총칭하며;

- 폴리할로C₁ _- ₄알킬은 폴리할로 치환된 C_1- ₄알킬, 특히, 2 내지 6개의 할로겐 원자로 치환된 C_1- ₄알킬 (이상에서 정의된 바와 같음), 예컨대 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 트리플루오로에틸 등으로 정의된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "본 발명의 화합물"이라는 용어는 화학식 I의 화합물, 및 이의 염 및 용매화물을 포함함을 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 단지 실선으로 나타낸 그리고 실선 쐐기 (solid wedged) 또는 해시드 (hashed) 쐐기 결합으로 나타내지 않은, 또는 달리 1개 이상의 원자 주위에서 특정 배열 (예를 들어, R, S)을 갖는 것으로 표시된 결합을 갖는 임의의 화학식에서는 각각의 가능한 입체이성체, 또는 2가지 입체이성체의 혼합물이 고려된다.

이상 및 이하에서, "화학식 I의 화합물" 및 "화학식 I의 화합물의 합성의 중간체"는 이의 입체이성체 및 이의 호변이성체 형태를 포함함을 의미한다.

이상에서 또는 이하에서 "입체이성체", "입체이성체 형태" 또는 "입체화학적 이성체 형태"라는 용어는 상호교환가능하게 사용된다.

본 발명은 순수한 입체이성체로서의 또는 2가지 이상의 입체이성체의 혼합물로서의 본 발명의 화합물의 모든 입체이성체를 포함한다. 거울상 이성체는 서로 포개질 수 없는 거울상인 입체이성체이다. 한 쌍의 거울상 이성체의 1:1 혼합물은 라세미체 또는 라세미 혼합물이다. 부분입체이성질체 (또는 부분입체이성체)는 거울상 이성체가 아닌 입체이성체이며, 즉, 이것은 거울상으로서 관련된 것이 아니다. 화합물이 이중 결합을 포함할 경우, 치환체는 E 또는 Z 배열로 존재할 수 있다. 2가 환형 (부분) 포화 라디칼 상의 치환체는 시스- 또는 트랜스-배열 중 어느 하나를 가질 수 있으며; 예를 들어, 화합물이 2치환 시클로알킬 기를 포함할 경우, 치환체는 시스 또는 트랜스 배열로 존재할 수 있다.

따라서, 본 발명은 화학적으로 가능할 때는 언제든지 거울상 이성체, 부분입체 이성체, 라세미체, E 이성체, Z 이성체, 시스 이성체, 트랜스 이성체 및 이들의 혼합물을 포함한다.

모든 상기 용어, 즉, 거울상 이성체, 부분입체 이성체, 라세미체, E 이성체, Z 이성체, 시스 이성체, 트랜스 이성체 및 이들의 혼합물의 의미는 당업자에게 공지되어 있다.

절대 배열은 칸-인골드-프렐로그 (Cahn-Ingold-Prelog) 시스템에 따라 명시된다. 비대칭 원자에서의 배열은 R 또는 S 중 어느 하나로 명시된다. 절대 배열이 공지되지 않은 분할 입체이성체는 이것이 평면 편광을 회전시키는 방향에 따라 (+) 또는 (-)로 표기될 수 있다. 예를 들어, 절대 배열이 공지되지 않은 분할 거울상 이성체는 이것이 평면 편광을 회전시키는 방향에 따라 (+) 또는 (-)로 표기될 수 있다.

특정 입체이성체가 확인될 때, 이는 상기 입체이성체에 다른 입체이성체가 실질적으로 없음을 의미하며, 즉, 상기 입체이성체가 50% 미만, 바람직하게는 20% 미만, 더 바람직하게는 10% 미만, 더욱 더 바람직하게는 5% 미만, 특히 2% 미만, 그리고 가장 바람직하게는 1% 미만의 다른 입체이성체와 결부됨을 의미한다. 따라서, 화학식 I의 화합물이 예를 들어 (R)로서 명시될 때, 이는 이 화합물에 (S) 이성체가 실질적으로 없음을 의미하며; 화학식 I의 화합물이 예를 들어 E로서 명시될 때, 이는 이 화합물에 Z 이성체가 실질적으로 없음을 의미하며; 화학식 I의 화합물이 예를 들어 시스로서 명시될 때, 이는 이 화합물에 트랜스 이성체가 실질적으로 없음을 의미한다.

화학식 I에 따른 화합물 중 일부는 그의 호변이성체 형태로도 존재할 수 있다. 그러한 형태는, 상기 화학식 I로 명백하게 표시되지는 않지만 이것이 존재할 수 있는 한 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다.

단일 화합물이 입체이성체 및 호변이성체 형태 둘 모두로 존재할 수 있음이 뒤따른다.

의심을 피하기 위해, 화학식 I의 화합물은 그의 천연 또는 비천연 동위원소 형태 중 임의의 형태의 진술된 원자를 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 언급될 수 있는 본 발명의 실시 양태는 (a) 화학식 I의 화합물이 이 화합물의 임의의 원자와 관련하여 동위원소 풍부한 것이 아니거나 표지되지 않은 것; 및 (b) 화학식 I의 화합물이 이 화합물의 1개 이상의 원자와 관련하여 동위원소 풍부한 것이거나 표지된 것을 포함한다. (화학식 I의 화합물의 1개 이상의 원자와 관련하여) 동위원소 풍부하거나 1개 이상의 안정한 동위원소로 표지된 화학식 I의 화합물은 예를 들어 중수소, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁴N, ¹⁵O 등과 같은 1개 이상의 원자로 표지되거나 동위원소 풍부한 화학식 I의 화합물을 포함한다.

이상에서 언급된 바와 같이, 제약상 허용가능한 산 부가염은 화학식 I의 화합물이 형성할 수 있는 치료적 활성 비독성 산 부가염 형태를 포함함을 의미한다. 이러한 제약상 허용가능한 산 부가염은 염기 형태를 그러한 적절한 산으로 처리함으로써 편리하게 수득될 수 있다. 적절한 산은 예를 들어 무기 산, 예컨대 할로겐화수소산, 예를 들어 염산 또는 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등의 산; 또는 유기 산, 예를 들어 아세트산, 프로판산, 히드록시아세트산, 락트산, 피루브산, 옥살산 (즉, 에탄디오익산), 말론산, 숙신산 (즉, 부탄-디오익산), 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 시클람산, 살리실산, p-아미노살리실산, 팜산 등의 산을 포함한다.

역으로 말하자면, 염 형태는 적절한 염기를 이용한 처리에 의해 유리 염기 형태로 전환될 수 있다.

화학식 I의 화합물은 비용매화된 형태 및 용매화된 형태 둘 모두로 존재할 수 있다. 본원에서 '용매화물'이라는 용어는 본 발명의 화합물 및 1가지 이상의 제약상 허용가능한 용매 분자, 예를 들어 물 또는 에탄올을 포함하는 분자 회합을 설명하기 위하여 사용된다. 본원에서 '수화물'이라는 용어는 상기 용매가 물일 때 사용된다.

흥미로운 화학식 I의 화합물은 하기 제한 중 하나 이상이 적용되는 화학식 I의 화합물이다:

a) R¹이 수소임; 또는

b) R¹이 C_1- ₄알킬, 모노- 또는 디(C_1-4알킬)아미노, 또는 헤테로시클릴¹임; 또는

c) R¹이 헤테로시클릴¹임; 또는

d) R²가 수소임; 또는

e) R²가 C_1- ₄알킬임; 또는

f) R³이 C_3- ₆시클로알킬임; 또는

g) R³이 C_1- ₄알킬, 모노- 또는 디(C_1-4알킬)아미노임; 또는

h) R³이 헤테로시클릴²임; 또는

i) R⁴가 수소임; 또는

j) 헤테로시클릴¹이 C_1- ₄알킬, 히드록시, 할로, 폴리할로C₁ _- ₄알킬, C_1- ₄알킬옥시카르보닐, 아미노, C₁ _- ₄알킬아미노카르보닐, 또는 C_1- ₄알킬술포닐로부터 선택되는 1개의 치환체로 임의로 치환되는 피페라지닐임; 또는

k) 헤테로시클릴¹이 C_1- ₄알킬, 히드록시, 할로, 폴리할로C₁ _- ₄알킬, C_1- ₄알킬옥시카르보닐, 아미노, C₁ _- ₄알킬아미노카르보닐, 또는 C_1- ₄알킬술포닐로부터 선택되는 1개의 치환체로 임의로 치환되는 모르폴리닐임; 또는

l) Het가 할로, C_1- ₄알킬, C_1- ₄알킬옥시, C_1- ₄알킬티오, 히드록시, 아미노, 모노- 또는 디(C_1-4알킬)아미노, 히드록시카르보닐, C_1- ₄알킬옥시카르보닐, C_1- ₄알킬술포닐아미노, 아미노카르보닐, 트리플루오로메틸, C_1- ₄알킬옥시카르보닐-아미노, 디(C_1-4알킬옥시카르보닐)아미노, C_1- ₄알킬술포닐아미노카르보닐, C_1- ₄알킬아미노카르보닐, C_1- ₄알킬옥시C₁ _- ₆알킬옥시카르보닐아미노, 디(C_1-4알킬)아미노술포닐아미노카르보닐, C_3- ₆시클로알킬술포닐아미노카르보닐, HO-NH-(C=NH)-; 각각 임의로 1개 또는 2개의 C_1- ₄알킬로 치환되는 옥사졸릴 또는 트리아졸릴로부터 각각 독립적으로 선택되는 1개, 2개 또는 3개의 치환체로 임의로 치환되는 퀴나졸리닐임.

제1 실시 양태에서, 본 발명은

R¹이 수소, C_1- ₄알킬, 모노- 또는 디(C_1-4알킬)아미노, 또는 헤테로시클릴¹이며;

R²가 수소 또는 C_1- ₄알킬이고;

R³이 C_3- ₆시클로알킬 또는 헤테로시클릴²이며;

R⁴는 수소이고;

헤테로시클릴¹은 피페라지닐 또는 모르폴리닐이며, 각각의 헤테로시클릴¹은 C_1-4알킬옥시카르보닐, C_1- ₄알킬아미노카르보닐, 또는 C_1- ₄알킬술포닐로부터 선택되는 1개의 치환체로 임의로 치환되고;

헤테로시클릴²는 아제티디닐, 또는 피롤리디닐이며, 각각의 헤테로시클릴²는히드록시 또는 아미노로부터 선택되는 1개의 치환체로 임의로 치환되고;

Het는 퀴나졸리닐, 피리도[2,3-d]피리미디닐, 티아졸로[5,4-d]-피리미디닐, 7H-피롤로[2,3-d]피리미디닐, 옥사졸로[5,4-d]피리미디닐, 또는 티에노[2,3-d]피리미디닐로부터 선택되며, 각각의 Het는 할로, C_1- ₄알킬, C_1- ₄알킬옥시, C_1- ₄알킬티오, 히드록시, 히드록시카르보닐, C_1- ₄알킬옥시카르보닐, C_1- ₄알킬술포닐아미노, 아미노카르보닐, 트리플루오로메틸, C_1- ₄알킬옥시카르보닐아미노, 디(C_1-4알킬옥시카르보닐)아미노, C_1- ₄알킬술포닐아미노카르보닐, C_1- ₄알킬아미노카르보닐, C_1- ₄알킬옥시C₁ _- ₆알킬옥시카르보닐아미노, 디(C_1-4알킬)아미노술포닐아미노카르보닐, C_3- ₆시클로알킬술포닐아미노카르보닐, HO-NH-(C=NH)-; 각각 임의로 1개 또는 2개의 C_1- ₄알킬로 치환된 옥사졸릴 또는 트리아졸릴로부터 각각 독립적으로 선택되는 1개, 2개 또는 3개의 치환체로 임의로 치환되는 화학식 I의 화합물 (이의 임의의 입체화학적 이성체 형태를 포함함) 또는 이의 제약상 허용가능한 산 부가염에 관한 것이다.

화학식 I의 화합물의 제1 군은 R¹이 헤테로시클릴¹이고, R²가 수소이고, R³이 헤테로시클릴²인 화학식 I의 화합물이다.

화학식 I의 화합물의 제2 군은 R¹이 수소이고, R²가 C_1- ₄알킬이고, R³이 헤테로시클릴²인 화학식 I의 화합물이다.

화학식 I의 화합물의 제3 군은 R¹이 수소이고, R²가 수소이고, R³이 헤테로시클릴²인 화학식 I의 화합물이다.

화학식 I의 화합물의 제4 군은 R¹이 C_1- ₄알킬이고, R²가 수소이고, R³이 헤테로시클릴²인 화학식 I의 화합물이다.

화학식 I의 화합물의 제5 군은 R¹이 수소이고, R²가 수소이고, R³이 C_1- ₄알킬인 화학식 I의 화합물이다.

화학식 I의 화합물의 제6 군은 R¹이 수소이고, R²가 수소이고, R³이 C_3- ₆시클로알킬인 화학식 I의 화합물이다.

화학식 I의 화합물의 제7 군은 Het가 퀴나졸리닐인 화학식 I의 화합물이다.

화학식 I의 화합물, 또는 그의 제약상 허용가능한 염은 유기 화학 분야에 공지된 합성 방법, 또는 당업자에게 친숙한 변형 및 유도체화를 이용하여 본원에 논의된 반응식에 따라 제조될 수 있다. 본원에서 사용되는 출발 재료는 구매가능하거나 본 기술 분야에 공지된 일상적인 방법, 예컨대 표준 참고 도서에 개시된 방법에 의해 제조될 수 있다. 바람직한 방법은 하기에 기술된 것을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

임의의 하기 합성 시퀀스 (sequence) 동안, 관련된 분자들 중 임의의 것 상의 민감성 또는 반응성 기를 보호하는 것이 필요하고/하거나 바람직할 수 있다. 이것은 당업자에게 잘 알려진 통상적인 보호기에 의해 달성될 수 있다.

달리 표시되지 않으면, 반응식에서 치환체는 상기와 같이 정의된다. 생성물의 단리 및 정제는 통상의 지식의 화학자에게 공지된 표준 절차에 의해 성취된다.

일반 반응식 1 내지 3은 본 발명의 화합물의 제조에 사용된 방법을 설명한다. 이러한 반응식에서 설명된 일반적인 방법은 본 발명의 추가의 화합물의 제조에 또한 이용될 수 있다.

출발 재료 I은 바람직하게는 (S) 입체화학 특성을 갖는 고리 질소에 인접한 탄소 원자 상의 카르복실 기를 갖는 보호된 (PG) 피페리딘이다. 이 피페리딘은 또한 다른 기로 치환될 수 있다. 피페리딘 고리 질소 상의 보호기는 바람직하게는 BOC 또는 CBZ이며, 문헌[Green and Wutts, protecting groups in Organic Synthesis 3^rd Edition]에 기술된 방법을 이용하여 합성 동안 도입되거나 제거될 수 있다. 반응식 1에서 N-보호된 환형 아미노복소환 I 상의 카르복실산 기가 이탈기에 의해 첫 번째로 활성화된다. 전형적인 이탈기는 알킬 에스테르 (예를 들어 메틸 또는 에틸 에스테르)이며, 이는 카르복실산을 비-수성 또는 저-수성 산성 조건 하에서 적절한 알코올로 처리함으로써 또는 염기, 예컨대 탄산세슘 등의 존재 하에 메틸 요오다이드로 처리함으로써 생성된다. 대안적으로, 산은 표준 펩티드 커플링 절차, 예를 들어 EDCI/HOBT, HATU, DCC 등을 이용하여 바인렙 (Weinreb) 아미드로서 활성화될 수 있다. 일단 산이 에스테르 또는 바인렙 아미드 II로서 활성화되면, 아세토니트릴 음이온의 부가가 수행된다. 음이온은 아세토니트릴 및 강염기, 예를 들어 리튬 또는 소듐 헥사메틸디실라지드 (LiHMDS) 또는 알킬 리튬 염기, 예를 들어 nBuLi로부터 생성되었으며, 에스테르 또는 바인렙 아미드와 반응시킬 때 시아노 케톤 III을 생성한다. 그 후 시아노 케톤과 히드라진 아세테이트 염의 반응은 아미노피라졸 중간체 IV를 생성한다. 이것은 다른 축합 반응을 통한 다른 측쇄를 갖는 이환식 복소환 VI의 형성에 있어서 핵심 중간체이다. 아미노 피라졸 IV와 말로네이트 V의 축합에 의해 이환식 유사체 VI이 생성된다. 그 후 이환식 유사체 VI를 승온 하에 순 POCl₃으로 처리하여 (일부의 경우에 유기 염기, 예컨대 디이소프로필에틸 아민 또는 트리에틸아민이 이 반응을 개선시킬 수 있음) 디클로라이드 VII을 생성한다. POCl₃ 조건 하에 산성 불안정 보호기, 예를 들어 BOC가 전형적으로 제거되지만, 이것이 부분적일 경우, 산, 예를 들어 디옥산 중 4 N HCl을 이용한 추가의 처리를 이용하여 잔존 BOC 보호 물질을 제거할 수 있다. 다른 보호기가 이용되면, 문헌[Green and Wutts, Protecting groups in Organic Synthesis 3^rd Edition]에 기술된 절차를 이용하여 보호기를 제거할 수 있다. 디클로라이드 VII 상의 브리지헤드 (bridgehead) 질소에 인접한 클로라이드의 대체를 전형적으로 실온에서 친핵체 VIII을 이용하여 행하여 화합물 IX를 제공할 수 있다. 전형적인 친핵체 VIII은 트리에틸아민과 같은 염기의 부재 또는 존재 하에 반응할 수 있는 아민이다. 그 후, 제2의 덜 반응성인 클로라이드가 전형적으로 50℃ 초과의 승온에서 대체된다. 이러한 친핵성 아민 대체의 결과는 구조식 XI의 화합물이다 (반응식 1).

[반응식 1]

화합물 XIII는 본원에 개시된 실시 양태에 따라 아미노 기를 갖는 화합물 XI, 및 복소환식 할라이드 화합물 XII로부터 합성될 수 있다. 반응은 염기 및 8족 내지 10족 전이 금속 촉매의 존재 하에 수행될 수 있다. N-복소환식 아민 화합물을 생성하기 위한 복소환식 할라이드 화합물과 아민 사이의 반응의 일례가 반응식 2에 제시되어 있을 수 있다. 간략하게는, 복소환식 할라이드 XII 화합물을 염기 및 킬레이팅 리간드 (LL)를 포함하는 8족 내지 10족 전이 금속 (M) 착물의 존재 하에 아민 화합물 XI과 반응시켜 N-아릴 아민 화합물을 형성한다. 본원에 개시된 실시 양태에 따른 전이 금속 촉매는 8족 내지 10족 전이 금속 착물이다. 특정 실시 양태에서, 8족 내지 10족 전이 금속은 팔라듐, 백금, 및 니켈 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 8족 내지 10족 전이 금속은 팔라듐이다.

본 발명의 공정에서 사용되는 복소환식 화합물은 하기 화학식 XII의 임의의 복소환식 화합물일 수 있다:

[화학식 XII]

화학식 XII의 화합물에서의 바람직한 복소환식 기:

화학식 XII에서, X는 임의의 할라이드 원자 (F, Cl, Br, I), 또는 본 기술 분야에 공지된 임의의 황-함유 이탈기 (예를 들어, 트리플레이트, 술포네이트, 토실레이트 등)일 수 있다. 클로라이드가 본 발명의 공정에서 특히 바람직하다.

[반응식 2]

승온에서 산 (아세트산)의 존재 하에서의 베타-케토 에스테르 VIX (예를 들어 2-메틸아세토아세테이트)를 이용한 아미노피라졸 IV의 대안적인 축합은 피라조-피리미디논 스캐폴드 (scaffold) XV를 초래한다. 그 후 상기 스캐폴드 XV를 승온 하에 순 POCl₃으로 처리하여 (일부의 경우에 장애 염기, 예컨대 디이소프로필에틸 아민이 이 반응을 개선시킬 수 있음) 디클로라이드 XVI를 생성한다. POCl₃ 조건 하에 산성 불안정 보호기, 예를 들어 BOC가 전형적으로 제거되지만, 이것이 부분적일 경우, 산, 예를 들어 디옥산 중 4 N HCl을 이용한 추가의 처리를 이용하여 잔존 BOC 보호 물질을 제거할 수 있다. 다른 보호기가 이용되면, 문헌[Green and Wutts, Protecting groups in Organic Synthesis 3^rd Edition]에 기술된 절차를 이용하여 보호기를 제거할 수 있다. 디클로라이드 XVI 상의 브리지헤드 질소에 인접한 클로라이드의 대체를 전형적으로 실온에서 친핵체 VIII을 이용하여 행하여 타입 XVII의 화합물을 제공할 수 있다. 전형적인 친핵체는 트리에틸아민과 같은 염기의 부재 또는 존재 하에 반응할 수 있는 아민이며, 이는 그 후, 반응식 3의 최종 화합물 XVIII을 생성하도록 유리 아민 XVII가 반응식 2에 설명된 바와 같이 다양한 복소환에 의해 알킬화되게 한다.

[반응식 3]

아미노 피라졸 IV의 추가의 대안적인 환화는 염기, 예를 들어 탄산세슘 및 열의 존재 하에 아크릴레이트, 예를 들어 화합물 XIX로 처리하여 화합물 XX를 생성하는 것을 포함한다. 이탈기로서의 그 OH를 활성화하기 위한 화합물 XX의 추가의 처리는 POCl₃ 및 열을 이용하여 클로라이드 XXI로 전환시키는 것을 포함할 수 있다. 산성 보호기, 예를 들어 BOC는 POCl₃ 조건 하에 제거될 수 있거나, 그렇지 않으면, 문헌[Green and Wurtts, Protecting groups in Organic Synthesis 3^rd Edition]에 약술된 절차에 따라 임의의 보호기가 제거될 수 있다. 클로라이드를 친핵체 X로 대체하여 화합물 XXII를 생성할 수 있다. 마지막으로, 그 후 유리 NH 화합물 XXII를 반응식 2에서 이전에 설명된 바와 같이 알킬화하여 타입 XXIII의 화합물을 제공한다 (반응식 4).

[반응식 4]

화학식 I의 화합물은 또한 본 기술 분야에 공지된 기 변환 반응에 따라 화학식 I의 화합물을 서로 전환시킴으로써 제조될 수 있다.

출발 재료 및 일부의 중간체는 공지된 화합물이며 구매가능하거나, 일반적으로 본 기술 분야에 공지된 통상적인 반응 절차에 따라 제조될 수 있다.

이상에서 설명된 공정에서 제조된 화학식 I의 화합물은 본 기술 분야에 공지된 분할 절차에 따라 서로로부터 분리될 수 있는 거울상 이성체들의 라세미 혼합물의 형태로 합성될 수 있다. 라세미 형태로 수득된 화학식 I의 화합물은 적합한 키랄 산과의 반응에 의해 상응하는 부분입체 이성체 염 형태로 전환될 수 있다. 상기 부분입체 이성체 염 형태는 후속적으로, 예를 들어 선별적 또는 분별적 결정화에 의해 분리되며, 거울상 이성체가 알칼리에 의해 그로부터 유리된다. 화학식 I의 화합물의 거울상 이성체 형태를 분리하는 대안적인 방식은 키랄 고정상을 이용한 액체 크로마토그래피를 포함한다. 상기 순수 입체화학적 이성체 형태는 또한 적절한 출발 재료의 상응하는 순수 입체화학적 이성체 형태로부터 유도될 수 있되, 단, 반응은 입체특이적으로 일어난다. 바람직하게는, 특정 입체이성체가 요망되는 경우, 상기 화합물은 입체특이적 제조 방법에 의해 합성된다. 이러한 방법은 유리하게는 거울상 이성체로서 순수한 (enantiomerically pure) 출발 재료를 이용한다.

화학식 I의 화합물은 항바이러스 특성을 나타낸다. 본 발명의 화합물 및 방법을 이용하여 치료가능한 바이러스 감염은 오르토- 및 파라믹소바이러스 (paramyxovirus), 그리고 특히 인간 및 소 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV)에 의해 야기되는 감염을 포함한다. 게다가, 다수의 본 발명의 화합물은 RSV의 돌연변이된 주 (strain)에 대하여 활성을 갖는다. 부가적으로, 많은 본 발명의 화합물이 유리한 약동학적 프로파일을 나타내며, 생체이용성 면에서 매력적인 특성 (허용가능한 반감기, AUC 및 피크 값을 포함하며, 불리한 현상, 예컨대 불충분한 빠른 개시 및 조직 보유성이 결여됨)을 갖는다.

본 발명의 화합물의 RSV에 대한 시험관 내 항바이러스 활성은 [발명을 실시하기 위한 구체적인 내용]의 실험 파트에 설명된 바와 같은 테스트에서 테스트되었으며, 이는 또한 바이러스 수율 (virus yield) 감소 분석법에서 입증될 수 있다. 본 발명의 화합물의 RSV에 대한 생체 내 항바이러스 활성은 문헌[Wyde et al., Antiviral Research, 38, p. 31-42(1998)]에 기술된 바와 같이 코튼 래트 (cotton rat)를 이용하여 테스트 모델에서 입증될 수 있다.

부가적으로 본 발명은 1가지 이상의 제약상 허용가능한 담체 및 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물을 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본 발명의 제약 조성물의 제조를 위하여, 활성 성분으로서의 염기 또는 산 부가염 형태의 특정한 화합물의 유효량을 1가지 이상의 제약상 허용가능한 담체와 친밀한 혼합물 형태로 조합하는데, 상기 담체는 투여에 요망되는 제제의 형태에 따라 매우 다양한 형태를 취할 수 있다. 바람직하게는 이러한 제약 조성물은 바람직하게는 경구 투여, 직장 투여, 경피 투여 또는 비경구 주사에 적합한 단위 투여 형태 (unitary dosage form)로 존재한다.

예를 들어, 경구 투여 형태의 조성물의 제조에 있어서, 경구용 액체 제제, 예컨대 현탁액, 시럽, 엘릭시르 및 용액의 경우에 일반적인 액체 제약 담체 중 임의의 것, 예를 들어 물, 글리콜, 오일, 알코올 등; 또는 산제, 알약, 캡슐 및 정제의 경우에 고체 제약 담체, 예컨대 전분, 당, 카올린, 활택제, 결합제, 붕해제 등이 이용될 수 있다. 정제 및 캡슐이 그의 용이한 투여 때문에 가장 유리한 경구 투여 단위 형태를 대표하며, 이 경우, 고체 제약 담체가 명확히 이용된다. 비경구 주사 조성물에 있어서, 제약 담체는 주로 살균수를 포함하지만, 활성 성분의 용해도를 향상시키기 위하여 다른 성분이 포함될 수 있다. 주사 용액 (injectable solution)은 예를 들어 식염수, 글루코스 용액 또는 이 2가지의 혼합물을 포함하는 제약 담체의 이용에 의해 제조될 수 있다. 또한 주사 현탁액이 적절한 액체 담체, 현탁제 등의 이용에 의해 제조될 수 있다. 경피 투여에 적합한 조성물에서, 제약 담체는 피부에 대하여 유의한 유해 효과를 야기하지 않는 작은 비율의 적합한 첨가제와 임의로 조합된, 침투 향상제 및/또는 적합한 습윤제를 임의로 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 활성 성분의 피부에의 투여를 용이하게 하기 위하여 및/또는 요망되는 조성물의 제조에 도움이 되기 위하여 선택될 수 있다. 이러한 국소 조성물은 다양한 방식으로, 예를 들어 경피 패치, 스폿-온 (spon-on) 또는 연고로서 투여될 수 있다. 화학식 I의 화합물의 부가염은, 상응하는 염기 형태에 비하여 그의 증가된 수용해도로 인하여, 수성 조성물의 제조에서 명확하게 더 적합하다.

투여의 용이함 및 투여량의 균일성을 위하여 본 발명의 제약 조성물을 투여 단위 형태 (dosage unit form)로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "투여 단위 형태"는 단위 투약형 (unitary dosage)으로서 적합한 물리적으로 별개인 단위를 나타내며, 각각의 단위는 요구되는 제약 담체와 결부되어 요망되는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 활성 성분을 포함한다. 그러한 투여 단위 형태의 예로는 정제 (분할선이 있는 (scored) 또는 코팅된 정제를 포함함), 캡슐, 알약, 산제 패킷 (packet), 웨이퍼 (wafer), 주사 용액 또는 현탁액, 티스푼풀 (teaspoonful), 테이블스푼풀 (tablespoonful) 등과, 이들의 분리형 멀티플 (segregated multiple)이 있다.

경구 투여를 위하여, 본 발명의 제약 조성물은 고체 투약 형태, 예를 들어 정제 (삼킬 수 있는 형태 및 저작가능한 형태 둘 모두), 캡슐 또는 젤라틴 캡슐 (gelcap)의 형태를 취할 수 있으며, 이는 제약상 허용가능한 부형제 및 담체, 예컨대 결합제 (예를 들어, 예비젤라틴화 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필메틸셀룰로오스 등), 충전제 (예를 들어 락토스, 미정질 셀룰로오스, 인산칼슘 등), 활택제 (예를 들어 스테아르산마그네슘, 활석, 실리카 등), 붕해제 (예를 들어 감자 전분, 소듐 스타치 글리콜레이트 등), 습윤제 (예를 들어 소듐 라우릴술페이트) 등을 이용한 통상적인 수단에 의해 제조된다. 그러한 정제는 또한 본 기술 분야에 잘 알려진 방법에 의해 코팅될 수 있다.

경구 투여용 액체 제제는 예를 들어 용액, 시럽 또는 현탁액의 형태를 취할 수 있거나, 이것은 사용 전에 물 및/또는 또 다른 적합한 액체 담체와의 혼합을 위한 건조 생성물로서 제형화될 수 있다. 그러한 액체 제제는, 임의로 다른 제약상 허용가능한 첨가제, 예컨대 현탁제 (예를 들어 소르비톨 시럽, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스 또는 수화 식용 지방), 유화제 (예를 들어 레시틴 또는 아카시아), 비-수성 담체 (예를 들어 아몬드유, 유성 에스테르 또는 에틸 알코올), 감미제, 착향제, 차폐제 및 방부제 (예를 들어 메틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트 또는 소르브산)를 이용하여 통상적인 수단에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 조성물에서 유용한 제약상 허용가능한 감미제는 바람직하게는 1가지 이상의 강한 감미제, 예컨대 아스파탐, 아세술팜 포타슘, 소듐 시클라메이트, 알리탐, 디히드로칼콘 감미제, 모넬린, 스테비오사이드 수크랄로스 (4,1',6'-트리-클로로-4,1',6'-트리데옥시갈락토수크로스), 또는 바람직하게는 사카린, 소듐 또는 칼슘 사카린과, 임의로, 1가지 이상의 벌크 감미제, 예컨대 소르비톨, 만니톨, 프룩토스, 수크로스, 말토스, 이소말트 (isomalt), 글루코스, 수소화 글루코스 시럽, 자일리톨, 캐라멜 또는 꿀을 포함한다. 강한 감미제는 통상적으로 낮은 농도로 사용된다. 예를 들어, 소듐 사카린의 경우, 상기 농도는 최종 제형의 약 0.04% 내지 0.1% (중량/부피)의 범위일 수 있다. 벌크 감미제는 더 큰 농도로 효과적으로 사용될 수 있으며, 이는 약 10% 내지 약 35%, 바람직하게는 약 10% 내지 15% (중량/부피)의 범위이다.

저-투여량 제형에서 쓴 맛 성분을 차폐할 수 있는 제약상 허용가능한 착향제는 바람직하게는 과일향, 예컨대 체리향, 라즈베리향, 블랙 커런트 (black currant)향, 또는 딸기향이다. 2가지 착향제의 조합이 매우 우수한 결과를 생성할 수 있다. 고-투여량 제형에 있어서, 더 강한 제약상 허용가능한 착향제, 예컨대 캐러멜 초콜릿 (Caramel Chocolate), 민트 쿨 (Mint Cool), 판타지 (Fantasy) 등이 요구될 수 있다. 각각의 착향제는 최종 조성물에 약 0.05% 내지 1% (중량/부피)의 범위의 농도로 존재할 수 있다. 상기 강한 착향제들의 조합이 유리하게 사용된다. 바람직하게는 제형화 환경 하에서 맛 및/또는 색의 어떠한 변화 또는 손실도 겪지 않는 착향제가 사용된다.

화학식 I의 화합물은 예를 들어 볼루스 주사 또는 연속 정맥내 주입에 의한, 주사, 편리하게는 정맥내, 근육내 또는 피하 주사에 의한 비경구 투여용으로 제형화될 수 있다. 주사용 제형은 첨가된 방부제를 포함하는, 단위 투여 형태, 예를 들어 앰풀 또는 다회 용량 용기로 제공될 수 있다. 이것은 유성 또는 수성 비히클 중 현탁액, 용액 또는 에멀젼과 같은 형태를 취할 수 있으며, 등장제 (isotonizing agent), 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형화제를 포함할 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 사용 전에 적합한 비히클, 예를 들어 발열원 무함유 살균수와 혼합하기 위하여 분말 형태로 존재할 수 있다.

또한 화학식 I의 화합물은 예를 들어 코코아 버터 및/또는 다른 글리세라이드와 같은 통상적인 좌약 베이스를 포함하는, 좌약 또는 정체 관장제와 같은 직장용 조성물 형태로 제형화될 수 있다.

일반적으로, 항바이러스적 일일 유효량은 체중 1 kg당 0.01 mg 내지 500 mg, 더 바람직하게는 체중 1 kg당 0.1 mg 내지 50 mg인 것이 고려된다. 요구되는 용량을 그 날 전체에 걸쳐 적절한 간격으로 2회, 3회, 4회의 또는 이보다 더 많은 하위용량 (sub-dose)으로 투여하는 것이 적절할 수 있다. 상기 하위용량은 예를 들어 단위 투여 형태당 1 내지 1000 mg, 특히 5 내지 200 mg의 활성 성분을 포함하는 단위 투여 형태로서 제형화될 수 있다.

정확한 투여량 및 투여 빈도는 사용되는 화학식 I의 특정 화합물, 치료되는 특정 병태, 치료되는 병태의 중증도, 특정 환자의 연령, 체중, 성별, 장애의 정도 및 전반적인 신체 상태와, 개체가 복약 중일 수 있는 다른 약에 따라 달라지며, 이는 당업자에게 잘 알려져 있는 바와 같다. 더욱이, 상기 일일 유효량은 치료되는 대상체의 응답에 따라 및/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사의 평가에 따라 낮추어지거나 증가될 수 있음이 명백하다. 따라서 이상에서 언급된 일일 유효량 범위는 단지 지침이다.

또한, 또 다른 항바이러스제와 화학식 I의 화합물의 조합물을 의약으로 사용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한, 항바이러스 치료에서 동시적으로, 별도로 또는 순차적으로 사용하기 위한 병용 제제로서의, (a) 화학식 I의 화합물, 및 (b) 또 다른 항바이러스 화합물을 포함하는 생성물에 관한 것이다. 상이한 약물들은 제약상 허용가능한 담체와 함께 단일 제제로 조합될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 RSV 감염의 치료 또는 예방을 위하여 인터페론-베타 또는 종양 괴사 인자-알파와 조합될 수 있다.

이하에서 본 발명을 하기의 비제한적 실시예를 참고로 하여 예시한다.

실험 파트

약어

NMR

다수의 화합물에 있어서, ¹H NMR 스펙트럼을, 용매로서 클로로포름-d (중수소화 클로로포름, CDCl₃) 또는 DMSO-d ₆ (중수소화 DMSO, 디메틸-d6 술폭시드)을 사용하여, 400 MHz에서 작동하는 브루커 (Bruker) DPX-400 분광계에서 또는 360 MHz에서 작동하는 브루커 DPX-360에서 기록하였다. 화학적 이동 (δ)을 내부 표준물로서 사용한 테트라메틸실란 (TMS)에 대하여 백만분율 (parts per million; ppm)로 기록한다.

선광도:

선광도를 퍼킨 엘머 (Perkin Elmer) 341 편광계를 사용하여 측정하였다. [α]_D ²⁰은 20℃의 온도에서 D-라인 (line)의 나트륨의 파장 (589 nm)의 광을 이용하여 측정한 선광도를 나타낸다. 셀 경로 길이는 1 dm이다. 실제 값 뒤에 선광도 측정에 사용한 용액의 농도 및 용매가 언급되어 있다.

실험 파트

A. 중간체의 화학물질 및 화학식 I의 화합물

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(6-클로로퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P1의 합성

[반응식 5]

단계 1: (S)-1- tert - 부틸2 - 메틸 피페리딘-1,2- 디카르복실레이트 2의 합성

탄산칼륨 (108.50 g, 785.09 mmol)을 DMF (900 ml) 중 (S)-1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-2-카르복실산 1 (90 g, 392.55 mmol)의 용액에 첨가하였다. 요오도메탄 (83.58 g, 588.82 mmol)을 상기 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 에틸 아세테이트를 상기 반응 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고 진공 하에 농축시켜 중간체 2 (90 g, 수율: 85%)를 제공하였다.

m/z = 244 (M+H)⁺.

단계 2: tert - 부틸2 -(2- 시아노아세틸 )피페리딘-1- 카르복실레이트 3의 합성

-78℃에서 건조 THF (40 ml) 중 CH₃CN (1.30 ml, 24.66 mmol)의 용액에 LiHMDS (22.61 ml, 22.61 mmol)를 적가하였다. 상기 용액을 -78℃에서 20분 동안 교반시켰다. 건조 THF (10 ml) 중 중간체 2 (5 g, 22.55 mmol)의 용액을 상기 혼합물에 적가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반시켰다. 그 후, 상기 혼합물을 -78℃까지 냉각시키고, THF (50　ml) 중 HOAc (5 ml, 76.67 mmol)의 용액을 상기 혼합물에 적가하였다. 상기 용액을 실온까지 가온하였다. 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔사를 에틸 아세테이트에 용해시키고, 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 농축시켜 조 중간체 3 (4 g, 수율: 69%)을 제공하였다.

m/z = 253 (M+H)⁺.

단계 3: tert - 부틸2 -(5-아미노-1 H - 피라졸 -3-일)피페리딘-1- 카르복실레이트 4

히드라진 수화물 (100 ml) 및 에탄올 (500 ml)을 중간체 3 (80 g, 317.70 mmol)에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔사를 에틸 아세테이트에 용해시키고, 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고 진공 하에 농축시켜 중간체 4 (80 g, 수율: 76%)를 제공하였다.

m/z = 267 (M+H)⁺.

단계 4: tert - 부틸2 -(7-히드록시-5-옥소-4,5- 디히드로피라졸로 [1,5-a]-피리미딘-2-일)피페리딘-1-카르복실레이트 5의 합성

중간체 4 (70 g, 262.82 mmol)를 메탄올 (700 ml)에 용해시키고, 그 후 디메틸 말로네이트 (85.19 g, 394.23 mmol)를 상기 용액에 첨가하고, 이어서 CH₃OH (25%, 85.19 g, 394.23 mmol) 중 CH₃ONa의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 하룻밤 가열하여 환류시켰다. 용매를 진공 하에 제거하였다. 물을 잔사에 첨가하고, pH를 아세트산의 첨가에 의해 6 내지 7까지 조정하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고 진공 하에 농축시켜 중간체 5 (85　g, 수율: 63%)를 제공하고, 이를 다음 반응에 직접적으로 이용하였다.

m/z = 335 (M+H)⁺.

단계 5: 5 ,7- 디클로로 -2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 6의 합성

중간체 5 (25 g, 74.77 mmol)를 순 POCl₃ (100 ml)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃까지 3시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시켜 중간체 6 (15 g, 수율: 63%)을 생성하고, 이를 다음 반응에 직접적으로 이용하였다.

m/z = 272 (M+H)⁺.

단계 6: 4 -(5- 클로로 -2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7-일)-모르폴린 7의 합성

중간체 6 (35 g, 129.08 mmol)을 CH₃CN (100 ml) 및 H₂O (100 ml)에 첨가하였다. 상기 혼합물에 NaHCO₃ (21.69 g, 258.16 mmol) 및 모르폴린 (11.25 g, 129.08 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 그 후 용매를 증발시키고, 디클로로메탄을 첨가하고, 혼합물을 여과시키고, 여과액을 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (용출제: 1:0으로부터 0:1까지의 디클로로메탄: 에틸 아세테이트) 중간체 7 (25 g, 수율: 51%)을 생성하였다.

m/z = 322 (M+H)⁺.

단계 7 : 4 -(5-( 아제티딘 -1-일)-2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7-일)-모르폴린 8의 합성

아제티딘 히드로클로라이드 (29.07 g, 310.75 mmol) 및 TEA (62.89 g, 621.49 mmol)를 에탄올 (1000 ml) 중 중간체 7 (20 g, 62.15 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃까지 2시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시켰다. 생성된 조 물질을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (용출제: 1/10의 메탄올/에틸 아세테이트). 수집된 분획물을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 CH₃CN (200 ml)에 용해시켰다. K₂CO₃ (100 g, 723.54 mmol)을 상기 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 생성된 혼합물을 여과시키고, 진공에서 용매가 제거되도록 증발시켰다. 잔사를 동결건조시켰다. 중간체 8을 단리하였다 (6 g, 수율: 27%).

m/z = 343 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.52-1.66 (m, 4 H) 1.90 (m, 1 H) 1.97 (m, 1 H) 2.37-2.40 (m, 2 H) 2.79 (m, 1 H) 3.31 (m, 1 H) 3.55-3.58 (m, 4 H) 3.81 (m, 1 H) 3.93-3.95(m, 4 H) 4.09-4.13(m, 4 H) 5.09 (s, 1 H) 6.04 (s, 1 H).

단계 8: 4 ,6- 디클로로퀴나졸린 9의 합성

6- 클로로퀴나졸린 -4-올 9-b의 합성

2-아미노-5-클로로벤조산 9-a (5 g, 29 mmol)를 포름아미드 (30 ml)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃까지 3시간 동안 가열하였다. 고형물을 여과에 의해 수집하였다. 고형물을 에탄올로 수회 세척하여 중간체 9-b (5　g, 86%)를 생성하였다. m/z = 181 (M+H)⁺.

4,6- 디클로로퀴나졸린 9의 합성

중간체 9-b (3 g, 16.61 mmol)를 CHCl₃ (30 ml)에 용해시켰다. 옥살릴 클로라이드 (2.8 g, 33.22 mmol) 및 DMF (0.1 ml)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 100℃까지 3시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시켜 중간체 9 (2.5 g, 수율: 68%)를 얻었다.

m/z = 200 (M+H)⁺.

단계 9: 4 -(5-( 아제티딘 -1-일)-2-(1-(6- 클로로퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P1의 합성

중간체 8 TFA 염 (400 mg, 0.87 mmol)을 메톡시에탄올 (20　mL)에 용해시키고, 중간체 9 (235 mg, 1.18 mmol) 및 디이소프로필 에틸아민 (0.6 mL, 3.5　mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 빙수 용액에 붓고, 15분 동안 교반시켰다. 고형물을 연속적으로 여과 제거하고, 물로 세척하고, 디클로로메탄에 용해시키고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 생성된 용액을 농축시키고, 고형물을 오븐에서 건조시켜 누르스름한 고체 화합물 P1 (380 mg, 85%)을 생성하였다.

m/z = 506 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.66 - 1.86 (m, 5 H), 1.99 - 2.12 (m, 1 H), 2.25 - 2.37 (m, 3 H), 3.47 - 3.58 (m, 6 H), 3.63 - 3.75 (m, 5 H), 3.96 - 4.07 (m, 5 H), 4.21 (d, J=13.4 Hz, 1 H), 5.25 (s, 1 H), 5.81 - 5.86 (m, 1 H), 5.89 (s, 1 H), 7.72 (dd, J=9.0, 2.2 Hz, 1 H), 7.78 (d, J=9.0 Hz, 1 H), 8.07 (d, J=2.2 Hz, 1 H), 8.57 (s, 1 H)

(S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(6-클로로퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P2 및 (R)-4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(6-클로로퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P3의 합성

단계 1: 4 -(5- 클로로 -2-(1-(6- 클로로퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)- 피라졸 로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 10의 합성

DMF (20 ml) 중 중간체 7 (1 g, 3.11 mmol) 및 중간체 9 (0.62 g, 3.11　mmol)의 용액에 K₂CO₃ (2.15 g, 15.54 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (용출제: 10:1로부터 0:1까지의 석유 에테르: 에틸 아세테이트) 중간체 10 (450 mg, 수율: 27%)을 생성하였다.

m/z = 485 (M+H)⁺.

단계 2: (S)-4-(5-( 아제티딘 -1-일)-2- (1-(6-클로로퀴나졸린-4-일) 피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P2 및 (R)-4-(5-( 아제티딘 -1-일)-2-(1-(6-클로로퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P3의 합성

아제티딘 히드로클로라이드 (0.39 g, 4.13 mmol) 및 TEA (0.84 g, 8.26 mmol)를 에탄올 (50 ml) 중 중간체 10 (0.4 g, 0.83 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 용액을 80℃까지 2시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시켰다. 잔사를 SFC에 의해 정제하였다. 요망되는 분획물을 수집하고, 증발시켰다. 잔사를 동결건조시켜 화합물 P2 (44.10 mg, 수율: 10%) 및 화합물 P3(43.30 mg, 수율: 10%)을 생성하였다.

m/z = 506 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.79-1.83 (m, 4 H) 2.01-2.06 (m, 1 H) 2.37-2.49 (m, 3 H) 3.45-3.49 (m, 3 H) 3.55-3.63 (m, 2 H) 3.80-3.90 (m, 4 H) 4.15 (m, 4 H) 4.25 (m, 1 H) 5.10 (s, 1 H) 5.90 (s, 1 H) 6.10 (s, 1 H) 7.61(dd, J1= 9.2 Hz, J2= 2.4 Hz, 1 H) 7.80(d, J=9.2 Hz, 2 H) 8.03 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 8.68 (s, 1 H).

P2 : [α]_D ²⁰ = -280.83° (589 nm, c = 0.24% (w/v), DMF, 20℃)

P3 : [α]_D ²⁰ = +270° (589 nm, c = 0.24% (w/v), DMF, 20℃)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(6-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P4의 합성

단계 1: 4 -(5- 클로로 -2-(1-(6- 메틸퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)- 피라졸 로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 11의 합성

6- 메틸퀴나졸린 -4-올 12-b의 합성

2-아미노-5-메틸벤조산 12-a (5 g, 33.08 mmol)를 포름아미드 (30　ml)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃까지 6시간 동안 가열하였다. 고형물을 여과에 의해 수집하고, 에탄올로 수 회 세척하여 중간체 12-b (4.5 g, 76　%)를 제공하였다.

m/z = 161 (M+H)⁺.

4- 클로로 -6- 메틸퀴나졸린 12의 합성

중간체 12-b (2.1 g, 13.11 mmol)를 CHCl₃ (30 ml)에 용해시켰다. 옥살릴 클로라이드 (1.97 g, 23.26 mmol) 및 DMF (0.1 ml)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 100℃까지 3시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시켜 중간체 12 (1.5 g, 58%)를 얻었다.

m/z = 179 (M+H)⁺.

CH₃CN (10 ml) 중 중간체 7 (0.5 g, 1.55 mmol) 및 중간체 12 (0.28 g, 1.55 mmol)의 용액에 K₂CO₃ (1.07 g, 7.77 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 72시간 동안 교반시켰다. 용매를 증발시키고, 잔사를 CH₂Cl₂에 용해시켰다. 생성된 혼합물을 여과시키고, 여과액을 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (용출제: 0:1로부터 1:1까지의 석유 에테르: 에틸 아세테이트) 중간체 11 (350 mg, 수율: 44%)을 생성하였다.

m/z = 464 (M+H)⁺.

단계 2: 4 -(5- 클로로 -2-(1-(6- 메틸퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)- 피라졸 로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P4의 합성

아제티딘 히드로클로라이드 (0.30 g, 3.24 mmol) 및 TEA (0.66 g, 6.47 mmol)를 에탄올 (10 ml) 중 중간체 11 (0.3 g, 0.65 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 용액을 80℃까지 2시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시켰다. 잔사를 HPLC에 의해 정제하였다. 요망되는 분획물을 수집하고, NaHCO₃ 용액을 이용하여 pH=8 내지 9까지 중화시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 동결건조시켜 화합물 P4 (111.00 mg, 35%)를 생성하였다.

m/z = 485 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.67-1.79 (m, 4 H) 2.17 (m, 1 H) 2.42 (m, 6 H) 3.43-3.45 (m, 3 H) 3.60-3.61 (m, 2 H) 3.81 (m, 4 H) 4.11 (m, 4 H) 4.23 (m, 1 H) 5.09 (s, 1 H) 5.89 (s, 1 H) 6.15 (s, 1 H) 7.52(d, J=9.2 Hz,1 H) 7.76-7.78(m, 2 H) 8.66 (s, 1　H).

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(2-클로로-6-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P5의 합성

에탄올 (20 ml) 중 중간체 8 (500 mg, 1.460 mmol, 1 당량), 구매가능한 2,4-디클로로-6-메틸퀴나졸린 13 (622 mg, 2.920 mmol, 2 당량) 및 Et₃N (443 mg, 4.38 mmol, 3 당량)의 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 침전물을 여과시키고, 수집하였다. 고형물을 냉각 에탄올 (2x3 ml)로 세척하여 화합물 P5 (540 mg, 69%)를 생성하였다.

m/z = 520 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.66 - 1.88 (m, 4 H) 1.97 - 2.13 (m, 1 H) 2.32 - 2.54 (m, 6 H) 3.38 - 3.52 (m, 3 H) 3.55 - 3.68 (m, 2 H) 3.86 (m, 4 H) 4.13 (t, J=7.53 Hz, 4 H) 4.34 (d, J=12.80 Hz, 1 H) 5.10 (s, 1 H) 5.96 (br. s., 1 H) 6.13 (s, 1 H) 7.51 (dd, J1=8.53, J2=1.51 Hz, 1 H) 7.69 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 7.74 (s, 1 H).

N-(4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-6-메틸퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P6의 합성

아세트산팔라듐 (8.6 mg, 0.038 mmol, 0.1 당량)을 디옥산 (6 ml) 중 화합물 P5 (200 mg, 0.385 mmol, 1 당량), 메탄술폰아미드(73 mg, 0.77 mmol, 2 당량), 잔트포스 (22 mg, 0.038 mmol, 0.1 당량) 및 Cs₂CO₃ (250 mg, 0.77 mmol, 2 당량)의 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 마이크로웨이브 (microwave) 하에 90℃에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과시키고, 에틸 아세테이트로 세척하여 표제 화합물 P6 (98 mg, 42.34%)을 생성하였다.

m/z = 578 (M+H)⁺.

¹HNMR (400 MHz, CDCl₃): δ ppm 1.89 (m, 4H) 1.90 (m, 1H) 2.31 (s, 3 H) 2.40 (m, 2 H) 2.51 (m, 1H) 3.20 (s, 3H) 3.50 (m, 3H) 3.68 (m, 1H) 3.89 (m, 4H) 4.13 (m, 4H) 4.62 (br, 1H) 5.13 (s, 1H) 6.12 (s, 1H) 7.41-7.43 (d, J= 8.4 Hz, 1H) 7.46-7.49 (d, J = 8.8 Hz, 1H) 7.66 (s, 1H).

(R)-N-(4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-6-메틸퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P7 및 (S)-N-(4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-6-메틸퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P8

정제를 예비 (Prep) SFC (고정상: 키랄팩 디아셀 (Chiralpak Diacel) AS 20 x 250 mm, 이동상: CO2, 0.2% iPrNH2를 포함하는 EtOH)를 통하여 수행하여 둘 모두의 관련 거울상 이성체를 제공하였다:

m/z = 578 (M+H)⁺.

N-(4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P9의 합성

2,4-디클로로-5-메틸퀴나졸린 14의 합성

단계 1: 5 - 메틸퀴나졸린 -2,4( 1H,3H )- 디온 14-b의 합성

2-아미노-6-메틸벤조산 14-a (10 g, 66.15 mmol) 및 우레아 (39.73 g, 661.54　mmol)를 160℃까지 가열하고, 6시간 동안 교반시키고, 반응 혼합물을 100℃까지 냉각시키고, 40 ml의 H₂O를 첨가하였다. 수득된 현탁물을 10분 동안 교반되게 두고, 실온까지 냉각시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 0.2 M 수산화나트륨 수용액 (100 ml)에 용해시켰다. 상기 용액을 100℃까지 5분 동안 가열하여, 백색 침전물이 형성되게 하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시키고, 용액을 진한 HCl로 pH=7까지 중화시키고, 백색 고형물을 여과 제거하였다. 수득된 고형물을 물로 세척하고, 고온 에틸 아세테이트 (100 ml)로 미분화하고, 실온까지 냉각시켰다. 여과액을 수집하고, 진공 하에 건조시켜 중간체 14-b (6.4 g, 수율: 49%)를 생성하였다.

m/z = 177 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.64 (s, 3 H) 6.93 (d, J=7.48 Hz, 1 H) 7.01 (d, J=8.14 Hz, 1 H) 7.44 (t, J=7.81 Hz, 1 H) 10.99 (s, 1 H) 11.03 (br. s., 1 H)

단계 2 : 2 ,4- 디클로로 -5- 메틸퀴나졸린 14의 합성

POCl₃ (5 ml) 중 디에틸아닐린 (2.267 ml, 14.19　mmol), 중간체 14-b (1 g, 5.68 mmol)의 혼합물을 2시간 동안 환류시켰다. 상기 혼합물을 파쇄된 얼음 위로 조심스럽게 부었다. 상기 혼합물을 포화 NaHCO₃으로 pH=7까지 중화시켰다. 생성된 혼합물을 CH₂Cl₂ (2x15 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공 하에 농축시켜 중간체 14 (950 mg, 수율: 68%)를 생성하였다.

m/z = 214 (M+H)⁺.

단계 3: 4 -(5-( 아제티딘 -1-일)-2- (1-(2-클로로-6-메틸퀴나졸린-4-일) -피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 15의 합성

EtOH (20 ml) 중 중간체 8 (500 mg, 1.46 mmol), 중간체 14 (933.13 mg, 4.38　mmol) 및 트리에틸 아민 (443.21 mg, 4.38 mmol)의 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 침전물을 여과시키고, 수집하였다. 고형물을 냉각 에탄올 (2x5 ml)로 세척하여 요망되는 화합물 15 (400 mg, 48%)를 생성하였다.

m/z = 520 (M+H)⁺.

단계 4: N-(4-(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-7- 모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P9의 합성

디옥산 (6 ml) 중 화합물 15 (200 mg, 0.385 mmol), 메탄술폰아미드 (73.24 mg, 0.77 mmol), 잔트포스 (23.15 mg, 0.04 mmol) 및 Cs₂CO₃ (250.88 mg, 0.77 mmol)의 혼합물에 Pd(OAc)₂ (9 mg, 0.04 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 마이크로웨이브 하에 120℃에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 여과시켰다. 침전물을 MeOH로 처리하고, 여과시켰다. 합한 여과액을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 정제하고, 성물을 포함하는 분획물의 pH를 포화 NaHCO₃으로 7 내지 8까지 조정하였다. 유기 용매를 진공 하에 증발시켰다. 수성 농축물을 CH₂Cl₂ (30 ml)로 추출하였다. 유기 층을 진공 하에 농축시켜 화합물 P9 (105 mg, 수율: 45%)를 생성하였다.

m/z = 578 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.55-1.85 (m, 4 H) 2.10-2.62 (m, 5 H) 2.69-2.85 (m, 5 H) 3.35 (s, 3 H) 3.59-3.86 (m, 8 H) 4.07-4.17 (m, 4 H) 5.21 (s, 1 H) 5.75 (s, 1 H) 7.17-7.23 (m, 2 H) 7.55-7.58 (m,1 H).

N-(4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2--일)피페리딘-1-일)퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P10의 합성

단계 1: 4 -(5-( 아제티딘 -1-일)-2-(1-(2- 클로로퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 16의 합성

에탄올 중 화합물 8 (250 mg, 0.73 mmol, 1 당량), 2,4-디클로로퀴나졸린 (290 mg, 1.46 mmol, 2 당량) 및 트리에틸아민 (221 mg, 2.19 mmol, 3 당량)의 혼합물을 90℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응물을 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (석유 에테르 중 50% EtOAc)에 의해 정제하여 화합물 16을 75% 순도로 수득하였다. EtOAc 및 석유 에테르로부터의 결정화 후, 표제 중간체 16을 백색 고형물로서 수득하였다 (160 mg, 43.42%).

m/z = 506 (M+H)⁺.

¹HNMR (CDCl₃ 400 MHz) δ ppm 1.72-1.84 (m, 4H) 2.03 (m, 1H) 2.38-2.50 (m, 3H) 3.47-3.52 (m, 3H) 3.61-3.68 (m, 2H) 3.84-3.93 (m, 4H) 4.12-4.15 (t, J = 7.4Hz, 4H) 4.41-4.45 (d, J=12.80 Hz, 1H) 5.11(s, 1H) 5.96 (br.s, 1H) 6.15 (s, 1H) 7.29-7.33 (m, 1H) 7.66-7.70 (m, 1H) 7.78-7.80 (d, J = 8.5Hz, 1H) 7.98-8.00 (d, J = 8.3Hz, 1H).

단계 2: N-(4-(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-7- 모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)피페리딘-1-일)퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P10의 합성

1,4-디옥산 (5 mL) 중 중간체 16 (60 mg, 119 umol, 1 당량), 메탄술폰아미드 (34 mg, 357 umol, 3 당량), 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸잔텐 (14 mg, 0.2 당량), 아세트산팔라듐(II) (5.3 mg, 0.2 당량) 및 탄산세슘 (116 mg, 357 umol, 3 당량)을 N₂ 하에 110℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물로 희석시키고, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 농축시켰다. 잔사를 HPLC에 의해 정제하고, 분획물을 동결건조시켰다. 고형물을 SAX-SPE로 처리하여 화합물 P10을 황색 고형물로서 수득하였다 (24 mg, 34%)

m/z = 564 (M+H)⁺.

¹HNMR (400 MHz, CD₃OD,): δ ppm 1.89 (br, 4H) 2.22 (m, 1H) 2.58 (m, 3H) 3.08 (s, 3H) 3.59 (br, 1H) 3.89 (d, 4H) 3.91 (m, 4H) 4.38 (t, J =7.5 Hz, 4H) 4.62 (br, 1H) 5.27 (s, 1H) 6.29 (s, 1H) 6.33 (br, 1H) 7.39 (t, J = 7.3 Hz, 1H) 7.49 (d, J= 8.5 Hz, 1H) 7.79 (t, J = 7.3 Hz, 1H) 8.01 (d, J = 8 Hz, 1H).

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-6-메틸피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-6-메틸퀴나졸린 P11의 합성

단계 1: tert - 부틸2 -(6- 메틸 -5-옥소-4,5- 디히드로피라졸로 [1,5-a]-피리미딘-2-일)피페리딘-1-카르복실레이트 18의 합성

중간체 4 (5.00 g, 18.08 mmol)를 건조 DMF (112 ml)에 용해시키고, 그 후 Cs₂CO₃ (9.00 g, 27.62 mmol) 및 (E)-에틸 3-에톡시-2-메틸아크릴레이트 17 (4.30 g, 27.18 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 130℃에서 3일 동안 가열하였다. DMF를 증발시키고, 진한 갈색의 오일을 빙수 내로 부었다. 실온까지 가온한 후, 생성물을 EtOAc (3회)로 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시키고, 생성된 잔사를 0%로부터 시작하여 10%까지의 구배의 MeOH 및 디클로로메탄으로 용출시키면서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 관련 분획물의 증발 후, 중간체 18을 황색 고형물로서 수득하였다 (1100 mg, 18%).

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.35 - 1.71 (m, 13 H) 1.73 - 1.88 (m, 1 H) 2.09 (d, J=1.10 Hz, 3 H) 2.32 (d, J=13.64 Hz, 1 H) 2.70 - 2.92 (m, 1 H) 3.93 - 4.13 (m, 1 H) 5.35 - 5.54 (m, 1 H) 5.71 (s, 1 H) 7.99 (s, 1 H) 10.56 - 10.76 (m, 1 H)

m/z = 333.20 (M+H)⁺

단계 2: 5 - 클로로 -6- 메틸 -2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 19의 합성

실온에서 POCl₃ (6.15 ml, 66.19 mmol)을 중간체 18 (1100 mg, 3.31 mmol)에 첨가하고, 그 후 상기 혼합물을 100℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, POCl₃을 증발시켰다. 잔사를 톨루엔과 함께 3회 동시 증발시켜 갈색 폼 중간체 19를 얻었으며, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

m/z = 250.96 (M+H)⁺

단계 3: 4 -(6- 메틸 -2-(1-(6- 메틸퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)- 피라졸 로[1,5-a]피리미딘-5-일)모르폴린 20의 합성

조 중간체 19 (150 mg, 0.30 mmol) 및 4-클로로-6-메틸퀴나졸린 12 (107 mg, 0.60 mmol)를 2-메톡시에탄올 (3.79 ml)에 용해시키고, 그 후 디-이소프로필에틸 아민 (619 μl, 3.59 mmol)을 첨가하였다. 상기 용액을 100℃에서 하룻밤 가열하였다. 가열을 중단하고, 상기 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물에 모르폴린 (1.035 ml, 11.97 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 가열하였다. 그 후 이것을 증발 건조시켰다. 생성된 잔사를 2.5% (MeOH/NH₃) 및 디클로로메탄으로 용출시키면서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 수득된 오일을 디-이소프로필 에테르에서 재결정화하였다. 형성된 황백색 결정을 여과하여 중간체 20 (52 mg, 38%)을 얻었다.

m/z = 444.25 (M+H)⁺

MP = 180.64℃

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.57 - 1.80 (m, 4 H) 1.92 - 2.08 (m, 1 H) 2.24 (s, 3 H) 2.34 - 2.46 (m, 4 H) 3.20 - 3.28 (m, 4 H) 3.45 (br. t, J=11.20, 11.20 Hz, 1 H) 3.67 - 3.83 (m, 4 H) 4.21 (br. d, J=13.90 Hz, 1 H) 5.85 (br. s., 1 H) 6.20 (s, 1 H) 7.64 (br. d, J=8.40 Hz, 1 H) 7.71 (d, J=8.58 Hz, 1 H) 7.83 (br. s, 1 H) 8.56 (s, 1 H) 8.71 (s, 1　H)

단계 4: 4 -(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-6- 메틸피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)-피페리딘-1-일)-6-메틸퀴나졸린 P11의 합성

EtOH (10 ml) 중 중간체 20 (145 mg, 0.37 mmol), 아제티딘 히드로클로라이드 (69 mg, 0.74 mmol) 및 디-이소프로필에틸 에테르 (191 μl, 1.11 mmol)의 용액을 65℃에서 3.5시간 동안 가열하였다. 모든 용매를 증발시키고, 황색 습윤 고형물을 아세토니트릴에서 환류시켰다. 잔존 불용성 고형물을 고온에서 여과 제거하고, 여과액을 실온까지 냉각시켰다. 상기 혼합물을 하룻밤 교반시켰다. 결정을 여과 제거하고, 아세토니트릴로 세척하였다. 생성물을 다시 MeOH 및 아세토니트릴에서 재결정화하였다. 백색 결정을 여과시키고, 아세토니트릴로 세척하여 표제 생성물 P11 (72 mg, 47%)을 얻었다.

m/z = 414.12 (M+H)⁺

MP = 205.49℃

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆)δ ppm 1.58 - 1.79 (m, 4 H) 1.88 - 2.03 (m, 1 H) 2.15 (d, J=0.88 Hz, 3 H) 2.27 (quin, J=7.59 Hz, 2 H) 2.32 - 2.40 (m, 1 H) 2.42 (s, 3 H) 3.37 - 3.49 (m, 1 H) 4.15 - 4.28 (m, 5 H) 5.77 - 5.84 (m, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 7.63 (dd, J=8.58, 1.76 Hz, 1 H) 7.71 (d, J=8.58 Hz, 1 H) 7.82 (br. s, 1 H) 8.40 - 8.45 (m, 1 H) 8.56 (s, 1 H)

1-(6-메틸-2-(1-(6-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로-[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-올 P12의 합성

중간체 20 및 아제티딘-3-올을 출발 재료로 사용하여 화합물 P11과 동일한 방식으로 화합물 P12를 제조하였다.

m/z = 430.12 (M+H)⁺

MP = 233.08℃

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.53 - 1.80 (m, 4 H) 1.87 - 2.03 (m, 1 H) 2.14 (s, 3 H) 2.31 - 2.40 (m, 1 H) 2.42 (s, 3 H) 3.38 - 3.50 (m, 1 H) 3.93 (dd, J=9.13, 4.73 Hz, 2 H) 4.16 - 4.28 (m, 1 H) 4.32 - 4.44 (m, 2 H) 4.46 - 4.59 (m, 1 H) 5.61 - 5.71 (m, 1 H) 5.76 - 5.84 (m, 1 H) 5.98 (s, 1 H) 7.58 - 7.67 (m, 1 H) 7.67 - 7.75 (m, 1 H) 7.83 (br. s, 1 H) 8.45 (br. s, 1 H) 8.56 (s, 1 H)

1-(6-메틸-2-(1-(6-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로-[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-아민 P13의 합성

단계 1: tert - 부틸1 -(6- 메틸 -2- (1-(6-메틸퀴나졸린-4-일) 피페리딘-2-일) 피라 졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-일카르바메이트 21의 합성

중간체 20 및 tert-부틸아제티딘-3-일카르바메이트를 출발 재료로 사용하여 화합물 P11과 동일한 방식으로 중간체 21을 제조하였다.

m/z = 529.25 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.40 (s, 9 H) 1.67 - 1.89 (m, 4 H) 1.98 - 2.11 (m, 1 H) 2.15 (d, J=0.88 Hz, 3 H) 2.41 - 2.46 (m, 4 H) 3.60 - 3.74 (m, 1 H) 4.02 - 4.11 (m, 2 H) 4.27 - 4.37 (m, 1 H) 4.37 - 4.46 (m, 2 H) 4.61 - 4.75 (m, 1 H) 6.12 (s, 1 H) 6.22 - 6.35 (m, 1 H) 7.10 - 7.30 (m, 1 H) 7.80 - 7.88 (m, 2 H) 7.97 (br. s, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 8.74 (s, 1 H)

단계 2: 1 -(6- 메틸 -2-(1-(6- 메틸퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)- 피라졸 로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-아민 P13의 합성

디옥산 (6 ml, 24 mmol) 중 HCl의 4 M 용액 및 중간체 21 (215 mg, 0.39 mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 디옥산을 증발시키고, 조 물질을 0.5%로부터 시작하여 10%까지의 구배의 (MeOH/NH₃) 및 디클로로메탄으로 용출시키면서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매의 증발 후 표제 화합물 P13을 백색 고형물로서 수득하였다 (18 mg, 10%).

m/z = 429.20 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.57 - 1.75 (m, 4 H) 1.88 - 2.03 (m, 1 H) 2.11 - 2.20 (m, 3 H) 2.31 - 2.40 (m, 1 H) 2.42 (s, 3 H) 3.37 - 3.49 (m, 1 H) 3.70 - 3.89 (m, 3 H) 4.16 - 4.27 (m, 1 H) 4.29 - 4.39 (m, 2 H) 5.76 - 5.84 (m, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 7.63 (dd, J=8.58, 1.76 Hz, 1 H) 7.71 (d, J=8.36 Hz, 1 H) 7.82 (br. s, 1 H) 8.42 - 8.46 (m, 1 H) 8.55 (s, 1 H).

2-메톡시에틸 4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]-피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-6-모르폴리노퀴나졸린-2-일카르바메이트 P14의 합성

메틸 (4-클로로-6-모르폴리노퀴나졸린-2-일)카르바메이트 22의 합성

단계 1: 에틸 5- 모르폴리노 -2-니트로벤조에이트 22-a의 합성

에틸 5-플루오로-2-니트로벤조에이트 (5 g, 23.46 mmol)를 DMF (150 ml)에 용해시키고, 그 후 모르폴린 (6.13 g, 70.37 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 용매를 감압 하에 제거하고, 조 물질을 디클로로메탄에 재용해시키고, 1 M HCl 용액으로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발 건조시켜 중간체 22-a를 생성하였다.

단계 2: 에틸 2-아미노-5- 모르폴리노벤조에이트 22-b의 합성

에틸 5-모르폴리노-2-니트로벤조에이트 22-a (6.574 g, 23.46 mmol)를 EtOH (150 ml)와 THF (250 ml)의 혼합물에 용해시키고, 그 후 Pd/C (10%) (2.496 g, 2.35 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 수소 분위기 하에 2시간 동안 두었다. 반응 혼합물을 디칼라이트 (dicalite)에서 여과시키고, 여과액을 증발 건조시켜 원하는 중간체 22-b를 갈색 고형물로서 생성하였다 (6.24 g, 정량적).

단계 3: 메틸 4-히드록시-6- 모르폴리노퀴나졸린 -2- 일카르바메이트 22-c의 합성

에틸 2-아미노-5-모르폴리노벤조에이트 22-b (6.24 g, 24.93 mmol), 1,3-비스(메톡시-카르보닐)-2-메틸-2-티오슈도우레아 (5.91 g, 28.67 mmol) 및 아세트산 (7.14 ml, 124.65 mmol)을 100 ml의 MeOH에 용해시키고, 75℃에서 하룻밤 교반시켰다. 가외의 아세트산 (1 ml, 17.47 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 75℃에서 7일 동안 교반시켰다. pH를 아세트산을 이용하여 5까지 맞추었다. 휘발성 물질을 증발 건조시켰다. 그 후 잔사를 15 ml의 MeOH에 재용해시키고, 100 ml의 물을 첨가하였다. 침전물을 여과 제거하고, 디에틸에테르로 세척하여 표제 중간체 22-c를 갈색 고형물로서 생성하였다 (5.28 g, 70%).

단계 4: 메틸 4- 클로로 -6- 모르폴리노퀴나졸린 -2- 일카르바메이트 22의 합성

메틸 (4-히드록시-6-모르폴리노퀴나졸린-2-일)카르바메이트 22-c (1.00 g, 3.29 mmol)를 건조 아세토니트릴 (12.38 ml)에 현탁시키고, 그 후 실온에서 POCl₃ (1.15 ml, 12.4 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 4.5시간 동안 환류시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 증발 건조시켰다. 잔사를 톨루엔과 함께 동시 증발시켰다. 조 물질을 DCM에 용해시키고, 이것을 물 중 포화 탄산수소나트륨 용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 디-이소프로필에테르에 미분화하였다. 고형물을 여과 제거하여 표제 중간체 22를 진한 갈색의 고형물로 얻었다.

m/z = 323.15 (M+H)⁺

단계 5: 2 - 메톡시에틸 4-(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-7- 모르폴리노피라졸로 -[1,5-a]피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-6-모르폴리노퀴나졸린-2-일카르바메이트 P14의 합성

2-메톡시에탄올 (1.79 ml) 중 중간체 8 (80 mg, 0.23 mmol), 메틸 (4-클로로-6-모르폴리노-퀴나졸린-2-일)카르바메이트 22 (152 mg, 0.23 mmol) 및 디이소프로필 에틸 아민 (117　μl, 0.68 mmol)의 용액을 100℃에서 하룻밤 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔사를 0.5%로부터 시작하여 10%까지의 구배의 DCM 중 MeOH로 용출시키면서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매의 증발 후 오일을 수득하고, 이를 디-이소프로필 에테르에 미분화하고, 현탁물을 5분 동안 초음파 처리하였다. 고형물을 여과시키고, 약간의 디-이소프로필 에테르로 세척하여 표제 화합물 P14를 갈색 분말로 얻었다 (38 mg, 24%).

m/z = 673.34 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.58 - 1.80 (m, 4 H) 1.93 - 2.06 (m, 1 H) 2.24 - 2.40 (m, 3 H) 2.95 - 3.11 (m, 4 H) 3.28 (s, 3 H) 3.30 - 3.34 (m, 1 H) 3.42 - 3.59 (m, 6 H) 3.64 - 3.75 (m, 8 H) 4.01 (t, J=7.37 Hz, 4 H) 4.14 - 4.22 (m, 2 H) 4.22 - 4.32 (m, 1　H) 5.33 (s, 1 H) 5.70 - 5.81 (m, 1 H) 6.00 (s, 1 H) 7.17 (d, J=2.20 Hz, 1 H) 7.51 (d, J=9.24 Hz, 1 H) 7.56 (dd, J=9.68, 2.64 Hz, 1 H) 9.83 (br. s., 1 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(2-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P15의 합성

4-클로로-2-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 23의 합성

불활성 분위기 하에 2-메틸-3H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4(7H)-온 23-a (10.54 g, 70.6 mmol)를 톨루엔 (20 mL)에 용해시켰다. DIPEA (24 mL, 141 mmol, 2 당량) 및 POCl₃ (19.5 mL, 212 mmol, 3 당량)을 70℃에서 적가하고, 그 후 상기 혼합물을 106℃까지 가열하였다. 16시간 후, 용액을 진공에서 농축시키고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 포화 NaHCO₃ 용액으로 세척하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 진공에서 농축시켜 회색 오일을 생성하고, 이를 물/헵탄에 현탁시켜 백색 고체 중간체 23 (5.9 g, 50%)을 생성하였다.

밀봉 가압 튜브에서 이소프로판올 (3 mL) 중 중간체 8 (100 mg, 0.28 mmol)의 용액에 중간체 23 (47 mg, 0.28 mmol, 1 당량) 및 Et₃N (0.118 mL, 0.84 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 상기 용액을 140℃까지 가열하고, 16시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 용액을 진공에서 농축시키고, 예비 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 P15 (36 mg, 27%)를 생성하였다.

m/z = 474 (M+H)⁺

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.52 - 1.58 (m, 1 H) 1.58 - 1.69 (m, 2 H) 1.73 (d, J=11.74 Hz, 1 H) 1.91 (br. s., 1 H) 2.24 - 2.32 (m, 2 H) 2.32 - 2.38 (m, 1 H) 2.36 (s, 3 H) 3.27 (t, J=12.03 Hz, 1 H) 3.47 (br. s., 4 H) 3.58 - 3.68 (m, 4 H) 3.97 (t, J=7.34 Hz, 4 H) 4.61 (d, J=11.74 Hz, 1 H) 5.23 (s, 1 H) 5.71 (s, 1 H) 6.21 (br. s., 1 H) 6.42 (br. s., 1 H) 6.98 (br. s., 1 H) 11.17 (br. s., 1 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(2-에톡시피리도[2,3-d]피리미딘-4-일)-피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P16의 합성

단계 1 : 4 -(5-( 아제티딘 -1-일)-2- (1-(2-클로로피리도[2,3-d] 피리미딘-4-일)-피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 25의 합성

중간체 8 (200 mg, 0.584 mmol)을 에탄올 (10 mL)에 용해시키고, 그 후 2,4-디클로로피리도[2,3-d]피리미딘 24 (117 mg, 0.58 mmol) 및 트리에틸아민 (177 mg, 1.75 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 용매를 증발시켰다. 이 조 생성물을 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (용출제: 1/10의 메탄올/ 에틸 아세테이트). 생성된 잔사를 동결건조시켜 백색 고형물 (78.3 mg, 27%)을 생성하였다.

단계 2: 4 -(5-( 아제티딘 -1-일)-2- (1- (2- 에톡시피리도[2,3-d]피리미딘 -4-일)-피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P16의 합성

EtOH (10 mL) 중 중간체 25 (67 mg, 0.13 mmol)의 용액에 100　μL의 HCl.iPrOH (6 N)를 첨가하고, 용액을 40℃까지 16시간 동안 가열하였다. 생성된 용액을 진공에서 농축시키고, 0%로부터 시작하여 10%까지의 구배의 DCM 중 MeOH로 용출시키면서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 증발 후 표제 화합물 P16 (20 mg, 25%)을 수득하였다.

m/z = 516 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.33 (t, J=7.04 Hz, 3 H) 1.71 (br. s., 4 H) 1.92 - 2.11 (m, 1 H) 2.23 - 2.39 (m, 3 H) 3.40 - 3.58 (m, 5 H) 3.61 - 3.74 (m, 4 H) 4.01 (t, J=7.37 Hz, 4 H) 4.20 (br. d, J=13.90 Hz, 1 H) 4.40 (q, J=7.00 Hz, 2 H) 5.28 (s, 1 H) 5.79 - 5.88 (m, 1 H) 5.91 (s, 1 H) 7.19 (dd, J=8.58, 4.40 Hz, 1 H) 8.38 (dd, J=8.14, 1.54 Hz, 1 H) 8.76 - 8.82 (m, 1 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P17의 합성

4-클로로-5-메틸퀴나졸린 26의 합성

단계 1: 5 - 메틸퀴나졸린 -4-올 26-b의 합성

2-아미노-6-메틸벤조산 26-a (4g, 26 mmol)를 10 mL의 포름아미드에 용해시키고, 상기 용액을 120℃까지 가열하였다. 4시간 후, 물을 첨가하고, 고형물을 여과 제거하였다. 고형물을 추가로 물로 세척하고, 오븐에서 건조시켜 중간체 26-b (3.25 g, 77%)를 생성하였다.

m/z = 160 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.77 (s, 3 H) 7.25 (d, J=7.48 Hz, 1 H) 7.46 (d, J=7.70 Hz, 1 H) 7.62 (t, J=7.90 Hz, 1 H) 7.98 (s, 1 H) 11.89 (br. s, 1 H)

단계 2: 4 - 클로로 -5- 메틸퀴나졸린 26의 합성

아세토니트릴 (2 mL) 중 중간체 26-b (100 mg, 0.62 mmol)의 용액에 DIPEA (0.23 mL, 1.88 mmol, 3 당량)를 첨가하였다. 생성된 용액을 70℃까지 가열하고, 10분 동안 교반시켰다. 그 후 POCl₃을 상기 용액에 적가하였다. 16시간 후, 상기 용액을 진공에서 농축시켜 중간체 26을 생성하였다.

밀봉 튜브에서 CH₃CN (10 mL) 중 중간체 8 (230 mg, 0.67 mmol)의 용액에 DIPEA (2.3 mL, 13.4 mmol, 20 당량) 및 4-클로로-5-메틸퀴나졸린 26 (120 mg, 0.67 mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 상기 용액을 120℃에서 가열하고, 16시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 용액을 진공에서 농축시키고, 조 물질을 예비 HPLC에 의해 정제하여 화합물 P17 (28 mg, 9%)을 생성하였다.

m/z = 485 (M+H)⁺

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.54 - 1.86 (m, 4 H) 2.08 - 2.13 (m, 2 H) 2.28 - 2.33 (m, 2 H) 2.86 (s, 3 H) 3.28 - 3.31 (m, 2 H) 3.39 - 3.44 (m, 2 H) 3.49 - 3.54 (m, 2 H) 3.62 - 3.69 (m, 4 H) 4.00 (t, J=7.41 Hz, 4 H) 5.31 (s, 1 H) 5.75 (t, J=4.40 Hz, 1 H) 5.97 (s, 1 H) 7.37 (d, J=6.90 Hz, 1 H) 7.60 - 7.63 (m, 1 H) 7.67 - 7.71 (m, 1 H) 8.53 (s, 1 H)

(R)-4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P18 및 (S)-4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P19의 합성

정제를 예비 SFC (고정상: 키랄팩 디아셀 AS 20 x 250 mm, 이동상: CO2, 0.2% iPrNH2를 포함하는 EtOH)를 통하여 수행하여 둘 모두의 관련 거울상 이성체를 제공하였다:

P18 : [α]_D ²⁰= +210.64° (589 nm, c = 0.3855% (w/v), DMF, 20℃)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(2-메틸티아졸로[5,4-d]피리미딘-7-일)-피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P20의 합성

7-클로로-2-메틸티아졸로[5,4-d]피리미딘 27의 합성

단계 1: 5 -아미노-6- 클로로피리미딘 -4- 티올 27-b의 합성

물 (6 mL) 중 술파닐소듐 수화물 (2.48 g, 33.54 mmol)의 용액에 MeOH (50 mL) 및 4,6-디클로로피리미딘-5-아민 27-a (5 g, 30.49 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 환류에서 1시간 동안, 그리고 주위 온도에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 증발시키고, 잔사를 진공에서 건조시켜 중간체 27-b (3.63 g, 74%)를 생성하였다.

m/z = 161 (M+H)⁺

단계 2: 7 - 클로로 -2- 메틸티아졸로[5,4-d]피리미딘 27의 합성

트리에틸오르토아세테이트 (150 mL) 중 5-아미노-6-클로로-피리미딘-4-티올 27-b (4.7 g, 29.1 mmol)의 용액을 150℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 그 후 증발 건조시켰다. 잔사를 약간의 아세토니트릴을 포함하는 디이소프로필에테르에 미분화하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, 진공에서 건조시켜 중간체 27 (0.9 g, 4.85 mmol)을 생성하였다.

중간체 8 (378.9 mg, 1 mmol), 7-클로로-2-메틸-티아졸로[5,4-d]-피리미딘 27 (185.6 mg, 1 mmol), 휘니그 염기 (Hunig's base) (0.7 mL, 4.22 mmol) 및 2-메톡시에탄올 (10 mL)의 용액을 100℃에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 증발시키고, 잔사를 디클로로메탄에 용해시키고, 물로 2회 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 구배로서 100/0에서 95/5까지의 디클로로메탄/메탄올을 이용하여 실리카에서 정제하였다. 상응하는 분획물을 증발시켰다. 잔사를 디이소프로필에테르 및 10% 아세토니트릴에서 결정화하였다. 백색 결정을 여과에 의해 수집하고, 진공에서 건조시켜 화합물 P20 (163 mg, 33%)을 생성하였다.

m/z = 491.62 (M+H)⁺

mp: 229.8℃

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.48 - 1.83 (m, 2 H), 1.91 - 2.06 (m, 1 H), 2.29 (quin, J=7.5 Hz, 1 H), 2.39 (d, J=13.7 Hz, 1 H), 2.72 (s, 3 H), 3.21 (m, J=2.4 Hz, 1 H), 3.42 - 3.54 (m, 4 H), 3.56 - 3.70 (m, 4 H), 3.98 (t, J=7.5 Hz, 4 H), 5.16 - 5.30 (m, 2 H), 5.73 (s, 1 H), 6.98 (br. s., 1 H), 8.32 (s, 1 H)

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-메틸피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-6-메틸퀴나졸린 P21의 합성

단계 1: 7 - 메틸 -2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 -5(4H)-온 29의 합성

구매가능한 (Z)-에틸 3-에톡시부트-2-에노에이트 28 (33 g, 208.60 mmol) 및 Cs₂CO₃(54 g, 165.74 mmol)을 DMF (180 ml) 중 중간체 4 (30 g, 112.64 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 110℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 에틸 아세테이트 (100 ml)로 세척하였다. 여과액을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트 (300 ml)에 용해시키고, 염수 (2 x 100 ml)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 여과액을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 이소프로필 에테르 (200 ml)로 세척하고, 그 후 건조시켜 (진공, 45℃, 1시간) 중간체 29 (25 g, 65.37%)를 생성하였다.

m/z = 233 (M+H)⁺

단계 2: 5 - 클로로 -7- 메틸 -2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 30의 합성

POCl₃(377.5 g) 중 중간체 29 (22.5 g, 67.69 mmol)의 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 아세토니트릴 (200 ml)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 NH₃ (메탄올 중 7 M)을 이용하여 pH = 8까지 중화시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (용출제: 10/1의 디클로로메탄/메탄올) 중간체 30 (13.97 g, 80.47%)을 생성하였다.

m/z = 251 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.52 - 1.73 (m, 4 H) 1.76 - 1.86 (m, 1 H) 1.99 - 2.02 (m, 1 H) 2.70 (s, 3 H) 2.83-2.88 (m, 1 H) 3.15-3.18 (d, J=12.0 Hz, 1 H) 4.14-4.17 (dd, J1=10.8, J2=2.8 Hz, 1 H) 6.81 (s, 1 H) 7.14 (s, 1 H)

단계 3: 4 -(2-(5- 클로로 -7- 메틸피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)피페리딘-1-일)-6-메틸퀴나졸린 31의 합성

메톡시에탄올 (5 mL) 중 중간체 30 (501.5 mg, 2 mmol) 및 4-클로로-6-메틸-퀴나졸린 12 (535.9 mg, 3 mmol)의 용액을 120℃에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 증발시키고, 잔사를 디클로로메탄에 용해시키고, 물로 2회 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 98/2의 디클로로메탄/메탄올-NH3을 이용하여 실리카에서 정제하였다. 상응하는 분획물을 증발시키고, 잔사를 10% 아세토니트릴을 포함하는 디-이소프로필에테르에서 결정화하였다. 녹색을 띤 침전물을 여과 제거하고, 진공에서 건조시켜 중간체 31 (645 mg, 82%)을 생성하였다.

m/z = 392.9 (M+H)⁺

mp: 154.2℃

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.62 - 1.81 (m, 2 H), 2.45 (s, 3 H), 2.69 (s, 2 H), 4.16 (br. s., 1 H), 5.95 (br. s., 1 H), 6.60 (s, 1 H), 7.00 (s, 1 H), 7.63 (d, J=1.6 Hz, 1 H), 7.66 - 7.79 (m, 1 H), 7.86 (s, 1 H), 8.55 (s, 1 H)

중간체 31 (196.45 mg, 0.5 mmol), 아제티딘 히드로클로라이드 (93.56　mg, 1 mmol), 휘니그 염기 (0.26 mL, 1.5 mmol) 및 에탄올 (5 mL)의 용액을 주말에 걸쳐 60℃에서 교반시켰다. 상기 혼합물을 증발시키고, 잔사를 물에 미분화하고, 1시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 아세토니트릴에서 재결정화하였다. 백색 결정을 여과에 의해 수집하고, 진공에서 건조시켜 화합물 P21 (175 mg, 84%)을 생성하였다.

m/z = 413.5 (M+H)⁺

mp: 192.43℃

¹H NMR (360 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.58 - 1.78 (m, 4 H), 1.90 - 2.05 (m, 1 H), 2.25 - 2.39 (m, 3 H), 2.43 (s, 3 H), 2.54 (s, 3 H), 4.03 (t, J=7.5 Hz, 4 H), 5.80 (br. s., 1 H), 6.00 (s, 1 H), 6.12 (d, J=1.1 Hz, 1 H), 7.65 (d, J=1.8 Hz, 1 H), 7.68 - 7.74 (m, 1 H), 7.89 (s, 1 H), 8.57 (s, 1 H)

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-6-메틸-7-(피페리딘-1-일)피라졸로[1,5-a]-피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-6-메틸퀴나졸린 P22의 합성

단계 1: tert - 부틸2 -(7-히드록시-6- 메틸 -5-옥소-4,5- 디히드로피라졸로 -[1,5-a]-피리미딘-2-일)피페리딘-1-카르복실레이트 33의 합성

신선하게 제조한 소듐 메탄올레이트 (50 ml, 93.87 mmol)를 메탄올 (50 ml) 중 중간체 4 (5 g, 18.77 mmol) 및 디에틸 2-메틸말로네이트 32 (3.93 g, 22.53 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 용액을 15시간 동안 환류시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 물을 잔사에 첨가하고, 용액을 아세트산의 첨가에 의해 pH = 4 내지 5까지 조정하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3x300 ml)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수 (2x100 ml)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 진공 하에 농축시켜 조 중간체 33 (8.5 g, 수율: 91%)을 제공하였다.

m/z = 349 (M+H)⁺

단계 2: 5 ,7- 디클로로 -6- 메틸 -2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 34

0℃에서 삼염화인 (30 ml)을 중간체 33 (6.5 g, 18.66 mmol)에 첨가하였다. 상기 혼합물을 100℃에서 15시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 CH₃CN (30 ml)에 용해시켰다. 상기 용액을 암모니아 메탄올 용액의 첨가에 의해 pH=7까지 조정하였다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (용출제: 20/1의 디클로로메탄/메탄올 (0.5% 암모니아 메탄올 용액)). 요망되는 분획물을 수집하고, 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 고형물을 진공 하에 건조시켜 중간체 34 (1.12 g, 21%)를 생성하였다.

m/z = 286 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.22-1.25 (m, 1 H) 1.65-1.68 (m, 2 H) 2.04 - 2.08 (m, 1 H) 2.24 - 2.28 (m, 2 H) 2.53 (s, 3 H) 3.08 (br. s., 1 H) 3.57 (br. s., 1 H) 3.69 - 3.80 (m, 1 H) 4.48 (br. s., 1 H) 7.21 (s, 1 H).

단계 3: 5 - 클로로 -6- 메틸 -7-(피페리딘-1-일)-2-(피페리딘-2-일) 피라졸로 -[1,5-a]피리미딘 35의 합성

에탄올 (25 mL) 중 중간체 34 (1120 mg, 3.93 mmol), 모르폴린 (377 mg, 4.32 mmol), 휘니그 염기 (1.35 mL, 7.85 mmol)의 용액을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 증발시키고, 잔사를 약 50%의 아세토니트릴을 포함하는 디이소프로필-에테르에서 결정화하였다. 결정을 여과에 의해 수집하고, 진공에서 건조시켜 중간체 35 (1060 mg, 80%)를 생성하였다.

m/z = 335.8 (M+H)⁺

단계 4: 4 -(2-(5- 클로로 -6- 메틸 -7- (피페리딘-1-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)-피페리딘-1-일)-6-메틸퀴나졸린 36

중간체 35(1060 mg, 3.16 mmol), 4-클로로-6-메틸-퀴나졸린 12 (845.7 mg, 4.73 mmol), 휘니그 염기 (1.1 mL, 6.32 mmol) 및 2-메톡시에탄올 (20 mL)의 용액을 100℃에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 증발시키고, 잔사를 물에 녹이고, 디클로로메탄으로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 연속적으로 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 98/2의 디클로로메탄/메탄올을 용출제로 이용하여 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하였다. 상응하는 분획물을 증발시켜 중간체 36 (1400 mg, 92%)을 생성하였다.

단계 5: 4 -(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-6- 메틸 -7-(피페리딘-1-일) 피라졸로 -[1,5-a]-피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-6-메틸퀴나졸린 P22의 합성

중간체 36을 출발 재료로 사용하여 화합물 P21과 동일한 방식으로 화합물 P22를 제조하였다.

m/z = 498.6 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.58 - 1.87 (m, 4 H) 1.98 - 2.06 (m, 1 H) 2.07 (s, 3 H) 2.24 (quin, J=7.57 Hz, 2 H) 2.34 - 2.40 (m, 1 H) 2.42 - 2.46 (m, 3 H) 3.34 - 3.40 (m, 4 H) 3.49 (br ddd, J=13.62, 10.60, 3.63 Hz, 1 H) 3.64 - 3.71 (m, 4 H) 4.10 (t, J=7.67 Hz, 4 H) 4.19 (br d, J=14.13 Hz, 1 H) 5.81 - 5.88 (m, 1 H) 5.92 (s, 1 H) 7.59 (dd, J=8.48, 1.61 Hz, 1 H) 7.65 - 7.73 (m, 1 H) 7.86 (s, 1 H) 8.53 (s, 1 H)

1-(6-메틸-2-(1-(5-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로-[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-올 P23의 합성

P24 : [α]_D ²⁰ = +251.32° (589 nm, c = 0.3975% (w/v), DMF, 20℃)

P25 : [α]_D ²⁰ =-264.8° (589 nm, c = 0.375% (w/v), DMF, 20℃)

단계 1: 4 -(2-(5- 클로로 -6- 메틸피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린 37의 합성

중간체 19 (500 mg, 1.72 mmol)를 2-메톡시에탄올 (30 mL)에 용해시켰다. DIPEA (0.89 mL, 5.17 mmol, 3 당량) 및 4-클로로-5-메틸퀴나졸린 26 (324.26 mg, 1.72 mmol, 1 당량)을 상기 용액에 첨가하고, 80℃까지 가열하였다. 16시간의 교반 후, 상기 용액을 진공에서 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피를 통하여 정제하여 (DCM/(NH₃/MeOH) 7N): 9/1) 요망되는 중간체 37 (735 mg, 86%)을 생성하였다.

LCMS m/z = 393 (M+H)⁺

단계 2: 1 -(6- 메틸 -2-(1-(5- 메틸퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)- 피라졸 로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-올 P23의 합성

중간체 37 (735 mg, 1.5 mmol)을 EtOH (50 mL)에 용해시켰다. 아제티딘-3-올 히드로클로라이드 (327 mg, 3 mmol, 2 당량) 및 DIPEA (0.77 mL, 4.5 mmol, 3 당량)를 첨가하고, 용액을 16시간 동안 가열 환류시켰다. 그 후, 상기 용액을 실온까지 냉각시키고, 얼음을 첨가하고, 용액을 1시간 동안 교반시켰다. 고형물을 여과 제거하고, 오븐에서 건조시켜 화합물 P23 (440 mg, 68%)을 생성하였다.

LCMS m/z = 430 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, 420 K, DMSO-d ₆)δ ppm 1.41 - 1.70 (m, 3 H) 1.76 - 1.89 (m, 1 H) 2.11 (d, J=1.21 Hz, 3 H) 2.13 - 2.31 (m, 2 H) 2.81 (s, 3 H) 3.42 - 3.60 (m, 2 H) 3.90 (dd, J=9.28, 4.84 Hz, 2 H) 4.34 (t, J=8.10 Hz, 2 H) 4.46 - 4.55 (m, 1 H) 4.73 - 5.12 (m, 1 H) 5.47 - 5.58 (m, 1 H) 5.64 (br. s., 1 H) 7.21 - 7.33 (m, 1 H) 7.46 - 7.63 (m, 2 H) 8.10 (s, 1 H) 8.45 (s, 1 H)

(R)-1-(6-메틸-2-(1-(5-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]-피리미딘-5-일)아제티딘-3-올 P24 및 (S)-1-(6-메틸-2-(1-(5-메틸퀴나졸린-4-일)-피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-올 P25

이들 두 거울상 이성체를 화합물 P23을 이용하여 SFC 분리에 의해 단리하였다.

1-(6-메틸-2-(1-(5-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로-[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-아민 P26의 합성

단계 1: tert - 부틸(1-(6-메틸-2-(피페리딘-2-일)피라졸로 [1,5-a]-피리미딘-5-일)아제티딘-3-일)카르바메이트 38의 합성

EtOH (30 ml) 중 중간체 19 (1300 mg, 5.185 mmol), tert-부틸아제티딘-3-일카르바메이트 (1786 mg, 10.37 mmol) 및 휘니그 염기 (2 ml, 11.606 mmol)의 용액을 70℃에서 3시간 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 디칼라이트를 첨가하고 혼합물을 증발 건조시켰다. 조 물질을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 컬럼을 100% DCM에서 시작하여 10% MeOH 및 90% DCM까지의 구배를 이용하여 용출시켰다. 생성물을 포함하는 분획물을 증발시키고, 잔사를 ACN에서 재결정화하였다. 여과 후, 백색 결정성 고형물을 얻으며, 이것은 요망되는 표제 중간체 38과 출발 시약 tert-부틸아제티딘-3-일카르바메이트 (2204 mg)의 혼합물인데, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

m/z = 387.26 (M+H)⁺

단계 2: tert - 부틸(1-(6-메틸-2-(1-(5-메틸퀴나 졸린-4-일)피페리딘-2-일)- 피 라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-일)카르바메이트 39의 합성

단계 1에서 제조한 조 물질, 중간체 38 (250 mg, 0.647 mmol), 4-클로로-5-메틸-퀴나졸린 26 (182 mg, 0.97 mmol) 및 휘니그 염기 (368 μl, 2.135 mmol)를 2-메톡시에탄올 (4.36 ml)에서 혼합하고, 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔사를 100% DCM에서 시작하여 5% MeOH 및 95% DCM까지의 구배를 이용하여 용출함으로써 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 모든 분획물을 증발시켜 황색 폼을 얻었으며, 이는 단지 52% 순수하였다 (315 mg). 조 물질을 단계 3에서 그대로 사용하였다.

m/z = 529.28 (M+H)⁺

단계 3: 1 -(6- 메틸 -2- (1-(5-메틸퀴나졸린-4-일) 피페리딘-2-일) 피라졸로 [1,5-a]-피리미딘-5-일)아제티딘-3-아민 P26

단계 2에서 제조한 조 물질, 중간체 39 (157 mg, 0.297 mmol)를 DCM (1.9 ml)에 용해시켰다. 그 후 TFA (227 μl, 2.97 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 MeOH 중 7 M NH₃으로 염기성화하고, 모든 용매를 증발시켰다. 잔사를 물에 미분화하고, 형성된 고형물을 여과 제거하고, 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 컬럼을 100% DCM으로부터 시작하여 10% (MeOH/NH₃) 및 90% DCM까지의 구배를 이용하여 용출시켰다. 모든 순수 분획물을 증발시켜 표제 생성물 P26을 백색 고형물로서 얻었다 (76 mg, 59%).

m/z = 429.30 (M+H)⁺

MP = 221.07℃

150℃에서의 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 8.46 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.64 - 7.53 (m, 2H), 7.28 (d, J=5.9 Hz, 1H), 5.75 - 5.37 (m, 2H), 4.41 - 4.22 (m, 2H), 3.87 - 3.71 (m, 3H), 3.60 - 3.37 (m, 2H), 2.81 (s, 3H), 2.31 - 2.12 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.94 - 1.32 (m, 6H)

1-(2-(1-(2,5-디메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-6-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-아민 P27의 합성

4-클로로-2,5-디메틸퀴나졸린 40의 합성

단계 1: 2 ,5-디메틸-4H- 벤조[d][1,3]옥사진 -4-온 40-b의 합성

아세트산 무수물 (100 ml) 중 2-아미노-6-메틸벤조산 40-a (20.0 g, 132 mmol)의 용액을 140℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공 하에 농축시켜 표제 중간체 40-b (20.0 g, 77.7%)를 제공하였다.

단계 2: 2 ,5- 디메틸퀴나졸린 -4(3H)-온 40-c의 합성

중간체 40-b (20.0 g, 114 mmol) 및 수산화암모늄 (50 ml)의 혼합물을 하룻밤 환류시켰다. 상기 혼합물을 25℃까지 냉각시켰다. 고형물을 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하였다. 필터 케이크 (filter cake)를 진공 하에 40℃에서 1시간 동안 건조시켜 표제 중간체 40-c (20 g, 90.5%)를 생성하였다.

단계 3: 4 - 클로로 -2,5- 디메틸퀴나졸린 40의 합성

0℃에서 트리에틸 아민 (5.05 g, 49.9 mmol)을 옥시염화인 (108 g, 709 mmol) 중 중간체 40-c (2.90　g, 16.7 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 3시간 동안 환류시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 톨루엔 (50 ml)에 용해시키고, 용액을 빙수 (50 g)에 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 연속적으로 물 (2 x 50 ml), 10% NaHCO₃ 수용액 (2 x 50 ml), 물 (2 x 50 ml), 염수 (50 ml)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 여과액을 진공 하에 농축시켜 중간체 40 (1.91 g, 58.61%)을 생성하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 2.80 (s, 3 H) 3.00 (s, 3H) 7.41 (d, J=7.28 Hz, 1 H) 7.68 - 7.76 (m, 1 H) 7.78 - 7.85 (m, 1 H).

단계 4: tert - 부틸 (1-(2-(1-(2,5- 디메틸퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)-6- 메 틸피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-일)카르바메이트 41의 합성

조 중간체 38, (250 mg, 0.647 mmol), 중간체 40 (190 mg, 0.97　mmol) 및 휘니그 염기 (368 μl, 2.135 mmol)를 2-메톡시에탄올 (4.36 ml)에서 혼합하고, 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔사를 100% DCM으로 시작하여 5% MeOH 및 95% DCM까지의 구배를 이용하여 용출시킴으로써 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 모든 분획물을 증발시켜 중간체 41의 황색 폼을 얻었으며, 이는 단지 55% 순수하였다 (427　mg). 조 물질을 단계 5에서 그대로 사용하였다.

m/z = 543.36 (M+H)⁺

단계 5: 1 -(2-(1-(2,5- 디메틸퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)-6- 메틸 - 피라졸 로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-아민 P27의 합성

조 중간체 41 (427 mg (단지 55% 순수), 0.433 mmol)을 디옥산 중 HCl의 4　M 용액 (21.64 ml, 86.551 mmol)에 용해시키고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 디클로로메탄으로 희석시키고, 그 후 포화 Na₂CO₃ 용액으로 염기성화하였다. 생성물을 디클로로메탄 (3x15 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 조 물질을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 실리카 컬럼을 100% DCM으로부터 시작하여 4% (MeOH/NH₃) 및 96% DCM까지의 구배를 이용하여 용출시켰다. 모든 순수 분획물을 증발시켰다. 잔사를 DIPE에서 미분화하여 표제 생성물 P27을 백색 고형물로서 얻었다 (11 mg, 6%).

m/z = 443.6 (M+H)⁺

MP = 176.85℃

150℃에서의 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 8.10 (s, 1H), 7.56 - 7.43 (m, 2H), 7.19 (d, J=6.8 Hz, 1H), 5.74 - 5.44 (m, 2H), 4.39 - 4.25 (m, 2H), 3.83 - 3.71 (m, 3H), 3.53 - 3.38 (m, 2H), 2.79 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.26 - 2.13 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.94 - 1.38 (m, 6H)

디메틸 (4-{2-[5-(아제티딘-1-일)-7-(모르폴린-4-일)피라졸로[1,5-a]-피리미딘-2-일]피페리딘-1-일}-5-메틸퀴나졸린-2-일)이미도디카르보네이트 P28의 합성

단계 1: 4 -(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-7- 모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린-2-아민 42의 합성

MeOH 중 NH₃의 7 M 용액 (25 ml, 175 mmol) 중 중간체 15 (1031 mg, 1.902 mmol)의 현탁물을 밀봉 금속 반응기에서 120℃에서 4일 동안 가열하였다. 증발 후, 잔사를 HPLC 정제에 의해 정제하였다. 정제된 생성물을 DCM과 DIPE의 혼합물에 용해시키고, 상기 용액을 다시 증발시켜 표제 중간체 42를 백색 고형물로서 얻었다 (473 mg, 47%).

m/z = 500.3 (M+H)⁺

MP = 252.24℃

150℃에서의 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 7.36 - 7.27 (m, 1H), 7.16 - 7.10 (m, 1H), 6.90 - 6.83 (m, 1H), 5.71 - 5.60 (m, 1H), 5.54 - 5.41 (m, 2H), 5.31 - 5.22 (m, 1H), 5.17 (s, 1H), 3.98 (t, J=7.5 Hz, 4H), 3.78 - 3.28 (m, 10H), 2.76 (s, 3H), 2.28 (quin, J=7.4 Hz, 2H), 2.21 - 2.07 (m, 2H), 1.90 - 1.44 (m, 4H)

단계 2: 디메틸 (4-{2-[5-( 아제티딘 -1-일)-7-(모르폴린-4-일) 피라졸로 -[1,5- a ]-피리미딘-2-일]피페리딘-1-일}-5-메틸퀴나졸린-2-일)이미도-디카르보네이트 P28의 합성

중간체 42 (100 mg, 0.188 mmol)를 DCM (2.21 ml)에 용해시켰다. 그 후 DIPEA (117 μl, 0.678 mmol) 및 메틸 클로로포르메이트 (cas = 79-22-1, 29 μl, 0.376 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. DCM을 증발시키고, 잔사를 물에 미분화하였다. 상기 현탁물을 30분 동안 초음파 처리하고, 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 고형물을 여과시키고, 물 및 DIPE로 세척하여 표제 화합물 P28을 백색 분말로서 수득하였다 (40　mg, 31%).

m/z = 616.6 (M+H)⁺

MP = 136.62℃

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 7.79 - 7.66 (m, 1H), 7.65 - 7.55 (m, 1H), 7.48 - 7.39 (m, 1H), 6.05 - 4.99 (m, 3H), 4.09 - 3.02 (m, 20H), 2.89 - 2.73 (m, 3H), 2.38 - 1.94 (m, 4H), 1.87 - 1.40 (m, 4H)

메틸 (4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]-피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린-2-일)카르바메이트 P29의 합성

화합물 P28 (200 mg, 0.279 mmol)을 MeOH (6.0 ml) 및 THF (6.0　ml)에 용해시켰다. 그 후 물 (4.3 ml) 중 LiOH (17 mg, 0.722 mmol)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 그 후 이것을 1 M HCl 용액으로 중화시키고, 약간의 물로 희석시켰다. 상기 현탁물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 백색 고형물을 여과에 의해 수집하고, 요망되는 생성물을 진공 오븐에서 하룻밤 건조시켜 백색 고형물 P29 (71　mg, 43%)를 생성하였다.

80℃에서의 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 9.70 - 9.32 (m, 1H), 7.53 (dd, J=7.3, 8.1 Hz, 1H), 7.38 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.14 (d, J=7.0 Hz, 1H), 6.25 - 4.79 (m, 3H), 3.99 (t, J=7.4 Hz, 4H), 3.80 - 3.67 (m, 5H), 3.65 (s, 3H), 3.60 - 3.32 (m, 5H), 2.77 (s, 3H), 2.35 - 2.13 (m, 4H), 1.91 - 1.33 (m, 4H)

m/z = 558.3 (M+H)⁺

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-N-히드록시-5-메틸퀴나졸린-2-카르복스이미드아미드 P30의 합성

단계 1: 4 -(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-7- 모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)-피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린-2-카르보니트릴 43의 합성

NMP (44.6 ml) 중 화합물 15 (2000 mg, 3.689 mmol), 시안화아연 (cas = 557-21-1, 521 mg, 4.433 mmol) 및 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센 (cas = 12150-46-8, 372 mg, 0.671 mmol)의 황색 용액을 N₂를 이용하여 30분 동안 탈기시켰다. 그 후 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (cas = 51364-51-3, 327 mg, 0.357 mmol)을 첨가하고, 반응 용기를 밀봉하고, 90℃에서 20시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물 (176 ml)로 켄칭하였으며 (quenched) 침전물이 즉시 형성되었다. 이 현탁물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 고형물을 여과시키고, 물로 세척하여 진한 갈색의 고형물을 얻었다. 습윤 갈색 고형물을 DCM에 용해시키고, 잔존하는 물을 분리 및 Na₂SO₄에서의 건조에 의해 제거하였다. 잔사를 ACN에서 재결정화하고, 혼합물을 하룻밤 교반시켰다. 흑색 결정을 여과시키고, ACN 및 MeOH로 세척하여 자주색/회색 결정을 얻었다. 고형물을 다시 ACN에서 재결정화하고, 6시간 동안 교반시켰다. 그 후, 형성된 자주색 결정 중간체 43을 여과시키고, 약간의 ACN으로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켰다 (1685 mg, 81%).

m/z = 510.3 (M+H)⁺

단계 2: 4 -(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-7- 모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)-피페리딘-1-일)-N-히드록시-5-메틸퀴나졸린-2-카르복스이미드아미드 P30의 합성

물 (12.5 ml) 중 히드록실아민 히드로클로라이드 (3753 mg, 54 mmol)의 용액에 Na₂CO₃ (625 mg, 5.9 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반시켰다. 그 후, EtOH (50 ml) 중 중간체 43 (1132 mg, 2 mmol)의 현탁물을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 16시간 동안 교반시켰다. 빙수를 첨가하였다. 2시간 동안 교반시킨 후, 베이지색 고형물을 여과시키고, DIPE로 세척하였다. 조 물질을 95% DCM과 5% MeOH의 혼합물에 현탁시키고, 잔존 침전물을 여과 제거하였다. 여과액을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 실리카 컬럼을 100% DCM으로 시작하여 10% (MeOH/NH₃) 및 90% DCM까지의 구배에 의해 용출시켰다. 순수 분획물의 증발 후, 요망되는 생성물 P30을 베이지색 고형물로 얻었다 (38 mg, 3%).

m/z = 543.6 (M+H)⁺

MP = 205.46℃

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 9.82 - 9.46 (m, 1H), 7.71 - 7.56 (m, 2H), 7.32 (dd, J=1.4, 6.3 Hz, 1H), 5.97 - 5.40 (m, 4H), 5.20 (s, 1H), 3.98 (t, J=7.4 Hz, 4H), 3.81 - 3.29 (m, 10H), 2.84 (s, 3H), 2.28 (quin, J=7.4 Hz, 2H), 2.23 - 2.11 (m, 2H), 1.90 - 1.38 (m, 4H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(2-에톡시-5-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P31의 합성

EtOH (2.39 ml) 중 중간체 15 (150 mg, 0.277 mmol)의 현탁물을 NaOEt (EtOH 중 21%) (525 μl, 1.407 mmol)로 처리하였다. 샘플을 N₂로 플러시하고 (flushed), 밀봉하고, 80℃에서 48시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 잔사를 100% DCM으로부터 시작하여 10% MeOH 및 90% DCM까지의 구배를 이용하여 용출시킴으로써 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 모든 분획물을 증발시켜 백색 폼을 얻었다. 상기 폼을 DIPE 및 5% ACN으로 재결정화하고, 혼합물을 3일 동안 교반시켰다. 백색 결정성 표제 화합물 P31을 여과에 의해 수득하였다 (46 mg, 29%).

m/z = 529.3 (M+H)⁺

MP = 186.90℃

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 7.52 - 7.42 (m, 1H), 7.35 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.09 (d, J=7.0 Hz, 1H), 5.70 - 5.58 (m, 1H), 5.41 - 5.28 (m, 1H), 5.18 (s, 1H), 4.39 - 4.27 (m, 2H), 4.05 - 3.90 (m, 4H), 3.74 - 3.57 (m, 4H), 3.56 - 3.37 (m, 6H), 2.80 (s, 3H), 2.35 - 2.23 (m, 2H), 2.22 - 2.11 (m, 2H), 1.94 - 1.40 (m, 4H), 1.27 (t, J=6.9 Hz, 3H)

(S)-N-(4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-6-클로로퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P32의 합성

P33 : [α]_D ²⁰ = -209.83° (589 nm, c = 0.3765% (w/v), DMF, 20℃)

P34 : [α]_D ²⁰ =+192.15° (589 nm, c = 0.242% (w/v), DMF, 20℃)

단계 1: 4 -(5-( 아제티딘 -1-일)-2-(1-(2,6- 디클로로퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 45의 합성

중간체 8 (1341 mg, 2.92 mmol), 2,4,6-트리클로로퀴나졸린 44 (cas = 20028-68-6, 768 mg, 2.83 mmol) 및 DIPEA (cas = 7087-68-5, 1.24 ml, 7.183 mmol)를 2-메톡시에탄올 (14.7 ml)에서 혼합하고, 60℃에서 2시간 동안 가열하였다. 냉각시킨 반응 혼합물을 빙수에 서서히 첨가하고, 혼합물을 실온까지 가온하였다. 형성된 밝은 황색의 침전물을 연속적으로 여과시키고, 물 및 DIPE로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물을 100% DCM으로 시작하여 5% MeOH 및 95% DCM까지의 구배를 이용하여 용출시킴으로써 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 분획물의 증발 후, 황색 폼을 중간체 45 (781 mg, 49%)로서 단리하였다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 8.12 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.85 (dd, J=2.2, 9.0 Hz, 1H), 7.74 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.07 (s, 1H), 5.97 - 5.88 (m, 1H), 5.35 (s, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 1H), 4.02 (t, J=7.5 Hz, 4H), 3.77 - 3.60 (m, 4H), 3.59 - 3.34 (m, 5H), 2.42 - 2.22 (m, 3H), 2.09 - 1.93 (m, 1H), 1.79 - 1.59 (m, 4H)

m/z = 539.3 (M+H)⁺

단계 2: N-(4-(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-7- 모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)피페리딘-1-일)-6-클로로퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P32의 합성

중간체 45 (750 mg, 1.39 mmol), 메탄 술폰아미드 (264 mg, 2.781　mmol), 탄산세슘 (cas = 534-17-8, 1132 mg, 3.476 mmol), 4,5-비스-(디페닐-포스피노)-9,9-디메틸잔텐 (cas = 161265-03-8, 241 mg, 0.417 mmol) 및 아세트산팔라듐(II) (cas = 3375-31-3, 94 mg, 0.417 mmol)을 디옥산 (10　ml)에서 혼합하였다. 상기 현탁물을 N₂를 이용하여 10분 동안 탈기시켰다. 반응 용기를 밀봉하고, 그 후 마이크로웨이브 오븐에서 110℃에서 30분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 증발 건조시켜서, 100% DCM으로 시작하여 10% (MeOH/NH₃) 및 90% DCM까지의 구배를 이용하여 용출시킴으로써 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 관련 분획물의 증발 후, 표제 생성물 P32를 갈색 고형물로 얻었다 (507 mg, 59%).

m/z = 598.2 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 12.06 (br. s., 1H), 8.13 - 7.91 (m, 1H), 7.76 (dd, J=2.2, 9.0 Hz, 1H), 7.41 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.38 - 5.80 (m, 2H), 5.37 (s, 1H), 4.56 - 4.30 (m, 1H), 4.03 (t, J=7.5 Hz, 4H), 3.79 - 3.64 (m, 4H), 3.60 - 3.35 (m, 5H), 3.11 - 2.87 (m, 3H), 2.44 - 2.25 (m, 3H), 2.09 - 1.89 (m, 1H), 1.82 - 1.60 (m, 4H)

단계 3: (S)-N-(4-(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-7- 모르폴리노피라졸로 [1,5-a]-피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-6-클로로퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P33 및 (R)-N-(4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]-피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-6-클로로퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P34의 합성

화합물 P32 (400 mg, 0.669 mmol)를 SFC에 의해 정제하여 표제 화합물, 순수 거울상 이성체 P33을 누르스름한 고형물 (173 mg, 43%)로서, 그리고 순수 거울상 이성체 P34를 누르스름한 고형물 (187 mg, 46%)로서 수득하였다.

P33, SFC: 100% 순수, R_t = 1.94분

m/z = 598.2 (M+H)⁺

P34, SFC: 98.65% 순수, 1.35% R_t = 1.89분 및 98.65% R_t = 2.74분.

m/z = 598.2 (M+H)⁺

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5-클로로퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P35의 합성

2-메톡시에탄올 (20 mL) 중 중간체 8 (300 mg, 0.63 mmol)의 용액에 4,5-디클로로퀴나졸린 46 (CAS: 2148-55-2, 1.1 당량, 139 mg, 0.7 mmol) 및 DIPEA (3 당량, 0.33 mL, 1.9 mmol)를 첨가하였다. 상기 용액을 80℃까지 16시간 동안 가열하였다. 상기 용액을 진공에서 농축시키고, DCM으로 추출하고, 물로 세척하였다. 합한 유기물을 수집하고, MgSO4로 건조시키고, 여과 제거하고, 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 0%로부터 시작하여 10%의 DCM 중 MeOH까지의 구배를 이용하여 용출시켜 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 증발 후 화합물 P35 (190 mg, 57%)를 수득하였다.

LCMS m/z = 505 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, 420 K, DMSO-d ₆) δ ppm 1.48 - 1.90 (m, 4 H) 2.22 - 2.35 (m, 4 H) 3.43 - 3.56 (m, 5 H) 3.64 - 3.76 (m, 4 H) 3.84 (d, J=13.89 Hz, 1 H) 3.93 - 4.04 (m, 4 H) 5.18 (s, 1 H) 5.62 (s, 1 H) 5.66 (br. s., 1 H) 7.51 (dd, J=7.16, 1.61 Hz, 1 H) 7.61 - 7.66 (m, 1 H) 7.67 - 7.70 (m, 1 H) 8.45 (s, 1 H)

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-N-(N,N-디메틸술파모일)퀴나졸린-2-카르복스아미드 P36의 합성

단계 1: 에틸 4-(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-7- 모르폴리노피라졸로 [1,5-a]-피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)퀴나졸린-2-카르복실레이트 48의 합성

2-메톡시에탄올 (40 mL) 중 중간체 8 (1.2 g, 3.4 mmol)의 용액에 에틸 4-클로로퀴나졸린-2-카르복실레이트 47 (0.97 g, 4.06 mmol) 및 DIPEA (3 당량, 1.75 mL, 10 mmol)를 첨가하였다. 상기 용액을 80℃에서 48시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 용액을 진공에서 농축시키고, 0%로부터 시작하여 10%의 DCM 중 MeOH까지의 구배를 이용하여 용출시켜 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 중간체 48 (998 mg, 75% 순수, 40% 수율)을 제공하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

LCMS m/z = 543 (M+H)⁺

단계 2: 4 -(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-7- 모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)-피페리딘-1-일)퀴나졸린-2-카르복실산 49의 합성

25 ml의 THF/물 (3/1) 중 중간체 48 (998 mg, 75% 순수, 1.3 mmol)의 용액에 LiOH (3 당량, 93 mg, 3.9 mmol)를 첨가하였다. 상기 용액을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 그 후, 상기 용액을 pH = 6까지 조정하고, 혼합물을 진공에서 농축시켜 중간체 49 (828 mg, 76% 순수, 94% 수율)를 제공하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

LCMS m/z = 515 (M+H)⁺

단계 3: 4 -(2-(5-( 아제티딘 -1-일)-7- 모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)-피페리딘-1-일)-N-(N,N-디메틸술파모일)퀴나졸린-2-카르복스아미드 P36의 합성

중간체 49 (300 mg, 0.37 mmol)의 용액에 3 mL의 THF/DMF (1/1) 중 CDI (120 mg, 0.73　mmol)의 용액을 첨가하였다. 상기 용액을 50℃까지 가열하고, 1시간 동안 교반시켰다. N,N-디메틸술파미드 (136 mg, 1.1 mmol) 및 DBU (0.165 mL, 1.1 mmol)를 상기 용액에 첨가하고, 50℃에서 추가로 1시간 동안 교반시켰다. 상기 용액을 DCM으로 추출하고, 물로 세척하였다. 합한 유기물을 MgSO₄로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 0%로부터 시작하여 10%의 DCM 중 MeOH까지의 구배를 이용하여 용출시켜 컬럼 크로마토그래피에 의해 추가로 정제하였다. 증발 후 조 물질을 물에 녹이고, 고형물을 여과 제거하고, 오븐에서 건조시켜 화합물 P36 (53 mg, 22%)을 백색 고형물로서 생성하였다.

LCMS m/z = 621 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, 360 K, DMSO-d ₆) δ ppm 1.69 - 1.81 (m, 4 H) 2.02 - 2.13 (m, 1 H) 2.26 - 2.35 (m, 3 H) 2.35 - 2.42 (m, 1 H) 2.90 (s, 6 H) 3.49 - 3.57 (m, 5 H) 3.62 - 3.72 (m, 4 H) 4.01 (t, J=7.48 Hz, 4 H) 4.37 (d, J=13.42 Hz, 1 H) 5.27 (s, 1 H) 5.94 (s, 1 H) 6.05 (br. s, 1 H) 7.57 - 7.61 (m, 1 H) 7.83 - 7.88 (m, 1 H) 7.93 (dd, J=8.36, 1.10 Hz, 1 H) 8.15 (d, J=8.58 Hz, 1 H)

1-(2-(1-(2,5-디메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-6-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-올 P37의 합성

단계 1: 4 -(2-(5- 클로로 -6- 메틸피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)피페리딘-1-일)-2,5-디메틸퀴나졸린 50의 합성

2-메톡시에탄올 (40 mL) 중 중간체 19 (200 mg, 0.58 mmol)의 용액에 4-클로로-2,5-디메틸-퀴나졸린 40 (1 당량, 114 mg, 0.58 mmol, CAS 번호 147006-57-3) 및 DIPEA (3 당량, 0.3 mL, 1.7 mmol)를 첨가하였다. 상기 용액을 80℃까지 16시간 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 용액을 진공에서 농축시키고, 0%로부터 시작하여 10%의 DCM 중 MeOH까지의 구배를 이용하여 용출시켜 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 증발 후 조 물질을 디에틸 에테르로 미분화하여 중간체 50 (140 mg, 90% 순수, 53% 수율)을 생성하였다. 고형물을 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

LCMS m/z = 407 (M+H)⁺

단계 2: 1 -(2-(1-(2,5- 디메틸퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)-6- 메틸 - 피라졸 로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-올 P37의 합성

실온에서 중간체 50 (140 mg, 0.31 mmol)을 5 mL의 EtOH에 용해시켰다. 그 후 아제티딘-3-올 히드로클로라이드 (68 mg, 0.62 mmol) 및 DIPEA (0.16 mL, 0.92 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 16시간 동안 환류시켰다. 그 후 상기 혼합물을 진공에서 농축시키고, 물/EtOH (3/1)에 녹이고, 생성된 고형물을 여과 제거하고, 오븐에서 건조시켜 화합물 P37 (65 mg, 48%)을 제공하였다.

LCMS m/z = 444 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, 420 K, DMSO-d ₆) δ ppm 1.41 - 1.70 (m, 3 H) 1.76 - 1.89 (m, 1 H) 2.12 (d, J=0.81 Hz, 3 H) 2.23 - 2.33 (m, 2 H) 2.49 (s, 3 H) 2.75 (s, 3 H) 3.53 - 3.64 (m, 2 H) 3.94 (dd, J=9.69, 4.04 Hz, 2 H) 4.36 (t, J=8.10 Hz, 2 H) 4.48 - 4.56 (m, 1 H) 5.74 (br. s., 1 H) 5.79 (br. s., 1 H) 7.27 (d, J=7.27 Hz, 1 H) 7.43 - 7.54 (m, 1 H) 7.55 - 7.63 (m, 1 H) 8.12 (s, 1 H)

화합물 P37 (400 mg, 0.669 mmol)을 SFC에 의해 정제하여 하기의 표제 화합물을 수득하였다: 순수 거울상 이성체 P38 (44 mg):

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.47 - 1.77 (m, 4 H) 1.86 - 2.00 (m, 1 H) 2.13 (d, J=0.66 Hz, 3 H) 2.25 - 2.43 (m, 4 H) 2.50 (s, 3 H) 3.32 - 3.46 (m, 1 H) 3.92 (dd, J=9.79, 4.73 Hz, 2 H) 4.20 (d, J=12.76 Hz, 1 H) 4.28 - 4.42 (m, 2 H) 4.43 - 4.57 (m, 1 H) 5.65 (d, J=6.16 Hz, 1 H) 5.78 (br. s, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 7.56 (dd, J=8.80, 1.76 Hz, 1 H) 7.60 (d, J=8.36 Hz, 1 H) 7.76 (s, 1 H) 8.45 (s, 1 H)

및 순수 거울상 이성체 P39 (55 mg) :

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.45 - 1.77 (m, 4 H) 1.89 - 2.03 (m, 1 H) 2.15 (s, 3 H) 2.28 - 2.43 (m, 4 H) 2.51 (br. s., 3 H) 3.35 - 3.47 (m, 1 H) 3.94 (dd, J=9.79, 4.73 Hz, 2 H) 4.23 (d, J=12.76 Hz, 1 H) 4.38 (t, J=8.80 Hz, 2 H) 4.45 - 4.62 (m, 1 H) 5.62 (br. s, 1 H) 5.83 (br. s., 1 H) 5.98 (s, 1 H) 7.57 (dd, J=8.58, 1.32 Hz, 1 H) 7.62 (d, J=8.58 Hz, 1 H) 7.78 (s, 1 H) 8.46 (s, 1 H).

N-(4-(2-(5-(3-히드록시아제티딘-1-일)-6-메틸피라졸로[1,5-a]-피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P41의 합성

단계 1: 1 -(6- 메틸 -2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 -5-일)- 아제티 딘-3-올 51의 합성

EtOH (50 mL) 중 중간체 19 (4.1 g, 11.9 mmol)의 용액에 아제티딘-3-올 히드로클로라이드 (1.04 g, 14.3 mmol, 1.2 당량) 및 DIPEA (10.2 mL, 60　mmol, 5 당량)를 첨가하고, 용액을 하룻밤 환류시켰다. 주위 온도까지 냉각시킨 후, 상기 용액을 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 DCM/MeOH (9/1)에 용해시키고, 염을 여과 제거하였다. 여과액을 진공에서 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피 (DCM/NH₃(MeOH 7N): 9/1)를 통하여 정제하여 중간체 51 (1.9 g, 56%)을 수득하였다.

LCMS m/z = 288 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.56 - 1.84 (m, 5 H) 1.96 - 2.07 (m, 1 H) 2.16 (d, J=0.88 Hz, 3 H) 2.82 - 2.96 (m, 1 H) 3.16 - 3.23 (m, 1 H) 3.95 (dd, J=9.57, 4.95 Hz, 2 H) 4.12 (dd, J=11.11, 2.97 Hz, 1 H) 4.34 - 4.44 (m, 2 H) 4.48 - 4.58 (m, 1 H) 6.16 (s, 1 H) 8.40 (s, 1 H).

단계 2: 1 -(2-(1-(2- 클로로 -5- 메틸퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)-6- 메틸피라 졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-올 P40의 합성

2-메톡시에탄올 (30 mL) 중 중간체 51 (500 mg, 1.74 mmol)의 용액에 2,4-디클로로-5-메틸퀴나졸린 14 (1.2 당량, 808 mg, 2.08 mmol) 및 DIPEA (3 당량, 0.9 mL, 5.2 mmol)를 첨가하였다. 상기 용액을 50℃에서 2시간 동안 교반시키고, 혼합물을 진공에서 농축시키고, DCM으로 추출하고, 물로 세척하였다. 합한 유기물을 MgSO₄로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 HPLC에서 추가로 정제하여 표제 생성물 P40 (130 mg, 16%)을 제공하였다.

LCMS m/z = 464 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.39 - 1.55 (m, 1 H) 1.55 - 1.70 (m, 2 H) 1.73 - 1.89 (m, 1 H) 2.05 - 2.20 (m, 4 H) 2.23 - 2.32 (m, 1 H) 3.43 - 3.70 (m, 2 H) 3.89 - 3.98 (m, 2 H) 4.32 - 4.41 (m, 2 H) 4.47 - 4.56 (m, 1 H) 5.06 - 5.18 (m, 1 H) 5.59 - 5.68 (m, 1 H) 5.68 - 5.79 (m, 1 H) 7.25 - 7.33 (m, 1 H) 7.44 - 7.52 (m, 1 H) 7.58 - 7.66 (m, 1 H) 8.11 - 8.19 (m, 1 H)

단계 3: N-(4-(2-(5-(3- 히드록시아제티딘 -1-일)-6- 메틸피라졸로 [1,5-a]-피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린-2-일)메탄술폰아미드 P41의 합성

밀봉 튜브에서 1,4-디옥산 (5 mL) 중 화합물 P40 (130 mg, 0.28 mmol)의 용액에 메탄술폰아미드 (2 당량, 53 mg, 0.56 mmol), 탄산세슘 (2.5 당량, 0.7 mmol, 228 mg), 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸잔텐 (0.3 당량, 48.6 mg, 0.084　mmol) 및 Pd(OAc)₂ (0.3 당량, 18.87 mg, 0.084 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 마이크로웨이브에서 120℃까지 5분 동안 가열하였다. 상기 용액을 디칼라이트에서 여과시키고, 디클로로메탄으로 세척하고, 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 HPLC에 의해 추가로 정제하여 화합물 P41 (42 mg, 30%)을 백색 분말로서 제공하였다.

LCMS m/z = 523 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, 420 K, DMSO-d₆) δ ppm 1.46 (m, J=9.46 Hz, 1 H) 1.62 (m, 2 H) 1.80 (m, 1 H) 2.07 - 2.18 (m, 4 H) 2.24 - 2.36 (m, 1 H) 2.63 (s, 3 H) 2.97 (s, 3 H) 3.57 (m, 1 H) 3.68 - 3.80 (m, 1 H) 3.90 - 3.98 (m, 2 H) 4.33 - 4.41 (m, 2 H) 4.45 - 4.59 (m, 1 H) 5.05 (br. s., 1 H) 5.82 (br. s., 1 H) 5.94 (br. s., 1 H) 7.05 (d, J=7.04 Hz, 1 H) 7.22 (d, J=8.14 Hz, 1 H) 7.47 (t, J=7.05 Hz, 1 H) 8.16 (s, 1 H) 9.88 - 11.04 (m, 1 H).

1-(2-(1-(2,6-디메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-6-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-올 P42의 합성

4-클로로-2,6-디메틸퀴나졸린 52의 합성

단계 1: 2 ,6- 디메틸퀴나졸린 -4-올 52-b의 합성

2-아미노-5-메틸벤조산 52-a (8 g, 53 mmol)를 아세트산 무수물 (80 mL)에 용해시키고, 130℃에서 2시간 동안 가열하였다. 그 후, 상기 용액을 진공에서 농축시켜 고체 중간체를 제공하고, 이를 추가로 EtOH (100 mL) 및 NH3.H2O (80 mL)의 용액에 용해시키고, 80℃까지 가열하였다. 48시간 후, 상기 용액을 냉각시키고, 고형물을 여과 제거하고, 오븐에서 건조시켜 2,6-디메틸퀴나졸린-4-올 52-b (6.3 g, 70%)를 제공하였다.

LCMS m/z = 175 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.32 (s, 3 H) 2.41 (s, 3 H) 7.46 (d, J=8.36 Hz, 1　H) 7.56 (dd, J=8.14, 1.98 Hz, 1 H) 7.76 - 7.92 (m, 1 H) 11.91 (br. s, 1 H)

단계 2: 4 - 클로로 -2,6- 디메틸퀴나졸린 52의 합성

톨루엔 (10　mL) 중 2,6-디메틸퀴나졸린-4-올 52-b (500 mg, 2.87 mmol)의 용액에 DIPEA (0.989 mL, 5.74 mmol, 2 당량) 및 POCl₃ (0.4 mL, 4.3　mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 상기 용액을 80℃까지 가열하고, 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시키고, 디클로로메탄으로 희석시키고, 그 후 NaHCO₃의 포화 수용액으로 세척하였다. 합한 유기물을 MgSO₄로 건조시키고, 진공에서 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc: 1/1)에서 정제하여 중간체 52 (300 mg, 90% 순도, 48%)를 제공하였다.

LCMS m/z = 193 (M+H)⁺

단계 3: 1 -(2-(1-(2,6- 디메틸퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)-6- 메틸 - 피라졸 로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-올 P42의 합성

중간체 51 (240 mg, 0.83 mmol)을 2-메톡시에탄올 (5 mL) 중 4-클로로-2,6-디메틸퀴나졸린 52 (1.7 당량, 300 mg, 1.4 mmol) 및 DIPEA (3 당량 0.43 mL, 2.5　mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 용액을 140℃에서 가열하고, 16시간 동안 교반시켰다. 주위 온도까지 냉각시킨 후, 혼합물을 DCM으로 추출하고, 물로 세척하였다. 합한 유기물을 수집하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과 제거하고, 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 HPLC에 의해 추가로 정제하여 화합물 P42 (167 mg, 45%)를 제공하였다.

LCMS m/z = 444 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.56 - 1.75 (m, 4 H) 1.88 - 2.02 (m, 2 H) 2.14 (s, 3 H) 2.34 (s, 1 H) 2.39 (s, 3 H) 3.94 (dd, J=9.46, 5.28 Hz, 2 H) 4.20 (d, J=12.76 Hz, 1 H) 4.37 (t, J=8.10 Hz, 2 H) 4.51 (br. s, 1 H) 5.54 - 5.72 (m, 1 H) 5.81 (br. s, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 7.53 - 7.63 (m, 2 H) 7.77 (s, 1 H) 8.45 (s, 1 H)

(S)-1-(2-(1-(2,6-디메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-6-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-올 P43 및 (R)-1-(2-(1-(2,6-디메틸-퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-6-메틸피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)아제티딘-3-올 P44의 합성

추가의 정제를 예비 SFC (고정상: 키랄팩 디아셀 AS 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, 0.2% iPrNH₂를 포함하는 EtOH)를 통하여 수행하여 하기 둘 모두의 관련 거울상 이성체를 제공하였다:

P43:

LCMS m/z = 444 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.68 (s, 4 H) 1.89 - 2.03 (m, 1 H) 2.15 (s, 3 H) 2.28 - 2.43 (m, 4 H) 2.51 (br. s., 3 H) 3.35 - 3.47 (m, 1 H) 3.94 (dd, J=9.79, 4.73 Hz, 2　H) 4.23 (d, J=12.76 Hz, 1 H) 4.38 (t, J=8.80 Hz, 2 H) 4.45 - 4.62 (m, 1 H) 5.62 (br. s, 1 H) 5.83 (br. s., 1 H) 5.98 (s, 1 H) 7.57 (dd, J=8.58, 1.32 Hz, 1 H) 7.62 (d, J=8.58 Hz, 1 H) 7.78 (s, 1 H) 8.46 (s, 1 H)

P44:

LCMS m/z = 444 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.47 - 1.77 (m, 4 H) 1.86 - 2.00 (m, 1 H) 2.13 (d, J=0.66 Hz, 3 H) 2.25 - 2.43 (m, 4 H) 2.50 (s, 3 H) 3.32 - 3.46 (m, 1 H) 3.92 (dd, J=9.79, 4.73 Hz, 2 H) 4.20 (d, J=12.76 Hz, 1 H) 4.28 - 4.42 (m, 2 H) 4.43 - 4.57 (m, 1　H) 5.65 (d, J=6.16 Hz, 1 H) 5.78 (br. s, 1 H) 5.96 (s, 1 H) 7.56 (dd, J=8.80, 1.76 Hz, 1 H) 7.60 (d, J=8.36 Hz, 1 H) 7.76 (s, 1 H) 8.45 (s, 1 H)

P43 : [α]_D ²⁰ = +295.23° (589 nm, c = 0.377% (w/v), DMF, 20℃)

P44 : [α]_D ²⁰ =-269.05° (589 nm, c = 0.378% (w/v), DMF, 20℃)

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린-2-올 P45의 합성

아세트산 (2 mL) 중 중간체 15 (100 mg, 0.193 mmol)의 용액을 70℃까지 3시간 동안 가온하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 물을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄으로 희석시키고, 중탄산나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 용매를 증발시켜 생성물 P45 (80 mg, 80%)를 생성하였다.

m/z = 501.6 (M+H)⁺

MP = 223.59℃

100℃에서의 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 10.31 (br. s., 1H), 7.35 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.02 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.90 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.24 - 5.34 (m, 2H), 5.24 (s, 1H), 4.10 - 3.43 (m, 14H), 2.65 (s, 3H), 2.37 - 2.06 (m, 4H), 1.89 - 1.39 (m, 4H)

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린-2-카르복스아미드 P46의 합성

밀봉 튜브에서 DMF (5 mL) 중 중간체 43 (100 mg, 0.17 mmol)의 용액에 10　mL의 NaOH (H₂O 중 1 M)를 첨가하였다. 상기 용액을 마이크로웨이브에서 130℃까지 10분 동안 가열하였다. 그 후 상기 용액을 1몰 염산 수성 용액으로 pH = 6 내지 7까지 조정하였다. 상기 용액을 추가로 DCM으로 추출하고, 합한 유기물을 포화 NaHCO₃ 용액 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 추가로 MgSO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 생성된 물질을 HPLC에서 화합물 P46 (68 mg, 73%)으로 정제하였다.

LCMS m/z = 528 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.14 - 1.87 (m, 4 H) 1.98 - 2.41 (m, 4 H) 2.84 (s, 3 H) 3.19 - 3.27 (m, 2 H) 3.40 - 3.83 (m, 7 H) 3.85 - 4.28 (m, 5 H) 5.12 - 5.44 (m, 2　H) 5.87 (s, 1 H) 7.38 - 7.50 (m, 1 H) 7.55 - 7.81 (m, 3 H) 7.89 - 8.03 (m, 1 H).

4-(5-시클로프로필-6-메틸-2-(1-(5-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P47의 합성

단계 1: 5 - 시클로프로필 -6- 메틸 -2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a] -피리미딘-7-올 54의 합성

아세트산 (100 mL) 중 중간체 4 (16 g, 60 mmol)의 용액에 메틸 3-시클로프로필-2-메틸-3-옥소프로파노에이트 53 (30 g, 180 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 하룻밤 교반시켰다.

생성된 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔사 (46 g, 98%)를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

단계 2: 7 - 클로로 -5- 시클로프로필 -6- 메틸 -2-(피페리딘-2-일) 피라졸로 -[1,5-a]-피리미딘 55의 합성

중간체 54 (45 g, 79 mmol) 및 포스포릴 트리클로라이드 (220 g)의 혼합물을 110℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 용매를 제거하고, 잔사를 얼음물 용액에 용해시키고, 탄산나트륨 (19.8 g, 238 mmol)의 첨가에 의해 염기성화하였다. 이 용액을 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

단계 3: 4 -(5- 시클로프로필 -6- 메틸 -2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a] -피리미딘-7-일)모르폴린 56의 합성

중간체 55의 용액에 아세토니트릴 (250 mL) 및 모르폴린 (20.7 g, 238　mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 하룻밤 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 생성된 수성 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 잔사를 디클로로메탄 및 메탄올을 용출제로 사용하여 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 중간체 56 (2 g, 7%)을 단리하였다.

단계 4: 4 -(5- 시클로프로필 -6- 메틸 -2- (1-(5-메틸퀴나졸린-4-일) -피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P47의 합성

5 mL의 2-메톡시에탄올 중 중간체 56 (200 mg, 0.56 mmol)의 용액에 4-클로로-5-메틸-퀴나졸린 26 (1.2 당량, 126 mg, 0.67 mmol) 및 DIPEA (3 당량, 0.289 mL, 1.68 mmol)를 첨가하였다. 상기 용액을 80℃에서 48시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 용액을 진공에서 농축시키고, HPLC에서 정제하여 표제 생성물 P47 (110 mg, 41%)을 제공하였다.

LCMS m/z = 484 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, 420 K, DMSO-d ₆) δ ppm 0.90 - 1.11 (m, 4 H) 1.50 - 1.61 (m, 1 H) 1.61 - 1.76 (m, 2 H) 1.80 - 1.92 (m, 1 H) 2.07 - 2.18 (m, 1 H) 2.20 - 2.32 (m, 2 H) 2.35 (s, 3 H) 2.84 (s, 3 H) 3.28 - 3.40 (m, 4 H) 3.47 - 3.65 (m, 2 H) 3.66 - 3.78 (m, 4 H) 5.56 - 5.67 (m, 1 H) 6.00 (br. s., 1 H) 7.30 (d, J=6.46 Hz, 1 H) 7.55 - 7.66 (m, 2 H) 8.46 (s, 1　H)

(3S)-1-(6-메틸-2-(1-(5-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)피롤리딘-3-아민 P48의 합성

단계 1: tert - 부틸2 -(5-히드록시-6- 메틸피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)-피페리딘-1-카르복실레이트 58의 합성

DMF (270 ml) 중 중간체 4 (14.43 g, 54.18 mmol)의 용액에 (E)-에틸 3-에톡시-2-메틸아크릴레이트 57 (9.00 g, 56.9 mmol) 및 Cs₂CO₃ (26.48 g, 81.27 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 130℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 연속적으로 에틸 아세테이트 (300　ml)에 용해시키고, 포화 NH₄Cl 수용액, 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시켰다. 여과 후, 여과액을 진공 하에 100 ml까지 농축시켰다. 16시간 후, 침전물을 여과 제거하였다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (2 x 30 ml)로 세척하고, 건조시켜 (진공, 45℃, 1시간) 중간체 58 (11.80 g, 65.52%)을 제공하였다.

단계 2: 5 - 클로로 -6- 메틸 -2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 59의 합성

포스포릴 트리클로라이드 (178 ml) 중 중간체 58 (11.80 g, 35.50 mmol)의 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 아세토니트릴 (200 ml)에 용해시켰다. 상기 혼합물을 암모니아 (메탄올 중 7　M)를 이용하여 pH = 7 내지 8까지 중화시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 여과액을 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (용출제: 디클로로메탄/메탄올 중 1% NH₃ (10/1)). 수집한 분획물을 농축시켜 중간체 59 (3.715 g, 40.44%)를 제공하였다.

단계 3: tert - 부틸((3S)-1-(6-메틸-2-(피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a] -피리미딘-5-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트 61의 합성

MeOH (50 ml) 중 중간체 59 (3.58 g, 10.0 mmol, 70% 순도), (S)-tert-부틸-피롤리딘-3-일카르바메이트 60 (2.33 g, 12.5 mmol) 및 Et₃N (3.04 g, 30.0 mmol)의 용액을 70℃에서 하룻밤 교반시켰다. 혼합물을 여과시키고, 여과액을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂에 용해시키고, 염수로 세척하였다. 분리한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 컬럼 크로마토그래피 (용출제: 10:1의 CH₂Cl₂/MeOH)에 의해 정제하였다. 농축 후, 조 생성물을 CH₃CN으로 미분화하였다. 고형물을 여과시키고, CH₃CN으로 세척하여 표제 중간체 62 (768 mg, 12% 수율)를 제공하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃)δ ppm 1.45 (s, 9 H) 1.62 (m, 1 H) 1.90 (m, 3 H) 2.16 (m, 3 H) 2.26 (s, 3 H) 3.12 (m, 1 H) 3.47 (m, 1 H) 3.49 (s, 3 H) 3.65 (m, 1 H) 3.72 (m, 1 H) 3.84 (m, 1 H) 4.26 (m, 1 H) 4.37 (m, 1 H) 4.90 (d, 1 H, J=6.8 Hz) 6.39 (s, 1 H) 7.99 (d, 1 H, J=4.8 Hz).

단계 4: tert - 부틸((3S)-1-(6-메틸-2-(1- (5-메틸퀴나졸린-4-일)-피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트 62의 합성

중간체 61(300 mg, 0.694 mmol), 4-클로로-5-메틸-퀴나졸린 26 (170　mg, 0.902 mmol) 및 휘니그 염기 (395 μl, 2.291 mmol)를 2-메톡시에탄올 (4.7 ml)에서 혼합하고, 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 얼음물 용액에 서서히 첨가하였다. 상기 현탁물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 형성된 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, 그 후 진공 오븐에서 16시간 동안 건조시켰다. 조 물질을 100% DCM으로 시작하여 10% MeOH 및 90% DCM까지의 구배를 이용하여 용출시킴으로써 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수 분획물의 증발 후 표제 중간체 62의 조 물질 (238 mg)을 얻었다.

m/z = 543.4 (M+H)⁺

단계 5: (3S)-1-(6- 메틸 -2- (1-(5-메틸퀴나졸린-4-일) 피페리딘-2-일) 피라졸 로[1,5-a]피리미딘-5-일)피롤리딘-3-아민 P48의 합성

중간체 62 (238 mg, 0.386 mmol)를 DCM (2.5 ml)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (295 μl, 3.859 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 NaHCO₃의 냉각 포화 용액에 적가하였다. 생성물을 DCM으로 추출하였다 (3회). 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발 건조시켰다. 조 물질을 100% DCM으로 시작하여 10% (MeOH/NH₃) 및 90% DCM까지의 구배를 이용하여 용출시킴으로써 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수 분획물의 증발 후, 황색 폼을 단리하였다. 상기 폼을 디에틸 에테르에서 미분화하여 표제 생성물 P48을 백색 고형물로서 얻었다 (152 mg, 85%).

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 8.46 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.68 - 7.51 (m, 2H), 7.29 (d, J=6.4 Hz, 1H), 5.79 - 5.42 (m, 2H), 3.85 - 3.19 (m, 7H), 2.80 - 2.75 (m, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.25 - 1.28 (m, 8H)

m/z = 443.3 (M+H)⁺

MP = 124.92℃

(3S)-1-(2-(1-(6-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)피롤리딘-3-아민 P49의 합성

단계 1: tert - 부틸2 -(5- 히드록시피라졸로[1,5-a]피리미딘 -2-일)피페리딘-1-카르복실레이트 64의 합성

에탄올 (50 mL) 중 중간체 4 (5.00 g, 18.8 mmol) 및 1,3-디메틸피리미딘-2,4(1H,3H)-디온 63 (2.90 g, 20.7 mmol)의 용액에 소듐 에톡시드 (22 ml, 66 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 하룻밤 환류시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 물을 잔사에 첨가하고, pH를 HCl (1 N)을 이용하여 4 내지 5까지 조정하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO4로 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 농축시켜 조 중간체 64 (5 g, 75%)를 제공하였다.

단계 2: 5 - 클로로 -2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 65의 합성

POCl₃ (50 ml) 중 중간체 64 (5 g, 15.7 mmol)의 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 tert-부틸메틸 에테르로 세척하여 중간체 65 (4.5 g, 19 mmol)를 생성하였다.

단계 3: tert -부틸((3S)-1-(2-(피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트 66의 합성

메탄올 (50 ml) 중 중간체 65 (4.5 g, 19 mmol), (S)-tert-부틸피롤리딘-3-일카르바메이트 60(7.0 g, 38 mmol) 및 트리에틸아민 (7.7 g, 76 mmol)의 혼합물을 하룻밤 환류시켰다. 혼합물을 여과시키고, 여과액을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 CH₃CN에 용해시키고, K₂CO₃ (5.0 g, 38 mmol)과 함께 교반시켰다. 혼합물을 여과시키고, 여과액을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 H₂O 및 CH₂Cl₂로 처리하였다. 분리한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고 진공 하에 농축시켜 중간체 66 (1.65 g, 22　%)을 제공하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.45 (s, 9 H) 1.51-1.72 (m, 1 H) 1.83-1.93 (m, 2　H) 1.94-2.07 (m, 3 H) 2.20-2.39 (m, 1 H) 2.73-2.93 (m, 1 H) 3.11-3.28 (m, 1 H) 3.35-3.49 (m, 1 H) 3.53-3.74 (m, 1 H) 3.75-3.95 (m, 1 H) 4.24-4.45 (m, 1 H) 4.59-4.90 (m, 1　H) 5.96-6.19 (m, 1 H) 8.12-8.30 (m, 1 H).

단계 4 : tert -부틸((3S)-1-(2-(1-(6-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-5-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트 67의 합성

중간체 66 (250 mg, 0.624 mmol), 4-클로로-6-메틸퀴나졸린 12 (145 mg, 0.811 mmol) 및 DIPEA (355 μl, 2.058 mmol)를 2-메톡시에탄올 (4.2　ml)에서 혼합하고, 80℃에서 16시간 동안, 그리고 90℃에서 1시간 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 얼음물에 서서히 첨가하였다. 상기 현탁물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 갈색 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, 그 후 진공 오븐에서 16시간 동안 건조시켰다. 표제 중간체 67의 조 물질 (250 mg)을 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

m/z = 529.4 (M+H)⁺

단계 5 : (3S)-1-(2-(1-(6- 메틸퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)- 피라졸로 -[1,5-a]피리미딘-5-일)피롤리딘-3-아민 P49의 합성

중간체 67 (250 mg, 0.473 mmol)을 DCM (3.0 ml)에 용해시키고, TFA (362　μl, 4.729 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 Na₂CO₃ 용액으로 켄칭하고, 생성물을 DCM으로 3회 추출하였다. 유기 층을 증발시키고, 생성물을 100% DCM으로 시작하여 10% (MeOH/NH₃) 및 90% DCM까지의 구배를 이용하여 용출시킴으로써 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수 분획물의 증발 후, 요망되는 생성물 P49를 황색 폼으로 얻었다 (122 mg, 56%).

m/z = 429.3 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 8.63 - 8.53 (m, 2H), 7.82 (br. s, 1H), 7.71 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.63 (dd, J=1.5, 8.6 Hz, 1H), 6.30 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.91 (s, 1H), 5.84 - 5.77 (m, 1H), 4.29 - 4.17 (m, 1H), 3.72 - 2.99 (m, 6H), 2.47 - 1.58 (m, 13H)

100℃에서의 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆)δ ppm 8.52 (s, 1H), 8.42 (dd, J=0.7, 7.7 Hz, 1H), 7.86 - 7.81 (m, 1H), 7.68 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.58 (dd, J=1.8, 8.6 Hz, 1H), 6.24 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.84 - 5.79 (m, 1H), 4.26 - 4.18 (m, 1H), 3.66 - 3.43 (m, 5H), 3.19 - 3.12 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.40 - 2.30 (m, 1H), 2.14 - 1.92 (m, 3H), 1.86 - 1.59 (m, 6H)

(S)-1-(2-((R)-1-(6-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로-[1,5-a]--피리미딘-5-일)피롤리딘-3-아민 P50의 합성

생성물 P49 (100 mg, 0.233 mmol)를 SFC에 의해 정제하여 표제 화합물, 순수 거울상 이성체를 황백색 고형물 P50으로서 수득하였다 (51 mg, 51%).

SFC: R_t = 2.64분에서 100% 순수

m/z = 429.2 (M+H)⁺

P50 : [α]_D ²⁰ = -268.64° (589 nm, c = 0.354% (w/v), DMF, 20℃)

(S)-1-(2-((S)-1-(6-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로-[1,5-a]-피리미딘-5-일)피롤리딘-3-아민 P51의 합성

생성물 P49 (100 mg, 0.233 mmol)를 SFC에 의해 정제하여 표제 화합물, 순수 거울상 이성체를 황백색 고형물 P51로서 수득하였다 (17 mg, 17%).

SFC: R_t = 3.68분에서 100% 순수

m/z = 429.3 (M+H)⁺

tert-부틸4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트 P52의 합성

단계 1: tert - 부틸4 -(5- 클로로 -2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7-일)피페라진-1-카르복실레이트 69의 합성

CH₃CN (300 ml) 및 H₂O (300 ml) 중 중간체 6 (40.0 g, 125 mmol), tert-부틸피페라진-1-카르복실레이트 68 (25.7 g, 138 mmol) 및 NaHCO₃ (26.30 g, 313.5 mmol)의 혼합물 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공 하에 농축시켰다. 농축물을 CH₂Cl₂ (500 ml)로 처리하였다. 분리한 유기 층을 염수 (200 ml)로 세척하고, 여과시키고, 진공 하에 농축시켜 표제 중간체 69 (40 g, 수율: 68%)를 생성하였다.

단계 2: tert - 부틸4 -(5-( 아제티딘 -1-일)-2- (피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a] -피리미딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트 70의 합성

에탄올 (500 ml) 중 중간체 69 (40 g, 95 mmol), 아제티딘 히드로클로라이드 (47.7 g, 510　mmol) 및 TEA (155.0 g, 1530 mmol)의 혼합물을 하룻밤 환류시켰다. 혼합물을 여과시키고, 여과액을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂ 및 H₂O로 처리하였다. 분리한 유기 층을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (용출제: 디클로로메탄/메탄올 (1%의 TEA를 포함함) = 15/1). 생성물 분획물을 수집하고, 용매를 증발시켜 표제 중간체 70 (17.96 g, 수율: 42.71%)을 생성하였다.

m/z = 515 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.49 (s, 9 H) 1.52 - 1.68 (m, 4 H) 1.91 - 2.05 (m, 4　H) 2.37 - 2.41 (m, 2 H) 2.78 - 2.83 (m, 1 H) 3.16 - 3.18 (m, 1 H) 3.51-3.53 (m, 4 H) 3.67 - 3.68 (m, 4 H) 3.79 - 3.82 (m, 1 H) 4.09 - 4.4.13 (m, 4 H) 5.10 (s, 1 H) 6.04 (s, 1　H).

단계 3 : tert - 부틸4 -(5-( 아제티딘 -1-일)-2- (1-(5-메틸퀴나졸린-4-일) -피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트 P52의 합성

중간체 70 (3 g, 5.83 mmol), 중간체 26 (1.56 g, 8.75 mmol)의 혼합물을 2-메톡시에탄올 (100 mL)에 용해시키고, 그 후 디이소프로필에틸 아민 (2 mL, 11.66　mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 3일 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음물 용액에 부었다. 생성된 혼합물을 모든 얼음이 용융될 때까지 교반시키고, 그 후, 생성된 고형물을 여과 제거하였다. 상기 고형물을 연속적으로 물로 세척하고, 디클로로메탄에 용해시키고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔사를 디클로로메탄 및 메탄올을 사용하여 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 P52 (3.3 g, 87%)을 백색 연황색 고형물로서 생성하였다.

m/z = 584 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.39 - 1.49 (m, 9 H), 1.53 - 1.91 (m, 4 H), 2.03 - 2.36 (m, 4 H), 2.87 (s, 3 H), 3.29 - 3.51 (m, 8 H), 3.53 - 3.67 (m, 4 H), 3.90 - 4.04 (m, 2 H), 5.40 - 5.51 (m, 1 H), 5.64 (s, 1 H), 6.25 (br. s., 1 H), 7.27 - 7.42 (m, 1 H), 7.52 - 7.70 (m, 2 H), 8.47 (s, 1 H).

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-(피페라진-1-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린 P53의 합성

화합물 P52 (3 g, 5.139 mmol)를 DCM (150 ml)에 용해시키고, TFA (4 ml, 51　mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5일 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 Na₂CO₃ 용액으로 켄칭하고, 생성물을 DCM으로 3회 추출하였다. 유기 층을 증발시키고, 생성물을 100% DCM으로 시작하여 10% (MeOH/NH₃) 및 90% DCM까지의 구배를 이용하여 용출시킴으로써 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 관련 분획물의 증발 후, 요망되는 생성물 P53을 황색 폼으로 얻었다 (2.3 g, 92%).

m/z = 484 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.57 (br. s., 1 H), 1.63 - 1.76 (m, 2 H), 1.80 - 1.95 (m, 1 H), 2.15 - 2.27 (m, 2 H), 2.32 (quin, J=7.4 Hz, 2 H), 2.90 - 3.08 (m, 5 H), 3.42 - 3.67 (m, 7 H), 3.77 - 3.96 (m, 1 H), 4.02 (t, J=7.4 Hz, 4 H), 5.20 (s, 1 H), 5.52 (br. s., 1 H), 5.63 (s, 1 H), 7.28 - 7.39 (m, 1 H), 7.57 - 7.68 (m, 2 H), 8.49 (s, 1 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)-N-이소프로필피페라진-1-카르복스아미드 P54의 합성

화합물 P53 (550 mg, 1.058 mmol)을 디옥산에 현탁시키고, 휘니그 염기를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 10분 동안 교반시켰다. 그 후 실온에서 2-이소시아나토프로판 (125 μL, 1.269 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 용액에 과량의 MeOH를 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반시켰다. 용매를 증발시켰다. 잔사를 디클로로메탄 (50 ml)에 용해시키고, 생성된 용액을 물로 3회 (20 ml) 세척하였다. 수층을 디클로로메탄으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과시켰다. 용매를 제거하고, 잔사를 디에틸 에테르에서 미분화하고, 이 용매에서 하룻밤 교반시켰다. 백색 경 (light) 분말을 여과시키고, 오븐에서 50℃에서 건조시켜 생성물 P54 (85 mg, 14%)를 생성하였다.

m/z = 569 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.11 (d, J=6.4 Hz, 6 H), 1.52 (br. s., 1 H), 1.66 (d, J=9.9 Hz, 2 H), 1.84 (br. s., 1 H), 2.21 (br. s., 2 H), 2.28 (dt, J=14.5, 7.2 Hz, 2 H), 2.85 (br. s, 3 H), 3.30 - 3.62 (m, 10 H), 3.73 - 3.86 (m, 1 H), 3.98 (t, J=7.3 Hz, 4 H), 5.19 (s, 1 H), 5.42 - 5.81 (m, 3 H), 7.30 (d, J=5.7 Hz, 1 H), 7.50 - 7.70 (m, 2 H), 8.46 (s, 1 H)

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-(4-(메틸술포닐)피페라진-1-일)피라졸로-[1,5-a]피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린 P55의 합성

화합물 P53 (500 mg, 1.03 mmol)을 디클로로메탄 (25 mL)에 용해시키고, 디이소프로필에틸 아민 (0.445 mL, 2.58 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반시키고, 그 후 메탄술포닐 클로라이드 (0.2 mL, 1.55　mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 생성된 혼합물을 물에 붓고, 디클로로메탄으로 추출하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔사를 디클로로메탄 및 메탄올을 용출제로서 사용하여 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 P55 (71% 순수)를 생성하였다. 이것을 HPLC에 의해 추가로 정제하여 화합물 P55를 백색 고형물로서 생성하였다 (28 mg, 5%).

m/z = 562 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.58 (br. s., 1 H), 1.65 - 1.77 (m, 2 H), 1.78 - 1.94 (m, 1 H), 2.20 - 2.27 (m, 2 H), 2.27 - 2.38 (m, 2 H), 2.87 (s, 3 H), 2.91 (s, 3 H), 3.22 - 3.35 (m, 4 H), 3.44 - 3.68 (m, 6 H), 4.02 (t, J=7.4 Hz, 4 H), 5.26 (s, 1 H), 5.49 (br. s., 1 H), 5.67 (br. s., 1 H), 7.30 - 7.36 (m, 1 H), 7.58 - 7.67 (m, 2 H), 8.49 (s, 1 H)

7-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-2-메틸옥사졸로[5,4-d]피리미딘 P56의 합성

7-클로로-2-메틸옥사졸로[5,4-d]피리미딘 71의 합성

단계 1: 2 - 메틸옥사졸로[5,4-d]피리미딘 -7-올 71-b의 합성

아세트산 무수물 (80　mL) 중 5-아미노피리미딘-4,6-디올 71-a (5 g, 39 mmol)의 용액을 120℃에서 16시간 동안 가열하였다. 그 후, 상기 용액을 냉각시키고, 고형물을 여과 제거하고, Et₂O로 미분화하였다. 여과 후, 고형물을 오븐에서 건조시켜 중간체 71-b (4g, 68%)를 생성하였다.

m/z = 152 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.54 (s, 3 H) 8.18 (s, 1 H) 12.84 (br. s., 1 H)

단계 2: 7 - 클로로 -2- 메틸옥사졸로[5,4-d]피리미딘 71의 합성

중간체 71-b (100 mg, 0.66 mmol)를 불활성 분위기 하에 아세토니트릴 (20 mL)에 용해시켰다. DIPEA (0.28 mL, 2.5 당량) 및 POCl₃ (0.15 mL, 2.5 당량)을 적가하고, 혼합물을 70℃까지 가열하였다. 3시간 후, 용액을 진공에서 농축시키고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 포화 NaHCO₃ 용액으로 세척하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

LCMS m/z = 170 (M+H)⁺

iPrOH (2 mL) 중 중간체 71 (20 mg, 0.12 mmol)의 용액에 트리에틸 아민 (0.05 mL, 0.35 mmol, 3 당량) 및 중간체 8 (40 mg, 0.12 mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 상기 용액을 120℃에서 3시간 동안 마이크로웨이브를 조사하였다. 생성된 용액을 진공에서 농축시키고, 예비 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 P56 (21 mg, 37%)을 백색 고형물로서 생성하였다.

m/z = 476 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.49 - 1.79 (m, 4 H) 1.84 - 2.02 (m, 1 H) 2.20 - 2.34 (m, 2 H) 2.40 (br. s., 1 H) 2.53 (s, 3 H) 3.15 - 3.27 (m, 1 H) 3.36 - 3.54 (m, 4 H) 3.55 - 3.69 (m, 4 H) 3.99 (t, J=7.70 Hz, 4 H) 4.99 (d, J=13.32 Hz, 1 H) 5.22 (s, 1 H) 5.73 (s, 1 H) 6.53 (d, J=5.65 Hz, 1 H) 8.24 (s, 1 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(6-메틸-2-(메틸티오)퀴나졸린-4-일)-피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P57의 합성

중간체 8 (1000 mg, 2.41 mmol), 4-클로로-6-메틸-2-(메틸티오)퀴나졸린 72 (649.2 mg, 2.89 mmol) 및 DIPEA (0.83 ml, 4.8 mmol)를 2-메톡시-에탄올 (30 ml)에서 혼합하고, 50℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음물 용액에 부었다. 고형물이 형성되었으며, 이를 여과 제거하였다. 상기 고형물을 디클로로메탄에 용해시키고, 수득된 용액을 연속적으로 MgSO4로 건조시키고 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 P57 (1.2 g, 78% 순수)을 생성하였다.

m/z = 531 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.69 (br. s., 4 H), 2.04 (dd, J=13.1, 5.2 Hz, 1　H), 2.24 - 2.38 (m, 3 H), 2.40 (s, 3 H), 2.48 (s, 3 H), 3.37 - 3.41 (m, 1 H), 3.49 (t, J=4.5 Hz, 4 H), 3.62 - 3.76 (m, 4 H), 4.00 (t, J=7.5 Hz, 4 H), 4.13 (d, J=13.2 Hz, 1 H), 5.30 (s, 1 H), 5.82 (d, J=2.2 Hz, 1 H), 5.93 (s, 1 H), 7.76 (s, 1 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5-에틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P58의 합성

4-클로로-5-에틸퀴나졸린 73의 합성

단계 1: 5 - 에틸퀴나졸린 -4-올 73-b의 합성

포름아미드 (200　ml) 중 2-아미노-6-에틸벤조산 73-a (18.0 g, 109 mmol)의 혼합물을 130℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하였다. 필터 케이크를 진공에서 45℃에서 1시간 동안 건조시켰다. 생성된 고체 중간체 73-b를 회수하였다 (8.5 g, 순도: 90%, 수율: 40.3%).

단계 2: 4 - 클로로 -5- 에틸퀴나졸린 73의 합성

0℃에서 트리에틸아민 (19.51 ml, 140.0 mmol)을 옥시염화인 (100 ml) 중 5-에틸퀴나졸린-4　올 73-b (7.0 g, 40 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3시간 동안 환류시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 톨루엔 (100 ml)에 용해시키고, 혼합물을 얼음 (100 g) 내에 적가하였다. 유기 층을 연속적으로 물 (2 x 100 ml), 10% 중탄산나트륨 용액 (2 x 100 ml), 물 (2 x 100 ml) 및 염수 (1 x 100 ml)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 여과액을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (용출제: 10/1의 석유 에테르/에틸 아세테이트) 중간체 73 (3.313 g, 순도: 96%, 수율: 41.37%)을 제공하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.39 (t, J=7.46 Hz, 3 H) 3.48 (q, J=7.34 Hz, 2 H) 7.56 (d, J=7.34 Hz, 1 H) 7.84 (t, J=7.83 Hz, 1 H) 7.95 (d, J=8.31 Hz, 1 H) 8.96 (s, 1 H)

단계 3: 4 -(5-( 아제티딘 -1-일)-2-(1-(5- 에틸퀴나졸린 -4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P58의 합성

중간체 8 HCl 염 (500 mg, 1.2 mmol) 및 중간체 73 (348　mg, 1.5 mmol)의 혼합물을 2-메톡시에탄올 (15 ml)에 용해시키고, 트리에틸 아민 (0.415 ml, 2.4 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음물 용액에 부었다. 생성된 혼합물을 얼음이 용융될 때까지 교반시키고, 그 후 여과 제거하고, 고형물을 물로 세척하였다. 상기 고형물을 디클로로-메탄에 용해시키고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 고형물을 디클로로메탄 및 메탄올을 사용하여 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 P58을 백색 분말로서 생성하였다 (400 mg, 63%).

m/z = 499 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.05 - 1.23 (m, 3 H), 1.42 - 1.57 (m, 1 H), 1.66 (d, J=8.1 Hz, 2 H), 1.73 - 1.91 (m, 1 H), 2.06 - 2.35 (m, 4 H), 3.10 - 3.41 (m, 3 H), 3.40 - 3.55 (m, 5 H), 3.58 - 3.78 (m, 5 H), 3.89 - 4.06 (m, 4 H), 5.18 (s, 1 H), 5.35 - 5.66 (m, 2 H), 7.37 (d, J=7.0 Hz, 1 H), 7.50 - 7.68 (m, 2 H), 8.43 (s, 1 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5,7-디메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P59의 합성

4-클로로-5,7-디메틸퀴나졸린 74의 합성

단계 1: (E)-N-(3,5- 디메틸페닐 )-2-( 히드록시이미노 )아세트아미드 74-b의 합성

실온에서 황산나트륨 (390.7 g, 2.750 mol)을 물 (1500 mL) 중 클로랄 수화물 (76.5　g, 0.520 mol)의 용액 내에 첨가하였다. 그 후, 히드록실아민 히드로클로라이드 (91.8 g, 1.32 mol), 3,5-디메틸아닐린 74-a (50 g, 0.41　mol) 및 진한 염산 (36.5%, 50 mL)의 현탁물을 첨가하였다. 상기 혼합물을 45℃에서 1.5시간 동안, 그 후 75℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 침전된 갈색 고형물을 여과시키고, 냉각 물 및 헥산으로 세척하였다. 조 화합물을 진공 하에 건조시켜 중간체 74-b (70 g, 수율: 83.78%)를 제공하였다.

단계 2: 4 ,6- 디메틸인돌린 -2,3- 디온 74-c의 합성

중간체 74-b (15.00 g, 78.04 mmol)를 진한 황산 (75 ml)에 용해시켰다. 상기 혼합물을 80℃에서 30분 동안 교반시켰다. 그 후, 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 빙수 내에 부었다. 중간체 75-c가 침전되었으며, 이를 여과시키고, 물로 세척하였다 (8.50 g, 49.74%).

단계 3: 2 -아미노-4,6-디메틸벤조산 74-d의 합성

70℃에서 H₂O₂ (123.7 g, 1200 mmol)를 NaOH 용액 (1225 mL, 0.33 g/mL) 중 중간체 74-C (35.00 g, 199.8 mmol)의 혼합물에 5분에 걸쳐 첨가하였다. 상기 혼합물을 추가로 15분 동안 가열하고, 그 후 15℃까지 냉각시켰다. 얼음을 상기 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL x 2)로 추출하였다. 상기 용액의 pH를 0℃에서 진한 HCl의 첨가에 의해 8까지 조정하고, 아세트산을 이용하여 대략 6의 pH까지 산성화하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 중간체 74-d (17 g, 수율: 41.20%)를 제공하였다.

단계 4: 5 ,7- 디메틸퀴나졸린 -4-올 74-e의 합성

중간체 74-d (15.0 g, 90.8 mmol) 및 포름아미딘 아세테이트 (94.5 g, 908 mmol)의 혼합물을 150℃에서 5시간 동안 교반시켰다. H₂O를 상기 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하였다. 필터 케이크를 진공 하에 건조시켜 중간체 74-e (17.5 g, 수율: 39.83%)를 제공하였다.

단계 5: 4 - 클로로 -5,7- 디메틸퀴나졸린 74의 합성

0℃에서 트리에틸아민 (30.50 ml, 301.4 mmol)을 POCl₃ (300 g, 1.96 mol) 중 중간체 74-e (17.50 g, 100.5 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3시간 동안 환류시키고, 그 후 빙수 내에 부었다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 NaHCO₃ 용액 (1%) 및 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔에서의 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (용출제: 0/1로부터 1/1까지의 헥산/에틸 아세테이트). 요망되는 분획물을 수집하고, 농축시켜 중간체 74 (4.806 g, 23.69%)를 제공하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃)δ ppm 2.53 (s, 3 H) 3.00(s, 3 H) 7.34 (s, 1 H) 7.71 (s, 1 H) 8.90 (s, 1 H)

중간체 8 TFA 염 (300 mg, 0.66 mmol) 및 중간체 74 (177　mg, 0.92 mmol)의 혼합물을 2-메톡시에탄올 (15 ml)에 용해시키고, 트리에틸 아민 (0.34 ml, 1.97 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음물 용액에 부었다. 생성된 혼합물을 얼음이 용융될 때까지 교반시키고, 그 후 여과 제거하고, 고형물을 물로 세척하였다. 상기 고형물을 디클로로-메탄에 용해시키고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켰다. 고형물을 디클로로메탄 및 메탄올을 이용하여 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 P59를 백색 분말로서 생성하였다 (212 mg, 64%).

m/z = 499 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.52 (br. s., 1 H), 1.65 (d, J=5.1 Hz, 2 H), 1.74 - 1.90 (m, 1 H), 2.17 (br. s., 2 H), 2.28 (quin, J=7.3 Hz, 2 H), 2.41 (s, 3 H), 2.80 (s, 3 H), 3.35 - 3.58 (m, 6 H), 3.60 - 3.77 (m, 4 H), 3.98 (t, J=7.3 Hz, 4 H), 5.17 (s, 1 H), 5.41 (br. s., 1 H), 5.53 - 5.73 (m, 1 H), 7.14 (s, 1 H), 7.38 (s, 1 H), 8.42 (s, 1 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5-플루오로퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P60의 합성

중간체 8 TFA 염 (400 mg, 0.87 mmol) 및 4-클로로-5-플루오로-퀴나졸린 75 (208 mg, 1.14 mmol)의 혼합물을 2-메톡시에탄올 (20 ml)에 용해시키고, 트리에틸 아민 (0.604 ml, 3.5 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음물 용액에 부었다. 생성된 혼합물을 얼음이 용융될 때까지 교반시키고, 그 후 여과 제거하고, 고형물을 물로 세척하였다. 고형물을 디클로로메탄에 용해시키고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 백색 고형물 P60 (145　mg, 34%)을 생성하였다.

m/z = 489 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.57 - 1.90 (m, 4 H), 2.06 - 2.20 (m, 1 H), 2.26 - 2.43 (m, 3 H), 3.38 - 3.51 (m, 1 H), 3.54 (br. s., 4 H), 3.65 - 3.79 (m, 4 H), 3.92 (d, J=12.8 Hz, 1 H), 4.02 (t, J=7.4 Hz, 4 H), 5.23 (s, 1 H), 5.75 (s, 1 H), 5.80 (br. s., 1 H), 7.23 (dd, J=11.7, 7.9 Hz, 1 H), 7.61 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 7.68 - 7.79 (m, 1 H), 8.51 (s, 1　H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5-에톡시퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P61의 합성

4-클로로-5-에톡시퀴나졸린 76의 합성

단계 1: 5 - 에톡시퀴나졸린 -4-올 76-b의 합성

0℃에서 수소화나트륨 (8.00 g, 200 mmol, 광유 중 60%)을 에탄올 (300 ml)에 첨가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반시킨 후, 5-브로모퀴나졸린-4-올 76-a (15.00 g, 66.65　mmol) 및 구리 (1.70 g, 26.7 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 교반시키고, 그 후 실온까지 냉각시켰다. 혼합물을 셀라이트 (Celite) 패드를 통하여 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켰다. 잔사를 물에 녹이고, pH를 37% 염산 용액의 첨가에 의해 8까지 조정하였다. 상기 용액을 CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기 상을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (용출제: 2/1의 석유 에테르/에틸 아세테이트) 중간체 76-b (5 g, 수율: 35%)를 생성하였다.

단계 2: 4 - 클로로 -5- 에톡시퀴나졸린 76의 합성

옥살릴 클로라이드 (12.5 mmol)를 CH₃Cl (100 ml) 중 중간체 76-b (5.00 g, 26.3 mmol) 및 DMF (2.5 ml)의 용액에 적가하였다. 상기 용액을 하룻밤 환류시켰다. 반응 용액을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 유리 필터 상의 실리카 겔에서 정제하였다 (용출제: 1/1의 CH₂Cl₂/에틸 아세테이트). 요망되는 분획물을 수집하고, 용매를 증발시켜 중간체 77 (2.81　g, 수율: 49%)을 생성하였다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.34 - 1.48 (m, 3 H) 4.14 - 4.23 (m, 2 H) 7.15 - 7.23 (m, 1 H) 7.27 - 7.36 (m, 1 H) 7.77 - 7.87 (m, 1 H) 8.90 (s, 1 H)

중간체 8 TFA 염 (500 mg, 1.1 mmol) 및 4-클로로-5-에톡시-퀴나졸린 76 (320 mg, 1.5 mmol)의 혼합물을 2-메톡시에탄올 (20 ml)에 용해시키고, 트리에틸 아민 (0.566 ml, 3.3 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 4일 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음물 용액에 부었다. 생성된 혼합물을 얼음이 용융될 때까지 교반시키고, 그 후 여과 제거하고, 고형물을 물로 세척하였다. 고형물을 디클로로메탄에 용해시키고 MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 잔사를 생성하고, 이를 예비 HPLC에 의해 정제하여 P61을 백색 고형물로서 생성하였다 (76 mg, 13%).

m/z = 515 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.33 - 1.49 (m, 3 H), 1.51 - 1.92 (m, 4 H), 2.08 - 2.24 (m, 1 H), 2.25 - 2.43 (m, 3 H), 3.27 - 3.47 (m, 1 H), 3.48 - 3.63 (m, 4 H), 3.65 - 3.82 (m, 4 H), 3.87 - 4.10 (m, 5 H), 4.15 - 4.35 (m, 2 H), 5.22 (s, 1 H), 5.67 (br. s., 1 H), 5.83 (br. s., 1 H), 6.98 (d, J=7.7 Hz, 1 H), 7.31 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 7.55 - 7.69 (m, 1 H), 8.38 (br. s., 1 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5-(트리플루오로메틸)퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P62의 합성

4-클로로-5-(트리플루오로메틸)퀴나졸린 77의 합성

단계 1: 5 -( 트리플루오로메틸 ) 퀴나졸린 -4(3H)-온 77-b의 합성

n-부탄올 (180 ml) 중 2-아미노-6-(트리플루오로메틸)벤조산 77-a (9.00 g, 43.9 mmol) 및 포름아미딘 아세테이트 (22.84 g, 219.4 mmol)의 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 에탄올 (2 x 50 ml)로 세척하고, 그 후 진공에서 45℃에서 1시간 동안 건조시켜 중간체 77-b (9 g, 수율: 91%)를 제공하였다.

단계 2: 4 - 클로로 -5-( 트리플루오로메틸 ) 퀴나졸린 77의 합성

0℃에서 트리에틸 아민 (29.3 ml, 210 mmol)을 옥시염화인 (331 g, 2.16 mol) 중 중간체 77-b (8.00　g, 37.4 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 2시간 동안 환류시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트 (200 ml)에 용해시키고, 혼합물을 얼음 (200 g)에 첨가하였다. 분리한 유기 층을 연속적으로 물 (1 x 100 ml), 10% 중탄산나트륨 수용액 (2 x 100 ml), 물 (1 x100 ml) 및 염수 (1 x 100 ml)로 세척하였다. 분리한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (용출제: 1/0에서 1/1까지의 석유 에테르/에틸 아세테이트) 중간체 77 (7.97 g, 91.38%)을 제공하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 7.89 - 8.06 (m, 1 H) 8.22 (d, J=7.50 Hz, 1 H) 8.31 (d, J=8.38 Hz, 1 H) 9.11 (s, 1 H)

중간체 8 TFA 염 (300 mg, 0.65 mmol), 중간체 77 (183 mg, 0.78 mmol)의 혼합물을 2-메톡시에탄올 (20 mL)에 용해시키고, 그 후 디이소프로필에틸 아민 (0.45 mL, 2.6 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음물 용액에 부었다. 생성된 혼합물을 모든 얼음이 용융될 때까지 교반시키고, 그 후, 생성된 고형물을 여과 제거하였다. 고형물을 연속적으로 물로 세척하고, 디클로로메탄에 용해시키고, MgSO₄로 건조시키고, 농축시켜 P62 (250 mg, 70%)를 백색 경 고형물로서 생성하였다.

m/z = 539 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.37 - 1.60 (m, 1 H), 1.69 (br. s., 2 H), 1.82 (d, J=11.9 Hz, 1 H), 2.07 - 2.40 (m, 4 H), 3.32 - 3.59 (m, 5 H), 3.62 - 3.80 (m, 5 H), 4.02 (t, J=7.4 Hz, 4 H), 5.20 (s, 1 H), 5.46 - 5.70 (m, 2 H), 7.81 - 7.91 (m, 2 H), 7.94 - 8.01 (m, 1 H), 8.49 (s, 1 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(6-에틸-5-메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P63의 합성

4-클로로-6-에틸-5-메틸퀴나졸린 78의 합성

단계 1: 6 - 요오도 -5- 메틸퀴나졸린 -4-올 78-b의 합성

EtOH (500 ml) 중 6-아미노-3-요오도-2-메틸벤조산 78-a (35.0 g, 126 mmol) 및 포름아미딘 아세테이트 (59.0 g, 567 mmol)의 용액을 하룻밤 환류시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 에탄올로 세척하여 중간체 78-b (21 g, 수율: 52%)를 생성하였다.

단계 2: 5 - 메틸 -6- 비닐퀴나졸린 -4-올 78-c의 합성

EtOH (150 ml) 중 중간체 78-b (15.0 g, 52.4 mmol), 포타슘 트리플루오로(비닐)보레이트 (10.6 g, 79.0 mmol), Pd(dppf)₂Cl₂ (1.7 g, 2.6 mmol) 및 K₂CO₃ (21.74 g, 157.3 mmol)의 용액을 하룻밤 환류시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 H₂O 및 CH₂Cl₂로 처리하였다. 분리한 유기 층을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 시너지 (SYNERGI)에서의 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (용출제: TFA 물 /아세토니트릴 (30/70 (v/v)). 생성물 분획물을 수집하고, 유기 용매를 증발시켰다. pH를 포화 NaHCO₃을 이용하여 7까지 조정하였다. 수성 농축물을 CH₂Cl₂로 추출하였다. 분리한 유기 층을 진공 하에 농축시켜 중간체 78-c (3 g, 수율: 29%)를 생성하였다.

단계 3: 6 -에틸-5- 메틸퀴나졸린 -4-올 78-d의 합성

Pd/C (0.6 g)를 촉매로서 이용하여 MeOH (30 ml) 중 중간체 78-c (3.0 g, 16 mmol) 및 HCl (11.5 ml)의 용액을 실온에서 (50 psi) 15시간 동안 수소화하였다. H₂ (32.50 mg, 16.11 mmol)의 흡수 후, 촉매를 여과 제거하고, 메탄올로 세척하였다. 용매를 진공 하에 증발시켜 중간체 78-d (2.1 g, 수율: 66%)를 생성하였다.

단계 4: 4 - 클로로 -6-에틸-5- 메틸퀴나졸린 78의 합성

중간체 78-d (1.80 g, 9.56 mmol), 트리에틸아민 (2.220 ml, 15.95　mmol) 및 옥시염화인 (60 ml)의 혼합물을 2시간 동안 환류시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트 (200 ml)에 용해시키고, 혼합물을 얼음 (200 g) 내에 적가하였다. 분리한 유기 층을 연속적으로 물 (1 x 100 ml), 10% 중탄산나트륨 수용액 (2 x 100 ml), 물 (1 x100 ml) 및 염수 (1 x 100 ml)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 (MgSO₄), 여과시키고, 여과액을 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (용출제:1/0에서 5/1까지의 석유 에테르/에틸 아세테이트) 중간체 78 (1.434 g, 68.94%)을 제공하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.27 (t, J=7.65 Hz, 3 H) 2.88 (q, J=7.53 Hz, 2 H) 2.94 (s, 3 H) 7.75 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 7.87 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 8.89 (s, 1 H)

단계 5: 4 -(5-( 아제티딘 -1-일)-2- (1-(6-에틸-5-메틸퀴나졸린-4-일) -피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P63의 합성

중간체 8 TFA 염 (400 mg, 0.87 mmol), 중간체 78 (235 mg, 1.14 mmol)의 혼합물을 2-메톡시에탄올 (20 mL)에 용해시키고, 그 후 디이소프로필에틸 아민 (0.604 mL, 3.5 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 4일 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음물 용액에 부었다. 생성된 혼합물을 모든 얼음이 용융될 때까지 교반시키고, 그 후, 생성된 고형물을 여과 제거하였다. 고형물을 연속적으로 물로 세척하고, 디클로로메탄에 용해시키고, MgSO4로 건조시키고, 농축시키고, 잔사를 예비 HPLC에 의해 정제하여 P63 (198 mg, 44%)을 백색 경 고형물로서 생성하였다.

m/z = 513 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.26 (t, J=7.5 Hz, 3 H), 1.37 - 1.58 (m, 1 H), 1.67 (br. s., 2 H), 1.77 - 1.94 (m, 1 H), 2.12 - 2.39 (m, 6 H), 2.75 - 2.89 (m, 6 H), 3.52 (br. s., 5 H), 3.65 - 3.80 (m, 4 H), 4.02 (t, J=7.4 Hz, 4 H), 5.21 (s, 1 H), 5.61 (s, 2 H), 7.49 - 7.63 (m, 2 H), 8.40 (s, 1 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5,6-디메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P64의 합성

4-클로로-5,6-디메틸퀴나졸린 79의 합성

단계 1: 5 ,6- 디메틸퀴나졸린 -4-올 79-a의 합성

N₂ 하에 PdCl₂(dppf)₂ (114 mg, 0.180 mmol) 및 PPh₃ (183 mg, 0.700 mmol)을 NMP (15 ml) 중 중간체 78-b (1.0 g, 3.5 mmol), Me₄Sn (940 mg, 5.20 mmol) 및 CuI (67 mg, 0.35 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 마이크로웨이브 하에 150℃에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 생성된 혼합물을 물 내에 부었다. 침전물을 여과 제거하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (용출제: 1/10의 메탄올/에틸 아세테이트) 중간체 79-a (0.7 g, 수율: 27%)를 생성하였다.

단계 2: 4 - 클로로 -5,6- 디메틸퀴나졸린 79의 합성

중간체 79-a (700 mg, 4.02 mmol), 옥시염화인 (20 ml) 및 트리에틸아민 (2.80 ml, 20.1 mmol)의 혼합물을 2시간 동안 환류시켰다. 용매를 진공 하에 증발시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트 (50 ml)에 용해시키고, 혼합물을 얼음 (20g)에 첨가하였다. 분리한 유기 층을 연속적으로 물 (1 x 20 ml), 10% 중탄산나트륨 수용액 (2 x 20 ml), 물 (1　x20 ml) 및 염수 (1 x 20 ml)로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (용출제: 1/0에서 10/1까지의 석유 에테르/에틸 아세테이트) 중간체 79 (598.30 mg, 73%)를 제공하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 2.53 (s, 3 H) 2.92 (s, 3 H) 7.68 - 7.78 (m, 1 H) 7.80 - 7.89 (m, 1 H) 8.89 (s, 1 H).

단계 3: 4 -(5-( 아제티딘 -1-일)-2- (1-(5,6-디메틸퀴나졸린-4-일) 피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P64의 합성

중간체 8 TFA 염 (300 mg, 0.65 mmol), 중간체 79 (183 mg, 0.95 mmol)의 혼합물을 2-메톡시에탄올 (15 mL)에 용해시키고, 그 후 디이소프로필에틸 아민 (0.45 mL, 2.6 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 3일 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음물 용액에 부었다. 생성된 혼합물을 모든 얼음이 용융될 때까지 교반시키고, 그 후, 생성된 고형물을 여과 제거하였다. 고형물을 연속적으로 물로 세척하고, 디클로로메탄에 용해시키고, MgSO₄로 건조시키고, 농축시켜 화합물 P64 (150 mg, 45%)를 백색 경 고형물로서 생성하였다.

m/z = 499 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.67 (br. s., 3 H), 1.82 (d, J=11.7 Hz, 1 H), 2.09 - 2.37 (m, 4 H), 2.41 (s, 3 H), 2.67 - 2.86 (m, 4 H), 3.52 (br. s., 5 H), 3.65 - 3.83 (m, 4 H), 4.02 (t, J=7.4 Hz, 4 H), 5.21 (s, 1 H), 5.40 - 5.90 (m, 2 H), 7.48 - 7.59 (m, 2 H), 8.40 (s, 1 H)

7-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-2-메틸옥사졸로[5,4-d]피리미딘 P65의 합성

iPrOH (2 mL) 중 중간체 71 (20 mg, 0.12 mmol)의 용액에 트리에틸 아민 (0.05 mL, 0.35 mmol, 3 당량) 및 중간체 8 (40 mg, 0.12 mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 상기 용액을 120℃에서 3시간 동안 마이크로웨이브를 조사하였다. 생성된 용액을 진공에서 농축시키고, 예비 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 P65 (21 mg, 37%)를 백색 고형물로서 생성하였다.

m/z = 476 (M+H)⁺

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5,8-디메틸퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P66의 합성

중간체 8 TFA 염 (300 mg, 0.65 mmol), 4-클로로-5,8-디메틸-퀴나졸린 80 (175 mg, 0.9 mmol)의 혼합물을 2-메톡시에탄올 (15 mL)에 용해시키고, 그 후 디이소프로필에틸 아민 (0.45 mL, 2.6 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 3일 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음물 용액에 부었다. 생성된 혼합물을 모든 얼음이 용융될 때까지 교반시키고, 그 후, 생성된 고형물을 여과 제거하였다. 고형물은 순수하지 않았으며, 이것을 디클로로메탄에 용해시키고, 수층을 디클로로메탄으로 추출하고, 모든 유기물을 합하고, MgSO4로 건조시켰다.

용매를 제거하고, 잔사를 디클로로메탄 및 메탄올을 이용하여 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 화합물 P66을 백색 고형물로서 단리하였다 (150 mg, 46%).

m/z = 499 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 1.51 (br. s., 1 H), 1.64 (d, J=7.7 Hz, 2 H), 1.82 (d, J=7.9 Hz, 1 H), 2.18 (br. s., 2 H), 2.28 (quin, J=7.4 Hz, 2 H), 2.56 (s, 3 H), 2.78 (s, 3　H), 3.35 - 3.56 (m, 6 H), 3.61 - 3.74 (m, 4 H), 3.98 (t, J=7.4 Hz, 4 H), 5.17 (s, 1 H), 5.46 (br. s., 1 H), 5.62 (br. s., 1 H), 7.18 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 7.46 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 8.50 (s, 1 H)

메틸 4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린-2-카르복실레이트 P67의 합성

오토클레이브에서 중간체 15 (100 mg, 0.13 mmol)를 30 mL의 THF/MeOH (3/1)에 용해시켰다. 아세트산칼륨 (20 mg, 0.20 mmol, 1.5 당량), Pd(OAc)₂ (3 mg, 0.013　mmol, 0.1 당량) 및 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판 (11 mg, 0.027 mmol, 0.2 당량)을 첨가하였다. 오토클레이브를 50 바 (bar)의 일산화탄소 압력 하에 120℃까지 8시간 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 용액을 진공에서 농축시키고, DCM으로 희석시키고, 그 후 NaHCO₃의 포화 용액으로 세척하였다. 합한 유기물을 MgSO₄로 건조시키고, 여과 제거하고, 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 HPLC에서 추가로 정제하여 메틸 화합물 P67(43　mg, 60%)을 제공하였다.

m/z = 543 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, 420 K, DMSO-d ₆) δ ppm 1.42 - 1.59 (m, 1 H) 1.62 - 1.70 (m, 2 H) 1.77 - 1.88 (m, 1 H) 2.14 - 2.33 (m, 4 H) 2.80 (s, 3 H) 3.43 - 3.55 (m, 5 H) 3.64 - 3.74 (m, 5 H) 3.85 (s, 3 H) 3.99 (t, J=7.41 Hz, 4 H) 5.18 (s, 1 H) 5.61 (m, J=3.98 Hz, 1 H) 5.66 (s, 1 H) 7.39 (t, J=4.22 Hz, 1 H) 7.66 (d, J=4.30 Hz, 2 H)

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-5-메틸퀴나졸린-2-카르복실산 P68의 합성

30 mL의 THF/물 (3/1) 중 화합물 P67 (300 mg, 0.38 mmol)의 용액에 LiOH (28 mg, 1.16 mmol, 3 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반시켰다. 그 후 반응 혼합물을 HCl (물 중 1 M)을 이용하여 pH = 6까지 조정하고, 진공에서 농축시켰다. 조 물질을 HPLC에서 정제하여 화합물 P68 (110 mg, 53%)을 제공하였다.

m/z = 529 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.44 - 1.62 (m, 1 H) 1.64 - 1.76 (m, 2 H) 1.78 - 1.91 (m, 1 H) 2.16 - 2.37 (m, 4 H) 3.24 (s, 3 H) 3.46 - 3.59 (m, 5 H) 3.68 - 3.77 (m, 5 H) 4.02 (t, J=7.37 Hz, 4 H) 5.22 (s, 1 H) 5.54 - 5.88 (m, 2 H) 7.39 - 7.44 (m, 1 H) 7.68 - 7.73 (m, 2 H)

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-5-메틸-N-(메틸술포닐)퀴나졸린-2-카르복스아미드 P69의 합성

화합물 P68 (150 mg, 0.28 mmol)을 10 mL의 THF에 용해시키고, CDI (92 mg, 0.56 mmol, 2 당량)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 50℃까지 가열하고, 1시간 교반시킨 후, DBU (0.08 mL, 0.56 mmol, 2 당량) 및 메틸 술폰아미드 (70 mg, 0.74 mmol, 2.6 당량)를 상기 용액에 첨가하였다. 50℃에서 1시간 교반시킨 후, 상기 용액을 진공에서 농축시키고, 0%로부터 시작하여 10%의 DCM 중 MeOH까지의 구배를 이용하여 용출시켜 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 P69 (65 mg, 38%)를 제공하였다.

m/z = 606 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.46 - 1.60 (m, 1 H) 1.62 - 1.73 (m, 2 H) 1.77 - 1.89 (m, 1 H) 2.15 - 2.38 (m, 4 H) 2.80 (s, 3 H) 3.27 (s, 3 H) 3.42 - 3.60 (m, 5 H) 3.64 - 3.77 (m, 5 H) 4.00 (t, J=7.42 Hz, 4 H) 5.20 (s, 1 H) 5.68 - 5.77 (m, 2 H) 7.38 - 7.47 (m, 1 H) 7.65 - 7.76 (m, 2 H)

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-N,5-디메틸퀴나졸린-2-카르복스아미드 P70의 합성

DMF (5 mL) 중 화합물 P68 (240 mg, 0.45 mmol)의 용액에 DIPEA (0.23 mL, 1.36 mmol, 3 당량), 메틸 아민 (0.08 mL, 0.90 mmol, 2 당량) 및 HATU (431.5 mg, 1.135 mmol, 2.5 당량)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 물 (5 mL)을 첨가하고, 상기 용액을 진공에서 농축시키고, HPLC에서 정제하여 화합물 P70 (87 mg, 36%)을 제공하였다.

m/z = 542 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 1.45 - 1.60 (m, 1 H) 1.67 (br. s., 2 H) 1.76 - 1.90 (m, 1 H) 2.10 - 2.24 (m, 2 H) 2.28 (quin, J=7.37 Hz, 2 H) 2.79 - 2.87 (m, 6 H) 3.35 - 3.62 (m, 6 H) 3.61 - 3.75 (m, 4 H) 3.98 (t, J=7.37 Hz, 4 H) 5.19 (s, 1 H) 5.54 (br. s., 1 H) 5.68 (br. s., 1 H) 7.29 - 7.42 (m, 1 H) 7.58 - 7.72 (m, 2 H) 8.04 (br. s., 1 H)

4-(2-(5-(아제티딘-1-일)-7-모르폴리노피라졸로[1,5-a]피리미딘-2-일)-피페리딘-1-일)-N-(시클로프로필술포닐)-5-메틸퀴나졸린-2-카르복스아미드 P71의 합성

화합물 P68 (150 mg, 0.28 mmol)을 10 mL의 THF에 용해시키고, CDI (92 mg, 0.56 mmol, 2 당량)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 50℃까지 가열하고, 1시간 교반시킨 후, DBU (0.12 mL, 0.85 mmol, 3 당량) 및 시클로프로필 술폰아미드 (85 mg, 0.709　mmol, 2.5 당량)를 상기 용액에 첨가하였다. 50℃에서 1시간 교반시킨 후, 상기 용액을 진공에서 농축시키고, 0%로부터 시작하여 10%의 DCM 중 MeOH까지의 구배를 이용하여 용출시켜 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하고, HPLC에서 추가로 정제하여 화합물 P71 (65 mg, 44%)을 제공하였다.

m/z = 632 (M+H)⁺

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 0.99 - 1.10 (m, 2 H) 1.13 - 1.26 (m, 2 H) 1.44 - 1.93 (m, 4 H) 2.12 - 2.35 (m, 4 H) 2.81 (s, 3 H) 2.95 - 3.02 (m, 1 H) 3.41 - 3.60 (m, 5 H) 3.63 - 3.75 (m, 5 H) 3.99 (t, J=7.42 Hz, 4 H) 5.19 (s, 1 H) 5.65 - 5.77 (m, 2 H) 7.42 (d, J=6.67 Hz, 1 H) 7.67 - 7.75 (m, 2 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(2-(이속사졸-4-일)-5-메틸퀴나졸린-4-일)-피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P72의 합성

중간체 15 (200 mg, 0.369 mmol), 이속사졸-4-일보론산 (cas = 1008139-25-0, 83 mg, 0.738 mmol) 및 K₂CO₃ (cas = 584-08-7, 102 mg, 0.738 mmol)을 1,4-디옥산 (3 ml) 및 물 (0.3 ml)에 용해시켰다. 상기 용액을 N₂에 의해 5분 동안 탈기시켰다. 반응 튜브를 밀봉하고, 혼합물을 마이크로웨이브 오븐에서 120℃에서 30분 동안 가열하였다. 그 후, 상기 용액을 DCM 및 물로 희석시켰다. 생성물을 DCM으로 2회 추출하였다. 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발 건조시키고, 조 물질을 0%에서 시작하여 5% MeOH까지의, DCM 중 MeOH의 구배를 이용하여 용출시켜 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 관련 분획물의 증발 후, 갈색 고형물을 얻었다. 고형물을 고온 DIPE에서 미분화하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 침전물을 여과시켰다. 생성물은 여전히 순수하지 않기 때문에, 갈색 고형물을 다시 한 번 더 고온 DIPE로 미분화하였다. 냉각 후, 표제 화합물 P72를 여과에 의해 수득하였다 (21 mg, 10%).

m/z = 552.3 (M+H).

¹H NMR (400 MHz, DMSO -d ₆ ) δ ppm 1.25 - 2.46 (m, 8 H) 2.66 (s, 3 H) 3.24 - 4.72 (m, 14 H) 5.09 - 9.25 (m, 8 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(2-(1,4-디메틸-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)-5-메틸-퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P73의 합성

중간체 15 및 1,4-디메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-1,2,3-트리아졸을 출발 재료로 사용하여 화합물 P72와 동일한 방식으로 화합물 P73을 제조하였다.

m/z = 580 (M+H).

MP : 238,91℃.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 1.29 - 2.05 (m, 4 H) 2.12 - 2.49 (m, 4 H) 2.55 - 2.76 (m, 3 H) 2.82 - 3.00 (m, 3 H) 3.13 - 4.16 (m, 14 H) 4.30 - 4.49 (m, 3 H) 4.93 - 6.11 (m, 3 H) 7.27 - 7.34 (m, 1 H) 7.53 - 7.79 (m, 2 H)

4-(5-(아제티딘-1-일)-2-(1-(5-메톡시퀴나졸린-4-일)피페리딘-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일)모르폴린 P74의 합성

중간체 8 TFA 염 (300 mg, 0.65 mmol), 4-클로로-5-메톡시-퀴나졸린 81 (153 mg, 0.78 mmol)의 혼합물을 2-메톡시에탄올 (15 mL)에 용해시키고, 그 후 디이소프로필에틸 아민 (0.45 mL, 2.6 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음물 용액에 부었다. 생성된 혼합물을 모든 얼음이 용융될 때까지 교반시키고, 그 후, 생성된 고형물을 여과 제거하였다. 고형물을 연속적으로 물로 세척하고, 디클로로메탄에 용해시키고, MgSO₄로 건조시키고, 농축시켜 화합물 P74 (267 mg, 81%)를 백색 경 고형물로서 생성하였다.

m/z = 501 (M+H).

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 1.58 - 1.82 (m, 4 H), 2.02 - 2.14 (m, 1 H), 2.22 - 2.39 (m, 3 H), 3.28 - 3.41 (m, 1 H), 3.45 - 3.56 (m, 4 H), 3.66 - 3.75 (m, 4 H), 3.92 (s, 3 H), 3.99 (t, J=7.5 Hz, 5 H), 5.18 (s, 1 H), 5.63 (s, 1 H), 5.68 (br. s., 1 H), 6.95 (d, J=7.5 Hz, 1 H), 7.28 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 7.59 (t, J=8.1 Hz, 1 H), 8.35 (s, 1 H).

B. 약리학적 실시예

B.1 항바이러스 활성

블랙 384웰 투명-바닥 마이크로타이터 (microtiter) 플레이트 (네덜란드 암스테르담 소재의 코닝 (Corning))를 에코 액체 핸들러 (echo liquid handler) (미국 캘리포니아주 서니베일 소재의 랩사이트 (Labcyte))를 사용하여 어쿠스틱 드롭 이젝션 (acoustic drop ejection)을 통하여 충전시켰다. 200 nL의 화합물 스톡 용액 (100% DMSO)을 분석 플레이트로 옮겼다. 화합물을 9회 연속 4배 희석시킨 것을 제조하여 사분면당 동일 화합물 농도를 생성하였다. 10 μL의 배양 배지를 각각의 웰에 첨가함으로써 분석을 개시하였다 (페놀 레드 (phenol red)를 포함하지 않는 RPMI, 10% FBS-열 불활성화, 0.04% 겐타마이신 (50 mg/mL)). 모든 첨가 단계를 멀티드롭 디스펜서 (multidrop dispenser) (벨기에 에렘보데겜 소재의 서모 사이언티픽 (Thermo Scientific))를 사용하여 행하였다. 다음, 배양 배지에 희석시킨 rgRSV224 바이러스 (MOI = 1)를 상기 플레이트에 첨가하였다. rgRSV224 바이러스는 추가의 GFP 유전자를 포함하는 엔지니어링된 바이러스이며 (문헌[Hallak LK, Spillmann D, Collins PL, Peeples ME. Glycosaminoglycan sulfation requirements for respiratory syncytial virus infection; Journal of virology (2000), 74(22), 10508-13]), NIH (미국 메릴랜드주 베데스다 소재)로부터 허가를 받았다. 마지막으로, 20 μL의 HeLa 세포 현탁물 (3,000개의 세포/웰)을 도말하였다. 배지, 바이러스- 및 모크 (mock)-감염된 대조구를 각각의 테스트에 포함시켰다. 웰은 부피당 0.05%의 DMSO를 포함한다. 세포를 5% CO2 분위기에서 37℃에서 인큐베이션하였다. 바이러스 노출한지 3일 후, 사내 개발된 MSM 레이저 현미경 (벨기에 비르세 소재의 티보테크 (Tibotec))에 의해 세포에서의 GFP 발현을 측정함으로써 바이러스 복제를 정량화하였다. EC50을 GFP 발현에 대한 50% 저해 농도로서 정의하였다. 이와 동시에, 화합물을 화이트 384웰 마이크로타이터 플레이트 (코닝) 세트에서 3일 동안 인큐베이션하고, 제조업자의 지시에 따라 ATPlite 키트 (벨기에 자벤템 소재의 퍼킨엘머)를 이용하여 세포의 ATP 함량을 측정함으로써 HeLa 세포에서의 화합물의 세포독성을 결정하였다. CC₅₀은 세포독성에 대한 50% 농도로서 정의되었다.

[표 B-1]

C. 예상 조성물 실시예

이 실시예 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, "활성 성분"은 화학식 I의 최종 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 이들의 용매화물 및 입체화학적 이성체 형태 및 호변이성체에 관련된다.

본 발명의 제형을 위한 전형적인 레시피 (recipe)의 예는 하기와 같다:

C.1. 정제

활성 성분 5 내지 50 mg

인산이칼슘 20 mg

락토스 30 mg

탤컴 10 mg

스테아르산마그네슘 5 mg

감자 전분 200 mg이 되게 하는 양

이 실시예에서, 활성 성분을 동일한 양의 본 발명에 따른 임의의 화합물, 특히 동일한 양의 임의의 예시된 화합물로 대체할 수 있다.

C.2. 현탁액

각각 1 밀리리터가 활성 화합물들 중 1가지 1 내지 5 mg, 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스 50 mg, 벤조산나트륨 1 mg, 소르비톨 500 mg 및 1 ml이 되게 하는 양의 물을 포함하도록 수성 현탁액을 경구 투여용으로 제조한다.

C.3. 주사제

물 중 10 부피%의 프로필렌 글리콜에서 1.5 중량%의 본 발명의 활성 성분을 교반시킴으로써 비경구 조성물을 제조한다.

C.4. 연고

활성 성분 5 내지 1000 mg

스테아릴 알코올 3 g

라놀린 5 g

백색 페트롤륨 (White petroleum) 15 g

물 100 g이 되게 하는 양

합리적인 변화는 본 발명의 범주를 벗어나는 것으로 간주되지 않는다. 이와 같이 설명된 본 발명은 당업자에 의해 많은 방식으로 변화될 수 있음이 명백하다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물 (이의 임의의 입체화학적 이성체 형태를 포함함), 또는 이의 제약상 허용가능한 산 부가염:
[화학식 I]

(여기서,
R¹은 수소, 히드록시, C_1- ₄알킬, 모노- 또는 디(C_1-4알킬)아미노, 또는 헤테로시클릴¹이며;
R²는 수소 또는 C_1-4알킬이고;
R³은 C_1- ₄알킬, 할로, C_3- ₆시클로알킬, 모노- 또는 디(C_1-4알킬)아미노, 또는 헤테로시클릴²이며;
R⁴는 수소, C_1-6알킬, 히드록시, 또는 할로이고;
헤테로시클릴¹은 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 또는 모르폴리닐이며, 각각의 헤테로시클릴¹은 C_1- ₄알킬, 히드록시, 할로, 폴리할로C₁ _- ₄알킬, C_1-4알킬옥시카르보닐, 아미노, C_1- ₄알킬아미노카르보닐, 또는 C_1- ₄알킬술포닐로부터 선택되는 1개 또는 2개의 치환체로 임의로 치환되고;
헤테로시클릴²는 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 또는 모르폴리닐이며, 각각의 헤테로시클릴²는 C_1- ₄알킬, 히드록시, 할로, 폴리할로C₁ _- ₄알킬, C_1-4알킬옥시카르보닐, 아미노, C_1- ₄알킬옥시카르보닐아미노, 또는 C_1- ₄알킬술포닐로부터 선택되는 1개 또는 2개의 치환체로 임의로 치환되고;
Het는 푸라닐, 티오페닐, 피라졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 시놀리닐, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 1,5-나프티리디닐, 1,6-나프티리디닐, 1,7-나프티리디닐, 1,8-나프티리디닐, 피리도[2,3-d]피리미디닐, 피리도[3,2-d]피리미디닐, 9H-퓨리닐, 티아졸로[5,4-d]피리미디닐, 7H-피롤로[2,3-d]피리미디닐, 옥사졸로[5,4-d]피리미디닐, 티에노[2,3-d]피리미디닐, 또는 티에노[3,2-d]피리미디닐로부터 선택되며, 각각의 Het는 할로, C_1- ₄알킬, C_1- ₄알킬옥시, C_1- ₄알킬티오, 히드록시, 아미노, 모노- 또는 디(C_1-4알킬)아미노, 히드록시카르보닐, C_1- ₄알킬옥시카르보닐, C_1- ₄알킬술포닐아미노, 아미노카르보닐, 트리플루오로메틸, C_1- ₄알킬옥시카르보닐아미노, 디(C_1-4알킬옥시카르보닐)아미노, C_1- ₄알킬술포닐아미노카르보닐, C_1- ₄알킬아미노카르보닐, C_1- ₄알킬옥시C₁ _- ₆알킬옥시카르보닐아미노, 디(C_1-4알킬)아미노술포닐아미노카르보닐, C_3- ₆시클로알킬술포닐아미노카르보닐, HO-NH-(C=NH)-; 각각 임의로 1개 또는 2개의 C_1- ₄알킬로 치환된 옥사졸릴 또는 트리아졸릴로부터 각각 독립적으로 선택되는 1개, 2개 또는 3개의 치환체로 임의로 치환됨).
제1항에 있어서,
R¹이 수소, C_1- ₄알킬, 모노- 또는 디(C_1-4알킬)아미노, 또는 헤테로시클릴¹이며;
R²가 수소 또는 C_1-4알킬이고;
R³이 C_3-6시클로알킬 또는 헤테로시클릴²이며;
R⁴는 수소이고;
헤테로시클릴¹은 피페라지닐 또는 모르폴리닐이며, 각각의 헤테로시클릴¹은 C_1-4알킬옥시카르보닐, C_1- ₄알킬아미노카르보닐, 또는 C_1- ₄알킬술포닐로부터 선택되는 1개의 치환체로 임의로 치환되고;
헤테로시클릴²는 아제티디닐, 또는 피롤리디닐이며, 각각의 헤테로시클릴²는히드록시 또는 아미노로부터 선택되는 1개의 치환체로 임의로 치환되고;
Het는 퀴나졸리닐, 피리도[2,3-d]피리미디닐, 티아졸로[5,4-d]-피리미디닐, 7H-피롤로[2,3-d]피리미디닐, 옥사졸로[5,4-d]피리미디닐, 또는 티에노[2,3-d]피리미디닐로부터 선택되며, 각각의 Het는 할로, C_1- ₄알킬, C_1- ₄알킬옥시, C_1- ₄알킬티오, 히드록시, 히드록시카르보닐, C_1- ₄알킬옥시카르보닐, C_1- ₄알킬술포닐아미노, 아미노카르보닐, 트리플루오로메틸, C_1- ₄알킬옥시카르보닐아미노, 디(C_1-4알킬옥시카르보닐)아미노, C_1- ₄알킬술포닐아미노카르보닐, C_1- ₄알킬아미노카르보닐, C_1- ₄알킬옥시C₁ _- ₆알킬옥시카르보닐아미노, 디(C_1-4알킬)아미노술포닐아미노카르보닐, C_3- ₆시클로알킬술포닐아미노카르보닐, HO-NH-(C=NH)-; 각각 임의로 1개 또는 2개의 C_1- ₄알킬로 치환된 옥사졸릴 또는 트리아졸릴로부터 각각 독립적으로 선택되는 1개, 2개 또는 3개의 치환체로 임의로 치환되는 화합물.
제1항에 있어서, R¹은 헤테로시클릴¹이며, R²는 수소이고, R³은 헤테로시클릴²인 화합물.
제1항에 있어서,R¹은 수소이며, R²는 C_1- ₄알킬이고, R³은 헤테로시클릴²인 화합물.
제1항에 있어서, R¹은 수소이며, R²는 수소이고, R³은 헤테로시클릴²인 화합물.
제1항에 있어서, R¹은 C_1- ₄알킬이며, R²는 수소이고, R³은 헤테로시클릴²인 화합물.
제1항에 있어서, R¹은 수소이며, R²는 수소이고, R³은 C_1- ₄알킬인 화합물.
제1항에 있어서, R¹은 수소이며, R²는 수소이고, R³은 C_3- ₆시클로알킬인 화합물.
제1항에 있어서, Het는 퀴나졸리닐인 화합물.
제약상 허용가능한 담체와, 치료적 활성량(therapeutically active amount)의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 청구된 화합물을 포함하는, 호흡기 세포융합 바이러스(respiratory syncytial virus) 감염의 치료용 제약 조성물.
치료적 활성량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 청구된 화합물을 제약상 허용가능한 담체와 혼합하는 것을 포함하는, 호흡기 세포융합 바이러스 감염의 치료용 제약 조성물의 제조 방법.
의약으로 사용하기 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 청구된 화합물.
호흡기 세포융합 바이러스 감염의 치료에서 사용하기 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 청구된 화합물.