KR102273108B1 - 프로바이오틱 활성을 갖는 신규 락토바실러스 플란타럼 kc23 균주 및 참당귀 추출물을 이용한 발효조성물 - Google Patents
프로바이오틱 활성을 갖는 신규 락토바실러스 플란타럼 kc23 균주 및 참당귀 추출물을 이용한 발효조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 신규한 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P) 및 참당귀 추출물을 이용한 발효조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 참당귀잎 추출물 또는 참당귀 지상부 추출물을 뛰어난 내산성, 내담즙성, 항균활성 및 우유단백질 분해능이 우수한 프로바이오틱 활성을 갖는 신규한 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)으로 발효시킨 참당귀잎 추출물 또는 참당귀 지상부 추출물의 유산균 발효물 및 이를 함유하는 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명에서 선별한 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)은 내산성, 내담즙성 및 항균활성이 우수하여 유산균의 장내 생존성을 높여주어 프로바이오틱스 기능성이 뛰어나며, 우유단백질 형성능이 우수하여 발효유 제조를 위한 스타터로서 이용할 수 있다.
또한, 본 발명의 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물을 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P)으로 발효시킨 참당귀잎 추출물또는 참당귀지상부 추출물의 유산균 발효물은 식물성 소재(발효김치)로부터 분리된 식물성 유산균을 이용한 발효를 통해 비교적 신속하게 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물을 발효시킬 수 있고, 참당귀잎 또는 참당귀지상부 성분을 용매를 이용하여 1차 추출물로 제조 후, 발효시킴으로써 다량의 발효가 용이하여 경제적이며 원물을 발효시키는 것에 비해 취급이 간편하다.
본 발명의 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물을 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P)으로 발효시킨 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물의 유산균 발효물을 이용하여 면역기능 향상, 혈당저하 효과, 인지기능 개선 등의 여러 건강효과가 있는 참당귀 소재의 효능을 가지면서, 발효 처리를 통해 생약재 추출성분 고유의 쓴맛을 저감시킴으로써 관능이 개선된 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물 함유 발효유를 제조할 수 있다.
또한, 본 발명의 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물을 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P)으로 발효시킨 참당귀잎 추출물또는 참당귀지상부 추출물의 유산균 발효물은 식물성 소재(발효김치)로부터 분리된 식물성 유산균을 이용한 발효를 통해 비교적 신속하게 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물을 발효시킬 수 있고, 참당귀잎 또는 참당귀지상부 성분을 용매를 이용하여 1차 추출물로 제조 후, 발효시킴으로써 다량의 발효가 용이하여 경제적이며 원물을 발효시키는 것에 비해 취급이 간편하다.
본 발명의 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물을 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P)으로 발효시킨 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물의 유산균 발효물을 이용하여 면역기능 향상, 혈당저하 효과, 인지기능 개선 등의 여러 건강효과가 있는 참당귀 소재의 효능을 가지면서, 발효 처리를 통해 생약재 추출성분 고유의 쓴맛을 저감시킴으로써 관능이 개선된 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물 함유 발효유를 제조할 수 있다.
Description
본 발명은 신규한 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P) 및 참당귀 추출물을 이용한 발효조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물을 뛰어난 내산성, 내담즙성, 항균활성 및 우유단백질 분해능이 우수한 프로바이오틱 활성을 갖는 신규한 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)으로 발효시킨 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물의 유산균 발효물 및 이를 함유하는 식품 조성물에 관한 것이다.
유산균은 탄수화물을 이용하여 젖산을 생성하는 미생물로서 오랫동안 산업에 이용되어 왔으며, 발효공정을 통해 탄수화물과 단백질 및 지방성분 등을 분해하여 풍미를 증진시키고 영양학적 가치를 높여준다. 프로바이오틱스(Probiotics) 유산균은 체내에 들어가서 정장효과를 포함하는 유익한 기능성을 가지는 살아있는 균을 말하는 것으로, 장내에서 젖산을 생성하여 장내환경을 산성으로 만들어 산성에 견디지 못하는 유해균을 억제시키고, 산성에서 생육이 잘 되는 유익균의 증식 여건을 조성하여 정상 장내 세균총의 균형을 유지하고 배변활동 원활에 도움을 줄 수 있다.
유산균을 비롯한 세균들이 프로바이오틱스로 인정받기 위해서는 위산과 담즙산에 살아남아 소장까지 도달하여 장에서 증식하고 정착하여야 하며, 장관 내에서 유효한 효과를 나타내어야 한다. 또한, 발효공정을 통해서는 추가적으로 유당불내증을 개선하고 면역기능 개선 등 다양한 효능을 기대할 수 있어 소비자들의 관심이 높으며 이에 대한 다양한 연구가 진행되고 있다. 이와 같이 다양화되고 있는 제품 유형과 소비자 성향을 충족시켜주기 위해서 우수한 프로바이오틱스의 지속적인 개발이 필요하다.
한편, 유산균을 이용한 발효처리를 통해 생약재 추출성분의 쓴맛을 저감시켜주는 등의 효과를 가져올 수 있어, 이에 대한 다양한 시도가 있어왔다. 이에 종래 보고된 바 없는 생약재 추출성분을 이용하여 고유의 효능을 유지하면서 발효처리를 통해 관능을 개선시키는 기술에 대한 연구가 필요한 실정이다.
본 발명은 참당귀잎 추출물 또는 참당귀 지상부 추출물을 뛰어난 내산성, 내담즙성, 항균활성 및 우유단백질 분해능이 우수한 프로바이오틱 활성을 갖는 신규한 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)으로 발효시킨 참당귀잎 추출물 또는 참당귀 지상부 추출물의 유산균 발효물 및 이를 함유하는 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 D-갈락토오스(D-galactose), 락토오스(Lactose) 및 라피노오스(Raffinose)에 양성반응을 나타내는 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P)을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)은, 바람직하게 내산성, 내담즙성, 항균활성, 우유단백질 분해능 중 선택되는 하나 이상의 성질을 갖는 것일 수 있다.
한편, 본 발명은 참당귀 추출물을 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P)으로 발효시킨 참당귀 추출물의 유산균 발효물을 제공한다.
한편, 본 발명은 상기 참당귀 추출물의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물을 제공한다. 이때, 상기 식품은, 바람직하게 발효유일 수 있다.
본 발명에서 선별한 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)은 내산성, 내담즙성 및 항균활성이 우수하여 유산균의 장내 생존성을 높여주어 프로바이오틱스 기능성이 뛰어나며, 우유단백질 형성능이 우수하여 발효유 제조를 위한 스타터로서 이용할 수 있다.
본 발명의 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물을 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P)으로 발효시킨 참당귀잎 추출물또는 참당귀지상부 추출물의 유산균 발효물은 식물성 소재(발효김치)로부터 분리된 식물성 유산균을 이용한 발효를 통해 비교적 신속하게 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물을 발효시킬 수 있고, 참당귀잎 또는 참당귀지상부 성분을 용매를 이용하여 1차 추출물로 제조 후, 발효시킴으로써 다량의 발효가 용이하여 경제적이며 원물을 발효시키는 것에 비해 취급이 간편하다.
본 발명의 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물을 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P)으로 발효시킨 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물의 유산균 발효물을 이용하여 면역기능 향상, 혈당저하 효과, 인지기능 개선 등의 여러 건강효과가 있는 참당귀 소재의 효능을 가지면서, 발효 처리를 통해 생약재 추출성분 고유의 쓴맛을 저감시킴으로써 관능이 개선된 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물 함유 발효유를 제조할 수 있다.
도 1은 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)의 광학현미경(A) 및 주사전자현미경(B) 관찰 사진이다.
도 2는 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)의 유전학적 계통수(Phylogenetic tree)를 나타낸 그림이다.
도 3은 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)의 생장률(A)과 pH 변화(B)를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)의 10% 탈지유에서 유리 티로신 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)(A)와 비교균주 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus) CSLA (B)의 우유단백질 분해능을 비교한 그림이다.
도 6은 참당귀잎 추출물을 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)을 이용하여 발효시킨 참당귀잎 추출물의 유산균 발효물에 대한 발효 특성(생균수 측정)을 나타낸 그래프이다. 비교를 위해 Y430A 균주 및 두 균주를 혼합하여 사용하였다.
도 7은 참당귀잎 추출물을 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)을 이용하여 발효시킨 참당귀잎 추출물의 유산균 발효물을 혼합한 발효유 제조 공정을 나타낸 그림이다.
도 8은 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)과 비교균주 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus) CSLA를 37℃에서 12시간 발효 후 커드형성능을 비교한 그림이다.
도 2는 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)의 유전학적 계통수(Phylogenetic tree)를 나타낸 그림이다.
도 3은 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)의 생장률(A)과 pH 변화(B)를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)의 10% 탈지유에서 유리 티로신 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)(A)와 비교균주 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus) CSLA (B)의 우유단백질 분해능을 비교한 그림이다.
도 6은 참당귀잎 추출물을 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)을 이용하여 발효시킨 참당귀잎 추출물의 유산균 발효물에 대한 발효 특성(생균수 측정)을 나타낸 그래프이다. 비교를 위해 Y430A 균주 및 두 균주를 혼합하여 사용하였다.
도 7은 참당귀잎 추출물을 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)을 이용하여 발효시킨 참당귀잎 추출물의 유산균 발효물을 혼합한 발효유 제조 공정을 나타낸 그림이다.
도 8은 본 발명의 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM12351P)과 비교균주 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus) CSLA를 37℃에서 12시간 발효 후 커드형성능을 비교한 그림이다.
본 발명은 D-갈락토오스(D-galactose), 락토오스(Lactose) 및 라피노오스(Raffinose)에 양성반응을 나타내는 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P)을 제공한다.
본 발명에서는 강원지역에서 제조된 전통김치로부터 락토오스(lactose)와 라피노오스(raffinose)를 포함하여 분해능을 가지며, 내산성, 내담즙성 및 우유단백질 분해능이 우수한 유산균을 분리 선발하고, 분리균의 형태 및 생화학적 특성과 항균성, 항산화 활성 및 장내부착능 등의 프로바이오틱활성을 조사하여 새로운 유산균주를 선별하였으며 우유 발효용 스타터로서의 이용가능성을 검토하였다.
유산균은 탄수화물을 이용하여 젖산을 생성하는 미생물로서 오랫동안 산업에 이용되어 왔으며, 발효공정을 통해 탄수화물과 단백질 및 지방성분 등을 분해하여 풍미를 증진시키고 영양학적 가치를 높여준다.
본 발명에 있어서, 상기 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)은, 바람직하게 내산성, 내담즙성, 항균활성, 우유단백질 분해능 중 선택되는 하나 이상의 성질을 갖는 것일 수 있다.
본 발명의 유산균은 하기 실험에 의할 경우, 우유단백질 분해능(유리 티로신 함량)이 우수하였으며, 클리어 존(clear zone) 형성 크기를 비교한 결과도 우수하였고, 온도별 생장특성도 중온균의 특성을 나타내었다. 또한, 5개 병원성균에 대하여 우수한 저해특성을 보였고, 커드형성능에서도 상업균주와 유사한 수준을 보여 우유 발효용 스타터서의 이용이 가능할 것으로 판단되었다.
한편, 본 발명은 참당귀 추출물을 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P)으로 발효시킨 참당귀 추출물의 유산균 발효물을 제공한다. 본 발명에서 참당귀 추출물은 참당귀잎 추출물 또는 참당귀지상부 추출물로 구성될 수 있다.
참당귀(Angelica gigas)는 비교적 습한 땅에 나는 두해살이 또는 세해살이 풀로, 산골짜기 냇가 근처에서 자란다. 뿌리는 크며 향기가 강하고 줄기는 곧게 서며 어린순을 나물로 식용하고 뿌리를 당귀라고 하며 약재로 사용한다. 당귀는 중국산을 안젤리카 시넨시스(A. sinensis), 일본산을 왜당귀, 한국산을 참당귀라고 한다.
한편, 본 발명은 상기 참당귀 추출물의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물을 제공한다. 이때, 상기 식품은, 바람직하게 발효유일 수 있다.
이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예를 통해 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[실시예 1: 신규한 락토바실러스 플란타럼 KC23 선발 및 분리동정]
본 실시예에서는 전통김치로부터 내산성, 내담즙성 및 우유단백질 분해능이 우수한 신규한 유산균주를 선발 및 분리동정하고자 하였다.
1) 신규한 락토바실러스 플란타럼 KC23 선발 및 프로바이오틱 활성, 형태적, 생화학적 특성 분석
강원도 일원에서 25종의 재래김치를 수거하고, 각 시료별로 1 g씩을 취한 후 멸균수에 5배 희석하여 유산균분리를 위한 시료로 사용하였으며, 탈지분유는 서울우유(Seoul Dairy Cooperative, Korea) 제품을 사용하였다. 유산균의 분리 및 저장에는 BCP 배지(Eiken chemical Co., Ltd., Japan)와 MRS 배지(Difco, USA) 및 NA 배지(Difco, USA)를 사용하였다.
희석한 김치 시료 1g씩을 멸균수에 희석한 후, MRS 고체배지(Difco Laboratories, Detroit, MI, USA)에 백금이로 획선 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양하고, 유백색의 콜로니를 크게 형성하는 균락을 1차적으로 50 콜로니(colony)를 선별하였다. 선별한 콜로니를 다시 BCP 고체배지(Eiken chemical Co., Ltd., Japan)에 획선 접종하여 젖산 생성으로 노란색을 형성하는 균락을 유산균으로 판단하였으며, 이들 중 상대적으로 노란색 환을 빠르고 크게 형성하여 산생성이 우수한 것으로 판단되는 32 콜로니(colony)를 순수 분리하였다. 이들을 대상으로 프로바이오틱 활성실험을 진행하여 우수균을 선발하였다.
상기에서 분리한 32개 균주를 대상으로 우수균주를 선발하기 위한 프로바이오틱 활성 측정으로 내산성 및 내담즙성을 실험하였다. 내산성 확인은 분리균주를 MRS broth에 접종하여 37℃에서 24시간 배양한 배양액을 1N-HCl(Daejung chemicals & metals Co., Ltd., Korea)로 보정하여 만든 pH 3.0 MRS broth에 각각 2%씩 접종하여 37℃에서 3시간 배양방법으로 테스트하였다. 내담즙성 확인은 분리유산균 배양액을 0.3% bile salts(Oxoid, England)를 첨가한 MRS broth에 각각 2%씩 접종하여 37℃에서 6시간 배양방법으로 테스트 하였다. 배양된 샘플을 멸균수에 십진 희석하고 1 mL 채취하여 MRS agar에 접종한 다음, 37℃에서 24시간 배양하여 생성된 콜로니를 계수하고, 초기 균수와 배양 후의 균수를 비교하여 산성 및 염기성 pH에 대한 내성을 확인하였다.
유산균이 프로바이오틱스(probiotics)가 되기 위해서는 위장의 pH 3이하의 산성조건과 소화효소가 많은 담즙의 환경조건에서 생존할 수 있어야 한다. 실험결과를 바탕으로 내성이 우수한 수준을 생존율 60% 이상으로 임의 판단하였으며, 김치유래 유산균들이 내산성뿐만 아니라 매우 우수한 내담즙성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 본 연구에서는 일반적으로 pH 2.5-3.5에서 90%이상의 내산성으로 보이는 것으로 알려진 락토바실러스 아시도필러스(L. acidophilus)에 비교되는 내산성과 내염기성 모두에서 90%이상의 매우 우수한 내성을 보인 KC23 균주를 우수균주로 선발하고 동정 및 추가적인 특성을 실험하였다.
상기 분리균주 KC23의 특성을 조사하고자 그람 염색 후 광학현미경(BX60, Olympus, Japan) 및 주사전자현미경(Scanning Electron Microscopy, SEM, TM3030 Plus, HITACHI, Japan)을 통한 형태학적 관찰을 하였다. 주사전자현미경 관찰을 위해 분리균주를 MRS agar에 스트리킹(streaking)하여 증식시킨 후 단일 콜로니(colony)를 백금이로 취하여 슬라이드 글라스(slide glass)에 균일하게 도포하였으며, 이를 SEM용 샘플 홀더(holder)에 고정시켰다. 샘플 홀더(holder)를 SEM에 위치시킨 후 진공상태를 형성하여 외부 공기를 차단시킨 다음 15,000～30,000배율로 형태를 관찰하였으며, 저진공에서 15 kV 조건으로 이미징(imaging)하였다.
또한, 분리균주 KC23의 산소유무와 35℃ 및 45℃에서의 생장, 카탈라아제(catalase) 활성여부 및 API 50 CHL kit(biomerieux, France)에 의한 49종의 탄수화물 이용성을 확인하였다. API 50CHL medium에 현탁하여 스트립(strip)에 분주한 후 37℃에서 48시간 동안 배양하였고, 실험에 의한 스트립(strip)의 판독은 각 튜브(tube)의 색변화로 음성(negative, (-)), 양성(positive, (+)) 등으로 판정하였으며 API 50 CHL database를 이용하여 동정하였다.
분리균주 KC23의 형태적, 생화학적 특성을 분석한 결과는 하기 표 1 및 도 1과 같았다. 분리균주 KC23을 크리스탈 바이올렛(crystal violet)으로 염색하여 1,000 배율의 광학 현미경으로 관찰한 결과 단간균 형태임을 확인할 수 있었고, 전자현미경으로 관찰한 결과 세포의 크기는 약 2～3 μm를 나타내었으며 표면상태는 점질물이 없이 매끄러운 형태를 보였다(도 1). 분리균주 KC23은 그람염색을 통해 그람양성(+)균임을 확인하였고, 현미경 관찰결과 막대(rod) 형태를 보였으며, 카탈라아제(catalase) 시험 결과 음성(-)반응을 나타냈고, 산소유무와 관계없이 잘 증식하였다. 또한 최적 생장온도를 확인하기 위하여 BCP agar에 스트리킹(streaking)한 후 45℃ 및 35℃에서 24시간동안 배양한 결과 45℃에서는 거의 생장이 이루어지지 못하고 35℃에서는 잘 생장하는 전형적인 중온균의 특성을 보였다.
| Strain No. | KC23 |
| Cell type | rod |
| Gram stain | + |
| Catalase test | - |
| Aerobic growth | + |
| Anaerobic growth | + |
| Growth at 35℃ | + |
| Growth at 45℃ | - |
분리균주 KC23의 당분해 특성을 확인하기 위해 API 50 CHL kit(Bio Meriex Co., Lyon, France)을 이용하여 37℃에서 48시간 동안 배양한 후 각각의 당이용 패턴을 조사한 결과, 하기 표 2와 같이, KC23균주는 D-갈락토오스(D-galactose), 락토오스(Lactose) 및 라피노오스(Raffinose)를 포함하여 양성반응을 보여 우유 또는 두유 중의 당이용 가능성을 확인할 수 있었다. 당분해 패턴을 API 50 CHL 데이터베이스(database)를 이용하여 동정한 결과 KC23은 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)과 99.9% 유사한 것으로 판정되었다.
| Carbohydrate | Reaction | Carbohydrate | Reaction |
| control | - | Esculin | + |
| Glycerol | - | Salicin | + |
| Erythritol | - | Cellobiose | + |
| D-Arabinose | - | Maltose | + |
| L-Arabinose | + | Lactose | + |
| Ribose | + | Melibiose | + |
| D-Xylose | - | Sucrose | + |
| L-Xylose | - | Trehalose | + |
| Adonitol | - | Inulin | - |
| Methyl-βD-xylopyranoside | - | Melezitose | + |
| D-Galactose | + | Raffinose | + |
| D-Glucose | + | Starch | - |
| D-Fructose | + | Glycogen | - |
| D-Mannose | + | Xylitol | - |
| L-Sorbose | + | Gentiobiose | - |
| Rhamnose | - | D-Turanose | + |
| Dulcitol | - | D-Lyxose | - |
| Inositol | - | D-Tagatose | - |
| Mannitol | + | D-Fucose | - |
| Sorbitol | + | L-Fucose | - |
| α-Methyl-D-mannoside | + | D-Arabitol | - |
| α-Methyl-D-glucoside | - | L-Arabitol | - |
| N-Acetyl-glucosamine | + | Gluconate | - |
| Amygdalin | + | 2-keto-gluconate | - |
| Arbutin | + | 5-keto-gluconate | - |
| +, positive; -, negative | |||
2) 신규한 락토바실러스 플란타럼 KC23의 유전학적 동정
상기 분리균주 KC23의 정확한 동정을 위하여 16S rRNA gene분석을 통한 유전학적 동정을 실시하였다.
분리균주의 콜로니 샘플은 MRS 액체배지에서 24시간 배양하여 genomic DNA를 추출 후 16S rRNA 증폭을 위해 유산균용 프라이머인 forward primer 27F(5'-aga gtt tga tcc ctc ag-3')와 reverse primer 1492R(5'-ggt tac ctt gtt acg act t-3')을 사용하였고, 처음 사이클은 95℃에서 15분, 30사이클은 95℃에서 20초, 50℃에서 40초, 72℃에서 1분 30초, 마지막 사이클은 72℃에서 5분, 4℃에서 10분의 조건으로 PCR(Polymerase chain reaction)을 수행하였다. 염기서열 분석은 ABI 3730XL capillary DNA Sequencer(Applied Biosystems)를 사용하였고, NCBI blast(www.ncbi.nih.gov/blast)의 데이터베이스(database)를 이용하여 유전학적 동정을 실시하였으며, 염기서열 분석에 기초하여 유전학적 계통수(Phylogenetic tree)를 나타내었다.
분리균주 KC23의 동정 결과, 하기 표 3과 같이 KC23은 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)로 99%이상의 상동성을 보이며 동정되었다. KC23의 염기서열 및 유전학적 계통수(Phylogenetic tree)는 하기 표 4 및 도 2에 나타내었다.
| Strains | Identification | API 50 CHL | 16S rRNA |
| KC23 | Lactobacillus plantarum | 99.9% | 99% |
| 명칭 | 16S rDNA 염기서열 |
| 동정균주(KC23) | 서열번호 1 |
본 발명의 발명자들은 우유 또는 두유 요구르트 제조용 스타터로서 활용하기 위해 당분해 특성에서 락토오스(lactose)와 라피노오스(raffinose)에 양성 반응을 보인 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23을 최종 균주로 선발하고 한국미생물보존센터에 기탁(KCCM 12351P)하였다.
[실험예 1 : 신규 락토바실러스 플란타럼 KC23의 생육특성 확인]
본 실험예에서는 선별된 분리 균주 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23(KCCM 12351P)의 생육특성을 확인하기 위한 실험을 진행하였다.
분리균주 KC23을 MRS broth에 각 균주를 접종한 후, 최적생장온도 실험에서 확인된 37℃(중온균)로 12시간 동안 정치배양하면서 2시간 간격으로 시료를 채취하고 스펙트로포토미터(Spectrophotometer) (X-ma 1200, Human Co., Korea)로 660 nm에서 흡광도를 측정하여 생육곡선을 작성하였으며, 생육에 따른 pH는 pH 미터(pH meter)(Orion 3 star plus, USA)로, 산도는 AACC method 02-31(2000)에 따라 적정산도를 측정하였다.
그 결과, 도 3의 (A)와 같이 균주의 생육은 배양 6시간에서 10시간 사이에 대수증식기를 보이며 잘 생육하였고, 배양 12시간 후의 생균수는 8.9X108 CFU/mL를 보였으며, 10시간 이후에는 완만한 증가세로 정체기에 접어들고 있음을 확인할 수 있었다. 대조균으로 사용된 락토바실러스 아시도필러스(L. acidophilus) CSLA의 생장 형태는 서로 유사한 경향을 보여 분리균주는 상업균주와 같이 우수한 생장능력이 있음을 알 수 있었다. 또한, pH의 변화는 도 3의 (B)에서 보이는 것과 같이 분리균주와 대조균이 생균수의 증식곡선에 비례하여 6시간에서 10시간 사이에 급격한 저하를 보였고, 배양 12시간 후에는 pH 4.25수준으로 감소하였다.
[실험예 2 : 신규 락토바실러스 플란타럼 KC23의 우유단백질 분해능 확인]
본 실험예에서는 선별된 분리 균주 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23(KCCM 12351P)의 우유단백질 분해능을 확인하기 위한 실험을 진행하였다.
분리균주 KC23의 우유단백질 분해능 측정은 페이퍼 디스크 어세이 방법(aper disc assay method)과 티로신(tyrosine) 함량 측정 방법으로 실험하였다. 2% SMP를 혼합한 NA 평판배지를 만든 후 paper disc(Ø8 mm, Advantec, Japan)를 올려놓은 다음, 상기 분리유산균 액체 배양액을 10 μL씩 적하하고 37℃에서 48시간동안 배양시켜 클리어 존(clear zone)의 생성여부를 확인하였다. 투명환의 생성을 우유단백질 분해능이 있는 것으로 판단하였으며, 비교를 위하여 상업 균주인 락토바실러스 아시도필러스(L. acidophilus) CSLA를 실험에 사용하였다.
티로신(tyrosine) 함량 측정은 10% 환원탈지유를 배지로 사용하였으며, 유리되는 티로신(tyrosine) 함량으로 나타내었다. 살균된 환원탈지유 배지에 계대배양된 분리균주 1%를 접종한 후 37℃에서 24시간 동안 배양하면서 4시간 단위로 시료를 취하여 분석하였다. 시료를 와트맨(whatman) (No. 2) 여과지로 여과한 후 여과액 5 mL에 0.44 M 트리클로아세틱산(trichlroacetic acid, TCA) 동량을 가해 침전시켜 상등액을 사용하였다. 30분간 방치 후 와트맨(whatman) (No. 42) 여과지로 여과하여 여과액 1 mL와 0.44 M의 Na2CO3 2.5 mL를 혼합한 후 1 N folin시약 200 μL를 가하여 5분 동안 잘 흔들어 청색을 발색시켰다. 발색시킨 시료를 스펙트로포토미터(Spectrophotometer, X-ma 1200, Human Co., Ltd., Korea)로 660 nm에서의 흡광도를 측정하였으며, 측정값을 준비해 둔 티로신 스탠다드(tyrosine standard)의 값으로 환산하여 유리된 티로신(tyrosine)양을 ㎍/mL로 표시하였다. 우유단백질 분해능 실험을 위한 L-티로신(L-tyrosine)과 1 N 폴린(folin)시약은 Sigma Aldrich(USA)로부터 구입하여 사용하였다.
그 결과, 도 4와 같이 배양 후 8시간이전까지는 미미한 수준의 단백질 분해력을 보였으며, 배양 8시간 후, 24.1 μg/mL에서 16시간 후, 43.9 μg/mL, 20시간 후, 52.2 μg/mL로 급격한 증가를 보였다. 또한, 2% SMP를 혼합한 NA고체배지에서 투명환 생성여부를 비교균주인 락토바실러스 아시도필러스(L. acidophilus) CSLA와 함께 확인한 결과 도 5와 같이 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23가 비교균주의 약 9 mm보다 큰 약 12 mm의 투명환을 형성시키며 우수한 우유단백질 분해 특성을 나타내었다.
[실험예 3 : 신규 락토바실러스 플란타럼 KC23의 항균활성 측정]
본 실험예에서는 선별된 분리 균주 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23(KCCM 12351P)의 항균활성을 측정하기 위한 실험을 진행하였다.
분리균주의 항균활성 테스트는 Paper disc agar diffusion method (Song et al, 2009)을 응용하여 대표적인 병원성 지시균으로 살모넬라 타이피뮤리움(Salmonella typhimurium) ATCC14028, 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes) ATCC15313, 황색포도상구균(Staphylococcus aureus) ATCC25923, 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) ATCC27348, 대장균(Escherichia coli) KCCM32396 등의 5종을 각각 tryptic soy broth(Oxoid, UK)에 접종한 뒤 37℃에서 24시간 배양하여 피검균주로 사용하였다. 분리 유산균 배양액은 MRS broth에 분리균주를 접종하여 37℃에서 12시간동안 전배양한 다음 샘플로 사용하였으며, 비교 유산균으로 상업균주인 락토바실러스 아시도필러스(L. acidophilus) CSLA를 동일한 방법으로 전배양하여 사용해 비교하였다. MRS agar과 BHI(brain heart infusion) agar를 1:1로 혼합하여 평판배지를 만들고 충분히 굳힌 다음, 각 병원성 미생물 배양액을 고체배지 표면에 100 μL씩 뿌린 후 멸균 면봉으로 도말하였다. 표면을 충분히 건조시킨 후 멸균한 paper disk를 올려 각 유산균 배양액 샘플 50 μL씩을 접종하고, 37℃에서 24시간 동안 배양한 후 clear zone의 형성 여부를 확인하였다. 저해환의 크기는 12 mm를 초과는 ++로, 10～12 mm의 크기는 +로, 10 mm미만은 w로 표시하였다.
상기 5종의 병원성 균주에 대하여 형성된 클리어 존(clear zone)의 크기를 비교한 결과, 하기 표 5와 같이 분리균주 KC23은 시험한 5개 모두의 병원성 균주에 대하여 8~13 mm의 저해환을 형성하여 항균력을 나타내었고, 포도상구균을 제외한 다른 4종의 병원성 균주에 대하여 모두 상업균주인 락토바실러스 아시도필러스(L. acidophilus) CSLA보다 우수한 항균특성을 보였다. 일반적으로 유산균은 젖산을 생성하여 산도를 낮춤으로써 병원성 세균의 생육을 억제하며, 박테리오신(bacteriocin) 등의 항균물질을 생성하여 항균작용을 나타내는 것으로 알려져 있다. 따라서 항균 활성이 우수한 분리균주 KC23은 생균제 또는 발효유용으로 이용시 유해균의 증식을 억제하여 장내균총을 개선시키는 효과를 기대할 수 있을 것으로 판단된다.
| Pathogens | Species | |
| L. acidophilus CSLA | L. plantarum KC23 | |
| Salmonella typhimurium ATCC14028 | w1)(8mm) | ++(13mm) |
| Bacillus cereus ATCC27348 | +(10mm) | ++(13mm) |
| Listeria monocytogenes ATCC15313 | +(10mm) | +(10mm) |
| Staphylococcus aureus ATCC25923 | +(10mm) | +(8mm) |
| Escherichia coli KCCM32396 | w(8mm) | +(10mm) |
| 1) Inhibitory clear zone size (w: < 10mm, + : 10～12 mm , ++ : > 12 mm) | ||
상기와 같은 결과를 종합해볼 때, 신규한 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23(KCCM 12351P)은 락토오스(Lactose) 및 라피노오스(Raffinose)를 포함하여 당분해 특성이 있으며, 내산성, 내담즙성, 우유단백질 분해능 및 커드형성능이 뛰어나면서 병원성균에 대하여 우수한 항균활성을 가져 프로바이오틱스 및 우유 발효용 스타터로서의 이용가능성이 있음을 확인하였다.
[제조예 1: 참당귀잎 추출물 제조]
참당귀잎은 건조시료를 60% 에탄올로 추출하여 분무건조를 진행하였다. 참당귀잎 건조물 시료 10 kg에 60% 에탄올 100 L를 첨가하여 70℃에서 3시간 동안 순환 추출하고 10 μm 사이즈 필터에 여과시켰다. 여과된 추출액을 65℃에서 최종 추출액의 양이 10 L가 될 때까지 농축하였으며 농축액에 부형제로 600 g의 덱스트린을 첨가한 다음 열풍건조하여 추출분말을 얻었다.
상기 분무건조 추출분말에 대한 분석을 위해 각 추출분말 시료를 각각 0.1 g씩 정확하게 칭량하고 메탄올 100 mL을 가하여 최종농도가 1 mg/mL이 되도록 재용해한 다음 0.45 μm 멤브레인 필터(membrane filter)에 통과시켜 HPLC 분석용 시료로 하였으며 모든 분석은 3반복 실시하여 통계처리하였다. 참당귀잎 추출액의 지표물질을 데커신(decursin)으로 설정하고, Nano Space SI-2 HPLC (Shiseido, Japan)를 사용하여 분석하였다. 컬럼은 Cadenza CD-C18 (150 ×3 mm, 3 μm, Imtakt, Kyoto, Japan)을 사용하였고, 0.1% TFA와 100% acetonitrile을 이동상으로 사용하여 시료 주입량 5 μL, 컬럼 온도 50℃, 유속 500 μL/min으로 25분 동안 분석하였다. HLPC의 분석조건은 하기 표 6과 같았다.
| Classification | Condition |
| Instrument | Nano Space SI-2 (Shiseido, Japan) |
| Column | Cadenza CD-C18 (150 ×3 mm, 3 μm) |
| Column temp ℃ | 50 |
| Mobile phase | Eluent A: 0.1% TFA, Eluent B: acetonitrile |
| Injection volume | 5 μL |
| Detector | UV 330 nm |
| Run time | 25 min |
분석 결과, 참당귀잎 분무건조 분말시료의 지표물질인 데커신(decursin)의 평균 함량은 하기 표 7과 같이 0.36%이었다.
| Samples | Concentrations (%, mean ±SD) |
| 1 | 0.36 ±0.021) |
| 2 | 0.35 ±0.01 |
| 3 | 0.36 ±0.01 |
| 1)Each data was obtained by triple analysis (n=3). | |
하기에서는 상기 실시예 1에서 선별한 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23(KCCM 12351P)을 이용하여 상기 제조예에서 제조한 참당귀잎 추출물의 발효물에서의 효과를 확인하고자 하였다.
[실시예 2: 참당귀잎 추출물을 신규한 락토바실러스 플란타럼 KC23을 이용하여 발효시킨 참당귀잎 추출물의 유산균 발효물 시험 및 발효유 제조]
본 실시예에서는 참당귀잎 추출물을 상기 실시예1에서 선별한 락토바실러스 플란타럼 KC23을 이용하여 발효시킨 참당귀잎 추출물의 유산균 발효물 시험 및 발효유 제조하였다.
1) 참당귀잎 추출물을 신규한 락토바실러스 플란타럼 KC23을 이용하여 발효시킨 참당귀잎 추출물의 유산균 발효물 특성 실험
분리 유산균의 참당귀잎 추출물 발효능을 확인하기 위하여 발효테스트하였으며, 열풍식으로 건조한 상기 제조예의 참당귀잎 추출 분말을 MRS액체배지에 무첨가(O%(w/w)), 0.5%(w/w), 1.0%(w/w) 및 2.0%(w/w)를 첨가하여 혼합한 다음, 37℃에서 12시간 동안 배양하면서 3시간 간격으로 660nm에서 흡광도를 측정하였다. 흡광도 측정 이후에는 10배 희석법으로 4~8회 희석하고 BCP 고체배지에 1ml 씩 분주하여 생균수를 확인하였다. 비교를 위해 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)균과 락토바실러스 델브르키 블가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus)균으로 구성된 상업균주 Y430A을 사용하였다. 그 결과는 하기 표 8 및 도 6과 같았다.
일반적으로 우유 발효에 사용되는 상업균주인 Y430A를 이용한 경우는 초기 생육은 비교적 빠르게 진행되었으나 9시간 이후 정체기를 형성하였으며, 이에 비하여 KC23균과 상업균주 Y430A를 혼합하여 배양한 경우 6시간 이후부터 보다 우수한 생육상태를 보였으며, 특히 배양 12시간차에는 상업균주만으로 발효한 것에 비하여 1.6배 이상의 높은 생장률을 보였다. 이는 식물성 소재인 김치로부터 분리된 KC23 유산균이 식물성 성분인 참당귀 추출물의 발효에 긍정적인 영향을 준 것으로 볼 수 있다.
| 흡광도/시간 | KC23 | Mixed | Y430A | |||||||||
| K-0 | K-0.5 | K-1 | K-2 | M-0 | M-0.5 | M-1 | M-2 | Y-0 | Y-0.5 | Y-1 | Y-2 | |
| 0 | 0.138 | 0.164 | 0.183 | 0.247 | 0.124 | 0.157 | 0.21 | 0.268 | 0.104 | 0.129 | 0.156 | 0.226 |
| 3 | 0.157 | 0.182 | 0.211 | 0.245 | 0.39 | 0.439 | 0.56 | 0.597 | 0.557 | 0.625 | 0.624 | 0.592 |
| 6 | 0.244 | 0.271 | 0.281 | 0.328 | 1.145 | 1.233 | 1.395 | 1.387 | 1.164 | 1.166 | 1.126 | 1.031 |
| 9 | 1.107 | 1.116 | 1.095 | 1.008 | 2.077 | 2.088 | 2.076 | 2.039 | 1.337 | 1.316 | 1.27 | 1.183 |
| 12 | 1.881 | 1.909 | 1.936 | 1.942 | 2.196 | 2.22 | 2.198 | 2.182 | 1.358 | 1.352 | 1.307 | 1.247 |
K-0 : L. plantarum KC23 유산균 + 참당귀추출분말 0% 첨가
K-0.5 : L. plantarum KC23 유산균 + 참당귀추출분말 0.5% 첨가
K-1.0 : L. plantarum KC23 유산균 + 참당귀추출분말 1.0% 첨가
K-2.0 : L. plantarum KC23 유산균 + 참당귀추출분말 2.0% 첨가
M-0 : L. plantarum KC23 + 상업용Y430A 유산균 + 참당귀추출분말 0% 첨가
M-0.5 : L. plantarum KC23 + 상업용Y430A 유산균 + 참당귀추출분말 0.5% 첨가
M-1.0 : L. plantarum KC23 + 상업용Y430A 유산균 + 참당귀추출분말 1.0% 첨가
M-2.0 : L. plantarum KC23 + 상업용Y430A 유산균 + 참당귀추출분말 2.0% 첨가
Y-0 : 상업용Y430A 유산균 + 참당귀추출분말 0% 첨가
Y-0.5 : 상업용Y430A 유산균 + 참당귀추출분말 0.5% 첨가
Y-1.0 : 상업용Y430A 유산균 + 참당귀추출분말 1.0% 첨가
Y-2.0 : 상업용Y430A 유산균 + 참당귀추출분말 2.0% 첨가
2) 신규한 락토바실러스 플란타럼 KC23을 이용한 참당귀잎 추출물의 발효물을 혼합한 발효유 제조 및 우유 단백질 커드 형성능 확인
발효유의 제조 공정은 발효유의 제조 공정은 도 7과 같이 나타냈다.
락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23을 이용한 참당귀잎 추출물의 발효물을 혼합한 발효유의 효능을 확인하기 위해 대조구로서 상업균주인 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus) CSLA를 사용하였다. 각 균주를 MRS broth에서 37℃로 12시간 동안 배양한 배양액을 스터터로 사용하였으며, 10% 환원탈지유에 참당귀잎 추출분말 0.1%씩을 혼합하여 85℃로 10분간 살균하고, 상기 배양액을 1%씩 접종한 후 37℃에서 12시간 동안 배양하여 커드의 형성정도를 관찰하였다. 살균 탈지유에서 배양한 결과 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23를 이용한 경우, 배양 5시간 이후에 커드형성이 관찰되었으며, 배양 12시간 후에는 상업균주인 L. acidophilus CSLA와 유사한 수준의 커드형성 상태를 보였다(도 8).
본 발명의 발명자들은 한국미생물보존센터에 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P)을 기탁하였다.
기탁기관명 : 한국미생물보존센터(국외)
수탁번호 : KCCM12351P
수탁일자 : 20181029
<110> Seoul F&B Co.,Ltd.
<120> Fermented composition comprising Angelica gigas extract and novel
Lactobacillus plantarum KC23 with probiotic activities
<130> YP-19-153
<160> 1
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 1529
<212> DNA
<213> Lactobacillus plantarum
<400> 1
agagtttgat cctggctcag gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac 60
gaactctggt attgattggt gcttgcatca tgatttacat ttgagtgagt ggcgaactgg 120
tgagtaacac gtgggaaacc tgcccagaag cgggggataa cacctggaaa cagatgctaa 180
taccgcataa caacttggac cgcatggtcc gagtttgaaa gatggcttcg gctatcactt 240
ttggatggtc ccgcggcgta ttagctagat ggtggggtaa cggctcacca tggcaatgat 300
acgtagccga cctgagaggg taatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct 360
acgggaggca gcagtaggga atcttccaca atggacgaaa gtctgatgga gcaacgccgc 420
gtgagtgaag aagggtttcg gctcgtaaaa ctctgttgtt aaagaagaac atatctgaga 480
gtaactgttc aggtattgac ggtatttaac cagaaagcca cggctaacta cgtgccagca 540
gccgcggtaa tacgtaggtg gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca 600
ggcggttttt taagtctgat gtgaaagcct tcggctcaac cgaagaagtg catcggaaac 660
tgggaaactt gagtgcagaa gaggacagtg gaactccatg tgtagcggtg aaatgcgtag 720
atatatggaa gaacaccagt ggcgaaggcg gctgtctggt ctgtaactga cgctgaggct 780
cgaaagtatg ggtagcaaac aggattagat accctggtag tccataccgt aaacgatgaa 840
tgctaagtgt tggagggttt ccgcccttca gtgctgcagc taacgcatta agcattccgc 900
ctggggagta cggccgcaag gctgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg 960
tggagcatgt ggtttaattc gaagctacgc gaagaacctt accaggtctt gacatactat 1020
gcaaatctaa gagattagac gttcccttcg gggacatgga tacaggtggt gcatggttgt 1080
cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttattatc 1140
agttgccagc attaagttgg gcactctggt gagactgccg gtgacaaacc ggaggaaggt 1200
ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga 1260
tggtacaacg agttgcgaac tcgcgagagt aagctaatct cttaaagcca ttctcagttc 1320
ggattgtagg ctgcaactcg cctacatgaa gtcggaatcg ctagtaatcg cggatcagca 1380
tgccgcggtg aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgagagtttg 1440
taacacccaa agtcggtggg gtaacctttt aggaaccagc cgcctaaggt gggacagatg 1500
attagggtga agtcgtaaca agggtaacc 1529
Claims (5)
- L-소르보오스(L-sorbose), 알파-메틸-D-만노사이드(α-methyl-D-mannoside), D-갈락토오스(D-galactose), 락토오스(Lactose) 및 라피노오스(Raffinose)에 양성반응을 나타내고, 우유단백질 분해능 및 커드 형성능을 가지는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P).
- 제1항에 있어서,
상기 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)은,
내산성, 내담즙성 및 항균활성 중 선택되는 하나 이상의 성질을 갖는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P).
- 참당귀 추출물을 L-소르보오스(L-sorbose), 알파-메틸-D-만노사이드(α-methyl-D-mannoside), D-갈락토오스(D-galactose), 락토오스(Lactose) 및 라피노오스(Raffinose)에 양성반응을 나타내고, 우유단백질 분해능 및 커드 형성능을 가지는 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) KC23 (KCCM 12351P)으로 발효시킨 참당귀 추출물의 유산균 발효물.
- 제3항의 참당귀 추출물의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물.
- 제4항에 있어서,
상기 식품은,
발효유인 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
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2019
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