KR101908678B1 - 천연 추출물을 함유하는 아토피 피부염 개선용 발효 조성물 - Google Patents

천연 추출물을 함유하는 아토피 피부염 개선용 발효 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 비피더스(Bifidobacterium spp.) 발효물, 귤외피 추출물, 다시마 추출물, 동백꽃 추출물, 및 애엽 추출물로 구성된 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 개선용 피부 외용제 조성물이 제공된다.

Description

천연 추출물을 함유하는 아토피 피부염 개선용 발효 조성물{A FERMENTED COMPOSITION FOR IMPROVING ATOPIC DERMATITIS CONTANING NATURAL EXTRACT}
본 발명은 천연 추출물을 함유하는 아토피 피부염 개선용 조성물에 관한 것이다.
피부의 가장 외층인 표피는 외부로부터 인체를 보호하는 역할을 하며, 표피의 최상층부인 각질층이 표피 장벽(epidermal barrier)으로서 표피의 수분 증발과 손실 억제, 표피의 건조화 방지, 및 세균, 곰팡이, 바이러스 등의 피부 침입을 방지하는 인체방어 기전의 제일선 역할을 한다. 각질층은 각질 세포들 사이에 지방질들이 벽돌과 그 사이의 회반죽이 있는 형태의 층상구조를 이루고 있다.
아토피 피부염(Atopic Dermatitis)은 원인 불명의 강한 소양감, 건조함, 심한 각질 발생, 두부 인설(비듬), 홍반과 부어오름, 피부균열, 심한 진물과 습진, 태선화 등의 증상이 복합적으로 나타나는 피부의 이상 증후군으로, 10년 이상 지속되며 장기간 생활에 큰 불편을 끼치는 만성 질환이다. 예전에는 영아기나 유아기에 시작되어 성장과 함께 병세가 점점 호전되어 7~8세 이전에 사라지는 경우가 대부분이었다.
그러나, 1970년대 이후 급격한 산업화로 유발된 공해, 환경오염 등으로 인해 발생률이 해마다 증가하고 있으며, 증상이 청소년기 및 성인기까지 지속되며 점차 심화되거나 청소년기 이후에 새로이 발병하는 경우도 현저하게 증가하고 있다. 강한 가려움증과 함께 피부염증을 동반하는 것이 증상의 특징이며, 히스타민 과다 분비가 가려움증의 주요 원인이 된다. 가려움으로 인해 피부를 긁게 되면 홍반이나 습진성 병변이 나타나게 되고, 심한 경우 피부가 벗겨지거나 태선화(피부가 두꺼워지게 되는 현상)가 진행된다.
아토피 피부염의 원인에 대해서는 최근까지 다수의 연구결과와 정보가 제시되었으나, 질환 자체의 복잡성과 서로 상충되는 연구 데이터들로 인해 정화한 병인과 유효한 치료법에 대해서 아직까지 명확한 이론이 확립되지 않은 상태이다.
이러한 문제점으로 인해 현재까지 개발된 아토피 피부염 치료제는 스테로이드 제제, 경구용 항히스타민제, 히드록시퀴놀린, 타르 제제 및 저자극성 보습제 등 근본적인 치료보다는 증상을 적절한 수준으로 조절하기 위한 제품들이 주종을 이루고 있다. 그러나, 현재까지 개발된 어떠한 의약품도 환자들의 요구를 완전히 충족시켜주지 못하고 있는 실정이다.
한편, 아토피 피부염 개선용 화장품은 가려움증과 피부 자극을 유발하지 않으면서 기존의 가려움증을 억제 또는 완화하는 피부 진정, 염증 억제, 세균 억제, 보습 및 피부 장벽 유지 효과 등이 요구된다.
그러나, 현재까지 개발된 아토피 피부염 개선용 화장품에 사용되는 화학방부제(파라벤류, 페녹시에탄올, 디아졸리디닐우레아)는 인체 DNA를 손상시킨다는 연구결과가 보고된 바 있고, 아토피 피부염 증상을 오히려 악화시킨다는 사례가 보고된 바 있다.
이에 따라, 화학물질의 사용을 최소화하여 피부 자극 및 부작용을 감소시킬 수 있는 천연 소재에 대한 수요가 급증하고 있으며, 생체 안정성 및 피부 진정 효과가 우수한 아토피 피부염 개선용 화장품 개발에 대한 다양한 연구가 활발하게 이루어지고 있다.
본 발명은 전술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 본 발명의 목적은 천연 원료를 유효성분으로 포함하여 피부 건강에 유익하고, 항염 작용에 따른 피부 진정 효과가 우수한 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 측면은 비피더스(Bifidobacterium spp .) 발효 추출물, 귤외피 추출물, 다시마 추출물, 동백꽃 추출물, 및 애엽 추출물로 구성된 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.
일 실시예에 있어서, 상기 혼합 추출물은 상기 비피더스 발효 추출물 10 내지 20 중량부, 상기 귤외피 추출물 10 내지 20 중량부, 상기 다시마 추출물 10 내지 20 중량부, 상기 동백꽃 추출물 10 내지 20 중량부, 및 상기 애엽 추출물 10 내지 20 중량부로 구성될 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 상기 혼합 추출물 0.5 내지 10.0중량%를 포함할 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 혼합 추출물은 정제수, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 및 1,3-부틸렌글라이콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 추출될 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 알코올은 60 내지 90%(v/v) 농도의 에탄올일 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 항산화, 항염, 및 항균 활성을 가질 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이, 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화될 수 있다.
발명의 일 측면에 따른 피부 외용제 조성물은 혼합 추출물에 포함된 유효성분들이 상호 작용하여 사용자의 피부 건강에 유익하고 피부 진정 효과가 극대화될 수 있다.
본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.
이하, 본 발명의 실시예를 상세히 기술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 아니함은 자명하다.
본 발명의 일 측면은 비피더스(Bifidobacterium spp .) 발효 추출물, 귤외피 추출물, 다시마 추출물, 동백꽃 추출물, 및 애엽 추출물로 구성된 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.
상기 피부 외용제 조성물은 천연 유래의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하여 항산화, 항염, 및 항균 활성이 우수하므로, 피부 자극을 완화하고 아토피 피부염을 효과적으로 개선할 수 있다. 특히, 상기 혼합 추출물은 피부에 동시에 작용하므로 상승효과로 인해 피부 진정 및 아토피 피부염 개선 효과가 현저히 증대될 수 있다.
상기 비피더스 발효 추출물은 비피더스 속(Bifidobacterium spp .) 균주를 탈지분유와 같은 에너지원을 포함하는 배지 상에서 발효시켜 수득한 발효물의 혼합물(mixture)을 의미한다. 상기 발효물은 통상적인 유산균 발효 방법에 의해 제조될 수 있다. 상기 유산균 발효 방법은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명하다.
상기 에너지원은 소의 우유(cow milk), 염소의 우유(goat milk), 또는 말의 우유(horse milk)일 수 있으며, 이들의 전우유(whole milk), 탈지 우유(skim milk) 또는 이들의 분말(powder) 형태로 사용될 수 있다.
상기 비피더스 속 균주는 비피도박테리움 브레브(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 또는 비피도박테리움 인펀티스(Bifidobacterium infantis)일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 비피더스 속(Bifidobacterium spp .) 균주는 주로 아미노당류를 함유하는 올리고당을 이용하며 장내의 유해세균의 발육을 억제하여 단백질의 소화흡수를 촉진하고 비타민군을 합성하여 체내에 제공하는 미생물로서, 상기 비피더스 발효 추출물은 천연보습인자(NMF, natural moisturizing factor)의 전구체인 프로필라그린(profilaggrin)이 천연보습인자로 전환하는 것을 촉진하여 피부 보습을 향상시키고 피부에 수분 및 윤기를 부여할 수 있다. 또한, 상기 발효 추출물에 함유된 풍부한 다당 성분은 피부 표면 내의 수분 증발을 억제할 수 있다.
상기 비피더스 발효 추출물은 녹차 잎의 비피더스 균주 발효물을 포함할 수 있다. 상기 녹차잎은 카테킨을 다량 함유하여 항균 및 항암 효과가 우수하고, 비타민C, 비타민E, 베타카로틴, 식물섬유, 미네랄 및 엽록소를 풍부하게 함유한다. 상기 녹차잎은 항산화 효과, 피부 탄력 개선 효과, 노화 억제 효과, 중금속 제거 효과, 항 알레르기 효과, 염증 치료 효과, 면역력 증강 등 다양한 효과를 보유하고 있는 것으로 보고된다. 특히, 상기 녹차잎의 항산화 및 피부 탄력 개선 효과는 상기 비피더스 균주의 발효에 의해 더욱 증대될 수 있다.
상기 “귤(Citrus unshiu Marcov .)”은 비타민 C와 구연산이 풍부하게 함유되어 있고, 모세혈관 강화 작용에 우수한 비타민 P, 인, 헤스페리딘이 함유되어 있다. 상기 유효성분은 과육보다 껍질에 더 많이 함유되어 있으며, 특히 비타민 C의 경우 약 4배가 더 포함되어 있다. 상기 귤외피 추출물은 염증 물질인 IL-8을 중화시키는 효과가 뛰어나며, 멜라노사이트를 자극하는 물질을 중화시킴으로써 멜라닌 생성을 억제시켜 근본적으로 건강하고 깨끗한 피부를 만드는데 도움을 준다.
상기 “다시마(Laminaria japonica)“은 갈조식물문(Phaeophyta) 갈조강(Phaeophyceae) 다시마목(Laminariales) 다시마과(Laminariaceae)에 속하는 다년생 대형 갈조류로 참다시마, 해대 또는 해곤포라고도 불리운다. 한대, 아한대의 연안에 분포하는 한행성 해조류로서, 예로부터 우리나라를 비롯한 일본, 중국에서 식용 또는 약용으로 사용된 바 있다. 상기 다시마 추출물 손상된 피부에 활력을 제공하고 피부자극을 완화하며, 과도한 피지를 조절하여 피부에 청량감을 부여하고 피부 건강을 개선할 수 있다.
상기 “동백꽃(Camellia Japonica L.)”은 차나무과에 속하는 상록소교목 동백나무의 꽃으로 산다화(山茶花)라고도 불리운다. 대한민국 남부, 울릉도 및 대청도 해안 근처의 산지와 마을 부근에 나는 상록소 교목의 꽃으로 꽃이며, 코안토시아닌(leucoanthocyanin) 및 안토시아닌(anthocyanin)을 다량 함유한다. 또한, 상기 동백꽃은 카멜린(camellin) B, 쿼세틴(quercetin), 캠페롤(kaemferol), 섹스안굴라레틴(sexangularetin) 및 페놀 화합물로서 ρ-하이드록시벤조산(ρ-hydroxybenzoic acid), 프로토카테큐산 (protocatechuic acid), 갈산(gallic acid) 등을 함유하므로 섬유아세포 내 콜라겐 합성 효율을 증가시키고 피부 탄력을 효과적으로 개선할 수 있다.
상기 “애엽(艾葉)”은 국화과의 황해쑥(Artemisia argyi), 쑥(A. pronceps . var. orientlis) 또는 산쑥(A. montana)의 잎 및 어린줄기를 말린 약재를 말하며, 애구초, 구초, 첨애, 애, 빙대, 의초, 황초, 애호 등으로 불리운다. 한방에서 상기 애엽은 기혈과 경맥을 따뜻하게 하므로 자궁과 하복부가 허약하고 차서 생기는 자궁 출혈, 임신 중 출혈, 토혈, 코피, 각혈의 지혈에 널리 사용된다. 상기 애엽은 지혈작용, 억균작용, 기관지 평활근 이완작용, 진해거담작용, 수면작용, 자궁흥분유도작용, 과민성 쇼크 보호작용 등에 대한 약리효과가 있는 것으로 보고된다.
상기 혼합 추출물은 각 원료에서 유래한 유효성분 간 상호 작용으로 인해 우수한 피부 진정 및 아토피 피부염 개선 효과를 나타낼 수 있다. 상기 혼합 추출물은 각 추출물에 함유된 다양한 성분들이 함께 피부에 적용됨으로써 흡수율이 증대되고 피부 진정 및 아토피 피부염 개선 효과가 극대화될 수 있다.
상기 “추출물”은 용매와 추출 원료를 특정 조건 하에서 접촉시킴으로써 추출 원료에 함유된 유효성분이 전이된 용매를 지칭하는 것으로, 천연물로부터 원료에 함유된 성분을 분리해닌 물질이라면, 추출 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함할 수 있다. 예컨대, 물이나 유기용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출한 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함할 수 있다.
상기 혼합 추출물은 정제수, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 및 1,3-부틸렌글라이콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 추출될 수 있고, 상기 알코올은 60 내지 90% 농도(v/v)의 에탄올일 수 있다.
상기 원료에 포함된 유효 성분은 용매의 극성에 따라 추출 비율이 상이해질 수 있으며, 상기 에탄올은 천연 원료의 생리 활성 물질 추출에 있어서 선택성이 뛰어나므로 상기 에탄올 추출에 의해 최적의 피부 개선 효과가 구현될 수 있다.
특히, 물과 에탄올은 극성이 상이하여, 각 극성에 따라 추출되는 유효성분이 달라질 수 있으며 최적의 피부 개선 효과가 구현될 수 있도록 상기 에탄올의 농도를 적절히 제어할 수 있다. 이 때, 상기 에탄올은 농도가 90% 초과이면 적정한 수율이 구현되지 않을 수 있고, 농도가 60% 미만이면 피부 개선 효과를 나타내는 유효 성분이 충분하게 추출되지 않을 수 있다.
상기 혼합 추출물은 각 원료를 물로 수세한 후 건조 및 분쇄하여, 원료 중량의 8 내지 12배에 달하는 부피의 용매로 약 1시간 내지 24시간 동안 환류 순환 추출, 가압 추출, 초음파 추출 등 통상적인 방법으로 추출 및 여과하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 추출물은 감압 증류 또는 동결 건조 등과 같은 추가적인 공정에 의해 분말 상태로 수득할 수 있다.
상기 추출물은 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함할 수 있다. 예컨대, 상기 추출물은 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획물을 포함할 수 있다.
상기 조성물은 상기 혼합 추출물 0.5 내지 10.0중량%를 포함할 수 있다. 상기 혼합 추출물이 0.5 중량% 미만인 경우 상기 혼합 추출물에 의한 아토피 피부염 개선 효과가 적절히 구현되지 않을 수 있고, 10.0중량% 초과인 경우 제품화 하기 위해 포함되어 있는 기타 첨가물의 비중이 감소하므로 제품 본연의 품질이 저하될 수 있다.
상기 혼합 추출물은 상기 비피더스 발효 추출물 10 내지 20 중량부, 상기 귤외피 추출물 10 내지 20 중량부, 상기 다시마 추출물 10 내지 20 중량부, 상기 동백꽃 추출물 10 내지 20 중량부, 및 상기 애엽 추출물 10 내지 20 중량부로 구성될 수 있다.
상기 혼합 추출물을 구성하는 각 유효성분 간 함량 편차가 상기한 범위를 벗어나는 경우, 상기 유효성분 간 상호 작용에 따른 상승 효과가 적절하게 구현되지 않을 수 있으므로, 작업 환경 및 최종 산물의 품질을 고려하여 혼합 비율을 적절하게 제어할 수 있다.
상기 혼합 추출물이 정제수, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 및 1,3-부틸렌글라이콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 용매로 추출될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 원료에 포함된 유효성분은 용매의 극성에 따라 추출 비율이 상이해질 수 있다. 특히, 상기 용매는 상기 원료의 생리 활성 물질의 추출에 있어서 선택성이 우수한 알코올일 수 있고, 구체적으로, 최적의 피부 보습 효과를 구현하기 위해 상기 알코올이 60 내지 90% 농도의 에탄올일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
특히, 물과 에탄올은 극성이 상이하여 각 극성에 따라 추출되는 유효성분이 상이할 수 있으므로, 최적의 피부 보습 효과가 구현될 수 있도록 상기 에탄올의 농도를 적절히 제어할 수 있다. 다만, 상기 에탄올의 농도가 60% 미만이면 피부 보습 효과를 나타내는 유효성분이 충분히 추출되지 않을 수 있고, 90% 초과이면 적정한 수율이 구현되지 않을 수 있으므로, 상기 에탄올의 농도를 상기 범위 내에서 적절하게 조절할 수 있다.
상기 피부 외용제 조성물이 피부 진정용 또는 아토피 피부염 개선용일 수 있고, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이, 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화될 수 있다.
상기 피부 외용제 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 유효성분 외 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.
상기 피부 외용제 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 및 친수성 또는 친유성 활성제와 같은 화장료학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 포함할 수 있다.
다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택하는 것이 바람직하다.
이하, 첨부된 도면을 참고하여 본 발명의 실시예에 관하여 상세히 서술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.
제조예 1 : 비피더스 균주 발효 추출물의 제조
비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum) 균주를 탈지분유 배지에 접종하고 37℃에서 3일간 배양한 후 원심분리하여 상등액을 얻었다. 회수된 상등액의 pH를 6.5로 조정한 후 동결 건조하여 발효물을 수득하였다. 탈지분유 배지의 조성은 하기 표 1과 같다.
성분 농도(g/L)
탈지분유 100
포도당 20
효모추출물 3
펩톤 3
증류수 1
제조예 2 : 녹차잎 비피더스 발효 추출물의 제조
포도당, 설탕, 물엿, 효모 추출물(yeast extract)이 포함된 발효배지(포도당 1.5%(v/v), 설탕 1.5%(v/v), 물엿 1.5%(v/v), 효모 추출물 0.3%(v/v))를 이용하여 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum) 균주의 발효 추출물을 제조하였다.
상기 배지(10 mL)에 비피도박테리움 비피덤 균주 건조체 10 mg을 첨가하여 전배양(pre-cultivation)하였다. 상기 발효용 배지와 동일한 조성의 배지에 녹차잎 추출물을 첨가하고 상기 전배양액을 접종하여 발효시켰다.
비피도박테리움 비피덤 균주를 36.5℃에서 36시간 동안 배양하였으며, 배양시 균주의 증식 속도를 향상시키기 위하여 포도당 및 설탕 함량을 제어하였다. 발효가 종료된 후 원심 분리 및 필터링을 거쳐 녹차잎 비피더스 발효 추출물을 수득하였다.
제조예 3 : 천연 추출물( 열수 추출)의 제조
귤외피, 다시마, 동백꽃, 상백피, 및 애엽을 수세한 후 상온에서 건조시키고 분쇄하여 조분쇄물을 각각 100g씩 수득하였다.
상기 각 분쇄물 100g을 10배 부피의 정제수에 침지하여 80℃의 온도에서 12시간 동안 환류 추출하였다.
상기 추출물을 미세 필터를 통해 여과하였으며 잔여 원료에 대해 동일한 방법으로 3회 반복 추출한 후 상온에서 냉각하였다. 상기 각 추출물은 30℃에서 감압 농축되었으며 동결 건조되어 고형으로 수득되었다.
제조예 4 : 천연 추출물(에탄올 추출)의 제조
추출 용매로서 에탄올 수용액(70% 질량농도)를 사용한 것을 제외하고 제조예 3과 동일한 방법으로 각 추출물을 수득하였다. 각 추출물은 감압 농축한 후 동결 건조하여 고형으로 수득하였다.
실시예 1 : 혼합 추출물( 열수 추출) 시료
동결 건조하여 수득한 제조예 1 및 제조예 3의 추출물을 동일 비율로 혼합하였다. 상기 혼합된 복합추출물 10g을 실시예 1의 시료로 하였다.
실시예 2 : 혼합 추출물(에탄올 추출) 시료
동결 건조하여 수득한 제조예 1 및 제조예 4의 추출물을 동일 비율로 혼합하였다. 상기 혼합된 복합추출물 10g을 실시예 2의 시료로 하였다.
실시예 3 : 혼합 추출물(에탄올 추출) 시료
동결 건조하여 수득한 제조예 2 및 제조예 4의 추출물을 동일 비율로 혼합하였다. 상기 혼합된 복합추출물 10g을 실시예 3의 시료로 하였다.
비교예 1 : 비피더스 발효 추출물 시료
동결 건조하여 수득한 제조예 1의 비피더스 발효 추출물 10g을 비교예 1의 시료로 하였다.
비교예 2 : 귤외피 추출물( 열수 추출) 시료
동결 건조하여 수득된 제조예 1의 귤외피 추출물 10g을 비교예 2의 시료로 하였다.
비교예 3 : 다시마 추출물( 열수 추출) 시료
동결 건조하여 수득된 제조예 2의 다시마 추출물 10g을 비교예 3의 시료로 하였다.
비교예 4 : 동백꽃 추출물( 열수 추출) 시료
동결 건조하여 수득된 제조예 2의 동백꽃 추출물 10g을 비교예 4의 시료로 하였다.
비교예 5 : 애엽 추출물( 열수 추출) 시료
동결 건조하여 수득된 제조예 2의 애엽 추출물 10g을 비교예 5의 시료로 하였다.
실험예 1 : 자유라디칼 소거 활성 평가
상기 실시예 및 비교예의 추출물을 정제수에 현탁(농도 10%)하여 자유라디칼 소거 활성(free radical scavenging acticity)을 평가하였다.
DPPH 측정법은 억제제(inhibitor)가 안정한 라디칼 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl radical)를 소거하여 탈색되는 정도를 540 nm에서 흡광도를 측정하는 방법이다.
대조군으로서 디부틸히드록시톨루엔(BHT, Dibutyl hydroxy toluene)을 이용하여 자유라디칼 소거 활성을 명확히 비교하였다. 디부틸히드록시톨루엔은 무색의 결정, 또는 백색의 결정성 분말로 항산화 효과가 우수하여 식용유지, 유지성 식품의 산화방지제로 널리 사용되고 있다.
실험의 정확도를 위하여 동일한 실험을 3회 반복하였으며, 결과는 하기 표 2와 같다.
구분 DPPH radical scavenging activity(%)
실시예 1 133.1
실시예 2 141.7
실시예 3 147.5
비교예 1 113.5
비교예 2 103.3
비교예 3 106.5
비교예 4 92.7
비교예 5 97.8
대조군 155.9
표 2를 참조하면, 실시예 1 내지 3은 농도가 증가함에 따라 자유라디칼 소거활성이 증가하였으며, 자유라디칼 소거활성은 비교예 1 내지 5와 비교하여 현저히 우수하였다.
자유라디칼 소거활성이 높을수록 항산화 효과가 뛰어난 것으로 평가할 수 있으며, 특히, 에탄올 추출에 의한 실시예 2및 3의 추출물은 실시예 1과 비교하여 항산화 효과가 더욱 우수하였다.
실험예 2 : 항염 활성 평가
Lipopolysaccharide(LPS)로 자극을 유도한 쥐 대식세포주 RAW 264.7 cell에서 EAME의 NO 생성 억제능을 분석하여 실시예 및 비교예의 항염 활성을 평가하였다.
실험을 위해 Murine macrophage cell line 인 Raw 264.7 세포를 한국 세포주 은행으로부터 분양 받아 100units/mL penicillin-streptomycin과 10% fetal bovine serum(FBS)이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃ 5% CO2 incubator에서 배양하였으며, 2 내지 3일에 한번씩 계대 배양을 실시하였다.
Raw 264.7 세포(3 X 105 cells/mL)를 18시간 전 배양 후, 실시예 및 비교예의 추출물 시료(농도 10%)와 LPS(1 μg/mL)를 동시 처리하여 24시간동안 배양하였고, 생성된 NO는 Griess reagent을 이용하여 세포 배양액 중 존재하는 NO2 -의 형태로 측정하였다. 음성 대조군은 LPS를 처리하지 않았으며, 양성 대조군은 LPS만을 처리하여 생성된 NO량을 측정하였다.
세포 배양 상층액 100μL 및 Griess 시약(1%(w/v) sulfanilamide, 0.1%(w/v) naphtylehtylenediamine in 2.5%(v/v) phosphoric acid)을 동량 혼합하여 10분간 실온 암실에서 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 흡광도(540nm)를 측정하였다. 표준농도 곡선은 sodium nitrite(NaNO2)를 serial dilution하여 얻었다(10-100μM). 측정 결과는 하기 표 3과 같다.
구분 NO 생성량(μM)
실시예 1 13.47
실시예 2 11.72
실시예 3 10.37
비교예 1 22.54
비교예 2 24.94
비교예 3 23.61
비교예 4 26.53
비교예 5 25.52
LPS(-) 6.64
LPS(+) 37.21
표 3을 참조하면, 실시예 1 내지 3의 혼합 추출물은 비교예 1 내지 5의 단일 추출물과 비교하여 더 높은 NO(Nitric oxide) 생성 억제 활성을 나타냈으며, 항산화 및 항염증 활성이 현저히 우수하였다. 또한, 에탄올 추출에 의한 실시예 2 및 3의 추출물은 실시예 1과 비교하여 항염 활성이 더욱 우수하였다.
실험예 3 : 항균 활성 평가
실시예 및 비교예에서 수득한 시료의 항균 활성을 평가하였다. 공시균으로서 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes KCTC 3314)를 사용하였으며 양성 대조군으로서 화학합성 항균제인 트리클로산을 사용하였다.
프로피오니박테리움 아크네스균은 5% sheep blood가 포함된 tryptic soy agar 배지에 striking하여 2 내지 3일 정도 배양 하여 미리 준비해 둔 McFaland nephleometer standards 0.5(1% Barum chloride(0.05 ml) + 1% Sulfuric acid(9.95 ml))의 탁도와 동일하게 하면 균의 농도는 1x108 cells/mL이었다.
액체 BHI배지 2ml에 각 시료를 0에서 2000ppm까지 100ppm 간격으로 희석한 후, 1x108 cells/mL의 균액 20μL를 접종하여 48시간 동안 배양시켰다. 혼탁도를 기준으로 성장이 저해된 최소농도를 최저 성장저해농도(MIC)로 정의하였으며, 결과는 하기 표 4와 같다.
구분 최저성장저해농도 MIC(PPM)
실시예 1 600
실시예 2 520
실시예 3 450
비교예 1 1200
비교예 2 1400
비교예 3 1550
비교예 4 1650
비교예 5 1450
트리클로산 400
표 4를 참조하면 실시예 1 내지 3의 혼합 추출물은 양성 대조군인 트리클로산과 비교하여 항균 효과가 다소 미약하였으나, 비교예 1 내지 5와 비교하여 항균 효과가 현저히 우수하였다.
특히, 에탄올 추출에 의한 실시예 2 및 3의 추출물은 실시예 1과 비교하여 비듬균에 대한 항균 효과가 더욱 우수하였다.
실험예 4 : 아토피 피부염 개선 효과 평가
상기 실시예 및 비교예에서 수득된 시료를 포함하는 피부 외용제의 아토피 개선 효과를 평가하였다. 상기 각 시료를 동일한 조성의 크림으로 제형화하였으며, 실시예 1 내지 3, 비교예 1 내지 5의 시료만을 달리하였다.
30 내지 50세 여성 중 선정된 80명에 대하여 제형화한 실시예 및 비교예의 크림을 적용하고 아토피 피부염 개선 정도를 평가하였다.
유사한 피부염 증상을 나타내는 여성 80명에 대하여, 10명씩 8개의 조로 나누고 상기 제형화한 크림을 온도 24 내지 26℃, 습도 75% 조건에서 매일 2회씩 12주간 안면에 전체에 도포시켰다.
시험을 종료한 시점에 시험 대상자들로 하여금 설문지를 작성하게 하여 주관적인 효능 평가를 실시하였다. 설문에서는 아토피 피부염의 증상을 "소양감", "건조함", "각질 발생", "비듬", "홍반", "부어오름", "피부균열", "진물과 습진", 및 "태선화본"으로 나누고, 상기 증상이 있는 경우 각각의 증상에 대하여 개선 정도를 평가한 후 이를 평균하여 아토피 피부염 증상 개선 효과를 개인별로 평가하였다. 평가 결과는 하기 표 5와 같다.
시료 현저히 개선 (명) 약간의 개선 (명) 개선 없음 (명) 악화 (명)
실시예 1 6 3 1 -
실시예 2 7 2 1 -
실시예 3 8 1 1 -
비교예 1 3 4 2 1
비교예 2 2 4 3 1
비교예 3 3 3 3 1
비교예 4 3 3 2 2
비교예 5 2 4 2 2
표 5를 참고하면, 실시예 1 내지 3의 혼합 추출물은 비교예 1 내지 5의 단일 추출물과 비교하여 아토피 피부염 개선 효과가 우수한 것으로 평가되었다.
또한, 에탄올 추출에 의한 실시예 2 및 3의 추출물은 실시예 1과 비교하여 아토피 피부염을 현저히 개선시켰으며, 피부 진정 효과가 우수하였다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.
본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (7)

  1. 비피더스(Bifidobacterium spp.) 발효 추출물, 귤외피 추출물, 다시마 추출물, 동백꽃 추출물, 및 애엽 추출물로 구성된 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하되,
    상기 비피더스 발효 추출물은 녹차잎 추출물에 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum) 균주를 접종 및 배양하여 수득한 아토피 피부염 개선용 피부 외용제 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 혼합 추출물은 상기 비피더스 발효 추출물 10 내지 20 중량부, 상기 귤외피 추출물 10 내지 20 중량부, 상기 다시마 추출물 10 내지 20 중량부, 상기 동백꽃 추출물 10 내지 20 중량부, 및 상기 애엽 추출물 10 내지 20 중량부로 구성된 피부 외용제 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 혼합 추출물 0.5 내지 10.0중량%를 포함하는 피부 외용제 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 혼합 추출물은 정제수, 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 및 1,3-부틸렌글라이콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 추출된 피부 외용제 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 알코올은 60 내지 90%(v/v) 농도의 에탄올인 피부 외용제 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    항산화, 항염, 및 항균 활성을 더 가지는 피부 외용제 조성물.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이, 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화된 피부 외용제 조성물.
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