KR101789934B1 - 상피세포성장인자수용체 변이체를 가진 종양 진단 및 종양 성장 억제 활성을 갖는 신규 화합물 및 이를 포함하는 의학적 용도 - Google Patents

상피세포성장인자수용체 변이체를 가진 종양 진단 및 종양 성장 억제 활성을 갖는 신규 화합물 및 이를 포함하는 의학적 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 상피세포성장인자수용체 변이체를 가진 종양 진단 및 종양 성장 억제 활성을 갖는 신규 화합물 또는 이의 염, 이를 포함하는 조영제, 및 이를 유효성분으로 함유하는 EGFR 관련 암질환 치료 또는 예방용 약학조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 신규 화합물 또는 그의 염은 야생형 EGFR은 억제하지 않고 EGFR 변이체만을 선택적으로 억제할 수 있으므로, EGFR 관련 암질환인 폐암, 결장암 또는 유방암을 치료하고 예방할 수 있으며 특히 이레사나 타세바가 효과를 발휘하지 못하는 비소세포성 폐암을 효과적으로 치료하고 예방할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 신규 화합물 또는 그의 염은 야생형 EGFR 과발현 암세포보다는 EGFR 변이를 통한 제피니팁 민감성이 있는 암세포 또는 EGFR T790M 변이를 보이는 암세포를 표적으로 반응하는 바, 영상학적으로 EGFR 관련 암세포를 명확하게 구별할 수 있는 조영제로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

상피세포성장인자수용체 변이체를 가진 종양 진단 및 종양 성장 억제 활성을 갖는 신규 화합물 및 이를 포함하는 의학적 용도{Novel compound having tumor diagnosis or tumor growth inhibitory activity on EGFR mutant and medical uses comprising the same}
본 발명은 상피세포성장인자수용체 변이체를 가진 종양 진단 및 종양 성장 억제 활성을 갖는 신규 화합물 또는 이의 염, 이를 포함하는 조영제, 및 이를 유효성분으로 함유하는 EGFR 관련 암질환 치료 또는 예방용 약학조성물에 관한 것이다.
상피세포성장인자수용체(EGFR)는 세포의 증식, 생존, 이동, 분화 등을 조절 하고, 암세포의 성장에도 중요한 역할을 한다. EGFR 저해제인 게피티닙(gefitinib, 제품명: 이레사)과 엘로티닙(erlotinib, 제품명: 타세바)은 현재 임상에서 비소세포성 폐암(non-small cell lung cancer; NSCLC) 치료에 좋은 효과를 보이고 있다.
그러나 게피티닙과 엘로티닙은 야생형 EGFR 또는 카이나아제 도메인을 활성화 시켜주는 돌연변이 (L858R)를 가진 EGFR에는 좋은 효과를 보이지만 EGFR-T790M 에는 미약한 효과를 보인다.
T790M 변이체는 ATP 결합 포켓의 게이트키퍼(gatekeeper) 위치에 단일 점돌연변이가 일어나 Threonine790이 Methionine790으로 바뀐 형태이다. 이러한 돌연변이가 일어나면 EGFR의 게피티닙과 엘로티닙에 대한 친화도는 거의 변하지 않지만 ATP에 대한 친화도는 증가한다. 따라서 게피티닙과 엘로티닙이 T790M에 좋은 효과를 보이지 못하게 된다. 이러한 EGFR T790M 돌연변이는 임상적으로 발생하는 적응 내성의 50% 가량을 차지하기 때문에 비소세포성 폐암의 치료에 있어 매우 큰 장애물이 된다.
현재 많은 연구자들이 T790M을 극복하기 위한 연구를 진행하고 있다. 현재까지 알려져 있는 EGFR T790M 저해제들은 ATP 결합 부위의 Cystein797에 공유결합을 하는 ATP 경쟁적인 비가역적 저해제이다. 하지만 HKI-272, PF00299804, BIBW-2992 등의 퀴나졸린 구조를 가진 1세대 저해제들은 임상시험에서 기대에 못 미치는 효과를 보이고 있다.
따라서, 비소세포성 폐암과 같은 EGFR 관련 암질환을 효과적으로 치료할 수 있는 새로운 계열의 EGFR T790M 저해제 개발이 필요하다.
또한, 비소세포성 폐암과 같은 EGFR 관련 암질환이 야생형 EGFR 과발현 암세포인지, EGFR 변이를 통한 제피니팁 민감성이 있는 암세포(△E746-A750, L858R)인지, 혹은 EGFR T790M 변이를 보이는 암세포인지를 명확하게 구별할 수 있다면 암질환 치료에 보다 효과적이므로, EGFR 관련 암세포의 특징을 명확하게 진단할 수 있는 기술 개발이 필요하다.
한국등록특허 제0524701호
본 발명의 목적은 야생형 EGFR은 억제하지 않으면서 EGFR 변이체만을 선택적으로 억제하는 EGFR 저해제를 개발하는 데에 있다.
또한, 본 발명의 목적은 야생형 EGFR 과발현 암세포, EGFR 변이를 통한 제피니팁 민감성이 있는 암세포 또는 EGFR T790M 변이를 보이는 암세포를 명확하게 구별할 수 있는 특정 암세포 표적 화합물을 포함하는 조영제를 개발하는 데에 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 그의 염을 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112016073806757-pat00001
상기 화학식 1에서, R은 프로피온아미도 또는 아크릴아미도에서 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 그의 염을 유효성분으로 함유하는 상피세포성장인자수용체(EGFR) 관련 암질환 치료 또는 예방용 약학조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112016073806757-pat00002
상기 화학식 1에서, R은 프로피온아미도 또는 아크릴아미도에서 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물 또는 그의 염을 포함하는 조영제를 제공한다:
[화학식 2]
Figure 112016073806757-pat00003
상기 화학식 2에서, R은 프로피온아미도 또는 아크릴아미도에서 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 신규 화합물 또는 그의 염은 야생형 EGFR은 억제하지 않고 EGFR 변이체만을 선택적으로 억제할 수 있으므로, EGFR 관련 암질환인 폐암, 결장암 또는 유방암을 치료하고 예방할 수 있으며 특히 이레사나 타세바가 효과를 발휘하지 못하는 비소세포성 폐암을 효과적으로 치료하고 예방할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 신규 화합물 또는 그의 염은 야생형 EGFR 과발현 암세포보다는 EGFR 변이를 통한 제피니팁 민감성이 있는 암세포 또는 EGFR T790M 변이를 보이는 암세포를 표적으로 반응하는 바, 영상학적으로 EGFR 관련 암세포를 명확하게 구별할 수 있는 조영제로서 유용하게 사용될 수 있다.
도 1 및 도 2는 18F 라벨링(labeling) 반응 조건, 반응 과정 및 18F 라벨링된 최종 화합물을 나타낸다.
도 3 및 도 4는 CONDITION B로 실험을 진행하여, 18F 라벨링된 최종 화합물의 피크를 분석한 결과이다.
본 발명에 기재된 용어, 기술 등은 특별한 한정이 없는 한, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 일반적으로 사용되는 의미로 사용된다. 또한, 본 명세서에 언급된 문헌들은 모두 본 발명을 설명하기 위한 문헌으로 본 명세서에 포함된다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 그의 염을 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112016073806757-pat00004
상기 화학식 1에서, R은 프로피온아미도 또는 아크릴아미도에서 선택될 수 있다.
상기 화합물은 N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 또는 N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)아크릴아마이드에서 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 화합물은 공지의 방법에 의해 상응하는 염으로 제조할 수 있다. 이러한 염은 독성이 없는 수용성의 것이 바람직하다. 바람직한 염으로는 칼륨, 나트륨 등 등과 같은 알칼리 금속의 염; 칼슘, 마그네슘 등과 같은 알칼리토류 금속의 염; 그리고 테트라메틸 암모늄, 트리에틸아민, 메틸아민, 디메틸아민, 시클로펜틸아민, 벤질아민, 페네틸아민, 피페리딘, 모노에탄올아민, 디에탄올아민, 트리스(히드록시메틸)아민, 라이신, 아르기닌, N-메틸-D-글루카민 등과 같은 약학적으로 허용 가능한 아민의 염을 들 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 화합물은 공지의 방법에 의해 상응하는 산 부가염으로 제조할 수 있다. 이러한 산 부가염은 독성이 없는 수용성인 것이 바람직하다. 바람직한 산 부가염으로는 염산염, 브롬화수소산염, 요오드화수소산염, 황산염, 인산염 및 질산염과 같은 무기산염, 또는 아세트산염, 젖산염, 주석산염, 옥살산염, 푸마르산염, 말레인산염, 구연산염, 벤조산염, 메탄술폰산염, 에탄술폰산염, 벤젠술폰산염, 톨루엔술폰산염, 이세티온산염, 글루쿠론산염 및 글루콘산염과 같은 유기산염을 들 수 있다.
본 발명에 따른 화합물 또는 그의 염은 공지의 방법에 의해 수화물로 제조할 수 있다.
특히, 본 발명에 따른 화합물 또는 그 염은 야생형 EGFR은 억제하지 않고 EGFR 변이체만을 선택적으로 억제할 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 그의 염을 유효성분으로 함유하는 상피세포성장인자수용체(EGFR) 관련 암질환 치료 또는 예방용 약학조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112016073806757-pat00005
상기 화학식 1에서, R은 프로피온아미도 또는 아크릴아미도에서 선택될 수 있다.
상기 화합물은 N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 또는 N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)아크릴아마이드에서 선택될 수 있다.
상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 관련 암질환은 폐암, 결장암 및 유방암으로 이루어진 군에서 선택된 암질환일 수 있으며, 바람직하게는 비소세포성 폐암일 수 있다.
상기 약학조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용가능한 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물은 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제할 수 있다.
또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 화합물 또는 그 염은 약학조성물 총 100 중량부에 대하여 0.01 내지 30.0 중량부로 포함될 수 있다. 상기 함량이 0.01 중량% 미만일 경우에는 EGFR T790M 변이체 저해 효과가 미미하며, 30.0 중량%를 초과할 경우에는 사용량에 따른 효과가 미미한 문제가 야기될 수 있다.
상기 약학조성물의 유효성분인 본 발명에 따른 화합물 또는 그 염의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중, 질환에 따라 달라질 수 있으나, 0.001 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.01 내지 10 mg/kg을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다.　
또한, 본 발명에 따른 화합물 또는 그 염의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다.　 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
상기 약학조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 기관지내 흡입, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 화합물 또는 그 염은 50% 치사량(LC50)이 2 g/kg 이상으로 안정성이 확보된 것으로서, 본 발명의 약학조성물에 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물 또는 그의 염을 포함하는 조영제를 제공한다:
[화학식 2]
Figure 112016073806757-pat00006
상기 화학식 2에서, R은 프로피온아미도 또는 아크릴아미도에서 선택될 수 있다.
상기 화합물은 야생형 EGFR 과발현 세포, 제피티닙 민감성 EGFR 변이 세포 또는 T790M 변이 세포에서 선택된 어느 하나의 종양세포를 표적으로 하는지를 진단하는 데에 매우 유용하게 사용될 수 있다.
상기 조영제는 임의의 첨가제, 예를 들어 산, 염기, 완충액과 같은 pH 조절제, 아스코르브산과 같은 안정화제 또는 염화나트륨과 같은 등장화제 등을 더 포함할 수 있다.
상기 조영제로 이용되는 화합물은 조직 또는 환자에게 검출가능한 양으로 도입되며, 당업자에게 공지된 방법에 의해 조직 또는 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 화합물은 경구, 직장내, 비경구 (정맥내, 근내 또는 피하), 수조내 (intracisternally), 질내, 복강내, 방광내, 국소 (분말, 연고 또는 점적제) 투여되거나, 또는 구강내 또는 비내 스프레이로서 투여될 수 있다. 표지된 화합물의 환자에 대한 투여는 전신 또는 국소 투여 경로에 의해 실시될 수 있다. 예를 들어, 표지된 화합물은 신체 전반에 걸쳐 전달되도록 환자에게 투여될 수 있다. 다른 방법으로, 표지된 화합물은 목적하는 특이적인 장기 또는 조직에 투여될 수 있다.
당업자는 표지된 화합물을 검출하기 위한 다양한 방식을 잘 알고 있다. 예를 들어, 자기 공명 영상 (MRI), 양전자 방출 단층촬영 (PET), 또는 단일 광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT)을 사용하여 방사성 표지된 화합물을 검출할 수 있다. 화합물 내로 도입되는 표지는 목적하는 검출 방법에 따라 결정될 것이다.
이하, 본 발명을 하기 제조예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 제조예, 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 제조예, 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
< 참조예 1> 화합물의 합성 관련 준비
박층 크로마토그래피(TLC)는 TLC silica gel (DC Kiesegel 60 F254, Merck)을 사용하였고 분취 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(PTLC)는 1mm silica gel (PLC Kiesegel 60 F254, Merck)을 사용하였다. 칼럼 크로마토그래피는 silica gel (Kiesegel 60 F254, 230-40 mesh, Merck)을 사용하였다. 마이크로 웨이브 반응기는 Anton Paar의 MonowaveTM 300을 사용하였다. 1H NMR(nuclear magnetic resonance) spectra는 Gemini 2000(300MHz)와 VNS(600 MHz, Varian)을 이용하여 측정하였다. TMS(tetramethylsilane)을 내부 표준 물질로 사용하였으며, chemical shift는 ppm (part per million), 커플링 상수(coupling constant)는 Hz를 단위로 하여 나타내었다.
<실시예 1> 화합물 6a 내지 10f의 합성
[반응식 1]
Figure 112016073806757-pat00007
1. 6-아이오도퀴나졸린-4-올 (1) 합성
5-아이오도안트라닐산 메틸 에스테르(Iodoanthranilic acid methyl ester, 1 g, 3.61 mmol)와 포름아마이드(2 ml)를 반응물질 겸 용매로 사용하여 마이크로 웨이브 반응기용 바이알에 담아서 마이크로웨이브 반응기를 사용하여 200℃에서 1시간 반응하였다. 반응이 끝난 후 생성된 고체 화합물을 물로 세척한 후 100℃ 오븐에서 1시간 가량 두어 수분을 제거하여 화합물 1(784 mg, 2.88 mmol, 80%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, acetone-d6): δ 8.50(d, 1H, J = 2.1 Hz), 8.17(s, 1H), 8.11(dd, 1H, J = 8.7Hz, 2.1 Hz), 7.50(d, 1H, J = 8.7 Hz)
2. 4-클로로-6-아이오도퀴나졸린 (2) 합성
화합물 1(784 mg, 2.88 mmol)을 테트라하이드로퓨란(THF) 10 ml에 녹인 후 염화옥살릴(731 mg, 5.76 mmol)을 첨가하고 바로 DMF 두 세 방울을 반응 촉매로 첨가하였다. 상온에서 3시간 교반하였다. 반응 종료 확인 후에 반응물을 완전히 농축하여 화합물 2(828 mg, 2.85 mmol, 99%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, acetone-d6): δ 8.42(s, 1H), 8.40(d, 1H, J = 2.1 Hz), 8.15(dd, 1H, J = 8.7 Hz, 2.1 Hz), 7.52(d, 1H, J = 8.7 Hz)
3. N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-아이오도퀴나졸린-4-아민 (3) 합성
화합물 2 (828 mg, 2.85 mmol)를 THF 10ml에 녹인 후 3-클로로-4-플루오로 아닐린 (498 mg, 3.42 mmol)을 THF 5ml에 녹여서 적가한 후 1시간 동안 환류 하였다. 생성된 고체를 차가운 THF에 씻어 낸 후 건조시켜 화합물 3(819 mg, 2.05 mmol, 60%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, acetone-d6): δ 8.83(d, 1H, J = 1.8 Hz), 8.71(s,1H), 8.32(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 8.16(dd, 1H, J = 8.7 Hz, 1.8 Hz), 7.89-7.92(m, 1H), 7.62 (d, 1H, J = 8.7Hz), 7.35(t, 1H, J = 9 Hz)
4. N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-((트리메틸실릴)에티닐)퀴나졸린-4-아민 (4) 합성
화합물 3 (819 mg, 2.05 mmol)과 테트라키스 트리페닐 포스핀 팔라듐(0) (473 mg, 0.41 mmol)을 THF 10ml에 녹인 후 실온에서 교반하는 동안에 트리메틸실릴 아세틸렌(402 mg, 4.1 mmol)을 요오드화구리(192 mg, 0.41 mmol)와 THF 10ml에 녹인 후 TEA(418 mg, 4.1 mmol)을 넣고 용액 색깔이 노란색에서 형광 주황색으로 바뀌면 아세틸렌 혼합물을 화합물 3의 반응 용액 플라스크에 적가 한 후 18시간 동안 환류하였다. 반응이 종결 되면 잔사를 CH2Cl2로 희석한 후 물과 염수로 세척하였다. 무수 MgSO4로 유기층 용액을 건조 여과한 후 여액을 감압 농축하고 에틸아세테이트(EA):헥산(HEX)=1:20 조건으로 칼럼 크로마토그래피 하여 화합물 4(758 mg, 2.05 mmol, 50%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.58(s, 1H), 8.56(d, 1H, J = 1.2 Hz), 8.09(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.86(dd, 1H, J = 8.4 Hz, 1.5 Hz), 7.69-7.76(m, 3H), 7.27(t, 1H, J = 9 Hz), 0.27(s, 9H)
5. N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-에티닐퀴나졸린-4-아민 (5) 합성
화합물 4 (758 mg, 2.05 mmol)가 담긴 플라스크에 1M 화합물 4에 대해 THF(4.1 mmol, 4.1 ml)을 넣고 실온에서 10분간 교반한 후 반응 종결을 TLC로 확인하였다. 용액을 감압 농축하여 THF를 제거하여 잔사를 CH2Cl2로 희석한 후 물과 염수으로 세척하였다. 무수 MgSO4로 건조한 여액을 감압 농축하고 EA: HEX=1:2 조건으로 칼럼 크로마토그래피 하여 화합물 5(428 mg, 1.44 mmol, 70%)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.70(s, 1H), 8.60(d, 1H, J = 1.2 Hz), 8.34(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.81-7.93(m, 3H), 7.39(t, 1H, J = 9 Hz), 3.90(s, 1H)
6. 화합물 6a 내지 10f의 합성
화합물 5 (20 mg, 0.067 mmol)를 H2O: i-PrOH에 녹인 후 다양한 아자이드 화합물 (0.1 mmol)을 넣고 물(100 μl)에 녹인 소듐 아스코르베이트(1.4 mg, 0.007 mmol)와 물(100 μl)에 녹인 황산구리(II) 5수화물(0.2 mg, 0.0007 mmol)을 순서대로 넣어 주었다. 실온에서 10분간 교반 하였다. 생성된 고체를 여과 한 후 THF에 녹여서 PTLC를 이용하여 CH2Cl2: MeOH=20:1로 분리하여 화합물 6a 내지 10f를 얻었다.
1) 6-(1-벤질-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)퀴나졸린-4-아민 (6a)
수율 : 4.8 mg, 0.011 mmol, 16 %
1H NMR (300 MHz, acetone-d6): δ 9.53(s, 1H), 8.84(d, 1H, J = 1.2 Hz), 8.66(s, 1H), 8.49(s, 1H), 8.33-8.35(m, 1H), 8.30(dd, 1H, J = 8.4 Hz, 1.8 Hz), 7.89-7.92(m, 1H), 7.87(d, 1H, J = 9 Hz), 7.31-7.44(m, 5H)
2) N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-(1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)퀴나졸린-4-아민 (6b)
수율 : 5 mg, 0.011 mmol, 16 %
1H NMR (600 MHz, CD3OD): δ 8.21(d, 1H, J = 1.8 Hz), 8.57(s, 1H), 8.42(s, 1H), 8.32(dd, 1H, J = 9 Hz, 1.8 Hz), 8.07(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.86(d, 1H, J = 9 Hz), 7.71-7.74(m, 1H,), 7.46-7.48(m, 2H), 7.28(t, 1H, J = 9 Hz), 7.14-7.18(m, 2H), 5.69(s, 2H)
3) N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)퀴나졸린-4-아민 (6c)
수율 : 4 mg, 0.008 mmol, 13 %
1H NMR (600 MHz, acetone-d6): δ 9.52(s, 1H), 8.81(d, 1H, J = 1.8 Hz), 8.66(s, 1H), 8.41(s, 1H), 8.32-8.35(m, 1H,), 8.28(dd, 1H, J = 9 Hz, 1.8Hz), 7.88-7.92(m, 1H), 7.38-7.41(m, 2H), 7.32(t, 1H, J = 9 Hz), 6.96-6.98(m, 2H), 5.65(s, 2H), 3.80(s, 3H)
4) N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-(1-(3-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)퀴나졸린-4-아민 (6d)
수율 : 6 mg, 0.013 mmol, 19 %
1H NMR (600 MHz, CD3OD): δ 8.77(dd, 1H, J = 1.8 Hz, 0.6 Hz), 8.55(s, 1H), 8.38(s, 1H), 8.30(dd, 1H, J = 9 Hz, 1.8 Hz), 8.05(dd, 1H, J = 6 Hz, 2.4 Hz), 7.83(d, 1H, J = 9 Hz), 7.69-7.22(m, 1H), 7.32(t, 1H, J = 8.4 Hz), 7.26(t, 1H, J = 8.4 Hz), 6.96-6.98(m, 2H), 6.94(dd, 1H, J = 8.4 Hz, 1.2 Hz), 5.65(s, 2H), 3.79(s, 3H)
5) N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-(1-(4-메틸벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)퀴나졸린-4-아민 (6e)
수율 : 7 mg, 0.015 mmol, 23 %
1H NMR (300 MHz, acetone-d6): δ 9.54(s, 1H), 8.82(d, 1H, J = 2.1 Hz), 8.66(s, 1H), 8.44(s, 1H), 8.28-8.35(m, 2H,), 7.85-7.93(m, 2H), 7.22-7.36(m, 4H), 6.79(s, 1H), 5.68(s, 2H), 2.33(s, 3H)
6) N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-(1-(4-클로로페네틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)퀴나졸린-4-아민 (7)
수율 : 8 mg, 0.016 mmol, 24 %
1H NMR (600 MHz, acetone-d6): δ 10.12(s, 1H), 9.03(d, 1H, J = 1.8 Hz), 8.63(d, 2H, J = 2.4 Hz), 8.24(dd, 1H, J = 8.4 Hz, 2.4 Hz), 8.20(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.87-7.90(m, 2H,), 7.47(t, 1H, J = 9 Hz), 7.25-7.27(m, 2H), 4.73(t, 2H, J = 9 Hz), 3.26(t, 2H, J = 7.2 Hz)
7) N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-(1-(3-페닐프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)퀴나졸린-4-아민 (8)
수율 : 7mg, 0.015 mmol, 22 %
1H NMR (600 MHz, acetone-d6): δ 9.57(s, 1H), 8.85(d, 1H, J = 1.8 Hz), 8.67(d, 2H, J = 1.2 Hz), 8.35-8.38(m, 1H), 8.27(dd, 1H, J = 9 Hz, 1.8Hz), 8.20(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.91-7.94(m, 1H), 7.88(d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.26-7.35(m, 5H), 7.19-7.22(m, 1H), 4.55(t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.73(t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.30-2.35(m, 2H)
8) (E)-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-(1-신나밀-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)퀴나졸린-4-아민 (9)
수율 : 6 mg, 0.013 mmol, 19 %
1H NMR (600 MHz, acetone-d6): δ 8.77(d, 1H, J = 1.8 Hz), 8.54(s, 1H), 8.44(s, 1H), 8.30(dd, 1H, J = 8.4 Hz, 1.8 Hz), 8.05(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 3Hz), 7.81(d, 1H, J = 9 Hz), 7.68-7.71(m, 1H), 7.45-7.48(m, 2H), 7.31-7.34(m, 2H), 7.23-7.28(m, 2H), 6.81(d, 1H, J = 16.2 Hz), 6.50-6.55(m, 1H), 5.27 (d, 2H, J = 8.4 Hz)
9) N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-(1-(2-에톡시에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)퀴나졸린-4-아민 (10a)
수율 : 6 mg, 0.014 mmol, 21 %
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 10.12(s, 1H), 9.06(d, 1H, J = 1.8 Hz), 8.63(d, 2H, J = 1.2 Hz), 8.31(dd, 1H, J = 8.4Hz, 1.8Hz), 8.20(dd, 1H, J = 7.2Hz, 3Hz), 7.86-7.89(m, 2H), 7.47(t, 1H, J = 9 Hz), 4.64 (t, 2H, J = 5.4 Hz), 3.85 (t, 2H, J = 5.4 Hz), 5.27(q, 2H, J = 7.2 Hz), 1.09(t, 3H, J = 7.2 Hz)
10) N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-(1-(2-프로폭시에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)퀴나졸린-4-아민 (10b)
수율 : 5 mg, 0.011 mmol, 17 %
1H NMR (300 MHz, acetone-d6): δ 9.60(s, 1H), 8.85(d, 1H, J = 4.2 Hz), 8.68(s, 1H), 8.48(s,1H), 8.37-8.40(m, 1H), 8.30(dd, 1H, J = 17.4 Hz, 3.6Hz), 7.88-7.96(m, 2H), 7.35(t, 1H, J = 18 Hz), 4.69(t, 2H, J = 10.2 Hz), 3.92(t, 2H, J = 10.2 Hz), 3.44(t, 2H, J = 13.2 Hz), 1.49-1.61(m, 2H), 0.85(t, 3H, J = 14.4 Hz)
11) N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-(1-(2-메톡시에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)퀴나졸린-4-아민 (10c)
수율 : 8 mg, 0.02 mmol, 30 %
1H NMR (600 MHz, acetone-d6): δ 9.56(s, 1H), 8.84(d, 1H, J = 1.2 Hz), 8.67(s, 1H), 8.45(s, 1H), 8.35-8.38(m, 1H), 8.33(dd, 1H, J = 8.4 Hz, 1.8 Hz), 7.91-7.94(m, 1H), 7.89(d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.34(t, 1H, J = 9 Hz), 4.68(t, 2H, J = 4.8 Hz), 3.87(t, 2H, J = 4.8 Hz), 3.36(s, 3H)
12) N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-(1-(3-메톡시프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)퀴나졸린-4-아민 (10d)
수율 : 6 mg, 0.014 mmol, 21 %
1H NMR (600 MHz, acetone-d6): δ 9.56(s, 1H), 8.67(s, 1H), 8.47(s, 1H), 8.35-8.38(m, 1H), 8.29(dd, 1H, J = 9 Hz, 1.8 Hz), 7.91-7.94(m, 1H), 7.89(d, 1H, J = 9 Hz), 7.34(t, 1H, J = 9 Hz), 4.59(t, 2H, J = 6 Hz), 3.44(t, 2H, J = 6 Hz), 3.32(s, 3H), 2.20-2.24(m,2H)
13) 4-(4-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)퀴나졸린-6-일)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)부탄-1-올 (10e)
수율 :　4mg, 0.009 mmol, 13 %
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 10.13(s, 1H), 9.07(d, 1H, J = 3 Hz),　8.70(s, 1H), 8.64(s, 1H), 8.29(dd, 1H, J = 17.4 Hz, 1.8 Hz), 8.21(dd,　1H, J = 13.8 Hz, 5.4 Hz), 7.88-7.92(m, 2H), 7.47(t, 1H, J = 18 Hz),　4.52(t, 2H, J = 13.8 Hz), 3.41(t, 2H, J = 13.8 Hz), 1.92-2.03(m,2H),　1.52-1.62(m,2H)
14）N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-(1-펜틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)퀴나졸린-4-아민 (10f)
수율 : 8 mg, 0.019 mmol, 29 %
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 10.10(s, 1H), 9.04(d, 1H, J = 2.1 Hz), 8.66(s, 1H), 8.62(s, 1H), 8.26(dd, 1H, J = 8.4 Hz, 1.8 Hz), 8.19(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.85-7.88(m, 2H), 7.45(t, 1H, J = 9 Hz), 4.45(t, 2H, J = 7.2 Hz), 1.84-1.90(m, 2H), 1.27-1.34(m,2H), 0.91(t, 3H, J = 7.2 Hz)
<실시예 2> 화합물 16a 내지 17, 화합물 18a 내지 22c의 합성
[반응식 2]
Figure 112016073806757-pat00008
1. 7-클로로-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-나이트로퀴나졸린-4-아민 (12)합성
출발 물질인 7-클로로-6-나이트로퀴나졸린-4(3H)-온 11 (5 g, 22.16 mmol)을 30 ml의 CH3CN에 녹인 옥시 염화인(phosphorous oxy chloride) 10 ml를 첨가하고 80℃ 에서 5시간 동안 교반하였다. 5시간 후 10 ml의 다이옥산에 녹인 3-클로로-4-플루오로아닐린 (3.871 g, 26.59 mmol)을 적가한 후 1시간 동안 교반하였다. 반응이 종결된 것을 TLC로 확인한 후에 반응 용액에 2N KOH 용액으로 용액의 pH를 8-10사이로 조절하여 생성된 고체를 여과한 후 고체 화합물을 물과 에탄올로 씻은 후 화합물 12 (6.574 g, 18.61 mmol, 70 %)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, acetone-d6): δ 9.15(s, 1H), 8.79(s, 1H), 8.45(dd, 1H, J = 6.3 Hz, 2. 1Hz), 8.07(s, 1H), 7.80-7.85(m, 1H), 7.37(t, 1H, J = 9 Hz)
2. N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-나이트로-7-페닐설포닐)퀴나졸린-4-아민 (13) 합성
화합물 12(6.574 g, 18.61 mmol)와 벤젠설핀산 나트륨염(3.667 g, 22.34 mmol)를 DMF 30 ml에 녹인 후 90℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응이 종결된 것을 TLC로 확인한 후에 생성된 고체 화합물을 여과한 후 물과 에탄올로 씻고 100℃ 오븐에서 8시간 건조시켜 화합물 13 (6.833 g, 14.89 mmol, 80 %)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, acetone-d6): δ 9.07(s, 1H), 8.91(s, 1H), 8.74(s, 1H), 8.24(dd, 1H, J = 6.3 Hz, 2.1 Hz), 8.11-8.15(m, 2H), 7.97(s, 1H), 7.72-7.70(m 6H), 7.38(t, 1H, J = 9 Hz)
3. N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6-나이트로-7-(프로프-2-일옥시)퀴나졸린-4-아민 (14) 합성
화합물 13 (6.833 g, 14.89 mmol)을 t-BuOH 20 ml에 녹인 후 프로파길 알코올 (1.669 g, 29.78 mmol)을 첨가하고 0℃에서 1M 포타슘 t-부톡사이드 (in t-BuOH, 30 ml, 30 mmol)을 적가하였다. 실온에서 10시간 교반한 후에 온도를 80℃로 올려서 밤새도록 교반하였다. 반응이 종결된 것을 확인한 후에 반응 잔사를 감압 농축하여 용매를 제거하고 CHCl3:i-PrOH=3:1로 희석한 후 2N HCl을 사용하여 중성화한 후 물과 염수로 세척하였다. 무수 MgSO4로 건조한 여액을 감압 농축하고 EA: HEX=1:5 조건으로 칼럼 크로마토그래피 하여 화합물 14 (2.220 g, 5.95 mmol, 40 %)를 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 9.54(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.71(s, 1H), 8.25-2.28(m, 1H), 7.70-7.90(m, 1H), 7.61(s, 1H), 7.35(t, 1H, J = 9 Hz), 5.19(d, 2H, J = 3 Hz), 3.30(t, 1H, J = 3 Hz)
4. N 4 -(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-(프로프-2-이닐옥시)퀴나졸린-4,6-디아민 (15) 합성
Fe (1.667 g, 29.77 mmol)을 반응 플라스크에 넣고 50 % EtOH 10 ml를 넣은 후에 진한 HCl 두세 방울을 넣고 30분간 환류하였다. 50% EtOH 10ml에 녹인 화합물 14 (2.220 g, 5.95 mml)을 적가한 후에 3시간동안 환류하였다. 반응이 종결된 것을 TLC로 확인 한 후에 반응 잔사를 셀라이트(celite)로 여과하여 Fe를 제거한 후 여액을 감압 농축한 후 CHCl3:i-PrOH=3:1로 희석하고 포화 탄산수소나트륨 수용액을 사용하여 중성화 한 후 물과 염수로 세척하였다. 무수 MgSO4로 건조한 여액을 감압 농축하여 화합물 15 (1.886 g, 5.35 mmol, 90 %)를 얻었다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 9.59(s, 1H), 8.42(s, 1H), 8.16(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 1.8 Hz), 7.77-7.80(m, 1H), 7.40-7.43(m, 2H), 7.22(s, 1H), 5.45(s, 1H), 5.04(d, 3H, J = 1.8 Hz), 3.70(s, 1H)
5. 화합물 16a 내지 17의 합성
화합물 15 (200 mg, 0.58 mmol)를 THF 5ml에 녹인 후 0℃에서 THF 1ml에 녹인 다양한 아실 클로라이드 유도체(1.16 mmol, 2 eq)를 적가하고 트리메틸아민(0.58 mmol, 1 eq)을 첨가한 후 1시간 교반하였다. 반응이 종결된 것을 확인 한 후에 반응 잔사를 농축한 뒤 PTLC를 이용하여 EA:HEX=1:2 조건에서 분리한 후 화합물 16a 내지 17을 다양한 수득률로 얻었다.
1) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-(프로프-2-이닐옥시)퀴나졸린-6-일)아크릴아마이드 (16a)
수율 : 46 mg , 0.116 mmol, 20 %
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.93(s, 1H), 8.48(s, 1H), 8.02(dd, 1H, J = 7.8 Hz, 2.7 Hz), 7.65-7.71(m, 1H), 7.4(s, 1H), 7.25(t, 1H, J=9 Hz), 6.63-6.73(m, 1H), 6.47(dd, 1H, J = 16.8 Hz, 1. 5Hz), 5.86(dd, 1H, J = 10.2 Hz, 1.8 Hz), 5.07(d, 1H, J = 2.4 Hz)
2) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-(프로프-2-이닐옥시)퀴나졸린-6-일)부틸아마이드 (16b)
수율 : 94 mg, 0.232 mmol, 40 %
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 9.81 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.13 (dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.79~7.82 (m, 1H), 7.42 (t, 1H, J = 9 Hz), 5.09 (s, 2H), 3.72 (s, 1H), 2.38(t, 2H, J = 7.2 Hz), 1.70-1.76(m, 2H), 0.98(t, 3H, J = 7.2 Hz)
3) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-(프로프-2-이닐옥시)퀴나졸린-6-일)펜타아마이드 (16c)
수율 : 55.7 mg, 0.13 mmol, 45 %
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 9.81 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.13 (dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.79~7.82 (m, 1H), 7.42 (t, 1H, J = 9 Hz), 5.09 (s, 2H), 3.72 (s, 1H), 2.40(t, 2H, J = 7.8 Hz), 1.65-1.70(m, 2H), 1.35-1.42(m, 2H), 0.92(t, 3H, J = 7.2 Hz)
4) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-(프로프-2-이닐옥시)퀴나졸린-6-일)-3-메틸부탄아마이드 (16d)
수율 : 53 mg, 0.12 mmol, 43 %
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 9.81 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.13 (dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.79~7.82 (m, 1H), 7.42 (t, 1H, J = 9 Hz), 5.09 (s, 2H), 3.72 (s, 1H), 2.27(d, 2H, J = 7.2 Hz), 2.14-2.21(m, 1H), 1.00(s, 3H), 0.99(s, 3H)
5) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-(프로프-2-이닐옥시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 (17)
수율 : 854 mg, 2.14 mmol, 40 %
1H-NMR (600MHz, DMSO-d6): δ 9.81 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.13 (dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.79~7.82 (m, 1H), 7.42 (t, 1H, J = 9 Hz), 5.09 (s, 2H), 3.72 (s, 1H), 2.47(dd, 2H, J = 15 Hz, 7.2 Hz), 1.13(t, 3H, J = 7.2 Hz)
6. 화합물 18a 내지 22c의 합성
화합물 17 (20 mg, 0.05 mmol)을 H2O: i-PrOH에 녹인 후 다양한 아자이드 화합물(0.75 mmol)을 넣고 물(100 μl)에 녹인 소듐 아스코르베이트(1 mg, 0.005 mmol, 0.1 eq)과 물(100 μl) 에 녹인 황산구리(Ⅱ) 5수화물(0.14 mg, 0.0007 mmol, 0.01 eq)을 순서대로 넣어주었고, 실온에서 10분간 교반하였다. 생성된 고체를 여과하여 얻은 후 THF에 녹여서 PTLC를 이용하여 CH2Cl2 : MeOH = 20 : 1로 분리하여 화합물 18a 내지 22c를 얻었다.
1) N-(7-((1-벤질-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)-4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 (18a)
수율 : 9mg, 0.016 mmol, 32 %
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 9.78(s, 1H), 9.31(s, 1H), 8.77(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.34(s, 1H), 8.12(dd, 1H, J = 7.2 Hz, 2.4 Hz), 7.78-7.81(m, 1H), 7.51(s, 1H), 7.30-7.43(m, 6H), 7.45(t, 1H, J = 9 Hz), 5.64(s, 2H), 5.42(s, 2H), 2.40(q, 2H, J = 7.8 Hz), 1.07(t, 3H, J = 7.2 Hz)
2) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-클로로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 (18b)
수율 : 7 mg, 0.012 mmol, 24 %
1H NMR (600 MHz, MeOD): δ 8.74(s, 1H), 8.45(s, 1H), 8.16(s, 1H), 7.99(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 3 Hz), 7.62-7.65(m, 1H), 7.29-7.36(m, 5H), 7.22(t, 1H, J = 9 Hz), 5.6(s, 2H), 5.41(s, 2H), 2.46(q, 2H, J = 7.8 Hz), 1.19(t, 3H, J = 7.2 Hz)
3) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 (18c)
수율 : 10 mg, 0.018 mmol, 36 %
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 9.78(s, 1H), 9.31(s, 1H), 8.77(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.34(s, 1H), 8.12(dd, 1H, J = 7.2 Hz, 2.4 Hz), 7.78-7.81(m, 1H), 7.51(s, 1H), 7.38-7.43(m, 3H), 7.18-7.22(m, 2H), 5.63(s, 2H), 5.42(s, 2H), 2.40(q, 2H, J = 7.8 Hz), 1.07(t, 3H, J = 7.2 Hz)
4) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(3-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 (18d)
수율 : 8 mg, 0.014 mmol, 28 %
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 9.78(s, 1H), 9.32(s, 1H), 8.77(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.38(s, 1H), 8.13(dd, 1H, J = 7.2 Hz, 1.5 Hz), 7.78-7.81(m, 1H), 7.51(s, 1H), 7.40-7.43(m, 2H), 7.14-7.20(m, 3H), 5.67(s, 2H), 5.43(s, 2H), 2.40(q, 2H, J = 7.8 Hz), 1.07(t, 3H, J = 7.2 Hz)
5) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(2-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 (18e)
수율 : 6 mg, 0.01 mmol, 20 %
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 9.78(s, 1H), 9.32(s, 1H), 8.77(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.32(s, 1H), 8.12(dd, 1H, J = 7.2 Hz, 2.4 Hz), 7.78-7.81(m, 1H), 7.51(s, 1H), 7.40-7.45(m, 2H), 7.35(t, 1H, J = 7.2 Hz), 7.20-7.27(m, 2H), 5.70(s, 2H), 5.42(s, 2H), 2.40(q, 2H, J = 7.8 Hz), 1.07(t, 3H, J = 7.2 Hz)
6) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-메틸벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 (18f)
수율 : 4 mg, 0.007 mmol, 14 %
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 9.78(s, 1H), 9.31(s, 1H), 8.77(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.29(s, 1H), 8.12(dd, 1H, J = 6.6Hz, 2.4Hz), 7.78-7.81(m, 1H), 7.50(s, 1H), 7.42(t, 1H, J = 9Hz), 7.21(d, 2H, J = 8.4Hz), 7.17(d, 2H, J = 8.4Hz), 5.58(s, 2H), 5.41(s, 2H), 2.39(q, 2H, J = 7.8Hz), 2.27(s, 1H), 1.07(t, 3H, J = 7.8Hz)
7) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((19-(4-메틸벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 (18g)
수율 : 5 mg, 0.008 mmol, 16 %
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 9.78(s, 1H), 9.31(s, 1H), 8.77(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.28(s, 1H), 8.12(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.78-7.81(m, 1H), 7.50(s, 1H), 7.42(t, 1H, J = 9 Hz), 7.28-7.31(m, 2H), 6.90-6.93(m, 2H), 5.48(s, 2H), 5.41(s, 2H), 3.73(s, 3H), 2.39(q, 2H, J = 7.8 Hz), 1.07(t, 3H, J = 7.8 Hz)
8) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(2-메톡시에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 (19a)
수율 : 6 mg, 0.012 mmol, 24 %
1H NMR (600MHz, DMSO-d6): δ 9.81 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.13 (dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.79~7.82 (m, 1H), 7.42 (t, 1H, J = 9 Hz), 5.09 (s, 2H), 3.72 (s, 1H), 2.47(dd, 2H, J = 15Hz, 7.2 Hz), 1.13(t, 3H, J = 7.2 Hz)
9) N-(7-((1-부틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)-4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 (19b)
수율 : 4 mg, 0.008 mmol, 16 %
1H NMR (600MHz, DMSO-d6): δ 9.36 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.25 (d, 1H, J = 6.6 Hz), 8.19(s, 1H), 7.82~7.85 (m, 1H), 7.51(s, 1H), 7.29(t, 1H, J = 9 Hz), 5.47 (s, 2H), 4.45(t, 1H, J = 7.2 Hz), 2.47-2.51(m, 2H), 1.87-1.91(m, 2H), 1.30-1.37(m, 2H), 1.17(t, 3H, J = 7.2 Hz), 0.93(t, 3H, J = 7.2 Hz)
10) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)아크릴아마이드 (20)
수율 : 3 mg, 0.005 mmol, 10 %
1H NMR (600MHz, DMSO-d6): δ 9.81 (s, 1H), 9.69 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.13 (dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.79~7.81 (m, 1H), 7.53(s, 1H), 7.38-7.44(m, 3H), 7.20(t, 1H, J = 8.4 Hz), 6.67(dd, 1H, J = 17.4 Hz, 10.2 Hz), 6.29(d, 1H, J = 16.8 Hz), 5.79(d, 1H, J = 10.8 Hz), 5.62(s, 2H), 5.44(s, sH)
11) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 (21a)
수율 : 4 mg, 0.007 mmol, 14 %
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 9.04(s, 1H), 8.64(s, 1H), 8.17(s,1H), 8.15(s,1H), 7.89(dd, 1H, J = 6.3 Hz, 2.4 Hz), 7.81(s, 1H), 7.71-7.76(m, 3H), 7.43-7.53(m, 2H), 7.21-7.28(m, 2H), 7.12(t, 1H, J = 8.7 Hz), 5.48(s, 2H), 2.49(q, 2H, J = 7.5 Hz), 1.26(t, 3H, J = 7.5 Hz)
12) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)아크릴아마이드 (21b)
수율 : 3 mg, 0.005 mmol, 10 %
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 9.16(s, 1H), 8.69(s, 1H), 8.27(s, 1H), 8.16(s, 1H), 7.93-7.97(m, 1H), 7.71-7.76(m, 3H), 7.51-7.56(m, 2H), 7.12-7.27(m, 3H), 6.46(d, 2H, J = 17.1 Hz), 6.29-6.38(m, 2H), 5.83(d, 2H, J = 11.1 Hz), 5.51(s, 2H)
13) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)부틸아마이드 (22a)
수율 :　9 mg, 0.016 mmol, 32 %
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.98(s, 1H), 8.57(s, 1H), 8.08(s, 1H),　8.01(s, 1H), 7.77(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.67(s, 1H), 7.43-7.45(m, 1H), 7.28-7.32(m, 3H), 7.05-7.09(m, 2H), 5.53(s, 2H), 5.31(s,　2H), 2.38(t, 2H, J = 7.2 Hz), 1.70-1.76(m, 2H), 0.98(t, 3H, J = 7.2 Hz)　
14) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)펜탄아마이드 (22b)
수율 :　8 mg, 0.014 mmol, 28 %
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 9.00(s, 1H), 8.58(s, 1H), 8.05(s, 1H),　7.89(s, 1H), 7.77(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.67(s, 1H), 7.43-7.45(m, 1H), 7.28-7.33(m, 3H), 7.06-7.09(m, 3H), 5.53(s, 2H), 5.32(s,　2H), 2.40(t, 2H, J = 7.8 Hz), 1.65-1.70(m, 2H), 1.35-1.42(m, 2H),　0.92(t, 3H, J = 7.2 Hz)
15) N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)-3-메틸부탄아마이드 (22c)
수율 : 7 mg, 0.012 mmol, 24 %
1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 9.00(s, 1H), 8.58(s, 1H), 8.00(s, 1H), 7.90(s, 1H), 7.72(dd, 1H, J = 6.6 Hz, 2.4 Hz), 7.66(s, 1H), 7.38-7.41(m, 1H), 7.28-7.31(m, 3H), 7.05-7.09(m, 3H), 5.53(s, 2H), 5.31(s, 2H), 2.27(d, 2H, J = 7.2 Hz), 2.14-2.21(m, 1H), 1.00(s, 3H), 0.99(s, 3H)
< 실시예 3> 18 F 라벨링 (labeling)
도 1 및 도 2에서 나타낸 바와 같이, 반감기가 110분인 18F로 라벨링(labeling)하였으며, 반응 조건은 TBAB/DMF로 100℃에서 10 내지 30분 동안 반응시켰다. Manual로 직접 상태를 확인하여 진행하였으며, CAU 조건 및 단지 고온으로만 coupling하는 것을 함께 비교 진행하였다. 2가지 조건으로 실험이 진행되었는데, CONDITION A는 water/iPrOH(2/1) 1.0 mL에 녹인 화합물 c와, 물 1.0 mL에 녹인 소듐 아스코르베이트(SODIUM Ascorbate)(미량), 및 구리(II)설페이트하이드레이트(Copper(II)Sulfatehydrate) (미량)을 상온에서 10분 동안 반응시켰고, CONDITION B는 DMF에 녹인 화합물 c를 90℃에서 10분 동안 반응시켰다. 18F로 라벨링된 최종 화합물은 화합물 d로 나타냈다.
CONDITION B로 실험을 진행한 결과는 도 3 및 도 4와 같다. 실험은 맑은 용액을 확인하였고, Cu catalyst가 들어가지 않았다. HPLC RT 패턴은 reagent가 다 들어간 LC와 유사한 양상을 보였으며, 피크(peak)가 더 샤프하게 갈렸다(도 3). 한편, RI와 UV를 겹친 HPLC는 도 4와 같다. 도 4와 같이 최종 표지 조건 및 분리 조건을 확인 완료하였다.
<실험예 1> 효소 및 세포 억제 효과 검토
1. 카이네이즈 어세이
카이네이즈 프로파일러 스크리닝(Millipore)의 실험 과정을 다음과 같다. EGFR(WT), EGFR(L858R), EGFR(T790M)은 8 mM MOPS[(3-(N-morpholino)propanesulfonic acid] (pH 7.0), 0.2 mM EDTA(Ethylenediaminetetraacetic acid), 0.1 mg/mL 폴리 Glu, Tyr (Glu=4, Tyr=1 비율), 10 mM 마그네슘 아세테이트, γ-33P-ATP로 구성된 완충 용액에 MgATP mix(MgCl2와 ATP 혼합 용액)를 첨가하여 상온에서 40분간 반응시켰다. 폴리 Glu/Tyr이 카이네이즈 기질로 이용되었다. 반응의 중지는 3%의 인산 수용액(부피 기준)을 반응 용액에 첨가하였다. 반응이 끝난 용액을 필터 매트 A에 각 실험군 당 화합물 10 μL를 올린 후, 5분 간격으로 75 mM의 인산 용액으로 3번 씻어준 후, 메탄올로 가볍게 세척하여 잔여 인산 용액을 제거하였다. 필터 매트를 말린 다음, 루미노미터(luminometer)로 섬광지수를 측정하였다. 하기 표 1에서 6-트리아졸릴 퀴나졸린 유도체의 효소 억제 활성을, 표 2에서 7-트리아졸릴 메톡시 퀴나졸린 유도체의 효소 억제 활성을 각각 나타내었다.
[표 1]
Figure 112016073806757-pat00009
표 1과 같이, 화합물 6a 내지 6f는 트리아졸 링커의 1번 N 위치에 벤질 구조를 지닌 화합물로서, 벤질 그룹을 갖는 화합물 6a는 대조 약물인 제피티닙(gefitinib)과 비교해 보면 비슷한 wtEGFR 억제 활성을 나타내었다. R1의 벤질 구조에 EWG을 도입한 화합물 6b와 EDG을 도입한 화합물 6c, 6d, 6e는 모두 화합물 6a와 비슷한 wtEGFR 억제 효과를 보였고 T790M 억제 활성은 조금 감소하는 것으로 나타났다. 트리아졸의 1번 N 위치에 페네틸, 페닐프로필, 신나밀을 각각 도입한 화합물 7, 8, 9는 제피티닙과 비슷한 wtEGFR 억제 효과를 보였고 T790M에는 제피티닙보다 낮은 억제 효과를 보였다.
트리아졸의 1번 질소 위치에 다양한 탄소 사슬 및 에테르 사슬을 도입한 화합물 10a 내지 10f 역시 화합물 6a 그리고 제피티닙과 비교하여 비슷한 wtEGFR 억제 활성을 보여 좋은 억제 활성을 보이는 것으로 나타났으나 두드러지는 T790M 억제 활성을 보이는 결과는 얻지 못하였다.
따라서, 6번 위치에 1,2,3-트리아졸을 연결하여 다양한 그룹을 치환한 6-트리아졸 유도체들은 wtEGFR에는 좋은 억제 활성을 나타내었지만 T790M 변이에 관하여는 기대했던 억제 활성 결과는 얻지 못하였다.
[표 2]
Figure 112016073806757-pat00010
표 2와 같이, 화합물 17은 wtEGFR에 관하여 제피티닙과 비슷한 활성을 보였으며 EGFR 변이 효소 T790M에 관하여는 더 낮은 IC50 값을 나타내어 억제 활성이 증가하였음을 알 수 있다. 화합물 17에 대하여 아세틸렌을 벤질 아자이드와 클릭 반응시킨 화합물 18a는 제피티닙에 비교하여 wtEGFR, T790M 모두 비슷한 활성을 보였다. 화합물 18a의 벤질 그룹에 EWG인 클로라이드(Cl)를 도입한 화합물 18b의 경우에 제피티닙과 비교해서 wtEGFR에 관하여는 감소하는 억제 활성을, EGFR T790M에 대하여 비슷한 억제 활성을 보였다. 화합물 18a의 벤질 그룹에 EWG인 플로라이드(F)를 치환한 화합물 18c는 EGFR, EGFR T790M 변이 모두에 대해 억제 활성이 증가하는 것을 보였다. 화합물 18d와 18e는 화합물 18c의 벤질 그룹의 4-fluoro 위치를 3-fluoro, 2-fluoro 위치로 변환시켜 보았는데 wtEGFR, T790M 에 관하여 화합물 18c와 비슷한 활성을 보였다. 화합물 18f와 18g는 화합물 18c에 대하여 4-fluoro 치환기를 EDG인 메틸과 메톡시 그룹으로 변경하였고, 두 화합물 모두 화합물 18c에 비해서 wtEGFR에는 떨어지는 억제 효과를 보였고 T790M에 관하여는 화합물 18f는 효과가 감소하였고 화합물 18g는 화합물 18c와 비슷한 억제 효과를 보였다.
화합물 19a와 19b는 트리아졸의 1번 N 위치에 벤질 그룹 대신에 탄소 체인을 도입한 구조로 wtEGFR에는 좋은 억제 활성을 보였지만 T790M에 관하여는 제피티닙과 비슷한 억제 활성을 나타내었다. 화합물 20은 화합물 18c에 대하여 퀴나졸린의 6번 위치에 에틸 아마이드 구조를 아크릴 아마이드로 변형시켜 비가역적 억제 효과를 기대하고 합성한 화합물로서, 화합물 20은 wtEGFR에 관하여는 제피티닙과 비슷한 활성을 보였고 T790M 변이에서는 억제 활성이 매우 좋아지는 것으로 T790M 변이 카이네이즈 수용체 구조 내 공유 결합을 형성하여 억제 활성이 증가한 것으로 추측 하였다.
퀴나졸린의 6번 위치의 트리아졸릴 유도체들보다 억제 활성이 향상된 퀴나졸린의 7번 위치에 트리아졸릴 메톡시를 도입한 화합물 17 내지 20을 EGFR 변이 효소 L858R에 관하여 억제 활성을 테스트 해 보았는데 제피티닙과 비슷한 IC50 값을 얻었다.
따라서, 화합물 17-20이 처음에 표적했던 T790M 변이 수용체에 관하여는 기대했던 억제 활성을 나타내지 못했지만 EGFR L858R 변이에 관하여 제피티닙 민감성 환자들에게 제피티닙과 비슷한 효능을 보일 수 있을 것이다.
이러한 카이네이즈 어세이로부터 얻은 데이터를 토대로 화합물 18c를 선도 약물로 선택하였고, 화합물 18c의 R1 구조를 벤질 그룹에서 페닐 그룹으로 변형시켜 본 화합물 21a와 21b를 합성하였고 퀴나졸린의 6번 위치에 에틸 아마이드의 탄소 체인의 사슬의 길이를 늘린 화합물 22a, 22b, 22c를 추가 합성하였다.
2. 세포 배양
H1975 (ATCC, Manassas, VA, USA), HCC827 (ATCC, Manassas, VA, USA), A549 (ATCC, Manassas, VA, USA), PC9 (연세대 의과대학 조병철 교수님), PC9-GR (연세대 의과대학 조병철 교수님) 세포주들은 10% FBS (Welgene), 1%의 페니실린/스트렙토마이신 (Gibco)이 포함된 RPMI-1640 (Welgene) 배양액에 5% CO2 조건이 유지되는 37℃ 가습 배양기에서 배양하였다.
3. 세포 생존률 분석
A549, PC9, PC9-GR 세포주는 2000개, H1975, HCC827세포주는 3000개/100 ㎕/well의 조건으로 96well plate에 분주하였다. 이 때 FBS가 5%, 1%의 페니실린이 포함된 RPMI-1640 배양 배지를 사용하였다. 세포가 완전히 배양 접시 바닥에 붙을 수 있도록 24시간 동안 세포 배양기에 둔 후, DMSO로 희석한 화합물을 실험하고자 하는 농도로 처리하였다. 72시간 동안의 화합물 처리 기간이 끝난 후, EZ-CYTOX (DOGEN, 대한민국, 대전)를 well 당 10 ㎕ 넣고, 세포 배양기에서 2시간(A549, PC9, PC9-GR) 또는 2시간 30분(H1975, HCC827) 동안 배양시켰다. 흡광도는 plate reader기에서 450nm의 파장으로 측정하였다. IC50 (The half maximal inhibitory concentration) 값은 GraphPad Prism 프로그램으로 산출하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
[표 3]
Figure 112016073806757-pat00011
7-트리아졸릴 메톡시 퀴나졸린 유도체인 화합물 17-22c를 A549 (EGFR wild type lung cancer cell line), HCC827과 PC9(ΔE746-A750, Gefitinib sensitive), PC9-GR(ΔE746-A750, T790M mutation), H1975(L858R, T790M mutation)에서 억제 활성을 측정한 결과, 하기 표 3과 같이 화합물 18c가 A549에서 제피티닙보다 향상된 억제 활성을 보이지만 IC50 값이 2 mM 단위인 반면, HCC827과 PC9에서 보인 IC50 값 43 nM 과 25 nM에 비교하였을 때 wtEGFR 세포주보다 제피티닙 민감 세포주에서 더 좋은 억제 효능을 보였다. 이것으로 NSCLC EGFR 변이 타이로신 카이네이즈 수용체 억제제로서 좋은 약이 될 수 있을 것으로 기대된다.
화합물 18c의 퀴나졸린의 6번 위치에 아크릴 아마이드를 도입하여 비가역 억제 활성을 보일 것으로 예측한 화합물 20은 PC9GR, H1975에서 예상대로 화합물 18c에 비해서 억제 활성이 증가하였다. 반면에 A549에서 제피티닙보다는 활성이 좋지만 화합물 18c와 비교하여 IC50 값이 증가하여 T790M에 대한 선택성이 증가하였음을 확인할 수 있었다.
<실험예 2> 독성 실험
웅성 Balb/c 마우스에 화합물 18c를 0.5% 메틸셀룰로즈 용액에 각각 현탁하여 0.5g/kg, 1g/kg 및 2g/kg의 용량으로 1회 단회 경구투여하고 7일간 마우스의 생존율 및 체중을 조사하였다.
이러한 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다.
그 결과, 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.
이상의 결과, 본 발명의 화합물들은 마우스에서 2g/㎏까지 독성변화를 나타내지 않으며, 따라서, 경구 투여 중간치사량(LD50)은 2g/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.
하기에 본 발명에 따른 화합물 18c을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
<제제예 1> 산제의 제조
화합물 18c 5 mg, 유당 100 mg 및 탈크 10 mg을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<제제예 2> 정제의 제조
화합물 18c 5 mg, 옥수수전분 100 mg, 유당 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 2 mg을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<제제예 3> 캅셀제의 제조
화합물 18c 5 mg, 옥수수전분 100 mg, 유당 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후 통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<제제예 4> 주사제의 제조
화합물 18c 2 mg, 주사용 멸균 증류수 적량 및 pH 조절제 적량을 혼합한 후 통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (8)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 그의 염:
    [화학식 1]
    Figure 112016073806757-pat00012

    상기 화학식 1에서, R은 프로피온아미도 또는 아크릴아미도에서 선택됨.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 화합물은 N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 또는 N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)아크릴아마이드에서 선택된 것을 특징으로 하는 화합물 또는 그의 염.
  3. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 그의 염을 유효성분으로 함유하는 상피세포성장인자수용체(EGFR) 관련 암질환 치료 또는 예방용 약학조성물:
    [화학식 1]
    Figure 112016073806757-pat00013

    상기 화학식 1에서, R은 프로피온아미도 또는 아크릴아미도에서 선택됨.
  4. 청구항 3에 있어서, 상기 화합물은 N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)프로피온아마이드 또는 N-(4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-((1-(4-플루오로벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)퀴나졸린-6-일)아크릴아마이드에서 선택된 것을 특징으로 하는 약학조성물.
  5. 청구항 3에 있어서, 상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 관련 암질환은 폐암, 결장암 및 유방암으로 이루어진 군에서 선택된 암질환인 것을 특징으로 하는 약학조성물.
  6. 청구항 3에 있어서, 상기 상피세포성장인자수용체(EGFR) 관련 암질환은 비소세포성 폐암인 것을 특징으로 하는 약학조성물.
  7. 하기 화학식 2로 표시되는 화합물 또는 그의 염을 포함하는 조영제:
    [화학식 2]
    Figure 112016073806757-pat00014

    상기 화학식 2에서, R은 프로피온아미도 또는 아크릴아미도에서 선택됨.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 화합물은 야생형 EGFR 과발현 세포, 제피티닙 민감성 EGFR 변이 세포 또는 T790M 변이 세포에서 선택된 어느 하나의 종양세포를 표적으로 하는지를 진단하는 것을 특징으로 하는 조영제.

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