KR101758144B1

KR101758144B1 - 이고들빼기 추출물을 포함하는 항노화 조성물

Info

Publication number: KR101758144B1
Application number: KR1020140109512A
Authority: KR
Inventors: 노주원; 김명석; 김형석; 이희주; 오상록; 임수지; 박영균
Original assignee: 한국과학기술연구원
Priority date: 2014-08-22
Filing date: 2014-08-22
Publication date: 2017-07-17
Also published as: KR20160023310A

Abstract

본 발명은 이고들빼기 추출물을 포함하는 피부의 항노화용 조성물에 관한 것이다.

Description

이고들빼기 추출물을 포함하는 항노화 조성물 {COMPOSITION FOR ANTI-AGING CONTAINING YOUNGIA DENTICULATA EXTRACT}

피부는 외부환경의 자극으로부터 체내의 기관들을 보호해주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 한다. 이러한 피부는 여러 가지 내·외적 요인에 의해서 노화가 발생되며, 크게 유전적 원인에 의한 내인성 노화와 환경적 원인에 의한 외인성 노화로 구분된다. 이 중, 광노화는 자외선(ultraviolet; UV)에 의한 노화를 의미한다. 최근 환경오염으로 인한 오존층 파괴는 자외선의 양을 증가시켰고 이에 따라 광노화에 대한 연구가 주목되고 있다(Wang SQ et al., Dermatol. Ther. 23(1):31-47, 2010). 광노화된 피부에서는 거칠어짐, 탄력 손실, 주름 발생 및 불규칙한 색소 침착 등과 같은 외관상의 특징이 관찰되며, 이 중 광노화의 주된 연구 분야는 피부 주름의 변화에 대한 것이다. 상기 광노화에 의한 피부 주름 형성에 관해 피부의 주요 구성성분인 콜라겐(collagen)의 합성, 분해 및 수분 함유량 등의 기초적인 생리 대사 변화에 대한 연구 결과가 다수 보고되고 있다(Brenneisen et al., Ann. N. Y. Acad. Sci., 973:31-43, 2002).

피부 진피층에 존재하는 콜라겐은 피부 전체 건조 중량의 약 70-80%를 차지하며 탄력섬유인 엘라스틴(elastin)과 함께 피부의 탄력을 주관하는 것으로 알려져 있다. 특히 자외선에 의해 활성 산소종(reactive oxygen species) 생성이 증가되고 피부의 효소적·비효소적 항산화 방어체계 붕괴가 유발되어 콜라겐의 분해 증가 및 생합성을 감소시켜 진피층 내의 콜라겐이 현저하게 감소된다(Bickers DR, Athar M, J. Invest. Dermatol., 126(12):2565-2575, 2006). 상기 콜라겐 감소에 중요한 영향을 미치는 것은 콜라겐 분해 효소(MMPs; matrix metalloproteinases)로, 이는 세포 외 기질(extracellular matrix)과 기저막(basement membrane)의 분해에 관여 한다. 상기 효소는 자외선에 의해 활성이 증가되며 이를 억제함으로써 자외선에 의해 유도되는 피부 두께 증가 및 주름 형성이 감소된다는 연구 결과들이 보고되어 있다(Inomata S et al., J. Invest. Dermatol., 120(1):128-134, 2003). 따라서 광노화의 예방 및 치료를 위해서는 MMPs를 조절하는 것이 효과적인 방법이다.

피부 진피층의 구성성분인 히알루론산(hyaluronic acid)은 진피층의 콜라겐 사이를 채워 피부의 보습 및 탄력을 유지시키는 성분이다. 특히, 자외선은 히알루론산의 양을 감소시켜 피부 내 수분 함유량을 감소시키고 경피 수분 손실량을 증가시켜 피부 장벽의 손상을 야기한다. 이로 인해 피부가 거칠어지고 탄력성이 감소되어 주름이 생성된다(Baumann L, J. Pathol., 211(2):241-251, 2007). 즉, 피부의 보습력 상실은 피부노화의 주요 원인이 된다.

주름 개선에 대한 전 세계 소비자의 기대와 관심은 레티놀을 시작으로 하여 2000년대부터 천연물추출성분, 아데노신, 세포성장인자 등 그 종류와 기능이 다양해지고 있는 추세이다(Lee EJ et al., Journal of the Korean Society of Cosmetology, 17(1):127-133, 2011). 기존의 방법은 레티노이드, 아스코르브산, 토코페롤 및 히알루론산 등을 함유하는 화장료나 의약품을 제조하여 사용하는 것이다.

하지만 현재 개발되고 있는 피부 주름 개선 또는 항노화를 위한 유효성분들은 일부 화장품 원료로 사용할 수 없거나 매우 불안정하고 피부로의 전달이 용이하지 않아 특별한 안정화 시스템과 전달체계가 필요하며, 피부주름의 개선효과가 가시적이지 않다는 문제점이 있다. 예컨대, 상기 피부 주름 개선 유효성분인 레티노이드는 콜라겐 분해효소를 저해하고 콜라겐 합성을 증가시킴으로써 주름 형성 및 탄력 감소 등의 광노화 현상을 개선하기 위해 이용되고 있으나, 자외선에 매우 민감하여 쉽게 화학적인 변화를 일으키므로 피부 자극 등의 부작용을 일으키며, 장기적으로 사용해야 효과가 나타난다는 문제점이 있다(Rabe JH, J. Am. Acad. Dermatol., 55:1-19, 2006).

그러므로, 이러한 문제점들을 해결하기 위하여 안정성이 입증된 천연물 유래 유효성분에 대한 요구가 당업계에서 있어 왔다.

Baumann L, J. Pathol., 211(2):241-251, 2007

본 발명의 목적은 천연 추출물 또는 특정 화합물을 유효성분으로 포함하는 항노화 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해 본 발명의 일 관점은 이고들빼기 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 예방 또는 지연용 화장료 조성물 및 건강식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 관점은 또한 하기 화학식 1 및 2로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 화합물, 이의 유도체 및 이의 염 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 예방 또는 지연용 화장료 조성물 및 건강식품 조성물을 제공한다.

[화학식 1]

[화학식 2]

본 발명의 조성물은 노화에 따른 피부 변화를 예방하거나 또는 지연시킬 수 있다. 구체적으로, 피부 주름을 개선하거나 이를 완화시킬 수 있고, 피부 탄력을 증진시킬 수 있다. 더 구체적으로 본 발명의 조성물은 콜라겐 분해 효소의 발현 또는 이의 활성을 저해시킬 수 있고, 이에 따라 또는 별개의 경로로 콜라겐 자체의 발현 또는 이의 활성을 촉진시킬 수 있다. 뿐만 아니라 본 발명의 조성물은 천연 유래 성분을 유효성분으로 포함하므로, 부작용 발생 가능성이 현저히 낮다는 장점이 있다.

도 1은 이고들빼기 추출물, 화합물 1 및 화합물 2각각에 의해 콜라겐 분해효소-1 분비량이 억제되는 효과를 보인 것이다.
도 2는 이고들빼기 추출물, 화합물 1 및 화합물 2 각각에 의해 타입-1 프로콜라겐의 분비량이 증가되는 효과를 관찰한 것이다.
도 3은 이고들빼기 추출물, 화합물 1 및 화합물 2 각각에 의해 콜라겐 분해효소의 발현량이 감소되는 효과를 나타낸 것이다.
도 4는 이고들빼기 추출물, 화합물 1 및 화합물 2 각각에 의해 콜라겐의 발현량이 증가하는 효과를 나타낸 것이다.

본 명세서에서 “이고들빼기(Youngia denticulata)”는 쌍떡잎식물 합판화군 초롱꽃목 국화과의 식물을 의미한다. 이는 한해살이 또는 두해살이풀로 산과 들의 건조한 곳에서 자라고, 높이 30∼70 ㎝이며, 줄기는 가늘고 자줏빛이다.

본 명세서에서 “피부 노화”현상은 나이가 들면서 발생하는 피부의 모든 변화를 포함하는 것이다. 예컨대, 상기 피부 노화 현상은 노화에 따른 피부 탄력 감소, 새로운 주름 생성 또는 주름의 깊이와 개수의 증가, 노화에 의한 건조함을 들 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서 노화를 “지연”또는 이를 “예방”한다는 것은 나이가 들면서 발생하는 피부의 모든 변화를 가능한 늦추는 것을 의미하는 것으로 당업계에서 사용되는 용어인 ““항노화(Anti-aging)”와 동일한 의미를 가진다. 시간의 흐름에 따라 누구에게나 발생할 수 밖에 없는 피부 노화를 ‘방지’한다는 것은 현실적으로 불가능하지만, 피부 노화를 최대한 늦추는 것은 본 발명의 조성물에 의해 가능할 수 있다.

이에 따라, 상기 노화의 지연 또는 예방은 “피부 주름을 완화 또는 개선”함을 포함할 수 있다. 즉, 본 발명의 조성물은 이미 생성된 주름을 완화시키거나 이를 개선시킬 수 있고, 주름의 생성 시기를 가능한 늦춰서 주름의 생성을 예방할 수도 있다. 또한 본 발명의 조성물은 예컨대 피부 탄력을 증가 또는 증진시키거나 개선시킬 수 있다.

본 명세서에서 “화장료 조성물”은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 파우더, 에센스 또는 팩 등의 형태로 제형화될 수 있으며, 그 제형이 특별히 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명에 의한 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다. 또한, 본 발명의 조성물은 피부 개선 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.

또한 본 명세서의 상기 화장료 조성물은 “피부 외용제 조성물”로 사용될 수 있으며 이는 피부 내 콜라게나제의 발현을 효과적으로 억제함으로써 피부 내의 콜라겐 분해를 감소시켜 피부 탄력을 증진시키고 주름을 개선시키는 항노화 효과가 뛰어나다.

본 명세서에서 “건강식품 조성물”은 다양한 형태의 식품 첨가제 또는 기능성 식품을 포함하는 것이다. 예컨대, 상기 건강식품 조성물은 발효유, 치즈, 요구르트, 주스, 생균제제 및 건강보조식품 등으로 가공될 수 있으며, 그 외 다양한 식품 첨가제의 형태로 사용될 수 있다.

일실시예에서 상기 조성물은, 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들어, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 성분들의 첨가량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.01~5 중량%, 보다 구체적으로는 0.01~3 중량% 범위일 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 제형은 용액, 유화물, 점성형 혼합물, 타블렛, 분말 등의 다양한 형태일 수 있으며, 이는 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.

본 발명은 일 관점에서 이고들빼기 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 예방 또는 지연용 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 다른 관점에서, 이고들빼기 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 예방 또는 지연용 건강식품 조성물에 관한 것이다.

본 명세서에서 “추출물”은 공지의 천연물 추출방법에 의하여 추출될 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 6개의 유기용매 및 아임계 또는 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출될 수 있으며, 상기 탄소수 1 내지 6개의 유기용매는 탄소수 1 내지 6개의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군 중에서 선택된 것일 수 있다.

상기 추출물을 얻기 위해 사용하는 이고들빼기는 지상부 또는 지하부를 제한없이 사용할 수 있으며 시판 또는 재배한 것을 제한없이 사용할 수 있다.

구체적으로 본 명세서에서 이고들빼기 추출물은 이고들빼기의 에탄올 추출물일 수 있고, 에탄올 추출 과정을 1내지5회, 구체적으로 3회 반복하여 얻어진 추출물일 수 있으며, 이를 감압농축하여 얻어지는 추출물 또는 분획물을 포함하는 것이다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 피부 주름을 완화시키거나 또는 개선시킬 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 피부 탄력을 증진시킬 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 콜라겐 분해효소(Collagenase)의 발현을 억제하거나 또는 이의 활성을 저해할 수 있다. 아울러 본 발명의 일 관점인 조성물은 상기 콜라겐 분해효소의 발현 또는 이의 활성을 억제하는 데 관련하는 상위(up-stream) 물질에도 특정 효과를 가져올 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 콜라겐의 발현을 촉진시키거나 또는 이의 활성을 증가시킬 수 있다. 아울러 본 발명의 일 관점인 조성물은 상기 콜라겐의 발현 또는 이의 활성을 증가시키는 데 관련이 있는 상위(up-stream) 물질의 활성이나 발현에도 특정 효과를 가져올 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 이고들빼기 추출물을 조성물 총중량에 대하여 0.001 내지 80중량%로 포함할 수 있다. 상기 조성물이 이고들빼기 추출물을 조성물 총중량에 대하여 0.001 중량% 미만으로 포함하면 피부 노화에 효과가 적고, 80 중량%을 초과하여 포함할 경우 다른 구성 성분의 함량에 제한이 있다. 상기와 같은 관점에서, 상기 조성물은 이고들빼기 추출물을 조성물 총중량에 대하여 0.01 내지 75 중량%, 0.1 내지 70 중량%, 1 내지 65 중량% 또는 10 내지 55 중량%로 포함할 수 있다.

본 발명은 또 다른 관점에서, 하기 화학식 1 및 2로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 화합물, 이의 유도체 및 이의 허용 가능한 염 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 예방 또는 지연용 화장료 조성물에 관한 것이다.

[화학식 1]

[화학식 2]

본 발명은 또 다른 관점에서, 상기 화학식 1 및 2로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 화합물, 이의 유도체 및 이의 염 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 피부 노화 예방 또는 지연용 건강식품 조성물에 관한 것이다.

본 명세서에서 "유도체"는 화합물들의 치환 가능한 위치에서 다른 치환기로 변경되는 모든 화합물을 의미한다. 이러한 치환기의 종류에는 제한이 없으며, 예컨대 각각 독립적으로 히드록실, 페녹시, 티에닐, 푸릴, 피리딜, 시클로헥실, 알킬알콜, 알킬디알콜 또는 임의 치환된 페닐로 치환될 수 있는 C1-10비사이클릭 탄화수소기; 히드록실, 히드록시메틸, 메틸 또는 아미노로 치환될 수 있는 C5-6사이클릭 탄화수소기; 또는 당 잔기를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 명세서에서 "당 잔기"라는 용어는 다당류 분자로부터 1개의 수소 원자의 제거시의 기를 의미하며, 따라서 예를 들어 단당류 또는 올리고당으로부터 유래된 잔기를 의미할 수 있다.

구체적으로 본 명세서에서 상기 “화학식 1의 유도체”는 상기 화학식 1에서 수소 또는 알킬기만을 포함하는 치환기를 직쇄(unbranched) 또는 분지(branched)된 C1내지 C18의 알킬기(alkyl group), C1내지 C18의 알콕시기(alkoxy group), C1내지 C18의 알케닐기(alkenyl group), C1내지 C18의 알키닐기(alkynyl group) 또는 C3내지 C6의 사이클릭 알킬기(cyclic alkyl group)로 치환하여 얻어지는 화합물을 모두 포함할 수 있다. 아울러 상기“화학식 2의 유도체”역시 상기 화학식 2에서 수소 또는 알킬기만을 포함하는 치환기를 직쇄(unbranched) 또는 분지(branched)된 C1내지 C18의 알킬기(alkyl group), C1내지 C18의 알콕시기(alkoxy group), C1내지 C18의 알케닐기(alkenyl group), C1내지 C18의 알키닐기(alkynyl group) 또는 C3내지 C6의 사이클릭 알킬기(cyclic alkyl group)로 치환하여 얻어지는 화합물을 모두 포함하는 것이다.

이와 같이 본 명세서의 유도체는 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물 구조 중 해당 화합물의 활성이나 반응기와는 무관한 작용기를 또한 활성이나 반응기와 무관한 다른 작용기로 치환하여 얻어지는 화합물을 의미하는 것이므로, 화학식 1 또는 화학식 2와 동일한 효과를 가질 것임이 당업자에게 자명하댜ㅏ.

본 명세서에서 상기 “허용 가능한 염”은 당업계에서 널리 사용하는 것으로 모 화합물(parent compound)의 바람직한 약리 활성을 가지는 본 발명의 일측면에 따른 염을 의미한다. 상기 염은 (1) 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산으로 형성되거나; 또는 아세트산, 프로파이온산, 헥사노산, 시클로펜테인프로피온산, 글라이콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일) 벤조산, 신남산, 만델산, 메테인설폰산, 에테인설폰산, 1,2-에테인-디설폰산, 2-히드록시에테인설폰산, 벤젠설폰산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-톨루엔설폰산, 캄퍼설폰산, 4-메틸바이시클로 [2,2,2]-oct-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로파이온산, 트리메틸아세트산, tert-부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 히드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산과 같은 유기산으로 형성되는 산 부가염(acid addition salt); 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 프로톤이 치환될 때 형성되는 염을 포함할 수 있다. 아울러, 본 명세서에 따른 화합물은 약제학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 수화물, 용매화물을 모두 포함할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 콜라겐의 발현을 촉진시키거나 또는 이의 활성을 증가시킬 수 있다. 아울러 본 발명의 일 관점인 조성물은 상기 콜라겐의 발현 또는 이의 활성을 증가시키는 데 관련된 상위(up-stream) 물질에도 특정 효과를 가져올 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 화학식 1 또는 2의 화합물은 이고들빼기 추출물로부터 얻어지는 것일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 즉, 상기 화합물은 천연의 물질로부터 얻어지는 것이나 합성하여 사용하는 것이나 제한 없이 포함하는 것이다.

구체적으로, 상기 화학식 1 또는 2의 화합물은 다음과 같은 방법으로 얻어질 수 있는 것이나 이에 제한되는 것은 아니다.

에컨대, 상기 화학식 1 또는 2의 화합물은 이고들빼기를 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 가하여 이고들빼기 추출물을 수득하는 단계(단계 1); 상기 단계 1에서 수득한 추출물을 n-헥산, 에틸아세테이트 및 n-부탄올로 순차적으로 계통분획하여 분획물을 얻는 단계(단계 2); 및 상기 단계 2에서 수득한 분획물에 대해 실리카겔 크로마토그래피를 수행하여 화학식 1 및 2의 화합물을 분리하고 정제하는 단계(단계 3)를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

이하, 더 자세한 설명을 부가하나, 이는 예시적인 것으로 이에 제한되는 것은 아니다.

먼저, 본 발명에 따른 상기 단계 1은 추출용매로 이고들빼기 추출물을 수득하는 단계이다. 상기 이고들빼기는 채취한 것, 양식한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 건조된 이고들빼기를 적당한 크기로 분쇄하여 추출용기에 넣는다. 추출용매로는 C1 내지 C4의 알코올, 초산에틸, 염화메틸렌, 클로로포름 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있고, 이들 중에서 메탄올 또는 에탄올을 사용하는 것이 바람직하다. 이를 상온에서 초음파로 4시간 동안 추출한 후 거름종이 등으로 여과하여 본 발명에 따른 이고들빼기 추출물을 수득할 수 있다.

다음으로, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 얻은 이고들빼기 추출물을 극성을 달리하는 용매로 순차적으로 분획하여 분획물을 얻는 단계이다. 상기 용매로는 n-헥산(n-hexane), 에틸아세테이트(ethyl acetate) 및 n-부탄올(butanol)을 순차적으로 사용할 수 있다.

다음으로, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 얻은 분획물에 대해 실리카겔 크로마토그래피를 수행하여 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물을 분리하고 정제하는 단계이다.

상기 실리카겔 크로마토그래피는 크기 배제 크로마토그래피용 컬럼을 사용하여 수행될 수 있으며, 바람직하게는 세파덱스 LH-20을 충진한 컬럼을 사용할 수 있다. 상기 단계 2에서 수득한 분획물에 대하여 100% 메탄올을 이동상으로 하여 세파덱스 LH-20 컬럼을 이용한 실리카겔 크로마토그래피를 수행한다. 이때 수득한 분획물에 대하여 고속액체 크로마토그래피를 수행하여 화학식 1 내지 화학식 5의 화합물을 분리할 수 있다.

상기 고속액체 크로마토그래피는 20 부피%에서 30 부피%, 25 부피%에서 40 부피%, 25 부피% 아세토니트릴로 농도 구배된 물과 아세토니트릴의 혼합용매를 전개용매로 사용하여 수행될 수 있다. 이때, 상기 이동상의 유속은 2-15 ㎖/분인 것이 바람직하고, 수행 시간은 0.5 내지 1시간이 바람직하다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 이의 유효성분인 하기 화학식 1 및 2로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 화합물, 이의 유도체 및 이의 염 중 하나 이상의 화합물을 0.0001 내지 10중량%로 포함할 수 있다. 상기 조성물이 유효성분을 0.0001 중량% 미만으로 포함하면 피부 노화에 효과가 적고, 10 중량%을 초과하여 포함할 경우 다른 구성 성분의 함량에 제한이 있다. 상기와 같은 관점에서, 상기 조성물은 이고들빼기 추출물을 조성물 총중량에 대하여 0.001 내지 9.5 중량%, 0.01 내지 9중량% 또는 0.11 내지 8.5중량%로 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 관점은 이고들빼기 추출물을 포함하거나 또는 화합식 1 및 2로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 화합물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다. 경구 투여를 위한 제형은 정제, 환제, 연질 및 경질 캅셀제, 과립제, 산제, 세립제, 액제, 유탁제 또는 펠렛제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들 제형은 유효 성분 이외에 희석제(예: 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 또는 폴리에틸렌 글리콜), 또는 결합제(예: 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스 또는 폴리비닐피롤리딘)를 함유할 수 있다. 경우에 따라 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 또는 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 점안제, 주사제, 점적제, 로션, 연고, 겔, 크림, 현탁제, 유제, 좌제, 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 이고들빼기 추출물의 경우0.1mg/kg/일 내지 100mg/kg/일, 보다 구체적으로는 5 mg/kg/일 내지 50 mg/kg/일이 될 수 있고, 화합식 1 및 2로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 화합물의 경우 0.1㎍/kg/일 내지 100㎍/kg/일, 보다 구체적으로는 5 ㎍/kg/일 내지 50 ㎍/kg/일 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[실시예 1] 이고들빼기 추출물의 제조

강원도 평창 산채시험장에서 채취한 이고들빼기를 그늘에서 건조하여, 적당한 크기로 세절하여 추출용기에 이고들빼기 1 ㎏과 94% 에탄올 5 L를 가하여 초음파로 추출하였고, 거름종이로 여과하여 추출물을 얻었다. 추출과정을 3회 반복하였고, 이후 용매를 감압 농축 및 건조하여 70 g의 에탄올 추출물을 수득하였다.

[실시예 2] 화학식 1의 화합물(=영지아사이드 A)의 분리 및 구조결정

상기 실시예 1에서 얻은 이고들빼기 추출물에 대해 고속액체 크로마토그래피를 수행하여 영지아사이드 A를 얻었다. 이때, 이동상으로 물과 아세토니트릴의 혼합용매를 사용하였으며, 40분 동안 25 부피%에서 40 부피% 아세토니트릴로 순차적으로 극성을 주어 농도 구배하였고, 유속은 10 ㎖/분, YMC Hydrosphere ODS(φ20×250 ㎜, 5 ㎛) 컬럼을 사용하였다.

분리된 단일 활성물질의 구조결정을 위하여 1H-NMR 스펙트럼과 13C-NMR 스펙트럼을 각각 500 MHz 와 125 MHz (용매: CDCl3)에서 측정하였다. 이상의 1H-NMR, 13C-NMR, 및 EI/MS에 대한 결과와 기존에 발표된 연구보고(Biol Pharm Bull. 2010;33(10):1650-7.)를 비교 분석하여 동정한 결과, 상기에서 분리된 단일물질은 하기 화학식 1로 표시되는 영지아사이드 A로 확인되었다.

1H-NMR (DMSO-d6) δ 2.12 (1H, dd, J=2.4, 13.9 Hz, H-2) 2.45 (1H, d, J=13.9 Hz, H-2), 5.96 (1H, m, H-3), 3.67-3.59 (4H, m, H-5,6,9,Glc-6), 2.93 (1H, m, H-7), 3.06 (2H, m, H-8), 6.11 (1H, dd, J=1.7, 3.0 Hz, H-13), 5.97 (1H, m, H-13), 1.69 (3H, s, H-14), 4.35 (2H, quar, J=1.6, 14.3 Hz, H-15), 4.13 (1H, d,

J=7.8 Hz, Glc-1), 3.00 (1H, m, Glc-2), 3.12 (1H, m, Glc-3), 3.06 (2H, m, Glc-4,5), 3.45 (1H, m, Glc-6)

13C-NMR (DMSO-d6) δ 136.51 (C-1), 45.81 (C-2), 128.49 (C-3), 141.26 (C-4), 51.88 (C-5), 82.24 (C-6), 57.70 (C-7), 37.28 (C-8), 68.06 (C-9), 126.56 (C-10), 139.23 (C-11), 169.73 (C-12), 121.35 (C-13), 23.42 (C-14), 67.52 (C-15), 102.22 (Glc-1), 73.95 (Glc-2), 77.09 (Glc-3), 70.46 (Glc-4), 77.23 (Glc-5), 61.43 (Glc-6)

[실시예 3] 화학식 2의 화합물(=영지아사이드 C)의 분리 및 구조결정

상기 실시예 1에서 얻은 농축된 이고들빼기 에탄올 추출물을 고속액체 크로마토그래피를 수행하여 영지아사이드 C를 얻었다. 이때, 이동상으로 물과 아세토니트릴의 혼합용매를 사용하였으며, 40분 동안 25 부피%에서 40 부피% 아세토니트릴로 순차적으로 극성을 주어 농도구배하였고, 유속은 10 ㎖/분, YMC Hydrosphere ODS(φ20×250 ㎜, 5 ㎛) 컬럼을 사용하였다.

분리된 단일 활성물질의 구조결정을 위하여 1H-NMR 스펙트럼과 13C-NMR 스펙트럼을 각각 500 MHz 와 125 MHz (용매: CDCl3)에서 측정하였다. 이상의 1H-NMR, 13C-NMR, 및 EI/MS에 대한 결과와 기존에 발표된 연구보고(Biol Pharm Bull. 2010;33(10):1650-7.)를 비교 분석하여 동정한 결과, 상기에서 분리된 단일물질은 하기 화학식 2로 표시되는 영지아사이드 C로 확인되었다.

1H-NMR δ 2.15 (1H, dd, J=2.4, 13.9 Hz, H-2) 2.46 (1H, d, J=13.9 Hz, H-2), 5.97 (1H, m, H-3), 3.67-3.61 (3H, m, H-5,6,9), 2.93 (1H, m, H-7), 3.00 (2H, m, H-8), 6.12 (1H, dd, J=1.3, 3.0 Hz, H-13), 5.98 (1H, m, H-13), 1.70 (3H, s, H-14), 4.37 (2H, quar, J=1.6, 14.3 Hz, H-15), 4.24 (1H, d, J=7.8 Hz, Glc-1), 3.11-3.07 (1H, m, Glc-2), 3.40-3.31 (3H, m, Glc-3,5,6), 4.58 (1H, t, J=9.6 Hz, Glc-4), 3.30 (1H, m, Glc-4), 3.24 (1H, m, Glc-6), 3.53 (2H, d, J=2.6 Hz, H-β), 7.05 (2H, d, J=8.6 Hz, H-2',6'), 6.69 (2H, d, J=8.6 Hz, H-3',5')

13C-NMR (DMSO-d6) δ 136.46 (C-1), 45.81 (C-2), 128.57 (C-3), 141.06 (C-4), 51.90 (C-5), 82.23 (C-6), 57.69 (C-7), 37.31 (C-8), 68.05 (C-9), 126.58 (C-10), 139.24 (C-11), 169.72 (C-12), 121.35 (C-13), 23.43 (C-14), 67.73 (C-15), 102.13 (Glc-1), 74.04 (Glc-2), 74.27 (Glc-3), 72.05 (Glc-4), 74.53 (Glc-5), 61.03 (Glc-6), 171.26 (C-α), 40.01 (C-β), 124.87 (C-1'), 130.74 (C-2',6'), 115.51 (C-3',5'), 156.58 (C-4')

[실험예 1] 콜라겐 분해효소-1 분비량 억제 확인

상기 실시예 1 내지 실시예 3을 통해 얻은 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C각각의 콜라겐 분해효소-1(Matrix Metalloproteinase-1, MMP-1) 억제 효능을 측정하였다. 양성 대조군으로는 Epigallocatechin gallate (EGCG, Sigma, USA) 10 μM 농도를 사용하였다.

먼저, 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 들어있는 24-공 평판배양기(24-well microtiter plate)에 인간의 섬유 아세포를 1×10⁵ 세포/ 공(well)이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 실시예 1 내지 실시예 3을 통해 얻은 이고들빼기 에탄올 추출물을 5, 10 μg/ml, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C를 5, 10 μM, 그리고 EGCG를 10 μM 농도로 1시간 동안 처리한 후, DPBS로 워싱한 다음, UV조사기를 이용하여 15 mJ을 조사하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 에탄올 추출물을 5, 10 μg/ml, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C를 5, 10 μM, 그리고 EGCG를 10 μM 농도로 추가로 처리하였다. 24시간 경과한 다음 세포배양액을 채취하여 원심분리하고 상등액만 수확하였다.

이후, 채취한 상등액으로부터 콜라겐 분해효소-1 측정키트(QIA55, Merch ＆ Co., 미국)를 이용하여 콜라겐 분해효소-1 생성정도를 측정하였다. 먼저, 콜라겐 분해효소 1차 항체가 균일하게 도포된 96-공 평판(96-well plate)에 채취된 상기 세포배양액을 넣고 2시간 동안 항원-항체 반응을 상온에서 실시하였다. 2시간 후 발색단이 결합된 1차 콜라겐 항체를 96-공 평판(96-well plate)에 넣고 1시간 동안 반응시켰다. 1시간 후 발색유발물질을 넣어 실온에서 30분간 발색을 유발시킨 후 다시 종결버퍼를 넣어 반응(발색)을 중지시키면 반응액의 색깔은 노란색을 띄며 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다. 노란색을 띠는 96-공 평판(96-well plate)의 흡광도를 흡광계를 이용하여 450/540 nm에서 측정하였다.

그 결과 (도 1), 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C 각각이 콜라겐 분해효소-1을 억제하는 효과가 뛰어난 것을 확인할 수 있었다.

[실험예 2] 타입-1 프로콜라겐(Type-1 procollagen) 분비량 증가 확인

상기 실시예 1 내지 실시예 3을 통해 얻은 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C각각의 타입-1 프로콜라겐(Type-1 procollagen) 분비량 증가 효능을 측정하였다. 양성 대조군으로는 EGCG 10 μM 농도를 사용하였다.

먼저, 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 들어있는 24-공 평판배양기(24-well microtiter plate)에 인간의 섬유 아세포를 1×10⁵ 세포/ 공(well)이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 실시예 1 내지 실시예 3을 통해 얻은 이고들빼기 에탄올 추출물을 5, 10 μg/ml, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C를 5, 10 μM, 그리고 EGCG를 10 μM 농도로 1시간 동안 처리한 후, DPBS로 워싱한 다음, UV조사기를 이용하여 15 mJ을 조사하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 에탄올 추출물을 5, 10 μg/ml, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C를 5, 10 μM, 그리고 EGCG를 10 μM 농도로 추가로 처리하였다. 24시간 경과한 다음 세포배양액을 채취하여 원심분리하고 상등액만 수확하여, 콜라겐 합성의 지표가 되는 펩타이드(procollagen type-Ⅰ C-peptide, PIP)를 ELISA 키트(MK101, Takara Bio Ink., 일본)를 이용하여 콜라겐 생성에 미치는 영향을 정량적으로 측정하였다.

먼저, 프로콜라겐에 대한 마우스 단일클론 항체가 균일하게 도포된 96-공 평판(96-well plate)에 퍼록시다제(peroxidase)로 표지한 항체-PIP 컨쥬게이트를 넣어 반응시켰다. 그 후 채취한 상기 세포배양액을 넣고 37℃ 인큐베이터에서 3시간 동안 반응시키고 기질용액을 넣어 발색시켰다. 실온에서 15분 방치 후 반응중지용액을 넣어 반응을 중지시키고 흡광계를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과 (도 2), 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C각각이 타입-1 프로콜라겐의 생성 및 분비를 촉진시키는 데 뛰어난 효과를 가짐을 알 수 있었다.

[실험예 3] 콜라겐 분해효소(MMP) 발현량 억제 확인

상기 실시예 1 내지 실시예 3을 통해 얻은 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C각각의 콜라겐 분해효소-1(Matrix Metalloproteinase-1, MMP-1) 발현량 억제 효능을 측정하였다. 양성 대조군으로는 EGCG 10 μM 농도를 사용하였다.

먼저, 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 들어있는 6-공 평판배양기(6-well microtiter plate)에 인간의 각질형성세포를 2×10⁶ 세포/ 공(well)이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 실시예 1 내지 실시예 3을 통해 얻은 이고들빼기 에탄올 추출물을 5, 10 μg/ml, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C를 5, 10 μM, 그리고 EGCG를 10 μM 농도로 1시간 동안 처리한 후, DPBS로 워싱한 다음, UV조사기를 이용하여 15 mJ을 조사하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 에탄올 추출물을 5, 10 μg/ml, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C를 5, 10 μM, 그리고 EGCG를 10 μM 농도로 추가로 처리하였다. 24시간 경과한 다음 세포로부터 TRIzol시약(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 총 RNA를 수확하여 역전사시킨 후, RT-PCR 분석을 다음과 같이 수행하였다. 먼저 cDNA 합성을 위해 상기 RNA를 reverse transcriptase로 역전사시켰다. RT-PCR은 다음의 특정 프라이머로 수행하였다:

β-actin

Forward primer: 5'-AGCCATGTACGTAGCCATCC-3' (서열번호 1)

Reverse primer: 5'-CTCTCAGCTGTGGTGGTGAA-3' (서열번호 2)

MMP-1

Forward primer: 5'-ACAGCTTCCCAGCGACTCTA-3' (서열번호 3)

Reverse primer: 5'-CTCTTGGCAAATCTGGCGTG-3' (서열번호 4)

MMP-2

Forward primer: 5'-CGCATCTGGGGCTTTAAACAT-3' (서열번호 5)

Reverse primer: 5'-CCATTAGCGCCTCCATCGTA-3' (서열번호 6)

MMP-9

Forward primer: 5'-CATCCGGCACCTCTATGGTC-3' (서열번호 7)

Reverse primer: 5'-CATCGTCCACCGGACTCAAA-3' (서열번호 8)

각각의 상대적인 mRNA 발현량 값은 β-actin 값으로 표준화하였다.

그 결과 (도 3), 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C각각이 콜라겐 분해효소(MMP) 발현량을 억제하는 데 뛰어난 효과를 가짐을 알 수 있었다.

[실험예 4] 콜라겐 발현량 증가 확인

상기 실시예 1 내지 실시예 3을 통해 얻은 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C각각에 의한 콜라겐 발현량 증가 효능을 측정하였다. 양성 대조군으로는 EGCG 10 μM 농도를 사용하였다.

β-actin

Forward primer: 5'-AGCCATGTACGTAGCCATCC-3' (서열번호 1)

Reverse primer: 5'-CTCTCAGCTGTGGTGGTGAA-3' (서열번호 2)

COL1A1

Forward primer: 5'-TGAGCGGACGCTAACCCCCT-3' (서열번호 9)

Reverse primer: 5'-CAGACGGGACAGCACTCGCC-3' (서열번호 10)

COL3A1

Forward primer: 5'-TGGTGCCCCTGGTCCTTGCT-3' (서열번호 11)

Reverse primer: 5'-TACGGGGCAAAACCGCCAGC-3' (서열번호 12)

그 결과 (도 4), 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A 및 영지아사이드 C각각이 콜라겐 발현량 증가에 뛰어난 효과를 가짐을 알 수 있었다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

<제형예 1 - 화장품>

<1-1> 영양화장수(밀크로션)

상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 에탄올 추출물 또는 영지아사이드 A, 영지아사이드 C를 하기 표 1의 영양화장수 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 영양화장수를 제조하였다.

배합성분 (중량%)	제형예1-1	제형예 1-2	제형예 1-3
영지아사이드 A	2.0	-	-
영지아사이드 C	-	2.0	-
이고들빼기 추출물	-	-	2.0
스쿠알란	5.0	5.0	5.0
밀납	4.0	4.0	4.0
폴리솔베이트 60	1.5	1.5	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.5	1.5	1.5
유동파라핀	0.5	0.5	0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0	5.0	5.0
글리세린	3.0	3.0	3.0
부틸렌글리콜	3.0	3.0	3.0
프로필렌글리콜	3.0	3.0	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1	0.1	0.1
트리에탄올아민	0.2	0.2	0.2
방부제, 색소, 향료	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100

<1-2> 유연화장수(스킨로션)

상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 에탄올 추출물 또는 영지아사이드 A, 영지아사이드 C를 하기 표 2의 유연화장수 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 유연화장수를 제조하였다.

배합성분 (중량%)	제형예 1-4	제형예 1-5	제형예 1-6
영지아사이드 A	2.0	-	-
영지아사이드 C	-	2.0	-
이고들빼기 추출물	-	-	2.0
글리세린	3.0	3.0	3.0
부틸렌글리콜	2.0	2.0	2.0
프로필렌글리콜	2.0	2.0	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1	0.1	0.1
PEG 12 노닐페닐에테르	0.2	0.2	0.2
폴리솔베이트 80	0.4	0.4	0.4
에탄올	10.0	10.0	10.0
트리에탄올아민	0.1	0.1	0.1
방부제, 색소, 향료	적량	적량	적량

<1-3> 영양크림

상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 에탄올 추출물 또는 영지아사이드 A, 영지아사이드 C를 하기 표 3의 영양크림 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 영양크림을 제조하였다.

배합성분 (중량%)	제형예 1-7	제형예 1-8	제형예 1-9
영지아사이드 A	2.0	-	-
영지아사이드 C	-	2.0	-
이고들빼기 추출물	-	-	2.0
폴리솔베이트 60	1.5	1.5	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	0.5	0.5	0.5
PEG60 경화피마자유	2.0	2.0	2.0
유동파라핀	10	10	10
스쿠알란	5.0	5.0	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0	5.0	5.0
글리세린	5.0	5.0	5.0
부틸렌글리콜	3.0	3.0	3.0
프로필렌글리콜	3.0	3.0	3.0
트리에탄올아민	0.2	0.2	0.2
방부제	적량	적량	적량
색소	적량	적량	적량
향료	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100

<1-4> 마사지크림

상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 에탄올 추출물 또는 영지아사이드 A, 영지아사이드 C를 하기 표 4의 마사지크림 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 마사지크림을 제조하였다.

배합성분 (중량%)	제형예 1-10	제형예 1-11	제형예 1-12
영지아사이드 A	1.0	-	-
영지아사이드 C	-	1.0	-
이고들빼기 추출물	-	-	1.0
밀납	10.0	10.0	10.0
폴리솔베이트 60	1.5	1.5	1.5
PEG 60 경화피마자유	2.0	2.0	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.8	0.8	0.8
유동파라핀	40.0	40.0	40.0
스쿠알란	5.0	5.0	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0	4.0	4.0
글리세린	5.0	5.0	5.0
부틸렌글리콜	3.0	3.0	3.0
프로필렌글리콜	3.0	3.0	3.0
트리에탄올아민	0.2	0.2	0.2
방부제, 색소, 향료	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100

<1-5> 팩

상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 에탄올 추출물 또는 영지아사이드 A, 영지아사이드 C를 하기 표 5의 팩 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 팩을 제조하였다.

배합성분 (중량%)	제형예 1-13	제형예 1-14	제형예 1-15
영지아사이드 A	1.0	-	-
영지아사이드 C	-	1.0	-
이고들빼기 추출물	-	-	1.0
폴리비닐알콜	13.0	13.0	13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스	0.2	0.2	0.2
글리세린	5.0	5.0	5.0
알란토인	0.1	0.1	0.1
에탄올	6.0	6.0	6.0
PEG 12 노닐페닐에테르	0.3	0.3	0.3
폴리솔베이트 60	0.3	0.3	0.3
방부제, 색소, 향료	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100

<1-6> 젤

상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 에탄올 추출물 또는 영지아사이드 A, 영지아사이드 C를 하기 표 6의 젤 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 젤을 제조하였다.

배합성분 (중량%)	제형예 1-16	제형예 1-17	제형예 1-18
영지아사이드 A	0.5	-	-
영지아사이드 C	-	0.5	-
이고들빼기 추출물	-	-	0.5
에틸렌디아민초산나트륨	0.05	0.05	0.05
글리세린	5.0	5.0	5.0
카르복시비닐폴리머	0.3	0.3	0.3
에탄올	5.0	5.0	5.0
PEG 60 경화피마자유	0.5	0.5	0.5
트리에탄올아민	0.3	0.3	0.3
방부제, 색소, 향료	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100

<제형예 2 - 식품>

<2-1> 건강식품의 제조

상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A, 및 영지아사이드 C 중 하나 이상의 물질을1000 mg, 비타민 A 아세테이트 70 ug, 비타민 E 1.0 mg, 비타민 B1 0.13 mg, 비타민 B2 0.15 mg, 비타민 B6 0.5 mg, 비타민 B12 0.2 ug, 비타민 C 10 mg, 비오틴 10 ug, 니코틴산아미드 1.7 mg, 엽산 50 ug, 판토텐산 칼슘 0.5 mg, 황산제1철 1.75 mg, 산화아연 0.82 mg, 탄산마그네슘 25.3 mg, 제1인산칼륨 15 mg, 제2인산칼슘 55 mg, 구연산칼륨 90 mg, 탄산칼슘 100 mg, 염화마그네슘 24.8 mg를 혼합하여 제조할 수 있으며, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

<2-2> 건강음료의 제조

상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A, 및 영지아사이드 C 중 하나 이상의 물질을1000 mg, 구연산 1000 mg, 올리고당 100 g, 매실농축액 2 g, 타우린 1 g에 정제수를 가하여 전체 900 ml 통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강음료 조성물 제조에 사용할 수 있다.

<2-3> 츄잉껌

껌 베이스 20 중량%, 설탕 76.9 중량%, 향료 1 중량% 및 물 2 중량%와 상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A, 및 영지아사이드 C 중 하나 이상의 물질을 0.1 중량%를 배합하여 통상의 방법으로 츄잉껌을 제조하였다.

<2-4> 캔디

설탕 60 중량%, 물엿 39.8 중량% 및 향료 0.1 중량%와 상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A, 및 영지아사이드 C 중 하나 이상의 물질을 0.1 중량%를 배합하여 통상의 방법으로 캔디를 제조하였다.

<제형예 3 - 약학 조성물>

<3-1> 산제

상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A, 및 영지아사이드 C 중 하나 이상의 물질50 mg, 결정셀룰로오즈 2 g을 혼합한 후 통상의 산제 제조방법에 따라서 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<3-2> 정제

상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A, 및 영지아사이드 C 중 하나 이상의 물질50 mg, 결정셀룰로오즈 400 mg, 스테아린산 마그네슘 5 mg을 혼합한 후 통상의 정제 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<3-3> 캡슐제

상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A, 및 영지아사이드 C 중 하나 이상의 물질 30 mg, 유청단백질 100 mg, 결정셀룰로오즈 400 mg, 스테아린산 마그네슘 6 mg을 혼합한 후 통상의 캡슐제 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<3-4> 주사제

통상의 주사제 제조방법에 따라 활성성분을 주사용 증류수에 용해하고 pH를 약 7.5로 조절한 다음 상기 <실시예 1> 내지 <실시예 3>의 이고들빼기 추출물, 영지아사이드 A, 및 영지아사이드 C 중 하나 이상의 물질100 mg, 주사용 증류수, pH 조절제를 혼합하여 2 ml 용량의 앰플에 충진하고 멸균시켜 주사제를 제조하였다.

<110> KOREA INSTITUTE OF SCIENCE AND TECHNOLOGY <120> COMPOSITION FOR ANTI-AGING CONTAINING YOUNGIA DENTICULATA EXTRACT <130> 14P445IND(K07294) <160> 12 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin forward primer <400> 1 agccatgtac gtagccatcc 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin reverse primer <400> 2 ctctcagctg tggtggtgaa 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-1 forward primer <400> 3 acagcttccc agcgactcta 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-1 reverse primer <400> 4 ctcttggcaa atctggcgtg 20 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-2 forward primer <400> 5 cgcatctggg gctttaaaca t 21 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-2 reverse primer <400> 6 ccattagcgc ctccatcgta 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-9 forward primer <400> 7 catccggcac ctctatggtc 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-9 reverse primer <400> 8 catcgtccac cggactcaaa 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COL1A1 forward primer <400> 9 tgagcggacg ctaaccccct 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COL1A1 reverse primer <400> 10 cagacgggac agcactcgcc 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COL3A1 forward primer <400> 11 tggtgcccct ggtccttgct 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COL3A1 reverse primer <400> 12 tacggggcaa aaccgccagc 20

Claims

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하기 화학식 1의 화합물; 및
하기 화학식 2의 화합물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물.
[화학식 1]

[화학식 2]
하기 화학식 1의 화합물; 및
하기 화학식 2의 화합물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는, 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 건강식품 조성물.
[화학식 1]

[화학식 2]
제8항에 있어서,
상기 조성물은 하기 특징 중 하나 이상의 특징을 갖는 것인, 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물.
1) 콜라겐 분해효소의 발현을 억제하거나 또는 이의 활성을 저해하는 특징; 및
2) 콜라겐의 발현을 촉진시키거나 또는 이의 활성을 증진시키는 특징.
제8항에 있어서,
상기 화학식 1의 화합물 또는 화학식 2의 화합물은 이고들빼기 추출물로부터 얻어지는 것인, 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물.
제8항에 있어서,
상기 조성물은 상기 유효성분을 0.0001 내지 10중량%로 포함하는, 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 화장료 조성물.
제9항에 있어서,
상기 조성물은 하기 특징 중 하나 이상의 특징을 갖는 것인, 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 건강식품 조성물.
1) 콜라겐 분해효소의 발현을 억제하거나 또는 이의 활성을 저해하는 특징; 및
2) 콜라겐의 발현을 촉진시키거나 또는 이의 활성을 증진시키는 특징.
제9항에 있어서,
상기 화학식 1의 화합물 또는 화학식 2의 화합물은 이고들빼기 추출물로부터 얻어지는 것인, 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 건강식품 조성물.
제9항에 있어서,
상기 조성물은 상기 유효성분을 0.0001 내지 10중량%로 포함하는, 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용 건강식품 조성물.