KR101719708B1 - 바위솔 및 삼백초 추출물을 포함하는 주름 개선 및 피부손상 회복 촉진용 조성물 - Google Patents

바위솔 및 삼백초 추출물을 포함하는 주름 개선 및 피부손상 회복 촉진용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명의 일 양상은 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물을 포함하는 주름의 예방 또는 개선용 화장용 조성물, 및 피부손상의 예방 또는 회복 촉진용 화장용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 양상은 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물을 포함하는 주름의 예방 또는 개선용 건강기능식품용 조성물, 및 피부손상의 예방 또는 회복 촉진용 건강기능식품용 조성물을 제공한다.

Description

바위솔 및 삼백초 추출물을 포함하는 주름 개선 및 피부손상 회복 촉진용 조성물{Composition for reducing skin wrinkle and for promoting recovery of iskin injury comprising extracts of Orostachys japonicus and Saururus chinensis}
본 발명은 주름 개선 및 피부손상 회복 촉진용 화장용 조성물 및 건강기능식품용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 생약 추출물의 조합을 포함하는 주름 개선 및 피부손상 회복 촉진용 화장용 조성물 및 건강기능식품용 조성물에 관한 것이다.
피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 기관들을 온도·습도 변화, 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해 주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 한다. 이렇게 중요한 피부 역시 인체의 다른 장기와 마찬가지로 나이가 들어감에 따라 점차 노화가 진행되게 되고, 그 결과로서 피부 탄력손실, 각질화, 주름 생성, 피부 위축 등의 현상이 나타나게 된다. 이러한 피부 노화 현상은 피부 표면의 주름 발생뿐 아니라 얼굴의 전체적인 라인의 변화를 가져 오게 된다. 피부에 주름이 생기는 것은 노화에 수반되는 현상으로 생체기능의 저하로 인한 여러 가지 구조적 변화를 나타내는데 그 발생원인은 크게 두 가지로 볼 수 있다. 즉, 연령이 증가함에 따라 발생하는 내인성 노화(intrinsicaging)와 내인성 노화에 외부인자, 특히 자외선에 의한 손상이 덧붙여져서 발생하는 광노화(photoaging)로 구분된다.
이러한 주름과 피부 탄력에 직접적으로 영향을 미치는 콜라겐의 중요성과 역할에 대해서는 많은 연구가 지속되어 오고 있다. 피부의 대부분, 피부 전체의 77%, 진피의 90%를 차지하는 콜라겐이 양적으로 풍부하고 질적으로 건강할 때, 피부 또한 주름과 처짐 현상 없이 건강하고 아름답게 유지될 수 있는 것이다. 또한 콜라겐은 손상된 피부의 재생을 촉진하는 것으로 알려져 있다.
진피에서 콜라겐은 콜라겐 섬유를 형성하여 피부의 형태를 유지하며 피부조직을 단단하게 만들어 준다. 콜라겐의 합성은 섬유아세포에서 이루어지는데, 섬유아세포에서 전구 콜라겐(procollagen)이 합성되며 전구 콜라겐 분자 3 개가 모여 서로 꽈배기 모양으로 꼬이고 서로 결합하여 콜라겐 섬유의 초기형태가 만들어지 지고 세포 밖으로 분비된다. 세포 밖에서 전구 콜라겐의 양쪽 끝 부분이 효소에 의해 잘려지고, 그런 다음 서로 결합하여 더 굵은 콜라겐 섬유를 형성하게 된다. 따라서, 주름 개선 및 피부손상의 회복에 필요한 콜라겐 생성은 진피 중의 섬유아세포에서의 전구 콜라겐의 생성 촉진에 의해 이루어질 수 있다. 또한, 콜라게나제(MMP-1) 발현 저해에 의한, 생성된 콜라겐의 분해 억제에 의해 이루어질 수 있다.
종래에는 콜라겐을 화장품에 배합하여 제품화한 경우가 있었는데, 콜라겐을 화장품으로써 피부표면에 도포할 경우, 고분자인 콜라겐의 경피 흡수가 어려워 그 기능을 충분하게 기대할 수 없다는 문제가 있었다. 또한, 피부의 진피에 직접 콜라겐을 주입하는 방법도 있었으나, 이 방법 역시 부작용에 의해 피부주름을 개선하는 해결책이 되지 못하였다. 최근 들어, 콜라겐합성을 촉진하는 물질로서, 레티노익산(Retinoic acid), 동물 태반 유래의 단백질(특허문헌 1)등이 알려진 바 있다. 그러나, 레티노익산은 불안정하여 제형기술이 복잡하며 피부에 자극이 되는 등 안정성의 측면에서 사용에 한계가 있었고, 동물 태반 유래 단백질은 광우병에 걸린 소의 적출물을 사용할 수 있다는 치명적인 단점이 있다.
한편, 바위솔(Orostachysjaponicus.)은 와송이라고도 하며, 돌나물과 식물로 산지의 양지바른 바위틈이나 전통가옥의 기와와 돌각담에 붙어서 서식하나, 지금은 찾아보기 어려운 실정이다. 요즘은 멸종 단계에 이르러 인위적으로 배양, 증식 시켜 약용으로 사용하고 있다. 예로부터 학질, 간염, 습진, 이질설사, 치질, 악성종기, 화상 등의 치료에 쓰였으며, 종기나 상처에 짓찧어 붙이면 고름을 빨아내는 효과가 큰 것으로 알려져 있다. 혈류량 촉진, 진통, 면역, 피부염, 모발 성장 촉진 및 피부가 갈라지는 피부염에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 특허문헌 2는 와송의 디클로로메탄 및/또는 헥산 분획물을 유효성분으로 하는 항산화용 약학 조성물을 개시한다.
삼백초(Saururus chinensis BAILL.)는 삼백초과 식물의 여러해살이풀로서 중국, 일본 및 한국에 많이 분포되어있다. 한방에서 삼백초는 수종, 황달, 성인병, 해열, 이뇨, 간암 그리고 항염증 등에 효과가 있다고 알려져 있다. 삼백초에서 분리된 리그난 유도체인 테트라히드로푸란류는 세포부착 억제, 항염증, 간보호 및 섭식저해 활성 등이 보고된 바 있다. 특허문헌 3은 삼백초로부터 분리된 에리스로-오스트로바이리그난-6(erthro-austrobailignan-6)의 섬유아세포 노화 억제 효과를 개시하고 있다.
일본 특개평8-231370호 한국특허공개 2015-0015164 한국특허공개 2015-0025520
본 발명의 목적은 주름 개선 효과 및 피부 손상의 회복 촉진 효과가 우수한 기능성 화장용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 주름 개선 효과 및 피부 손상의 회복 촉진 효과가 우수한 건강기능식품용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 양상은 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물을 포함하는 주름의 예방 또는 개선용 화장용 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 일 양상은 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물을 포함하는 피부손상의 예방 또는 회복 촉진용 화장용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 양상은 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물을 포함하는 주름의 예방 또는 개선용 건강기능식품용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 양상은 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물을 포함하는 피부손상의 예방 또는 회복 촉진용 건강기능식품용 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물의 조합은 콜라겐 전구물질의 생성 효과 및 콜라게나제 억제 효과에 있어서 상승적인 효과를 나타내어, 본 발명이 제공하는 화장용 조성물 및 건강기능식품용 조성물은 주름의 예방 및 개선, 그리고 피부 손상의 예방 및 회복 촉진 효과가 우수하다.
도 1은 제조예 1 내지 3에서 제조된 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물 각각에 대한 세포독성 시험 결과 얻어진 세포 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 2는 실시예 3에서 제조된 바위솔, 삼백초, 및 하엽의 혼합 추출물에 대한 세포독성 시험 결과 얻어진 세포 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 3은 제조예 1 에서 제조된 바위솔 추출물에 대한 전구 콜라겐 합성 촉진 효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 제조예 2 에서 제조된 삼백초 추출물에 대한 전구 콜라겐 합성 촉진 효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 제조예 3 에서 제조된 하엽 추출물에 대한 전구 콜라겐 합성 촉진 효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 실시예 3에서 제조된 바위솔, 삼백초, 및 하엽의 혼합 추출물에 대한 전구 콜라겐 합성 촉진 효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 전체가 본 명세서에 참고로 통합된다.
본 발명자들은 주름 개선 또는 피부 손상의 회복 촉진 효과가 탁월한 생약 추출물의 조성물을 개발하기 위해 연구하였다. 구체적으로는 주름 개선 및 피부손상의 회복에 필수적인 콜라겐 생성 효과가 우수한 생약 추출물의 조성물을 연구하였으며, 그 결과 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물의 조합이 각각을 단독으로 사용할 경우에 비해 전구 콜라겐 생성 촉진 효과 및 콜라게나제 발현 저해 효과가 있어서 상승효과를 나타낸다는 것을 확인하였다.
본 발명의 일 양상은 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물을 포함하는 주름의 예방 또는 개선용 화장용 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 일 양상은 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물을 포함하는 피부손상의 예방 또는 회복 촉진용 화장용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 양상은 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물을 포함하는 주름의 예방 또는 개선용 건강기능식품용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 양상은 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물을 포함하는 피부손상의 예방 또는 회복 촉진용 건강기능식품용 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 "피부손상"이란 주름을 제외하고 콜라겐의 생성 촉진에 의해 예방될 수 있거나 회복이 촉진될 수 있는 임의의 피부 손상을 의미한다.
본 발명에서 정의되는 건강기능식품은 2008년 개정된 건강기능식품에 관한 법률을 통하여 새롭게 정의된 인체에 대한 기능성 및 안전성이 충분하게 확립되어 식품의약품안전청 식약청 고시 제2008-72호에 규정된 건강기능식품 기능성 원료 인정에 관한 규정에 수재된 건강기능식품임을 의미한다.
이하에서는, 상기 본 발명에 따른 화장용 조성물 및 건강기능식품용 조성물을 포괄하여 "본 발명에 따른 조성물"이라고도 한다.
상기 본 발명에 따른 조성물은 추가적으로 하엽 추출물을 더 포함할 수 있다. 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물의 조합에 하엽 추출물을 조합 시, 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물의 두 가지 조합의 경우 및 하엽 추출물 단독의 경우에 비해 같은 용량에서 전구 콜라겐 생성 효과 및 콜라게나제 발현 억제 효과가 더 우수하였다. 따라서, 하엽 추출물을 더 부가 시에도, 전구 콜라겐 생성 효과 및 콜라게나제 발현 억제 효과에 있어서 상승적인 효과를 나타내었다.
상기 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법, 즉, 통상적인 온도와 압력 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있다. 상기 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물 제조에 사용될 수 있는 추출용매로는 예를 들면, 물, 탄소수 C1 내지 C3의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3 부틸렌 글리콜 등의 추출용매를 단독으로 또는 혼합하여 사용 가능하다. 일 구체예에서 상기 추출용매는 에탄올이며, 보다 구체적으로는 약 70% 에탄올이다.
상기 추출 용매의 양은 바위솔, 삼백초, 또는 하엽 건조 중량의 약 1 내지 15배 정도이며, 5 내지 12배일 수 있으며, 10배일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 추출방법으로는 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등을 사용할 수 있으며, 1 회 또는 다수 회 반복하여 추출시켜 사용할 수 있다. 또한, 추출온도는 상기 바위솔, 삼백초, 또는 하엽의 유용성분의 유효활성이 제거되지 않을 정도의 온도이면, 특별히 제한되지 않는다. 일 구체예에서는 바람직하게는 상온에서 침적시켜 추출한다.
상기 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물은 각각 단독으로도, 조합으로도 세포독성 시험 시, 세포에 독성을 나타내지 않는 것으로 확인되었다. 따라서, 상기 본 발명에 따른 조성물은 안전하게 사용될 수 있다.
상기 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물은 각각 단독으로도 전구 콜라겐 생성 촉진 효과 및 콜라게나제 발현 억제 효과가 있으나, 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물의 조합, 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물의 조합이 전구 콜라겐 생성 촉진 및 콜라게나제 발현 억제 있어 상승효과를 나타내어 주름의 예방 또는 개선용 또는 피부손상의 예방 또는 회복 촉진용 화장용 조성물로 사용될 수 있다. 또한, 상기 조합은 식품의 형태로서 제조되어 주름 예방 또는 개선용, 또는 피부손상의 예방 또는 회복 촉진용 건강기능식품용 조성물로도 사용될 수 있다.
상기 조합의 각각의 추출물의 비율 및 함량은 특별히 한정되는 것은 아니나, 당업자가 최적의 효과를 나타내기 위하여 적절히 변경할 수도 있다. 상기 조합은 상기 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물을 1 ~ 10 : 1 ~ 10 중량비율로 함유할 수 있으며, 상기 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물을 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10 중량비율로 함유할 수 있고, 보다 구체적으로는 상기 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물을 2 ~ 8 : 2 ~ 8 중량비율로 함유할 수 있으며, 상기 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물을 2 ~ 8 : 2 ~ 8 : 2 ~ 8 : 2 ~ 8 중량비율로 함유할 수 있다. 그러나, 함량비율은 제품의 특성에 따라 다양한 중량비로 혼합될 수 있다.
상기 본 발명에 따른 화장용 조성물 중의 상기 추출물의 함량은 특별히 한정되는 것은 아니나, 상기 화장용 조성물 중에 상기 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물의 조합, 또는 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물의 조합을 약 1 내지 30 중량%로 함유하거나, 5 내지 20 중량%로 함유할 수 있다.
상기 화장용 조성물은 화장품의 제형으로서 공지된 임의의 제형으로서 제제화될 수 있다. 구체적으로, 상기 화장용 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 이루어진 군에서 선택된 제형으로 제제화될 수 있으며, 이외에도 주름 개선용 또는 손상된 피부 회복용으로 이용되는 임의의 화장품 제형으로 제제화될 수 있다.
또한, 상기 화장용 조성물은 화장수, 로션, 크림, 맛사지 크림, 에센스, 아이크림, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 제품으로 제조될 수 있으며, 이외에도 주름 개선용 또는 손상된 피부 회복용으로 이용되는 임의의 화장품으로 제조될 수 있다.
상기 화장용 조성물은 상기 추출물 이외에 화장품의 제조에 사용될 수 있는 임의의 화장품용 첨가제를 포함할 수 있으며, 예를 들어 이러한 화장품용 첨가제는 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있으며, 이러한 화장품용 첨가제는 구체적인 제형 및 제품의 종류에 따라 당업자가 적절히 선택할 수 있다.
예를 들어, 상기 화장용 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
상기 화장용 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
상기 화장용 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
상기 화장용 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁화제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
상기 화장용 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 본 발명에 따른 건강기능식품용 조성물 중의 상기 추출물의 함량은 특별히 한정되는 것은 아니나, 상기 건강기능식품용 조성물 중에 상기 바위솔 추출물 및 삼백초 추출물의 조합, 또는 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물의 조합을 약 1 내지 80 중량%로 함유하거나, 5 내지 50 중량%, 또는 10 내지 30 중량%로 함유할 수 있다.
일 구체예에서, 상기 건강기능식품용 조성물 중의 상기 추출물의 함량은 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적합하게 결정될 수도 있다. 일반적으로, 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 포함할 수 있으며, 음료로서 제조될 경우 100 mL를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 함유할 수 있다.
상기 건강기능성 식품용 조성물의 투여량은 특별히 한정되는 것은 아니나, 상기 추출물로서 성인을 기준으로 1 일 총 투여량이 약 0.01 mg/kg 내지 10 g/kg, 바람직하게는 약 1 mg/kg 내지 1 g/kg이 되도록 임의로 수회 나누어서 투여할 수 있다. 상기 투여량은 주름의 진행 정도, 투여 경로, 질병의 진행 정도, 성별, 나이, 체중, 사용목적(예방 또는 개선) 등에 따라 달라질 수 있으며 전문가의 판단에 따라 가감될 수 있다.
상기 건강기능식품용 조성물은 예를 들어 산제, 과립제, 정제, 환제, 캅셀제, 현탁액, 유제, 시럽제, 침제, 액제, 엑스제 등의 일반적인 제형으로 제조될 수도 있고, 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 젤리, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등의 임의의 건강기능식품 형태로 제조될 수도 있다. 상기 건강기능식품의 제제화를 위해 식품학적으로 허용 가능한 담체 또는 첨가제를 사용할 수 있으며, 제조하고자 하는 제형의 제조에 당해 기술분야에서 사용 가능한 것으로 공지되어 있는 임의의 담체 또는 첨가제가 이용될 수 있다.
상기 첨가제로서 각종 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 이외에도 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 첨가제 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 상기 건강기능식품용 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택될 수 있다.
상기 음료는 상기 활성성분 이외의 다른 성분을 더 포함할 수 있으며, 통상적으로 음료에 사용되는 다양한 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 더 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물로는 단당류(예: 포도당, 과당 등), 이당류(예: 말토즈, 수크로즈 등), 다당류(예: 덱스트린, 시클로덱스트린 등)와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 함유될 수 있다. 또한, 향미제로서 천연 향미제(예: 타우마틴, 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제(예: 사카린, 아스파탐 등)를 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 음료 100 mL당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g으로 함유되는 것이 바람직하다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의거하여 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.
약어에 대한 설명
본 명세서에 기재된 약어는 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다.
본 명세서에 제공된 약어에 대한 설명은 다음과 같다.
HDF-N: Human Dermal Fibroblasts-neonate
FBS: fetal bovine serum
DMEM: Dulbeco's modified eagle's medium
MTT: 3-(4,5-dimethythiasol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide
MMP-1: metalloproteinase-1
EDTA: ethylenediaminetetraacetic acid
PBS: Phosphate Buffered Saline
DPBS: Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline
생약재의 입수
하기 사용한 생약재는 삼흥건재약업사에서 구입해서 깨끗하게 정제수로 세척 및 건조한 후 사용하였다.
제조예 1. 바위솔 추출물의 제조
바위솔 100g을 정제수 300g 및 에탄올 700g의 혼합용매에 넣고 상온에서 72시간 동안 침적 추출하였다. 이후 상기 추출물을 300 메쉬(mesh) 여과지로 여과한 다음, No.5C(1㎛, ADVANTEC)로 여과하고, 그 다음에 GF/C(1.2㎛, Glass microfiber filter, Whatman) 여과지로 여과하여 바위솔 추출물을 제조하였다.
제조예 2. 삼백초 추출물의 제조
상기 제조예 1과 동일한 방식으로 제조하되, 다만 제조예 1의 바위솔 대신 삼백초를 사용하는 것만을 달리하여 삼백초 추출물을 제조하였다.
제조예 3. 하엽 추출물의 제조
상기 제조예 1과 동일한 방식으로 제조하되, 다만 제조예 1의 바위솔 대신 하엽을 사용하는 것만을 달리하여 하엽 추출물을 제조하였다.
실시예 1~8: 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 하엽 추출물의 혼합 추출물의 제조
바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물을 하기 표 1에 제시된 것과 같은 중량 비율로 혼합한 혼합 추출물을 얻었다. 구체적으로는 상기 제조예 1 내지 3에서 얻은 각각의 추출물을 20 ㎎/㎖의 농도로 70% 에탄올에 녹인 후 각 추출물의 중량비율이 표 1이 되도록 각각의 추출물 수용액을 혼합하여 혼합 추출물을 제조하였다.
혼합 추출물에 있어서의 각 추출물 성분의 중량 비율(%)
실시예 바위솔 추출물 삼백초 추출물 하엽 추출물
1 10 90 0
2 50 50 0
3 33.33 33.33 33.33
4 90 10 0
5 45 45 10
6 80 10 10
7 10 80 10
8 10 10 80
실험예
1. 세포배양
추출물들의 세포독성 및 세포 내 전구 콜라겐 합성 효과를 확인하기 위하여 HDF-N 세포를, MMP-1 발현 억제와 엘라스타제 활성 억제를 확인하기 위하여 CCD-986Sk(Human fibroblast cell line)을 사용하였다. 세포는 각각 10%(v/v) FBS(Gibco, USA), 100U/mL의 스트렙토마이신, 100U/㎖의 페니실린 항생제(Gibco, USA)가 포함된 DMEM(Gibco, USA)배지를 사용하여 5% CO2 및 37℃ 조건의 인큐베이터에서 배양하였다.
2. 세포 생존율 측정 시험( MTT assay )
MTT 어세이를 이용하여 세포독성 시험을 수행하였다.
MTT 어세이는, MTT 시약이 세포 내로 흡수된 후 미토콘드리아의 숙신산 탈수소효소(succinate dehydrogenase)에 의해 포마잔(formazan)을 형성하는데 이 물질의 세포 내 축적은 미토콘드리아의 활성, 넓게는 세포의 활성을 의미하는 것으로써 세포의 생존율을 측정하는 대표적인 방법이다.
상기 배양된 HDF-N 세포를 1 x 105 cells/웰의 밀도로 96 웰에 200 ㎕ 배지와 함께 분주한 뒤 5% CO2, 37℃ 조건의 incubator에서 24시간 배양한 후 배지를 버리고 PBS로 씻어준 다음, 같은 양의 배지와 PBS에 녹인 시료를 0.1%에서 5.0%까지 다양한 농도에 따라 각 웰에 처리하여 24시간 배양하였다. 배양이 끝나기 4 시간 전에 PBS에 녹인 5㎎/㎖ MTT를 20㎕씩 각 웰에 첨가하고 알루미늄 호일로 차광시킨 후 3 시간 동안 5% CO2 및 37℃ 조건의 incubator에서 배양하였다. 배양액을 제거하고 DMSO용액 200 ㎕를 첨가하여 37℃ incubator에서 1 시간 반응 시킨 후 ELISA reader를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하여 비교하였다. 세포 생존율은 하기 식에 의해 산출하였다.
Figure 112015040409793-pat00001
그 결과를 도 1 및 2에 나타내었다.
도 1은 제조예 1 내지 3에서 제조된 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물 각각에 대한 세포독성 시험 결과 얻어진 세포 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 2는 실시예 3에서 제조된 바위솔, 삼백초, 및 하엽의 혼합 추출물에 대한 세포독성 시험 결과 얻어진 세포 생존율을 나타낸 그래프이다.
2. 전구 콜라겐 합성 효과 실험
HDF-N 세포를 48-웰 플레이트에 1ｘ104 cells/웰로 분주하고 37℃, 5% CO2에서 24시간 배양하였다. 이후에 배지를 제거하고 24시간 동안 세포의 기아상태를 유지하며, 이 후 시험 물질을 세포 배양 배지인 DMEM(FBS 제외)에 희석하고 추출물의 세포 생존율 100% 이상으로 나타난 농도와 양의 대조군으로 TGF-β를 사용했으며, 최종농도 10 ng/㎖로 세포에 처리한 후 24시간 배양하였다. 이후에 배양된 세포의 배지를 수거하여 전구 콜라겐 type I c-펩티드 (PIP) EIA kit(TAKARA, MK101)를 사용하여 전구 콜라겐 양을 측정하였다. 한편, 바닥에 부착되어 있는 세포는 PBS로 세척한 후 1N NaOH로 용해(lysis)시켜 총 단백질 양을 측정하여, 일정 단백질 당 전구 콜라겐 합성양을 계산하였다.
그 결과를 하기 표 2, 및 도 3 ~ 6에 나타내었다.
도 3은 제조예 1 에서 제조된 바위솔 추출물에 대한 전구 콜라겐 합성 촉진 효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 제조예 2 에서 제조된 삼백초 추출물에 대한 전구 콜라겐 합성 촉진 효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 제조예 3 에서 제조된 하엽 추출물에 대한 전구 콜라겐 합성 촉진 효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 실시예 3에서 제조된 바위솔, 삼백초, 및 하엽의 혼합 추출물에 대한 전구 콜라겐 합성 촉진 효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
구분 Conc.(ppm) 전구 콜라겐/단백질
대조군 4.68
TGF-β 10 8.56
삼백초
(제조예 1)		 62.5 6.13
125 6.89
250 7.54
500 7.93
바위솔
(제조예 2)		 62.5 5.36
125 6.11
250 6.51
500 6.87
하엽
(제조예 3)		 62.5 4.88
125 5.45
250 5.78
500 5.93
삼백초 & 바위솔
(실시예 2)		 62.5 5.91
125 6.73
250 7.13
500 7.64
삼백초 & 바위솔 & 하엽
(실시예 3)		 62.5 7.44
125 8.01
250 8.51
500 8.95
3. 콜라게나제 ( MMP -1) 발현 억제 시험
CCD-986Sk 세포를 24-웰 플레이트에 2ｘ104 cells/웰로 분주한 다음 37℃, 5% CO2에서 24시간 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 DPBS로 세척한 후에 세포 생존율 100% 이상으로 나타난 시료의 농도를 세포에 처리하여 37℃, 5% CO2에서 24 시간 배양하였다. 이후에 배양액을 취하여 Human total MMP-1 ELISA kit(R&D system, DY901)을 사용하여 MMP-1 양을 측정하며, 측정된 MMP-1 양은 총 단백질 양으로 보정하였다. 음의 대조군으로서 UV-B를 20mJ/㎠ 조사하였으며, 각각 시험군의 MMP-1 발현 억제율%를, 음의 대조군의 MMP-1의 발현 억제율을 0으로 한 상대값으로서 나타내었다.
시험 결과를 하기 표 3 에 나타내었다.
구분 Conc.(ppm) MMP-1 발현 억제량(%)
대조군 (UV) - 0
양성 대조군 (Non-UV) - 81.08
삼백초
(제조예 1)		 62.5 35.42
125 36.10
250 36.57
500 36.77
바위솔
(제조예 2)		 62.5 37.61
125 38.12
250 41.91
500 42.85
하엽
(제조예 3)		 62.5 39.76
125 42.26
250 43.20
500 44.97
삼백초 & 바위솔
(실시예 2)		 62.5 36.57
125 37.03
250 38.71
500 39.48
삼백초 & 바위솔 & 하엽
(실시예 3)		 62.5 40.49
125 44.72
250 46.95
500 49.17
제제예 1 및 2. 화장수의 제조
상기 실시예 2의 바위솔 및 삼백초의 혼합 추출물(제제예 1), 또는 실시예 3의 바위솔, 삼백초, 및 하엽의 혼합 추출물(제제예 2)을 함유하는 화장수의 제제예는 다음 표 4의 조성과 같이 제조하였다.
구체적으로는 A 상(phase)을 수상 용해조에서 65~70℃로 가열 용해하였다. B 상을 유상 용해조에서 55~60℃로 가열 용해하였다. 그런 다음, A 상에 B 상을 투입하고 호모믹서(HOMO MIXER)를 이용하여 유화 후, C 상을 투입하여 20 분간 혼합하였다. 그런 다음, 40℃까지 냉각 후 D 상을 투입하여 혼합 교반, 냉각하였다.
　 INCI 명 배합용도 함량
A 정제수 용제 to 100
디소듐 EDTA 금속이온 봉쇄제 0.02
알란토인 첨가제 0.10
메틸파라벤 보존제 0.20
부틸렌 글리콜 보습제 300
글리세린 보습제 5.00
카보머 점증제 0.10
폴리아크릴레이트-13 /폴리이소부텐/ 폴리소르베이트-20 점증제 0.30
B 에탄올 수렴제 3.00
PEG-10 스테아레이트 / 스테아레스-6 / 세테스-20 계면활성제-
유화제		 1.00
PEG-5 글리세릴 스테아레이트 계면활성제-
유화제		 0.70
프로필파라벤 보존제 0.10
C 물 용제 2.00
아르기닌 첨가제 0.2
D 페닐 트리메치콘 오일 8.00
실시예 2 추출물(제제예 1) 또는
실시예 3의 추출물(제제예 2) 		기능성 성분 1.00
히알루론산 소듐 첨가제 0.10
향료 향료 적량
제제예 3 및 4. 로션
상기 실시예 2의 바위솔 및 삼백초의 혼합 추출물(제제예 3), 또는 실시예 3의 바위솔, 삼백초, 및 하엽의 혼합 추출물(제제예 4)을 함유하는 로션의 제제예는 다음 표 5의 조성과 같이 제조하였다.
구체적으로는 A 상(phase)을 수상 용해조에서 70~75℃로 가열 용해하였다. B 상을 유상 용해조에서 78~80℃로 가열 용해하였다. 그런 다음, A 상에 B 상을 투입하고 호모믹서(HOMO MIXER)를 이용하여 유화 후, C 상을 투입하여 20 분간 혼합하였다. 그런 다음, 40℃까지 냉각 후 D 상을 투입하여 혼합 교반, 냉각하였다.
　 INCI 명 용도 함량
　　 A 물 용제 to 100
알란토인 첨가제 0.10
디소듐 EDTA 금속이온 봉쇄제 0.02
메틸파라벤 보존제 0.20
부틸렌 글리콜 보습제 5.00
카보머 점증제 0.10
Glycerin/글리세릴 폴리아크릴레이트 점증제 1.00
글리세린 보습제 5.00
잔탄검 점증제 0.10
페녹시에탄올 보존제 0.30
B 세테아릴 알콜 유화안정제 1.20
글리세릴 스테아레이트 & PEG-100 Stearate 유화제 0.50
스테아르산 유화안정제 1.00
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 오일 8.00
마카다미아씨오일 오일 1.00
디메치콘 오일 1.00
토코페릴 아세테이트 항산화제 0.10
프로필파라벤 보존제 0.10
C 물 용제 2.00
Arginine 첨가제 0.2
D 실시예 2 추출물(제제예 3) 또는
실시예 3의 추출물(제제예 4)		 기능성 성분 1.00
향료 향료 적량
제제예 5 및 6. 에센스
상기 실시예 2의 바위솔 및 삼백초의 혼합 추출물(제제예 5), 또는 실시예 3의 바위솔, 삼백초, 및 하엽의 혼합 추출물을 함유하는 에센스의 제제예(제제예 6)는 다음 표 6의 조성과 같이 제조하였다.
구체적으로는 A 상(phase)을 수상 용해조에서 65~70℃로 가열 용해하였다. B 상을 유상 용해조에서 70~75℃로 가열 용해하였다. 그런 다음, A 상에 B 상을 투입하고 호모믹서(HOMO MIXER)를 이용하여 유화 후, C 상을 투입하여 혼합 교반, 냉각하였다.
　 INCI 명 용도 함량
A 물 용제 to 100
알란토인 첨가제 0.10
디소듐 EDTA 금속이온 봉쇄제 0.02
메틸파라벤 보존제 0.20
부틸렌 글리콜 보습제 5.00
암모늄 아크릴로일디메틸타우레이트/VP 코폴리머 점증제 0.30
폴리아크릴레이트-13 /폴리이소부텐/ 폴리소르베이트-20 점증제 0.30
글리세린 보습제 5.00
글리세레스-26 보습제 3.00
페녹시에탄올 보존제 0.30
B 세테아릴 알코올 유화안정제 1.20
글리세릴 스테아레이트 & PEG-100 스테아레이트 유화제 1.50
폴리소르베이트 60 유화안정제 1.00
페닐 트리메치콘 오일 2.00
시클로메치콘 오일 3.00
프로필파라벤 보존제 0.10
C 실시예 2 추출물(제제예 5) 또는
실시예 3의 추출물(제제예 6)		 기능성 성분 1.00
향료 착향제 적량
제제예 7 및 8. 크림
상기 실시예 2의 바위솔 및 삼백초의 혼합 추출물(제제예 7), 또는 실시예 3의 바위솔, 삼백초, 및 하엽의 혼합 추출물을 함유하는 크림의 제제예(제제예 8)는 다음 표 7의 조성과 같이 제조하였다.
구체적으로는 A 상(phase)을 수상 용해조에서 70~75℃로 가열 용해하였다. B 상을 유상 용해조에서 78~80℃로 가열 용해하였다. 그런 다음, A 상에 B 상을 투입하고 호모믹서(HOMO MIXER)를 이용하여 유화 후, C 상을 투입하여 20 분간 혼합하였다. 그런 다음, 40℃까지 냉각 후 D 상을 투입하여 혼합 교반, 냉각하였다.
　 INCI 명 용도 함량
A 물 용제 to 100
알란토인 첨가제 0.10
디소듐 EDTA 금속이온 봉쇄제 0.02
메틸파라벤 보존제 0.20
부틸렌 글리콜 보습제 8.00
카보머 점증제 0.30
글리세린 보습제 5.00
잔탄검 점증제 0.10
페녹시에탄올 보존제 0.30
바이오사카라이드 검-1 첨가제 1.00
　 세테아릴 알콜 유화안정제 1.50
글리세릴 스테아레이트 SE 유화안정제 2.00
B 글리세릴 스테아레이트 / PEG-100 스테아레이트 유화제 0.50
바틸알콜/스테아르산/ 카프릴릭·카프릭 트리글리세라이드 /레시틴 유화안정제 2.00
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 오일 5.00
수소화 폴리데센 오일 3.00
세틸 에틸헥사노에이트　 오일 3.00
Limnanthes Alba (Meadowfoam) Seed Oil 오일 1.00
Helianthus Annuuus Seed oil 오일 0.50
디메치콘 오일 2.50
토코페릴 아세테이트 항산화제 0.30
프로필파라벤 보존제 0.10
C 물 용제 2.00
아르기닌 첨가제 0.50
D 실시예 2 추출물(제제예 7) 또는
실시예 3의 추출물(제제예 8)		 기능성 성분 1.00
향료 착향제 적량
제제예 9 및 10. 아이크림
상기 실시예 2의 바위솔 및 삼백초의 혼합 추출물(제제예 9), 또는 실시예 3의 바위솔, 삼백초, 및 하엽의 혼합 추출물을 함유하는 아이크림의 제제예(제제예 10)는 다음 표 8의 조성과 같이 제조하였다.
구체적으로는 A 상(phase)을 수상 용해조에서 70~75℃로 가열 용해하였다. B 상을 유상 용해조에서 78~80℃로 가열 용해하였다. 그런 다음, A 상에 B 상을 투입하고 호모믹서(HOMO MIXER)를 이용하여 유화 후, C 상을 투입하여 20 분간 혼합하였다. 그런 다음, 40℃까지 냉각 후 D 상을 투입하여 혼합 교반, 냉각하였다.
　 INCI 명 용도 함량
A 물 용제 to 100
알란토인 첨가제 0.10
디소듐 EDTA 금속이온 봉쇄제 0.02
메틸파라벤 보존제 0.20
부틸렌 글리콜 보습제 5.00
카보머 점증제 0.10
글리세릴 폴리아크릴레이트 / 디메치콘 / 시클로메치콘 점증제 2.00
글리세린 보습제 5.00
페녹시에탄올 보존제 0.30
B 세테아릴 알콜 유화안정제 1.20
세테아레스-12 계면활성제-
유화제		 0.50
글리세릴 스테아레이트 SE 유화안정제 2.00
세틸 팔미테이트 유화안정제 1.00
수소화 폴리데센 오일 3.00
세틸 에틸헥사노에이트　 오일 3.00
마카다미아씨오일 오일 1.00
디메티콘 오일 2.00
토코페릴 아세테이트 항산화제 0.10
프로필파라벤 보존제 0.10
C 물 용제 2.00
아르기닌 첨가제 0.2
D 실시예 2 추출물(제제예 9) 또는
실시예 3의 추출물(제제예 10)		 기능성 성분 1.00
향료 착향제 적량
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로, 상기 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (17)

  1. 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물을 포함하는 주름의 예방 또는 개선용 화장용 조성물.
  2. 삭제
  3. 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물을 포함하는 피부손상의 예방 또는 회복 촉진용 화장용 조성물.
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 청구항 1 또는 3에 있어서, 상기 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물은 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10 중량비율로 함유되는 것인 화장용 조성물.
  7. 청구항 1 또는 3에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C3의 알코올, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매의 추출물인 것인 화장용 조성물.
  8. 청구항 1 또는 3에 있어서, 상기 화장용 조성물은 크림, 유연화장수, 수렴화장수, 밀크 로션, 파운데이션, 비누 또는 세안폼으로 제제화된 것인 화장용 조성물.
  9. 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물을 포함하는 주름의 예방 또는 개선용 건강기능식품용 조성물.
  10. 삭제
  11. 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물을 포함하는 피부손상의 예방 또는 회복 촉진용 건강기능식품용 조성물.
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 청구항 9 또는 11에 있어서, 상기 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 및 하엽 추출물은 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10 중량비율로 함유되는 것인 조성물.
  15. 청구항 9 또는 11에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C3의 알코올, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매의 추출물인 것인 조성물.
  16. 청구항 9 또는 11에 있어서, 상기 추출물은 바위솔 추출물, 삼백초 추출물, 또는 하엽의 분쇄물을 에탄올로 추출하여 얻어진 에탄올 추출물을 헥산과 물층으로 분획한 후, 헥산층을 실리카 칼럼크로마토그래피를 수행하고, 전구 콜라겐 활성을 갖는 분획을 취하는 것에 의하여 얻어진 것인 조성물.
  17. 청구항 9 또는 11에 있어서, 상기 건강기능식품용 조성물은 산제, 과립제, 정제, 환제, 캅셀제, 현탁액, 유제, 시럽제, 침제, 액제, 엑스제, 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 면류, 껌류, 젤리, 아이스크림류, 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민제로 구성된 군에서 선택된 식품의 형태로서 제제화된 것인 조성물.
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