KR101392810B1

KR101392810B1 - 된장풀 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항균용 조성물

Info

Publication number: KR101392810B1
Application number: KR1020130113755A
Authority: KR
Inventors: 신동원; 정대기
Original assignee: 순천대학교 산학협력단
Priority date: 2013-09-25
Filing date: 2013-09-25
Publication date: 2014-05-12
Also published as: KR20130108238A

Abstract

본 발명은 쑥부쟁이, 용아초, 레인, 감송향, 대풍자, 된장풀 및 지부자로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 식물을 사용하여 제조한 항균용 조성물은 메티실린 감수성 황색포도상구균 뿐 아니라 메티실린 내성 황색포도상구균에도 항균 활성을 나타내며, 특히 통상의 항균제를 더 포함하는 경우 시너지 효과를 나타내기 때문에 그 효용 가치는 매우 크다고 할 것이다. 즉, 적은 양의 항균제를 사용하더라도 기존의 항균제에 비하여 동등 이상의 항균 활성을 나타낼 수 있어 항균제의 남용으로 인해 생기는 부작용 발생 위험이 낮고, 경제적이며 효율적이다. 이외에도 우리나라에서 쉽게 찾아볼 수 있는 식물들을 사용하기 때문에 이들의 자원화 및 고부가가치 제품화를 모색할 수 있다.

Description

된장풀 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항균용 조성물 {Antibacterial compositions containing plant extracts or fractions}

본 발명은 쑥부쟁이, 용아초, 레인, 감송향, 대풍자, 된장풀 및 지부자로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물에 관한 것이다.

항균제란 세균에 대한 항균작용을 하는 물질, 상세하게는 세균이 세포벽이나 단백질 등을 합성하는 시스템을 저해시킴으로써 항균작용을 하는 물질 또는 이러한 물질로부터 제조된 것을 의미한다. 항균제는 세균 감염에 의한 질병 등을 치료하기 위하여 많이 사용되고 있는데 주로 곰팡이를 비롯한 천연물로부터 분리되거나 화학적으로 합성하는 방법으로 제조되어 왔다.

항균제 중에서 가장 대표적인 항균제는 1928년에 알렌산더 플레밍이 발견한 페니실린이다. 페니실린은 인류가 최초로 개발한 항균제로써, 페니실린의 베타-락탐의 일부분이 세균의 세포막인 펩티도글리칸 분자를 연결하는 트랜스펩티다아제(transpeptidase)와 임의로 결합하여 세균의 세포벽을 자라지 못하게 함으로써 세포벽이 약화되어 삼투압을 견디지 못하고 세균이 용균(lysis)되게 하여 박테리아의 생장을 억제시켜 항균 효과를 낸다. 페니실린의 개발 이후 이를 기초로 우수한 항균제의 개발이 진행되어 왔으며, 대표적인 것이 페니실린의 화학 구조를 일부 변경하여 제조한 메티실린(methicillin)이다.

항균제가 세균 감염을 막거나 치료하는데 있어서 많은 역할을 하였으나 항균제의 무분별한 사용 등으로 인하여 기존 항균제에 내성을 보여 약효가 듣지 않는 항균제 내성 세균이 출현하는 문제가 발생하였다. 항균제 내성 세균이란 특정 항균제에 내성을 보여 약효가 듣지 않는 세균을 말하는데, 내성균은 다른 균에도 내성을 전이시켜서 내성균이 계속 늘어나게 하기 때문에 내성이 생기면 항균력이 더 강한 항균제를 사용하든지 다른 계열의 항균제로 바꾸어야 하는 문제가 생긴다.

항균제에 내성을 가지는 여러 가지 세균 중 대표적인 것이 메티실린 내성 황색포도상구균(methicillin resistant Staphylococcus aureus; MRSA), 반코마이신 내성 엔테로코키(vancomycin resistant enterococci; VRE), 반코마이신 매개 황색포도상구균(vancomycin intermediate Staphylococcus aureus; VISA), 그리고 최소 6종 이상의 항균제에 내성을 가지는 대장균(E.coli) P157:H7 등이 있다.

메티실린 내성 황색포도상구균의 경우 1961년 영국에서 처음으로 발견된 후 세계 각처에서 보고되기 시작하였는데, 메티실린 내성 황색포도상구균은 메티실린 뿐 아니라 대부분의 항균제에 내성을 보여 극히 제한된 항균제로만 치료가 가능하다는 문제가 있다. 또한, 메티실린 내성 황색포도상구균은 병원내 감염을 유발하는 병원균 중 가장 빈번히 나타나는 원인균이고, 면역력이 약한 환자나 노약자에게 감염되는 경우 사망에까지 이를 정도로 치명적일 수 있다는 점에서 심각하다.

예로, 2006년 한 해 동안 미국에서 9만 4000여명이 메티실린 내성 황색포도상구균에 감염되었고, 이 중 1만 9천여명 이상이 사망한 것으로 보고되었다. 우리나라에서도 메티실린 내성 황색포도상구균은 병원의 감염 병원체로 대형 종합병원에서 80% 가까이 상재하고 있는 것으로 보고되고 있다.

항균제에 대한 내성 증가는 새로운 고가 항균제의 사용 증가, 치료 기간의 증가, 사망률 등을 증가시키며 의료 분쟁을 일으키는 등 경제적, 사회적 문제를 발생시키고 있다. 따라서 이러한 문제를 해결하기 위하여 새로운 항균제의 개발이 요구되고 있다. 그러나 새로 항균제를 개발한다 하여도 시간이 지나면 내성이 생기는데 천연물을 이용한다면 이러한 문제를 해결하면서도 부작용이 적은 안전한 약물을 개발할 수 있다. 왜냐하면 천연물 속에는 현재까지 알려지지 않은 새로운 성분이 함유되어 있고, 다양한 성분의 혼합물이어서 복합물 상호간의 약리 작용으로 인하여 내성 등의 부작용을 감소시킬 수 있기 때문이다.

한편, 쑥부쟁이(Kalimeris yomena Kitam)는 국화과에 속하는 여러해살이풀로 한국, 일본, 중국 등에 분포하고 있는데, 높이는 약 30~100cm이고, 잎은 어긋나고 가장자리에 굵은 톱니가 있으며, 꽃은 7월에서 10월에 핀다. 편도선염, 기관지염, 진해, 거담, 기침, 천식, 벌레물린 곳 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

쑥부쟁이를 이용한 약제학적 또는 화장료 조성물과 관련하여, 한국식품영양과학회지 34(1), 8~12(2005)는 쑥부쟁이 메탄올 추출물에 대한 분획물의 항암 효과에 대하여 개시하고 있다.

용아초(Agrimonia pilosa L.)는 장미과에 속하는 여러해살이풀로 짚신나물, 선학초라고 불리기도 한다. 지혈제, 설사, 장염, 신장결석, 담석증 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

용아초를 이용한 약제학적 또는 화장료 조성물과 관련하여, 대한민국 등록특허 10-0327762호는 B형 간염바이러스 표면항원 생성억제능이 있는 짚신나물 추출물에 대하여 개시하고 있고, 대한민국 공개특허 10-2007-0089434호는 용아초속 식물 추출물을 포함하는 비바이러스성 간염 또는 간질환의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물에 대하여 개시하고 있으며, 대한민국 등록특허 10-0809797호는 짚신나물 뿌리 추출물을 이용한 식물의 탄저병 방제 조성물에 대하여 개시하고 있다. 또한, 대한민국 공개특허 10-2010-0120766호는 용아초, 계혈등 및 교맥 추출물 중 1종 이상을 함유한 피부주름 개선용 화장료 조성물에 대하여 개시하고 있으며, 대한민국 공개특허 10-2010-0123456호는 상수리나무 추출물, 등골나물 추출물 및 짚신나물 추출물로 이루어진 군으로부터 1 이상 선택한 추출물을 포함하는 피지생성 억제용, 여드름 예방 및 개선용, 지루성 피부염 예방 빛 개선용 조성물에 대하여 개시하고 있다. 그리고, 대한민국 공개특허 10-2011-0075336호는 짚신나물 추출물을 포함하는 진통제 조성물에 대하여 개시하고 있으며, 대한민국 등록특허 10-0763035호는 선학초 추출물을 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물에 대하여 개시하고 있고, 한국식품영양과학회지 34(2), 244~248(2004)는 용아초 추출물의 식중독 원인균에 대한 항균 효과에 대하여 개시하고 있다.

레인(Rhein)은 C₁₅H₈O₆(4,5-Dihydroxyanthraquinone-2-carboxylic acid)의 화학식을 가지는 식물 추출물로 대황, 하수오, 장군풀, 결명자 등에서 추출할 수 있으며, 항염, 항균, 면역 억제 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

레인을 이용한 약제학적 또는 화장료 조성물과 관련하여, 대한민국 공개특허 10-2005-0092820호는 에모딘, 레인 및 이들의 유도체로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택한 화합물을 유효성분으로 포함하는 식물병원균 방제용 조성물에 대하여 개시하고 있다.

감송향(Nardostachys chinensis Batalin)은 마타리과에 속하는 여러해살이풀로 고산의 초지나 초원의 도랑가에서 자란다. 완복창통, 구토, 식욕부진, 치통, 충치, 치질, 기미 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

감송향을 이용한 약제학적 또는 화장료 조성물과 관련하여, 대한민국 공개특허 특2000-0020728호는 감송향 추출물, 해금사 추출물 및 호박 추출물로 구성된 그룹 중에서 1 이상 선택된 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백제 조성물에 대하여 개시하고 있으며, 대한민국 등록특허 10-1023780호는 감송향 추출물을 유효성분으로 포함하는 급성췌장염 예방 및 치료용 약학적 조성물에 대하여 개시하고 있고, 대한민국 공개특허 10-2011-0098500호는 감송향 추출물을 유효성분으로 포함하는 제1형 당뇨병 예방 및 치료용 조성물에 대하여 개시하고 있다.

대풍자(Hydnocarpi semen)는 대풍자나무 또는 동속근연식물의 씨로서 한센병, 가려움증 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

대풍자를 이용한 약제학적 또는 화장료 조성물과 관련하여, 대한민국 등록특허 10-0975426호는 대풍자 추출물을 함유하는 알러지성 피부염 또는 아토피 피부염 예방 및 치료용 약학조성물에 대하여 개시하고 있으며, 대한민국 등록특허 10-0966154호는 대풍자 추출물을 함유하는 당뇨병성 궤양 예방 및 치료용 조성물에 대하여 개시하고 있고, 대한민국 등록특허 10-0966155호는 대풍자 추출물을 함유하는 허혈성 질환 예방 및 치료용 조성물에 대하여 개시하고 있다.

된장풀(Desmodium caudatum)은 콩과의 낙엽활엽 소관목으로 높이 약 1.5m 정도로 전체에 털이 나있으며 쉬풀, 쉽싸리풀 등으로 불리기도 한다. 잎은 위장염, 이질, 관절통 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

된장풀을 이용한 약제학적 또는 화장료 조성물과 관련하여, 대한민국 등록특허 10-0543744호는 떡갈나무 열매, 상수리 열매 및 된장풀 잎을 함유하는 소나무재선충병 방제 및 치료용 발효액에 대하여 개시하고 있다.

지부자는 명아주과에 속하는 일년생초본인 댑싸리(Kochia scoparia L.)의 성숙한 과실을 말하는데, 천두자, 낙추자로 불리기도 하며 흉통, 동통, 이뇨, 방광염, 변비, 각종 염증 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

지부자를 이용한 약제학적 또는 화장료 조성물과 관련하여, 대한민국 공개특허 특2002-0004192호는 지부자 추출물 또는 드릅나무 추출물에 식이섬유, 키토산, 가르니시아 캄보지아 추출물 및 결명자 추출물을 함유하는 비만치료 및 예방용 조성물에 대하여 개시하고 있고, 대한민국 공개특허 특2002-0004193호는 지부자 추출물 또는 두릅나무추출물에 밀크씨슬 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 숙취제거 및 간장 보호용 조성물에 대하여 개시하고 있으며, 대한민국 등록특허 10-0867509호는 지부자 추출물을 함유하는 피부 질환 예방 및 경감용 마스크 팩에 대하여 개시하고 있다. 또한, 대한민국 등록특허 10-0981407호는 연잎, 지부자, 지골피 추출물로 구성되는 천연항균 복합체를 함유하는 화장료 조성물에 대하여 개시하고 있으며, 대한민국 등록특허 10-1039532호는 연잎, 지부자, 지골피 추출물로 구성되는 천연항균 복합체를 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물에 대하여 개시하고 있다.

그러나 현재까지 상기 식물의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물, 특히 상기 조성물에 통상의 항균제를 더 포함하는 경우 시너지 효과를 내는 항균용 조성물에 대하여는 전혀 개시되어 있지 않은 실정이다.

이에 본 발명자들은 다양한 식물 추출물을 이용하여 항균용 조성물, 특히 통상의 항균제를 더 포함하는 경우 시너지 효과를 나타내는 항균용 조성물을 개발하고자 시도하여 왔다. 그 결과, 쑥부쟁이, 용아초, 레인, 감송향, 대풍자, 된장풀 및 지부자로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 에탄올 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물에 통상의 항균제를 더 포함하는 경우 시너지 효과를 나타내며, 특히 병원내 주된 감염균인 황색포도상구균인 메티실린 감수성 황색포도상구균 뿐 아니라 메티실린 내성 황색포도상구균을 효과적으로 사멸시키고, 부작용이 적고 안전한 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 하나의 목적은 쑥부쟁이, 용아초, 레인, 감송향, 대풍자, 된장풀 및 지부자로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 조성물에 페니실린 계열, 퀴놀론 계열, 테트라사이클린 계열, 세팔로스포린 계열 또는 마크로라이드 계열과 같은 통상의 항균제를 더 포함하는 경우 시너지 효과를 나타내는 항균용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 조성물이 간균, 구균 또는 나선균에 대해 항균 효과를 나타내는 항균용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 조성물을 의약품, 세정제, 화장료 등의 용도로 제공하는 것이다.

하나의 양태로서, 본 발명은 쑥부쟁이, 용아초, 레인, 감송향, 대풍자, 된장풀 및 지부자로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 식물 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 쑥부쟁이, 용아초, 레인, 감송향, 대풍자, 된장풀 및 지부자에 관한 내용은 상술한 바를 참조한다.

상기 식물은 식물의 잎, 꽃, 열매, 종자, 줄기, 뿌리, 껍질 및 전초를 포함하며, 이들 부위를 하나 이상 포함하여 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 식물 추출물 또는 이의 분획물은 식물의 용매에 의한 추출물 또는 분획물 뿐만 아니라, 그들의 정제물, 그 추출물, 분획물 또는 정제물의 농축 또는 건조된 형태 등을 모두 포함한다.

상기 식물 추출물을 위한 용매는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 펜탄올, 헥산올, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 물을 단독 혹은 2종 이상의 혼합물로서 이용할 수 있으나, 이로 제한되지는 않는다. 바람직하게는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 펜탄올 및 헥산올이다.

상기 식물 분획물을 위한 용매는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 노르말 부탄올, 이소부탄올, 펜탄올, 헥산올, 에틸렌, 아세톤, 노르말 헥산, 이소헥산, 시클로헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 물을 단독 혹은 2종 이상의 혼합물로서 이용할 수 있으나, 이로 제한되지는 않는다. 바람직하게는 노르말 헥산올, 에틸아세테이트, 노르말 부탄올 및 물이다.

하나의 구체적 실시에서, 상기 식물의 항균 활성을 평가하기 위하여 에탄올을 이용하여 식물의 추출물을 제조한 다음, 노르말 헥산, 에틸아세테이트, 노르말 부탄올 및 물을 사용하여 순차적으로 분획하였다.

본 발명에 있어서, 상기 식물 추출물 또는 이의 분획물의 제조 방법은 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출 등을 사용할 수 있다.

상기 정제물은 추출물 또는 분획물로부터 부유하는 고체 입자를 제거하는 과정으로, 면, 나일론 등을 이용하여 입자를 걸러 내거나 한외여과법, 냉동여과법, 원심분리법 등을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 크로마토그래피)에 의한 분리 과정을 추가로 포함할 수 있다.

상기 추출물, 분획물 또는 정제물은 액체 형태로 그대로 사용하거나 또는 이를 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. 상기 농축 및/또는 건조 방법은, 이로써 제한되는 것은 아니나, 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조, 감압건조, 포말건조, 고주파건조, 적외선건조 등의 방법을 포함한다.

본 발명에 있어서, 상기 균은 그람 양성균 및 그람 음성균을 모두 포함하며, 막대 모양의 간균, 구형인 구균, 나선처럼 돌돌 말린 모양인 나선균 등 그 종류가 이로 제한되지는 않으나, 바람직하게는 구균이다. 상기 구균은 구균이 쌍을 이룬 쌍구균, 구균이 포도송이 같이 덩어리진 포도상구균, 구균이 열을 지어 배열하거나 사슬처럼 연결되어 있는 연쇄상구균 등을 포함하는데, 보다 바람직하게는 상기 구균 중 포도상구균이다. 상기 포도상구균에는 황색포도상구균, 표피 포도상구균, 반코마이신 매개 황색포도상구균 등이 있는데, 바람직하게는 황색포도상구균이며, 상기 황색포도상구균에는 메티실린 감수성 황색포도상구균과 메티실린 내성 황색포도상구균이 있는데, 보다 바람직하게는 메티실린 내성 황색포도상구균이다.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 조성물에 통상의 항균제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항균용 조성물을 제공한다.

상기 항균제는 시판되어 사용되고 있는 통상의 항균제를 말하며, 그 종류는 이로 제한되지 않으나 페니실린(penicillin) 계열 항균제, 퀴놀론(quinolone) 계열 항균제, 테트라사이클린(tetracycline) 계열 항균제, 세팔로스포린(cephalosporin) 계열 항균제, 마크로라이드(macrolide) 계열 항균제 등이며, 바람직하게는 페니실린 계열 항균제이며, 보다 바람직하게는 암피실린 또는 옥사실린이다.

상기 페니실린 계열 항균제는 화학적으로 베타락탐 고리(beta-lactam ring)를 가지며, 세균의 세포벽 합성에 영향을 미쳐 세균의 생장을 억제시켜 항균 효과를 나타내는데, 이의 예로는 페니실린(penicillin) G, 페니실린 V, 메티실린(meticillin), 옥사실린(oxacillin), 클록사실린(cloxacillin), 디클록사실린(dicloxacillin), 나프실린(nafcillin), 암피실린(ampicillin), 아목시실린(amoxicillin), 카베니실린(carbenicillin), 티카실린(ticarcillin), 메즐로실린(mezlocillin), 피페라실린(piperacillin) 등이 있으나, 반드시 이로 제한되는 것은 아니다.

상기 퀴놀론 계열 항균제는 화학적으로 퀴놀론카르복실산을 가지며 DNA를 슈퍼코일(supercoil) 상태로 압축하는 DNA 선회효소를 억제하여 DNA 합성을 방해함으로써 항균 효과를 나타내는데, 이의 예로는 시프로플록사신(ciprofloxacin), 레보플록사신(levofloxacin), 목시플록사실(moxifloxacin) 등이 있으나, 반드시 이로 제한되는 것은 아니다.

상기 테트라사이클린 계열 항균제는 화학적으로 테트라사이클린 핵을 가지고 있으며, 미생물의 리보솜에서 t-RNA의 전사를 방해하여 단백질 합성에 영향을 미쳐 항균 효과를 나타내는데, 이의 예로는 클로르테트라사이클린(chlortetracycline), 옥시테트라사이클린(oxytetracycline), 독시사이클린(doxycyclin) 등이 있으나, 반드시 이로 제한되는 것은 아니다.

상기 세팔로스포린 계열 항균제는 화학적으로 베타락탐 고리를 가지며 세균의 세포벽 생성을 억제하여 항균 효과를 나타내는데, 이의 예로는 세푸록심(cefuroxime), 세파클러(cefaclor), 세파트리악손(ceftriaxone), 세포탁심(cefotaxim) 등이 있으나, 반드시 이로 제한되는 것은 아니다.

상기 마크로라이드 계열 항균제는 화학적으로 락톤 고리에 당이 부착된 형태를 가지며 리보솜과 결합하여 단백질 합성을 억제함으로써 항균 효과를 나타내는데, 이의 예로는 에리스로마이신(erythromycin), 스피라마이신(spiramycin), 타이로신(tylosin) 등이 있으나, 반드시 이로 제한되는 것은 아니다.

이와 같이 상기 조성물에 통상의 항균제를 더 포함하는 경우 서로 다른 기전을 가진 항균 작용으로 인하여 항균 활성이 더욱 증진될 수 있으며 보다 다양한 종류의 균에 대하여 항균 활성을 나타낼 수 있다.

그리고, 상기 포함되는 통상의 항균제의 함량은 식물 추출물 또는 이의 분획물 중량 대비 0.2 내지 1.2, 바람직하게는 0.3 내지 1.0의 중량 비율이다. 상기 항균제의 함량비가 0.2 미만인 경우 시너지 또는 부가 효과가 미미할 수 있으며, 1.2를 초과하는 경우에는 항균제가 석출되거나 효과 대비 비경제적일 수 있다.

하나의 구체적 실시에서, 쑥부쟁이의 지상부의 에탄올 추출물 또는 이의 분획물 각각의 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대한 항균 활성을 관찰한 결과, 각각의 추출물 또는 분획물을 단독으로 사용한 경우에는 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균 대부분에서 미미한 항균 활성을 보였으나, 암피실린과 병용하여 사용한 경우에는 시너지 효과가 나타났으며, 옥사실린과 병용하여 사용한 경우에는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대하여는 부가 효과가, 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대하여는 시너지 효과가 나타났다.

다른 하나의 구체적 실시에서, 용아초의 에탄올 추출물 또는 이의 분획물 각각의 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대한 항균 활성을 관찰한 결과, 용아초 뿌리의 에탄올 추출물 및 노르말 헥산 분획물의 항균 활성이 우수하게 나타났으며, 암피실린 또는 옥사실린과 병용하여 사용한 경우에는 메티실린 내성 황색포도상구균에 대하여 부가 효과가 나타났다.

또 다른 하나의 구체적 실시에서 레인의 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대한 항균 활성을 관찰한 결과, 단독으로 사용한 경우에도 항균 활성이 관찰되었으나, 암피실린 또는 옥사실린과 병용하여 사용한 경우에는 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대해서는 시너지 효과가, 메티실린 내성 황색포도상구균에 대해서는 대체적으로 시너지 효과가 나타났다.

또 다른 하나의 구체적 실시에서, 감송향 또는 대풍자의 에탄올 추출물 또는 이의 분획물 각각의 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대한 항균 활성을 관찰한 결과, 암피실린 또는 옥사실린과 병용하여 사용한 경우 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균 모두에서 시너지 효과가 나타났다.

또 다른 하나의 구체적 실시에서, 된장풀의 에탄올 추출물 또는 이의 분획물 각각의 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대한 항균 활성을 관찰한 결과, 메티실린 내성 황색포도상구균에 대해서는 부가 효과가, 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대해서는 시너지 효과가 나타났다.

또 다른 하나의 구체적 실시에서, 지부자의 에탄올 추출물 또는 이의 분획물 각각의 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대한 항균 활성을 관찰한 결과, 각각의 추출물 또는 분획물을 단독으로 사용한 경우에는 메티실린 내성 황색포도상구균에서 미미한 항균 활성을 보였으나, 암피실린과 병용하여 사용한 경우에는 부가 효과가 나타났으며, 옥사실린과 병용하여 사용한 경우에는 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균 모두에서 시너지 효과가 나타났다.

따라서, 식물 추출물 또는 분획물에 통상의 항균제를 더 포함하여 사용함으로써, 기존보다 적은 양의 통상의 항균제를 사용하면서도 동등 이상의 항균 활성을 낼 수 있기 때문에 경제적이고, 부작용이 최소화되어 안전한 항균용 조성물을 사용할 수 있다.

본 발명의 항균용 조성물은 항균을 목적으로 다양한 용도로 사용될 수 있는데, 이의 예로는 의약품, 세정제, 화장료 등을 들 수 있다.

하나의 구체적 양태로서 상기 항균용 조성물은 항균용 약제학적 조성물로 사용된다.

상기 약제학적 조성물에 포함되는 본 발명의 항균용 조성물은 약제학적 조성물의 총 중량에 대해서 0.0001 내지 30 중량%, 바람직하게는 0.0001 내지 10 중량%이다.

상기 약제학적 조성물은 치료 목적에 따라 약제학 분야에서 통상적인 제제로 제형화될 수 있으며, 예를 들어, 정제, 캅셀제, 산제, 과립, 현탁제, 유제, 시럽제, 유탁제, 경고제, 연고제, 스프레이제, 오일제, 겔제, 주정제, 틴크제, 욕제, 리니먼트제, 로션제, 패취제, 패드제, 크림제 등으로 제형화될 수 있다. 또한, 환부에 직접 도포하는 국소투여를 목적으로 하는 피부 외용제로서 바람직하게 사용될 수 있는데, 이 경우 연고제, 로션제, 스프레이제, 젤 등의 형태가 바람직하다. 이들 피부외용제는 또한 치료 부위에 직접 적용될 수 있는 지지 기재(support base) 또는 매트릭스 등에 포함될 수 있으며, 지지기재의 예는 거즈 또는 붕대를 포함한다. 상기 제형화에 사용되는 식물 추출물 또는 이들의 분획물은 콜로이드 형태 또는 건조된 분말 형태 등일 수 있다.

연고제로 제형화하는 경우, 피부 표면 온도, 피부의 pH, 경피수분손실(transdermal water loss) 값, 표피의 총지질값 등을 고려하여야 하며, 바세린, 유동파라핀, 파라핀, 플라스티베이스, 실리콘, 돈지(lard), 식물유, 왁스, 정제 라놀린(purified lanolin) 등의 유지성 기재, 수용성 기재, 유제성 기재, 현탁성 기재 등과 배합하여 제형화한다. 이러한 연고제는 산화방지제(예, 토코페롤, BHA, BHT, NDGA 등), 방부제(예, 페놀성 물질, 클로로부탄올, 벤질알코올, 파라벤류, 안식향산 등), 보습제(예, 글리세린, 프로필렌클리콘, 소르비톨), 용해보조제(예, 에탄올, 프로필렌글리콜), 연화보조제(예, 유동파라핀, 글리세린, 프로필렌글리콜, 계면활면성제 등) 등의 첨가제와 함께 배합될 수 있다.

로션제로 제형화하는 경우, 용액형, 현탁형 또는 유제형 등의 로션제로 제조될 수 있으며, 피부에 바르는 로션의 경우 예를 들어 200cps 내지 500cps의 점성을 가지도록 제조할 수 있으며, 도포시 부드러운 느낌을 주기 위하여 글리세린, 프로필렌글리콜 같은 습윤제를 배합하여 제조하는 것이 바람직하다.

스프레이제로 제형화하는 경우, 수분산된 농축물 또는 습윤 분말이 분산되도록 추진제 등이 첨가제와 함께 배합될 수 있다.

패취제로 제형화하는 경우, 피부를 통한 화합물의 흡수를 증가시키기 위해서 흡수촉진제를 사용할 수 있다.

본 발명의 상기 약제학적 조성물은 경구, 비경구, 국소 투여, 직장 투여, 비내 투여 등 다양한 투여방식으로 투여할 수 있다. 경구 투여하는 경우, 예를 들어 경구용 고형제는 활성물과 함께 희석제(예, 락토즈, 덱스트로즈, 자당, 셀룰로즈, 옥수수 전분, 감자 전분 등), 활탁제(예, 실리카, 탈크, 스테아린산, 마그네슘 또는 칼슘 스테아레이트, 폴리에틸렌 글리콜 등), 결합제(예, 전분, 아라빅 검, 젤라틴 메틸셀룰로즈, 카르복시메틸셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈 등), 붕해제(예, 전분, 알긴산, 알기네이트, 나트륨 전분 글리콜레이트 등), 포르말 혼합물, 염료, 감미제, 습윤제(예, 레시틴, 폴리솔베이트, 라우릴설페이트 등), 기타 일반적으로 약제에 사용되는 약물학적 불활성 물질 등을 포함할 수 있다. 국소 투여하는 경우, 부형제(예, 락토스, 전분, 셀룰로스, 유당, 폴리에틸렌 글리콜 등), 윤활제(예, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산, 글리세릴 베헤네이트(behenate), 활석 등), 보존제(예, 벤질알코늄 클로라이드 등) 등을 포함할 수 있다.

비경구 투여는 전신 효과를 가져오는 주사 또는 고통받는 영역에 직접 투여되는 주사를 포함한다. 비경구 투여의 예로는, 피하, 정맥내, 근육내, 진피내, 경막내, 안내 및 일반적인 주입 기법이 있다.

국소 투여는, 예를 들어 눈, 외이 및 중이 감염을 비롯한 귀, 질, 열리고 봉합된 상처 또는 닫힌 상처 및 피부와 같은 국소 적용에 의해 용이하게 접근가능한 감염 영역 또는 기관의 치료를 포함한다. 또한, 전신 효과를 가져오는 경피 전달을 포함한다.

직장 투여는 좌약의 형태를 포함한다.

비내 투여는 코 에어로졸 또는 흡입 적용을 포함한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서 약학적으로 유효한 양은 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 종류 및 이의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강 및 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 특정 추출물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 사용된 특정 추출물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 일반적으로, 성인에게 1일에 0.1 내지 1000mg/kg의 양을, 바람직하게는 10 내지 100mg/kg의 용량을, 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 항균용 약제학적 조성물 단독으로, 또는 상기 조성물에 통상의 항균제를 더 포함하여 개체에 투여하여 간균, 구균 또는 나선균성 감염증, 특히 메티실린 감수성 황색포도상구균 뿐 아니라 메티실린 내성 황색포도상구균을 치료하는 방법에 관한 것이다.

상기 치료는 치료학적 처치 및 예방 또는 방지 수단을 말한다. 그러므로, 치료가 필요한 자들은 상기 균에 감염된 자뿐만 아니라, 상기 균에 감염되는 것을 예방하고자 하는 자들을 포함한다. 또한, 상기 개체는 상기 균에 감염되어 치료가 필요한 모든 동물을 말하여, 구체적으로 사람, 소, 개, 말, 돼지 등의 포유류, 기니피그, 햄스터, 다람쥐, 랫드 등의 설치류, 닭, 꿩, 참새 등의 조류, 뱀, 도마뱀, 거북, 악어 등의 파충류, 개구리, 도룡뇽 등의 양서류 등을 말하나 이로 제한되지는 않는다.

다른 하나의 구체적 양태로서, 상기 항균용 조성물은 항균용 세정제 조성물로 사용된다.

상기 세정제는 세척되고 있는 표면으로부터 고체와 액체 오물을 구축, 제거 또는 분산시킬 수 있는 물질 및 제품을 말하고, 상기 세척은 표면으로부터 원하지 않는 물질이나 미생물을 제거하는 것을 말한다.

본 발명의 세정제에 포함되는 상기 항균용 조성물은 세정제의 총 중량에 대해서 0.0001 내지 30 중량%, 바람직하게는 0.0001 내지 20 중량%, 가장 바람직하게는 0.0001 내지 10중량%이다.

본 발명의 세정제에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기의 항균용 조성물 이외에 세정제에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함한다. 예를 들어 향료, 염료, 용매, 불투명화제, 공중합체계 분산액, 농후화제, 셀룰로즈 유도체, 첨연 검, 알부민 유도체, 지방, 오일, 각질용해제, 각화제, 점증제, 안정화제와 같은 통상적인 보조제, 및 담체 등을 포함한다.

본 발명의 세정제는 샴푸, 린스, 비누, 핸드워시, 폼클렌징 등 인체를 세척하기 위한 용도의 세정제, 식기용, 욕실용, 싱크대용, 벽지용 등 생활 환경을 세척하기 위한 용도의 세정제로 사용될 수 있으나, 이로 제한되지는 않는다.

본 발명의 세정제는 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들면, 액체, 고체, 크림, 스프레이제가 있다.

또 다른 하나의 구체적 양태로서, 상기 항균용 조성물은 항균용 화장료 조성물로 사용된다.

본 발명의 화장료에 포함되는 항균용 조성물은 화장료의 총 중량에 대해서 0.0001 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.0001 내지 10 중량%, 가장 바람직하게는 0.0001 내지 3.0 중량%이다.

본 발명의 화장료에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기의 항균용 조성물 이외에 화장료에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함한다. 예를 들어 점증제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체 등을 포함한다.

본 발명의 화장료는 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 구체적으로, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 화장료 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 식물 추출물 또는 이들의 분획물 중의 어느 하나 이상을 제조하는 단계, 또는 상기 추출물 또는 분획물에 통상의 항균제를 더 포함하는 단계를 특징으로 하는 항균용 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.

본 발명의 항균용 조성물을 제조하는 방법에 있어서, 첫번째 단계는 식물 추출물 또는 이들의 분획물을 제조하는 단계이다. 상기 식물은 쑥부쟁이, 용아초, 레인, 감송향, 대풍자, 된장풀 및 지부자로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상이며, 이의 추출물 또는 분획물에 관한 내용은 상술한 내용을 참조한다.

하나의 구체적 실시에서, 식물을 에탄올을 이용하여 추출물을 제조한 다음 노르말 헥산, 에틸아세테이트, 노르말 부탄올 및 물을 사용하여 순차적으로 분획한다.

다음 단계는, 상기 식물 추출물 또는 이들의 분획물에 통상의 항균제를 더 포함하는 단계이다. 상기 식물 추출물 또는 이들의 분획물에 통상의 항균제를 더 포함하여 사용하는 경우 서로 다른 기전을 가진 식물 추출물 또는 이들의 분획물과 항균제가 시너지 또는 부가 효과를 나타내어 적은 양의 항균제를 사용하여도 높은 항균 활성을 얻을 수 있어 경제적이면서도 안전하며 보다 다양한 균에 항균 작용을 나타낼 수 있다. 상기 항균제의 종류 및 함량에 관한 내용은 상술한 내용을 참조한다.

그리고, 상기 식물들은 민간 요법으로 오래전부터 사용해오던 천연물로서 자체의 독성 및 부작용이 거의 없으므로, 의약품, 세정제 및 화장료 등에 독성 및 부작용에 대한 염려 없이 사용할 수 있다.

본 발명의 항균용 조성물은 천연물인 다양한 식물을 사용하기 때문에 부작용의 우려가 적고 안전하며, 항균 활성이 우수하여 의약품, 세정제 또는 화장료 등에 유용하게 사용할 수 있다. 특히, 메티실린 감수성 황색포도상구균 뿐 아니라 메티실린 내성 황색포도상구균에 대하여도 우수한 항균 활성을 나타내며, 특히 통상의 항균제를 더 포함하는 경우 시너지 효과를 나타내기 때문에 그 효용 가치는 매우 크다고 할 것이다. 즉, 적은 양의 항균제를 사용하더라도 기존의 항균제에 비하여 동등 이상의 항균 활성을 나타낼 수 있어 항균제의 남용으로 인해 생기는 부작용 발생 위험이 낮고, 경제적이며 효율적이다. 이외에도 우리나라에서 쉽게 찾아볼 수 있는 식물들을 사용하기 때문에 이들의 자원화 및 고부가가치 제품화를 모색할 수 있다.

이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상을 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 식물 추출물 및 분획물 제조

1-1. 식물의 수집

쑥부쟁이, 용아초, 감송향, 대풍자, 된장풀 및 지부자는 2010년 06월 순천에서 수집하였다. 레인은 대황에서 추출한 것을 구입하였다. 샘플은 순천대학교 한약자원학과의 신동원 교수가 확인하였으며 대조표본은 본초 및 방제 실험실에 보관해 놓았다.

1-2. 식물 추출물 및 분획물 제조

상기 실시예 1-1에서 수집한 식물을 건조한 다음, 1L의 에탄올에서 3시간 동안 끓여 추출하였다. 다음으로, 상기 에탄올 추출물을 10% 농도로 증류수에 녹인 후 극성 정도가 다른 유기 용매인 노르말 헥산(n-hexane), 에틸아세테이트(EtOAc), 노르말 부탄올(n-BuOH) 및 물의 순서로 분획한 다음 4℃에 보관하였다.

실시예 2 : 균주의 수집 및 배양방법

2-1. 균주의 수집

메티실린 내성 황색포도상구균(MRSA)에 대한 임상 분리균(DPS1 내지 14)은 원광대학교 병원의 환자 14명으로부터 분리하였다. 메티실린 내성 균주(methicillin-resistant strain)인 S. aureus ATCC 33591 및 메티실린 감수성 균주(methicillin-susceptible strain)인 S. aureus ATCC 25923은 미국의 ATCC(American Type Culture Collection)사에서 구입하였다.

2-2. 균주의 저장 및 배양방법

상기 실시예 2-1의 균들은 30% 글리세롤에 저장한 후 -70℃에서 얼려 보관하였다. 상기 균들은 뮬러-힌톤 배지(Mueller-Hinton broth; MHB) 및 뮬러-힌톤 한천배지(Mueller-Hinton agar; MHA)를 사용하여 배양하였으며, 뮬러-힌톤 배지에서 배양하는 경우에는 상기 실시예 2-1의 균들을 뮬러-힌톤 배지에 현탁한 후 37℃에서 24시간동안 배양한 후 사용하였다.

실시예 3 : 쑥부쟁이 추출물 또는 분획물의 항균 활성 측정

3-1. 최소 저해 농도의 결정

(1) 샘플의 제조

쑥부쟁이 지상부의 에탄올 추출물, 에탄올 추출물의 노르말 헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 노르말 부탄올 분획물, 물 분획물, 암피실린 및 옥사실린은 최초 농도가 2000ug/ml이 되도록 샘플을 제조하였다.

(2) 최소 저해 농도 (minimal inhibitory concentration; MIC)의 결정

*최소 저해 농도는 CLSI의 액체배지 미량희석법(microdilution broth method)에 의하여 결정하였다. 메티실린 감수성 균주인 S. aureus ATCC 25923, 메티실린 내성 균주인 S. aureus ATCC 33591 및 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 임상 분리균인 DPS1 내지 DPS14를 1.5×10⁸ CFU/ml의 농도로 제조하였다. 2000㎍/㎖의 농도로 제조한 상기 실시예 3-1의 (1) 샘플을 50% DMSO에 순차적으로 2배씩 희석시켜 샘플의 농도가 2000㎍/㎖부터 0.975㎍/㎖까지의 농도가 되도록 하였다. 그 후 96-웰 플레이트의 각 웰에 액체배지 100㎕, 균액 10㎕ 및 각 농도별 샘플 10㎕를 처리하고 37℃에서 18시간 동안 배양하였다. 최소 저해 농도는 메티실린 감수성 균주인 S. aureus ATCC 25923, 메티실린 내성 균주인 S. aureus ATCC 33591 및 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 임상 분리균인 DPS1 내지 DPS14의 성장이 완전히 억제된 농도로 결정하였으며, 실험을 통하여 얻은 결과는 하기 표 1 및 표 2에 나타내었다.

실험 결과, 상기 표 1에서 알 수 있는 것처럼 쑥부쟁이 지상부의 에탄올 추출물 및 에탄올 추출물의 노르말 헥산 분획물에서 메티실린 내성 황색포도상구균인 ATCC 33591에 대하여 미약한 항균 활성을 보였으나, 암피실린이나 옥사실린에 비하여 항균 효과가 크게 나타나지는 않았다.

또한, 상기 표 2과 같이 쑥부쟁이 지상부의 에탄올 추출물에 대한 노르말 헥산 분획물의 메티실린 내성 황색포도상구구균에 대해 실험군수를 늘려 실험한 경우에도, 쑥부쟁이 지상부의 노르말 헥산 분획물의 메티실린 내성 황색포도상 구균에 대한 항균 활성은 대부분의 실험군에서 암피실린에 비해 낮게 나타났다. 또한, 메티실린 감수성 황색포도상구구균에 대해서도 암피실린 또는 옥사실린에 비하여 미약한 항균 활성을 나타내었다.

3-2. 성장 저해 정도의 결정

(1) 균주 현탁액의 제조

디스크 확산법(disc diffusion method)으로 쑥부쟁이 에탄올 추출물의 노르말 헥산 분획물에 대한 항균 활성을 측정하기 위하여 메티실린 감수성 균주인 S.aureus ATCC 25923, 메티실린 내성 균주인 S. aureus ATCC 33591 및 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 임상 분리균인 DPS1 내지 DPS14를 37℃에서 24 시간동안 뮬러-힌톤 한천배지에서 배양하였다. 그 후 상기 균주들을 뮬러-힌톤 배지에 접종하여 탁도가 약 1.5 X 10⁸CFU/ml이 되도록 현탁액을 제조하였다.

(2) 샘플의 제조

쑥부쟁이 지상부의 에탄올 추출물의 노르말 헥산 분획물, 암피실린 및 옥사실린은 최초 농도가 2000ug/ml이 되도록 샘플을 제조하였다.

(3) 샘플의 접종 및 배양

*뮬러-힌톤 한천배지를 페트리디쉬에 부은 후 상기 실시예 3-2의 (1)에서 제조한 현탁액을 각각의 페트리디쉬에 100㎕씩 넣고 도말하였다. 그 후 지름이 6mm인 무균 상태의 종이 디스크를 페트리디쉬의 가운데에 올려놓았다. 다음으로 상기 실시예 3-2의 (2)에서 제조한 쑥부쟁이 지상부의 에탄올 추출물에 대한 노르말 헥산 분획물을 페트리디쉬의 종이 디스크에 각각 순차적으로 2배씩 희석시킨 샘플을 각각 10㎕씩 로딩하여 약량이 250ug 및 500ug이 되도록 하였다. 그 후 페트리디쉬를 37℃의 식물 성장 챔버에서 18시간 동안 배양하였다.

(4) 항균 활성의 측정

항균 활성은 상기 실시예 3-2의 (3)의 배양 시간이 지난 후 각각의 디스크 주위에서 균주의 성장이 저해된 지름을 측정하여 나타내었다. 실험을 통하여 얻은 결과는 하기 표 3에 나타내었다.

실험 결과, 쑥부쟁이 지상부의 노르말 헥산 분획물의 경우 메티실린 내성 황색 포도상 구균 및 메티실린 감수성 황색 포도상 구균 모두에서 항균 활성을 보였으나, 암피실린에 비하여 항균 효과가 크게 나타나지는 않았다.

그리고, 실험한 모든 군에서 쑥부쟁이 지상부의 노르말 헥산 분획물을 250ug 로딩한 경우에 비하여 500ug 로딩한 경우 균주의 성장이 저해된 지름이 넓게 관찰되어 농도 의존적인 항균 활성을 보였다.

3-3. 분할저해농도지수의 결정

(1) 샘플의 제조

(2) 분할저해농도지수의 결정

쑥부쟁이 지상부의 노르말 헥산 분획물과 암피실린 또는 옥사실린과의 병용효과를 보기 위해 상기 실시예 3-1의 방법을 사용하여 쑥부쟁이 지상부의 노르말 헥산 분획물, 암피실린 또는 옥사실린을 각각 단독으로 처리하였을 경우와 쑥부쟁이 지상부의 노르말 헥산 분획물이 있는 상태에서 암피실린 또는 옥사실린을 추가로 처리하였을 경우 및 암피실린 또는 옥사실린이 있는 상태에서 쑥부쟁이 지상부의 노르말 헥산 분획물을 추가로 처리한 경우의 최소저해농도를 구하였다.

분할저해농도지수(fractional inhibitory concentration inhibition, FICI)는 하기 실험식에서 볼 수 있듯이 각 샘플을 같이 처리하였을 때 나온 최소저해농도를 단독으로 처리하였을 때의 최소저해농도로 나눈 후 더한 값으로 정하였으며(FICI = MIC(AB)/MIC(A) + MIC(BA)/MIC(B), 여기서 MIC(AB)는 B 물질이 있을 때 A 물질을 추가로 처리한 경우의 최소 저해 농도, MIC(A)는 A 물질의 최소 저해농도, MIC(BA)는 A 물질이 있을 때 B 물질을 추가로 처리한 경우의 최소 저해 농도, MICA(B)는 B 물질의 최소 저해농도를 의미하며, FICI 값이 0.5 이하이면 시너지 효과, 0.5 초과 1.0 미만이면 부가 효과가 있는 것을 의미한다.) 그 결과를 하기 표 4 및 5에 나타내었다.

실험 결과, 쑥부쟁이 지상부의 노르말 헥산 분획물과 암피실린의 분할저해농도지수는 메티실린 내성 황색포도상구구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균 모두에서 0.5 이하로 나타나 시너지 효과가 있는 것으로 관찰되었다.

그러나, 쑥부쟁이 지상부의 노르말 헥산 분획물과 옥사실린의 분할저해농도지수는 메티실린 감수성 황색포도상구구균에서는 0.06으로 시너지(synergy) 효과가 있었으나, 메티실린 내성 황색포도상구균에서는 0.5 및 1.0으로 부가(additive) 효과가 있는 것으로 관찰되었다.

실시예 4 : 용아초 추출물 또는 분획물의 항균 활성 측정

4-1. 최소 저해 농도의 결정

*용아초 부위별 에탄올 추출물의 최소 저해 농도 및 용아초 뿌리 에탄올 추출물의 노르말 헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 노르말 부탄올 분획물, 물 분획물, 암피실린 및 옥사실린에 대한 최소 저해 농도를 구하기 위해 상기 실시예 3-1의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과는 하기 표 6 내지 표 8에 나타내었다.

실험 결과, 상기 표 6에서 볼 수 있는 것처럼 용아초 뿌리의 에탄올 추출물이 메티실린 내성 황색포도상구균에 대하여 항균 활성이 가장 우수한 것으로 관찰되었다.

그리고, 상기 표 7에서 볼 수 있는 것처럼 용아초 뿌리의 에탄올 추출물에 대한 분획물 중 노르말 헥산 분획물이 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균 모두에서 우수한 항균 활성을 나타내었다.

또한, 상기 표 8에서처럼 용아초 뿌리 노르말 헥산 분획물의 항균 효과에 대하여 실험군수를 늘려 실험한 경우에도, 용아초 뿌리의 노르말 헥산 분획물은 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균 모두에서 우수한 항균 활성을 나타내었으며, 특히 메티실린 내성 황색포도상구균에 대해서는 대조군인 암피실린이나 옥사실린에 비하여 우수한 항균 활성을 나타내었다.

4-2. 성장 저해 정도의 결정

용아초 뿌리의 에탄올 추출물에 대한 노르말 헥산 분획물, 암피실린 및 옥사실린의 성장 저해 정도를 구하기 위해 상기 실시예 3-2의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과는 하기 표 9에 나타내었다.

실험 결과, 용아초 뿌리의 노르말 헥산 분획물의 경우 메티실린 내성 황색 포도상 구균 및 메티실린 감수성 황색 포도상 구균 모두에서 항균 활성을 보였으며, 특히 메티실린 내성 황색포도상구균에 대하여는 암피실린이나 옥사실린보다 항균 효과가 우수한 것으로 관찰되었다.

그리고, 실험한 모든 군에서 용아초 뿌리의 노르말 헥산 분획물을 250ug 로딩한 경우에 비하여 500ug 로딩한 경우 균주의 성장이 저해된 지름이 넓게 관찰되어 농도 의존적인 항균 활성을 보였다.

4-3. 분할저해농도지수의 결정

용아초 뿌리의 노르말 헥산 분획물과 암피실린 또는 옥사실린과의 병용효과를 보기 위해 상기 실시예 3-3의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과를 하기 표 10 및 표 11에 나타내었다.

실험 결과, 용아초 뿌리의 노르말 헥산 분획물과 암피실린 또는 옥사실린의 분할저해농도지수는 0.5 내지 1.0 사이의 값을 보여 부가(additive) 효과가 있는 것으로 관찰되었다.

실시예 5 : 레인( Rhein )의 항균 활성 측정

5-1. 최소 저해 농도의 결정

레인, 암피실린 및 옥사실린에 대한 최소 저해 농도를 구하기 위해 상기 실시예 3-1의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과는 하기 표 12에 나타내었다.

실험 결과, 레인은 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균 모두에서 항균 활성이 있는 것으로 관찰되었으며, 특히 메티실린 내성 황색포도상구균에 대해서는 대조군인 암피실린이나 옥사실린에 비하여 우수한 항균 활성을 나타내었다.

5-2. 성장 저해 정도의 결정

레인, 암피실린 및 옥사실린의 성장 저해 정도를 구하기 위해 상기 실시예 3-2의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과는 하기 표 13에 나타내었다.

실험 결과, 레인은 메티실린 내성 황색 포도상 구균 및 메티실린 감수성 황색 포도상 구균 모두에서 항균 활성을 보였으며, 특히 메티실린 내성 황색포도상구균에 대하여는 암피실린이나 옥사실린보다 항균 효과가 우수한 것으로 관찰되었다.

그리고, 실험한 모든 군에서 레인을 250ug 로딩한 경우에 비하여 500ug 로딩한 경우 균주의 성장이 저해된 지름이 넓게 관찰되어 농도 의존적인 항균 활성을 보였다.

5-3. 분할저해농도지수의 결정

레인과 암피실린 또는 옥사실린과의 병용효과를 보기 위해 상기 실시예 3-3의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과를 하기 표 14 및 표 15에 나타내었다.

실험 결과, 레인과 암피실린 또는 옥사실린의 분할저해농도지수는 메티실린 감수성 황색포도상구균에서 0.5 이하의 값을 보여 시너지 효과가 있는 것으로 관찰되었으며, 메티실린 내성 황색포도상구균에서는 군에 따라 다르지만 대체적으로 시너지 효과가 있는 것으로 관찰되었다.

실시예 6 : 감송향의 항균 활성 측정

6-1. 최소 저해 농도의 결정

감송향의 에탄올 추출물, 에탄올 추출물의 노르말 헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 노르말 부탄올 분획물, 물 분획물, 암피실린 및 옥사실린에 대한 최소 저해 농도를 구하기 위해 상기 실시예 3-1의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과는 하기 표 16 및 표 17에 나타내었다.

실험 결과, 상기 표 16에서 볼 수 있는 것처럼 감송향의 에탄올 추출물의 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대한 항균 활성은 미약한 것으로 관찰되었다.

그리고, 상기 표 17에서 볼 수 있는 것처럼 감송향의 여러 분획물 중 노르말 헥산 분획물의 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대한 항균 활성이 가장 우수하게 나타났으며, 그 정도는 대체적으로 암피실린에 비하여 미약한 것으로 관찰되었다.

6-2. 성장 저해 정도의 결정

감송향의 에탄올 추출물, 에탄올 추출물에 대한 노르말 헥산 분획물, 암피실린 및 옥사실린의 성장 저해 정도를 구하기 위해 상기 실시예 3-2의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과는 하기 표 18에 나타내었다.

실험 결과, 감송향의 에탄올 추출물 및 노르말 헥산 분획물의 경우 메티실린 내성 황색 포도상 구균 및 메티실린 감수성 황색 포도상 구균 모두에서 항균 활성을 보였다. 메티실린 감수성 황색포도상구균에서는 감송향의 에탄올 추출물 및 노르말 헥산 분획물 모두 암피실린보다 동등 이상의 우수한 항균 활성을 나타내었으나, 메티실린 내성 황색포도상구균에서는 암피실린에 비하여 미약한 항균 활성이 관찰되었다.

그리고, 실험한 모든 군에서 감송향의 에탄올 추출물 및 노르말 헥산 분획물을 250ug 로딩한 경우에 비하여 500ug 로딩한 경우 균주의 성장이 저해된 지름이 넓게 관찰되어 농도 의존적인 항균 활성을 보였다.

6-3. 분할저해농도지수의 결정

감송향의 노르말 헥산 분획물과 암피실린 또는 옥사실린과의 병용효과를 보기 위해 상기 실시예 3-3의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과를 하기 표 19 및 표 20에 나타내었다.

실험 결과, 감송향의 노르말 헥산 분획물과 암피실린 또는 옥사실린의 분할저해농도지수는 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균 모두에서 0.5 이하의 값을 보여 시너지 효과가 있는 것으로 관찰되었다.

실시예 7 : 대풍자의 항균 활성 측정

7-1. 최소 저해 농도의 결정

대풍자의 에탄올 추출물, 에탄올 추출물의 노르말 헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 노르말 부탄올 분획물, 물 분획물, 암피실린 및 옥사실린에 대한 최소 저해 농도를 구하기 위해 상기 실시예 3-1의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과는 하기 표 21 및 표 22에 나타내었다.

실험 결과, 대풍자의 에탄올 추출물 및 노르말 헥산 분획물 모두 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균에서 항균 활성을 나타내었으며, 그 정도는 대조군인 암피실린이나 옥사실린에 비하여 우수한 것으로 관찰되었다.

7-2. 성장 저해 정도의 결정

대풍자의 에탄올 추출물에 대한 노르말 헥산 분획물, 암피실린 및 옥사실린의 성장 저해 정도를 구하기 위해 상기 실시예 3-2의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과는 하기 표 23에 나타내었다.

실험 결과, 대풍자의 노르말 헥산 분획물은 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대해서는 암피실린 및 옥사실린에 비하여 우수한 항균 활성을 나타냈으나, 메티실린 내성 황색포도상구균에 대해서는 암피실린과 동등하거나 약간 미약한 수준의 항균 활성이 관찰되었다.

그리고, 실험한 모든 군에서 대풍자의 노르말 헥산 분획물을 250ug 로딩한 경우에 비하여 500ug 로딩한 경우 균주의 성장이 저해된 지름이 넓게 관찰되어 농도 의존적인 항균 활성을 보였다.

7-3. 분할저해농도지수의 결정

대풍자의 노르말 헥산 분획물과 암피실린 또는 옥사실린과의 병용효과를 보기 위해 상기 실시예 3-3의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과를 하기 표 24 및 표 25에 나타내었다.

실험 결과, 대풍자의 노르말 헥산 분획물과 암피실린 또는 옥사실린의 분할저해농도지수는 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균 모두에서 0.5 이하의 값을 보여 시너지 효과가 있는 것으로 관찰되었다.

실시예 8 : 된장풀의 항균 활성 측정

8-1. 최소 저해 농도의 결정

된장풀 부위별 에탄올 추출물의 최소 저해 농도 및 된장풀 잎 에탄올 추출물의 노르말 헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 노르말 부탄올 분획물, 물 분획물, 암피실린 및 옥사실린에 대한 최소 저해 농도를 구하기 위해 상기 실시예 3-1의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과는 하기 표 26 및 표 27에 나타내었다.

실험 결과, 상기 표 26에서 볼 수 있는 것처럼 된장풀 부위 중 잎에 대한 에탄올 추출물의 항균 활성이 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균 모두에서 가장 우수한 것으로 관찰되었다.

그리고, 된장풀 잎의 에탄올 추출물에 대한 분획물 중 노르말 헥산 분획물의 항균 활성이 메티실린 내성 황색포도상구균 및 메티실린 감수성 황색포도상구균 모두에서 가장 우수한 것으로 관찰되었으나, 그 정도는 미약한 것으로 나타났다.

8-2. 성장 저해 정도의 결정

된장풀 잎의 에탄올 추출물, 에탄올 추출물에 대한 노르말 헥산 분획물, 암피실린 및 옥사실린의 성장 저해 정도를 구하기 위해 상기 실시예 3-2의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과는 하기 표 28에 나타내었다.

실험 결과, 된장풀 잎의 노르말 헥산 분획물은 메티실린 내성 황색 포도상 구균 및 메티실린 감수성 황색 포도상 구균 모두에서 항균 활성을 보였으나 대조군인 암피실린에 비하여 항균 효과가 대체적으로 미약한 것으로 관찰되었다.

그리고, 실험한 모든 군에서 된장풀 잎의 노르말 헥산 분획물을 250ug 로딩한 경우에 비하여 500ug 로딩한 경우 균주의 성장이 저해된 지름이 넓게 관찰되어 농도 의존적인 항균 활성을 보였다.

8-3. 분할저해농도지수의 결정

된장풀 잎의 노르말 헥산 분획물과 암피실린 또는 옥사실린과의 병용효과를 보기 위해 상기 실시예 3-3의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과를 하기 표 29 및 표 30에 나타내었다.

실험 결과, 메티실린 내성 황색 포도상 구균에 대한 된장풀 잎의 노르말 헥산 분획물과 암피실린 또는 옥사실린의 분할저해농도지수는 1.0으로 부가(additive) 효과가 있는 것으로 관찰되었다. 그러나, 메티실린 감수성 황색 포도상 구균에 대한 된장풀 잎의 노르말 헥산 분획물과 암피실린 또는 옥사실린의 분할저해농도지수는 0.5 이하로 시너지 효과가 있는 것으로 관찰되었다.

실시예 9 : 지부자의 항균 활성 측정

9-1. 최소 저해 농도의 결정

지부자의 에탄올 추출물, 에탄올 추출물의 노르말 헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 노르말 부탄올 분획물, 물 분획물, 암피실린 및 옥사실린에 대한 최소 저해 농도를 구하기 위해 상기 실시예 3-1의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과는 하기 표 31에 나타내었다.

실험 결과, 지부자의 에탄올 추출물에 대한 노르말 헥산 분획물의 메티실린 감수성 황색포도상구균에 대한 항균 활성은 암피실린이나 옥사실린에 비하여 미약하게 나타났으나, 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균 활성은 암피실린이나 옥사실린에 비하여 우수한 것으로 관찰되었다.

9-2. 성장 저해 정도의 결정

지부자의 에탄올 추출물에 대한 노르말 헥산 분획물, 암피실린 및 옥사실린의 성장 저해 정도를 구하기 위해 상기 실시예 3-2의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과는 하기 표 32에 나타내었다.

실험 결과, 지부자의 노르말 헥산 분획물은 메티실린 내성 황색 포도상 구균 및 메티실린 감수성 황색 포도상 구균 모두에서 항균 활성을 보였으며, 특히 메티실린 내성 황색포도상구균에 대한 항균 활성은 암피실린이나 옥사실린에 비하여 우수한 것으로 관찰되었다.

그리고, 실험한 모든 군에서 지부자의 노르말 헥산 분획물을 250ug 로딩한 경우에 비하여 500ug 로딩한 경우 균주의 성장이 저해된 지름이 넓게 관찰되어 농도 의존적인 항균 활성을 보였다.

9-3. 분할저해농도지수의 결정

지부자의 노르말 헥산 분획물과 암피실린 또는 옥사실린과의 병용효과를 보기 위해 상기 실시예 3-3의 방법으로 실험을 수행하여 얻은 결과를 하기 표 33 및 표 34에 나타내었다.

실험 결과, 지부자와 암피실린 또는 옥사실린의 분할저해농도지수는 메티실린 감수성 황색포도상구균에서 0.5 이하의 값을 보여 시너지 효과가 있는 것으로 관찰되었다. 그리고, 메티실린 내성 황색 포도상 구균에 대한 지부자의 노르말 헥산 분획물과 암피실린의 분할저해농도지수는 군에 따라 다르지만 대체적으로 부가 효과가 있는 것으로 관찰되었으며, 지부자의 노르말 헥산 분획물과 옥사실린의 분할저해농도지수는 0.5 이하의 값을 보여 시너지 효과가 있는 것으로 관찰되었다.

실시예 10 : 급성 경구 독성 시험

본 발명의 식물 추출물이 독성이 없는지를 확인하기 위하여 급성 경구독성 시험을 실시하였다. 실험 동물로서 5 내지 6주령 된 SPF SD계 랫드 20마리를 사용하여 하기와 같은 조건에서 급성 독성 시험을 실시하였다.

온도, 습도조건: 온도 22도 +/- 2도, 상대습도 50 +/- 10%

명암 사이클: 형광등 조명(8시에 점등 후 20시에 소등)

조도: 200 내지 300룩스

자외선 처리된 음용수는 자유섭취 시킴

시험물질을 멸균 증류수에 희석하여 투여시료를 제조하여 대조구로서 멸균 증류수를 사용하여 동량 투입하였다.

투여 당일은 4시간까지 매 시간마다 일반상태를 관찰하고, 투여 다음날부터 14일까지는 매일 1회씩 일반상태의 변화, 중독증상, 운동성, 외관, 자율신경 및 사망동물의 유무를 주의깊게 관찰하고 여러 가지 병리 해부학적인 검증을 거쳐 독성 유무를 판단하였다. 실험 결과, LD₅₀이 3000mg/kg B.W.이었으며, 독성은 없는 것으로 관찰되었다.

Claims

된장풀 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 암피실린 또는 옥사실린을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항균용 약제학적 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 균은 간균, 구균 및 나선균으로 이루어진 군에서 하나 이상 선택한 균인 것을 특징으로 하는 항균용 약제학적 조성물.
제4항에 있어서, 상기 구균은 황색포도상구균, 표피 포도상구균 및 반코마이신 매개 황색포도상구균으로 이루어진 군에서 하나 이상 선택한 구균인 것을 특징으로 하는 항균용 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 펜탄올 및 헥산올로 이루어진 군에서 하나 이상 선택한 용매로 추출한 것을 특징으로 하는 항균용 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 분획물은 노르말 헥산, 에틸아세테이트, 노르말 부탄올 및 물로 이루어진 군에서 하나 이상 선택한 용매로 분획한 것을 특징으로 하는 항균용 약제학적 조성물.
된장풀 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 세정제.
제8항에 있어서, 상기 세정제는 암피실린 또는 옥사실린을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항균 세정제.
제8항에 있어서, 상기 균은 간균, 구균 및 나선균으로 이루어진 군에서 하나 이상 선택한 균인 것을 특징으로 하는 항균 세정제.