KR101132599B1 - 아폽토시스 유도 효과를 갖는 인돌 유도체 - Google Patents

아폽토시스 유도 효과를 갖는 인돌 유도체 Download PDF

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Abstract

본 발명은, 특히 기타 활성 성분에 대한 약물의 내성 및 전이성 암종의 경우, 종양성 질환을 치료하기 위한 약물로서 사용되는 인돌 유도체에 관한 것이다.
종양성 질환, 약물 내성, 전이성 암종, 인돌 유도체

Description

아폽토시스 유도 효과를 갖는 인돌 유도체{Indole derivatives with apoptosis-inducing effect}
본 발명은 우수한 생물학적 효과를 갖고, 관용성 (tolerability) 및 경구 생체이용성이 우수하고, 특히 기타 활성 화합물에 대한 약물 내성 (resistance)이 존재하고 암종이 전이되는 경우 종양 질환을 치료하기 위한 약물로서 사용되는 신규한 인돌 유도체에 관한 것이다.
암 질환 치료가 의약 분야에서 매우 중요하다. 환자에게 적합하고 표적 지향된 치료를 달성하기 위해 효과적인 암 치료법이 전세계적으로 요구되고 있다. 이는 최근 응용 종양학 및 암 치료와 관련된 기초 연구 분야에서 나타나는 다수의 과학적 연구로부터 알 수 있다.
종양 억제제의 효과는 매우 광범위한 메카니즘에 기인하지만, 이중 일부만이 공지되어 있다. 신규 작용 메카니즘을 갖는 것으로 밝혀진 공지된 종양 약물은 특별하지 않다. 이는 또한 본 발명에 따르는 화합물의 경우에도 기대될 것이다. 다수의 종양 약물은 세포 중의 세포 분열 메카니즘을 차단하고, 종양에 영양분 및 산소가 공급되는 것을 억제하고(항혈관형성), 전이를 억제하고, 성장 신호의 수령 및 이후 종양 세포로의 전송을 억제하거나, 종양 세포를 계획된 세포 사멸 (아폽토시스)로 이끄는 것과 같은 메카니즘에 의해 작용한다.
이들은 상이한 세포질내 표적물과의 상호작용을 포함하여 상이한 작용 메카니즘을 갖기 때문에, 임상적으로 관련된 세포증식 억제제가 종종 상승작용성 치료 효과를 달성하기 위해 함께 투여된다.
인돌 유도체는 매우 다양한 방식으로 약물역학적 활성 화합물로서 및 약제 화학에서 합성용 구성 단위로서 사용된다.
문헌[참조: 국제 공개공보 제WO 99/51224 A1호 및 제WO 01/22954 A1호]에는 항종양제 효과를 갖고 2-, 3-, 4- 및 8-퀴놀린 라디칼 또는 2-, 3-, 4-, 5- 및 6-피리딘 라디칼을 포함하는 다수의 그룹에 의해 치환될 수 있는 인돌-3-일 유도체가 기재되어 있다. 2-메틸-8-퀴놀리닐 그룹이 아미드 그룹 상의 치환체인 것으로 실시예 60에 언급되어 있다. 그러나, 생물학적 특성은 전혀 언급되어 있지 않다.
국제 공개공보 제WO 99/55696 A1호에는 포스포디에스테라제 4의 억제제로서 치환된 하이드록시인돌이 기재되어 있다. 그러나, 당해 발명에 따르는 화합물은 항종양제 활성을 갖는다고 기재되어 있지도 않고 이들이 이러한 활성을 가질 수 있다는 것을 제안하고 있지도 않다.
국제 공개공보 제WO 02/08225 A1호에는 고형 종양과 관련한 항종양제 효과를 갖는 2-(1H-인돌-3-일)-2-옥소-아세트아미드 유도체가 기재되어 있다. 그러나, 퀴놀린, 피리도피라진 또는 인다졸릴 라디칼을 함유하는 구체적 실시예가 언급되어 있지 않다.
특허 명세서 제WO 00/67802호에는 강력한 항종양제로서 비교적 장쇄 지방산으로 치환된 인돌-3-글리옥실아미드가 기재되어 있다. 그러나, 퀴놀린, 피리도피라진 또는 인다졸릴 라디칼을 함유하는 구체적 실시예가 언급되어 있지 않다. 이러한 실시예와 관련하여 소정의 생물학적 데이터도 전혀 없다.
간행물[참조: W.-T. Li et al., J. Med. Chem. 2003, 46, 1706 ff.]에는 항종양제 활성을 갖는 경구 활성 화합물로서 N-헤테로사이클릭 인돌릴글리옥실아미드가 기재되어 있다. 그러나, 이들의 작용 메카니즘에 대한 정보는 전혀 제공되어 있지 않다.
국제 특허공보 제WO 03/022280 A2호에는 3-글리옥실아미드인돌 및 항종양 치료용 약물로서의 이들의 용도가 기재되어 있다. 이들의 화학식은 또한 6-퀴놀린 유도체를 포함한다. 또한, 6-퀴놀린 라디칼을 함유하는 2개의 예가 실시예로서 언급되고 생물학적 결과로서 입증되었다. 그러나, 피리도피라진 또는 인다졸릴 라디칼을 함유하는 구체적 실시예에 대한 언급은 없다.
미국 특허원 제03/0181482 A1호에는 신규한 인돌릴글리옥실아미드가 기재되어 있다. 이 경우에, 당해 발명에 따르는 화합물은 세포독성 활성을 갖는 항종양제 및 혈관형성 억제제로서 기재되어 있다. 이외에, 6-퀴놀린 유도체가 실시예(화합물 3: p. 10)로서 제시되고 항증식 데이터[참조: p. 19; 표 1a 및 1b] 및 항혈관형성 특성 (참조: p. 20)으로 입증되었다. 그러나, 피리도피라진 또는 인다졸릴 라디칼을 함유하는 구체적 실시예에 관한 언급은 없었다.
본 출원인은 국제 공개공보 제WO 02/10152 A2호에 종양을 치료하기 위한 인돌 유도체의 제2 그룹을 이미 기술했다. 이 특허 문헌에서, 특히, 활성 화합물인 N-(2-메틸-6-퀴놀릴)-[1-(4-클로로벤질)인돌-3-일]글리옥실아미드를 각종 종양 세포주에서 이의 항증식 효과에 대해 시험했다.
미세관에 결합 (파클리탁셀 및 빈크리스틴)하거나 토포아이소머라제 II를 억제 (독소루비신, 에토포시드 및 미토크산트론)하는 임상적으로 시험된 화합물은 현재 특히, 유방암, 난소암, 위암 및 폐암에 대한 암 치료법, 카포시 육종 및 백혈병에 성공적으로 사용되었다. 그러나, 이들의 용도는 약물 내성의 출현 및 심각한 신경계, 위장관, 심혈관 및 간 부작용에 의해 제한된다.
본 발명의 기본적인 목적은 현재 복합 작용 메카니즘을 포함하고, 특히 활성 화합물 내성이 기타 약물에 대해 존재하고 암종이 전이될 때 다수의 종양을 치료하는데 적합한 이용가능한 세포독성 물질을 제조하는 것이다.
당해 목적은 화학식 I의 인돌 유도체, 이의 토오토머, 디아스테레오머와 에난티오머를 포함하는 이의 입체이성체 및 생리학적으로 허용되는 이의 염에 의해 달성된다.
Figure 112005070896515-pct00001
상기 화학식 I에서,
R은 그룹 N, O 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로 원자를 함유하고 아미드 질소에 직접 결합된 포화, 불포화 또는 방향족인 치환되거나 치환되지 않은 (C2-C14)-헤테로사이클이고, 여기서 헤테로사이클은 바람직하게는 (i) 치환되지 않거나 치환된 5-, 6- 및 7-퀴놀릴, (ii) 치환되지 않거나 치환된 2-, 3-, 6-, 7- 및 8-피리도피라지닐, (iii) 치환되지 않거나 치환된 3-, 4-, 5-, 6- 및 7-인다졸릴, (iv) 치환되지 않거나 치환된 2-, 3-, 4-, 5- 및 6-피리딜, (v) 치환되지 않거나 치환된 3-, 4- 및 5-이속사졸릴 또는 (vi) 치환되지 않거나 치환된 3-, 4- 및 5-이소티아졸릴이고,
R1은 치환되지 않거나 치환된 알킬-아릴이고,
R2는 (i) 수소 또는 (ii) 치환되지 않거나 치환된 (C1-C6)-알킬이고,
R3 내지 R6은 (i) 수소, (ii) 치환되지 않거나 치환된 (C1-C6)-알킬, (iii) 치환되지 않거나 치환된 (C3-C7)-사이클로알킬, (iv) 아미노, 모노-(C1-C4)-알킬아미노, 디-(C1-C4)-알킬아미노, (v) 할로겐, (vi) 하나 이상의 불소원자에 의해 치환된 (C1-C4)-알킬, 바람직하게는 트리플루오로메틸 그룹, (vii) 시아노, 직쇄 또는 측쇄 시아노-(C1-C6)-알킬, (viii) (C1-C6)-알킬카보닐, (ix) 카복실, (C1-C4)-알콕시카보닐, 카복시-(C1-C6)-알킬 또는 (C1-C6)-알콕시카보닐-(C1-C6)-알킬, (x) 하이드록실, (xi) -(C1-C6)-알콕시, (xii) 아릴-(C1-C4)-알콕시, 바람직하게는 벤질옥시 또는 (xiii) (C1-C6)-알콕시카보닐아미노, (C1-C6)-알콕시카보닐아미노-(C1-C6)-알킬이고,
R7은 (C1-C6)-알킬카보닐, 바람직하게는 아세틸 또는 프로피오닐, (C1-C6)-알콕시카보닐, 바람직하게는 메톡시카보닐, 에톡시카보닐 또는 프로폭시카보닐이고,
X 및 Y는 산소 또는 황이다.
R이 치환되지 않거나 치환된 2-, 3-, 4-, 5- 또는 6-피리딜 그룹이고 R1 내지 R6이 상기한 바와 같을 경우, R7은 이러한 경우에 아세틸 라디칼 또는 3급 부틸옥시카보닐 그룹이 아니어야 한다.
본 발명은 또한 하기 화학식 I의 인돌 유도체, 이의 토오토머, 디아스테레오머와 에난티오머를 포함하는 이의 입체이성체 및 생리학적으로 허용되는 이의 염에 관한 것이다:
화학식 I
Figure 112009007693301-pct00019

상기 화학식 I에서,
R이 아미드 질소에 직접 결합된 (i) 치환된 6-퀴놀릴, 치환되지 않거나 치환된 7-퀴놀릴이고, 이때 2-메틸-6-퀴놀릴은 제외되고, X가 황원자이면 R은 또한 치환되지 않은 6-퀴놀릴일 수 있고, 또는 (ii) 치환되지 않거나 치환된 2-, 3-, 6-, 7- 및 8-피리도피라지닐 또는 (iii) 치환되지 않거나 치환된 3-, 4-, 5-, 6- 및 7-인다졸릴이고,
R1이 치환되지 않거나 치환된 알킬-아릴이고,
R2가 수소이고,
R3 내지 R6이 (xiv) 수소, (xv) 치환되지 않거나 치환된 (C1-C6)-알킬, (xvi) 치환되지 않거나 치환된 (C3-C7)-사이클로알킬, (xvii) 아미노, 모노-(C1-C4)-알킬아미노, 디-(C1-C4)-알킬아미노, (xviii) 할로겐, (xix) 하나 이상의 불소원자에 의해 치환된 (C1-C4)-알킬, 바람직하게는 트리플루오로메틸 그룹, (xx) 시아노, 직쇄 또는 측쇄 시아노-(C1-C6)-알킬, (xxi) (C1-C6)-알킬카보닐, (xxii) 카복실, (C1-C4)-알콕시카보닐, 카복시-(C1-C6)-알킬 또는 (C1-C6)-알콕시카보닐-(C1-C6)-알 킬, (xxiii) -(C1-C6)-알콕시, (xxiv) 아릴-(C1-C4)-알콕시, 바람직하게는 벤질옥시 또는 (xxv) (C1-C6)-알콕시카보닐아미노, (C1-C6)-알콕시카보닐아미노-(C1-C6)-알킬이고,
R7이 수소이고,
X 및 Y가 산소 또는 황이다.
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본 발명은 국제 공개공보 제WO 02/10152호에 기재된 발명의 추가의 진전이다. 2-메틸-6-퀴놀릴 그룹을 치환되지 않거나 치환된 2-, 3-, 6-, 7- 및 8-피리도피라지닐 또는 치환되지 않거나 치환된 3-, 4-, 5-, 6- 및 7-인다졸릴로 대체시킴으로써 수득된 인돌 유도체가 다수의 종양 세포주에 대해 우수한 항증식 효과를 나타낸다는 것이 관찰되었다.
본 발명에 따르는 화합물이 매우 다양한 상이한 메카니즘에 기인할 수 있는 강력한 세포독성 효과를 발휘한다는 것이 또한 관찰되었다. 본 발명에서 입증된, 본 발명에 따르는 화합물의 하나의 메카니즘은 튜불린 중합을 억제하고 토포아이소머라제 II를 억제함에 기초한다. 이는 G2M 단계에서 종양형성 세포를 저지한다. 이외에, 본 발명에 따르는 화합물은 아폽토시스를 유도한다.
본 발명에 따르는 화합물이 물에 대한 우수한 용해도를 갖고 결과적으로 경구 생체이용성이 우수하다는 것이 또한 관찰되었다.
또한, 아세틸 라디칼을 R7 라디칼로서 도입하면 생체내 활성이 우수한 동시에 관용성이 우수한 본 발명에 따르는 화합물을 유도한다는 것이 입증되었다.
본 발명에 기재된 물질 부류는, 통상의 세포증식 억제제를 사용하여 달성할 수 있는 것보다, 더 저급이고 보다 장기간 지속되며, 더 우수한 관용성을 가진 항종양 약물을 수득할 가능성을 개방하여야 한다. 특히, 다수의 항종양제의 경우에 발생하는 것으로 공지된 불리한 내성 발달을 회피할 수 있어야 한다. 본 발명에 따르는 인돌 유도체를 사용하여 달성되는 효과 증가는 약물 사용을 더욱 효율적이도록 해야 한다. 이외에, 치료법에 내성인 경우에 치료를 연장시킬 수 있어야 한다.
바람직한 양태에서, 화학식 I의 인돌 유도체에서 R1은 4-클로로벤질이고, R2 내지 R6은 수소이고, R은 헤테로사이클이고, R7은 알킬카보닐 또는 알콕시카보닐이다.
또하나의 바람직한 양태에서, 화학식 I의 인돌 유도체에서 R은 치환되지 않은 5-퀴놀릴, 치환되지 않은 6-퀴놀릴 또는 치환되지 않은 7-퀴놀릴이고, R7은 아세틸 또는 프로피오닐이다.
또하나의 바람직한 양태에서, 화학식 I의 인돌 유도체에서 R은 치환되지 않은 5-퀴놀릴, 치환되지 않은 6-퀴놀릴 또는 치환되지 않은 7-퀴놀릴이고, R7은 메 톡시카보닐, 에톡시카보닐 또는 프로피온옥시카보닐이다.
상세한 설명 및 청구범위에 사용된 일부 용어는 이하 정의된다.
"헤테로사이클"과 관련하여, 당해 용어는 상기 명백하게 명시되지 않는 한, 피롤, 푸란, 티오펜, 피라졸, 티아졸, 인돌, 옥사졸, 이미다졸, 이소티아졸, 이속사졸, 1,2,3-트리아졸, 1,2,4-트리아졸, 1,2,4-옥사디아졸, 1,3,4-옥사디아졸, 1,2,5-티아디아졸, 1,3,4-티아디아졸, 테트라졸, 피리딘, 피리미딘, 피리다진, 피라진, 벤조푸란, 인다졸, 카바졸, 벤족사졸, 벤즈이미다졸, 벤조티아졸, 벤조트리아졸, 퀴놀린, 신놀린, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 프탈라진, 피리도피라진, 1,2,3-트리아진, 1,2,4-트리아진, 1,3,5-트리아진, 푸린, 프테리딘, 아크리딘 및 페난트리딘을 의미하는 것으로 이해된다.
본 발명의 의미내에서, "알킬"이란 표현은 직쇄 또는 측쇄일 수 있는 포화되거나 포화되지 않은 비환식 탄화수소를 포함한다. "알킬"과 관련하여, 용어 "치환된"은 본 발명의 범위내에서 상기 명백하게 정의되지 않는 한, 수소 라디칼을 F, Cl, Br, I, CN, NH2, NH-알킬, NH-사이클로알킬, OH 또는 O-알킬로 대체시키는 것으로 이해되고, 여기서 다치환된 라디칼은 상이한 원자에서 또는 동일한 원자에서 한번 이상, 예를 들어, 2회 또는 3회, 예를 들어, -CF3 및 -CH2CF3의 경우에서 처럼 동일한 C 원자에서 또는 -CH(OH)-CH2-CH2-CHCl2의 경우에서 처럼 상이한 위치에서 3회 치환된 것들을 의미하는 것으로 이해된다. 다치환은 동일한 치환체 또는 상이한 치환체를 사용하여 수행될 수 있다.
표현 "알킬-아릴"은 (C1-C6)-알킬-(C6-C14)-아릴, 바람직하게는 (C1-C6)-알킬-C6-아릴을 의미한다.
"알킬-아릴" 및 "사이클로알킬"과 관련하여, "1회 또는 1회 이상 치환된"은 본 발명의 의미 내에서, 상기와 같이 명확하게 명시되지 않는 한, 환 시스템 중의 하나 이상의 수소원자가 하나의 원자 또는, 경우에 따라, 상이한 원자에서 (치환체가 경우에 따라 이의 일부로서 치환될 수 있다), F, Cl, Br, I, CN, NH2, NH-알킬, OH, O-알킬, CF3, 알킬, (C6-C10)-아릴, (C6-C10)-아릴-(C1-C6)-알킬 및/또는 헤테로사이클릴로 단일 또는 수회, 예를 들어, 2회, 3회 또는 4회 치환되는 것으로 이해된다. 이와 관련하여, 다중 치환은 동일한 치환체 또는 상이한 치환체를 사용하여 수행한다.
"헤테로사이클"과 관련하여, "1회 또는 1회 이상 치환된"은 본 발명의 의미 내에서, 상기와 같이 명확하게 명시되지 않는 한, 환 시스템 중의 하나 이상의 수소원자가 하나의 원자 또는, 경우에 따라, 상이한 원자에서 (치환체가 경우에 따라 이의 일부로서 치환될 수 있다), F, Cl, Br, I, 니트로, 아미노, C1-C6-알킬, 바람직하게는 메틸, 모노-(C1-C6)-알킬아미노, 디-(C1-C6)-알킬아미노, 하이드록실, C1-C6-알콕시, 벤질옥시, 카복실, (C1-C6)-알콕시카보닐, (C1-C6)-알콕시카보닐아미노, 또는 불소로 1회 이상 치환된 (C1-C6)-알킬, 바람직하게는 트리플루오로메틸, (C1-C6)-아릴 및/또는 (C6-C10)-아릴-(C1-C6)-알킬로 1회 또는 수회, 예를 들어, 2회, 3회 또는 4회 치환되는 것으로 이해된다. 이와 관련하여, 다중 치환은 동일한 치환체 또는 상이한 치환체를 사용하여 수행한다.
본 발명에 따르는 화학식 I의 화합물이 하나 이상의 비대칭 중심을 포함하는 한, 이들은 라세미체 형태, 순수한 에난티오머 및/또는 디아스테레오머 형태 또는 이들 에난티오머 및/또는 디아스테레오머의 혼합물 형태로 존재할 수 있다. 입체이성체는 임의 비율의 혼합물로 존재할 수 있다. 이것이 가능한 한, 본 발명에 따르는 화합물은 토오토머 형태로 존재할 수 있다.
따라서, 공지된 방법을 그대로 사용하여, 예를 들어, 하나 이상의 키랄성 중심을 포함하고 라세미체로 생성되는 본 발명에 따르는 화학식 I의 화합물을 이들의 광학 이성체, 즉 에난티오머 또는 디아스테레오머로 분리할 수 있다. 분리는 키랄 상에서 컬럼 분리에 의해 또는 광학 활성 용매로부터 또는 광학 활성 산 또는 염기를 사용하여 재결정화로 또는 광학 활성 시약, 예를 들어, 광학 활성 알콜로 유도체화한 후 잔사를 절단시킴으로써 수행될 수 있다.
이들이 충분히 산성 그룹, 예를 들어, 카복실 그룹을 함유하면, 본 발명에 따르는 화학식 I의 화합물은 무기 염기 및/또는 유기 염기를 사용하여 생리학적으로 허용되는 이의 염으로 전환시킬 수 있다. 적합한 무기 염기의 예에는 수산화나트륨, 수산화칼륨 및 수산화칼슘이 포함되고, 적합한 유기 염기의 예에는 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 사이클로헥실아민, 디벤질에틸렌디아민 및 라이신이 포함된다. 이와 관련하여, 형성되는 본 발명에 따르는 화합물의 염의 화학량론은 하나의 완전체 또는 불완전한 다수체일 수 있다.
이들이 충분히 염기성 그룹, 예를 들어, 2급 또는 3급 아민을 포함하면, 본 발명에 따르는 화학식 I의 화합물은 무기산 또는 유기산을 사용하여 염으로 전환시 킬 수 있다. 본 발명에 따르는 화학식 I의 약제학적으로 허용되는 염은 바람직하게는 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 메탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 카본산, 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 옥살산, 말론산, 말레산, 석신산, 타르타르산, 피루브산, 말산, 엠본산, 만델산, 푸마르산, 락트산, 시트르산, 글루탐산 또는 아스파트산을 사용하여 형성된다. 형성되는 염은 특히, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 설페이트, 포스페이트, 메탄설포네이트, 설포아세트산, 토실레이트, 카보네이트, 탄산수소, 포르메이트, 아세테이트, 트리플레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 말레에이트, 석시네이트, 타르트레이트, 말레이트, 엠보네이트, 만델레이트, 푸마레이트, 락테이트, 시트레이트 및 글루타미네이트이다. 이와 관련하여, 형성되는 본 발명에 따르는 화합물의 염의 화학량론은 하나의 완전체 또는 불완전한 다수체일 수 있다.
예를 들어, 용매 또는 수용액으로부터의 결정화에 의해 수득될 수 있는 본 발명에 따르는 화학식 I의 화합물의 용매화물, 특히 수화물이 또한 바람직하다. 이와 관련하여, 1개, 2개, 3개 또는 임의 수의 용매화물 또는 물 분자를 본 발명에 따르는 화합물과 혼합하여 용매화물 및 수화물을 형성할 수 있다.
화학 물질은 다정형 형태 또는 변형물로 칭명되는 정도의 상이한 형태로 존재하는 고체를 형성하는 것으로 공지되었다. 다정형 물질의 상이한 변형물은 이들의 물리적 특성이 크게 상이할 수 있다. 본 발명에 따르는 화학식 I의 화합물은 상이한 다정형 형태로 존재할 수 있고, 특정 변형물은 준안정화될 수 있다.
화학식 I의 화합물 및 이의 염은 모두 생물학적으로 활성이다. 화학식 I의 화합물은 유리 형태로 또는 생리학적으로 허용되는 산 또는 염기와의 염으로서 투여될 수 있다.
화학식 I의 화합물은 경구, 직장, 구강 경로(예: 설하), 비경구(예: 피하, 근육내, 피내 또는 정맥내), 국소 또는 경피 투여될 수 있다.
본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 I의 화합물 또는 생리학적으로 허용되는 무기산 또는 유기산과의 염 및, 경우에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 물질 및/또는 희석제 또는 보조 물질을 포함하는 약물에 관한 것이다.
이들 약물은 종양 질환의 치료, 특히 기타 활성 화합물에 대한 약물 내성을 지닌 종양 질환 및/또는 전이성 암종을 포함하는 종양 질환과 관련된 치료용으로 사용된다.
적합한 투여 제형의 예는 정제, 당의정, 캡슐제, 주입 또는 앰풀용 용액제, 좌제, 플라스터제, 흡입용으로 사용될 수 있는 분말 제제, 현탁제, 크림 및 연고이다.
본 발명에 따르는 화합물은 또한 미립자, 예를 들어, 나노입자 조성물에 분산될 수도 있다.
상세하게, 치료학적으로 유용하다고 밝혀진 특성은 다음과 같은 이점에 관한 것이다:
? 본 발명에 따르는 화합물은 강력한 항증식성을 특징으로 하고,
? 본 발명에 따르는 화합물은 튜불린 중합을 억제하고,
? 본 발명에 따르는 화합물은 토포아이소머라제 II를 억제하고,
? 본 발명에 따르는 화합물은 G2/M 단계에서 세포 분할을 저지하고,
? 본 발명에 따르는 화합물은 아폽토시스를 유도하고,
? 본 발명에 따르는 화합물은 생체내에서의 강력한 항종양제 활성과 또한 우수한 관용성을 특징으로 하고,
? 본 발명에 따르는 화합물은, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 독소루비신 또는 에토포시드와 대조적으로, mdr-내성 세포주 상에서 시험관내 활성이다.
다음과 같은 선택안에 포함되는 본 발명에 따르는 화학식 I의 화합물이 가장 바람직하다:
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소-N-피리도[2,3-b]피라진-7-일아세트아미드(화합물 1),
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-N-(1H-인다졸-5-일)-2-옥소아세트아미드(화합물 4),
N-{2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세틸}-N-퀴놀린-6-일아세트아미드(화합물 2),
메틸 {2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세틸}퀴놀린-6-일카바메이트(화합물 3),
에틸 {2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세틸}퀴놀린-6-일카바메이트(화합물 5),
프로필 {2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세틸}퀴놀린-6-일카바메이트(화합물 6),
N-{2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세틸}-N-퀴놀린-6-일프로피온아미드(화합물 7),
에틸 {2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세틸}피리딘-4-일카바메이트(화합물 8) 또는
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-N-퀴놀린-6-일-2-티옥소아세트아미드(화합물 11).
화합물(1), (4) 및 (11)은 라디칼 R7이 수소인 화합물이다. 화합물(2), (3), (5) 및 (6) 내지 (8)은 그룹 R7로서 알콕시카보닐 그룹의 알킬카보닐 그룹을 함유한다.
다음 화합물(9), (10), (12), (13), (14) 및 (15)는 또한 비교용으로 연구된 화합물들이다. 화합물 (9), (10), (14) 및 (15)는 종래 기술 분야로부터 공지되었다. 화합물(9)는 국제 공개공보 제WO 02/10152호에 기재되어 있고, 화합물(10)은 국제 공개공보 제WO 03/022280호에 기재되어 있으며, 화합물(13)은 국제 공개공보 제WO 02/08225 A1호의 청구범위에 포함되고, 화합물(12), (14) 및 (15)는 국제 공개공보 제WO 99/51224 A1호 및 제WO 01/22954호의 청구범위에 포함된다.
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-N-(2-메틸퀴놀린-6-일)-2-옥소아세트아미드(화합물 9),
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소-N-퀴놀린-6-일아세트아미드(화합물 10),
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소-N-퀴놀린-8-일아세트아미드(화합물 12),
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-N-이소퀴놀린-5-일-2-옥소아세트아미드(화합물 13),
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소-N-피리딘-4-일아세트아미드(화합물 14),
2-[1-(4-플루오로벤질)-1H-인돌-3-일]-N-(2-메틸퀴놀린-8-일)-2-옥소아세트아미드(화합물 15).
반응식의 화학식 Ia 및 Ib의 화합물은 다음 반응식 1에 따라서 수득할 수 있다:
Figure 112005070896515-pct00003
X가 S인 화학식 Ic의 화합물은 반응식 2에 따라서 제조할 수 있다:
Figure 112005070896515-pct00004
Y가 S인 화학식 Ic의 화합물은 문헌[참조: W.-D. Malmberg et al. Liebigs Ann. Chem. 10, 1983; 1649-1711]으로부터 공지된 방법을 사용하여 수득할 수 있다.
화학식 II, III 및 IV의 출발 화합물은 시판되거나 그 자체로 공지된 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 화학식 II, III 및 IV의 출발 화합물은 본 발명에 따르는 화학식 I의 인돌 유도체를 제조하기 위한 유용한 중간체이다.
출발 화합물 및 표적 화합물을 제조하기 위해, 예를 들어, 전문이 본원 상세한 설명에 참조로 인용된 다음과 같은 유기 합성에 대한 표준 문헌을 참조할 수 있다:
? Houben-Weyl, Volume E 7a (Part 1) pp. 290-492, pp. 571-740
? Houben-Weyl, Volume E 7a (Part 2) pp. 119-156, pp. 205-686, pp. 157- 204
? The monograph "Heterocyclic Compounds" (Elderfield),
Volume 1, pp. 119-207, pp. 397-616
Volume 3, pp. 1-274
Volume 6, pp. 101-135, pp. 234-323
? The monograph "Comprehensive Organic Chemistry"
(S. D. Barton, W. D. Ollis)
Volume 4, pp. 155-204, pp. 205-232, pp. 493-564
숙련가들은 그들의 전문 지식으로 인해, 용매 및 보조제 및, 경우에 따라, 사용되어야 하는 반응 파라메터, 예를 들어, 반응 온도 및 반응 지속시간에 대해 잘 알고 있다.
이들 각각의 화학적 명명으로부터 자명한, 아래의 검사에 포함되는 다음 화합물은 합성 반응식 1 및 2에 기초하여, 단계 1, 2 및 3에 대한 일반적 지침에 따라 합성된다. 본 발명에 따르는 화합물은 이들의 융점 및/또는 1H NMR 분광학 및/또는 질량 분광학에 의해 분석적으로 특성이 규명된다.
사용되는 화학약품 및 용매는 통상의 공급처(아크로스(Acros), 아보카도(Avocado), 알드리히(Aldrich), 플루카(Fluka), 랑카스터(Lancaster), 메이브릿지(Maybridge), 머크(Merck), 시그마(Sigma), 티씨아이(TCI) 등)로부터 시판되거나 합성된다.
본 발명은 하기 실시예의 도움으로 보다 상세히 설명되지만, 이에 제한되지 않는다.
실시예
실시예 1(반응식 1의 1단계에 따르는 반응)
1-(4-클로로벤질)인돌의 제조
DMSO 25ml 중의 인돌 5.86g(0.05mol)의 용액을 디메틸 설폭사이드 50ml 중의 수소화나트륨 1.32g(0.055mol, 광유 현탁액)의 혼합물에 가한다. 생성되는 혼합물을 60℃에서 1.3시간 동안 가열한 후, 냉각시키고, 4-클로로벤질 클로라이드 17.7g(0.11mol)을 적가한다. 용액을 60℃로 가온시켜 밤새 정치시킨 다음, 교반하면서 물 200ml에 붓는다. 이 혼합물을 총 75ml의 CH2Cl2를 사용하여 수회 추출한 후, 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 여과시키고, 여액을 진공하에 증발시킨다.
수율: 11.5g(이론치의 95%)
실시예 2(반응식 1의 2단계에 따르는 반응):
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소-N-피리도[2,3-b]피라진-7-일아세트아미드(화합물 1)
에테르 200ml 중의 1-(4-클로로벤질)-인돌 10.2g(10.7mmol)의 용액을 0℃에서 질소하에 에테르 50ml 중의 옥살릴 클로라이드 1.12ml의 용액에 적가한다. 혼합물을 2시간 동안 환류 가열시킨 다음, 용매를 증발시킨다. 이어서, DMF 30ml를 잔사에 가한 후, 탄산칼륨 1.93g(13.9mmol)을 가하고, 현탁액을 0℃로 냉각시킨 다음, DMF 10ml 중의 아미노 성분 1.57g(10.7mmol)의 용액을 적가한다. 반응 혼합물을 정치시켜 실온에서 밤새 교반시킨다. 빙수 속에서 최종적으로 교반하고, 생성되는 침전물을 흡인 여과시킨다. 수득되는 조 생성물을 n-헵탄/에틸 아세테이트= 4:1을 사용하여 실리카 겔 100g 상에서 크로마토그래피한다.
수율: 3.23g(68.0%)
융점: 250℃
1H-NMR (DMSO-D6) δ= 11.56 (s, 1H), 9.53 (d, 1H), 9.12 (s, 1H), 9.09 (d, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.32 (d, 1H), 7.6 (d, 1H), 7.40 (d, 2H), 7.35 (m, 3H), 7.32 (m, 2H), 5.64 (s, 2H) ppm
실시예 3(반응식 1의 3단계(a)에 따르는 반응)
N-{2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세틸}-N-콜린-6-일아세트아미드(2)
0.833g(6.82mmol)의 DMAP, 1.38g(13.6mmol)의 트리에틸아민 및 13.9g(136mmol)의 아세트산 무수물을 질소하에 DMF 60ml 중의 2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소-N-퀴놀린-6-일아세트아미드 6.0g(13.6mmol)의 교반 용액에 가한다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반시킨 후에, 에틸 아세테이트 200ml에 붓는다. 물 300ml를 가한 후, 혼합물을 분별 깔때기에서 진탕시킨 다음, 2상을 분리한다. 20분 후에 침전되기 시작한다. 담황색 결정을 여과시키고 60℃에서 진공하에 건조시킨다.
수율: 4.04g(61.5%)
융점: 122.9℃
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ= 9.02 (d, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.21 (d, 1H), 8.17 (d, 1H), 8.10 (m, 1H), 7.88 (m, 1H), 7.65 (m, 1H), 7.58 (m, 1H), 7.44 (d, 2H), 7.33 (d, 2H), 7.28 (m, 2H), 5.60 (s, 2H), 2.15 (s, 3H).
MS (ESI) m/z 482.1 (MH+), (이론치: 481.94)
실시예 4(반응식 1의 3단계(a)에 따르는 반응):
메틸 {2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세틸}퀴놀린-6-일카바메이트(3)
930.2mg(27.3mmol)의 NaH(광유 중의 60% 농도 분산액)를 질소하에 무수 THF 500ml 중의 10.0g(22.7mmol)의 2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소-N-퀴놀린-6-일아세트아미드의 냉각되고 교반된 용액에 가한다. 당해 용액을 황색 침전물이 분리될 때까지 0℃에서 교반한 후, 추가로 15분 동안 교반시킨다. 이후, 2.58g(27.3mmol)의 메틸 클로로포르메이트를 +5℃ 이하의 온도에서 적가한다. 반응을 박층 크로마토그래피(용출제: n-헵탄/에틸 아세테이트 1/1 RF= 0.11)로 모니터한다. 반응 혼합물을 물에 붓고, 생성되는 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출시키고, 유기 상을 염화나트륨 포화 용액으로 세척하고 무수 MgSO4로 건조시킨다. 용매를 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 컬럼 크로마토그래피(n-헵탄/아세톤 2/1)로 정제시켜 화합물(3)을 수득한다. 박층 크로마토그래피로 화합물(3)이 약간의 불순물을 여전히 함유함을 나타내고, 이러한 불순물은 조 화합물(3)을 아세톤과 1시간 동안 교반시킴으로써 제거될 수 있다. 여과하여 화합물(3)을 담황색 결정으로서 수득한다.
수율: 3.0g(26.5%)
융점: 178.5℃
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ= 9.02 (d, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.47 (d, 1H), 8.17 (m, 3H), 7.84 (m, 1H), 7.63 (m, 2H), 7.44 (d, 2H), 7.34 (m, 4H), 5.60 (s, 2H), 3.65 (s, 3H).
MS (ESI) m/z 498.2 (MH+), (이론치: 497.94)
실시예 5(반응식 2의 3단계(b)에 따르는 반응):
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-N-퀴놀린-6-일-2-티옥소아세트아미드(11)의 제조
3.68g(9.1mmol)의 2,4-비스(4-메톡시페닐)-1,3-디티아-2,4-디포스페탄-2,4-디설파이드를 질소하에 톨루엔 200ml 중의 4.00g(9.1mmol)의 2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소-N-퀴놀린-6-일아세트아미드의 현탁액에 가한 후, 혼합물을 75℃에서 3시간 동안 가열시킨다. 형성된 잔사를 반응 용액으로부터 뜨겁게 여과시킨 후, 메틸렌 클로라이드 100ml로 세척시킨다. 여액을 진공하에 농축시키고, 잔사를 플래쉬 실리카 겔(용출제: 메틸렌 클로라이드/메탄올 99:1) 상에서 크로마토그래피한다. 용매를 한번 더 제거한 후, 생성물 분획을 플래쉬 실리카 겔(용출제: n-헵탄/에틸 아세테이트 1:1) 상에서 여과시킨다.
수율: 0.46g(이론치의 11%)
ESI-MS: m/e = 456.1 (MH+), (이론치: 455.97)
1H-NMR (DMSO-D6) δ= 10.89 (s, 1H), 8.8 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.0 (d, 1H), 7.93 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.4 (m, 3H), 7.3 (m, 3H), 5.6 (s, 2H) ppm.
다음과 같은 화학식 I의 화합물은 반응식 1의 합성 경로와 유사하게 실시예 2 및 3에 따라서 간략화되었다.
실시예 6:
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-N-(1H-인다졸-5-일)-2-옥소아세트아미드(화합물 4)
융점: 203℃
1H-NMR (DMSO-D6) δ= 13.02 (s, 1H), 10.7 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.6 (d, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.40 (d, 2H), 7.28-7.35 (m, 4H), 5.63 (s, 2H) ppm
실시예 7:
에틸 {2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세틸}-퀴놀린-6-일카바메이트(화합물 5)
융점: 199℃
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ= 9.02 (m, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.48 (d, 1H), 8.15 (m, 3H), 7.83 (m, 1H), 7.63 (m, sH), 7.43 (d, 2H), 7.32 (m, 4H), 5.60 (s, 2H), 4.15 (q, 2H), 0.95 (t, 3H).
MS (ESI) m/z 514.2, 512.1 (MH+), (이론치: 511.97)
실시예 8:
프로필 {2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세틸}퀴놀린-6-일카바메이트(화합물 6)
융점: 164℃
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ= 9.02 (m, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.48 (d, 1H), 8.17 (m, 3H), 7.84 (m, 1H), 7.63 (m, 2H), 7.43 (d, 2H), 7.33 (m, 4H), 5.61 (s, 2H), 4.03 (t, 2H), 1.32 (m, 2H), 0.56 (t, 3H).
실시예 9:
N-{2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세틸}-N-퀴놀린-6-일프로피온아미드(화합물 7)
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ= 9.03 (m, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.45 (d, 1H), 8.23 (d, 2H), 8.18 (d, 1H), 8.13 (m, 1H), 7.88 (m, 1H), 7.65 (m, 1H), 7.58 (m, 1H), 7.45, (d, 2H), 7.30 (m, 4H), 5.59 (s, 2H), 2.61 (q, 3H), 0.88 (t, 3H).
실시예 10:
에틸 {2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세틸}-피리딘-4-일카바메이트(화합물 8)
융점: 62℃
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ= 8.74 (m, 2H), 8.52 (s, 1H), 8.12 (m, 1H), 7.60 (m, 1H), 7.55 (m, 2H), 7.40 (m, 2H), 7.30 (m, 4H), 5.57 (s, 2H), 4.10 (q, 2H), 0.95 (t, 3H).
실시예 11(비교용 물질):
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-N-(2-메틸퀴놀린-6-일)-2-옥소아세트아미드(화합물 9)
수율: 14.8g(이론치의 77.3%)
융점: 182-185℃
1H-NMR (CDCl3) δ= 9.58 (s, 1H), 9.12 (s, 1H), 8.5 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.05 (t, 2H), 7.78 (d, 1H), 7.4 (dd, 1H), 7.32 (m, 4H), 7.26 (s, 1H), 7.15 (d, 1H), 5.38 (s, 2H), 2.73 (s, 3H) ppm
실시예 12(비교용 물질):
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소-N-퀴놀린-6-일아세트아미드(화합물 10)
융점: 200℃
1H-NMR (DMSO-D6) δ= 11.5 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.32 (d, 2H), 8.12 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.53 (dd, 1H), 7.42 (d, 2H), 7.30-7.38 (m, 4H), 5.63 (s, 2H) ppm
실시예 13(비교용 물질):
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소-N-퀴놀린-8-일아세트아미드(화합물 12)
융점: 178℃
실시예 14(비교용 물질):
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-N-이소퀴놀린-5-일-2-옥소아세트아미드(화합물 13)
융점: 239 내지 241℃
실시예 15(비교용 물질):
2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소-N-피리딘-4-일아세트아미드(화합물 14)
융점: 264℃
실시예 16(비교용 물질):
2-[1-(4-플루오로벤질)-1H-인돌-3-일]-N-(2-메틸퀴놀린-8-일)-2-옥소아세트아미드(화합물 15)
융점: 200 내지 202℃
본 발명에 따르는 화합물의 생물학적 효과
선택된 종양 모델에 대한 시험관내 및 생체내 시험을 수행하여 다음과 같은 약물학적 활성의 존재를 보여준다.
실시예 17: 각종 종양 세포주에 대한 항증식 효과
물질 1, 2, 4, 9, 11, 12, 13 및 15의 항증식 활성을, 확립된 종양 세포주에 대해 수행된 증식 시험에서 조사했다(참조: D.A. Scuderio et al. Cancer Res. 1988, 48, 4827-4833). 사용된 시험은 세포의 데하이드로게나제 활성을 측정하고 간접적으로 세포 생육성과 세포수를 측정할 수 있도록 한다. 사용되는 세포주는 사람 자궁경부 암종 세포주 KB/HeLa (ATCC CCL17), 난소 샘암종 세포주 SKOV-3 (ATCC HTB77), 사람 아교모세포종 세포주 SF-268 (NCI 503138) 및 폐 암종 세포주 NCI-H460 (NCI 503473)이다.
Figure 112005070896515-pct00005
결과는 실시예 1, 2, 4 및 11이 선택된 종양 세포주의 증식에 대한 매우 강력한 억제제임을 보여준다.
실시예 18: MDR 종양 세포주에서의 항증식 효과
추가의 특성 규명을 위해, 물질 1, 2, 4 및 11을 비내성 야생형 세포주에서의 효과와 비교하여 다중약물 내성 세포주에 대한 이들의 효과에 대해 조사했다.
조사된 세포주는 쥐 세포주 L1210, 급성 골수 백혈병 세포주 LT12 및 내성 주 L1210/mdr 및 LT12/mdr이다. 쥐 세포 주 P388(메틸콜란트렌-유도된 림프형 종양) 및 독소루비신 내성 P388도 또한 시험 시스템으로서 포함되었다.
결과는 이하 표 2에 요약된다:
Figure 112005070896515-pct00006
물질 1, 2, 4 및 11은 시험된 모든 세포주에 대해 매우 강력한 억제 효과를 나타내지만, 튜불린 억제 효과를 갖는 전형적인 물질, 예를 들어, 파클릭탁셀 또는 빈크리스틴, 및 토포아이소머라제 II 억제제(독소루비신, 미토크산트론 및 에토포시드)는 MDR1 내성 세포주에서 적어도 크게 감소된 효과를 갖는다는 것을 알 수 있다.
실시예 19: 튜불린 중합 억제
물질 1, 4, 9, 11, 12, 13 및 15를 시험관내 시험에서 이들의 소 튜불린 중합 억제능에 대해 시험했다(참조: D. M. Bollag et al. Cancer Res. 1995, 55, 2325-2333). 당해 시험은 중합 및 탈중합 주기로 정제되고, GTP를 가하고 이를 가열함으로써 중합시킬 수 있는 튜불린을 사용한다. 표 3은 30% 관련 단백질(MPA)을 함유하는 튜불린의 중합을 억제할 수 있는 EC50 값을 제공한다.
Figure 112005070896515-pct00007
결과(표 3 참조)는 물질 1, 4, 9 및 11이 튜불린 중합에 대한 매우 강력한 억제 효과를 갖는 반면, 화합물 12, 13 및 15가 어떤 효과도 발휘하지 않는다는 것을 보여준다.
실시예 20: 토포아이소머라제 II의 억제
물질 1의 토포아이소머라제 II 억제능을 2개의 상이한 시험관내 시험으로 시험했다.
? 토포아이소머라제 II 활성을 시험하기 위한 kDNA 검정:
문헌[참조: P. Arimondo, Anti-Cancer Drug Design 2000, 15(6), 413-421]에 기재되어 있는 이러한 분석에서, kDNA는 시험 화합물의 부재하 또는 존재하에 사람 DNA 토포아이소머라제 II로 처리하였다. 이러한 분석에서, 본 발명에 따르는 화합물 1을 3개의 상이한 농도(100, 31.6 및 10μM)에서 시험했다. 양성 대조군 및 참조 화합물인 m-암사크린(m-amsa), 파클리탁셀(탁솔) 및 빈크리스틴 각각 100μM 농도를 비교용으로 사용했다.
분석 수행:
10×분석 완충제 2㎕, kDNA 1㎕(200ng), 0.5㎕의 사람 토포아이소머라제 II (1 단위) 및 15.5㎕의 H2O를 피펫을 사용하여, 최초 도입된 시험 물질(100% DMSO 중에서 20배 농축됨) 1㎕에 가하고 시약을 혼합시켰다.
반응 분석 샘플을 37℃로 예열된 가열 블록에 위치시키고 37℃에서 10분 동안 항온배양시켰다. 5×스톱 완충제 4㎕를 가한 후 항온배양을 정지시킨 다음, 물질을 CIA로 추출시켰다. 그 후, 상청액 20㎕를 브롬화에티듐 0.25㎍/ml를 함유하는 1% 아가로스 겔 상에 가하고, 100V에서 1시간 동안 분리시켰다. 최종적으로, 겔을 자외선 여기하에 사진을 찍었다(도 1 참조). kDNA의 탈연결반응 (decatenation)의 억제를 겔프로 어날라이져 소프트웨어(GelProR Analyzer Software)를 사용하여 정량화하였다(도 2 참조).
?토포아이소머라제 II 활성을 시험하기 위한 pRYG 이완 분석
이러한 이완 분석은 본 발명에 따르는 화합물의 토포아이소머라제 II에 대한 억제성을 추가로 입증하는데 사용되었다. 이 분석에서, 본 발명에 따르는 화합물 1은 3개의 상이한 농도(100, 31.6 및 10μM)에서 시험했다. 참조 화합물인 m-암사크린, 파클리탁셀(탁솔) 및 빈크리스틴을 비교용으로 316μM 및 100μM의 농도에서 사용하였다.
분석은 다음과 같이 수행한다:
10×분석 완충제 2㎕, pRYG DNA 0.5㎕(125ng), 0.5㎕의 사람 토포아이소머라제 II (1 단위) 및 16㎕의 H2O를 피펫을 사용하여, 최초 도입된 시험 물질(100% DMSO 중에서 20배 농축됨) 1㎕에 가하고 시약을 혼합시켰다. 반응 분석 샘플을 37℃로 예열된 가열 블록에 위치시키고 37℃에서 30분 동안 항온배양시켰다. 5×스톱 완충제 4㎕를 가한 후 항온배양을 정지시킨다. 그 후, 분석 샘플 10㎕를 브롬화에티듐 0.25㎍/ml를 함유하는 1.2% 아가로스 겔 상에 가하고, 100V에서 2.5시간 동안 분리시켰다. 최종적으로, 겔을 자외선 여기하에 사진을 찍었다(도 3 참조). pRYG 이완의 억제를 겔프로 어날라이져 소프트웨어(GelProR Analyzer Software)를 사용하여 정량화하였다(도 4 참조).
종합적으로, 본 발명에 따르는 화합물 1은 두 분석에서 토포아이소머라제 II를 상당히 억제한다는 것을 알 수 있다. 화합물 1로 수득된 결과는 토포아이소머라제 II 억제제인 m-암사크린으로 수득된 억제 값에 필적할 만한다. 기대한 바와 같이, 파클릭탁셀과 빈크리스틴은 두 분석에서 어떠한 억제 효과도 갖지 않는 것으로 관찰되었다.
실시예 21: 세포 주기 분석
세포 주기는 한 세포 세대로부터 다음 세대까지의 세포 진행을 포함한다.
휴지기 (G0) 및 예비합성기 (G1) 동안, 세포는 이배수 (diploid) 염색체 세트 (2c)를 포함한다. 합성기 (S)에서, DNA의 양은 복제에 의해 증가된다. S 단계는, 세포가 염색체의 복제된 상보체 (4c)와 2배량의 DNA를 포함하는 예비유사분열 단계 (G2M)에 도달하면 종결된다. 짧은 지속기간의 후속적인 유사분열기 (M)에서, 복제된 염색체는 2개의 딸세포 사이에 균일하게 배당되고, 이는 각각 이배수 함량의 DNA를 다시 한번 포함하고 G01 단계에 존재하며, 이는 세포 주기가 다시 시작할 수 있다는 것을 의미한다.
세포 주기 분석을 위해, KB/HeLa 세포를 37℃에서 24시간 동안 상이한 농도의 시험 물질(0.1 내지 1000nM)로 처리하였다.
참조 물질 또는 선택된 시험 물질로 처리한 후, 세포 주기의 G2/M 단계에서의 세포 저지율은 하기 표 4에 제시하였다. 결과는 전문 분석 소프트웨어(ModFitTM)를 사용하여 분석하였다.
Figure 112005070896515-pct00008
본 발명에 따르는 화합물 1, 2, 4 및 11은 참조 화합물인 파클리탁셀 및 미토크산트론의 활성에 필적할 만한 활성을 나타낸다.
실시예 22: 아폽토시스의 증명
CDDplus 뉴클레오솜 ELISA 시험:
핵 분열은 아폽토시스 과정의 말기 결과이다. 이와 관련하여 관찰될 수 있는 변화는, 엔도뉴클레아제에 의해 절단되는 DNA 쇄 및 이로부터 생성되는 뉴클레오솜 입자로의 분절에 기인할 수 있다.
문헌[참조: Roche Molecular Biochemicals]에 기술된 CDDplus 뉴클레오솜 ELISA 시험을 뉴클레오솜 입자 증명용으로 사용하였다. 이를 위해, U-937 세포주에서의 화합물 1 및 2의 효과를 상이한 농도(1nM 내지 10μM; 24시간 동안 처리)에서 조사하였다(참조: 도 5 및 도 6).
이 시험에서, 화합물 1 및 2에 대한 세포 용해물 내에서의 뉴클레오솜의 농도 의존 증가를 관찰할 수 있다. 세포 배양 상청액에서의 상당한 증가는 입증할 수 없었고, 이는 화합물 1 및 2로 처리한 후 발생하는 아폽토시스 세포 사멸을 지지하는 증거이다.
실시예 23: 본 발명에 따르는 화합물의 물에 대한 포화 용해도 증명
화합물 1, 2, 10 및 14의 물에 대한 포화 용해도는 이하 기술된 바와 같이 측정하였다. 최대 1% DMSO를 물질을 가용화시키고 샘플의 습윤성을 향상시킬 목적으로 가했다. HPLC-UV법을 함량을 체크하기 위해 사용하였다. 결과는 이하 표 5에 요약된다:
Figure 112005070896515-pct00009
본 발명에 따르는 화합물 1 및 2는 물에 대해 보다 가용성인 화합물 10 및 14와 상이하다.
실시예 24: 생체내 활성
물질 10 및 14의 경우와 비교되는 본 발명에 따르는 화합물 2의 생체내 활성 및 관용성을 사람 이종이식 모델(흑색종, MEXF-462)로 시험했다. 결과는 이하 표 6에 요약된다:
Figure 112005070896515-pct00010
이러한 이종이식 모델에서, 화합물 2는 처리된 동물에서 종양의 완전 완화를 유도하고 또한 매우 충분히 관용성(사망 없음)인 것으로 관찰되었다. 화합물 10 및 14의 경우에 필적할만한 항종양제 효과가 관찰되지만, 이들의 관용성은 훨씬 덜했다.
실시예 25: 생체내 활성
물질 10의 경우와 비교되는 본 발명에 따르는 화합물 2의 생체내 활성 및 관용성을 다른 사람 이종이식 모델(젖샘, MAXF857)로 시험하였다.
결과는 다음 표에 제시된다:
Figure 112005070896515-pct00011
화합물 2 및 10은 필적할만한 항종양제 효과를 갖는 것으로 관찰되지만, 물질 10(여섯 마리 쥐 중 2마리 사망)은 화합물 2보다 관용성이 훨씬 덜 충분했다.

Claims (13)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-2-옥소-N-피리도[2,3-b]피라진-7-일아세트아미드(화합물 1) 및
    2-[1-(4-클로로벤질)-1H-인돌-3-일]-N-(1H-인다졸-5-일)-2-옥소아세트아미드(화합물 4)로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 인돌 유도체.
  7. 삭제
  8. 제6항에 따르는 인돌 유도체 하나 이상을 포함하는, 종양 질환을 치료하기 위한 약제학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 미립자 또는 나노입자 조성물 중에 인돌 유도체를 포함하는 약제학적 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 인돌 유도체 및 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 희석제 및 보조 물질을 포함하는, 정제, 당의정, 캡슐제, 주입 또는 앰풀용 액제, 좌제, 플라스터제, 흡입용으로 사용될 수 있는 분말 제제, 현탁제, 크림 및 연고로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 형태의 약제학적 조성물.
  11. 삭제
  12. 제8항에 있어서, 기타 활성 화합물에 대한 약물 내성을 지닌 종양 질환을 치료하기 위한 약제학적 조성물.
  13. 제8항에 있어서, 전이성 암종을 포함하는 종양 질환을 치료하기 위한 약제학적 조성물.
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