JP2019518776A - Ｅｇｆｒ阻害剤としてのアニリンピリミジン化合物の結晶 - Google Patents

Abstract

本発明は、医薬化学分野に属し、ＥＧＦＲ阻害剤としてのアニリンピリミジン化合物の結晶に関する。具体的には、本発明は、Ｎ−（２−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）−４−メトキシ−５−（４−（３−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−１−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）アクリルアミド（式Ｉ）塩酸塩の結晶Ａ、結晶Ｂ及び結晶Ｃに関し、さらに前記結晶Ａ、結晶Ｂ及び結晶Ｃの製造方法、前記結晶Ａ、結晶Ｂ又は結晶Ｃを含む結晶組成物、前記結晶Ａ、結晶Ｂ及び結晶Ｃ又はその結晶組成物を含む医薬組成物、並びにそれらの医薬用途に関する。本発明に係る結晶Ａ、結晶Ｂ及び結晶Ｃは、純度が高く、結晶度が高く、安定性が良い等の利点を有する。【化１】【選択図】なし

Description

（関連出願の相互参照）
本願は、２０１６年６月２４日に中国国家知的財産局に出願された出願番号がＣＮ２０１６１０４７０８３５．２である中国特許出願に基づく優先権及び利益を主張し、当該中国特許出願の内容の全てを本願に援用する。

本発明は、医薬化学分野に属する。具体的に、本発明は、ＥＧＦＲ阻害剤としてのアニリンピリミジン化合物のＮ−（２−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）−４−メトキシ−５−（４−（３−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−１−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）アクリルアミド塩酸塩の結晶、結晶組成物、医薬組成物、並びにその製造方法及び使用に関する。

ＥＧＦＲ（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：上皮成長因子受容体）は、ＨＥＲ１、ＥｒｂＢ１とも呼ばれ、上皮成長因子（ＥＧＦ）の細胞増殖及び信号伝達に対する受容体である。ＥＧＦＲは、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ−１）、ＨＥＲ２／ｃ−ｎｅｕ（ＥｒｂＢ−２）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ−３）、及びＨＥＲ４（ＥｒｂＢ−４）を含むＥｒｂＢ受容体ファミリーの一員である。ＥＧＦＲは、チロシンキナーゼ型受容体に属し、分子量１７０ＫＤａ、膜貫通型糖タンパクである。

ＥＧＦＲは、細胞膜の表面に位置し、ＥＧＦ及びＴＧＦαを含むリガンドとの結合によって活性化され、活性化後、ＥＧＦＲは単量体から二量体に変換される。前記二量体は、２つの同種の受容体分子の結合（ホモ二量体化）を含むだけではなく、ヒトＥＧＦ関連受容体（ＨＥＲ）チロシンキナーゼファミリーにおける異なるメンバーの結合（ヘテロ二量体化）をも含んでいる。ＥＧＦＲは、二量体化後、その細胞内におけるキナーゼ経路を活性化させることができ、細胞内ドメインにおける肝心なチロシン残基のリン酸化を含み、細胞増殖及び生存に関与する多くの細胞内信号伝達経路に対する刺激を引き起こす。

多くの固形腫瘍において、ＥＧＦＲの高発現又は異常発現が存在する。ＥＧＦＲは、腫瘍細胞の増殖、血管形成、腫瘍浸潤、転移、及びアポトーシスの阻害に関連付けられる。その可能なメカニズムは、次の通り、すなわち、ＥＧＦＲの高発現に起因した下流の信号伝達の強化、変異ＥＧＦＲ受容体やリガンドの発現増加に起因したＥＧＦＲの持続的な活性化、自己分泌環の効果の増強、受容体ダウンレギュレーションメカニズムの破壊、異常信号伝達経路の活性化等である。ＥＧＦＲの過剰発現は、悪性腫瘍の進行に重要な役割を果たしており、グリア細胞、腎癌、肺癌、前立腺癌、膵臓癌、乳癌等の組織のいずれにもＥＧＦＲの過剰発現が発見された。

ＥＧＦＲ及びＥｒｂ−Ｂ２の異常発現は、腫瘍の形質転換及び成長に重要な役割を果たしている。肺癌を例にすれば、ＥＧＦＲは５０％の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）症例に発現されており、且つその発現は予後不良と関連付けられている。これらの２つの要因は、ＥＧＦＲ及びそのファミリーメンバーを、標的治療のための主な候補者とするようにさせる。ＥＧＦＲを標的とする２種類の低分子阻害剤であるゲフィチニブ及びエルロチニブは、従来の化学療法への応答を持たないＮＳＣＬＣの末期患者を治療するために、米国のＦＤＡによって急速に承認された。

初期臨床データでは、１０％のＮＳＣＬＣ患者がゲフィチニブ及びエルロチニブへの応答を持っていることが示された。分子生物学的分析によれば、大多数の場合、薬物応答性を持っている患者は、ＥＧＦＲコード遺伝子上に所定の突然変異を持っており、すなわち、エキソン１９の７４７番目〜７５０番目のアミノ酸の欠失が突然変異の４５％を占め、また１０％の突然変異がエキソン１８及びエキソン２０に発生する。最も一般的なＥＧＦＲ活性化突然変異（Ｌ８５８Ｒ及びｄｅｌＥ７４６＿Ａ７５０）は、野生型（ＷＴ）ＥＧＦＲに対して、低分子チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）への親和力が増加し、且つアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）への親和力が低下することをもたらす。Ｔ７９０Ｍ突然変異は、ＥＧＦＲのエキソン２０における１つの点突然変異であり、ゲフィチニブ又はエルロチニブでの治療に対する獲得抵抗性をもたらす。最近の研究によれば、Ｌ８５８Ｒ及びＴ７９０Ｍ突然変異の組合せは、単独のＬ８５８ＲよりもＡＴＰへの親和力が強いことが明らかとなっており、ＴＫＩがＡＴＰ競合的キナーゼ阻害剤であるため、ＴＫＩとキナーゼ領域との結合率が減少したことを引き起こす。

上記突然変異が標的ＥＧＦＲ治療の薬剤耐性メカニズムにおいて重要な役割を果たすため、ＥＧＦＲ−Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ二重突然変異型阻害剤を提供し、臨床治療に適用することが必要である。同時に、ＥＧＦＲ−ＷＴの阻害が臨床において複数の毒性・副作用を誘導するため、ＥＧＦＲ−ＷＴと比較し、活性化突然変異体形式のＥＧＦＲ（例えばＥＧＦＲ−Ｌ８５８Ｒ突然変異体、ｄｅｌＥ７４６_Ａ７５０突然変異体又はＥｘｏｎ１９欠失ＥＧＦＲ突然変異体）及び／又は耐性突然変異体形式のＥＧＦＲ（例えばＥＧＦＲ−Ｔ７９０Ｍ突然変異体）に対して選択的な阻害剤を提供し、臨床治療に適用することも必要である。

現在、複数の選択的なＥＧＦＲ阻害剤の報告があり、なかでも、出願日が２０１５年０７月１６日である出願番号２０１５１０４１９０１８．Ｘの中国特許出願には、複数のＥＧＦＲ阻害剤（ここで参照のために全文として組み込む）が開示され、下記式Ｉで表されるＮ−（２−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）−４−メトキシ−５−（４−（３−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−１−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）アクリルアミドの塩酸塩を含む。

治療効果以外、医薬研究開発者は、医薬としての性質を有する活性分子の適切な形式を提供することを試みる。商業的に実行可能な製造方法を得る観点から、又は活性化合物を含む医薬組成物を製造する観点から、活性成分の化学的な安定性、固形安定性及び貯蔵寿命は、いずれも非常に重要な要素である。そのため、必要な性質を有する形式を提供することは、医薬研究開発に極めて重要である。

本発明の一態様では、式Ｉ化合物（下記式Ｉで表される化合物、以下同じ）の塩酸塩の結晶Ａであって、

そのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンには、２θが８．９６°±０．２°、１４．１１°±０．２°、１４．８７°±０．２°、１６．５２°±０．２°、１８．６７°±０．２°、２１．９３°±０．２°及び２７．０９°±０．２°である回折ピークを有する、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａを提供する。

本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａの製造方法であって、
（１）式Ｉ化合物と塩酸とを接触させる工程と、
（２）結晶化溶媒から晶析する工程とを含み、
前記結晶化溶媒はアセトニトリル、メタノール、イソプロパノール、及びエタノールと水との混合物からなる群より選ばれる、製造方法を提供する。

本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａが前記結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める、結晶組成物を提供する。

本発明の他の態様では、治療有効量の式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａ又は上記結晶組成物を含む、医薬組成物を提供する。

本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物の、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療するための医薬の製造における使用を提供する。

本発明の更なる態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂであって、

そのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンには、２θが９．１７°±０．２°、９．９３°±０．２°、１４．０７°±０．２°、２０．３１°±０．２°、２１．４４°±０．２°及び２６．１０°±０．２°である回折ピークを有する、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂを提供する。

本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂの製造方法であって、
（１）式Ｉ化合物と塩酸とを接触させる工程と、
（２）結晶化溶媒から晶析する工程とを含み、
前記結晶化溶媒はエタノールである、製造方法を提供する。

本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂが前記結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める、結晶組成物を提供する。

本発明の他の態様では、治療有効量の式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂ又は上記結晶組成物を含む、医薬組成物を提供する。

本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物の、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療するための医薬の製造における使用を提供する。

本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃであって、

Ｘ線回折（ＸＲＤ）パターンには、２θが７．６８°±０．２°、８．２１°±０．２°、１０．８９°±０．２°、１５．９５°±０．２°、１９．１０°±０．２°、２０．５２°±０．２°及び２１．５４°±０．２°である回折ピークを有する、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃを提供する。

本発明の他の態様では、結晶Ｃの製造方法であって、
（１）式Ｉ化合物と塩酸とを接触させる工程と、
（２）結晶化溶媒から晶析する工程とを含み、
前記結晶化溶媒はテトラヒドロフラン、アセトン及びジオキサンからなる群より選ばれる、製造方法を提供する。

本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃが前記結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める、結晶組成物を提供する。

本発明の他の態様では、治療有効量の式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃ又は上記結晶組成物を含む、医薬組成物を提供する。

本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物の、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療するための医薬の製造における使用を提供する。

式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａ（実施例３の方法１）のＸＲＤパターンである。 式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａ（実施例３の方法１）のＤＳＣパターンである。 式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂ（実施例４の方法５）のＸＲＤパターンである。 式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂ（実施例４の方法５）のＤＳＣパターンである。 式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃ（実施例５の方法６）のＸＲＤパターンである。 式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃ（実施例５の方法６）のＤＳＣパターンである。

〔発明の詳細な説明〕
本発明の一態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａを提供する。

式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＡのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンには、２θが８．
９６°、１４．１１°、１４．８７°、１６．５２°、１８．６７°、２１．９３°及び２７．０９°±０．２°である回折ピークを有し、典型的には、２θが８．３３°、８．９６°、１２．１６°、１４．１１°、１４．８７°、１６．５２°、１７．６６°、１８．６７°、２１．９３°及び２７．０９°±０．２°である回折ピークを有し、より典型的には、２θが８．３３°、８．９６°、１１．７４°、１２．１６°、１４．１１°、１４．８７°、１６．５２°、１７．６６°、１８．２３°、１８．６７°、２１．９３°、２２．６５°及び２７．０９°±０．２°である回折ピークを有し、さらに典型的には、２θが８．３３°、８．９６°、１１．７４°、１２．１６°、１４．１１°、１４．８７°、１６．５２°、１７．６６°、１８．２３°、１８．６７°、１９．４８°、１９．９２°、２１．９３°、２２．６５°、２４．９５°、２７．０９°及び２７．５５°±０．２°である回折ピークを有する。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＡのＸ線回折ピークは、以下のような特徴を有する。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＡのＸ線回折パターンは、図１に示される。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＡのＤＳＣパターンは、約２７１℃にピークを有する。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＡのＤＳＣパターンは、図２に示される。

本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａの製造方法であって、
（１）式Ｉ化合物と塩酸とを接触させる工程と、
（２）結晶化溶媒から晶析し、必要に応じてろ過する工程とを含み、
前記結晶化溶媒はアセトニトリル、メタノール、イソプロパノール、及びエタノールと水との混合物からなる群より選ばれる、製造方法を提供する。

本発明のいくつかの実施形態において、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａを製造するための結晶化溶媒がエタノールと水との混合物である場合、エタノールと水との割合（体積基準）は、９：１〜１：９、好ましくは９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８又は１：９、より好ましくは３：１である。

本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａ製造方法における塩酸と式Ｉ化合物とのモル比は、１：０．５〜１．５であり、好ましくは、１：０．８〜１．２であり、より好ましくは、１：１である。

本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物と塩酸とを、結晶化溶媒において接触させる。

本発明の他の態様では、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａの結晶組成物を提供する。本発明のいくつかの実施形態において、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａは、結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める。

本発明の他の態様では、治療有効量の前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａ、又は前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａの結晶組成物を含む、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａの医薬組成物を提供する。また、当該医薬組成物は、さらに薬理学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒質を含有してもよく、含有しなくてもよい。

本発明の他の態様では、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物の、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療するための医薬の製造における使用を提供する。

本発明の他の態様では、治療有効量の上記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物を、それを必要とする哺乳類に投与することを含む、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療する方法を提供する。

本発明の他の態様では、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療するための上記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物を提供する。

本発明の一態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂを提供する。

式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＢのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンには、２θが９．１７°、９．９３°、１４．０７°、２０．３１°、２１．４４°及び２６．１０°±０．２°である回折ピークを有し、典型的には、２θが９．１７°、９．９３°、１０．６５°、１３．４６°、１４．０７°、２０．３１°、２１．４４°、２２．３３°、２４．９３°及び２６．１０°±０．２°である回折ピークを有し、より典型的には、２θが６．７１°、９．１７°、９．９３°、１０．６５°、１１．４４°、１３．４６°、１４．０７°、１８．９４°、２０．３１°、２１．４４°、２１．６６°、２２．３３°、２４．９３°、２５．７３°、及び２６．１０°±０．２°である回折ピークを有する。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＢのＸ線回折ピークは、以下のような特徴を有する。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＢのＸ線回折パターンは、図３に示される。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＢのＤＳＣパターンは、約２５９℃にピークを有する。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＢのＤＳＣパターンは、図４に示される。

本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂの製造方法であって、
（１）式Ｉ化合物と塩酸とを接触させる工程と、
（２）結晶化溶媒から晶析し、必要に応じてろ過する工程とを含み、
前記結晶化溶媒はエタノールである、製造方法を提供する。

本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂ製造方法における塩酸と式Ｉ化合物とのモル比は、１：０．５〜１．５であり、好ましくは、１：０．８〜１．２であり、より好ましくは、１：１である。

本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物と塩酸とを、結晶化溶媒において接触させる。

本発明の他の態様では、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂの結晶組成物を提供する。本発明のいくつかの実施形態において、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂは、結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める。

本発明の他の態様では、治療有効量の前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂ、又は前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂの結晶組成物を含む、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂの医薬組成物を提供する。また、当該医薬組成物は、さらに薬理学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒質を含有してもよく、含有しなくてもよい。

本発明の他の態様では、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物の、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療するための医薬の製造における使用を提供する。

本発明の他の態様では、治療有効量の上記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物を、それを必要とする哺乳類に投与することを含む、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療する方法を提供する。

本発明の他の態様では、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療するための上記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物を提供する。

本発明の一態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃを提供する。

式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＣのＸ線回折（ＸＲＤ）パターンには、２θが７．６８°、８．２１°、１０．８９°、１５．９５°、１９．１０°、２０．５２°及び２１．５４°±０．２°である回折ピークを有し、典型的には、２θが７．６８°、８．２１°、９．５５°、１０．８９°、１５．９５°、１９．１０°、２０．５２°、２１．０８°、２１．５４°及び２８．２２°±０．２°である回折ピークを有し、より典型的には、２θが７．６８°、８．２１°、９．５５°、１０．８９°、１４．２２°、１４．９５°、１５．９５°、１９．１０°、２０．５２°、２１．０８°、２１．５４°、２３．０５°、２６．２３°及び２８．２２°±０．２°である回折ピークを有する。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＣのＸ線回折ピークは、以下のような特徴を有する。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＣのＸ線回折パターンは、図５に示される。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＣのＤＳＣパターンは、約１７５℃及び２６２℃にピークを有する。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明に係る式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶ＣのＤＳＣパターンは、図６に示される。

本発明の他の態様では、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃの製造方法であって、
（１）式Ｉ化合物と塩酸とを接触させる工程と、
（２）結晶化溶媒から晶析し、必要に応じてろ過する工程とを含み、
前記結晶化溶媒はテトラヒドロフラン、アセトン及びジオキサンからなる群より選ばれる、製造方法を提供する。

本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃ製造方法におけるＨＣｌと式Ｉ化合物とのモル比は、１：０．５〜１．５であり、好ましくは、１：０．８〜１．２であり、より好ましくは、１：１である。

本発明のいくつかの実施形態において、式Ｉ化合物と塩酸とを、結晶化溶媒において接触させる。

本発明の他の態様では、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃの結晶組成物を提供する。本発明のいくつかの実施形態において、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃは、結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める。

本発明の他の態様では、治療有効量前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃ、又は前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃの結晶組成物を含む、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃの医薬組成物を提供する。また、当該医薬組成物は、さらに薬理学的に許容される担体、賦形剤及び／又は媒質を含有してもよく、含有しなくてもよい。

本発明の他の態様では、前記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物の、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療するための医薬の製造における使用を提供する。

本発明の他の態様では、治療有効量の上記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物を、それを必要とする哺乳類に投与することを含む、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療する方法を提供する。

本発明の他の態様では、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療するための上記式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃ、又は上記結晶組成物、又は上記医薬組成物を提供する。

本発明のいくつかの実施形態において、前記ＥＧＦＲ媒介性疾患は、ＥＧＦＲ−Ｌ８５８Ｒ活性化突然変異媒介性疾患からなる群より選ばれる。本発明のいくつかの実施形態において、前記ＥＧＦＲ媒介性疾患は、ＥＧＦＲ−Ｔ７９０Ｍ活性化突然変異媒介性疾患からなる群より選ばれる。本発明のいくつかの実施形態において、前記ＥＧＦＲ媒介性疾患は、ＥＧＦＲ−Ｌ８５８ＲとＥＧＦＲ−Ｔ７９０Ｍとを合せる二重突然変異活性化媒介性疾患からなる群より選ばれる。本発明のいくつかの実施形態において、前記ＥＧＦＲ媒介性疾患は、卵巣癌、子宮頸癌、大腸癌、乳癌、膵臓癌、神経膠腫、膠芽腫、黒色腫、前立腺癌、白血病、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、胃癌、肺癌、肝細胞癌、胃癌、消化管間質腫瘍、甲状腺癌、胆管癌、子宮内膜癌、腎癌、未分化大細胞型リンパ腫、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、黒色腫、中皮腫からなる群より選ばれる癌であり、前記肺癌が、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌からなる群より選ばれてもよい。

本発明に係るの結晶の安定性を検出する場合、結晶を高温、高湿度、又は光照射の条件において行われてもよい。前記高温条件は、４０〜６０℃から選ぶことができ、前記高湿度条件は、相対湿度７５％〜９２．５％ＲＨから選ばれてもよく、光照射条件は、５０００Ｌｕｘを選ばれてもよい。結晶安定性を評価する場合、試料における含有量、総不純物、水含有量等の複数のデータを考察し、製品性質に応じて総合的に上記パラメータを評価することができる。

本発明において、Ｘ線回折パターンは、下記方法により測定される。計器はＢｒｕｋｅｒ Ｄ２ Ｘ線回折機であり、方法はターゲット：Ｃｕであり、管電圧Ｖｏｌｔａｇｅは３０ｋＶであり、管電流Ｃｕｒｒｅｎｔは１０ｍＡであり、スキャン範囲は４〜４０°であり、スキャン速度はステップ毎に０．１秒、ステップ毎に０．０２°である。

本発明において、示差走査熱量分析（ＤＳＣ）は、下記方法により測定される。計器はＭＥＴＴＬＥＲ ＤＳＣ−１示差走査熱量分析機であり、方法は試料（〜５ｍｇ）を取ってＤＳＣアルミ鍋に入れてテストし、その中で、温度が３０℃〜３００℃であり、昇温速度が１０℃／ｍｉｎである。

なお、Ｘ線回折スペクトルにおいて、結晶化合物から得られる回折スペクトルは、所定の結晶形に関して特徴的なものである場合が多いが、スペクトル帯（特に低角度において）の相対強度は、結晶条件、粒径及びその他の測定条件の相違により生じる優位配向効果（ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ）によって変化する可能性がある。したがって、回折ピークの相対強度は、相応の結晶形に対して特徴的ではなく、既知の結晶形と同じか否かを判断する際に、ピークの相対強度ではなくピークの相対位置をさらに注意すべきである。また、いかなる所定の結晶形に対して、ピークの位置に少しの誤差が存在する可能性があることは、結晶学分野に周知である。例えば、サンプルを分析する際の温度の変化、サンプルの移動、又は計器の較正等により、ピークの位置が移動することができ、２θ値の測定誤差は、約±０．２°となる場合がある。そのため、それぞれの結晶形の構造を同定する場合、このような誤差を考慮すべきである。ＸＲＤパターンによく用いられる２θ角度又は格子面間隔ｄは、ピーク位置を示し、両者の間に、簡単な換算関係：ｄ＝λ／２ｓｉｎθ（式中、ｄが格子面間隔、λが入射Ｘ線の波長、θが回折角度を示す）を持っている。同一種類の化合物の同一種類の結晶形について、そのＸＲＤスペクトルのピーク位置は、全体的に類似性を有するが、相対強度の誤差がより大きい場合がある。なお、混合物の同定において、含有量の低下等の要因により、一部の回折線が欠失することがあるが、この場合、高純度試料において観察された全てのスペクトル帯に頼る必要がなく、1本のスペクトル帯だけでもが所定の結晶に対して特徴的なものである場合もある。

なお、ＤＳＣでは、結晶がその結晶構造に変化を生じたり、結晶が熔融により熱を吸収又は放出したりする際の転移温度を測定する。同一種類の化合物の同一種類の結晶形について、連続的な分析において、熱転移温度及び融点の誤差は、典型的に約５℃以内にある。ある化合物がある所定のＤＳＣピーク又は融点を有するという場合、当該ＤＳＣピーク又は融点±５℃を意味する。ＤＳＣは、異なる結晶形を判別するための補助方法を提供する。異なる結晶形態は、それらの異なる転移温度特徴によって識別することができる。

本発明において、用語「医薬組成物」とは、一種又は複数種の本発明の化合物と、本分野において通常に許容される、生物活性化合物を有機体（例えば、ヒト）に送達するための担体、賦形剤及び／又は媒質からなる製剤を意味する。医薬組成物は、本発明の化合物を有機体に投与することに有利となる目的とする。

用語「担体」は、化合物を細胞や組織に導入することに有利である化合物として定義される。

「薬学的に許容される担体」は、ヒトや家畜に用いられることが国家薬品管理機関により許可された補助剤、賦形剤、流動促進剤、甘味剤、希釈剤、防腐剤、染剤／着色剤、香味剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、等張化剤、溶媒又は乳化剤を含むが、これらに限られない。

「治療有効量」とは、本発明に係る化合物が哺乳類（好ましくは、ヒト）に投与される際に、下記定義されるように哺乳類（好ましくは、ヒト）にウイルス感染に対する治療の実現に十分な量を意味する。「治療有効量」となる本発明に係る化合物の量は、化合物、疾患状況とその重症度、投与方式及び治療しようとする哺乳類の年齢によって変わるが、当業者は、その自身の持つ知識及び本発明に開示された内容により通常的に決めることができる。

本明細書に記載の用語「治療」は、ウイルス感染を患っている哺乳類（好ましくは、ヒト）におけるウイルス感染の治療を含み、且つ
（ｉ）ウイルス感染を阻害し、すなわちその進行を阻止すること、
（ｉｉ）ウイルス感染を寛解し、すなわちウイルス感染の回復を引き起こすこと、或いは
（ｉｉｉ）ウイルス感染で引き起こされた症状を寛解すること、を含む。

本発明に用いられる全ての溶媒は、市販品であり、更なる精製の必要がなく、そのまま使用されてもよい。反応は、一般的に不活性の窒素雰囲気下で無水溶媒において行われる。

本発明に係る化合物は、人工的に命名されたり、ＣｈｅｍＤｒａｗ(R)ソフトウェアで命名されたりし、市販の化合物は、販売元のカタログ名称が用いられる。

本発明において、プロトン核磁気共鳴データは、「ＢＲＵＫＥＲ ＡＶＡＮＣＥ III ＨＤ ５００ Ｍ」分光計で記録され、化学シフトは、テトラメチルシラン低磁場側の（ｐｐｍ）で示され、質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ+ＸＥＶＯ Ｇ２ ＱＴｏｆで測定される。質量分析計は、正又は負のモードで動作されるエレクトロスプレーイオン源（ＥＳＩ）を一つ備える。
本発明に係る式Ｉで表される化合物の塩酸塩結晶Ａ、結晶Ｂ及び結晶Ｃは、純度が高く、結晶度が高く、安定性が良い等の利点を有すると共に、本発明に係る式Ｉで表される化合物の塩酸塩結晶Ａ、結晶Ｂ及び結晶Ｃの製造方法は簡単であり、溶媒が安価で入手しやすく、結晶条件が穏やかであり、工業化生産に適する。

以下の実施例は、本発明の技術案に対して、さらに非限定的な詳細説明をする。それらは、本発明の範囲に対する限定と見なさず、本発明の例示的な説明及び典型的な代表に過ぎない。本発明に用いられる溶媒、試薬及び原料等は、いずれも市販の化学純度又は分析純度の製品である。

実施例１: Ｎ−（２−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）−４−メトキシ−５−（４−（３−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−１−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）アクリルアミド（Ｉ）の塩酸塩

工程１： Ｎ^１−（２−クロロピリミジン−４−イル）ベンゼン−１，２−ジアミン

ｏ−フェニレンジアミン（３．２４ｇ、３０ｍｍｏｌ）と２，４−ジクロロピリミジン（４．４７ｇ、３０ｍｍｏｌ）とを無水エタノール（６０ｍＬ）に分散させ、ジイソプロピルエチルアミン（７．７４ｇ、６０ｍｍｏｌ）を加え、３時間加熱還流した。減圧濃縮で溶媒を除去し、残留物をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、水で洗浄し、飽和食塩水で洗浄し、減圧濃縮で溶媒を除去した。残留物は、カラムクロマトグラフィー（ＥＡ：ＰＥ＝１：２）により単離され、表題化合物（５．３２ｇ、８０％）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ ８．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、７．２０−７．１２（２Ｈ，ｍ）、６．８５−６．７８（２Ｈ，ｍ）、６．７４（１Ｈ，ｓ）、６．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、３．８２（２Ｈ，ｂｒ）。

工程２： １−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン

Ｎ^１−（２−クロロピリミジン−４−イル）フェニル−１，２−ジアミン（２．２１ｇ、１０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解し、カルボニルジイミダゾール（２．４３ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１時間撹拌し、水（５０ｍＬ）に投入し、引き続き１０分間撹拌した。吸引ろ過し、水で洗浄し（３０ｍＬ×３）、乾燥して、表題化合物（２．２３ｇ、９０％）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ １１．６４（１Ｈ，ｂｒ）、８．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、８．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、８．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．２２−７．１０（３Ｈ，ｍ）。

工程３： １−（２−クロロピリミジン−４−イル）−３−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン

１−（２−クロロピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（６００ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）に分散し、氷水浴で冷却した。水素化ナトリウム（１１６ｍｇ、６０％、２．９０ｍｍｏｌ）を加えて、１時間撹拌し、ヨードメタン（３４５ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ）を滴下し、引き続き１時間撹拌した。反応液を水（５０ｍＬ）に投入し、３０分間撹拌し、吸引ろ過し、水で洗浄し（３０ｍＬ×３）、乾燥して、表題化合物（４５９ｍｇ、７２％）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ ８．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、８．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）、８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．３０−７．２８（２Ｈ，ｍ）、７．２４−７．１９（１Ｈ，ｍ）、３．３９（３Ｈ，ｓ）。

工程４： １−（２−（４−フルオロ−２−メトキシ−５−ニトロフェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−３−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オンｐ−トルエンスルホン酸塩

１−（２−クロロピリミジン−４−イル）−３−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（４５９ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）、４−フルオロ−２−メトキシ−５−ニトロアニリン（３６０ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸一水合物（５５１ｍｇ、２．８９ｍｍｏｌ）を、２−ペンタノール（１０ｍＬ）に分散し、反応が１０５℃で一晩撹拌した。冷却後、吸引ろ過し、ろ過ケーキを少量の２−ペンタノールで３回洗浄し、乾燥して、表題化合物（４４０ｍｇ、４３％）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ １０．９５（１Ｈ，ｂｒ）、８．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、８．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、８．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、７．８７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．２８−７．２３（２Ｈ，ｍ）、７．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、６．９１−６．８５（２Ｈ，ｍ）、３．９２（３Ｈ，ｓ）、３．４６（３Ｈ，ｓ）、２．３８（３Ｈ，ｓ）。

工程５： １−（２−（４−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）−２−メトキシ−５−ニトロフェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−３−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン

１−（２−（４−フルオロ−２−メトキシ−５−ニトロフェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−３−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オンｐ−トルエンスルホン酸塩（４４０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（５ｍＬ）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（２０６ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）とＮ^１，Ｎ^１，Ｎ^２−トリメチルエタン−１，２−ジアミン（１１６ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を加えて、反応が８５℃で一晩撹拌した。反応液を冷却した後、水（５０ｍＬ）に投入し、吸引ろ過し、少量のメタノールで洗浄し、乾燥して、表題化合物（３２６ｍｇ、８８％）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：δ ８．９２（１Ｈ，ｓ）、８．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、８．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、７．４７（１Ｈ，ｓ）、７．２９−７．１９（１Ｈ，ｍ）、７．１７−７．１３（１Ｈ，ｍ）、７．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、６．６９（１Ｈ，ｓ）、３．９８（３Ｈ，ｓ）、３．４７（３Ｈ，ｓ）、３．２７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．８９（３Ｈ，ｓ）、２．８８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．２６（６Ｈ，ｓ）。

工程６： １−（２−（５−アミノ−４−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）−２−メトキシフェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−３−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン

１−（２−（４−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）−２−メトキシ−５−ニトロフェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−３−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（３２６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（１０％、３０ｍｇ）を加えて、水素ガスで３回置換し、反応系を水素雰囲気で一晩撹拌し、吸引ろ過した。製品が酸化しやすく、得られたろ過液を素早く減圧濃縮し、そのまま次の反応に投入した。

工程７： Ｎ−（２−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）−４−メトキシ−５−（４−（３−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−１−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）アクリルアミド塩酸塩

上記工程の反応により得られた１−（２−（５−アミノ−４−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）−２−メトキシフェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−３−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オンを無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（１２９ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を加えて、氷水浴により冷却した。塩化アクリロイル（６０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を溶解した無水ジクロロメタン（２ｍＬ）溶液を、１５分間かけて徐々に反応系に滴下した。引き続き１５分間撹拌した後、反応液を石油エーテル（５０ｍＬ）に投入し、１０分間撹拌した。吸引ろ過し、ろ過ケーキを石油エーテルで洗浄した。得られた粗生成物は、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）により単離し、表題化合物（１６４ｍｇ、２ステップ合わせた収率４５％）を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ １０．１５（１Ｈ，ｂｒ）、９．７２（１Ｈ，ｂｒ）、８．７０（１Ｈ，ｓ）、８．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、８．１６−８．１２（２Ｈ，ｍ）、７．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、７．２２−７１２（２Ｈ，ｍ）、６．９９−６．９２（３Ｈ，ｍ）、６．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ、１７．２Ｈｚ）、５．６８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ、１０．４Ｈｚ）、３．７７（３Ｈ，ｓ）、３．３４（３Ｈ，ｓ）、３． ２８（４Ｈ，ｂｒ）、２．７２（６Ｈ，ｓ）、２．６０（３Ｈ，ｓ）。

実施例２： Ｎ−（２−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）−４−メトキシ−５−（４−（３−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−１−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル）アクリルアミド（Ｉ）

実施例１の工程６で得られた１−（２−（５−アミノ−４−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）（メチル）アミノ）−２−メトキシフェニルアミノ）ピリミジン−４−イル）−３−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン（８２ｇ）をＴＨＦ（８００ｍＬ）及び水（８０ｍＬ）に加えて、撹拌しながら溶解し、３−クロロプロピオニルクロリド（２４．８ｇ）を滴下した。ＴＬＣで原料が消えたと示した後、トリエチルアミン（３５８．２ｇ）を加え、６５℃まで加熱し、反応した。反応完了後、反応液を乾燥まで濃縮し、ジクロロメタン１Ｌを加えて溶解し、水（５００ｍＬ）で２回分液させ、有機相を回収し、濃縮により８８ｇ粗生成物を得た。得られた粗生成物は、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）により単離し、表題化合物６２．５ｇを得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ［Ｍ+Ｈ］⁺：５１７．２６７７。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）：δ １０．０５（１Ｈ，ｓ）、８．６７（１Ｈ，ｓ）、８．５（１Ｈ，ｓ）、８．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、８．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．１３（２Ｈ，ｍ）、６．９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）、７．７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、７．０５（１Ｈ，ｓ）、６．４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．１５Ｈｚ、１６．９Ｈｚ）、６．２１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ、１６．９Ｈｚ），５．７２（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１１．５０Ｈｚ）、３．７７（３Ｈ，ｓ），３．３５（３Ｈ，ｓ）、２．９１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６５Ｈｚ）、２．７５（３Ｈ，ｓ）、２．３４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ）、２．２１（６Ｈ，ｓ）。

実施例３： 式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａ
方法１
実施例２で得られた化合物１０ｇを取って、５００ｍＬの反応釜に加え、エタノール１５０ｍＬを加えて、均一に撹拌し、徐々に２Ｎ塩酸１０ｍＬを加え、清澄になるまで溶解した後、２時間撹拌し、ろ過した。ろ過ケーキは、４５〜５０℃で真空乾燥した。回収された固体（８．３ｇ）をエタノール／水（エタノール：水＝３：１）溶液４９．８ｍＬに溶解し、８０℃で撹拌しながら、清澄になるまで溶解した後、２５〜３０℃までに冷却し、ろ過した。ろ過ケーキは、４５〜５０℃で真空乾燥し、対応の結晶を得た。

方法２
実施例２で得られた化合物１ｇを取って、２５ｍＬの反応釜に加え、アセトニトリル１０ｍＬを加えて、均一に撹拌し、徐々に２Ｎ塩酸１ｍＬを加え、固体を徐々に清澄になるまで溶解した。引き続き１０分間撹拌した後、固体が析出した。１２時間十分に撹拌した後、ろ過し、ろ過ケーキをアセトニトリル２ｍＬで洗浄し、４５℃で真空乾燥し、対応の結晶を得た。

方法３
実施例２で得られた化合物１ｇを取って、２５ｍＬの反応釜に加え、メタノール５ｍＬを加えて、均一に撹拌し、徐々に２Ｎ塩酸１ｍＬを加え、固体を徐々に清澄になるまで溶解した。引き続き１０分間撹拌した後、固体が析出した。１２時間十分に撹拌した後、ろ過し、ろ過ケーキをメタノール２ｍＬで洗浄し、４５℃で真空乾燥し、対応の結晶を得た。

方法４
実施例２で得られた化合物１ｇを取って、２５ｍＬの反応釜に加え、イソプロパノール５ｍＬを加えて、均一に撹拌し、徐々に２Ｎ塩酸１ｍＬを加え、固体を徐々に清澄になるまで溶解し、固体が間も無く析出した。１２時間十分に撹拌した後、ろ過し、ろ過ケーキをイソプロパノール２ｍＬで洗浄し、４５℃で真空乾燥し、対応の結晶を得た。

実施例４： 式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂ
方法５
実施例２で得られた化合物１０ｇを取って、５００ｍＬの反応釜に加え、エタノール１５０ｍＬを加えて、２５℃で撹拌し、この際に、反応系が未だ清澄になるまで溶解しなかった。徐々に２Ｎ塩酸を加えて、２時間撹拌し、ろ過した。ろ過ケーキは、４５〜５０℃で真空乾燥し、所望の結晶形を得た。

実施例５： 式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃ
方法６
実施例２で得られた化合物１ｇを取って、２５ｍＬの反応釜に加え、テトラヒドロフラン５ｍＬを加えて、均一に撹拌し、徐々に２Ｎ塩酸１ｍＬを加え、固体を徐々に清澄になるまで溶解し、間も無く混濁した。１２時間十分に撹拌した後、ろ過し、ろ過ケーキをテトラヒドロフラン２ｍＬで洗浄し、４５℃で真空乾燥し、対応の結晶を得た。

方法７
実施例２で得られた化合物１ｇを取って、２５ｍＬの反応釜に加え、アセトン５ｍＬを加えて、均一に撹拌し、徐々に２Ｎ塩酸１ｍＬを加え、固体を徐々に清澄になるまで溶解した。引き続き１０分間撹拌した後、固体が析出した。１２時間十分に撹拌した後、ろ過し、ろ過ケーキをアセトン２ｍＬで洗浄し、４５℃で真空乾燥し、対応の結晶を得た。

方法８
実施例２で得られた化合物１ｇを取って、２５ｍＬの反応釜に加え、１，４−ジオキサン５ｍＬを加えて、均一に撹拌し、徐々に２Ｎ塩酸１ｍＬを加え、固体を徐々に清澄になるまで溶解した。引き続き１０分間撹拌した後、固体が析出した。１２時間十分に撹拌した後、ろ過し、ろ過ケーキを１，４−ジオキサン２ｍＬで洗浄し、４５℃で真空乾燥し、対応の結晶を得た。

実施例６： 安定性実験
実施例３方法１で得られた結晶Ａを室温、遮光において放置し、それぞれ１．５ヶ月目、２ヶ月目、５ヶ月目及び６ヶ月目で試料を取って検出したところ、検出結果と０日目の初期検出結果とを比較し、試験結果を下記表に示す。

実施例４の方法５で得られた結晶Ｂを、それぞれ高温６０℃、高湿度７５％ＲＨ及び高湿度９２．５％ＲＨ，光照射５０００Ｌｕｘの環境において、それぞれ、５日目、１０日目及び３０日目で試料を取って検出したところ、検出結果と０日目の初期検出結果とを比較し、試験結果を下記表に示す。

実施例７： インビトロ活性試験
１．インビトロ酵素学的検出方法
ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ（Ｔ７９０Ｍ、Ｌ８５８Ｒ）キナーゼは、昆虫細胞発現系で発現し、精製することにより得られたもの、又は市販品を購入することにより得られたものである。
Ｃｉｓｂｉｏ社の均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）法を採用して、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ（Ｔ７９０Ｍ、Ｌ８５８Ｒ）のキナーゼ活性検出用プラットフォームを確立し、化合物活性の測定を行った。化合物を、１μＭから１００％ ＤＭＳＯで１０倍連続希釈し、濃度毎に４μＬを取って９６μＬの反応緩衝液（５０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、０．０２％ ＮａＮ_３、０．０１％ ＢＳＡ、０．１ｍＭ Ｏｒｔｈｏｖａｎａｄａｔｅ、５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、５０ｎＭ ＳＥＢ、１ｍＭ ＤＴＴ）に加え、２．５μＬを取って３８４ウェルプレート（ＯｐｔｉＰｌａｔｅ−３８４、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）に加え、その後、２．５μＬのキナーゼを加えて、遠心して均一に混合し、さらに５μＬのＡＴＰとＴＫ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ−ｂｉｏｔｉｎを加えて、反応を開始した。３８４ウェルプレートをインキュベーターにおいて、２３℃で一定の時間反応した後、５μＬのＥｕ^３+−Ｃｒｙｐｔａｔｅ標記のＴＫ−Ａｎｔｉｂｏｄｙ、５μＬのｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＸＬ６６５を加えて、反応を中止した。インキュベーターに１時間インキュベートした後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）に蛍光値を読み取った。化合物のＩＣ_５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０ソフトウェアを使用して算出した。

２．細胞増殖試験
ヒト非小細胞肺癌ＮＣＩ−Ｈ１９７５を、細胞インキュベーター（３７℃、５％ ＣＯ_２）に、ＲＰＭＩ−１６４０培地（１０％ウシ胎児血清及び１％マイシリン加入）で培養した。ウェルあたり２０００個の細胞（容積：１９５μＬ）で、９６ウェルプレートに播種し、一晩培養した。翌日、化合物を加えて、化合物を１０ｍＭから３倍連続希釈し、濃度毎に４μＬを取って９６μＬの培地に加えた。その後５μＬを取って細胞培養液（ＤＭＳＯ最終濃度０．１％、ｖ／ｖ）に加えて、７２時間処理した後、培地を吸引除去し、３０μＬ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ(R)（Ｐｒｏｍｅｇａ）試薬を加えて、Ｅｎｖｉｓｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に蛍光信号を読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０で、化合物の細胞増殖阻害に対するＩＣ_５０値を算出した。

ヒト皮膚扁平上皮癌細胞株Ａ４３１を、細胞インキュベーター（３７℃、５％ ＣＯ_２）に、ＤＭＥＭと１０％ウシ胎児血清及び１％のマイシリンで培養した。化合物の検出中、底層基質濃度を０．６％としており、細胞を０．３％の低融点寒天で再懸濁した後、１ウェルあたりに２０００個の細胞（１００μＬ）を加えるように９６ウェルプレートに播種した。化合物を１０ｍＭから３倍連続希釈し、濃度毎に２μＬを取って９８μＬの培地に加えた。その後５．３μＬを取って、細胞培養液（ＤＭＳＯ最終濃度０．１％、ｖ／ｖ）に加えて、一週間（７日間）処理した後、２０μＬ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ(R)（Ｐｒｏｍｅｇａ）試薬を加えて、３７℃で４時間インキュベートした。Ｅｎｖｉｓｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に蛍光信号を読み取って、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５．０で化合物の細胞増殖阻害に対するＩＣ_５０値を算出した。

生物学的活性のリスト

実施例８：薬物動態学的評価
被験化合物は、健康な成年（成熟）の雄ラットを使用して、単回投与量で胃内投与し、補助剤が２０％のスルホブチルエーテル-β-シクロデキストリンであり、用量が１０ｍｇ／ｋｇであった。胃内投与された動物は、実験前に一晩絶食し、絶食時間が投与前１０時間から投与後４時間までにし、胃内投与後０．２５、０．５、１、２、４、６、８及び２４時間で採血した。眼窩静脈叢により、約０．３ｍＬの全血を採取し、ヘパリン抗凝固管に入れ、試料を４℃、４０００ｒｐｍで５分間遠心し、血漿を遠心管に移転させ、分析までに−８０℃で保存した。血漿試料における被験品の濃度分析は、検証されていない液体クロマトグラフ/タンデム型質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を使用した。個体の動物の血漿濃度−時間データは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（プロフェッショナル版、バージョン６．３、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社）ソフトウェアにより分析された。ノンコンパートメントモデルは、濃度分析に用いられた。被験化合物の薬物動態学的パラメータを算出した。

Claims (18)

1. 式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａであって、
   

   

   そのＸ線回折パターンには、２θが８．９６°±０．２°、１４．１１°±０．２°、１４．８７°±０．２°、１６．５２°±０．２°、１８．６７°±０．２°、２１．９３°±０．２°及び２７．０９°±０．２°である回折ピークを有し、
   典型的には、２θが８．３３°±０．２°、８．９６°±０．２°、１２．１６°±０．２°、１４．１１°±０．２°、１４．８７°±０．２°、１６．５２°±０．２°、１７．６６°±０．２°、１８．６７°±０．２°、２１．９３°±０．２°及び２７．０９°±０．２°である回折ピークを有し、
   より典型的には、２θが８．３３°±０．２°、８．９６°±０．２°、１１．７４°±０．２°、１２．１６°±０．２°、１４．１１°±０．２°、１４．８７°±０．２°、１６．５２°±０．２°、１７．６６°±０．２°、１８．２３°±０．２°、１８．６７°±０．２°、２１．９３°±０．２°、２２．６５°±０．２°及び２７．０９°±０．２°である回折ピークを有し、
   さらに典型的には、２θが８．３３°±０．２°、８．９６°±０．２°、１１．７４°±０．２°、１２．１６°±０．２°、１４．１１°±０．２°、１４．８７°±０．２°、１６．５２°±０．２°、１７．６６°±０．２°、１８．２３°±０．２°、１８．６７°±０．２°、１９．４８°±０．２°、１９．９２°±０．２°、２１．９３°±０．２°、２２．６５°±０．２°、２４．９５°±０．２°、２７．０９°±０．２°及び２７．５５°±０．２°である回折ピークを有する、
   式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａ。
2. ＤＳＣパターンは２７１℃にピークを有する、請求項１に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａ。
3. 請求項１に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａの製造方法であって、
   （１）式Ｉ化合物と塩酸とを接触させる工程と、
   （２）式Ｉ化合物の塩酸塩を結晶化溶媒から晶析し、必要に応じて得られた結晶をろ過する工程とを含み、
   前記結晶化溶媒はアセトニトリル、メタノール、イソプロパノール、及びエタノールと水との混合物からなる群より選ばれる、製造方法。
4. 請求項１又は２に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ａは、結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める、結晶組成物。
5. 治療有効量の請求項１又は２に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩結晶Ａ或いは請求項４に記載の結晶組成物を含む、医薬組成物。
6. 請求項１又は２に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩結晶Ａ、或いは請求項４に記載の結晶組成物、或いは請求項５に記載の医薬組成物の、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療するための医薬の製造における使用。
7. 式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂであって、
   

   

   そのＸ線回折パターンには、２θが９．１７°±０．２°、９．９３°±０．２°、１４．０７°±０．２°、２０．３１°±０．２°、２１．４４°±０．２°及び２６．１０°±０．２°である回折ピークを有し、
   典型的には、２θが９．１７°±０．２°、９．９３°±０．２°、１０．６５°±０．２°、１３．４６°±０．２°、１４．０７°±０．２°、２０．３１°±０．２°、２１．４４°±０．２°、２２．３３°±０．２°、２４．９３°±０．２°及び２６．１０°±０．２°である回折ピークを有し、
   より典型的には、２θが６．７１°±０．２°、９．１７°±０．２°、９．９３°±０．２°、１０．６５°±０．２°、１１．４４°±０．２°、１３．４６°±０．２°、１４．０７°±０．２°、１８．９４°±０．２°、２０．３１°±０．２°、２１．４４°±０．２°、２１．６６°±０．２°、２２．３３°±０．２°、２４．９３°±０．２°、２５．７３°±０．２°及び２６．１０°±０．２°である回折ピークを有する、
   式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂ。
8. ＤＳＣパターンは２５９℃にピークを有する、請求項７に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂ。
9. 請求項７に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂの製造方法であって、
   （１）式Ｉ化合物と塩酸とを接触させる工程と、
   （２）式Ｉ化合物の塩酸塩を結晶化溶媒から晶析し、必要に応じて得られた結晶をろ過する工程とを含み、
   前記結晶化溶媒はエタノールである、製造方法。
10. 請求項７又は８に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｂは、結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める、結晶組成物。
11. 治療有効量の請求項７又は８に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩結晶Ｂ或いは請求項１０に記載の結晶組成物を含む、医薬組成物。
12. 請求項７又は８に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩結晶Ｂ、或いは請求項１０に記載の結晶組成物、或いは請求項１１に記載の医薬組成物の、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療するための医薬の製造における使用。
13. 式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃであって、
    

    

    そのＸ線回折パターンには、２θが７．６８°±０．２°、８．２１°±０．２°、１０．８９°±０．２°、１５．９５°±０．２°、１９．１０°±０．２°、２０．５２°±０．２°及び２１．５４°±０．２°である回折ピークを有し、
    典型的には、２θが７．６８°±０．２°、８．２１°±０．２°、９．５５°±０．２°、１０．８９°±０．２°、１５．９５°±０．２°、１９．１０°±０．２°、２０．５２°±０．２°、２１．０８°±０．２°、２１．５４°±０．２°及び２８．２２°±０．２°である回折ピークを有し、
    より典型的には、２θが７．６８°±０．２°、８．２１°±０．２°、９．５５°±０．２°、１０．８９°±０．２°、１４．２２°±０．２°、１４．９５°±０．２°、１５．９５°±０．２°、１９．１０°±０．２°、２０．５２°±０．２°、２１．０８°±０．２°、２１．５４°±０．２°、２３．０５°±０．２°、２６．２３°±０．２°及び２８．２２°±０．２°である回折ピークを有する、
    式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃ。
14. ＤＳＣパターンは、１７５℃及び２６２℃にピークを有する、請求項１３に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃ。
15. 請求項１３に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃの製造方法であって、
    （１）式Ｉ化合物と塩酸とを接触させる工程と、
    （２）式Ｉ化合物の塩酸塩を結晶化溶媒から晶析し、必要に応じて得られた結晶をろ過する工程とを含み、
    前記結晶化溶媒はテトラヒドロフラン、アセトン及びジオキサンからなる群より選ばれる、製造方法。
16. 請求項１３又は１４に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩の結晶Ｃは、結晶組成物の重量の５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上を占める、結晶組成物。
17. 治療有効量の請求項１３又は１４に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩結晶Ｃ或いは請求項１６に記載の結晶組成物を含む、医薬組成物。
18. 請求項１３又は１４に記載の式Ｉ化合物の塩酸塩結晶Ｃ、或いは請求項１６に記載の結晶組成物、或いは請求項１７に記載の医薬組成物の、ＥＧＦＲ媒介性疾患を治療するための医薬の製造における使用。

Images