KR20220107180A

KR20220107180A - 형질전환 성장 인자-베타 수용체 i/alk5의 억제제로서의 벤질아미드 유도체

Info

Publication number: KR20220107180A
Application number: KR1020227017493A
Authority: KR
Inventors: 아르탈 라몬 보쎄르; 카살 베호냐 팜핀; 라리아 훌리오 카스트로 파로미노
Original assignee: 오리고 바이오파마, 에스.엘.
Priority date: 2019-11-28
Filing date: 2020-11-27
Publication date: 2022-08-02
Also published as: CN114787145A; BR112022010251A2; CA3160963A1; AU2020394531A1; MX2022005843A; JP2023504795A; US20230025933A1; AR120578A1; IL293388A; WO2021105317A1; EP4065572A1; CN114787145B

Abstract

본 발명은 하기 화학식 (I)의 신규한 벤질아미드 유도체, 상기 화합물의 제조 방법; 상기 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 형질전환 성장 인자-β 수용체 I (TGFβRI)/ALK5의 억제에 의해 개선될 수 있는 병리학적 상태 또는 질환, 예컨대, 위장계, 피부 및 눈의 섬유성 병태와 연관이 있는 질환 및 장애의 치료에서 사용하기 위한 상기 화합물, 상기 질환 또는 병리학적 상태의 치료 및/또는 예방 방법, 및 상기 화합물을 포함하고, 상기 질환 또는 병리학적 상태의 치료에 유용한 다른 치료제를 치료 유효량으로 추가로 포함하는 조합물에 관한 것이다:

Description

형질전환 성장 인자-베타 수용체 I/ALK5의 억제제로서의 벤질아미드 유도체

본 발명의 기술분야

본 발명은 형질전환 성장 인자-β 수용체 I 키나제 (액티빈 수용체-유사 키나제 5로도 명명) (TGFβRI)/ALK5의 강력한 억제제로서, 편리하게 치환된 신규한 벤질아미드 유도체에 관한 것이다.

본 발명은 또한 상기 화합물을 제조하는 방법; 유효량의 상기 화합물을 포함하는 제약 조성물; 형질전환 성장 인자-β 수용체 I (TGFβRI)/ALK5의 억제에 의해 개선될 수 있는 병리학적 상태(pathological condition) 또는 질환 치료용 의약 제조를 위한 화합물의 용도로서, 상기 질환 또는 장애는 위장계, 피부 및 눈의 섬유성 병태와 연관이 있는 것인 용도에 관한 것이다.

최신 기술

형질전환 성장 인자-β (TGF-β)는 다른 단백질 중에서 TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3으로 구성된 TGF-β 슈퍼패밀리에 속한다. TGF-β는 세포 증식, 세포 이동, 침윤, 상피-중간엽 전이, 세포외 기질 생산 및 면역 억제를 비롯한, 많은 세포 프로세스에 관여한다. TGF-β 및 그의 수용체는 종종 암, 염증, 조직 섬유증 및 자가면역을 비롯한, 다양한 인간 질환에서 만성적으로 과다발현된다. 따라서, TGF-β 신호전달 경로의 차단은 약물 개발을 위한 매력적인 표적으로 간주된다 (문헌 [Heldin C. H. et al, Signaling Receptors for TGF -b Family Members, Cold Spring Harb Perspect Biol, 2016, doi: 10.1101/cshperspect.a022053]).

TGF-β는 2개의 관련된 막횡단 타입 I 및 타입 II 세린/트레오닌 키나제 수용체를 통해 신호를 전달한다. TGF-β가 구성적으로 활성인 타입 II 수용체에 결합한 후, I형 수용체 (액티빈 수용체-유사 키나제 5 (ALK5)로도 또한 명명)는 인산화되고, Smad2 및 Smad3 단백질에 대한 결합 부위를 생성하며, 이는 추가로 인산화된다. 인산화된 Smad2/Smad3 단백질은 Smad4와 헤테로머 복합체를 형성하여 핵으로 이동하고, 특정 DNA 결합 보조인자 및 보조 조정제와 어셈블리하고, 세포 분화, 증식, 아폽토시스, 이동 및 세포외 기질 생산에 관여하는 TGF-β 표적 유전자의 프로모터에 결합한다 (문헌 [Akhurst R. J. et al, Targeting the TGFβ signalling pathway in disease, Nature/Reviews, OCTOBER 2012, VOLUME 11]).

대부분의 세포 타입에서, 액티빈 수용체-유사 키나제 5 - ALK5 (TGFβR1로도 공지)는 TGFβ 수용체 II를 통해 TGF-β에 의해 활성화되는 우세한 TGFβ 수용체 I이다. 이러한 상호작용은 신호전달을 위한 세포외 및 세포내 도메인 모두를 필요로 한다. ALK5 및 TGFβ 수용체 II 단백질은 또한 리간드 부재하에 활성 헤테로올리고머 복합체를 형성할 수 있다. 이러한 복합체는 상호작용에 대한 그의 고유한 친화성으로 인해 두 수용체가 함께 공동 발현될 때 기본 신호를 전달할 수 있다 (문헌 [Bierie B. et al, TGF -β: the molecular Jekyll and Hyde of cancer, Nature Reviews, Cancer, Volume 6, July 2006]).

기능성 TGFβRII-TGFβRI (ALK5) 헤테로머 신호전달 복합체는 일반적으로 인간 암과 관련이 있으며, 하류 Smad 의존성 및 Smad 비의존성 경로의 활성화를 조절한다. 실제로, 많은 연구를 통해 TGF-β 경로와 연관이 있고, 많은 인간 조직에서 암 발생 및 예후와 상관관계가 있는 성분 중의 돌연변이가 확인되었다. TGF-β1의 과다발현은 유방암, 결장암, 식도암, 위암, 간세포암, 폐암 및 췌장암과 연관이 있다. 중요하게도, 인간 암에서 TGF-β의 과다발현은 종양 진행, 전이, 혈관신생 및 불량한 예후 결과와 상관관계가 있다.

암

현재, TGF-β 경로는 면역 성분의 변형 또는 소분자 억제제 및 가용성 단백질 또는 안티센스 화합물 억제제의 전달을 포함하는 전략법을 사용하여 표적화되었다. 면역치료 전략법은 동물에서 TGF-β 경로를 표적화하는 데 사용되었다.

사용되는 면역요법 전략법은 일반적으로 종양 보유 수용자에서 재구성되기 전에 면역 성분에서 TGF-β 신호전달을 감소시켜 암 세포와의 생산적인 상호작용을 허용한다. 대안적으로, TGF-β를 억제하는 데 사용되는 화합물의 전신 전달은 일반적으로 면역 회피, 혈관신생, 기질-상피 누화 및 종양-세포-자율 신호전달을 포함하는 TGF-β에 의해 조절되는 모든 숙주-종양 상호작용을 폐지한다. 마우스에서 TGF-β 신호전달의 유전적 제거 또는 억제와 연관된 면역 매개 질환 및 치사율로 인해, 암을 치료하기 위해 이 경로를 억제시키는 것이 생체내에서 지속 기간 동안 전달되었을 때 환자의 생존과 양립할 수 있는지 여부는 불분명하였다. 그러나, 최근에 마우스 모델에서 전신 가용성 TGF-β 억제제에 평생 노출된 경우, 심각한 부작용은 초래하지 않는 것으로 나타났다. 상기 연구에서는 TGF-β 특이적 억제가 생체내에서 지속 기간 동안 인간에게 주어질 때 장기 생존과 양립할 수 있어야 하는 것으로 나타났다 (문헌 [Yang, Y. et al, Lifetime exposure to a soluble TGF -β antagonist protects mice against metastasis without adverse side effects, J. Clin. Invest. 109:1607-1615 (2002)] 및 [Ruzek M. et al, Minimal Effects on Immune Parameters Following Chronic Anti- TGF -b Monoclonal Antibody Administration to Normal Mice, Immunopharmacology and Immunotoxicology Vol. 25, No. 2, pp. 235-257, 2003]).

종양 미세환경에서, TGF-β 신호전달은 예컨대, 면역 세포, 암 개시 세포, 내피 세포 및 섬유모세포와 같은 여러 세포 타입에 영향을 준다. 이러한 미세환경 변화의 전반적인 효과는 종양 진행 및 전이를 초래한다. TGF-β 신호전달은 예컨대, 간세포 암종, 췌장암 및 골수이형성 증후군(myelodysplastic syndrome)과 같은 대부분의 악성종양에 존재한다. 이러한 중요한 역할 때문에, 종양 성장을 감소시키기 위한 의도로 TGF-β 신호전달 경로를 차단하는 수개의 소분자 억제제가 개발되었다 (문헌 [Rodon, J. et al, First-in-Human Dose Study of the Novel Transforming Growth Factor-β Receptor I Kinase Inhibitor LY2157299 Monohydrate in Patients with Advanced Cancer and Glioma, American Association for Cancer Research, November 25, 2014; doi: 10.1158/1078-0432.CCR-14-1380).

간세포 암종 (HCC)은 미국과 유럽에서 종양 관련 사망의 세 번째로 흔한 원인인 고도로 악성인 암이다. 현행 치료 옵션은 침습적이며, 종양 매스를 물리적으로 제거하거나, 파괴하는 것을 목표로 한다. 그러나, 후기 재발 및/또는 전이성 확산이 흔하고, 생존에 부정적인 영향을 미친다. 전반적인 예후는 여전히 불만족스럽고, 새로운 치료 옵션을 찾는 데 진전이 거의 없다. HCC 환자에서, GF-β는 혈액과 소변 둘 모두에서 과다발현되는 것으로 보고되었으며, 이는 더 불량한 예후 및 생존과 상관관계가 있으며, 따라서, 상기 암의 마커를 나타낸다. TGF-β는 세포의 상피에서 중간엽으로의 전이 (EMT)를 촉발하여 HCC 공격성을 조정하는 데 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다. 연구에서는 소분자 억제제로 TGF-β 경로를 억제하는 것이 HCC 환자에게 유망한 요법이 될 수 있다는 것이 제안되었다 (문헌 [Fransvea, E. et al, Blocking Transforming Growth Factor-β Up-Regulates E-Cadherin and Reduces Migration and Invasion of Hepatocellular Carcinoma Cells, Wiley InterScience, 2008, doi 10.1002/hep.22201]).

췌장 선암종은 전 세계적으로 성인 암 사망률의 주요 원인 중 하나이다. 모든 병기를 합친 경우, 5년 생존율은 5%이고, 진단 후 생존 기간의 중간값은 <6개월이다. 진단 당시, 환자의 ⅔가 국소 진행성 또는 전이성 질환을 앓고 있다. 심지어 췌장암이 외관상 췌장으로 국재화되고, 수술로 제거되더라도, 환자의 70%에서는 간 전이가 발생할 것이다. 따라서, 췌장암은 암 연구에서 가장 큰 도전 과제 중 하나를 제기한다. 특히, 증가된 수준으로 TGF-β를 나타내는 인간 췌장암은 정맥 침습, 진행된 종양 병기, 진행성 질환, 더 짧은 환자 생존 기간 및 간 전이와 유의적인 연관이 있는 것으로 밝혀졌다. 췌장 종양에 의한 이러한 TGF-β 생성은 종양 미세환경에서 수지상 세포의 표현형 및 기능에 영향을 미침으로써 효과적인 항종양 면역 반응을 방해한다. 신규한 소분자-선택적 TGFRI/II 키나제 억제제 LY2109761의 전신 투여에 의한 TGF-β 신호전달 캐스케이드의 억제가 인간 췌장암의 생체내 모델에서 간 및 다른 복부 부위 전이를 억제한다는 것을 시사하는 연구가 있다 (문헌 [Melisi, D. et al, LY2109761, a novel transforming growth factor β receptor type I and type II dual inhibitor, as a therapeutic approach to suppressing pancreatic cancer metastasis, Mol Cancer Ther 2008;7(4). April 2008]).

결장암으로도 알려진 결장직장암은 종양 미세환경에서 예컨대, T 세포 침윤 부족, 타입 1 T 헬퍼 세포 (TH1)의 낮은 활성 및 감소된 면역 세포독성 또는 TGF-β 수준 증가와 같은 특정 특징을 가지고 있다. 최근 연구에 따르면, 종양 미세환경에서 증가된 TGF-β는 T 세포 배제를 촉진시키고, TH1 이펙터 표현형의 획득을 차단하는 면역 회피의 주요 기전을 나타낸다. 따라서, TGF-β 신호전달에 대한 면역요법은 진행성 결장직장암 환자를 치료하는 데 광범위하게 적용될 수 있다 (문헌 [Tauriello D.V.F, et al, TGF -β drives immune evasion in genetically reconstituted colon cancer metastasis, Nature, Published online:14 February 2018, doi:10.1038/nature25492]).

수막종은 원발성 뇌 종양 중 대략 36%이다. 실행가능한 화학요법이 없기 때문에 성장 조절 시토카인을 표적화하는 신규한 요법을 찾는 것이 촉발되었다. 이들 중 형질전환 성장 인자 베타 (TGF-β) 슈퍼 패밀리의 구성원이 특히 관련이 있을 수 있다. 더 높은 등급, 특히, 역형성 수막종(anaplastic meningioma)은 재발률이 가장 높고, 임의 등급의 수막종의 임의의 현행 요법에 대하여 가장 낮은 반응을 보인다. TGF-β 억제 신호 전달 경로의 회복은 수막종에 대해 효과적인 화학요법의 개발에 중요한 요소가 될 수 있다. 현재까지, 직접적인 치료 옵션은 부분적으로는 TGF-β 기준선 억제 복원과 연관된 독성으로 인해 제한적이다. 그럼에도 불구하고, TGF-β가 억제 효과에서 종양 진행 촉진으로 전환되는 악성 종양에서 TGF-β 신호전달은 TGF-β 타입 I 수용체의 소분자 억제제를 차단할 수 있다. 예비 연구에서는 LY 2157229 (가루니서팁(Galunisertib))는 TGF-β 효과를 차단하는 데 효과적이라는 것이 제안되었다 (문헌 [Johnson, M. D. Transforming growth factor β family in the pathogenesis of meningiomas, World Neurosurgery, doi: 10.1016/j.wneu.2017.03.058]).

가루니서팁은 현재 다양한 암에 대해 임상 개발 중인 TGFβRI 키나제 억제제이다 (문헌 [Herbertz, S et al, Clinical development of galunisertib (LY2157299 monohydrate ), a small molecule inhibitor of transforming growth factor-beta signaling pathway, Drug Design, Development and Therapy 2015:9 4479-4499]). TGFβRI/Alk5 키나제 도메인을 IC₅₀ 0.172 μM으로 억제시키고, ALK4를 IC₅₀ 0.77 μM으로 억제시킨다. 또한, MINK, TGFβRII, ALK6 및 ACVR2B를 포함한, 광범위한 다른 키나제도 마이크로몰 이하의 IC₅₀으로 억제시킨다. 고용량의 상기 화합물은 래트(rat) 및 개에서 부작용과 연관이 있다는 것을 보여주는 조기 보고가 있다. 따라서, 최소한의 독성으로 원하는 효과를 달성하기 위해 인간 대상체에서 투약 요법을 선택할 때 고도의 엄격함이 권장되었다. 이 화합물은 경구적으로 생체이용가능하다 (문헌 [Yingling, J. M. et al, Preclinical assessment of galunisertib (LY2157299 monohydrate ), a first-in-class transforming growth factor-β receptor type I inhibitor, Oncotarget. 2018 Jan 23; 9(6): 6659-6677]).

임상 개발 중인 TGFβ 타입 I 수용체 키나제의 다른 억제제는 키나제 검정법에서 0.013 μM의 IC₅₀ 값으로 ALK5를 억제하는 EW-7197이다. 이는 고도로 선택적인 ALK5/ALK4 억제제이며, 래트에서의 약동학적 연구에서 높은 전신 노출과 함께 51%의 경구 생체이용률을 보여준다 (문헌 [Jin, C.H. et al, Discovery of N((4-([1,2,4]Triazolo[1,5a]pyridin-6-yl)-5-(6-methylpyridin-2-yl)1Himidazol-2-yl)methyl)-2-fluoroaniline ( EW -7197): A Highly Potent, Selective, and Orally Bioavailable Inhibitor of TGFβ Type I Receptor Kinase as Cancer Immunotherapeutic/Antifibrotic Agent, J. Med. Chem. 2014, 57, 4213-4238])

섬유성 병태

광범위한 증거는 정규 ALK5/Smad3 경로가 많은 조직에서 섬유증의 발병기전에 결정적으로 관여한다는 것을 시사한다. ALK5의 키나제 활성에 대한 저분자량 선택적 억제제의 경구 투여는 진행성 TGF-β1 유도 폐 섬유증의 래트 모델에서 섬유화를 억제시켰다. 추가로, Smad3 널(null) 마우스는 광범위한 실험 모델에서 약화된 섬유증을 나타내고, 블레오마이신 유도 폐 섬유증에 저항성을 띤다. 유사하게, 방사선 조사 후 진피 섬유증, 일측성 요관 폐쇄에 의해 생성된 신장 간질 섬유증(renal interstitial fibrosis) 및 심장 섬유증은 Smad3 결핍 동물에서 모두 약화된다 (문헌 [Biernacka, A. et al, TGF -β signaling in fibrosis, Growth Factors. 2011 October; 29(5): 196-202. doi:10.3109/08977194.2011.595714]).

TGF-β 세포내 신호전달 경로의 억제제는 섬유증식성 질환에 대한 유용한 치료법이다. 구체적으로, 섬유증식성 질환으로는 조절되지 않은 TGF-β 활성과 연관된 신장 장애 및 사구체신염(glomerulonephritis: GN)을 포함하는 과도한 섬유증, 예컨대, 사구체 증식성(mesangial proliferative) GN, 면역 GN 및 반월상(crescentic) GN을 포함한다. 다른 신장 병태로는 당뇨병성 신병증, 신장 간질 섬유증, 이식 환자의 신장 섬유증을 포함한다. 콜라겐 혈관 장애로는 진행성 전신 경화증(progressive systemic sclerosis), 다발성근염(polymyositis) 및 경피증(scleroderma)을 포함한다. 섬유증식성 특징과 연관된 자가면역 장애로는 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus) 및 류마티스 관절염이 있다.

골수섬유증(myelofibrosis: MF)은 클론성 골수증식, 비정상적인 시토카인 생산, 골수외 조혈 및 골수 섬유증을 특징으로 하는 골수 장애이다. 야누스 키나제 2 (JAK2), 골수증식성 백혈병 바이러스(MPL) 및 칼레티쿨린 유전자 (CALR)의 체세포 돌연변이가 상기 질환의 발병기전에서 확인되었지만, JAK2 경로의 억제제는 환자에서 MF를 호전시키는 데 있어 효능을 보이지 않았다. TGF-β 패밀리 구성원은 섬유증유발성 시토카인이고, 원발성 MF 환자 샘플의 큰 코호트에서 유의적인 TGF-β1 이소폼 과다발현이 관찰되었다. TGF-β1은 TGF-β 수용체 I 키나제 (ALK5)/Smad3 경로를 활성화하여 중간엽 기질 세포 (MSC)에 의한 과도한 콜라겐 침착을 자극한다는 것이 입증되었다. 임상적으로 활성인 ALK5 억제제인 가루니서팁의 사용은 마우스 모델에서 MF를 유의적으로 개선시켰다. 데이터는 MF 발병기전에서 악성 조혈 줄기 세포 (HSC)/TGF-β/MSC 축의 역할을 입증하고, MF의 치료 전략법으로서 ALK5 차단에 대한 임상전 근거를 제공한다 (문헌 [Yue, L. et al, Efficacy of ALK5 inhibition in myelofibrosis, JCI Insight. 2017;2(6):e90932; doi.org/10.1172/jci.insight.90932]).

추가로, 수술 후 복강 유착 밴드 형성을 예방하는 데 TGF-β 억제제의 치료 잠재성을 조사한 연구가 있으며, 그 결과는 이러한 종류의 화합물이 염증, 산화 스트레스 억제, 염증유발성 유전자의 하향조절 뿐만 아니라, 섬유증 및 섬유증유발성 분자의 억제에 의해 유착 밴드 형성을 유의적으로 약화시키는 것으로 나타났다 (문헌 [Soleimani, A. et al, Novel oral transforming growth factor-β signaling inhibitor potently inhibits postsurgical adhesion band formation, J Cell Physiol. 2019;1-9]).

ALK5를 억제하는 수개의 소분자가 개발되었으며, 신장 섬유증의 동물 모델에서 고무적인 결과를 보여준다. 그러나, ALK5 신호전달의 항상성 역할에 대한 의문이 남아 있으며, 따라서, 이 효소를 표적화하는 것이 안전성에 영향을 미친다. 연구에서는 면역조직화학 분석 결과, 심장에서 ALK5 발현이 판막에 고유한 것으로 나타났다. 두 화합물 (AZ12601011 및 AZ12799734)이 래트에서 시험되었다. 현미경 평가에서 두 화합물 중 어느 한 화합물을 이용한 치료에 대한 반응으로 심장 판막 병변이 나타났다. 두 화합물 모두 출혈, 염증, 변성 및 판막 간질 세포의 증식을 특징으로 하는 조직병리학적 심장 판막 병변을 유도하였다. 모든 동물에서 병리학적 성질이 시험된 모든 용량에서 관찰되었으며, 4개의 심장 판막 모두에서 발생하였다. 래트 심장에서 ALK5를 분석한 결과, 판막에서는 발현되었지만, 심근에서는 발현되지 않는 것으로 밝혀졌다. 대조군 동물과 비교하여, ALK5의 단백질 수준은 처리된 동물의 심장 판막에서 변함이 없었다. 이러한 관찰결과는 ALK5를 통한 TGF-β 신호전달이 심장 판막 무결성을 유지하는 데 중요한 역할을 한다는 것을 시사한다 (문헌 [Anderton MJ et al, Induction of Heart Valve Lesions by Small-Molecule ALK5 Inhibitors, Toxicologic Pathology, 39: 916-924, 2011]).

추가로, 또 다른 ALK-5 억제제인 가루니서팁을 래트 및 개 둘 모두에서 시험하였다. 둘 모두에서, 심장 및 대혈관이 독성의 주요 표적 기관인 것으로 확인되었다. LY2157299로 처리된 F344 래트에서의 심혈관 소견으로는 퇴행성 및 염증성 판막 병변 (판막병증(valvulopathy)), 심근 변성 및 괴사, 파열을 동반한 대동맥염(aortitis), 혈관염(vasculitis)/혈관주위염(perivasculitis) 및 심장 중량 증가를 포함하였다 (문헌 [Stauber et al, Nonclinical Safety Evaluation of a Transforming Growth Factor β Receptor I Kinase Inhibitor in Fischer 344 Rats and Beagle Dogs, J Clin Pract. 2014, 4:3]).

과민성 장 질환 ( IBD )

장에서, 많은 면역 및 비면역 세포는 TGF-β1을 생성하고, 거의 모든 점막 세포는 상기 시토카인에 의해 표적화된다. TGF-β1은 잠복-연관 펩티드 (LAP) 및 잠복 TGF-β 결합 단백질을 포함하는 잠복 복합체의 일부로서 분비된다. 최근 연구에서 나온 데이터는 형질전환 성장 인자 β1이 장내 상피 세포 생물학 및 면역 조절에 관여하는 핵심 분자 중 하나라는 것을 분명하게 나타낸다.

이러한 연구는 장의 항상성 유지에서 TGF-β1의 중요한 역할을 강조하고, 상기 시토카인의 기능 결함이 장의 해로운 신호를 유발 및/또는 증폭시키는 원인이 될 수 있다는 것을 시사한다 (문헌 [Troncone E. et al, Transforming Growth Factor-β1/Smad7 in intestinal immunity, inflammation, and Cancer, Front. Immunol. 9:1407, 2018]).

지금까지 연구자들은 장 섬유증을 완화시키고, 억제하는 염증 기전을 연구해 왔다. 그러나, 항염증제는 염증성 장 질환 (IBD)에서 섬유증을 경감시키거나, 또는 치료하는 데 다양한 문제점과 한계를 가지고 있다. 따라서, 섬유화 질환을 치료하기 위해서는 항섬유성 기전에 대한 새로운 접근법이 모색되어야 한다. 수많은 공개문헌에 TGF-β 신호전달과 관련된 분자가 섬유증에 연루되어 있다고 제시되어 있으며, 따라서, IBD에서 장 섬유증의 진행 기전을 조절하는 복잡하고 다양한 신호전달 경로와 상관관계가 있기 때문에, 장 섬유증의 진행에서 중요한 표적이 된다. 따라서, TGF-β 신호전달은 IBD를 포함한 여러 섬유성 질환에서 섬유증을 치료하고, 완화시키는 잠재적인 전략법이다 (문헌 [Yun S. M. et al, The Molecular Mechanism of Transforming Growth Factor-β Signaling for Intestinal Fibrosis: A Mini-Review, Frontiers in Pharmacology, Mini-Review, published: 27 February 2019]; [Binabaj M.M et al, EW -7197 prevents ulcerative colitis-associated fibrosis and inflammation, J Cell Physiol. 2018;1-8]).

안구 질환

형질전환 성장 인자-β (TGF-β)는 원발성 개방각 녹내장(primary open-angle glaucoma: POAG)의 발병기전에 중요한 역할을 할 수 있다. TGF-β는 POAG의 발병기전에 연루되어 있으며, TGF-β 표적화에 대한 잠재적 영역은 생산, 활성화, 하류 신호전달 및 국소 조절을 포함한다. TGF-β 수준 상승은 녹내장 환자의 눈방수(aqueous humor)에서 및 반응성 시신경 성상세포에서 발견된다. 최근 연구에서 다수의 미지의 것들이 밝혀졌지만, 잠재적인 TGF-β 개입 전략법을 디자인하기 위해서는 TGF-β의 세포 신호전달 경로에 대한 더 깊은 이해가 필요하다 (문헌 [Wang, J. et al, Targeting Transforming Growth Factor-b Signaling in Primary Open-Angle Glaucoma, J Glaucoma 2017;26:390-395]).

섬유증식성 병태와 연관된 안구 질환으로는 증식성 유리체망막병증(proliferative vitreoretinopathy)을 동반한 망막 재부착 수술, 인공 수정체 삽입술을 통한 백내장 추출, TGF-β1 과잉 생산과 연관된 녹내장 후 배액 수술을 포함한다.

본 발명의 저자들은 널리 공지된 유의적인 부작용을 회피하는 데 도움이 되는 낮은 전신 노출을 보이는, TGF-β 신호전달 경로의 강력한 억제제, 특히, 형질전환 성장 인자-β 수용체 I/액티빈-유사 키나제 5 (TGFβRI/ALK5)의 억제제로서 편리하게 치환되는 새로운 벤질아미드 유도체를 개발하였다. 따라서, 본 발명은 우수한 치료 창(window)을 제공하는, 전신 노출이 낮은 ALK5 억제제를 개시한다.

본 발명의 요약

그의 측면들 중 하나 (측면 1)에서, 본 발명은 하기 화학식 (I)의 편리하게 치환된 신규한 벤질아미드 유도체, 및 이의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다:

상기 식에서,

- R¹은 독립적으로

a) 할로겐 원자,

b) 1, 2 또는 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C₁-C₆ 알킬,

c) 시아노 기,

d) C₁-C₃알콕시,

e) -COOH로부터 선택되는 1 또는 2개의 기를 나타내고,

-R²는

a) 수소 원자,

b) C₁-C₃ 알킬,

c) C₃-C₄ 시클로알킬로부터 선택되는 기를 나타내고,

- R³은

a) 1, 2 또는 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C₁-C₃ 알킬,

b) 수소 원자,

c) 할로겐 원자로부터 선택되는 기를 나타내고,

- R⁴ 및 R⁵는 독립적으로

a) 수소 원자,

b) 1, 2 또는 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C₁-C₃ 알킬,

c) 할로겐 원자로부터 선택되는 기를 나타내고,

- n은 0, 1 또는 2의 값을 갖는다.

제2 측면에서, 본 발명은 측면 1의 화합물 제조 방법에 관한 것이다.

제3 측면에서, 본 발명은 측면 1의 화합물 및 제약 측면의 희석제 또는 담체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

제4 측면에서, 본 발명은 위장 질환, 예컨대, 염증성 장 질환, 그 중 크론병(Crohn`s disease) 및 궤양성 결장염(ulcerative colitis), 간 섬유증(hepatic fibrosis) 및 암, 구체적으로, 위암, 식도암 및 결장직장암; 섬유성 피부 질환, 예컨대, 경피증(scleroderma), 신원성 섬유화 피부병증(nephrogenic fibrosing dermopathy), 혼합 결합 조직 질환(mixed connective tissue disease), 경화점액수종(scleromyxedema), 경화부종(scleredema), 및 호산구성 근막염(eosinophilic fasciitis); 섬유성 안구 질환, 예컨대, 안구건조증, 연령 관련 황반 변성, 각막 및 결막의 상흔(scarring in the cornea and conjunctiva), 백내장 후 섬유증(post-cataract fibrosis), 증식성 유리체망막병증(proliferative vitreoretinopathy) 및 증식성 당뇨병성 망막병증(proliferative diabetic retinopathy)의 치료에 유용한 작용제로부터 선택되는 치료제를 치료 유효량으로 추가로 포함하는, 상기 기술된 제3 측면에 따른 제약 조성물에 관한 것이다.

제5 측면에서, 본 발명은 형질전환 성장 인자-β 수용체 I (TGFβRI)/ALK5의 억제에 의해 호전될 수 있는 질환, 또는 병리학적 상태, 예컨대, 위장 질환, 예컨대, 염증성 장 질환, 그 중 크론병 및 궤양성 결장염, 간 섬유증 및 암, 구체적으로, 위암, 식도암 및 결장직장암; 섬유성 피부 질환, 예컨대, 경피증, 신원성 섬유화 피부병증, 혼합 결합 조직 질환, 경화점액수종, 경화부종, 및 호산구성 근막염; 섬유성 안구 질환, 예컨대, 안구건조증, 연령 관련 황반 변성, 각막 및 결막의 상흔, 백내장 후 섬유증, 증식성 유리체망막병증 및 증식성 당뇨병성 망막병증의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조에서 측면 1의 화합물의 용도에 관한 것이다.

제6 측면에서, 본 발명은 형질전환 성장 인자-β 수용체 I (TGFβRI)/ALK5의 억제에 의해 호전될 수 있는 질환 또는 병리학적 상태, 예컨대, 위장 질환, 예컨대, 염증성 장 질환, 그 중 크론병 및 궤양성 결장염, 간 섬유증 및 암, 구체적으로, 위암, 식도암 및 결장직장암; 섬유성 피부 질환, 예컨대, 경피증, 신원성 섬유화 피부병증, 혼합 결합 조직 질환, 경화점액수종, 경화부종, 및 호산구성 근막염; 섬유성 안구 질환, 예컨대, 안구건조증, 연령 관련 황반 변성, 각막 및 결막의 상흔, 백내장 후 섬유증, 증식성 유리체망막병증 및 증식성 당뇨병성 망막병증의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다.

제7 측면에서, 본 발명은 예컨대, 위장 질환, 예컨대, 염증성 장 질환, 그 중 크론병 및 궤양성 결장염, 간 섬유증 및 암, 구체적으로, 위암, 식도암 및 결장직장암; 섬유성 피부 질환, 예컨대, 경피증, 신원성 섬유화 피부병증, 혼합 결합 조직 질환, 경화점액수종, 경화부종, 및 호산구성 근막염; 섬유성 안구 질환, 예컨대, 안구건조증, 연령 관련 황반 변성, 각막 및 결막의 상흔, 백내장 후 섬유증, 증식성 유리체망막병증 및 증식성 당뇨병성 망막병증로부터 선택되는 질환의 치료에서 유용한 것으로 공지된 하나 이상의 치료제와, 상기 기술된 제1 측면의 화합물로 이루어진 조합 생성물에 관한 것이다.

제8 측면에서, 본 발명은 형질전환 성장 인자-β 수용체 I (TGFβRI)/ALK5의 억제에 의해 호전될 수 있는 질환 또는 병리학적 상태, 예컨대, 위장 질환, 예컨대, 염증성 장 질환, 그 중 크론병 및 궤양성 결장염, 간 섬유증 및 암, 구체적으로, 위암, 식도암 및 결장직장암; 섬유성 피부 질환, 예컨대, 경피증, 신원성 섬유화 피부병증, 혼합 결합 조직 질환, 경화점액수종, 경화부종, 및 호산구성 근막염; 섬유성 안구 질환, 예컨대, 안구건조증, 연령 관련 황반 변성, 각막 및 결막의 상흔, 백내장 후 섬유증, 증식성 유리체망막병증 및 증식성 당뇨병성 망막병증의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한 측면 1의 화합물에 관한 것이다.

특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물은 그의 극도로 낮은 대사 안정성에 기인하여 경구, 국소 또는 안구 투여 후 불활성 대사산물 형성으로 이어지는, 낮은 전신 노출을 보인다. 상기 이유에서, 이는 특히, 질환, 예컨대, 위장 질환 (염증성 장 질환, 그 중 크론병 및 궤양성 결장염 포함), 간 섬유증 및 암, 구체적으로, 위암, 식도암 및 결장직장암; 섬유성 피부 질환, 예컨대, 경피증, 신원성 섬유화 피부병증, 혼합 결합 조직 질환, 경화점액수종, 경화부종, 및 호산구성 근막염; 섬유성 안구 질환, 예컨대, 안구건조증, 연령 관련 황반 변성, 각막 및 결막의 상흔, 백내장 후 섬유증, 증식성 유리체망막병증 및 증식성 당뇨병성 망막병증 치료에 적합하다.

상기 언급된 바와 같이, 본 발명의 벤질아미드 유도체는 형질전환 성장 인자-β 수용체 I (TGFβRI)/ALK5의 억제제를 이용하는 치료에 의해 쉽게 호전될 수 있는 것으로 공지된 질환, 예컨대, 위장 질환, 예컨대, 염증성 장 질환, 그 중 크론병 및 궤양성 결장염, 간 섬유증 및 암, 구체적으로, 위암, 식도암 및 결장직장암; 섬유성 피부 질환, 예컨대, 경피증, 신원성 섬유화 피부병증, 혼합 결합 조직 질환, 경화점액수종, 경화부종, 및 호산구성 근막염; 섬유성 안구 질환, 예컨대, 안구건조증, 연령 관련 황반 변성, 각막 및 결막의 상흔, 백내장 후 섬유증, 증식성 유리체망막병증 및 증식성 당뇨병성 망막병증의 치료 또는 예방에서 유용하다.

따라서, 본 발명의 유도체 및 이의 제약상 허용되는 염, 및 상기 화합물 및/또는 이의 염을 포함하는 제약 조성물은 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본 발명의 벤질아미드 유도체 또는 이의 제약상 허용되는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 인체의 병리학적 상태 또는 질환을 치료하는 방법에서 사용될 수 있다.

본원에서 사용되는 바, 용어 C_a-C_b 알킬은 a 내지 b개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형 라디칼을 포함한다. 바람직한 라디칼은 1 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는다. 선형 또는 분지형 알킬 기의 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, i-부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸 및 헥실이다.

본원에서 사용되는 바, 용어 선형 또는 분지형 C_a-C_b 알콕시는 산소 원자에 연결된 C_a-C_b 알킬 라디칼을 함유하는 라디칼 (C_xH_2x ₊₁-O-)을 지정하는 데 사용된다. 바람직한 라디칼은 1 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는다. 바람직한 알콕시 라디칼은 예를 들어, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, i-프로폭시를 포함한다.

본원에서 사용되는 바, 용어 할로겐 원자는 염소, 불소, 브롬 및 요오드 원자, 바람직하게는 불소, 염소 및 브롬 원자를 포함한다. 접두사로 사용될 때 용어 할로는 동일한 의미를 갖는다. 단순한 예로서, 할로알킬은 하나 이상의 할로겐 원자에 의해 치환된 알킬을 의미한다.

본원에서 사용되는 바, 본 발명의 일반 구조에 존재하는 원자, 라디칼, 쇄 또는 고리의 일부는 "임의로 치환"된다. 이는 이들 원자, 라디칼, 쇄(chain) 또는 고리가 비치환되거나, 또는 임의의 위치에서 하나 이상, 예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개의 치환기에 의해 치환될 수 있고, 이로써, 원자, 라디칼, 쇄 또는 고리에 결합된 수소 원자가 화학적으로 허용되는 원자, 라디칼, 쇄 또는 고리에 의해 대체되는 것을 의미한다. 2개 이상의 치환기가 존재하는 경우, 각각의 치환기는 동일하거나, 또는 상이할 수 있다.

본원에서 사용되는 바, 용어 제약상 허용되는 염은 제약상 허용되는 산 또는 염기와의 염을 지정하는 데 사용된다. 제약상 허용되는 산으로는 무기산, 예를 들어, 염산, 황산, 인산, 이인산, 브롬화수소산, 요오드화수소산 및 질산, 및 유기산, 예를 들어, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 말산, 만델산, 아스코르브산, 옥살산, 숙신산, 타르타르산, 벤조산, 아세트산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산 또는 p-톨루엔술폰산을 포함한다. 제약상 허용되는 염기는 알칼리 금속 (예컨대, 나트륨 또는 칼륨), 알칼리 토금속 (예컨대, 칼슘 또는 마그네슘) 수산화물, 및 유기 염기, 예를 들어, 알킬 아민, 아릴알킬 아민 및 헤테로시클릭 아민을 포함한다.

본 발명에 따라 바람직한 다른 염은 음이온의 등가물 (X^-n)이 N 원자의 양전하와 회합된 4차 암모늄 화합물이다. X^-n은 예컨대, 예를 들어, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 설페이트, 니트레이트, 포스페이트와 같은 다양한 무기산의 음이온, 또는 예컨대, 예를 들어, 아세테이트, 말레에이트, 푸마레이트, 시트레이트, 옥살레이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 말레이트, 만델레이트, 트리플루오로아세테이트, 메탄술포네이트 및 p-톨루엔술포네이트와 같은 유기산의 음이온일 수 있다. X^-n은 바람직하게, 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 술페이트, 니트레이트, 아세테이트, 말레에이트, 옥살레이트, 숙시네이트 또는 트리플루오로아세테이트로부터 선택되는 음이온이다. 더욱 바람직하게, X^-는 클로라이드, 브로마이드, 트리플루오로아세테이트 또는 메탄술포네이트이다.

화학식 (I)의 화합물에서 본 발명의 한 실시양태에 따라, 각각의 R¹은 독립적으로할로겐 원자를 나타낸다. 바람직한 실시양태에서, n은 0이거나, 또는 n은 1 또는 2이고, 각각의 R¹은 할로겐 원자를 나타낸다. 더욱 바람직한 실시양태에서, n은 1 또는 2이고, 각각의 R¹은 불소 또는 염소 원자를 나타낸다.

본 발명의 한 실시양태에 따라, 화학식 (I)의 화합물에서, R²는 수소 원자를 나타낸다.

본 발명의 한 실시양태에 따라, 화학식 (I)의 화합물에서, R³은 1, 2 또는 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C₁-C₃ 알킬, 및 수소 원자로부터 선택되는 기를 나타낸다. 바람직한 실시양태에서, R³은 수소 또는 C₁-C₃ 알킬을 나타낸다. 더욱 바람직한 실시양태에서, R³은 수소, 메틸 기 또는 에틸 기, 바람직하게, 수소 또는 메틸 기를 나타낸다.

본 발명의 한 실시양태에 따라, 화학식 (I)의 화합물에서, R⁴는 수소 원자를 나타낸다.

본 발명의 한 실시양태에 따라, 화학식 (I)의 화합물에서, R², R⁴및 R⁵는 수소 원자를 나타낸다.

본 발명의 한 실시양태에 따라, 화학식 (I)의 화합물에서, n은 0이거나, 또는 n은 1 또는 2이고, 각각의 R¹은 독립적으로 할로겐 원자를 나타내고, R² _,R⁴및 R⁵는 독립적으로 수소 원자를 나타내고, R³은 메틸 기, 에틸 기 및 수소 원자로부터 선택되는 기를 나타낸다. 바람직한 실시양태에서, n은 0이거나, 또는 n은 1 또는 2이고, 각각의 R¹은 할로겐 원자를 나타내고, R³은 메틸 기를 나타낸다. 더욱 바람직한 실시양태에서, n은 1 또는 2이고, 각각의 R¹은 독립적으로 불소 또는 염소 원자를 나타낸다.

본 발명의 특정 개별 화합물은 하기를 포함한다:

N-벤질-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(4-플루오로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(4-클로로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(4-브로모벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(4-시아노벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(4-메톡시벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(4-메틸벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(4-(tert-부틸)벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-벤질-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(3-메틸벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(3-플루오로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(3-클로로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(3-시아노벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(2-메틸벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(2-메틸벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(2-플루오로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(2-플루오로벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-벤질-2-(3-(6-에틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

2-(3-(6-에틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N-(2-메틸벤질)아세트아미드

N-(4-메틸벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(2-클로로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(2-클로로벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(2,6-디플루오로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(2,6-디플루오로벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(2,6-디메틸벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(2,6-디메틸벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(2-에틸벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

N-(2,6-디클로로벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

4-((2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미도)메틸)벤조산 히드로클로라이드.

본 발명의 화합물은 하기 기술되는 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 방법 설명을 용이하게 하기 위해, 구체적인 예가 사용되었지만, 어느 방식으로든 본 발명의 범주를 제한하지 않는다.

화학식 (I)의 화합물의 합성은 반응식 1에 요약되어 있다.

반응식 1

시약 및 조건:

단계 a) NaH, THF, DMF, 0℃ 내지 RT, 또는 Na₂CO₃, DMF, RT.

일반 화학식 (I)의 화합물은 상응하는 브로모아세트아미드 (III)과의 반응에 의해 4-(3-(피리딘-2-일)-1H-피라졸-4-일)퀴놀린 유도체 (II)로부터 여러 단계에서 제조된다 (WO 2009123316 A1; 문헌 [Chem . Eur . J., 2013,19(32), 10506-10510]). 일부 4-(3-(피리딘-2-일)-1H-피라졸-4-일)퀴놀린 유도체 (II)는 상업적으로 이용가능하고, 다른 것은 반응식 2에 명시되어 있는 바와 같이 여러 단계에서 제조될 수 있다 (문헌 [J. Med. Chem. 2004, 47, 4494-4506]; WO 2004026302 A1).

반응식 2

시약 및 조건:

단계 b) LiHMDS, THF, -60℃ 내지 -10℃.

단계 c) R⁴= H인 화합물. 단계 1. DMF·DMA, AcOH, DMF, RT; 단계 2. N₂H₄·H₂O, RT.

할로겐 원자로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 기에 의해 임의로 치환된 R²= C₃-C₄시클로알킬인 화합물: 단계 d) 하기 반응식 (반응식 2-1)에 따라, R²-CO-N₂H₃, HCl, THF, 40℃.

4-메틸퀴놀린 유도체 (IV)를 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드의 존재하에서 에틸 2-피리딘카르복실레이트 (V)와 축합시켜 화학식 (VI)의 화합물을 제공한다. 유도체 (VI)과 디메틸포름아미드 디메틸아세탈의 반응으로 비단리된 엔아민 중간체를 수득하고, 이를 아세트산의 존재하에서 히드라진과의 반응에 의해 직접 폐환화하여 화학식 (II)의 피라졸을 제공한다.

화학식 (II)의 화합물을 수득하는 또 다른 경로는 하기와 같다:

반응식 2-1

화학식 (IIa)의 피라졸 유도체를 할로겐화하여 상응하는 할로겐화된 화합물을 수득할 수 있다. 상기 화합물은 피라졸 고리의 질소의 보호화 후, 숙신이미드 유도체와 같은 표준 할로겐화 시약을 이용하여 화학식 (IIa)의 화합물을 제공한다. C-C 커플링 후, 피라졸의 질소를 탈보호화하여 화학식 (II)의 유도체를 수득한다. PG = 보호기(protecting group). 보호기는 테트라히드로피란 (THP), tert-부틸옥시카르보닐로 (Boc) 및 트리틸 기 (Tr)로부터 선택된다.

화학식 (III)의 브로모아세트아미드는 반응식 3에 제시된 바와 같이, 화학식 (VIII)의 브로모아세틸 브로마이드와의 반응에 의해 상업적으로 이용가능한 아민 (VII)로부터 1 단계에서 쉽게 합성된다(문헌 [J. Med . Chem. 2009, 52, 6851-6859]).

반응식 3

시약 및 조건:

단계 f) THF, 0℃ 내지 RT; 또는 CH₂Cl₂, DIPEA, 0℃ 내지 RT.

화학식 (VII)의 다른 아민은 상업적으로 이용가능한 것이 아니고, 반응식 4에 제시된 바와 같이, 여러 단계에서 제조될 수 있다.

화학식 (VII)의 화합물은 하기 반응식 4에 기술된 바와 같이, X가 할로겐 원자인 화학식 (IX)의 화합물로부터 합성된다.

반응식 4

시약 및 조건:

X: 할로겐 원자

단계 g) 프탈이미드, K₂CO₃, DMF 50℃,

단계 h) N₂H₄·H₂O, EtOH, 환류.

가브리엘(Gabriel) 합성의 고전적 조건을 이용하여 화학식 (VII)의 아민을 제조하며; 이는 프탈이미드의 접합체 염기 및 알킬 할라이드 (IX)의 반응, 이어서, 후속하여, 히드라진을 이용하여 프탈로일 기를 제거하여 1차 아민 (VII)을 수득하는 것을 포함한다.

약어

본 출원에서는 하기 약어가 사용되며, 상응하는 정의는 하기와 같다:

AcOH: 아세트산

ACVR2B: 액티빈 A 수용체, 타입 IIB

ALKn: 액티빈 수용체-유사 키나제 n

ATP: 아데노신 트리포스페이트

Boc₂O: t-부틸 디카르보네이트

Clint: 고유 클리어런스

DIPEA: N,N-디이소프로필에틸아민

DMA: 디메틸아세트아미드

DMAP: 4-디메틸아미노피리딘

DME: 디메톡시에탄

DMF: 디메틸포름아미드

DMSO: 디메틸 술폭시드

Et₃N: 트리에틸아민

EtOAc: 에틸 아세테이트

EtOH: 에탄올

FBS: 우태아 혈청

¹H-NMR: 양성자 핵자기 공명

K₂EDTA: 에틸렌디아민테트라아세트산 디포타슘 염

KOtBu: 포타슘 tert-부톡시드

LC: 액체 크로마토그래피

LiHMDS: 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드

LLOQ: 정량 하한

MeCN: 아세토니트릴

MeOH: 메탄올

MS: 질량 분석법

N₂H₄·H₂O: 히드라진 일수화물

NaCMC: 소듐 카르복시메틸 셀룰로스

NMP: N-메틸-2-피롤리돈

PCy₃: 트리시클로헥실포스핀

Pd(OAc)₂: 아세트산팔라듐(II)

Pd/C: 탄소상 팔라듐

PPh₃: 트리페닐포스핀

Rt: 머무름 시간

RT: 실온

TGFβ: 형질전환 성장 인자-β

THF: 테트라히드로푸란

THF:EtOH: 테트라히드로푸란:에탄올

UPLC: 초고성능 액체 크로마토그래피

UV: 자외선

약리학적 활성

시험관내 효소 검정법: TGFβR -1 키나제 활성 억제

ADP- Glo 키나제 검정 키트 (프로메가(Promega) V9101) 및 TGFβR -1 키나제 효소 시스템 (프로메가 V4092)을 이용하여 백색 384-마이크로플레이트 낮은 플랜지 (Corning 3572)에서 인간 TGFβR-1 억제 실험을 수행하였다. 검정 완충제로서 키트에 의해 공급되는 반응 완충제를 사용하여, 시험 화합물 및 표준 가루니서팁 (케이맨(Cayman) 15312), 50 ng/웰 TGFβR-1 키나제 및 50 μM ATP를 최종 10 ㎕/웰로 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 120 min 동안 부드럽게 진탕시키면서 인큐베이션시키고, 인큐베이션 후, 10 ㎕의 ADP-Glo 시약을 첨가하고, RT에서 40 min 동안 부드럽게 진탕시키면서 인큐베이션시켰다. 20 ㎕ 키나제 검출 시약을 첨가하고, 플레이트를 RT에서 30 min 동안 부드럽게 진탕시키면서 인큐베이션시켰다. 퍼킨 엘머 엔스파이어 멀티모드(Perkin Elmer EnSpire Multimode) 플레이트 판독기에서 발광 (1000 ms)을 측정하였다.

결과

표 1은 본 발명의 일부 화합물에 대한, 하기 기술된 검정법의 결과를 보여주는 것이다.

세포내 TGF -베타 키나제 활성 ( ALK -5) 측정

A549 세포주에서 실험을 수행하였다. 96 웰 마이크로플레이트 (벡톤 디킨슨(Becton Dickinson) 353072) 상의, L-글루타민 (시그마(Sigma) G7513), 페니실린/스트렙토마이신 (인비트로겐(Invitrogen) 11058) 및 FBS (시그마 F9665)로 보충된 200 ㎕의 배양 배지 (시그마 D6046)에 30000개의 세포를 시딩하였다. 16시간 후, 배지를 무혈청 배지로 교체하였다. 억제제 리간드로서 가루니서팁 (케이맨 CAY-15312) 및 ALK-5의 활성제로서 재조합 인간 TGF-β2 (R&D 시스템즈(R&D Systems) 302-B2-002)를 이의 상응하는 웰에 첨가하고, 알파스크린알파LISA® 슈어파이어® 울트라™ p-SMAD3(Ser423/425) 키트(AlpahscreenAlphaLISA® SureFire® Ultra™ p-SMAD3(Ser423/425) Kit) (퍼킨 엘머 ALSU-PSM3-A500)의 설명서에 따라 인큐베이션시켰다.

결과

표 2는 본 발명의 일부 화합물에 대한, 하기 기술된 검정법의 결과를 보여주는 것이다.

상기 표에 기술된 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 화합물은 형질전환 성장 인자-β 수용체 I (TGFβRI/ALK5)의 강력한 억제제이다.

혈장 약동학적 검정법

본 연구의 목적은 수컷 스프라그 돌리(Sprague Dawley) 래트에서 단일 경구 투여 후 본 발명의 일부 화합물의 혈장 약동학적 성질을 조사하는 것이었다. 본 연구에서는 화합물당 래트 3마리를 사용하였다. 0.5% 트윈(Tween)-80 및 99.5% NaCMC (RO 물 중 0.5% w/v) 에 각 화합물의 현탁액 제제를 5 mg/kg으로 경구 경로에 의해 동물에게 투여하였다. 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 12 및 24 hr (p.o.)에 각 시점에서 항응고제로서 K₂EDTA 용액을 함유하는 표지된 마이크로원심분리 튜브에 래트 3마리로 이루어진 세트로부터 혈액 샘플을 수집하였다. 전혈을 원심분리하여 혈장 샘플을 분리하고, 생체분석시까지 -70 ± 10℃ 미만에서 보관하였다. 아세토니트릴을 사용하여 단백질 침전에 의해 분석하기 위해 모든 샘플을 프로세싱하고, 목적에 부합하는 LC-MS/MS 방법을 이용하여 (LLOQ = 1.01 ng/mL) 분석하였다. Phoenix WinNonlin®(버전 7.0)의 비구획 분석 도구를 사용하여 약동학적 파라미터를 계산하였다.

일부 실시예에서 수득한 주요 약동학적 파라미터가 하기 표 3에 제시되어 있다.

상기 제시된 PK 데이터로부터, 본 발명의 화합물은 경구 투여 후 낮은 전신 노출을 보인다는 결론을 내릴 수 있다.

대사 안정성 검정법

본 검정법에서는 테부-제노테크(Tebu-Xenotech)로부터의 인간 및 래트 재조합 마이크로솜을 사용하였다. 이는 0.5 mg/ml의 단백질을 함유한다. 96-웰 마이크로플레이트의 각 웰에 하기 정량을 첨가하였다.

플레이트를 37℃에서 인큐베이션시키고, 0, 10, 20, 40 및 60분에 75 ㎕ 샘플을 채취하였다. 샘플을 마이크로플레이트로 옮기고, 마이크로솜을 불활성화시키기 위해 75 ㎕ 아세토니트릴을 첨가하고, 크로마토그래피 조건을 개선시키기 위해 30 ㎕의 H₂O를 첨가하고, 4℃에서 보관하였다. 모든 샘플을 채취했을 때, 플레이트를 15℃에서 30 min 동안 46000 g로 원심분리하였다. 상청액을 채취하고, UPLC-MS/MS에 주입하였다.

정지상: 역상 액쿼티 UPLC(Reverse phase Acquity UPLC)® BEH C18 1.7 ㎛ (2.1 mm x 50 mm) (워터스(Waters)). 이동상: A: 0.1% 포름산; B: 아세토니트릴 + 0.1% 포름산. 유속: 0.6 ml/분. 사용된 크로마토그래피 장비는 UPLC QSM 워터스 액쿼티였다. UV 피크 면적으로부터 화합물 농도를 계산하였다. 반응은 10 ng/ml 내지 0.3125 ng/ml 범위에서 선형이었다. 평가된 각 시점에서의 잔류 화합물의 로그로부터 대사 안정성을 계산하였다.

데이터 분석

데이터를 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism)® 소프트웨어를 사용하여 1상 지수 감쇠 방정식으로 피팅할 것이다. 소프트웨어에 의해 생성된 반감기 (t_1/ ₂)를 기록할 것이다. 하기 공식 (여기서, k=감쇠 속도 상수 (min^-1))을 사용하여 고유 클리어런스를 계산할 것이다.

상기의 분석된 실시예는 간 마이크로솜 검정법에서 불안정하였고, 평가된 2개 종 모두에서 높은 클리어런스를 나타냈다.

대사산물의 확인 연구에서, 화합물 A가 확인되었다. 상기 화합물은 2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트산이고, 하기 화학식을 갖는다:

화합물 A는 그 중에서 특히 실시예 9, 15, 20, 22, 24 및 26의 주요 대사산물인 것으로 확인되었다.

TGFβR-1에 대한 화합물 A의 활성을 상기 기술된 조건에 따라 수행하였고, IC₅₀은 800 nM 초과인 것으로 나타났다. 세포내 TGF-베타 키나제 활성 (ALK-5) 또한 측정하였고, IC₅₀은 5000 nM 초과인 것으로 나타났다

본 발명의 화합물은 그의 극도로 낮은 대사 안정성에 기인하여 경구, 국소 또는 안구 투여 후, 낮은 전신 노출을 보이는 바, 이에, 상기 화합물은 특히, 질환, 예컨대, 위장 질환, 예컨대, 염증성 장 질환, 그 중 크론병 및 궤양성 결장염, 간 섬유증 및 암, 구체적으로, 위암, 식도암 및 결장직장암; 섬유성 피부 질환, 예컨대, 경피증, 신원성 섬유화 피부병증, 혼합 결합 조직 질환, 경화점액수종, 경화부종, 및 호산구성 근막염; 섬유성 안구 질환, 예컨대, 안구건조증, 연령 관련 황반 변성, 각막 및 결막의 상흔, 백내장 후 섬유증, 증식성 유리체망막병증 및 증식성 당뇨병성 망막병증 치료에 적합하다.

따라서, 본 발명의 유도체 및 그의 제약상 허용되는 염, 및 상기 화합물 및/또는 그의 염을 포함하는 제약 조성물은 인체의 장애 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본 발명의 벤질아미드 유도체 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 인체의 장애를 치료하는 방법에서 사용될 수 있다.

본 발명은 또한 활성 성분으로서 적어도 화학식 (I)의 벤질아미드 유도체, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 다른 치료제, 제약상 허용되는 부형제, 예컨대, 담체 또는 희석제와 함께 공동으로 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 활성 성분은 제제의 성질, 및 추가 희석이 적용 이전에 이루어지는지 여부에 의존하여 조성물의 0.001중량% 내지 99중량%, 바람직하게, 0.01중량% 내지 90중량%를 포함할 수 있다.

바람직하게, 화학식 (I)의 화합물, 제약상 허용되는 염 및 그의 조성물은 경구, 국소, 안구, 직장 또는 경피 투여에 적합한 형태로 구성된다.

본 발명의 조성물을 형성하기 위해 활성 화합물 또는 상기 화합물의 염과 혼합되는 제약상 허용되는 부형제는 그 자체로 널리 공지되어 있고, 사용되는 실제 부형제는 특히 조성물을 투여하는 의도된 방법에 의존한다.

본 발명의 화학식 (I)의 화합물, 그의 제약상 염 및 조성물은 바람직하게는 주사 및 경구 투여에 적합하다. 이러한 경우, 경구 투여용 조성물은, 모두가 본 발명의 화합물을 함유하는 정제, 지연형 정제, 설하 정제, 캡슐 또는 액체 제제, 예컨대, 혼합물, 엘릭시르, 시럽 또는 현탁제 형태를 취할 수 있으며; 상기 제제는 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.

조성물의 제조에 사용될 수 있는 희석제는 원하는 경우, 착색제 또는 향미제와 함께 활성 성분과 상용성인 액체 및 고체 희석제를 포함한다. 정제 또는 캡슐은 2 내지 500 mg의 활성 성분 또는 등가량의 그의 염을 편리하게 함유할 수 있다.

경구적 사용에 적합한 액체 조성물은 액제(solution) 또는 현탁제 형태일 수 있다. 액제는 예를 들어, 수크로스와 함께 공동으로 시럽을 형성하는 활성 화합물의 가용성 염 또는 다른 유도체의 수용액일 수 있다. 현탁제는 현탁화제 또는 향미제와 함께, 물과 함께 공동으로 본 발명의 불용성 활성 화합물 또는 이의 제약상 허용되는 염을 포함할 수 있다.

비경구 주사용 조성물은 가용성 염으로부터 제조될 수 있으며, 이는 동결 건조될 수 있거나, 그렇지 않을 수 있고, 발열원(pyrogen)이 없는 수성 매질 또는 다른 적절한 비경구 주사액 중에 용해될 수 있다.

유효 용량은 보통 1일당 활성 성분 2-2000 mg 범위이다. 1일 투여량은 1일당 1회 이상의 처리로, 바람직하게, 1 내지 4회의 처리로 투여될 수 있다.

본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 예시될 것이다. 하기는 예시를 위해 제공되며, 어느 방식으로든 본 발명의 범주를 제한하지 않는다. 본 발명의 화합물의 합성은 중간체의 제조를 포함하는 하기 실시예에 의해 예시되며, 이는 어느 방식으로든 본 발명의 범주를 제한하지 않는다.

실시예

일반. 시약, 용매 및 출발 생성물은 상업적 공급원으로부터 입수하였다. "농도"라는 용어는 부치(Buchi) 회전증발기를 사용한 진공 증발을 지칭한다. 명시된 경우, 반응 생성물을 명시된 용매 시스템을 이용하여 실리카겔 40-63 ㎛ 상에서 "플래시" 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 배리안 머큐리(Varian Mercury) 300 분광계에서 분광 데이터를 측정하였다. 얼라이언스(Alliance) 2795 분리 모듈, UV-Vis W 2996 검출기 및 마이크로매스 ZQ 200이 장착된 워터스 기기에서 HPLC-MS를 수행하였다.

중간체 1 : 에틸 6- 메틸피콜리네이트

에탄올 (50 mL) 중 6-메틸피콜린산 (2.0 g, 14.58 mmol)의 용액에 황산 (1.2 mL)을 첨가하고, 혼합물을 22시간 동안 가열 환류한 후, 이어서, 농축 건조시켰다. 잔류물을 물 (50 mL) 중에 용해시키고, pH 8-9가 될 때까지, 중탄산나트륨을 첨가하고, 에틸 아세테이트 (3x40 mL)로 추출하였다. 혼합된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 황색 오일 (1.88 g, 78%)을 수득하였다.

중간체 2 : 1 -(6- 메틸피리딘 -2-일)-2-(퀴놀린-4-일)에탄-1-온

-60℃에서 냉각된 테트라히드로푸란 (10 mL) 중 레피딘 (0.500 g, 3.49 mmol)의 용액에 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (10.5 mL, 10.47 mmol. 테트라히드로푸란 중 1 M 용액)를 첨가하고, 반응 혼합물을 저온에서 30분 동안 교반하였다. 테트라히드로푸란 (5 mL) 중 에틸 6-메틸피콜리네이트 (0.634 g, 3.83 mmol) 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새도록 교반하여, 온도가 -10℃에 도달하도록 하였다. 반응 혼합물을 염화암모늄 (포화 수용액)으로 켄칭하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (60 mL) 중에 용해시키고, 염화암모늄 (2 x 50 mL, 포화 수용액)으로 세척하였다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 반응 생성물을 실리카겔 상에서 플래시 크로마토그래피 (40% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오렌지색 오일 (0.423 g, 46%)을 수득하였다.

중간체 3 : 1 -(6-에틸피리딘-2-일)-2-(퀴놀린-4-일)에탄-1-온

HPLC-MS: Rt 10.643 m/z 276.7[M+H]⁺.

중간체 4 : 4 -(3-(6- 메틸피리딘 -2-일)-1H- 피라졸 -4-일) 퀴놀린

디메틸포름아미드 (5 mL) 중 1-(6-메틸피리딘-2-일)-2-(퀴놀린-4-일)에탄-1-온 (0.420 g, 1.60 mmol) 용액에 아세트산 (0.330 mL, 5.76 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드-디메틸 아세탈 (0.640 mL, 4.80 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 히드라진 일수화물 (1.75 mL, 35.84 mmol)을 첨가하고, 용액을 50℃에서 1시간 동안 가열하였다. 냉각된 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (30 mL)로 추출하였다. 유기층을 물 (20 mL)로 및 염수 (2x20 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 미정제 고체를 아세토니트릴로부터 재결정화하여 황색 고체 (0.335 g, 73%)를 수득하였다.

중간체 5 : 4 -(3-(6-에틸피리딘-2-일)-1 H - 피라졸 -4-일)퀴놀린

중간체 6 : (2- 에틸페닐 ) 메탄아민

외부 얼음/물 배쓰(bath) 외부 얼음/H₂O 배쓰의 도움으로 5℃로 냉각된, THF (8 mL) 중 2-에틸벤조니트릴 (0.20 g, 1.52 mmol)의 용액에 LiAlH4 (0.28 mg, 7.62 mmol)를 소량씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에 도달하게 하고, 21시간 동안 교반하였다. H2O (3 mL) 및 NaOH (1 mL. 수용액 36%)를 혼합물에 첨가하고, 5 min 동안 교반하였다. 현탁액을 EtOAc (15 mL)로 세척하면서, 셀라이트(Celite)를 통해 여과하였다. 모액(mother liquor)을 농축 건조시켜 핑크색 오일 (140 mg)을 수득하였다. 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 7 : tert -부틸 4-((1,3- 디옥소이소인돌린 -2-일) 메틸 ) 벤조에이트

N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 프탈이미드 (0.19 g, 1.32 mmol) 및 탄산칼륨 (0.22 g, 1.59 mmol)의 현탁액에 tert-부틸 4-(클로로메틸)벤조에이트 (0.30 g, 1.32 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 20시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온에서 냉각시키고, 물 (30 mL) 및 염수 (20 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (2x15 mL)로 추출하였다. 혼합된 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 백색 고체 (0.42 g, 95%)를 수득하였다.

중간체 8 : tert -부틸 4-( 아미노메틸 ) 벤조에이트

에탄올 (5 mL) 중 tert-부틸 4-((1,3-디옥소이소인돌린-2-일)메틸)벤조에이트 (0.41 g, 1.23 mmol)의 현탁액에 히드라진 일수화물 (0.12 g, 2.46 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 왕성하게 교반하면서 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 염산 용액 6 M (22 %)을 첨가하고, 용액을 추가로 5분 동안 가열하였다. 물 (10 mL), 에틸 아세테이트 (10 mL) 및 10% 염산 수용액을 첨가하여 pH 1에 도달하게 하였다. 층을 분리하고, 유기층을 10% 염산 수용액 (2x5 mL)으로 추출하였다. 혼합된 수성 추출물을 24% 수산화나트륨 수용액으로 염기화하고, 에틸 아세테이트 (2x10 mL)로 추출하였다. 혼합된 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 연한 황색 오일 (0.12 g, 48%)을 수득하였다.

중간체 9 : N- 벤질 -2- 브로모아세트아미드

외부 얼음/물 배쓰의 도움으로 5℃로 냉각된, THF (15 mL) 중 벤질아민 (1.5 g, 14.00 mmol)의 용액에 브로모아세틸 브로마이드 (1.46 mL, 16.80 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 22 h 동안 교반하고, 실온에 도달하게 하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 모액을 농축 건조시켰다. 미정제 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 크로마토그래피 (30%→50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 백색 고체 (1.33 g, 42%)를 수득하였다.

HPLC-MS: Rt 8.327 m/z 226.0-228.1 [M-H]^-.

중간체 10부터 중간체 26까지의 하기 중간체를 중간체 9에 대해 기술된 방법에 따라 제조하였다.

중간체 10 : 2 - 브로모 - N -(4- 플루오로벤질 )아세트아미드

HPLC-MS: Rt 8.608 m/z 244.0-246.0 [M-H]^-.

중간체 11 : 2 - 브로모 - N -(4- 클로로벤질 )아세트아미드

HPLC-MS: Rt 9.273 m/z 262.2 [M-H]^-.

중간체 12 : 2 - 브로모 - N -(4- 브로모벤질 )아세트아미드

본 중간체를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 13 : 2 - 브로모 - N -(4-메톡시 벤질 )아세트아미드

HPLC-MS: Rt 6.125 m/z 258.1-259.9 [M+H]⁺.

중간체 14 : 2 - 브로모 - N -(4- 메틸벤질 )아세트아미드

중간체 15 : 2 - 브로모 - N -(4-( tert -부틸) 벤질 )아세트아미드

HPLC-MS: Rt 10.406 m/z 282.0-284.2 [M-H]^-.

중간체 16 : 2 - 브로모 - N -(3- 메틸벤질 )아세트아미드

중간체 17 : 2 - 브로모 - N -(3- 플루오로벤질 )아세트아미드

중간체 18 : 2 - 브로모 - N -(3- 클로로벤질 )아세트아미드

중간체 19 : 2 - 브로모 - N -(3- 시아노벤질 )아세트아미드

중간체 20 : 2 - 브로모 - N -(2- 메틸벤질 )아세트아미드

중간체 21 : 2 - 브로모 - N -(2- 플루오로벤질 )아세트아미드

중간체 22 : 2 - 브로모 - N -(2- 클로로벤질 )아세트아미드

중간체 23 : 2 - 브로모 - N -(2,6- 디플루오로벤질 )아세트아미드

중간체 24 : 2 - 브로모 - N -(2- 클로로벤질 )아세트아미드

중간체 25 : 2 - 브로모 - N -(2- 에틸벤질 )아세트아미드

HPLC-MS: Rt 9.526 m/z 253.9-256.0 [M-H]^-.

중간체 166 : 2 - 브로모 - N -(2,6- 디클로로벤질 )아세트아미드

HPLC-MS: Rt 9.466 m/z 294.0 [M-H]^-.

중간체 27 : 2 - 브로모 - N -(4- 시아노벤질 )아세트아미드

외부 얼음/물 배쓰의 도움으로 5℃로 냉각된, 디클로로메탄 (4 mL) 중 4-(아미노메틸)벤조니트릴 히드로클로라이드 (0.150 g, 0.890 mmol)의 현탁액에 Et₃N (0.150 mL, 1.067 mmol) 및 브로모아세틸 브로마이드 (0.082mL, 0.934 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30 min 동안 교반하고, 실온에 도달하게 하고, 디클로로메탄 (10 mL)으로 희석시키고, H₂O (15 mL)로 세척하였다. 수층을 디클로로메탄(10 mL)으로 추출하고, 혼합된 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 크로마토그래피 (50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 베이지색 고체 (0.118 g, 52%)를 수득하였다.

하기 중간체 28을 중간체 27에 대하여 기술된 방법에 따라 제조하였다.

중간체 28 : tert -부틸 4-((2- 브로모아세트아미도 ) 메틸 ) 벤조에이트

중간체 29 : tert -부틸 4-((2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미도)메틸)벤조에이트

본 중간체를 실시예 1에 대하여 기술된 방법에 따라 제조하였다.

HPLC: Rt 18.982, 99.36%.

실시예

실시예 1 : N - 벤질 -2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

아세토니트릴 (2 mL) 중 N-벤질-2-브로모아세트아미드 (0.100 g, 0.441 mmol)의 용액에 K₂CO₃ (0.076 g, 0.550 mmol) 및 4-(3-(피리딘-2-일)-1H-피라졸-4-일)퀴놀린 (0.100 g, 0.367 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 6 h 동안 환류시켰다. N-벤질-2-브로모아세트아미드 (0.017 g, 0.073 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 추가로 1 h 동안 환류시키고, 실온에 도달하게 하였다. H₂O (10 mL)를 첨가하고, EtOAc (3x5 mL)로 추출하였다. 혼합된 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 콤비플래시(Combiflash) 시스템 (5→100%, H₂O/MeOH:MeCN 1:1)을 이용하여 C18 크로마토그래피에 의해, 및 실리카겔 상에서 플래시 크로마토그래피 (3% MeOH/CH₂Cl₂)에 의해 정제하여 백색 고체 (0.080 g, 52%)를 수득하였다.

실시예 1에 대해 기술된 방법을 사용하여 상응하는 4-(3-(피리딘-2-일)-1H-피라졸-4-일)퀴놀린 유도체로부터 하기 실시예 2-4를 합성하였다.

실시예 2 : N -(4- 플루오로벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 3 : N -(4- 클로로벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 4 : N -(4- 브로모벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예5 : N -(4- 시아노벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

외부 얼음/물 배쓰의 도움으로 5℃로 냉각된, 테트라히드로푸란 (3 mL) 중 4-(3-(피리딘-2-일)-1H-피라졸-4-일)퀴놀린 (0.060 g, 0.220 mmol)의 현탁액에 60% 수소화나트륨 (0.012 g, 0.308 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 같은 온도에서 30 min 동안 교반하였다. 테트라히드로푸란 (1 mL) 및 디메틸포름아미드 (0.3 mL)의 혼합물 중 N-(4-시아노벤질)-2-브로모아세트아미드 (0.078 g, 0.308 mmol)의 용액을 적가하고, 혼합물을 40 min 동안 교반하였다. 추가로 1.5 h 동안 교반하면서, N-(4-시아노벤질)-2-브로모아세트아미드 (0.011 g, 0.048 mmol)의 다른 일부를 첨가하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석시키고, EtOAc (3x10 mL)로 추출하였다. 혼합된 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 상에서 플래시 크로마토그래피 (2→4→5% MeOH/CH₂Cl₂)에 의해, 및 콤비플래시 시스템 (5→100% H₂O/MeCN)을 이용하여 C18 크로마토그래피에 의해 백색 고체 (0.016 g, 16%)를 수득하였다.

실시예 5에 대해 기술된 방법을 사용하여 하기 실시예 6-29를 합성하였다.

실시예 6 : N -(4-메톡시벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 7 : N -(4- 메틸벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 8 : N -(4-( tert -부틸) 벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H -피라졸-1-일)아세트아미드

실시예 9 : N - 벤질 -2-(3-(6- 메틸피리딘 -2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 10 : N -(3- 메틸벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 11 : N -(3- 플루오로벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 12 : N -(3- 클로로벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H- 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 13 : N -(3- 시아노벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H- 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 14 : N -(2- 메틸벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 15 : N -(2- 메틸벤질 )-2-(3-(6- 메틸피리딘 -2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H -피라졸-1-일)아세트아미드

실시예 16 : N -(2- 플루오로벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 17 : N -(2- 플루오로벤질 )-2-(3-(6- 메틸피리딘 -2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

실시예 18 : N - 벤질 -2-(3-(6-에틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H- 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 19 : 2 -(3-(6-에틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H- 피라졸 -1-일)-N-(2-메틸벤질)아세트아미드

실시예 20 : N -(4- 메틸벤질 )-2-(3-(6- 메틸피리딘 -2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H -피라졸-1-일)아세트아미드

실시예 21 : N -(2- 클로로벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 22 : N -(2- 클로로벤질 )-2-(3-(6- 메틸피리딘 -2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H -피라졸-1-일)아세트아미드

실시예 23 : N -(2,6- 디플루오로벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H -피라졸-1-일)아세트아미드

실시예 24 : N -(2,6- 디플루오로벤질 )-2-(3-(6- 메틸피리딘 -2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H -피라졸-1-일)아세트아미드

실시예 25 : N -(2,6- 디메틸벤질 )-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H- 피라졸 -1-일)아세트아미드

실시예 26 : N -(2,6- 디메틸벤질 )-2-(3-(6- 메틸피리딘 -2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H -피라졸-1-일)아세트아미드

실시예 27 : N -(2- 에틸벤질 )-2-(3-(6- 메틸피리딘 -2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H -피라졸-1-일)아세트아미드

실시예 28 : N -(2,6- 디클로로벤질 )-2-(3-(6- 메틸피리딘 -2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드

실시예 29 : 4 -((2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1 H - 피라졸 -1-일) 아세트아미도 )메틸)벤조산 히드로클로라이드

염산 (9 mL. 디옥산 중 4 M 용액) 중 tert-부틸 4-((2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미도)메틸)벤조에이트 (0.106 g, 0.204 mmol)의 현탁액을 80℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응물을 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 콤비플래시 시스템 (5→100% H₂O:MeCN)을 이용하여 C18 크로마토그래피에 의해 백색 고체 (0.033 g, 33%)를 수득하였다.

Claims

하기 화학식 (I)의 화합물, 및 이의 제약상 허용되는 염:

상기 식에서,
- R¹은 독립적으로
a) 할로겐 원자,
b) 1, 2 또는 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 선형 또는 분지형 C₁-C₆ 알킬,
c) 시아노 기,
d) C₁-C₃알콕시,
e) -COOH로부터 선택되는 1 또는 2개의 기를 나타내고,
-R²는
a) 수소 원자,
b) C₁-C₃ 알킬로부터 선택되는 기를 나타내고,
- R³은
a) 수소 원자,
b) 1, 2 또는 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C₁-C₃ 알킬,
c) 할로겐 원자로부터 선택되는 기를 나타내고,
- R⁴ 및 R⁵는 독립적으로
a) 수소 원자,
b) 1, 2 또는 3개의 할로겐 원자에 의해 임의로 치환된 C₁-C₃ 알킬,
c) 할로겐 원자로부터 선택되는 기를 나타내고,
- n은 0, 1 또는 2의 값을 갖는다.
제1항에 있어서, R², R⁴및 R⁵가 수소 원자를 나타내는 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, n이 0이거나, 또는 n이 1 또는 2이고, 각각의 R¹이 독립적으로 할로겐 원자를 나타내는 화합물.
제3항에 있어서, n이 1 또는 2이고, 각각의 R¹이 할로겐 원자를 나타내는 화합물.
제4항에 있어서, n이 1 또는 2이고, 각각의 R¹이 불소 및 염소 원자로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, R³이 수소 원자, 에틸 기 및 메틸 기로부터 선택되는 기를 나타내는 화합물.
제6항에 있어서, R³이 메틸 기를 나타내는 화합물.
제1항에 있어서, R², R⁴및 R⁵가독립적으로수소 원자를 나타내고, n이 0이거나, 또는 n이 1 또는 2이고, 각각의 R¹이 할로겐 원자를 나타내고, R³이 수소 원자, 에틸 기 및 메틸 기로부터 선택되는 기를 나타내는 화합물.
제8항에 있어서, n이 1 또는 2이고, 각각의 R¹이 불소 및 염소 원자로 구성된 군으로부터 선택되고, R³이 메틸 기를 나타내는 화합물.
제1항에 있어서,
N-벤질-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(4-플루오로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(4-클로로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(4-브로모벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(4-시아노벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(4-메톡시벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(4-메틸벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(4-(tert-부틸)벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-벤질-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(3-메틸벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(3-플루오로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(3-클로로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(3-시아노벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(2-메틸벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(2-메틸벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(2-플루오로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(2-플루오로벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-벤질-2-(3-(6-에틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
2-(3-(6-에틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)-N-(2-메틸벤질)아세트아미드
N-(4-메틸벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(2-클로로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(2-클로로벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(2,6-디플루오로벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(2,6-디플루오로벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(2,6-디메틸벤질)-2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(2,6-디메틸벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(2-에틸벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
N-(2,6-디클로로벤질)-2-(3-(6-메틸피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
4-((2-(3-(피리딘-2-일)-4-(퀴놀린-4-일)-1H-피라졸-1-일)아세트아미도)메틸)벤조산 히드로클로라이드 중 하나인 화합물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 희석제 또는 담체를 포함하는 제약 조성물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 형질전환 성장 인자-β 수용체 I (TGFβRI/ALK5)의 억제에 의해 쉽게 호전될 수 있는 질환 또는 병리학적 상태(pathological condition)의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한 화합물.
제12항에 있어서, 질환 또는 병리학적 상태가 위장 질환, 예컨대, 염증성 장 질환, 그 중 크론병(Crohn`s disease) 및 궤양성 결장염(ulcerative colitis), 간 섬유증(hepatic fibrosis) 및 암, 구체적으로, 위암, 식도암 및 결장직장암; 섬유성 피부 질환, 예컨대, 경피증(scleroderma), 신원성 섬유화 피부병증(nephrogenic fibrosing dermopathy), 혼합 결합 조직 질환(mixed connective tissue disease), 경화점액수종(scleromyxedema), 경화부종(scleredema), 및 호산구성 근막염(eosinophilic fasciitis); 섬유성 안구 질환, 예컨대, 안구건조증, 연령 관련 황반 변성, 각막 및 결막의 상흔(scarring in the cornea and conjunctiva), 백내장 후 섬유증(post-cataract fibrosis), 증식성 유리체망막병증(proliferative vitreoretinopathy) 및 증식성 당뇨병성 망막병증(proliferative diabetic retinopathy)으로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 화합물, 및 위장 질환, 예컨대, 염증성 장 질환, 그 중 크론병 및 궤양성 결장염, 간 섬유증 및 암, 구체적으로, 위암, 식도암 및 결장직장암; 섬유성 피부 질환, 예컨대, 경피증, 신원성 섬유화 피부병증, 혼합 결합 조직 질환, 경화점액수종, 경화부종, 및 호산구성 근막염; 섬유성 안구 질환, 예컨대, 안구건조증, 연령 관련 황반 변성, 각막 및 결막의 상흔, 백내장 후 섬유증, 증식성 유리체망막병증 및 증식성 당뇨병성 망막병증으로 구성된 군으로부터 선택되는 질환의 치료 및/또는 예방을 위해 사용되는 치료제를 포함하는 조합물(combination).
형질전환 성장 인자-β 수용체 I (TGFβRI/ALK5)의 억제에 의해 쉽게 호전될 수 있는 질환 또는 병리학적 상태의 치료용 및/또는 예방용 의약의 제조를 위한, 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 화합물의 용도.
제15항에 있어서, 질환 또는 병리학적 상태가 위장 질환, 예컨대, 염증성 장 질환, 그 중 크론병 및 궤양성 결장염, 간 섬유증 및 암, 구체적으로, 위암, 식도암 및 결장직장암; 섬유성 피부 질환, 예컨대, 경피증, 신원성 섬유화 피부병증, 혼합 결합 조직 질환, 경화점액수종, 경화부종, 및 호산구성 근막염; 섬유성 안구 질환, 예컨대, 안구건조증, 연령 관련 황반 변성, 각막 및 결막의 상흔, 백내장 후 섬유증, 증식성 유리체망막병증 및 증식성 당뇨병성 망막병증으로 구성된 군으로부터 선택되는 용도.
질환 또는 병리학적 상태의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 형질전환 성장 인자-β 수용체 I (TGFβRI/ALK5)의 억제에 의해 쉽게 호전될 수 있는 질환 또는 병리학적 상태를 치료 및/또는 예방하는 방법.
제17항에 있어서, 질환 또는 병리학적 상태가 위장 질환, 예컨대, 염증성 장 질환, 그 중 크론병 및 궤양성 결장염, 간 섬유증 및 암, 구체적으로, 위암, 식도암 및 결장직장암; 섬유성 피부 질환, 예컨대, 경피증, 신원성 섬유화 피부병증, 혼합 결합 조직 질환, 경화점액수종, 경화부종, 및 호산구성 근막염; 섬유성 안구 질환, 예컨대, 안구건조증, 연령 관련 황반 변성, 각막 및 결막의 상흔, 백내장 후 섬유증, 증식성 유리체망막병증 및 증식성 당뇨병성 망막병증으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.