KR100849660B1

KR100849660B1 - 바실러스 나토 균을 이용한 인삼 사포게닌 고농도 함유인삼제제 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR100849660B1
Application number: KR1020060113772A
Authority: KR
Inventors: 김재영; 조순현; 고성권
Original assignee: 주식회사 에이치브이엘에스; 고성권
Priority date: 2006-11-17
Filing date: 2006-11-17
Publication date: 2008-08-01
Also published as: KR20080044942A

Abstract

본 발명은 바실러스 나토 (Bacillus natto) 균을 이용한 인삼 사포게닌 고농도 함유 인삼제제 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 삶은 콩에 인삼 또는 인삼엑스를 10 ∼ 30 중량% 함유하게 혼합하여 전배양한 바실러스 나토 (Bacillus natto) 종배양액 1~5%를 접종한 후, 42 ~ 48 ℃에서 24 ~ 96시간 동안 발효시킨 다음 동결건조 하여 인삼 사포게닌을 고농도로 함유하는 인삼제제를 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 전체 중량에 대하여 기능성 물질인 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)이 0.1 ~ 10.5 중량%, 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol)이 0.01 ~ 1.2 중량% 함유되므로, 종래 가공인삼에 비해 우수한 기능성을 갖는 인삼제제를 제공할 수 있다.

인삼 사포게닌, 바실러스 나토 (Bacillus natto), 프로토파낙사디올, 프로토파낙사트리올

Description

바실러스 나토 균을 이용한 인삼 사포게닌 고농도 함유 인삼제제 및 이의 제조방법{Ginseng preparations containing a high concentration of ginseng sapogenin using a Bacillus natto and method thereof}

기술분야

본 발명은 바실러스 나토　(Bacillus natto) 균을 이용한 인삼 사포게닌 고농도 함유 인삼제제 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

종래기술

고려인삼(Panax ginseng)은 동양 최고의 본초서인 신농본초경의 상품에 수재되어 있는 대보원기요약으로 우리나라의 대표적인 특산물이다. 고려인삼은 30 여종의 인삼 사포닌(saponins), 항암 작용을 갖는 폴리아세틸렌, 항산화 작용을 갖는 페놀계 화합물, 방사선 방어 작용을 갖는 인삼 단백질, 면역조절 작용을 갖는 산성 다당체 등을 함유하고 있다. 특히, 고려인삼의 주된 생리활성성분으로 알려진 인삼 사포닌은 진세노사이드라 불리는데, 동경대학의 시바타(Shibata) 그룹에 의해 그 화학구조가 확인되었다. 진세노사이드는 비당체(aglycone)의 알콜성 OH의 수에 따라 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)과 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol) 계 사포닌으로 분류되고 C-3 및 C-20 또는 C-6 및 C-20의 OH기에 글루코오스(glucose), 람노스(rhamnose), 자일로오스(xylose), 아라비노스(arabinose)와 같은 당류가 에테르 결합되어 인삼 사포닌 배당체를 구성한다. 프로토파낙사디올 그룹의 주요 인삼 사포닌 배당체 성분은 진세노사이드 Rb₁이고, 이는 중추신경 억제작용을 나타내며, 프로토파낙사트리올 그룹의 주요 인삼 사포닌 배당체 성분은 진세노사이드 Rg₁으로 중추신경 흥분작용을 나타내고, 고려인삼의 어댑토젠(adaptogen) 활성에 주요하게 기여하는 것으로 알려져 있다.

고려인삼은 프로토파낙사디올 그룹과 프로토파낙사트리올 그룹의 함량비(디올/트리올)와 진세노사이드 Rb₁과 진세노사이드 Rg₁의 함량비(Rb₁/Rg₁)가 각각 1.96과 3.14를 나타내므로, 지나친 중추신경 억제작용을 나타내는 서양삼의 2.48 및 25.96에 비해 균형적이면서도, 흥분적이기 보다는 진정적인 보기작용을 나타낸다. 따라서, 고려인삼은 한방 약리학적인 효능으로 보원기와 더불어 안정신(安精神) 작용의 진세노사이드 Rb₁과 익지(益智)의 진세노사이드 Rg₁이 균형적이면서도 안정신 작용이 강화된, 진정한 의미에서의 현대인들의 최고의 강장제라고 사료된다.

지금까지 확인된 고려인삼의 약리 활성으로는 심장과 혈관의 보강, 혈액기능의 회복, 혈류 개선, 동맥경화 및 고혈압의 예방, 위장의 조절기능 강화, 간기능 촉진 및 숙취 제거 효과, 항피로 및 항스트레스 작용, 노화방지 작용, 두뇌활동 촉진 작용, 항염 활성, 알레르기성 질환 치료, 부인병, 당뇨병, 항방사선 작용, 정력 증강, 항종양 작용, 학습능력의 향상, 산화지질의 생성 억제, 창상치료 촉진, 면역 능력 향상, AIDS 바이러스 증식 억제효과 및 단백질 합성능력의 촉진 등이 보고되었다.

또한, 밭에서 채굴한 수삼을 증건한 것을 홍삼, 껍질과 잔뿌리를 제거한 후 일광에 자연 건조한 것을 백삼, 잔뿌리를 자연 건조한 것을 미삼이라고 한다. 특히, 홍삼은 열에 의해 생성되어 소량 존재하는 진세노사이드 Rg₂, Rg_3,Rh_1,Rh_2,Rh₄와 같은 특유성분이 암 예방 및 암전이 억제작용, 혈압강하 작용 및 항산화 작용이 있다고 하여 홍삼만의 특·장점으로 주목받고 있다.

이상 설명한 바와 같은 고려인삼은 오랜 기간 최고의 건강제품으로 인식되어 왔지만, 현재는 세계 인삼시장에서 3% 정도의 시장 점유율을 차지하고 있는 실정이다. 따라서, 국내 인삼산업의 혁신을 위해서는 고부가가치 인삼 제품의 개발이 필요하다. 그럼에도 불구하고 지금까지의 인삼 제제 및 홍삼 제제는 단순 추출물 수준의 제제가 주류를 이루어 강장제 정도의 수준에서 개발되었다. 그러나, 보다 전문적이며 기능성을 갖는 인삼 제제를 개발하기 위해서는, 무엇보다 생리활성이 강하면서 안전성이 확보된 기능성 물질이 고농도로 함유된 인삼 제제의 개발이 필수적이라 할 것이다.

이러한 이유로 최근에 들어 인삼의 성분 중 홍삼특유 인삼 사포닌을 다량 함유한 인삼제제를 만들기 위한 방법이 시도되고 있다. 1966년 발표된 시바타(Shibata) 논문에 의하면 사포닌을 초산 등 약산으로 가수분해하면 C-20의 글리코시드 결합(진세노사이드 Rb₁, Rb₂, Rc, Rd)만 가수분해되고, 프로사포게닌(20(R&S)- 진세노사이드 Rg₃)이 얻어진다는 사실이 발표되었으나, 이는 단지 표준품을 만드는데 그쳤다. 이와 함께 다른 연구자들은 진세노사이드 Rg₃를 다량 함유한 인삼제제를 만들기 위해 물리적인 반응인 고온처리 혹은 생화학적 반응인 효소 처리하는 방법 등을 사용하고 있다.

고온 처리하는 방법으로 예를 들면 인삼을 고온에서 가열처리함으로써 약효가 증강된 가공인삼에 관한 것으로 인삼을 120 ~ 180 ℃의 고온에서 0.5 ~ 20시간동안 가열처리하여 진세노사이드 (Rg₃＋Rg₅)/(Rc＋Rd＋Rb₁＋Rb₂)의 비율이 1 이상이 되도록 약효성분을 증가시킨 가공인삼제품 및 이 가공식품이 함유하는 음료조성물에 관한 특허(대한민국특허 제192678호)와 사포닌 글리코사이드 분해효소를 이용하여 인삼 사포닌의 당기를 가수분해하여 희소한 항암사포닌(진세노사이드 Rh₁, Rh₂)을 제조하는 방법에 관한 특허(대한민국특허 제329259호)등이 있으며 현재 시중에 제품으로는 선삼 그리고 신삼으로 시판되고 있다.

이와 같은 홍삼특유성분(진세노사이드 Rg₂, Rg_3,Rh_1,Rh_2,Rh₄)은 천연물화학적으로 백삼 및 수삼에 존재하는 인삼 사포닌 배당체(진세노사이드 Rb₁, Rb₂, Rc, Rd, Re, Rf, Rg₁)의 담마란 트리테르페노이드 구조에 결합된 당(sugar)의 일부분이 유리된 형태의 인삼 프로사포게닌 성분이라고 할 수 있다.

즉, 인삼 사포닌을 열 또는 초산 등 약산으로 가수분해하면 C-20의 글로코사이드 결합(glycosidic bond)만 가수분해되고 프로사포게닌(prosapogenin)이 얻어지 는데 따라서 진세노사이드-Rb₁, -Rb₂, -Rc, -Rd등은 동일한 프로사포게닌인 20(R&S)-진세노사이드 Rg₃을 생성시킨다. 프로토파낙사트리올계 사포닌인 진세노사이드 Re, 20-진세노사이드 Rf 및 진세노사이드 Rg₁등도 C-20 글리코사이드 결합이 열 또는 약산 가수분해에 의해서 서로 다른 종류의 프로사포게닌이 얻어진다. 즉, 진세노사이드 Re의 경우 20(R&S)-진세노사이드 Rg₂가 생성된다.

그러나, 인삼 사포닌 담마란 트리테르페노이드 기본 핵에 당이 결합되어 있지 않는 인삼 사포게닌(프로토파낙사디올, 프로토파낙사트리올)을 고농도로 함유하는 제제의 개발은 아직 이루어지지 않고 있다.

이에, 본 발명자들은 인삼 사포게닌(프로토파낙사디올, 프로토파낙사트리올)과 같은 기능성 물질을 고농도로 함유하는 인삼 제제를 제조하기 위하여 지속적인 연구를 수행해 오던 중 약산으로 인삼을 처리하는 가공방법과는 달리, 삶은 콩에 인삼을 10 ∼ 30 중량% 함유하게 혼합하여 전배양한 바실러스 나토 (Bacillus natto) 종배양액 1~5%를 접종한 후 42 ~ 48 ℃, 24 ∼ 96시간 발효시켜 동결건조하여 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)이 인삼제제 동결건조물 중량에 대하여 0.1 ∼ 10.5 중량% 및 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol)이 인삼제제 동결건조물 중량에 대하여 0.01% ∼ 1.2 중량%가 함유됨을 알게 되어 인삼 사포게닌을 고농도로 함유하는 인삼제제를 개발함으로써 본 발명을 완성하였다.

이와 같이, 본 발명은 기존 인삼 성분보다 세포친화성이 월등히 높아 약효가 증강된 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)을 인삼제제 동결건조물 중량에 대하여 0.1 ∼ 10.5 중량%, 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol)을 인삼제제 동결건조물 중량에 대하여 0.01% ∼ 1.2 중량%의 높은 농도로 함유하는 인삼제제와 이를 경제적으로 제조하는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

본 발명은 콩 자연 발효를 이용해 인삼 내의 유효성분의 변화 및 인삼 희귀성분의 함량을 극대화함과 동시에 콩 중의 유효성분이 인삼제제에 잔존함으로서 효력의 증강 및 보조역할까지 하도록 한 것에 그 특징이 있다.

본 발명에 따른 인삼제제의 제조방법을 더욱 구체적으로 설명하면 다음과 같다.

삶은 콩에 인삼 또는 인삼엑스를 혼합하여 전배양한 바실러스 나토 (Bacillus natto) 종배양액 1 ~ 5%를 접종한 후 42 ~ 48 ℃, 24 ∼ 96시간 동안, 더욱 바람직하기로는 24 ~ 48시간동안, 발효시킨 다음 동결건조하여 인삼제제를 얻는다. 바실러스 나토 (Bacillus natto) 종배양액 1 ~ 5%은 주배양액에 바실러스 균주가 1~5부피% 함유하도록 접종하여 준비한다. 상기 발효시 발효온도를 벗어난 경우에는 발효 반응이 저해되는 문제가 있다. 또한, 상기 발효시 발효시간이 96시간을 초과하면 최종 수득제품에서 목적하는 유효성분이 극미량 얻어지며, 24시간을 미만으로 처리하면 역시 유효성분의 함량이 저하되며 제조공정의 운영상 어려움이 많다. 이때, 콩에 인삼을 혼합하는 비율은 콩 중량에 대하여 인삼 10 ~ 30 중량%가 바람직하며, 더욱 바람직하게는 10 ~ 15 중량%를 혼합 사용한다. 이때, 10 중 량% 미만이면 인삼 유효 목적 성분의 수득율이 저하하는 문제가 있고, 30 중량%를 초과하면 발효 반응이 저해되는 문제가 있다.

본 발명의 방법으로 제조된 인삼제제는 유효성분인 프로토파낙사디올이 인삼제제 동결건조물 중량에 대하여 0.1 ~ 10.5 중량%, 프로토파낙사트리올이 인삼제제 동결건조물 중량에 대하여 0.01 ~ 1.2 중량%를 함유함을 확인하였으며, 이로서 혈액순환 개선, 발기부전 개선, 피로회복, 고혈압, 동맥경화, 항 혈전, 뇌졸중 치료 및 예방, 그리고 뇌기능 개선 용도 등에 유용하게 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, 어느 부분으로부터 채취된 인삼을 사용하는가는 본 발명의 효과를 좌우하는 중요인자가 될 수 없다. 따라서, 본 발명에서 인삼이라 함은 고려인삼(Panax ginseng)을 비롯한 서양삼(Panax quinquefolium), 삼칠삼(Panax notoginseng)과 같은 파낙스(Panax) 속 식물의 지상 또는 지하부 생약, 예를 들어, 미삼, 백삼, 홍삼, 수삼, 태극삼, 인삼엽, 인삼열매 및 이들을 가공 처리한 경우도 포함하는 것이며, 이는 인삼과 관련된 반복적인 실험으로부터 확인된 사실에 기초한 것이다.

또한, 본 발명에서 특징적으로 사용하는 콩(soybean, Glycine max)은 콩과에 속하는 식물의 씨 또는 꼬투리를 사용할 수 있다.

본 발명의 인삼제제를 통상의 분말화 공정을 거쳐 분말화하거나 환 또는 캡슐형태로 제조하여 보존기간을 연장시킬 수 있으며, 음료 형태의 액상 인삼의 제조도 가능하다.

이하, 본 발명은 다음 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명하겠는바, 본 발 명이 이에 한정되는 것은 아니다.

제조예 1: 인삼엑스의 제조

밀폐용기에 백삼 50 g과 95% 에탄올(주정) 250 ㎖을 넣어 76 ℃ 수욕상에서 4시간씩 4회 추출, 여과하여 수득한 인삼엑스를 감압 건조하여 인삼엑스를 제조하였다.

제조예 2: 백삼분말의 제조

백삼을 분쇄기에 넣어 고운 분말로 분쇄하여 백삼 분말을 제조하였다.

제조예 3: 홍삼분말의 제조

홍삼을 분쇄기에 넣어 고운 분말로 분쇄하여 홍삼 분말을 제조하였다.

제조예 4: 미삼분말의 제조

미삼을 분쇄기에 넣어 고운 분말로 분쇄하여 미삼 분말을 제조하였다.

제조예 5: 서양삼분말의 제조

서양삼을 분쇄기에 넣어 고운 분말로 분쇄하여 서양삼 분말을 제조하였다.

제조예 6: 인삼엽분말의 제조

건조 인삼엽을 분쇄기에 넣어 고운 분말로 분쇄하여 인삼엽 분말을 제조하였다.

제조예 7: 인삼엑스 액의 제조

밀폐용기에 백삼 50 g 과 95% 에탄올(주중) 250 ml을 넣어 76℃ 수욕상에서 4시간씩 4회 추출, 여과하고 농축하여 인삼엑스를 제조하였다.

실시예 1

8시간 삶은 콩 200 g에 백삼분말 30 g을 잘 혼합하여 바실러스 나토 (Bacillus natto) 종배양액 1~5부피%를 접종한 후 42 ℃에서 24시간 발효하였다. 수득한 인삼제제을 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻었고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

실시예 2

8시간 삶은 콩 200 g에 백삼분말 30 g을 잘 혼합하여 바실러스 나토 종배양액 1~5%를 접종한 후 42 ℃에서 48시간 발효하였다. 수득한 인삼제제을 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

실시예 3

8시간 삶은 콩 200 g에 백삼분말 30 g을 잘 혼합하여 바실러스 나토 종배양액 1~5%를 접종한 후42 ℃에서 72시간 발효하였다. 수득한 인삼제제를 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

실시예 4

8시간 삶은 콩 200 g에 백삼분말 30 g을 잘 혼합하여 바실러스 나토 종배양액 1~5%를 접종한 후 42 ℃에서 96시간 발효하였다. 수득한 인삼제제를 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻었고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

실시예 5

8시간 삶은 콩 200 g에 홍삼분말 30 g을 잘 혼합하여 바실러스 나토 종배양액 1~5%를 접종한 후 42 ℃에서 24시간 발효하였다. 수득한 인삼제제를 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

실시예 6

8시간 삶은 콩 200 g에 미삼분말 30 g을 잘 혼합하여 바실러스 나토 종배양액 1~5%를 접종한 후 44 ℃에서 24시간 발효하였다. 수득한 인삼제제를 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻었고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

실시예 7

8시간 삶은 콩 200 g에 서양삼분말 30 g을 잘 혼합하여 바실러스 나토 종배양액 1~5%를 접종한 후 44 ℃에서 24시간 발효하였다. 수득한 인삼제제를 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻었고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

실시예 8

8시간 삶은 콩 200 g에 인삼엽분말 30 g을 잘 혼합하여 바실러스 나토 종배양액 1~5%를 접종한 후 44 ℃에서 24시간 발효하였다. 수득한 인삼제제를 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻었고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

실시예 9

8시간 삶은 콩 200 g에 인삼엑스 30 g을 잘 혼합하여 바실러스 나토 종배양액 1~5%를 접종한 후 44 ℃에서 24시간 발효하였다. 얻은 인삼제제를 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻었고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

실시예 10

8시간 삶은 콩 200 g에 백삼분말 20 g을 잘 혼합하여 바실러스 나토 종배양액 1~5%를 접종한 후 42℃에서 24시간 발효하였다. 얻은 인삼제제를 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻었고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

실시예 11

8시간 삶은 콩 200 g에 백삼분말 60 g을 잘 혼합하여 바실러스 나토 종배양액 1~5%를 접종한 후 42 ℃에서 24시간 자연발효하였다. 수득한 인삼제제를 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻었고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

실시예 12

바실러스 나토 의 액체배양

5L 발효조에 배양액 3L가 되도록 하기 조성의 배양액을 넣었다. 배양액 조성은 배양액 리터당 4g의 포테이토 인퓨젼 솔리드 (potato infusion solids), 20g의 덱스트로오스 이다. 상기 배지를 스팀을 이용하여 121℃에서 20분간 멸균한 다음, 여기에 바실러스 나토의 종배양액 150ml을 가하고 배양액의 pH는 7.1 내지 7.3, 온도는 40℃ 내지 42℃, 통기량은 0.1 내지 1.0 VVM으로 유지하면서 12~24시간 동안 호기배양을 수행하였다. 배양이 종결된 후, 200g의 인삼엑스를 넣고, 상기 조건을 유지하면서 6시간 호기배양을 수행하였다. 배양이 종결된 후, 0.45u 카트리지 필터를 통과하여 여과하고, 그 여액을 동결건조하여 기능성 인삼 분말 170g을 얻었다.

실시예 13

바실러스 나토 의 액체배양

5L 발효조에 배양액 3L가 되도록 하기 조성의 배양액을 넣었다. 배양액 조성은 배양액 리터당 4g의 포테이토 인퓨젼 솔리드, 20g의 덱스트로오스이다. 상기 배지를 스팀을 이용하여 121℃에서 20분간 멸균한 다음, 여기에 바실러스 나토의 종배양액 150ml을 가하고 배양액의 pH는 7.1 내지 7.3, 온도는 40℃ 내지 42℃, 통기 량은 0.1 내지 1.0 VVM으로 유지하면서 12~24시간 동안 호기배양을 수행하였다. 배양이 종결된 후, 200g의 인삼엑스를 넣고, 상기 조건을 유지하면서 12시간 호기배양을 수행하였다. 배양이 종결된 후, 0.45u 카트리지 필터를 통과하여 여과하고, 그 여액을 동결건조하여 기능성 인삼 분말 170g을 얻는다.

비교예 1

백삼 50 g에 95% 에탄올 250 ㎖를 가하여 76 ℃에서 2 시간동안 2 회 추출하였다. 여액을 감압 하에 농축시키고 동결 건조시켜 갈색의 추출물을 수득했다.

비교예 2

8시간 삶은 콩 200 g에 백삼분말 30 g을 잘 혼합하여 48 ℃에서 120시간 자연 발효하였다. 수득한 인삼청국장을 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻었고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

비교예 3

8시간 삶은 콩 200 g에 백삼분말 30 g을 잘 혼합하여 42 ℃에서 24시간 자연발효하였다. 수득한 인삼제제을 동결 건조시켜 갈색의 무정형의 덩어리를 얻었고, HPLC 법에 준하여 분석하였다.

실험예 1: HPLC법을 통한 인삼 사포게닌 성분 분석

① 실험방법

검체를 각각 50 g씩 취하여 에테르로 3 회 처리한 후, 수가용부를 수포화 부탄올로 3 회 처리하고, 얻어진 n-부탄올 층을 감압 농축하여 조(crude) 사포닌으로 하였다(시바타법). 얻어진 조 사포닌을 HPLC법에 의하여 정량하였으며, 그 결과를 다음 표 1, 2, 3 및 4에 나타내었다.

② HPLC 분석조건

각 인삼 사포닌 성분은 1 ㎎/㎖(1000 ppm)를 기준으로 검량선을 작성하였고, 각 시료는 10 ㎎/㎖(10000 ppm)로 조제하여 주입하였다.

이때 HPLC 조건은 다음과 같다:

HPLC 모델명: Alltech Binary Gradient HPLC system Model 627

칼럼: Prevail Carbohydrate ES column (제조사: Alltech)

검출기: ELSD detector(제조사: Alltech)

온도: 실온

이동상 : Solvent A - ACN : Water : IPA = 80 : 5 : 15

Solvent B - ACN : Water : IPA = 67 : 21 : 12

시간	0	28	35	45	50	51	57	58	65
%B	10	85	80	75	90	100	25	10	10

유속 : 0.8 ㎖/min

표 1. 인삼제제의 진세노사이드 함량

구분	제제	비교예 1	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4	비교예２	비교예3
진세노사이드 (단위: 중량%)	PPD	0	1.37159	0.23989	0.15730	0.11535	0.00686	0.00843
	PPT	0	0.12654	0.01124	0.01432	0.01584	0.00426	0.00635
	Rg₁	0.20786	0	0.01185	0	0.00194	0.00316	0.00423
	Rf	0.04965	0	0	0	0	0	0
	Re	0.16321	0	0.00229	0.00280	0	0.00232	0.00258
	Rd	0.14359	0	0.02280	0.05983	0.25952	0.10329	0.10214
	Rc+Rb₂	0.46540	0	0.00267	0.00670	0.00935	0.00689	0.00542
	Rb₁	0.46352	0	0	0	0	0	0
* PPD - protopanaxadiol, PPT - protopanaxatriol, Rg₁ - ginsenoside Rg₁, Rf - ginsenoside Rf, Re - ginsenoside Re, Rd - ginsenoside Rd, Rc - ginsenoside Rc, Rb₂ - ginsenoside Rb₂, Rb₁ - ginsenoside Rb₁

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 백삼 추출물(비교예 1) 및 본 발명의 방법에 따라 얻은 인삼제제(실시예)으로부터 시바타법에 의하여 얻어진 조사포닌을 대상으로 HPLC법에 의해 각종 진세노사이드의 함량을 분석한 결과, 백삼 추출물에는 인삼 사포게닌 성분인 프로토파낙사디올 및 프로토파낙사트리올이 전혀 검출되지 않았음에 비해, 본 발명의 인삼제제에서는 다량의 프로토파낙사디올 및 프로토파낙사트리올이 검출되었다. 특히, 실시예 1의 경우 프로토파낙사디올의 함량이 인삼제제 동결건조물 중량에 대하여 1.37159 중량%로, 총 사포닌 중에 91.55%의 높은 함량비를 나타내었고, 실시예 2의 경우에도 인삼제제 동결건조물 중량에 대하여 프로토파낙사디올의 함량이 0.23989 중량%로, 총 사포닌 중에 82.51%의 높은 함량비를 나타내었다. 그러나, 바실러스 나토 (Bacillus natto) 종배양액 1~5%를 접종하지 않고 자연발효를 선택한 비교예 2와 3은 낮은 농도의 인삼 사포게닌을 함유하였다.

표 2.

구분	제제	실시예 5	실시예 6	실시예 7	실시예 8	실시예 9
진세노사이드 (단위: 중량%)	PPD	1.03450	5.12240	5.05678	6.78923	10.45200
	PPT	0.10563	0.50112	0.42345	1.00200	1.16450
	Rg₁	0	0.01267	0.00366	0.15583	0.15583
	Rf	0	0	0	0	0
	Re	0	0.00432	0.02569	1.98331	0.25003
	Rd	0	0.03248	0.09948	0.43620	1.56222
	Rc+Rb₂	0	0.00320	0.19832	0.24563	1.75630
	Rb₁	0	0	0	0	0.78885
* PPD - protopanaxadiol, PPT - protopanaxatriol, Rg1 - ginsenoside Rg1, Rf - ginsenoside Rf, Re - ginsenoside Re, Rd - ginsenoside Rd, Rc - ginsenoside Rc, Rb₂ - ginsenoside Rb₂, Rb₁ - ginsenoside Rb₁

상기 표 2의 결과에서 실시예 5는 실시예 1과 비슷한 함량을 나타냈으나, 실시예 6과 7은 프로토파낙사디올의 함량이 인삼제제 동결건조물 중량에 대하여 5.12240%, 5.05678%로 프로토파낙사디올의 생성이 크게 증가함을 알 수 있다. 더욱이 실시예 8과 9는 인삼제제 동결건조물 중량에 대하여 6.78923%, 10.452%로 고농도의 프로토파낙사디올의 함량을 나타냈다.

표 3.

구분	제제	실시예 10	실시예 11	실시예 12	실시예 13	비교예3
진세노사이드 (단위: 중량%)	PPD	1.02400	0.25470	5.12800	15.25600	0.00843
	PPT	0.10221	0.01330	0.26430	1.54330	0.00635
	Rg₁	0	0.01170	0.00412	0.00212	0.00423
	Rf	0	0	0	0	0
	Re	0	0.00232	0.00623	0.00523	0.00258
	Rd	0	0.02730	0.0232	0.00122	0.10214
	Rc+Rb₂	0	0.00324	0.	0.	0.00542
	Rb₁	0	0	0	0	0
* PPD - protopanaxadiol, PPT - protopanaxatriol, Rg₁ - ginsenoside Rg₁, Rf - ginsenoside Rf, Re - ginsenoside Re, Rd - ginsenoside Rd, Rc - ginsenoside Rc, Rb₂ - ginsenoside Rb₂, Rb₁ - ginsenoside Rb₁

상기 표 3의 결과에서 실시예 10의 경우는 실시예 1과 비슷한 함량을 나타냈으며, 실시예 11은 실시예 10에 비해 인삼 사포게닌 함량이 현저히 떨어졌으나, 혈액순환 개선, 발기부전 개선, 피로회복, 고혈압, 동맥경화, 항 혈전, 뇌졸중 치료 및 예방, 또는 뇌기능 개선 등의 약효 발휘가 가능한 사포제닌의 유효한 함량을 얻을 수 있었다. 특히, 자연발효를 선택한 비교예 3은 현저히 낮은 인삼 사포게닌 함량을 보여주었으나, 액체배양 발효한 실시예 12와 13은 고농도의 인삼 사포게닌 함유량을 나타냈다.

따라서, 본 발명은 삶은 콩에 인삼 또는 인삼엑스를 10 ∼ 30 중량% 함유하게 혼합하여 Bacillus natto 종배양액 1~5%를 접종한 후 42 ~ 48 ℃, 24 ∼ 96시간 발효시켜 동결건조하여 인삼 사포게닌을 고농도로 함유하는 인삼제제를 제조함으로써, 기능성 물질인 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)을 인삼제제 동결건조 중량에 대하여 0.1 ∼ 10.5 중량%, 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol)을 인삼제제 동결건조 중량에 대하여 0.01 ∼ 1.2 중량%를 함유하는 인삼제제를 제조할 수 있음을 확인할 수 있었다. 또한 Bacillus natto를 액체 배양하여 인삼엑스를 발효함으로써 기능성 물질인 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)을 인삼 동결건조 중량에 대하여 5.1 ∼ 15.3 중량%, 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol)을 인삼 동결건조 중량에 대하여 0.3 ∼ 1.5 중량%를 함유하는 인삼제제를 제조할 수 있음을 확인할 수 있었다.

이상에서 상술한 바와 같이, 본 발명은 세포 친화성이 높은 기능성 물질인 인삼 사포게닌인 프로토파낙사디올 및 트로토파낙사트리올을 고농도로 함유하는 인삼제제를 간단하게 제조할 수 있다.

Claims

삶은 콩에 인삼 또는 인삼엑스를 혼합하고 전배양한 바실러스나토 (Bacillus natto) 종배양액 1 ~ 5%를 접종하여 42 ~ 48 ℃, 24 ∼ 96시간 발효시킨 후 동결건조 하여 인삼제제를 제조하는 방법으로서, 동결건조 중량에 대하여 프로토파낙사디올(protopanaxadiol) 0.1 ∼ 10.5 중량%, 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol) 0.01 ∼ 1.2 중량%가 함유된 것을 특징으로 하는 인삼제제의 제조방법.
제 1 항에 있어서, 인삼 또는 인삼엑스를 콩의 중량에 대하여 10 ∼ 30 중량% 혼합하는 것을 특징으로 하는 인삼제제의 제조방법.
제 2 항에 있어서, 인삼 또는 인삼엑스를 콩의 중량에 대하여 10 ∼ 15 중량% 혼합하는 것을 특징으로 하는 인삼제제의 제조방법.
제 1 항에 있어서, 발효는 24 ~ 48시간동안 수행하는 것을 특징으로 하는 인삼제제의 제조방법.
제 1 항에 있어서, 상기 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)이 1 ∼ 10.5 중량%, 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol)이 0.1 ∼ 1.2 중량% 함유된 것을 특징으로 하는 인삼제제의 제조방법.
청구항 1 내지 4 중에서 선택된 어느 한 항에 의해 제조된 인삼제제로서, 인삼제제 동결건조 중량에 대하여 프로토파낙사디올(protopanaxadiol) 0.1 ∼ 10.5 중량%, 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol) 0.01 ∼ 1.2 중량%가 함유된 것을 특징으로 하는 인삼제제.
제 6 항에 있어서, 상기 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)이 1 ∼ 10.5 중량%, 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol)이 0.1 ∼ 1.2 중량% 함유된 것을 특징으로 하는 인삼제제.
바실러스 나토 (Bacillus natto)균을 액체 배양하여 인삼엑스를 첨가한 후에 다시 배양하여 상기 프로토파낙사디올(protopanaxadiol)이 5.1 ∼ 15.3 중량%, 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol)이 0.3 ∼ 1.5 중량% 함유된 것을 특징으로 하는 인삼 제제.