KR100829057B1 - 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품조성물 및 그제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, (a)프로폴리스 원괴를 주정과 혼합하고 이 혼합물을 항온수조에서 교반하고 잔사를 분리기로 분리하여 프로폴리스를 추출하는 단계, (b)상기 (a)단계에서 추출된 프로폴리스에서 알콜을 제거하고 급속 냉동기에 1~2시간 정치하여 밀납과 수분을 제거하여 연질의 프로폴리스를 얻는 단계, (c)상기 (b)단계에서 얻어진 연질의 프로폴리스에 리신(1ysine) 물질을 첨가하여 무알콜 수용성 프로폴리스를 얻는 단계, (d)한약재를 증류수와 배합하여 중탕기에서 끓여 한약액을 추출하는 단계, (e)상기 (c)단계에서 제조된 무알콜 수용성 프로폴리스 2ℓ와 상기 (d)단계에서 추출된 한약액을 1ℓ~2ℓ를 첨가하여 혼합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.

이와 같은, 무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품조성물 및 그 제조방법에 의하면, 천연약재에서 유래한 것으로 부작용이 없으며 당뇨를 현저하게 억제하므로 당뇨 및 관련 질환의 개선용 식품 성분 등에 다양하게 이용할 수 있는 효과가 얻어지며, 주변에서 흔히 구할 수 있는 다양한 한약재를 첨가, 혼합함으로써 다양한 배합의 혼합제품의 생산할 수 있고 그에 따른 그에따른 인체에 다양한 기능 효과를 갖는 하는 혈당저하 식품조성물을 얻을 수 있다.

무알콜 수용성 프로폴리스, 지구자, 혈당저하

Description

프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품조성물 및 그 제조방법{Anti-diabetic food composition comprising extracts from natural herbal materials and propolis and process for preparing the same}

도 1은 본 발명에 따라 무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품조성물을 제조하는 방법을 나타낸 순서도.

도 2는 본 발명에 따른 흰쥐의 약물 투여기간에 다른 체중의 변화를 나타낸 그래프.

도 3은 본 발명에 따른 흰쥐의 약물 투여기간에 따른 혈당량의 변화를 나타낸 그래프.

도 4는 본 발명에 따른 구강 부하 검사(Oral Blood Glucocs Tolerance Test)의 혈당량 변화를 나타낸 그래프.

도 5는 본 발명의 T-CHO(Total cholesterol)와 TG(Triglyceride) 검색에 따른 혈청지질치의 변화를 나타낸 그래프

도 6은 본 발명의 췌장의 랑거한스섬과 랑거한스섬 내 β세포에 대한 인슐린-병리조직학적 변화를 나타내는 광학현미경으로 본 사진.

본 발명은 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 특히 무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재에서 추출된 추출물을 혼합, 배합한 혈당저하 식품조성물의 제조방법에 관한 것이다.

최근 급속한 생활수준의 향상으로 고칼로리 음식의 과다 섭취, 운동부족 및 산업지식 정보사회의 고도화에 따른 스트레스로 인하여 질병양상도 점점 성인병 위주로 서구화되고 있다, 대표적인 성인병의 예로 고혈압, 당뇨병, 비만증, 고지혈증 등을 언급할 수 있으며 특히 당뇨병은 모든 만성 혈관질환의 원인이 되고 있다.

당뇨병은 췌장의 β세포에서 분비되는 인슐린이 부족하거나 그 기능을 제대로 발휘하지 못하여 체내에서 포도당이 에너지원으로 이용되지 못하고 혈액 내에 고농도로 남아있다가 소변으로 배설되는 질환으로, 당뇨병은 형태에 따라 여러가지로 분류할 수 있으며, 세계보건기구에서는 인슐린 의존형 당뇨병과 인슐린 비의존형 당뇨병으로 분류한다. 인슐린 의존성 당뇨병은 대부분 20세이하의 어린나이에 발병하게 되는데 당뇨병에 걸리기 쉬운 유전적 소질을 가진 사람이 세균이나 바이러스 등에 의한 감염과 독성물질 등 환경적 영향을 받음으로써 췌장의 Langerhans-islet 내 β- cell가 파괴되면 인슐린을 분비하는 능력이 떨어져서 혈당을 조절할 수 없게 되므로 당뇨병에 걸리게 된다.

인슐린 비의존형 당뇨병은 주로 40세이상의 중년이후에 발병하는 것으로써 가족이나 친척 중에 당뇨병 환자가 있는 경우 유전적 소인을 가진 사람이 비만증,운동부족,스트레스,임신, 외상 등 당대사를 나쁘게 하는 조건에 처하게 될때 인슐린의 작용이나 분비가 저하되어 혈당조절 능력이 떨어져서 당뇨병에 걸리게 된다.

당뇨병은 그 질환자체의 심각성보다도 치료가 늦어져서 만성이 되면 이로인한 합병증, 예를들면 혈액순환장애, 만성적인 피로, 고혈압, 심근경색, 당뇨병성 신경병증, 망막병증(시력장애, 실명, 망막출혈), 백내장, 신증 등으로 발전하여 인체의 전반적인 대사기능 및 감각기능이 저하되어 종래에 치명적인 결과를 초래할 수 있다.

당뇨병을 치료하기 위한 목표는 체내 혈당의 정상화, 지질대사의 정상화, 이상체중의 유지 등으로 합병증의 예방은 물론 정상적인 사회생활을 영위하도록 하는 데 있으며,당뇨병의 유형에 따라 그리고 질병의 정도에 의해 약간은 차이가 있으나, 공통적인 치료요법은 식이요법과 운동요법 그리고 약물요법이 있다.

현재 흔히 사용되는 당뇨병 치료제는 경구용 혈당강화제와 인슐린 주사제로 구분된다. 경구용 혈당강하제는 췌장의 인슐린 분비세포가 많이 파괴되어 있는 인슐린 의존형 당뇨병환자에게는 별로 도움이 되지 않고, 주로 인슐린 비의존형 당뇨병환자에게 사용하며, 인슐린 주사요법은 당뇨병 환자의 약 25%가 사용하고 있다.

일반적으로, 인슐린 의존형 당뇨병과, 당뇨병성 혼수와 당뇨병성 케토산증, 수술전과 후의 중증 감염자, 임신중의 당뇨병, 합병증이 동반되었을 때, 식사요법과 경구용 혈당강하제로 조절이 되지 않을때, 심한 당뇨병 증세로 혈당의 빠른 조절이 필요한 때에 인슐린 주사가 필요하다.

한편, 프로폴리스(propolis)는 꿀벌이 자신의 생존과 번식을 위해 여러 식물에서 뽑아낸 수지(樹脂)와 같은 물질에 자신의 침과 효소 등을 섞어서 만든 물질로 러시안페니실린 및 천연페니실린이라고도 한다.

주요 구성성분으로는 flavonoids, caffenic acid phenethyl ester(CAFE) 등 300종 정도의 성분이 들어있으며, 많은 성분 중에서 미네랄·비타민·아미노산·지방·유기산·플라보노이드 등은 세포대사에 중요한 역할을 하며, 테르펜류 등은 항암 작용을 한다. 특히 20여 종류가 넘는 플라보노이드가 들어 있어 건강 증진에 큰 도움을 준다.

주요한 효능으로는 항균, 항바이러스, 항알레르기, 항염, 항궤양 및 항암작용 등이 있다. 상처치유 및 조직재생, 면역증강 효과와 주요성분인 플라보노이드가 활성산소를 없애기 때문에 항산화 효과가 있고, 항암효과를 나타내는 케르세틴 등이 있어 암세포의 유전자가 복제되기 전에 차단한다.

최근에는 국내외에서 프로폴리스를 이용한 혈당강하, 당뇨병 종합치료, 당뇨병의 단백질대사, 췌장의 베타세포 방어 등 항당뇨병 효과에 대한 동물실험과 임상실험 그리고 연구논문이 발표되고 있다.

지금까지 프로폴리스는 주로 원괴에 주정 알콜을 이용 추출하여 이를 음료제품의 형태로 출시하거나 알약형태로 제조하고 있다.

상기와 같은 기술 일예가 등록특허공보 제329010호(명칭: 프로폴리스 추출물 분말이 첨가된 생식 타입의 차 조성물)와 등록특허공보 제523746호(명칭: 베타싸이 클로덱스트린(β-cyclodextrin)을 이용한 수용성 프로폴리스 제조방법), 등록특허공보 제478021호(명칭: 수용성이 개선된 프로폴리스 추출물) 등에 개시되어 있다.

등록특허공보 제329010호는 프로폴리스가 첨가된 생식타입의 차 조성물에 관한 것으로 더욱 상세히는 쌀, 콩, 보리, 율무 등 곡식류와 채소류 등을 익히지 않고 건조 분말화한 후 물에 타서 섭취하는 생식타입의 차에 프로폴리스 추출물 분말을 첨가함으로써 항균작용및 생리 활성 작용등의 효과를 보강한 생식타입의 차 조성물로 제조시 열에 익히는 공정이 생략됨으로써 발생 가능한 세균 및 바이러스에 의한 감염 및 충해발생을 방지하여 생식 타입 차 조성물 제품의 품질을 유지하도록 하였으며 프로폴리스 자체의 생리 활성 작용도 이용할 수 있도록 한 기술이 개시되어 있다.

또한 등록특허공보 제523746호는 베타싸이클로덱스트린(β-cyclodextrin)을 이용한 수용성프로폴리스 제조방법으로써 주정(에탄올)에 베타싸이클로덱스트린(β-cyclodextrin)을 용해하는 제1단계;베타싸이클로덱스트린(β-cyclodextrin)이 주정(에탄올)으로 프로폴리스를 추출하는 제2단계;추출액을 여과하여 여액은 수득하고 불순물은 제거하는 제3단계;상기의 추출물을 베타싸이클로덱스트린(β-cyclodextrin)에 분무하여 분말화시키는 제4단계; 상기 분말을 물에 용해하여 수용성 프로폴리스를 만드는 제5단계로 이루어지는 베타싸이클로덱스트린(β-cyclodextrin)을 이용한 수용성 프로폴리스 제조방법에 대해 개시하고 있다.

또한, 등록특허공보 제478021호는 프로폴리스의 pH를 5.5~7.0으로 조정하여 프로폴리스의 유효성분의 수용성을 개선하여 제조되는 프로폴리스추출물과, 이 프 로폴리스 추출물을 함유하는 조성물 및 프로폴리스 추출물의 수용성 개선방법이 개시되어 있다.

상술한 바와 같은 문헌에 기재된 기술에 있어서, 프로폴리스는 주로 원괴에 주정 알콜을 이용 추출하여 이를 음료제품의 형태로 출시되고 있다. 그러나 프로폴리스를 음용하기 좋게 적절히 처리하여 건강 기능성을 증대시키거나 특정 질환에 유효한 제품을 개발하려는 시도는 아직 주목할 만한 성과가 없는 실정이다.

본 발명의 목적은 상술한 바와 같이 천연 자연물질과 생약 물질들을 배합하여 항당뇨병 작용을 하고 이에 따른 만성 피로 또는 기타 합병증들을 막음으로써 당뇨병의 체질개선과 원활한 혈액 순환개선 또는 체력증강을 도모하기 위해 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품조성물 및 그 제조방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기한 바의 조성을 가진 당뇨병의 체질개선과 원활한 혈액순환개선 그리고 체력 증강을 도모하기 위한 건강기능성 식품을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위해 무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품조성물을 제조하는 방법에 있어서, (a)프로폴리스 원괴를 주정과 혼합하고 이 혼합물을 항온수조에서 교반하고 잔사를 분리기로 분리하여 프로폴리스를 추출하는 단계, (b)상기 (a)단계에서 추출된 프로폴리스에서 알콜을 제거하고 급속 냉동기에 1~2시간 정치하여 밀납과 수분을 제거하여 연질의 프로폴리스를 얻는 단계, (c)상기 (b)단계에서 얻어진 연질의 프로폴리스에 리신(1ysine) 물질을 첨가하여 무알콜 수용성 프로폴리스를 얻는 단계, (d)한약재를 증류수와 배합하여 중탕기에서 끓여 한약액을 추출하는 단계, (e)상기 (c)단계에서 제조된 무알콜 수용성 프로폴리스 2ℓ와 상기 (d)단계에서 추출된 한약액을 1ℓ를 첨가하여 혼합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 한약재는 지구자, 생지황, 뽕잎, 오가피, 두충, 황기, 동충하초, 홍삼, 구기자, 갈근 중의 하나 또는 혼합재인 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 (d)단계에서 상기 지구자의 열매 40g을 증류수 600㎖에 투입하여 배합 중탕기에서 3시간 끓이고 추출된 지구자 액상을 100㎖로 농축한 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 무알콜 수용성 프로폴리스, 리신물질, 지구자의 함량은 1~3:1~3:1~5 중량부로 이루어진 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 조성물에는 상기한 성분외에도 더욱 항당뇨작용을 유도하기 위하여 필요에 의거 생지황, 뽕잎, 가시오가피, 황기, 목당피, 천화분, 동충하초, 우황, 서홍화, 수질, 호장근, 황정, 귀전우, 산수유, 지골피, 구기자, 배출, 창출, 황련, 갈근, 땅두릅, 홍삼, 황련, 지모, 강냉이 수염, 맥문동, 육종용, 사삼, 단삼, 복령, 황백, 상백피, 오미자, 계내금, 대황, 산약, 택사, 하수오, 오배자, 마의, 삼칠, 진주 및 합계, 및 이들의 혼합물을 보조생약성분을 첨가해도 더욱 바람직한 결과를 나타낼 수 있으며, 이러한 성분의 선택 및 첨가량은 당업자에게도 자명할 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 식품 조성물은 상기 식품 조성물은 경구제, 파우치제, 드링크제 또는 캅셀, 분말, 정제, 엑기스의 형태로 이루어진 것을 특징으로 한다.

먼저 본 발명에 따른 개념을 설명한다.

본 발명의 조성물의 첫번째 성분은 프로폴리스 알콜추출물을 포함한다. 알콜추출물의 성분으로는 Organic acids(benzonic acid, gallic acid), Phenol acid(Caffenic acid, cinnamic acid, ferulic acid, isoferulic acid, ρ-coumaric acid), Aromatic aldehydes(vanillin isovanillin), Coumarines(esculetin, scopoletin), Flavonoids(Flavones:acacetin chrysin, pectolinarigenin, pinocembrin, tectochrysin, Flavonols;galaga, izalpinine kaempferlo, quercetin, rhamnocitrin, Flavonones; Pinostrobine, sakuranetin, Flavononols;pinobanksine), Minerals(alumium barium, boron, chromium, cobalt, copper sterontium, titanium, vandium, zinc), Vitamins(provitamin A, B group), xanthorrhed, pterostilbene, lactones, polysaccharides, amino acids 등이 존재한다.

본 발명에 따른 프로폴리스와 한약재 추출물을 배합한 조성물은 한약재 재료를 흐르는 물에 2~3회 세척한 다음, 세척한 과실에서 과즙을 얻기 위해 햄머밀(hammer mill)에서 파쇄하여 압력을 14~15lb/in²으로 온도를 120℃로 유지하면서 약 3시간 정도 가열하면서 농축하고 압착법을 사용하여 한약제 박을 제거한다. 재차 압력을 14~15lb/in²으로, 온도를 120℃ 유지하면서 약 3시간 정도 가열 멸균한 후 포장하고 냉각한다. 무알콜 수용성 프로폴리스는 깨끗한 프로폴리스 원괴를 선별하여 저온에서 분쇄를 하여 주정(에칠알콜)을 알콜농도 80%로하여 25ml에 분쇄 프로폴리스 2g 중량으로 혼합하여 15일 이상을 실온에서 보관하면서 매일 교반한다.

교반 혼합된 프로폴리스 원액을 70℃의 항온수조에 30분간 교반을 하여, 잔사를 분리기로 원심분리하고 여과기로 여과한 다음 준비된 용기에 수집한다.

수집된 프로폴리스를 항온수조에 60~90℃의 항온수조에 장치 교반하여 알콜을 제거한 다음 이를 급속 냉동기에서 1~2시간 정치한다.

실온에서 냉동정치된 프로폴리스 액의 상층액은 버린 후 침전된 연질의 물질을 무알콜 프로폴리스 원물질로 하여 밀봉보관한다.

본 발명에 따르는 조성물은 상기와 같이 약제학적 분야에서 통상적인 방법에 의해 제조할 수 있다.

본 발명의 상기 및 그 밖의 목적과 새로운 특징은 본 명세서의 기술 및 첨부도면에 의해 더욱 명확하게 될 것이다.

이하, 본 발명의 실시예를 도면에 따라 구체적으로 설명한다.

본 발명의 각 군별 실험 성적은 평균 ±표준오차로 나타내었다. 각 측정치의 통계처리는 대조군 값에 대비한 각 시료군의 값을 one-way ANOVA 및 paired-sample t-test를 이용하여 검정하였으며 ρ값이 0.05이하인 경우 유의한 차이가 있는것으로 간주한다.

<실시예 1>

본 발명에 따른 무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재를 배합한 식품 조성물에 있어서, 상기 원자재는 지구자인 것을 특징으로 한다.

지구자 또는 지구자나무(Hovenia dulcis var. koreana)는 헛개나무라고도 하며 감탕나무(갈매나무)과 식물로서, 국내에서만 자생하는 특산수종이다. 잎은 넓은 달걀형으로 산뽕나무잎을 닮았고 7월에 하얀 꽃이 피어 10~11월에 열매가 익는다. 맛이 달콤하다 해서 나무에서 나는 꿀이라고 해서 목밀(木蜜)이라고 했고, 중국에서는 신선의 정원에서 나는 배라는 뜻으로 현포리(玄葡梨)라고 했으며 돌과 같이 단단하고 희다고 하여 백석목(白石木)이라고 부르기도 했다. 열매는 갈색으로 익으며, 세 개의 방에 씨앗이 각각 한 개씩 들어있다. 씨앗은 갈색이며 겉껍질이 단단하고 윤이 나며 약간 납작하다. 이 나무의 열매는 오래전부터 한방에서는 숙취해소에 효능이 있는 것으로 전해져 왔으며 이를 이용한 숙취해소용 음료나 건강식품 제품으로의 개발이 활발히 진행되고 있다.

다음에 본 발명에 따른 무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재를 배합한 식품 조성물의 제조과정에 대해 도 1에 따라 설명한다. 도 1은 본 발명에 따라 무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재를 배합한 식품조성물을 제조하는 방법을 나타낸 순서도이다.

프로폴리스 추출하는 단계 - 단계 1

프로폴리스 원괴를 선별하여 저온(예를 들어 5℃ 이하)에서 분쇄한다. 분쇄된 프로폴리스를 2g 중량으로 측량하고, 알콜농도 80%로 조정한 주정(에칠알콜)을 25ml에 혼합하여 15일 이상을 실온에서 보관하여 매일 교반한다. 교반된 혼합물을 70℃의 항온수조에 30분간 교반을 하고 분리기에서 잔사분리를 한 후 2배 및 4배로 농축한다(S1).

프로폴리스 추출액의 알콜과 밀납 등 물리적 제거하는 단계- 단계 2

상기 단계 1에서 얻은 프로폴리스 추출액을 60~90℃의 수온의 항원수조 또는 진공농축기로 교반 알콜을 제거한 후 영하 20℃의 급속 냉동기 안에 1~2시간 정치하여 실온에서 밀납과 수분 등 상층액을 버린 후 침전된 연질의 무알콜 프로폴리스를 얻는다(S2).

무알콜 수용성 프로폴리스 제조하는 단계- 단계 3

상기 단계 2에서 얻는 연질의 프로폴리스 1kg을 넣고 리신(1ysine) 1kg을 첨가하여 무알콜 수용성 프로폴리스를 얻는다. 이 무알콜 수용성 프로폴리스에 시험액 또는 한약재 등 첨가하여 사용하는 기본액을 제조한다(S3). 즉, 단계2에서 얻어진 연질의 프로폴리스는 지용성 성질 때문에 물에 쉽게 용해되지 않는다. 물에 쉽게 용해할 수 있도록 염기성 α-아미노산의 하나이며, 최초의 카세인에서 분리된 단백질의 가수분해 산물인 리신(Lysine)은 소아의 성장과 성인의 질소 평형에 불가결한 필수 아미노산으로 당과 반응하기 쉬운 리신 물질을 분해제로 첨가하여 무알콜 수용성 프로폴리스를 얻는다.

한약재의 추출 단계- 단계 4

한약재는 지구자 열매 40g을 증류수 600ml에 투입하여 배합 중탕기에서 약 3시간 정도 끓이고, 추출된 지구자는 100ml로 농축한다(S4).

무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재의 배합제조- 단계 5

상기 단계 3에서 얻은 무알콜 수용성 프로폴리스 2ℓ를 넣고, 단계 4에서 얻은 지구자 추출물을 1ℓ내외를 첨가하여 혼합한다(S5).

본 발명에 따르는 조성물에서 성분의 조성비율은 다양한 실험결과에 의하면 중량을 기준으로 무알콜 수용성 프로폴리스, 리신(Lysine) 물질, 지구자의 함량은 1~3:1~3:1~5 중량부의 범위내에서 적절히 조정하여 사용한다. 본 발명의 조성물에서는 각각의 주 성분을 원료 중량기준으로 하여 1~2:1~2:2~3 중량부로 포함하는 것이 좋으며, 특히 1:1:1 중량부로 포함하는 것이 가장 바람직하다.

상기와 같은 조성비는 각각의 성분이 갖는 유효용량과 부작용 등을 고려하여 찾아낸 것이며, 그 비율의 범위를 벗어나는 경우에는 효과가 떨어질 우려가 있다.

상기한 바와 같이 성분이 단독 또는 혼합하여 첨가되는 경우에 이들의 첨가량은 중량의 전체 조성물의 중량을 기준으로 0.1~ 50중량% 로 배합하여 사용하는 것이 적합하다.

즉, 상기 실시예에 있어서는 한약재로서 지구자를 사용한 예에 대해 설명하였지만, 이에 한정되는 것은 아니며, 다른 한약재에도 적용됨은 물론이다.

또한 본 발명의 식품조성물은 원하는 조성물의 형태에 따라 통상의 보조제, 또는 첨가제 또는 감미료, 예를 들면 벌꿀, 비타민C, 구연산, 니코틴산, 안식향산 나트륨, 아스파탐, 팩틴, 말리톨, 솔비톨, 자일리톨, 구아검, 우유 및 올리고당으로 이루어진 군 중 하나 이상의 성분을 추가하여 기호도나 미감을 증대시킬 수 있다.

본 발명에 따른 무알콜 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품조성물의 제형은, 당뇨병의 개선을 위한 건강기능성 식품으로 이용시에 당해 분야에서 통상적인 방법에 따라, 예를 들어 경구제 또는 드링크제, 캅셀, 분말, 정제, 엑기스 중의 어느 하나의 음료수의 형태로 제형화시켜 사용할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 조성물의 복용량은 그 제제형태, 투여방법 , 사용목적 및 이것에 적용되는 환자의 연령, 체중 증상에 따라 적절히 설정되고, 일반적으로 제제중에 함유되는 유효성분의 양인 성인 1인당 0.1mg~1mg/kg이다. 물론 복용량은 당뇨병의 정도에 따라 변동하기 때문에 상기 투여량보다 적거나 많게 투여가 필요한 경우도 있다.

본 발명의 조성물의 전체 중량을 기준으로 약 0.01~30중량%으로 한다.

< 시험예 1>

도 2는 본 발명에 따른 흰쥐의 약물 투여기간에 다른 체중의 변화를 나타낸 그래프이다.

체중 193.1±10.1gm의 7주령 수컷 흰쥐(Spraque-Dawley Rat)를 대전보건환경연구원 실험 동물사육실에서 정상적인 사육환경에서 1주 이상 적응시킨 후 실험에 사용하였다.

실험에 사용한 모든 흰쥐를 16시간 동안 절식시킨 다음 각각의 흰쥐에 스트렙토조토신(streptozotocinm STZ) 50mg/kg을 꼬리정맥에 투여하여 고혈당을 유발시켰다. 공복시 정상흰쥐의 혈당은 약 75~85mg/dL이었으나, 유발후 고혈당 흰쥐(hyperglycemic rat)의 혈당이 약 300mg/dL 인 것을 실험군으로 사용하였다.

대조군은 STZ를 흰쥐의 꼬리정맥에 투여하여 췌장의 β-cells를 파괴한 다음, 약물을 투여하지 않고 통상적인 사료와 물을 공급하여 자연치유과정을 거치게 한다. 실험군에 대해서는 고혈당이 유발된 흰쥐에 통상적인 사료와 물을 공급하면서,단계 3에서 제조된 제품에 증류수를 2:1로 혼합한것과 단계 6에서 제조된 제품을 구분하여 각각 2ml씩 매일 구강투여하였다. 측정은 절식 전과 후 그리고 STZ를 투여 후 48시간 후와 30일 경과한 후 4회 실시하였으며, 측정 16시간 전에 금식을 시킨 다음 꼬리 정맥혈을 취하여 Glucose dyeoxidoreductase mediator reaction법에 의한 ACCU-CHEK Active(Roche Co)로 측정하였다.

각 실험동물의 체중은 실험전과 실험 후 30일 간격으로 측정하고 그 결과를 도 2에 나타내었다. con은 스트렙토조토신(STZ)으로 처리한 그룹이다. P-dose는 STZ로 처리한 후, 단계 1에서 얻은 알콜 추출 프로폴리스 2L에 증류수 1L를 배합한 용액을 투여(2ml/마리/일) 시킨 경우이다. N-dose는 STZ로 처리한 후 단계 3에서 얻은 무알콜 수용성 프로폴리스 2L에 증류수 1L를 배합한 용액을 투여(2ml/마리/일)를 시킨 경우이다. T-dose는 STZ로 처리한 후, 상기 단계 3에서 얻은 무알콜수용성프로폴리스 2L에 상기 단계 4에서 얻은 지구자의 농축액 1L를 배합한 용액을 투여(2ml/마리/일)를 시킨 경우이다.

도 2의 실험결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 대조군의 체중에 비하여 N-dose 실험군의 체중은 약간 높게 나타나고 T-dose실험군의 체중은 대조군에 비하여 월등히 높게 나타났고 통계적으로 유의성이 있었다.

<시험 예2> 지구자 첨가 무알콜 수용성 프로폴리스의 당뇨 유발 흰쥐의 혈당에 미치는 효과

시험 예1에서 동일한 방식으로 혈당을 측정하고 그 결과를 도 3에 나타냈다. 도 3은 본 발명에 따른 흰쥐의 약물 투여기간에 따른 혈당량의 변화를 나타낸 그래프이다. STZ를 투여하여 고혈당을 유발시킨 흰쥐 대조군의 혈당은 유발 후 30일 후에는 318ml/dl로 나타났다. T-dose 실험군은 유발 후 30일째는 감소하여 낮게 나타나 196ml/dl로 나타났다.N-dose실험군의 혈당은 30일째는 T-dose실험군보다 감소가 적으나 대조군에 비해 낮게 나타나 203ml/dl감소하였다. 이와같은 결과로 보아 STZ에 의하여 파괴된 췌장섬의 β-cell의 손상으로부터 회복되었거나, 재상되었을 것으로 사료되었다.

<시험예 3> 구강 당부하 검사(Oral Glucose Tolerance Test)

실험 30일후의 대조군, N-dose 실험군, T-dose실험군을 대상으로 구강당부하검사를 실시하였다. 구강 당부하검사를 시행하기 전에 흰쥐들을 16시간 동안 절식을 시킨 다음 glucose(2.0g/kg body weight)를 sonde를 이용하여 구강에 투여하였다. 그 이후 30,60,90,120 분에 각각 꼬리 정맥을 통하여 혈액을 채취한 다음 혈당을 측정하였다. 상기 단계 3에서 따른 지구자를 배합한 무알콜 수용성 프로폴리스 조성물을 투여한 지 30일 되던 날 공복 상태에서 흰쥐의 구강당부하검사를 시행하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4는 30일째의 구강당부하의 비교를 나타내는 그래프도이다.

그 결과 대조군에 비하여 T-dose실험군에서 우수한 결과를 보여 주었으며, N-dose실험군은 대조군보다 우수하였으나, T-dose실험군에 비해서는 저조한 결과를 보여 주었다, 상기와 같은 시험 결과로 보아 기능성 음료는 T-dose 실험군의 농도로 투여하였을 경우 손상된 췌장섬 β-cell의 재생 또는 회복에 우수한 효과를 나타낸다.

<시험예 4> T-CHO(Total cholesterol)와 TG(Triglyceride)의 혈청지질치 검색

고혈당 흰쥐의 혈청 지질치에 미치는 영향을 규명하기 위하여 흰쥐의 혈청의 T-CHO(Total cholesterol) 와 TG(Triglyceride)를 검색하고 그 결과를 도 5에 나타내었다. 구체적으로 마취를 시키지 않은 쥐를 직접 심장 천자하여 3~5㎖를 채혈하고, 항응고제가 없는 CBC-bottle(녹십자, 한국)에 넣어 냉장 보관시켰다. 보관된 혈액을 원심분리기(MF-550,Hanil Korea)로 3000rpm에서 10분간 처리한 후 자동생화학분석기(Hitach 7060,Japan)를 이용하여 T-CHO(Total cholesterol)과 TG( Triglyceride)를 측정하였다.

도 5는 30일째에 T-CHO와 TG의 변화를 나타내는 그라프이다. 프로폴리스 투여한 후 T-CHO는 당뇨병 대조군 58.3±6.3㎎/㎗에 비해 T-dose실험군에서 55.2±3.2㎎/㎗, N-dose실험군에서 58.1±4.9㎎/㎗로 저하되었으나 그 차이는 유의하지 않았다.

TG는 당뇨병대조군의 49.5±4.1㎎/㎗에 비해 N-dose 실험군에서 53.7±23.3㎎/㎗로 증가하였으나, 그 차이는 유의하지 않았으며, T-dose실험군에서는 대조군에 비해 46.8±8.7㎎/㎗감소하였으나 그 차이는 유의하지 않았다.

이와 같은 결과로 보아 지구자 배합 무알콜 수용성 프로폴리스는 고혈당의 지속에 의하여 나타나는 지질을 회복시키는데 영향을 미치었을 것으로 사료되며, 이 제품은 혈액의 유해한 영향을 미치지 않을 것으로 사료된다..

<시험 예 5> 췌장의 병리학적 관찰,

채혈이 끝난 쥐를 에테르로 마취시킨 후 수술가위로 복부를 절개하여 췌장 전부를 적출한 즉시 bouin's용액에 12시간 고정시켰다.고정된 췌장을 70% 알콜에 24시간 고정을 하였다.

알콜에 고정된 췌장은 세절을 한 다음에 조직처리 전까지 70% 알콜에 보관하였다.

췌장 조직을 automatic tissue processor(Hypercenter XP, Shandon England)에 장착하여 탈수, 투명, 침투과정을 거친 다음 파라핀 포맷을 하여 박절기(ddm-p 064, Germany)로 조직절편을 만들었다. 파라핀제거 및 탈수과정을 거쳐 랑거한스섬을 관찰하기 위해 hematoxylin-eosin(H&E)염색, 그리고 베타세포를 관찰하기 위해 aldehyde fuchsin염색(stanley,1976)을 하여 광학현미경하에서 200배율로 관찰한 후 사진을 촬영하였다.

STZ를 투여하여 흰쥐 췌장섬의 β-cells을 파괴한 대조군을 유발 후 30일째에 도살하여 병리조직학적 염색을 하였다. 도 6은 β-세포에 대한 췌장의 병리조직학적 변화를 나타내는 광학현미경 사진이다.

정상대조군에서는 H&E 염색 소견상, 췌장은 외분비 췌장과 내분비 췌장으로 구성되어 있으며, 내분비 췌장은 랑거한스섬과 외분비관 상피세포 사이에 산재해 있는 내분비 세포로 구성되어 있다. 랑거한스섬은 전체 췌장의 1~2%를 차지하는데, 베타세포(70%), 알파세포(20%), 델타세포(5~10%) 및 췌장 폴리펩티드 세포(1~2%)의 4가지 주된 세포로 구성되어 있다. 베타세포는 랑거한스섬의 중심부 내지 미만성으로 위치하여 있고, 인슐린을 생성하며, 알파세포는 주로 랑거한스섬의 변연부에 분포되어 있다. 베타 세포만 선택적으로 염색되는 aldehyde fuchsin stain소견상, 베타세포는 진한 청색으로 염색이 되며, 섬의 중심부 내지 미만성으로 분포되어 있다(도 6a, 도6e). 고혈당 유발 대조군에서는 랑거한스섬은 정상군과 비교하여 섬의 크기가 매우 위축되어 있다(도 6b). N-dose실험군에서의 랑거한스섬은 프로폴리스를 투여하지 않은 군에 비해 현저하게 크기가 증가하여 정상군의 크기로 되었다(도 6c). T-dose실험군에서의 랑거한스섬은 정상군의 크기로 회복되었다(도 6d).

상기와 같은 결과로 보아 당뇨 기능성 실시예3과 실시예 5의 제품은 STZ로 손상된 췌장섬 β-cells의 회복 또는 재생에 관여하고 있음을 확인할 수 있었다.

상기의 실험방법으로 프로폴리스만을 투여할 시 혈당저하 효과가 비슷하였으나, 지구자를 첨가한 프로폴리스 투여 실험군이 몸무게가 가장 컸으며 흰쥐의 생육이 가장 좋은것으로 나타났다.

본 발명의 무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품 조성물은 상기 시험예로부터 확인할 수 있는 바와 같이 당뇨병환자의 혈당을 강화시키고 혈중 지질농도를 저하시키는 작용과 췌장의 랑거한스섬 내의 손상된 인슐린을 분비하는 베타세포는 재생작용을 하며, 당뇨병 예방과 치료, 합병증 예방 및 치료효과를 가지므로 당뇨병이나 당뇨병에 관련된 각종 증상을 적절히 치료할 수 있을뿐만 아니라 부작용이나 독성이 거의 없어 당뇨병의 예방 및 개선을 위한 건강 기능성 식품 조성물로서 사용될 수 있다.

이상 본 발명자들에 의해서 이루어진 발명을 상기 실시예에 따라 구체적으로 설명하였지만, 본 발명은 상기 실시예에 한정되는 것은 아니고, 그 요지를 이탈하지 않은 범위에서 여러가지로 변경가능한 것은 물론이다. 즉, 상기 실시예에 있어서는 프로폴리스로서 무알콜 수용성 프로폴리스에 대해 설명하였지만, 이에 한정되는 것은 아니며, 지용성 알콜 프로폴리스 또는 무알콜 프로폴리스 등에도 적용할 수 있음은 물론이다.

상기한 바와 같이 본 발명에 따른 무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품조성물 및 그 제조방법에 의하면 천연약재에서 유래한 것으로 부작용이 없으며 당뇨를 현저하게 억제하므로 당뇨 및 관련 질환의 개선용 식품 성분 등에 다양하게 이용할 수 있는 효과가 얻어진다.

또한, 주변에서 흔히 구할 수 있는 다양한 한약재를 첨가, 혼합함으로써 다양한 배합의 혼합제품의 생산할 수 있고 그에 따른 인체에 다양한 기능 효과를 갖는 하는 혈당저하 식품조성물을 얻을 수 있다.

또한, 본 발명의 무알콜 수용성 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품조성물에 의하면 각각의 성분의 작용이 조합되어 나타나므로 당뇨병의 근본 원인을 제거하고 당뇨병으로 인해 허약해진 신체기능을 북돋아주며, 당뇨병에 대해서도 예방효과를 얻을 수 있다.

Claims (7)

1. 프로폴리스와 한약재를 배합한 혈당저하 식품조성물을 제조하는 방법에 있어서,

   (a)프로폴리스 원괴를 주정과 혼합하고 이 혼합물을 항온수조에서 교반하고 잔사를 분리기로 분리하여 프로폴리스를 추출하는 단계;

   (b)상기 (a)단계에서 추출된 프로폴리스에서 알콜을 제거하고 급속 냉동기에 1~2시간 정치하여 밀납과 수분을 제거하여 연질의 프로폴리스를 얻는 단계;

   (c)상기 (b)단계에서 얻어진 연질의 프로폴리스에 리신(1ysine) 물질을 첨가하여 무알콜 수용성 프로폴리스를 얻는 단계;

   (d)한약재를 증류수와 배합하여 중탕기에서 끓여 한약액을 추출하는 단계;

   (e)상기 (c)단계에서 제조된 무알콜 수용성 프로폴리스 2ℓ와 상기 (d)단계에서 추출된 한약액을 1ℓ를 첨가하여 혼합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 혈당저하 식품조성물의 제조방법.
2. 삭제
3. 제1항에 있어서,

   상기 (d)단계에서 한약재는 지구자, 생지황, 뽕잎, 오가피, 두충, 황기, 동충하초, 홍삼, 구기자, 갈근 중의 하나 또는 혼합재인 것을 특징으로 하는 혈당저하 식품조성물의 제조방법.
4. 제3항에 있어서,

   상기 (d)단계에서 지구자의 열매 40g을 증류수 600㎖에 투입하여 배합 중탕기에서 3시간 끓이고 추출된 지구자 액상을 100㎖로 농축한 것을 특징으로 하는 혈당저하 식품조성물의 제조방법 .
5. 제4항에 있어서,

   상기 (b)단계에서 무알콜 프로폴리스, (c)단계에서 첨가하는 리신물질, 지구자의 함량은 1~3:1~3:1~5 중량부로 이루어진 것을 특징으로 하는 혈당저하 식품 조성물의 제조방법.
6. 청구범위 제1항, 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 혈당저하 식품 조성물의 제조방법에 의해 제조된 것을 특징으로 하는 혈당저하 식품 조성물.
7. 제6항에 있어서,

   상기 식품 조성물은 경구제, 파우치제, 드링크제, 캅셀, 분말, 정제, 엑기스중의 어느 하나의 형태로 이루어진것을 특징으로 하는 혈당저하 식품 조성물.

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