JPS6127999A - グルタチオンの精製方法 - Google Patents
グルタチオンの精製方法Info
- Publication number
- JPS6127999A JPS6127999A JP59148335A JP14833584A JPS6127999A JP S6127999 A JPS6127999 A JP S6127999A JP 59148335 A JP59148335 A JP 59148335A JP 14833584 A JP14833584 A JP 14833584A JP S6127999 A JPS6127999 A JP S6127999A
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- Japan
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- glutathione
- impurities
- fraction
- exchange resin
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、グルタチオンの精製方法に関する。
更に詳しくはグルタチオンとともにアミノ酸、ペプチド
、たんばく等の不純物を含有する、例えば酵母菌体抽出
液、植物細胞抽出液、合成法によるグルタチオン粗溶液
等からグルタチオンを単離・精製する方法に関するもの
である。
、たんばく等の不純物を含有する、例えば酵母菌体抽出
液、植物細胞抽出液、合成法によるグルタチオン粗溶液
等からグルタチオンを単離・精製する方法に関するもの
である。
（従来の技術）
従来、酵母抽出液等のグルタチオン含有液からグルタチ
オンを単離、精製する方法としては銅塩法が広く知られ
ている。又、イオン交換樹脂を用いて、酵母菌体抽出液
から高濃度グルタチオン含有液を得る方法として、特公
昭４４−２：１１９、同４６−４７５５、同４６−２８
８８がある。
オンを単離、精製する方法としては銅塩法が広く知られ
ている。又、イオン交換樹脂を用いて、酵母菌体抽出液
から高濃度グルタチオン含有液を得る方法として、特公
昭４４−２：１１９、同４６−４７５５、同４６−２８
８８がある。
（発明が解決しようとする問題点）
しかしながら、銅塩法は銅塩生成反応、銅塩洗浄、銅塩
分解反応の８段階から成り、操作が繁雑であり、グルタ
チオンの回収収率も低い。しかもチオール基の共通性に
よりシスティン等のチオール化合物とグルタチオンの分
離が困難であるという欠点を有している。またイオン交
換樹脂を用いる前記の従来法では高濃度の塩類、酸、水
酸化アルカリ水溶液を用いてグルタチオンと不純物を同
時に溶出するため、グルタチオンの単離は行なわれず、
後に銅塩法による精製を必要とするものである。
分解反応の８段階から成り、操作が繁雑であり、グルタ
チオンの回収収率も低い。しかもチオール基の共通性に
よりシスティン等のチオール化合物とグルタチオンの分
離が困難であるという欠点を有している。またイオン交
換樹脂を用いる前記の従来法では高濃度の塩類、酸、水
酸化アルカリ水溶液を用いてグルタチオンと不純物を同
時に溶出するため、グルタチオンの単離は行なわれず、
後に銅塩法による精製を必要とするものである。
（問題点を解決するための手段）
本発明者はアミ゛ノ酸、タンパク、ペプチド等の不純物
を含むグルタチオン含有液からグルタチオンを高収率で
単離する方法について種々研究を行なった結果、不純物
を含むグルタチオン含有液を強酸性カチオン交換樹脂を
充填したカラムに流し、不純物及びグルタチオンを吸着
させた後、０，０５〜０．５規定の水酸化アルカリ水溶
液を流し、その分画をとるとグルタチオンと不純物は異
なる分画に含まれており、しかもそのグルタチオンが含
まれる分画に対しそのまま晶・析操作を施せば高純度の
グルタチオン結晶が高収率で得られることを見い出し、
本発明の完成に到った。
を含むグルタチオン含有液からグルタチオンを高収率で
単離する方法について種々研究を行なった結果、不純物
を含むグルタチオン含有液を強酸性カチオン交換樹脂を
充填したカラムに流し、不純物及びグルタチオンを吸着
させた後、０，０５〜０．５規定の水酸化アルカリ水溶
液を流し、その分画をとるとグルタチオンと不純物は異
なる分画に含まれており、しかもそのグルタチオンが含
まれる分画に対しそのまま晶・析操作を施せば高純度の
グルタチオン結晶が高収率で得られることを見い出し、
本発明の完成に到った。
すなわち、本発明は不純物を含有するグルタチオン粗溶
液を強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ型）に通し、グルタチ
オン及び不純物を吸着させた後、０．０５〜０．５規定
の水酸化アルカリを流すことにより、高純度のグルタチ
オンを含有する分画を回収することを特徴とするグルタ
チオンの精製方法を要旨とする。
１本発明を実施するには、まずグルタチオン粗溶液
を強液性イオン交換樹脂に通し、グルタチオンを吸着さ
せる。但し、この際液中に含まれるアミノ酸等の不純物
も同時に吸着される。本発明に適用されるグルタチオン
粗溶液としては酵母菌体抽出液、植物細胞抽出液、合成
法によるグルタチオン溶液等が挙げられるが、これらに
限定されない。
液を強酸性カチオン交換樹脂（Ｈ型）に通し、グルタチ
オン及び不純物を吸着させた後、０．０５〜０．５規定
の水酸化アルカリを流すことにより、高純度のグルタチ
オンを含有する分画を回収することを特徴とするグルタ
チオンの精製方法を要旨とする。
１本発明を実施するには、まずグルタチオン粗溶液
を強液性イオン交換樹脂に通し、グルタチオンを吸着さ
せる。但し、この際液中に含まれるアミノ酸等の不純物
も同時に吸着される。本発明に適用されるグルタチオン
粗溶液としては酵母菌体抽出液、植物細胞抽出液、合成
法によるグルタチオン溶液等が挙げられるが、これらに
限定されない。
吸着に使用される強酸性イオン交換樹脂には、８０３
基を交換基として持ち、スチレンとジビニルベンゼンの
共重合体を骨格とする、例えばローム・アンド・ハース
社製アンバーライト■Ｒ１１８、同１２０Ｂ、同１２４
；三菱化成工業株式会社製ダイヤイオン５Ｋ１０４〜１
１６等があるが、他にも各種の製品があり、これらに限
定されない。
基を交換基として持ち、スチレンとジビニルベンゼンの
共重合体を骨格とする、例えばローム・アンド・ハース
社製アンバーライト■Ｒ１１８、同１２０Ｂ、同１２４
；三菱化成工業株式会社製ダイヤイオン５Ｋ１０４〜１
１６等があるが、他にも各種の製品があり、これらに限
定されない。
但し、架橋度（スチレンとジビニルベンゼンヲｆｔ格と
する強酸性イオン交換樹脂におけるジビニルベンゼンの
割合）が低いものほどイオン交換速度が速くグルタチオ
ンの分離が迅速に行なわれる。
する強酸性イオン交換樹脂におけるジビニルベンゼンの
割合）が低いものほどイオン交換速度が速くグルタチオ
ンの分離が迅速に行なわれる。
この目的のためには、架橋度８％以下のものが好ましい
。又、グルタチオン粗溶液のｐＨは１〜８であればよい
が、グルタチオンの吸着力が大きいｐＨ範囲であるｐＨ
３〜５に液を調整すれば、使用する樹脂の量を少なくす
ることができる。一方、通液時の温度はグルタチオンの
精製度には影響しないが、グルタチオンの分解が少ない
４０℃以下が望ましい。
。又、グルタチオン粗溶液のｐＨは１〜８であればよい
が、グルタチオンの吸着力が大きいｐＨ範囲であるｐＨ
３〜５に液を調整すれば、使用する樹脂の量を少なくす
ることができる。一方、通液時の温度はグルタチオンの
精製度には影響しないが、グルタチオンの分解が少ない
４０℃以下が望ましい。
次に、グルタチオン及び不純物が吸着されたイオン交換
樹脂を蒸留水、イオン交換水等の清浄水で充分洗浄した
後、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化アル
カリ水溶液により不純物及びグルタチオンを溶出させ、
グルタチオンの含まれる分画を集める。溶出に使用する
水酸化アルカリ水溶液は、その濃度が濃すぎるとグルタ
チオンと不純物の溶出速度の差が小さく、その分離が充
分に行われないし、また濃度が低く過ぎると、溶出液を
多量に必要とし、現実的でない。用いる水酸化アルカリ
水溶液の濃度としては０．０５〜０．５規定が望ましい
。グルタチオンを含有する溶出液の分画を集めるための
グルタチオンの検出は通常のグルタチオン分析法を用い
ても行いうるが、グルタチオンの含まれる分画のｐＨが
それ以外の分画に比べてｐＨが著しく異なるので、これ
を利用してグルタチオンの含まれる分画を集めることが
できる。尚、このようにグルタチオンと不純物で溶出時
間が異なるのは、不純物を含むグルタチオン水溶液をイ
オン交換樹脂充填カラムに流した際に、グルタチオン及
び不純物とイオン交換樹脂との親和力の違いによりカラ
ム内に各物質の吸着帯が形成され、その後、水酸化アル
カリ水溶液を流すことにより、その吸着帯が順次カラム
の出口方向に移動するためと考えられる。。
樹脂を蒸留水、イオン交換水等の清浄水で充分洗浄した
後、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化アル
カリ水溶液により不純物及びグルタチオンを溶出させ、
グルタチオンの含まれる分画を集める。溶出に使用する
水酸化アルカリ水溶液は、その濃度が濃すぎるとグルタ
チオンと不純物の溶出速度の差が小さく、その分離が充
分に行われないし、また濃度が低く過ぎると、溶出液を
多量に必要とし、現実的でない。用いる水酸化アルカリ
水溶液の濃度としては０．０５〜０．５規定が望ましい
。グルタチオンを含有する溶出液の分画を集めるための
グルタチオンの検出は通常のグルタチオン分析法を用い
ても行いうるが、グルタチオンの含まれる分画のｐＨが
それ以外の分画に比べてｐＨが著しく異なるので、これ
を利用してグルタチオンの含まれる分画を集めることが
できる。尚、このようにグルタチオンと不純物で溶出時
間が異なるのは、不純物を含むグルタチオン水溶液をイ
オン交換樹脂充填カラムに流した際に、グルタチオン及
び不純物とイオン交換樹脂との親和力の違いによりカラ
ム内に各物質の吸着帯が形成され、その後、水酸化アル
カリ水溶液を流すことにより、その吸着帯が順次カラム
の出口方向に移動するためと考えられる。。
（発明の効果）
本発明方法により得られるグルタチオン含有液は、大部
分の不純物が除去されているので、直接通常の晶析操作
を施せば高純度のグルタチオン結晶が得られる。更に、
本発明方法は操作も極めて簡単であり、グルタチオン回
収率も非常に高い。
分の不純物が除去されているので、直接通常の晶析操作
を施せば高純度のグルタチオン結晶が得られる。更に、
本発明方法は操作も極めて簡単であり、グルタチオン回
収率も非常に高い。
（実施例）
次に実施例を用いて本発明を具体的に説明するが、本発
明はこれに限定されない。
明はこれに限定されない。
実施例１
塩酸でｐＥＩ３に調整したグルタチオン８．２ｇを含む
酵母菌体抽出液３Ｉ！を、３０℃で、架橋度４％の強酸
性イオン交換樹脂アンバーライトＩ ｎ。
酵母菌体抽出液３Ｉ！を、３０℃で、架橋度４％の強酸
性イオン交換樹脂アンバーライトＩ ｎ。
１１８（Ｈ型）８００ｍＪを充填した内径４０朋のカラ
ムにＳＶ２ （６００ｍｌ！／ｈｒ）ノ流速で流し、グ
ルタチオン及びアミノ酸、タンパク、ペプチド等の不純
物を吸着させた。ひきつづき、樹脂を水で洗浄した後、
０．１規定水酸化ナトリウムをＳ Ｖ ２ （６００ｒ
Ｍ’／ｈｒ） （７）流速で流し、１０ｍ１毎に分画を
とり、各分画のグルタチオン量をアロキサン法で分析し
たところ初期の１７００ｍｊｌ’の分画にはグルタチオ
ンは全く含まれず、その後の６００ｍＪの分画中に７．
９１のグルタチオンが含まれており、しかも液中のグル
タチオンの純度は９５％であった。このグルタチオンを
含有する分画を１９．８．ｐに濃縮し、ＥｔＯＨ１０ｍ
ｌ！ を加え１０℃で２０時間撹拌すると９９％の純度
の結晶が７．２ｇ得られた。
ムにＳＶ２ （６００ｍｌ！／ｈｒ）ノ流速で流し、グ
ルタチオン及びアミノ酸、タンパク、ペプチド等の不純
物を吸着させた。ひきつづき、樹脂を水で洗浄した後、
０．１規定水酸化ナトリウムをＳ Ｖ ２ （６００ｒ
Ｍ’／ｈｒ） （７）流速で流し、１０ｍ１毎に分画を
とり、各分画のグルタチオン量をアロキサン法で分析し
たところ初期の１７００ｍｊｌ’の分画にはグルタチオ
ンは全く含まれず、その後の６００ｍＪの分画中に７．
９１のグルタチオンが含まれており、しかも液中のグル
タチオンの純度は９５％であった。このグルタチオンを
含有する分画を１９．８．ｐに濃縮し、ＥｔＯＨ１０ｍ
ｌ！ を加え１０℃で２０時間撹拌すると９９％の純度
の結晶が７．２ｇ得られた。
比較例１
水酸化ナトリウム溶液濃度を１規定にした以外は実施例
１と同様の操作を行った。不純物とグルタチオンが同時
に溶出され、グルタチオンの単離けなされず、溶液中の
グルタチオンの純度は３９％であった。
１と同様の操作を行った。不純物とグルタチオンが同時
に溶出され、グルタチオンの単離けなされず、溶液中の
グルタチオンの純度は３９％であった。
実施例２
塩酸でｐＨ３に調整したグルタチオン８．２ｇを含む酵
母菌体抽出液３ｔ！を３０℃で架橋度４％の→− 強酸性イオン交換樹脂ｌＲ１１８（Ｈ型）３００ｒｎ１
３を充填した内径４０ｍｍのカラムにｓ Ｖ ２ （６
００ｍ１．／ｈｒ）の流速で流し、グルタチオン及びア
ミノ酸、タンパク、ペプチド等の不純物を吸着させた。
母菌体抽出液３ｔ！を３０℃で架橋度４％の→− 強酸性イオン交換樹脂ｌＲ１１８（Ｈ型）３００ｒｎ１
３を充填した内径４０ｍｍのカラムにｓ Ｖ ２ （６
００ｍ１．／ｈｒ）の流速で流し、グルタチオン及びア
ミノ酸、タンパク、ペプチド等の不純物を吸着させた。
ひきつつき、樹脂を水で洗浄した後、流出液のｐＨを検
出しながら、０．１規定水酸化ナトリウムをＳ Ｖ ２
（６００ｍ／／ｈｒ）の流速で流し、１０ｍ１３毎に
分画した。初期の１７００幌のｐＨは３．５で一定であ
り、１７１分画において不連続にｐｎ−ｚ、８に変わり
、その後２３０ ｊ）ＩＴＶまで一定であった。しかし
２３１分画において再びｐＨ８に不連続に変化した。そ
こで１７１分画から２３０分画までの６００ｍｊ’に含
まれるグルタチオン量をアロキサン法で求めたところグ
ルタチオンが７．９１含まれていた。又、その他の分画
にはグルタチオンは含まれていなかった。そこで次に実
施例１と同じ方法で晶析を行なったところ９９％のグル
タチオン結晶が７．２ｇ得られた。
出しながら、０．１規定水酸化ナトリウムをＳ Ｖ ２
（６００ｍ／／ｈｒ）の流速で流し、１０ｍ１３毎に
分画した。初期の１７００幌のｐＨは３．５で一定であ
り、１７１分画において不連続にｐｎ−ｚ、８に変わり
、その後２３０ ｊ）ＩＴＶまで一定であった。しかし
２３１分画において再びｐＨ８に不連続に変化した。そ
こで１７１分画から２３０分画までの６００ｍｊ’に含
まれるグルタチオン量をアロキサン法で求めたところグ
ルタチオンが７．９１含まれていた。又、その他の分画
にはグルタチオンは含まれていなかった。そこで次に実
施例１と同じ方法で晶析を行なったところ９９％のグル
タチオン結晶が７．２ｇ得られた。
Claims (2)
- （１）不純物を含有するグルタチオン粗溶液を強酸性カ
チオン交換樹脂（Ｈ＾＋型）に通し、グルタチオン及び
不純物を吸着させた後、０．０５〜０．５規定の水酸化
アルカリを流すことにより、高純度のグルタチオンを含
有する分画を回収することを特徴とするグルタチオンの
精製方法。 - （２）ｐＨを指標としてグルタチオンを含有する分画を
集める特許請求の範囲第１項記載の精製方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59148335A JPS6127999A (ja) | 1984-07-16 | 1984-07-16 | グルタチオンの精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59148335A JPS6127999A (ja) | 1984-07-16 | 1984-07-16 | グルタチオンの精製方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6127999A true JPS6127999A (ja) | 1986-02-07 |
Family
ID=15450463
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59148335A Pending JPS6127999A (ja) | 1984-07-16 | 1984-07-16 | グルタチオンの精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6127999A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6902912B2 (en) | 2002-08-09 | 2005-06-07 | Gnosis Srl | Process for producing glutathione |
| WO2016159317A1 (ja) * | 2015-03-31 | 2016-10-06 | 公立大学法人大阪市立大学 | 還元型グルタチオンの結晶 |
| CN109096367A (zh) * | 2018-08-22 | 2018-12-28 | 上海青平药业有限公司 | 一种还原型谷胱甘肽发酵过程中产生的杂质g的分离纯化方法及其用途 |
| JPWO2017159555A1 (ja) * | 2016-03-17 | 2019-01-24 | 協和発酵バイオ株式会社 | 還元型グルタチオンの結晶及びその製造方法 |
-
1984
- 1984-07-16 JP JP59148335A patent/JPS6127999A/ja active Pending
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6902912B2 (en) | 2002-08-09 | 2005-06-07 | Gnosis Srl | Process for producing glutathione |
| WO2016159317A1 (ja) * | 2015-03-31 | 2016-10-06 | 公立大学法人大阪市立大学 | 還元型グルタチオンの結晶 |
| JPWO2016159317A1 (ja) * | 2015-03-31 | 2018-02-01 | 公立大学法人大阪市立大学 | 還元型グルタチオンの結晶 |
| US10640532B2 (en) | 2015-03-31 | 2020-05-05 | University Public Corporation Osaka | Crystal of reduced glutathione |
| JPWO2017159555A1 (ja) * | 2016-03-17 | 2019-01-24 | 協和発酵バイオ株式会社 | 還元型グルタチオンの結晶及びその製造方法 |
| EP3431488A4 (en) * | 2016-03-17 | 2019-10-16 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | CRYSTAL WITH GLUTATHION WITH REDUCED FORM AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF |
| US10858393B2 (en) | 2016-03-17 | 2020-12-08 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | Crystal of reduced glutathione and method for producing same |
| JP2021191805A (ja) * | 2016-03-17 | 2021-12-16 | 協和発酵バイオ株式会社 | 還元型グルタチオンの結晶及びその製造方法 |
| CN109096367A (zh) * | 2018-08-22 | 2018-12-28 | 上海青平药业有限公司 | 一种还原型谷胱甘肽发酵过程中产生的杂质g的分离纯化方法及其用途 |
| CN109096367B (zh) * | 2018-08-22 | 2021-08-13 | 上海青平药业有限公司 | 一种还原型谷胱甘肽发酵过程中产生的杂质g的分离纯化方法及其用途 |
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