JPS6042397A - 新規なインシユリン誘導体およびそれらの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 現在一般的に血糖低下ホルモンであるインシュリンの処
方物は真性糖尿病の治療においで非経口的に投与される
。インシュリンおよびその代謝物の特殊な性質は、単純
な溶液の作用持続すなわち糖尿病患者の血糖制御の持続
が極めて短いことを意味しており、測定装置を用いて継
続注入するか、数日間毎日注射するかま・たけ作用を遅
延せし、めたインシュリン処方物を膜力することが必要
である。注射部位では少ししか溶解しないようなインシ
ュリンの状態（たとえば結晶または無定形の状態）は本
明細男中で遅延作用成分として特に重要である。それら
の近い再溶解過程の間一定の時間にわたってインシュリ
ンを放出する亜鉛インシュリンの結晶またはプロタミン
インシュリンの結晶は考慮されるべき別の例である。

今や、その作用特性ができるだけ厳密に個々の患者の要
求を満たすような種々の有効なインシュリン生成物を得
ることは治療において極めて有用であると証明された。

非最適調節と関連して、ただちに発現する作用たとえば
高血糖症または低血糖症の他に網膜症、神経障害、腎障
害および細小および巨大血管障害を含めて遅れて発現す
る合併症が論議される。

糖尿病患者におけるインシュリンの欠乏はその身体がも
はやその本来のホルモン平衡を達成できないことを意味
する。

本発明の目的は現在まで慣習的に使用さ五でいる形態の
インシュリンを投与した場合よシも。

糖尿病状態において本来のホルモン平衡により接近し、
−ｊしてこの平衡がよく保持されるようなインシュリン
誘導体゛または相当する薬学的薬剤を提供することであ
る。

今や１本発明によりこの目的はそのＢ鎖がＣ末端部分に
塩基性の有機基を有する１種または数種のインシュリン
誘導体、およびこのインシュリン誘導体を活性化合物と
して含有する薬学的薬剤によ抄達成される。

Ｂ鎖のＣ−末端部にＡｒｇ−ＯＨ４たはＡｒｇ　−Ａｒ
ｇ−ＯＨ基を有するインシュリン誘導体はすでに記載さ
れている。知られているようにこれらの誘導体は生体内
でプロインシュリンをインシュリンに酵素的に変換する
際の天然の中間体として生成され、そしてまた膵臓抽出
物中にも少ト１°検出することができる。上記の基は通
常トリゾシンおよび／またはカルボキシはブチダーゼＢ
またけ同様の特異性を有する酵素により解裂せしめられ
、そして修飾されていないインシュリンが遊離する。

本発明は式■ 〔、ただし式中　Ｒ１は水素またはＨ−Ｐｈｅを表わし
。

Ｒ５０は遺伝暗号を与えることができる中性Ｌ−アミノ
酸の基を表わし、Ｒ３１は５０個までの炭素原子を有し
、その構造において０〜３種のα−アミノ酸が関与して
おり、そしてそこにおける任意の末端カルボキシル基は
遊離の形態でか、エステル基としてか、アミド基として
か、ラクトンとしてか゛またはＣＨ２０Ｈに還元された
形態で存在することができるような生理学的に許容しう
る塩基性の有機基に表わずか、ただしＲ１がＨ−Ｐｂｅ
を表わす場合にはＣ−末端であるーＲ５°−Ｒ３１は−
Ｔｈｒ　−（Ａｒｇ）ｍ　−ＯＨ、−Ａｌａ　−（Ａｒ
ｇ）ｍ−ＯＨ１たは一８ｅｒ−（Ａｒｇ）ｍ−ＯＨ（た
だし式中１ｍは１または２である）を表わすことができ
ないものとする〕を有し、等電点が５．８〜８．５であ
るようなインシュリン誘導体およびそれらの生理学的に
許容しうる塩に関する。

Ｒ３１は特に式−ＸｎＳ（ただし式中、ｎはｏｌ　１゜
２または５であり、Ｘは同一または異なりＣ５天然に存
在する中性または塩基性のＬ−アミノ酸の基好ましくは
塩基性のＬ−アミノ酸特にＡｒｇ　、　Ｌｙｓ　、　Ｈ
ｌｓまたはＯｒｎおよび／またはこれらに相当するＤ−
アミノ酸の基を表わし、そしてＳけＯＨまたは生理学的
に許容しうるカルボキシルの封鎖基を表わすが、ｎが０
である場合にはそれは正に荷電しているかまたはプロト
ン化することができる塩基性の基を有し、またｎ＞。

である場合にはそれはそのような基を有することができ
、そしてＣ−末端−Ｘ−Ｓは対応するアルコールに還元
されたアミノ酸の基を表わすこともでき、またｎが２ま
たは３でちる場合にはホモセリンラクトン基を表わすこ
ともできる）の基を、ＴＶ、味するものと理解される。

好ましい式■のインシュリン誘導体はＲ５０が遺伝学的
にコード化できる中性Ｌ−アミノ酸の基を表わし。

ａ）Ｒ’が水素を表わし、そして Ｒ３１が ａｌ）カルボキシル基を封鎖し、そして正に荷電してい
るかまたはプロトン化しう る塩基性の基を有するような、生理学 的に許容しうる基ＳＲを表わすか。

ＰＬ２．１）Ｘ’−ＳＢ（ただし式中　ＸＮは天然に存
在する中性Ｌ−アミノ酸またはそのＤ形 の基を表わす）を表わすか。

ａ　２．２）ＸＩｌ−８（ただし式中　）ＣＤは天然に
存在する塩基性Ｌ−アミノ酸寸たけそのＤ 形、の基を表わし、そしてＳはＯＨ寸たけカルボキシル
基を封鎖し、そして場合 によυ正に荷電しているかまたはプロ トン化しうる塩基性の井を有するよう な基を表わす）を表わすか、 ｅ、２．３）対応するアルコールに還元された塩基性ア
ミノ酸炉の基Ｙを表わすか。

ａ　５．１）−Ｘｎ−８（ただし式中、ｎｒ／′ｉ２ｔ
たは３であり、Ｘは基ｘｌ＋および／またはＸｏを表わ
すが、ただしすべての７，１：　Ｘ　７３（Ｘ’である
場合にはＳはＳＲのみを表わすことができるものとする
）を表わすか。

Ｒ３，２）−χｎ−Ｙ（ただし式中、ｎけ１またｄ″２
である）を表わすか。

ａ　５．３）−ＸＩｌ−Ｚ−、−ＸＢ−Ｘ”−Ｚ、　−
Ｘ’、Ｘ’−Ｚ墳だけ−ＸＩ］−が−２（ただし式中。

ＺけＹであるかまたはホモセリン−ラクトン基を表わす
）を表わすか、または ｂ）　Ｒ’がＨ−ｐｈｅを表わし、そしてＲ５１が ｂ　１）　ａ　１）に定義された羨おりであるか。

ｂ　２−１）　ａ　２．１）に定義されたとおりである
か。

ｈ　２．２）　Ｌｙｓ　−ＯＨ，Ｄ　−Ｌｙｓ　−ＯＨ
、Ｄ−Ａｒｇ　−ＯＨ，Ｈｙ］、　−ＯＨ，Ｄ　−Ｈｙ
ｌ　−ＯＨ，０ｒｎ−Ｏ”Ｈ，Ｄ−Ｏｒｎ−ＯＨ，Ｃ１
ｔ　７０Ｈ，Ｄ−Ｃ１ｔ−ＯＨ，Ｈｌｓ　−ＯＨまだは
Ｄ−Ｈｉｓ−ＯＨを表わすか、 ｂ　２．５）　Ｘ”−Ｓ’　（たタシ式中、Ｓ′ハＳ）
意味含有するが、ただしＯＨを除外するものとする）な
表わすか、 ｂ　２．４）　ａ　２．３）に定義されたとおりである
か。

ｂ　５．１）Ｘ　−Ｘ’−ＯＨまたは−ｘ’−ｘ−ｏＨ
（ただし式中、Ｘ′けｂ２．２）Ｋ定義されたとおりで
ある）を表わすか。

ｂ　３．２）Ｘ２−８’を表わすか。

ｂ　３．３）ａ　３．ＩＸただしｎ＃′ｌｉ３である）
に定義されたとおりであるか。

ｂ　３．４）ａ、　３．２）　ｔたはＣ３，３）に定義
されたとおりである 場合の式ｌのそれらの化合物である。

８１位にフェニルアラニンを有するインシュリン誘導体
が特に好ましい。また８３０位にＡｌａ　、　Ｔｈｒ　
”ＪたはＳｅｒを含有するものも好ましい。

本発明による化合物のＡ鎖お・よび（Ｂ２−２９）鎖は
有利には牛または豚インシュリンの配列を有するが、ヒ
トインシュリンの配列を有するのが特に有利である〇 アミノ酸基ｘ、ｘ’およびＸＴＩおよび基Ｙおよび２は
互いに独立してＤ−またはＬ−配置で存在することが−
できる。しかしながらこれらすべての基に対してＬ−配
置が好ましい。

以下のＬ−アミノ酸には遺伝的にコード化することがで
きる。Ｇｌｙ、　Ａｌａ　、Ｓｅｒ、　Ｔｈｒ　、、Ｖ
ａｌ。

Ｌｅｕ　、Ｉｌｅ、Ａｓｐ、　Ａｓｎ、Ｇｌｕ　、　Ｇ
ｉｎ　、Ｃ’ｙｓ。

Ｍｅｔ　、　Ａｒｇ、　Ｌｙｓ　、Ｈｉｓ　、　Ｔｙｒ
　、Ｐａ）ｅ　、　Ｔｒｐ　。

およびＰｒｏ　（中性アミノ酸には下線が付されている
）。

天然に存在する中性アミノ酸は特にＧｌｙ　、　ａｌａ
。

Ｓｅｒ　、　Ｔｈｒ　、　Ｖａｌ　、　Ｌｅｕ　、　Ｘ
ｔｇ、　Ａｓｎ　、　Ｇｉｎ　。

Ｃｙｓ　、　Ｍｅｔ　、Ｔｙｒ　、　Ｐｈｅ　、Ｐｒｏ
またはＨｙｐを意味するものと理解される。天然に存在
する塩基性アミノ酸は特にＡｒｇ、Ｌｙｓ　、　Ｈｙｌ
　、　Ｏｒｎ　、Ｃ１ｔまたはＨｉｓを意味するものと
理解される。

本発明による化合物中の８鎖のＣ−末端部の遊離のカル
ボキシル基を封鎖することができる基は特にエステルお
よびアミド基好ましくは（０１〜Ｃ６）アルコキシ、（
０３〜Ｃ６）シクロアルコキシ、　ＮＨ２、（Ｃ，〜ｃ
６）アルキルアミノ、ジ（Ｃ＋〜Ｃ６）アルキルアミノ
または塩基性の基たとえばアミノ−（０２〜Ｃ４）アル
コキシ、（０１〜Ｃａ）アルキルアミノ−（０２〜Ｃ６
）アルコキシ、ジ（０１〜Ｃ４）アルキルアミノ−（Ｃ
２〜ｃ６）アルコキシ、トリ（Ｃ１〜ｃ４）アルキルア
ンモニオ−（０２〜Ｃ６）アルコキシ、アミノ−（Ｃ７
〜Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミ
ノ−（０２〜Ｃ６）アルキルアミノ。

〔ジ（Ｃ，〜Ｃ４）アルキルアミノ］　−（Ｃ２〜ｃ６
）アルキルアミノまたは〔トリ（０１〜Ｃ４）アルキル
アンモニオ）　−（０２〜Ｃ６）−アルキルアミノ、／
ｌ￥に−ロー　（ｏＨ２）ｐ−ＮＲ，、、−ｏ−［ＣＨ
２）ｐ−ＮＲい−ＮＨ−（ＣＨ２）　ｐ　−ＮＲ２また
は−ＮＨ−［：Ｃ）（２）ｐ−ＮＲ５（ただし式中、ｐ
は２〜６であり、そして基Ｒは同一または異なシて水素
または（Ｃ，〜Ｃ４）アルキルである）を意味するもの
と球解される。

本発明による一連のインシュリン誘導体のうちで以下の
化合物を例として記載することができるが５本発明はこ
れらにより限定されるものではない。

デス−Ｐｈｅ”−豚インシュリン”Ａｒｇ”’−ＯＨ。

デス−Ｐｈｅ”　’−ヒトインシュリ：／　−Ａｒｇ”
’−ＯＨ。

デス−Ｐｈｅ”−豚インシュリンーＡｒｇＢ５１−Ａｒ
ｇＢＳ２−ＯＨ。

デス−Ｐｈｅ”−ヒトイ／シュリン−ＡｒｇＢ５１−Ａ
ｒｇ”　−ＯＨ。

豚インシュリｙ　−Ａｒｇ　−０ＣＨ３゜ヒトインシュ
リン−ＡｒｇＢ３’　−０ＣＨＢ　。

牛インシュリン−ＡｒｇＢ５１−　ＯＣＨ，。

豚インシュリン−λｒｇｉｔ　！Ｉ　Ｉ　Ａ　ｒｇＢ　
５２−　ｏｃＨ５、ヒトインシュリン−Ａｒｇ　−Ａｒ
ｇ　−０ＣＨ３゜デスーＴｈｒＢ５０−ヒトインシュリ
ン−ｖａ１ｎ５ｏ−ＡｒｇＦ′３１−併重。

デス−Ｔｈｒ　−ヒトインシュリフ−ｖａ１ｐｓｏ　−
Ａｌａ　−Ａｒｇ　−ＯＨ。

ヒトインシュリン−Ｌｙｓ　−ＯＨ。

ヒトインシュリン−〇　−Ａｒｇ　−ＯＨ。

ヒトインシュリン−Ｄ　−Ａｒｇ”’　−Ａｒ、ｇ”　
−ＯＨ。

ヒトインシュリン−Ａｒｇ”　−Ｄ　−ＡｒｇＩ］５２
−　ＯＨ。

ヒトインシュリン−Ｌｙｓ　Ｂ　５　＋−Δｒｇ８５２
−　□Ｈ、−ヒトインシュリン−ＡｒｇＢ３１−Ｌｙ８
Ｂ５２−ＯＨ。

ヒトインシュリン−アルギニツール　。

ヒトインシュリフ　−Ｖａｌ　−Ａｒｇ　−ＯＨ。

ヒトインシュリフ　−’Ｖａｌ”−ムｒｇ−ＡｒＲＢ３
３−　ＯＨ。

ヒトインシュリン−ＡｒｇＢ５１−アルギニツールＢ５
２、ヒトインシュリン−Ｌ、ｙｓ　−Ａｒｇ−Ａｒｇ”
　”　−ＯＨ％ ヒ・トインシュリンーＡｒ（＜　−Ａｒｇ−ＮＨ２。

ヒトインシュリンー〇ｒＴｌ”　−Ｏｆｌ、ヒトインシ
ュリン−Ｉ、ｅｕ　−Ｃ１ｔ　−ＯＨ。

ヒトインシュリン−（Ｂ　３０　）　−０ＣＨ，、ＣＨ
，、−ＩＪＨ２゜ヒトインシュリン−（Ｂ　３０　）　
−ＮＨ−Ｃ，［（２ＣＨ２−ｔ、ＩＨ３゜ ヒトインシュリンーＡｒｔ＜　−０−ＣＨ２ＣＨ２−Ｎ
Ｈ２、ヒトインシュリン−Ａ１．ｇＢｇ＋　−、ＣＨ２
ＣＨ２−Ｎ　（ＣＨ，）　、、、ヒトインシュリフ−（
Ｂ２Ｏ）−０−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ　（ＣＨ３）３− ヒト・インシュリン−（Ｂ　３０　）　−ＮＨ−ＣＨ２
−ＣＨ２”−Ｎ　（ＣＨ３）３　。

ヒトインシュリン−Ｌｅｕ　−（ン−ＣｆＩ、　−ＣＨ
２−ＣＨ２−ｐｓ（Ｃ２Ｈ５）。

ヒトインシュリン−Ｔｒ、ｐ　−Ｔｒｐ　・−ＴｒｐＢ
５５−ＮＨ（ＣＨ２）４−　Ｎ　（（ＣＨ２）５ＣＨ５
〕３゜本発明はまた式■を有するインシュリン誘導体の
製造法に関するものであり、それは（ただし式中　Ｒ＋
はＰｈｅまたは結合を表わし。

Ｓｌはプロトン加溶媒分解まだなよβ−説離により解裂
することができるアミンの保獲基たとえば第３級ブトキ
シカルボニル（Ｂｏｃ　）、第３級７ミノー７オキシカ
ルボニル（Ａｏｃ　）まだはメチルスルホニルエトキシ
カルボニル（Ｍｓｃ　）　ＱｐＨを表わす）のデス−オ
クタはプチド（８２３〜３０）−インシュリンを式ＩＩ
Ｉ Ｈ−Ｇｕｙ−’Ｐｈ０−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ（Ｂ２）−Ｔｈ
ｒ（Ｂ２）−Ｐｒｏ　−（ただし式中、Ｒ３０１”−よ
びＢ３１は上記に定義された意味を有し　Ｂ２は水素、
　Ｂｚｌまたは第６級ブチルを表わし、そしてＢ３はウ
レタンの保護基たとえばＢｏＣ，Ｍｏｃ　、　Ｆｍｏｃ
または２を表わし、必要な場合には基Ｒ３０および■（
５１に存在する遊離のＣ０ＯＨ，ＯＨ，ＳＨ，ＮＨ２、
グアニジノおよび／またはイミダゾール基が本来既知の
方法で保獲さ些ていてもよい）のペプチドと縮合させ、
そして適当な場合には本来既知の方法で存在する保Ｉ基
を解裂するか。

ｂ）式■（ただし式中　Ｒ１はＨ！！、たはＨ−Ｐｈｅ
を表わし、そしてＣ−末端Ｒ５［１−Ｒ５１は一緒にな
ってＯＨを表わす）のデス−８３［１−インシュリンを
トリジシンまたはトリジシン様エンドベプチダー上の存
在下で式ＩＶ ｎ−ｕ　−Ｒ（ＩＶ） （ただし式中、Ｒ３０およびＲ３１は上記に定義された
意味を有し、そして必要な場合には存在する遊離のＣ０
ＯＨ％Ｏ）１．ＳＨ，ω−１−ＪＨ２−グアニジ、ノお
よび／またはイミダゾール基は本来既知の方法で保獲さ
れている）の化合物と反応させ、そしてつぎに適当な場
合には存在する保護基を本来既知の方法で解裂するか、
または Ｃ）Ｒ５１にＬ−配置のアミノ酸基を有するインシュリ
ン誘導体を製造するために、プロインシュリン、プロイ
ンシュリン類似体またはゾレプロインシュリン類似体ま
たはこれらの化合物の中間体を化学的に、そして／まだ
は酵素的にハ了裂する ことから成る。

ｔｍ記ａ）法においてはたとえは米国特許第４．０２９
，６４２号明細書に記載されたのと同様の方法によりデ
ス−オクタはプチド−（８２３〜３０）−インシュリン
のＮｌ２．ＨαＩ］１−ビスーＢｏｃ誘導体を縮合剤と
して１当量よりもわずかに少ないジシクロへキシルカル
ボジイミドを使用して１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ルの存在下で１当刊の式１■の化合物と直接に反応せし
める。

この方法においては通常カルボキシル基を保匠（ｔする
必要がないので、エステル化の間でも捷たアルカリ加水
分解の間でも通常インシュリンｈ店導体に対する損害は
避けられる。反応しなかったデス−オクタペプチドおよ
びＩｖおよびＡｓ　ｐＡ　２＋−ＯＨとの縮合により生
成したペプチドはそれらの分子サイズおよび電荷数の相
違に基づいて七〇 ファデックス　−ＬＨ２０の分配クロマトグラフ■ イーによるか、まだはセファデックス−０７５まだはＧ
５０（微却１粒）のゲルクロマトグラフィーにより容易
に除去することができる。

第５級ブチル保韻基を解裂する〆仁めにはその反応生成
物を室温で６０〜６０分間ドリブルオロ酢酸で処理する
だけでよい。この反応Ｑまインシュリン誘導体に損害を
与えない。、メチルスルボニルエトキシカルボニル基が
Ｎ−保に％＆として選ばれる場合には、β−説離により
除去するためにアルカリで処理する必要がある。その反
応Φ件はインシュリン誘導体が損害を受けないような条
件（たとえばｏ、ＩＮ水酸化ナトリウム。

０℃、５秒間）である。出発物質として使用される豚か
らのＮａＡＴ　、ＮαＲ＋−ヒス−Ｂｏｃ　−デス−８
２３〜３ｏ−オクタベゾチドーインシユリンししたとえ
ばつぎの経路により製造される２、豚インシュリンをジ
メチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドおよび水の
混合物中トｒ−エチルモルホリンの存在下で過剰の第６
級ブトキシカルボニル−Ｎ−ヒドロギシサクシンイミド
と反応させる。それにより期待されたＮｌ２゜Ｎ、、Ｎ
、　−トリス−Ｂｏｃ−インシュリンが生成する。

電気泳動によりもはや出発物質が検出されなくなるまで
、この化合物のジメチルホルムアミドおよびトリス緩衝
液（ｐＨ７，５）中溶液に少量のトリプシンを加える。

セファデックス■−ＬＨ２０の分配クロマトグラフィー
によりＮｌ２　、　ＮｃｔＢ　１−ビスーＢＯＣ−デス
−８２５〜き。−オクタペプチド−インシュリンを精製
する。

つぎにこの化合物をジメチルホルムアミド巾約ｐＨ７−
ｓで式ＩＩＩのはプチド１モル（それハハプチド化学に
より本来知られている方法で製造される）、１−ヒドロ
キシベンゾトリアゾール１〜２モルおよびジシクロへキ
シルカルボジイミド約０．９モｔｖと反応させる［　ｒ
　Ｃｈｅｍ、　Ｂｅｒ、　Ｊ第１０３巻第７８８頁（１
９７０年→参照〕。

分配クロマトグラフィーにより粗生成物を精製し、そし
て室温でトリフルオロ酢酸／アニンールを用いて処理す
ることにより保護基を除去して遊離の形にする。エーテ
ルを用いて沈澱させ、水から等電点沈澱させ、そしてセ
ファデックスＧ７５または（）５０微細粒のクロマトグ
ラフィーに付したのち、その化合物は電気泳動的に純粋
であり、そして既知の方法で結晶化す名ことができる。

このようにして得られたインシュリン誘導体は生物学的
に充分に活性である。

本発明の方法に対する出発化合物としてのデス−Ｐｈｅ
　−インシュリンはたとえばドイツ特許第２，００５，
６５８号またはヨーロッパ特許第Ａ−４６，９７９号各
明細書により知られている。

前記ｂ）法において出発化合物として使用されるデス−
８３０−インシュリンはたとえばヨーロッパ特許第Ａ　
−４６，９７９号明細１またはｒＨｏｐｐｅ−８ｅｙｌ
ｅｒｌｓ　Ｚ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、Ｊ第３
５９巻第７９９頁（１９７８年）により知られている。

ｂ）法で使用される式ｌｖの出発物質は本来ペプチド化
学の方法により知られている一方法で製造される。■に
対して使用することができる保護基はＭ、　Ｂｏｄａｎ
ｚｙｋｙ氏ら著ｒ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　８ｙｎｔＭｓｉｓ
　Ｊ　９４２版（１９７６年Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ
社発行）に詳細に記載されている。

デス−８３０−インシュリンおよび式ＩＶの化合物は米
国特許第４．５２０，１９　ｌＳ号明＃（川明に記載さ
れだのと同様、の操作により、ｐＨ５〜９の有機−水性
溶媒系中２０〜４０℃の温度でトリプシンまたはトリプ
シン様エンドペプチダーゼの存在下で互いに縮合させる
。生成するインシュリン誘導体ははプチド化学の通當の
方法によシ単離する仁とができる。

一方ヒトまたは霊長類動物からのプロインシュリン［ｃ
）法に対する出発物質として遺伝子工′学的方法により
入手することができる。ＡｒＦＣ（Ｒ３１）およびジー
Ａｒｇ（Ｒ３１〜３２）肋うｎ゛休はトリプシンまたは
トリプシン様のｍ素を用いる簡単な消化によりそれから
得らｊしろうしか【７ながらさらにまた対応するプレプ
ロインシュリン誘導体を解裂することにより新規なイン
シュリン誘導体に導くような比較的簡単なプラスミドを
４Ｊｌ成することも可能である。なぜならばそれらはＲ
３１またけＲ３２において天然に存在するアルギニンの
代わりに他の中性または塩基性アミノ酸をコード化する
からである。

ＤＮＡ組換え法を使用するプロインシュリンの製造はプ
ロインシュリンのアミノ酸配列にコードを与えるような
りＮＡ配列の生成を必要とし。

それは単離または構成によるか、または両者の組合わせ
により達成することができる。つき゛にプロインシュリ
ンＤＮＡを適当なりローニングに挿入し、そして表現担
体を読み取り相に挿入する。その担体は適当な微生物を
改良せしめるのに役立ち、つぎにそれによシ得られた改
良微生物を発酵状態に付すと、プロインシュリン遺伝子
を含むベクターの別の複製物が生成し、プロインシュリ
ン、プロインシュリン誘導体またはプロインシュリン前
駆体（またはプレプロインシュリン誘導体）が表現せし
められる。

表現生成物がプロインシュリン前駆体である場合にはそ
のような生成物は一般的にプロインシュリンのアミノ酸
配列を含んでおり、それはその末端アミノ基において通
常プロインシュリンまたはプロインシュリン誘導体が挿
入された遺伝子配列により表現される蛋白質の７ラグメ
ントと結合せしめられる。プロインシュリンアミノ酸配
列は特異的に解裂されうる位１ｉｔ（それはたとえばメ
チオニンである）でその蛋白質のフラグメントと結合せ
しめられる。生成するプロインシュリンの、アミノ酸配
列はたとえばドイツ特許第Ａ−３，２３２，０３６号明
細書に記載されたようにして縮合遺伝子生成物から解裂
せしめられ、そしてＮｆＬｌ！後プロインシュリンが単
離される。

この方法で得られたプロインシュリンまたはブロイ・ン
シュリン誘導体の酵素的解裂はｒ　Ｅｘｃｅｒ−ｐｔａ
　Ｍｅｄｉｃａ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎ
ｇｒｅｓｓ　８ｅｒｉ、ｅ８Ｊ第２３１号第２９２頁お
よびそれ以降に記載されているか、またはドイツ特許出
願第Ｐ　３２０９１８４号明細書に記載されているのと
同様の操作により行われる。

既知のアルギニン（Ｒ３０）およびジアルギニン（８６
１〜５２）誘導体および遺伝子工学的方法により得られ
、そしてＲ５１に天然に存在するＬ−アミノ酸を有する
ようなそれらの誘導体に加えて、０徴として１　ｆｉｌ
ｉまたは数種の塩基性基の存在および／′または遊離の
カルボキシル基の非存在を示し、従って分子の正味の荷
電が変更されていないインシュリンと比較してかまたは
デス−Ｐｈｅ”−インシュリンと比較して正の荷電が少
なくとも１個増加しているような多数の新規なインシュ
リン誘導体が上記の半合成的方法により得られる。

これらの誘導体にはたとえば天然に存在する８３１位の
アミノ酸でおるＬ−リジン、Ｌ−ヒスチジン、またはＬ
−アルギニンの代わりにそれらのＤ−鏡像異性体または
その側鎖に塩基性り、（（たとえばオルニチンまたはヒ
ドロキシリジン）ｌ有する通常のＤ−またはＬ−アミノ
酸類似体を含有する誘導体が含まれる。アミノ酸の代わ
りにたとえばコリンエステル基が８３１位に存在してい
てもよく、その場合には２個の正味の正の荷電が得られ
る。８３１位のアミノ酸マたはアミノ酸類似体は遊離の
カルボキシル末端を有することができ、また単純なアル
コール（た、とえばメタノ−／Ｌ／またはエタノールで
エステル化されているか、まだは単純なＶ水塩基（たと
えばアンモニアまだはモノ−またはジ−メチルアミン）
でアミド化されていてもよく、さらにたとえばコリンで
エステル化されていてもよい、たとえば中性まだはもう
一つの天然に存在する塩基性アミノ酸または上記のアミ
ノ酸銹導体の一つは８３２位に存在することができ、同
様にそのカルボキシル基は遊離であるか、エステル化さ
れているか、またはアミド化されていてもよい。この場
合にもまたたとえばコリ／エステル基または別の中性ま
たは゛塩基性アミノ酸′！ｌ：だはアミノ酸類似体が存
在することができる、これらのインシュリン誘導体はす
べてその分子表面に正の電荷が追加されたことによりそ
の分子の等電点が中性領域に移動しているという一般的
な特徴を有する。誘導体により５，８〜８．５゜特に６
．２〜８．２の等電点が等電点集束法で測定さ第１る。

このように中性領域の誘導体は、ｐＨ５，４にそれらの
等電点を有し１．従ってそこに最大溶解度領域を有する
変更されていないインシュリン捷たはプロインシュリン
よりも溶解しにくいが、他方それらは中性範囲内では通
常溶解した形態で存在する。

インシュリンまたはプロインシュリンの溶解度特性は等
電点よりも上の領域において、すなわち治療上特に興味
深い中性領域において亜鉛イオンの添加により影響せし
められる。亜鉛はここではインシュリンの六飼体状態を
安定化させることによシ蓄ｔ７１（デ”−ボ）成分とし
て作用しそして結晶化せしめるように作用する。これら
の凝集物は皮下組織で再び溶解する。

現在使用されているもう一つの蓄積（デボ）成分はイン
シュリンまたはプロインシュリンを塩基性蛋白質たとえ
ばグロビンまたはプロタミンとの錯体として結晶化せし
める。

プロインシュリンが溶液中でかまたは上記の蓄積成分と
ともに使用される場合には５変性されていない充分に活
性なインシュリンを遊離させるためにさらに蛋白質分解
が必要である。無傷のプロインシュリンはわずかにイン
シュリンの生物活性の約８分の１の活性を有するにすぎ
ない。なぜならば理論によれは表面上の生物学的、活性
領域すなわち受容体結合領域はプロインシュリンに存在
するＣ−はゾチドにより連動されているからである。看
うまでもなく同族のプロインシュリンすなわちヒトの配
列を有するプロインシュリンだけが糖尿病の治療に適当
である（たとえばドイツ特許Ａｌ−３，２３２，０３，
６号明細書参照）。異型のプロインシュリンは有意の免
疫原性を有する。この点についてはヒトのレロインシュ
リンはＣ−一？プテド部分が変化してもよいことに注目
すべきである。

Ｃ１１ａｎｃｅ　氏　（ｒｇｘｃｅｒｐしａ　Ｍｅｄｉ
ｃａ　ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｎｇｒｅＳｓ　
５ｅｒｉｅＳＪ第２６１号第２９２〜２９３頁）の研究
によれば、豚インシュリン−Ａｒ８Ｒ３１０Ｈおよび対
応するジアルギニン誘導体はそれぞれ変性されていない
豚インシュリンの活性の６２係および６６条を有するに
すぎない。

今や汽くべきことには、インシュリン−ＡｒｇＢ３１−
ＯＨ，インシュリン−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＯＨおよびＢ鎖
が塩基性のＣ−末端４１機基を有するような他のインシ
ュリン誘導体はプロインシュリンとは対照的に変性され
ていないインシュリンの活性とほぼ同水準の生物活性を
不することが見い出された。

従って本発明は薬学的に許容しうる相体および式■（た
だし式中　Ｒ１けＨオたはＨ−Ｐｈｅを表わし、Ｒ３０
は遺伝的コードを与えることができる中性Ｌ−アミノ酸
の基をＦわし、Ｒ″は５０個までの炭素原子を有し、そ
の第１・す造において０へ・６種のα−アミノ酸が関与
しでおり、ぞしてそこにおける任意の末端力／Ｌポキシ
ル基は遊離の形態でか、エステル基としてか、アミド基
としてか、ラクトンとしてかまたｉ−Ｊ：　０Ｈ２０Ｈ
に還元された形態で存在することができるような生理学
的に許容しうる塩基性の有機基を表わす）を有し、そし
て等電点が５．８・−８，５であるようなインシュリン
誘導体またはその生理学的にγ「容しうる塩である活性
化合物を含有する。真性糖尿病を治療するだめの医薬に
関する。

さらに本発明による医薬は完全に新規な遅延代用成分で
あシ、蓄積性補助剤たとえば亜鉛またはプロタミン硫酸
塩を用いることなくその作用を開始することができる。

蓄積（デボ）作用は蛋白質化学に固有の物理的性質すな
わちその等屯点においてはインシュリン誘導体は殆んど
Ｗ＋　解しないという性質による。その誘導体を生理学
的条件下で再度溶解することは、おそらくさらに加えら
れた塩基性基を解裂することにより達成されるであろう
。そしてそれは誘導体によりトリプシンまたはトリプシ
ン様の活性および／またはカルがキシペプチダーゼＢま
たはカルボキシペプチダーゼＢ様活性および／またはエ
ステラーゼ活性により行われる１、解裂される特定の基
は純粋に生理学的な代謝物たとえばアミノ酸、オルニチ
ンまたはコリンであるか、または容易に代謝しうる生理
学的に許容しうる物質である。

まだ異型のＣ−ペプチド部分を含む文献記載の中間体と
は対照的に、とれらの新規な医薬の活性化合物として使
用されるインシュリン誘導体は対応するインシュリンそ
れ自体よシも強力な免疫原作用を有しない。

上記のＣｈａｎｃｅ氏の活性値はあまりにも低いが、そ
れはおそらく研究されたフラクションが充分に純粋では
ないためか、もしくは系統的々測定誤差によるものであ
ろう。いずれにせよ医薬中における活性化合物としての
それらの有用性は（おそらくこの事実のために）現在ま
で知られていない１、 本発明による路剤は活性化合物として１種または数種の
式■を有する新規なインシュリン誘ｎｓ’＋ 導体まだはインシュリン−Ａｒ（＜　−ＯＨまｒｃｔｔ
Ｊ、インシュリフ　−Ａｒｇ　−Ａｒｇ　−ＯＨを含有
する、それらは好ましくはｐＨ値が２，５〜８，５であ
り、そして適当な等張削、適当な防腐剤および適当な）
烏合にはｐＨを５．０〜８．５の範囲内にするだめの適
当な？両剤を含有する。

記載された誘導体の典型的な使用形態は笠ＩＢ点以下で
生理学的に８′Ｆ容しうる賦形剤中の溶液の形態で存在
する生成物である。その溶液のｐＨ（・ま典型的には５
．０でありうる。すなわち酸がそのままの形であるイン
シュリンのｐＨ（典型的に１’：Ｉ：Ｊ）Ｈ３，０）よ
りも有意に高い。ある環境においては耐容性の点でさら
に中性の注射溶液が著しく訓点を与える。

１・１は゛中ｆ’Ｌのｐ）Ｉを冶する生理学的に許容し
うる賦形剤中上記誘導体の無定形まだは結晶性沈澱のｊ
ｉ％４ＨｆＱ物はもう一つの典型的な使用形態であんし
かしながら別の蓄積（デボ）成分たとえば１１１ｊ鉛ま
たはプロタミ、ン硫酸塩を加えることにより、生理学的
なｐＨ範囲においてその誘導体に固有の離溶性を増強す
ることも＋’ｌ’　ｆｉにである。加えられる亜鉛の牡
はインシュリン１００単位あだノ リＺｎ　１ｏｏμ２まで、典型的にはインシュリン１０
０単位あたりＺｎ約５０　ｔｔｆでありうる、プロタミ
ンの量は１００．単位あたり０．２８Ｆｌ！９〜０．６
Ｍｇ（プロタミン硫酸塩として）でありうる。

この方法で作用時間が特に長い？ｌｌ剤を得ることがで
きる。将来はそのような製剤を現在１でよりも広く使用
するようになるでちろう１．なぜならば正確に基本的な
量のインシュリンＵ、冶療上有利であ′ると考えられる
からである１、このことはすでにインシュリン測定装置
ｔｔを）ＬＪいる治療から認められている。

インシュリン誘導体と適合しうる適当な生理学的にＷ「
容しうる賦形剤である媒質は、通常の方法でたとえばグ
リセロール、Ｎｒヒナトリウムまたはグルコースを用い
て面ンＩＶと等張にしん無菌的な水性溶液であシ、そし
てそれはさらに通常の防腐剤たとえばフェノール、ｍ−
クレゾールまだはｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルを含
有することもできる。賦形剤である媒質はさらに緩両性
物賀たとえば酢酸ナトリウム、くえん酸ナトリウムまた
は隣酸ナトリウムを含有することもできる。ｐＨを調節
するためには希酸（典型的には塩ｌｖ２　）またはアル
カリ（典型的には水酸化ナトリウム）が使用される。

上記のインシュリン誘導体はまた本発明による薬剤中で
アルカリ金属塩またはアンモニウム塩の形態で使用する
ことができる。１種または数種の式■のインシュリン誘
導体またｉ＋：１　種の式■のインシュリジ誘導体の所
望された量をそれぞれの場合に互いに無関係に溶解され
た形態でか、無定形および／または結晶の形態でこの種
の別のインシュリン誘導体と混合することができる。

処方物が種々の物質と接触することにより熱または機械
的圧力にさらされた場合に、蛋白質の沈澱生成を阻止す
るような適当な安定剤の適量を本発明による処方物に加
えることがしばしば有利である。そのような安定剤はた
とえばヨーロッパ特許第Ａ−１８．６０９号、ドイツＱ
’ｊ許第Ａ　−３，２４０，１７７号またはＮｏ　−８
５１００２８８号各明細書か５知られている。

既知の遅延作用成分の一つ、たとえばプロタミン硫酸塩
、グロビンまたは亜鉛の適当量を・も含有することがで
きろ本発明による薬剤において、そのような遅延作用成
分は活性化合物の全部とか、また（はその一部と組み釡
わせてか、または１種または数種の式Ｉのインシュリン
誘導体とン昆合して使用することができる。薬剤は遅延
作用を有する数種の異なった補助剤と組み合わせて式Ｉ
を有する種々のインタ１リン誘導体を含有することがで
きる、 このように種々の極めて細かく調節できる作用特性が本
発明による治療剤を用いて達成できることは明らかであ
る。導入部の記載からこのことにより１１￥に長期の糖
尿病合併症に対して進歩がもたらされたと言える。

本発明をさらによく理解せしめる／こめに以下に実施例
をあげ゛Ｃ説明するっ 製造例　１ ヒトインシュリン−（Ｂ３Ｑ）　０−ＣＨ２−ＣＨ２−
Φ ”　（ＣＨｓ　）ｓ 豚インシュリン５２をツメチルホルムアミド４５ｍｅ、
ツメチルスルホキシド２５ｍｅ、Ｎ−エチルモルホリン
０．５　ｍｅおよび水２．５　ｍｅに溶解する。第３級
ブトキシカルビニル−Ｎ−ヒドロキシザクシンイミド１
，５２を室温で撹拌しながら加え、そしてその混合物を
６時間反応せしめる。つぎに氷ｒｉ’ｒ：　「俊−１滴
を加えることにより反応を市め、エーテルを用いて生成
物を沈澱せしめ、そしてｐ別する。残留物をジメチルホ
ルムアミド３６０　ｍｅに溶解し、そしてその溶液をト
リス緩衝液（０，０５Ｍ、　１．１．０１ＭＣａ　Ｃ７
０中、ｐＨ７，５）　５２０　ｒｒｔ　テ希釈−ｆ　ル
、、−ｆ：　レソレの場合に１時間間隔で且つ３６＋２
でトリプシン２０叩ずつを加える。

全部で１２回加えたのち酢酸を用いてｐＨを４．５とな
し、そしてその溶液を蒸発させる３、その後セｆｆｉ＋ ファデックス　ＬＨ２０のカラム（８ｘ２００ｃＴＬ）
を用いてｎ−ブタノール−氷酢酸−水（２：１：１０）
系の分配クロマトグラフィーによシその物質を精製する
とＮ♂Ｉ、ＮａＨ−ビスーＢｏｃ−デス−”２５〜５０
−オクタペプチドインシュリン（豚）　３．２５“２が
得られ、それは酸および塩基電気泳動で出発物質を示さ
ない。この物質のアミノ酸分析は正しい。

ＢｏＣ基の解裂を試みたのちもはやインシュリンの活性
は見い出されない。この物質（３，２５９）を１−ヒド
ロキシベンゾトリアゾール゛１００ｍ９、ＨＣｔ。

Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　−Ｔｙｒ　（Ｂｕ″）　−Ｔ
ｈｒ　−Ｐｒｏ　−Ｌｙｓ（ｍｏｃ）　−Ｔｈｒ（Ｂｕ
　）　−ｏｃ４２ｃｕ２−　Ｎ（ＣＨ３）、、ＨＣ４７
５０ｔｎｇおよびＩＪ−エチルモルホリン０．５　ｍｅ
とともにジメチルホルムアミド３０　ｍｅに溶解する。

つぎにジシクロへキシルカルボジイミド１２０ＭＩＦを
室温で加え、そしてその反応物を２４時間撹拌する。硯
澱したジシクロヘキシル尿素を戸別し、そしてエーテル
を加えることにより生成物を沈澱させる。

その沈澱を戸別し、エーテルで洗浄し、そして乾燥する
３、この物質を上記の系中セファデックス８−ＬＨ２０
の分配クロマトグラフィーにより精製する。主なピーク
から得られた物質２．６ｆをアセトン／エーテルを用い
る沈澱生成により単向１トする。

乾燥した、まだ保獲されていない誘導体をトリフルオロ
酢酸５−およびアニソール１　ｍｅの混合ゴ吻と室温で
６０分間反応させる。つぎにその氷冷した溶液からエー
テルの添加により粗製の物Ｊ１ｉＩを沈澱させる。乾燥
した沈澱を水に溶解し、そして水性アンモニアを用いて
生成物を沈澱させ、そして遠心分離する。この生成物を
七ファデックス’　−０５０微細粒またはＧ　７５　を
用いて１０チ酢酸中でｉｉｖ製する。所望のピークの部
分からヒトインシュリン＋　（Ｂ　３０　）　−ｏｃＨ
２ｃｎ２ｆｉ（ＣＨ３）、を疎漏乾燥にょシ単離する（
結晶化したのち収−ｉｌ、２Ｆ）。このようにして得ら
れたインシュリン誘導体は生物学的試験においてヒトイ
ンシュリンのそれと同等の活性を示す。

表■のオクタペプチドは通當のペプチド縮合方法によシ
つぎの縮合順序により製造される。

弐］■のオクタペプチドに対する合成１１ｉ！’ｌ　Ｉ
Ｉ’上記のアミノ酸および元素分析は理論と一致してい
る。

製造例　２ 豚のプロインシュリンからトリプシン消化による豚イン
シュリン−Ａｒｇ−Ａｒｇ　−ＯＨ豚のプロインシュリ
ン５５０■をｐＨ７，５の０，１人４トリス−塩酸緩衝
液２５．ｍｅに溶解する。トリプシン５００μｍを室温
でこの溶液に加えると数時間以内で濁りを生じる。反応
が終了した時点で沈澱を遠心分離し、酸性条件下で溶解
し、アセテート膜？ｌｌ気泳動または高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）により分析する。再度新しく沈
１８’：’ｌ生成し、そして沈澱を洗浄したのちこれを
本来既知の方法で後処理するか、まだは０．５Ｍまでの
塩化す）　ＩＪウム勾配を使用し、ｐＨ４，０の００５
Ｍのアセテートを用いて陽イオン交換体で４１ｖ製する
。適当な部分を合し、そして沈澱させる。洗浄し、そし
て再結晶したのち豚インシュ５１ す７−Ａｒｇ　−Ａｒｇ　−ＯＨ１０４Ｑが庁、　ｌ；
ＩＦされ、それはアミノ酸分析により固定され、そして
ＨＰＬＣおよび等電点集束により杓−であると定性され
た。

インシュリン誘導体である豚インシュリン−５１ ＬｙＳ−Ａｒｇ　−ＯＨはＢ３１位が変ｊｌ工された対
応する豚のプロインシュリンから同様の方法でイ（Ｉら
れる。

医薬 実施例　１ １　ｍ／！あだり４ＱＩ、Ｕ、を有［−１その蓄稍活性
を有する、弱酸性の溶角了された処方物中の豚からのイ
ンシュリアーＡｒｇ−Ａｒｐ；　−ＯＨ（ｆｆ’ｆ、の
プロインシュリンからトリプシン消化により製造される
） 豚インシュリン−Ａｒｇ−Ａｒｇ　”２−０Ｈ（２７１
Ｎ、／ＡＲ９＞　１４．８叩結晶性グルコース（モノ水
和物）　ｓ４ｏ、ｏ叩メチルｐ−ヒドロキシベンゾニー
）　１０．Ｇｌｉ？上記の成分を水に溶解し全＠１０　
ｍｌにする。

ＩＮ塩酸またはＩＮ水酸化ナトリウムを加えることによ
りそのｐＨ値を４，５にする。

そのような溶液は家兎において梅あたり０．４１、Ｕ、
の投与量で顕著な蓄積活性を示す。血糖曲線下領域は１
　ｍｅあたり４［）１．Ｕ、を有する標準生成物のそれ
と同様である。

実施例　２ 本例は１ｍｅあたり４０工、Ｕ、を有し且つその蓄積活
性を有する中性処方物中のヒトインシュリン−（Ｂ２Ｏ
）−コリ／エステル（豚インシュリンからの半合成によ
り製造される）の使用を示す。

ヒトインシュリン−（Ｂ２Ｏ）− コリンエステル（２８工、Ｕ、／■）　１４．３１ｇ燐
酸二水素ナトリウム２水和物　２１．０■ｍ−クレゾー
ル　２７．０　’９ グリセロール　１６０．ＯＱ 上記の成分を水に溶解し全＃、１０πｅとなす。

ＩＮ塩酸またはＩＮ水酸化ナトリウムを加えることによ
りそのｐＨ値をＺ３にする。

そのような懸濁物は家兎において呻あたり０．４１．Ｕ
、の投与量で顕著な蓄ＪＹ（活性を示す。

実施例　５ 本例は１−あたす４０工、Ｕ、を有し且つその極めて遅
延された作用を有する。結晶性ＮＰＨ処方物中のヒトイ
ンシュリンＡｒｇ　−ＯＨ（半合成により豚インシュリ
ンから製造される）の使用を示す。

ヒトインシュリン−Ａｒｇ　−０Ｈ （２７，５１，Ｕ、／ｍｙ　）　１４．５ＭＩＦプロタ
ミン硫酸塩　１．６■ 燐酸二水素ナトリウム２水和物　２１．　ＯＱｍ−クレ
ゾール　１５．０　Ｍ９ フェノール　６．０謄ｇ ダリセロール　１６０．０■ 上記の成分を水に溶解し全景１０　ｍｅとなす。

ＩＮ塩酸またはＩＮ水酸化ナトリウムの添加によりその
ｐＨを７．３にする。

そのような結晶の懸濁物は家兎においてｋｆあだりＱ、
４　Ｉ、Ｕ、の投与量で１へめで遅延された作用を示す
。

実施例　４ 本例は１　ｍｌあたり４　Ｑ　Ｉ、　Ｕ、を有し且つそ
の極めて遅延された作用を有する、亜鉛含有懸濁物５１ の形態のヒトインシュリン−Ａｒｇ　−ＯＨおよびヒト
インシュリンＡｒｇｉ′３１　ａｒｇＢ３２．−　ＯＨ
（両方とも半合成により豚インシュリンから製造される
）の混合物の調製を示す。

ヒトインシュリン−Ａｒｇ　−０Ｈ （２７，５ｉ、Ｕ。／叩）　７．３　ＦＩ９ヒトインシ
ュリン−Ａｒｇ−ＡｒｇＢ３２−ＯＨ（２７，０王、Ｕ
、／■）７．４叩塩化亜鉛（無水）　ｏ、４６＊ｇ 酢酸ナトリウム　１４．０　ｊ！９ メチルｐ−ヒドロキシベンゾニー）　１０．Ｏｍｌ？塩
化ナトリタナトリウム　８０ｆｆｉｇ上記の成分を水に
溶解して全Ｆｆ：’、　１　［）　ｍＰとなす。

工（Ｉ塩酸まだはＩＮ水酸化す）　ＩＪウムの添加によ
りそのｐＨ値を７．０にする。

そのよう々懸濁物は家兎においてｋｇあたり０．４工、
Ｕ、の投与）仕で極めて遅延された作用を示す。

実施例　５ 本例は１　ｍｌあだり１００工、Ｕ、を有し且つ遅延さ
れた作用を有する、弱酸性の溶解された処方物の形態の
ヒトインシュリン−Ａｒｇ　−Ｌｙθ　−〇ＣＨ３（豚
インシュリンから半合成によ、ｂ製造される）を示す。

ヒトイン７ユリｙ　−Ａｒｇ−ＬｙｅＢ３２−０（ｊ（
、（２７，０１，Ｕ、７ｍ９　）　５７．　ＯＩｆ酢１
１貨　プ゛　ト　リ　ウ　ム　１４．０■メ５−ルｐ−
ヒドロキシベンゾニー）’　１０．０１１１？ｊ、諷化
ブー　ト　リ　ウ　ム　ａ　ｏ、ｏ　ｖｙ上記の成分を
水に溶解して全量１０　ｍｅとなす。

ＩＮ塩酸またはＩＮ水酸化ナトリウノ、の添加によりそ
のｐＨを６．０にする。

そのような溶液は家兎において遅延された作用を示す。

実施例　６ 本例はヒトインシュリン−Ａｒｇ　−Ａｒｇ　−０Ｈ（
細菌由来の一次ブレブロインシュリンからトリプシン解
裂により製造される）と混合した５１ Ｎ”　Ｈ結晶の形態のヒトインシュリン−Ａｒｇ−Ｏｎ
　（細菌由来の一次プレグロインシュリンのトリプシン
解裂により製造される）を示す。

ヒトインシュリン−Ａｒｇ　−０Ｈ （２７，５１，Ｕ、／叩　）　１１．１■ヒトインシュ
リ：／　−Ａｒｇ　−ＡｒｇＢ３２−ＯＨ（２７，０工
、　Ｕ、／ｎｇ　）　３．７　’９プロタミン硫酸塩　
１．０■ 燐酸二水素ナトリウム２水和物　２１．　Ｏ，ｆｆｉ１
７ｍ−クレゾール　１５．０叩 フエノール　６．０ｑ グリセロール　１６０．０叩 上記の成分を水に溶解して余計１０　ＴＭｅとなす。

ＩＮ水酸化ナトリウムまたｔｉｔ　ｉ　Ｎ塩酸の添加に
よりそのｐＨをＺ２にする。

この懸濁物は家兎において（０，４工、Ｕ、７ｋｇで）
極めて遅延された作用を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）式Ｉ 〔ただし式中、Ｒ１は水素またはＨ−Ｐｈｅを表わし、
   Ｒ３０は遺伝暗号を与えることができる中性Ｌ−アミノ
   酸の基を表わし、Ｒ５１は５０個までの炭素原子を有し
   、その構造において０〜３挿のα−アミノ酸が関与して
   おり、そしてそこにおける任意の末端カルボキシル基は
   遊離の形態でか、エステル基とじてか、アミド基として
   か、ラクトンとしてか寸だけＣｌ７２０Ｈに還元された
   形態で存在することができるような生理学的に許容しう
   る塩基性の有機基を表わすが、ただしＲ１がｆ（−Ｐｈ
   ｅを表わす場合にはＣ−末端である一Ｒ３０−Ｒ３１は
   −Ｔｈｒ−（Ａｒｇ）ｍ−ＯＨ。 −Ａｌａ−（Ａｒｇ）、、　−ＯＨ−または−！’；ｅ
   　ｒ　−（Ａｒｚ　）ｍ−０１４（ただし式中、’ｍｉ
   ｊ：１または２である）を表わすことができないものと
   する〕を有し１等電点が５．８〜８．５であるようなイ
   ンシュリン誘導体またはその生理学的に許容しうる塩。 ２）　Ｒ５１が式−ＸｎＳ　（ただし式中、ｎは０．１
   ゜２または６であり、Ｘは同−寸だけｊ′へなりで。 天然に存在する中性または塩基性のＬ−アミノ酸および
   ／またはこれらに相当する■）−アミノ酸の基を表わし
   、そ１７てＳはＯＨまたは生理学的に許容しうるカルボ
   キシルの封鎖基を表わすが、ｎが６である場合にはそれ
   は正に荷電しているか、またはプロトン化しうる塩基性
   の基を有し、またｎ）Ｏである場合にはそれはそのよう
   な基を有することができ、そしてＣ−末端−Ｘ−８は対
   応するアルコールに還元されたアミノ酸の基を表わすこ
   ともでき、咬たｒｌが２または３である場合にはホモセ
   リン−ラクトン基を表わすことができる）の基を表わす
   、特許請求の範囲第１項記載の式Ｉの−ｆンンユリン誘
   導体。 ３）式Ｉ〔ただし式中、Ｒ３０は遺伝暗号を与えること
   ができる中性Ｌ−アミノ酸の基を表わし。 ａ）　Ｒ１は水素を表わし、そして ３１Ｈ ａｌ）カルボキシル基を封鎖し、そして正に荷電してい
   るか、またはプロトン 、化しうる環基性の基を有するような。 生理学的に許容しつる基ｓＢを表わす か。 ａ　２−１）　Ｘ”　−ｓ′Ｉ（ｆｔりＬ式中、ｙ！Ｔ
   ｊ：天然１ｔｃ存在する中性Ｌ−アミノ酸またはそ のＤ−形の基を表わす）を表わすか。 ａ　２．２）　ｘＢ−ｓ　（ただし式中ｘＲｕ天然に存
   在する塩基性も一アき）酸または そのＤ−形の基を表わし、そしてＳ はＯＨまたはカルボシキル基を封鎖し。 そして場合によシ正に荷電している かまたはプロトン化しうる塩基性の 基を有するような基を表わす）を表 わすか。 Ｒ２，３）　対応するアルコールに還元された塩基性ア
   ミノ酸Ｘ１１の基Ｙを表わすか。 ａ　５．１）　−Ｘｎ　−８（ただし式中、ｎは２ｔた
   は３であり、Ｘは基Ｘゞおよび／オ たけｘ”ｆ９わすが、ただしすべての 基Ｘがｘ”である場合には、５Ｊｉｓ”のみを表わす仁
   とかできるものとする） を表わすか。 ａ　３．２）　−ｘｎ−ｙ　（ただし式中、ｎは１また
   Ｆｉ２である）を表わすか。 ｎ　３．３）　−ＸＢ−Ｚ　、　−Ｘ”−Ｘ’−Ｚ　、
   　−Ｘ”−ｘＢ−ｚｔりｈ−ｘＩｌ−ｘＩｌ−ｚ　（タ
   だし式中、ＺはＹであるかまたはホモセ リン−ラクトン基を表わす）を表わ すか、または ｂ）：ａ’はＨ−Ｐｌ＋ｅを表わ【２、そしてＢＳ　＋
   は ｂｌ）Ｒ１）に定義されたとおりであるか。 ｂ２．１）Ｒ２，１）に定義されたとおりであるか。 ｂ　２．２）　Ｌｙｓ　−ＯＨ，Ｄ−Ｌｙｓ−ＯＨ％Ｄ
   　−Ａｒｇ　−ＯＨ。 Ｈｙｌ　−ＯＲ，Ｄ　−Ｈｙｌ−ＯＨ，０ｒｎ−ＯＨ、
   Ｄ　−Ｏｒ’ｎ−０１Ｉ、Ｃ１ｔ　−ＯＨ，Ｄ−Ｃｉｔ
   −ＯＨ。 Ｈｌｓ　−ＯＨ、またはＤ　−Ｈｌｓ−ＯＨを表わすか
   。 ｂ　２．３）　ＸＢ−８’（ただし式中、ｓ’ｈ：ｓの
   意味を有するが、ただしＯｆｌを除外するものとづる）
   を表わすか。 ｂ　２．４）　Ｒ２，３）に定義されたとおりであメが
   。 ｂ　３．１）Ｘ　−Ｘ’−０Ｈ−ｉたは−Ｘ’−Ｘ　−
   ＯＨ（ただし式中、Ｘ′はｂ２．２）に定義されたとお
   りである）を表わすか。 ｂ　３．２）　Ｘ２−８’を表わすか。 ｂ３．３）　Ｒ３，１）（た／どしｎ　ｉｔ　３である
   ）に定義されたとおりであるか。 ｂ　３．４）　ａ、　３．２）またはＲ３，３）に定Ｆ
   、　サｔＬ　タとおりである〕 のインシュリン誘導体またはその生理学的に許容しうる
   塩っ ４）Ｒ１がＪｉ−Ｐｈｅを不”わす、特許請求の範囲第
   １〜３項記載のインシュリン誘導体。 ５）Ｒ５０がＡｌａ、Ｔｈｒまたけ８ｅｒを表わす特許
   請求の範囲第１〜４項記載のインシュリン誘導体。 ６）　Ａ鎖および（８２〜２９）鎖がヒトインシュリン
   の配列を有する。特許請求の範囲第１〜５項記載のイン
   シュリン誘導体。 ７）アミノ酸基ｘ、ｘ’およびｘＢおよび基ＹおよびＺ
   がＬ−配置を有する。特許請求の範囲第１〜６項記載の
   インシュリン誘導体。 ８）　８またはＳ′が（Ｃ１〜ｃ６）アルコキシ、（０
   ５〜。６）シクロアルコキシ、Ｎｌ２．（Ｃ１〜Ｃ６）
   アルキルアミノ−１：）（ｃ、〜Ｃ６）アルキルアミノ
   、アミノ−（Ｃ２〜ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ４）
   アルキルアミノ−（Ｃ２〜Ｃ６）アルコキシ。 ジ（０１〜Ｃ４）アルキルアミノ−（０２〜Ｃ６）アル
   コキシ、トリ（Ｃ１〜Ｃ４）アル片ルアンモニオー（０
   ２〜Ｃ６）アルコキシ、アミノ−（０２〜Ｃ６）アルキ
   ルアミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ−（Ｃ７〜Ｃ
   ６）アルキルアミノ、〔：）（ｑ〜Ｃ４）アルキルアミ
   ノ）−（Ｃ２〜Ｃ’６）アルキルアミノまたは〔トリ（
   Ｃ４〜Ｃ４）アルキルアンモニオ）−（Ｃ２〜Ｃ６）ア
   ルキルアミノを表わし、そしてＢ８が上記の最倭の８個
   の意味を有する。’ｌ”ｒＦＴ請求の範囲第２〜７項記
   載のインシュリン誘導体。 ９）＊ｆｒ諸求の範囲第１〜８項記載の式Ｉのインシュ
   リン誘導体を製造するにあたり。 ａ）式■ （ただし式中　Ｒ１はＰｈｅまたは結合を表わし。 Ｓｌはプロトン加溶媒分解またはβ−説離により解裂す
   ることができるアミノの保護基たとえば第３級ブトキシ
   カルボニル（ＢＯＣ）　％第５級アミルオキシカルボニ
   ル（Ａｏｃ）またはメチルスルホニルエトキシカルボニ
   ルＣＭＢＣ）　Ｍを表わす）のデスーオクタベゾチド（
   ８２３〜３０）−インシュリンを式■ Ｈ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｈａ　−Ｔｙｒ（８２）　−Ｔ
   ｈｒ（Ｂ２）　−Ｐｒｏ　−Ｌｙｓ（Ｅｌ　）−Ｒ−Ｒ
   （ＩＩＩ） （ただし式中、Ｈ２ＯおよびＲ４１け特■′Ｆ請求の範
   囲第１および２項に定義された意味を有しＢ２は水素、
   Ｂｚｌまたは第３級ブチルを表わし、そしてＢＳはウレ
   タンの保ｉｉ！基たとえばＢｏｃ。 Ｍｏｃ　、　ＦｍｏｃまたはＺを表わし、必要な場合に
   は系Ｒ３°およびＲ３１に存在する遊離のｃｏＯＨ。 ＯＨ、ＳＨ、Ｎｌ２．グアニジノおよび／−、＋たｔま
   イミダゾール基が本来既知の方法で保ｉされていてもよ
   い）のベヲチドと縮合させ、そして適箔な場合には本来
   既知の方法で存在する保護基を解裂するか。 ｂ）式Ｉ（ただし式中　Ｒ１番−、ｔ　Ｈ−＋だはＨ−
   Ｐｈｅを表わし、そしてＣ−末端１１５０−　Ｒ３＋は
   一緒になってＯＨを表わす）のデス−８３０−インシュ
   リンをトリプシンまたはトリノシン様エンドはブチダー
   ゼの存在下て式ＩＶ Ｈ−Ｒ５°−Ｒ５１（ＩＶ） （ただし式中、Ｒ３０およびＲ５１は特許請求の範囲自
   １１〜３項に定義された意味を有し、そして必要な９１
   合には存在する遊離のＣ０ＯＨ、ＤＨ。 ＳＨ，ω−ＮＨ２，グアニジノおよび／またはイミダゾ
   ール基は本来既知の方法で保脆されて゛いる）の化合物
   と反応させ、そしてつぎに適当な場合には存在する保肋
   基を本来既知の方法で角了裂するか、まだは Ｃ）特許請求の範囲第７項記載のインシュリン誘導体を
   製造するだめに、プロインシュリン、プロインシュリン
   誘導体またはプレプロインシュリン誘導体−またはこれ
   らの化合物の中間体を化学的にそして／または酵素的に
   解裂し。 そして適当な場合にはａ）〜Ｃ）によシ得られた化合り
   しｊをその生理学的に許容しうる塙に変換することから
   成る。特許請求の範囲第１〜８項記載の弐Ｎを有するイ
   ンシュリン誘導体の製造法。 １０）医薬として使用するだめの特許請求の範囲第１〜
   ８項記載のインシュリン誘導体。 １１）特許請求の範囲第１〜８項記載のインシュリン誘
   導体を含有する医薬。 １２）薬学的に許容しうる賦形剤および活性化合物とし
   て式■（ただし式中、Ｒ’　Ｆｉｎまたけｋｌ−Ｐｈｅ
   を表わし５Ｒ３０は遺伝学的コードを与えることができ
   る中性Ｌ−アミノ酸の基を表わし。 Ｒ５１は５０個までの炭素原子を有し、そのｆ１イ造に
   おいて０〜３種のα−アミノ酸が関与１〜ておシ、そし
   てそこに存在する任意の末端カルボキシル基は遊離の形
   態でか、エステル基としてか、アミド基としてか、ラク
   トンとしてか、またはＣＨ２０Ｈに還元された形態で存
   在することができるような、生理学的に許容しうる塩基
   性の有機基を表わす）を有し且っ等電点が５．８〜８，
   ５であるようなインシュリン誘導体まだはその生理学的
   に許容しうる塩を含有する医薬っ １３）活性化合物としてインシュリン−Ｒ３１−Ａｒｇ
   −ＯＨまたはインシュリン−Ｒ３１−Ａｒｇ−Ａｒ）７
   −　ＯＨを特徴する特許請求の範囲第１２項記載の興剤
   、 １４）　ｐ　Ｈ（直が２．５〜８．５であり、そして適
   当な等張剤および適当な防腐剤を含有し、そしてそこに
   式■のインシュリン誘導体が溶解された形態でそして／
   または懸濁物として存在する。 特許請求の範囲第１２および１３項記載の薬剤。 １５）適当な緩衝剤を含有し、そして４．０〜８．５の
   ｐＨ値を有する１％許請求の範囲第１２〜１４項記載の
   薬剤。 １６）　、１００１．Ｕ、あたりｏ　〜ｉｏｏ、ａ、ｙ
   ノ亜鉛を特徴する特許請求の範囲第１２〜１５項記載の
   薬剤。 １７）式Ｉのペプチドがアルカリ金属塩またはアンモニ
   ウム塩の形態で存在する。特許請求の範囲第１２〜１６
   項記載の薬剤。 １８）１種または数種の式■のインシュリン誘導体また
   け式Ｉのインシュリン誘導体の所望された量が、それぞ
   れの場合に互いに独立して溶解された形態で、無定形で
   、そして／または結晶形で存在するこの型の他のインシ
   ュリン誘導体と混合される。特許請求の範囲第１２〜１
   ７項記載の薬剤。 １９）遅延作用を有する補助剤の適当量を特徴する特許
   請求の範囲第１２〜１８狼記戦の薬剤っ ２０）仁の遅延作用を有する成分が活性化合！吻の全９
   と、まだはその一部と組み合わせて使用されるか、また
   は１種または数種の式Ｉのインシュリン誘導体との混合
   物として使用される。特許請求の範囲第１９項記載の薬
   剤。 ２１）遅延作用を有する数種の異なったゝ補助剤と組み
   合わせて式Ｉの洋々のインシュリン誘導体を含有する。 ’ｌ’ｆ許請求の範囲第１２〜２０項記載の薬剤。 ２２）式Ｉのインシュリン誘導体を適当な投与形態にす
   ることから成る。特許請求の範囲第１１および１２項記
   載の薬剤の製造法。 ２３）真性糖尿病の治療における特許請求の範囲第１〜
   ８項記載のインシュリン誘導体または特許請求の範囲第
   １１〜２１項記載の薬剤の使用。