JPS60180596A - Ｌ‐α‐アミノ酸の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 竜業上の利用分野 本発明は、一般式ｆＩ） Ｃ−ＯＨ ＨＮ−’Ｏ−Ｈ （式中、Ｒは芳香族基、置換芳香族基、脂肪族基又は置
換脂肪族基である）で表わされるＬ−α−アミノ酸の製
法に係わる。

特に、本発明は、前記一般式（ｉ）におけるＲが、５Ｃ から選ばれるものであるＬ−α−アミノ酸の酵素による
製法に係わる。

上記一般式ＣＩ）　’ｋ　！する化合物は、医薬品工業
及び化学工業で使用される化合物を合成するための中間
体として有用である。

たトエハ、Ｌ−α−フェニルアラニンは高価な生成物で
あり、甘味料とし有用なアスパルテームの合成に使用さ
れる。

従来の技術及び問題点 一般式（Ｉ）で表わされる化合物は、公知の方法、たと
えばたんばく質の加水分解及び反応混合物からのアミノ
酸の単離でなる方法により製造される。

しかしながら、７Ｄ１かる方法は、高価な原料を使用す
ること、必要な処理工程の数が多いこと、及び全体とし
て収率が低いことのため不経済である。

特公昭４２−１３８５０号に記載された発明によれば、
Ｌ−α−アミノ酸は、不斉炭素をもつヒダントイン（５
−置換ヒダントインンを原料とし、酵素の存在下におけ
る発ｒＩｌ法により生成され、その後、反応混合物から
分離、回収され、る。

問題点を解決するだめの手段 発明者らは、簡単かつ安価なＬ−α−アミノ酸の製法を
見出し、本発明に至った。

本発明によれば、一般式ｆＩ） １ Ｃ−ＯＨ ＨＮ−Ｃ−Ｈ （式中、Ｒは芳香族基、置換芳香族基、脂肪族基又は置
換脂肪族基である）は、 ｌａＪ　一般式（Ｉｌｌ （式中、Ｒは前記と同意義であるンで表わされるＤ−Ｎ
−カルバミル−α−アミノ酸及びＬ−Ｎ−カルバミル−
α−アミノ酸形のＮ−カルバミル−α−アミノ酸を、液
状反応混合物中、ｐＨ６，０ないし７．０、温度２０°
Ｃないし４０°Ｃにおいて酵素と接触させて、一般式（
＠ （式中、Ｒ（ｒｉ前記と同意義である）で表わされるＤ
−ヒダントイン化合物及び一般式１１Ｖ）（式中、Ｒは
前記と同意義である）で表わされるＬ−Ｎ−カルバミル
−α−アミノ酸とし、（リ　前記Ｄ−ヒダントイン化合
物を反応混合物から分離し、加水分解するとともに、ラ
セミ化してＤ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸及びＬ−
Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸とし５、（ｃ）　一方、
前記Ｌ−Ｎ−カルバミルーα−アミノ酸を相当するＬ−
α−アミノ酸に変換させ、及び （ａ）　前記反応混合物からＬ−α−アミノ酸を分離し
、回収することを特徴とする方法により、生成される。

作用 本発明の方法によれば、まず、工程（ａ）において、一
般式ｆ■） （式中、Ｒは、 の中から選ばれる基で＝ある）で表わされるＤ−Ｎ−カ
ルバミル−α−アミノ酸及びＬ−Ｎ−カルバミル−α−
アミノ酸形の化合物を、液状反応混合物中、ｐＴ（６，
０ないし７．０、温度２０°Ｃないし４０°Ｃで酵素反
応せしめ、一般式ｆｌ［）（式中、Ｒは前記と同意義で
ある）で表わされるＤ−ヒダントイン化合物及び一般式
１ｙ）へ （式中、Ｒは前記と同意義である）で表わされるＬ−Ｎ
−カルバミル−α−アミノ酸とする。

この目的に使用される酵素は、不斉炭素原子をもつヒダ
ントインを選択的に加水分解させてＤ−Ｎ−カルバミル
−α−アミノ酸を生成する能力を有するものとして当分
野で公知のジヒドロピリミジンヒドロラーゼＥ、Ｃ０３
，５，２，２である。

この酵素は、動物の臓器の抽出物から又はシュードモナ
ス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）、アクロモノ（フタ−
（７ｔｃｈｒＯＩＩＩＯ，ｂａＣｔｅｒ　）、コリネバ
クテリウム（ＣＯｒｙｎｅｏａＣｔｅｒｌｕｍ）、ブレ
ビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　）　
、ミクロバクテリウム（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
　）　、アルトロバクター（Ａｒｔｒｏｂａｃｔｅｒ　
）、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｏａｃｔｅｒｉｕｏ
＋　）、アクロバクター（Ａｃｒｏｂａｃｔｅｒ　）、
クレブシェラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　）　、サルシナ
（Ｓａｒｃｉｎａ）、プロトアミノバクター（ｐｒｏｔ
ａｌｆｌｉｎＯＤａｏｔｅｒ　）、ストレプトミセス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）　、アクチノミセス（Ａ
ｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ　）、カンデイダ（Ｃｊａｎｄｉ
ｄａ　）　。

ロートドルーラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　）、ピチア
（Ｐｉｃｈｉａ）又は′ゝ１シロミセス（Ｐａｅｃｉｌ
ｏｍｙｃｅｓ　）　属に属する微生物から得られる。

本発明の好適な具体例では、Ｄ、Ｐ、Ｗａｌｌａａｈ及
びＳ、Ｇｒｉｓｏｌｉａ　によシ「ジャーナル・オフ・
ノ（イオロジカル・ケミストリー（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｏｈ
ｅｍ、　）　ｊ２２６．２７７（１９５７）に記載され
た方法に従って子牛の肝臓から柚、出された酵素及び下
記の微生物から抽出された酵素が使用される。

アゲｙＺりｔリウム・ラブイオノフタ−（Ａ　、ｒａｄ
ｉｏｂａｃｔｅｒ）　ＮＲＲＬ　Ｂ　１１２９１／ｑｙ
レス・フ゛しｅス（Ｂ、ｂｒｅｖｉｓ）　ＮＲＲＬ　Ｂ
　１１８０ノ９リレス優スプつ′ｐナーモフイＡ、＆ス
（Ｂ、ｓｔｅａｒａｔｈｅｍｏｐｈｉｌｍｓ）ＮＲＲＬ
　Ｂ　１１０７９ シュードモナス属菌（Ｐ、ｓｐ　）　ＣＢＳ　１４５７
５シユードモナス属菌（ｐ　、　ｓ　ｐ　）　ＣｊＢＳ
　１４６７５シユードモナス属菌（Ｐ、ｓｐ　）　ＡＴ
ＣＣ１１２９９εａ−ト’ｗ；ζΦフノーセト４例（Ｐ
、ｆｌｕｏｒｅｓａｅｎｓ）　ＡＴａｃ　１１２５０シ
ｄ−ト１シＬス・フテイダ　（’Ｐ　、ｐｕ　ｔｉ　ｄ
ａ）　ＡＴＣＯ１２６３３シａ−ドＵ覧ス・プ’！リテ
イカ　（Ｐ　、ｄｅａ＋ＩＩｏｌｙｔｉｃａ　）　Ｎ０
ＩＢ　８８５９上記微生物の分類学上の特性については
、Ｍ。

Ｊ、Ｐｅ１ｃｚａｖ　Ｋ　ヨＰ）　ｒマニュアルφオフ
、・ミクロバィオロジカルΦメソッズ（Ｍａｎｕａｌ　
ｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ’ｌ　Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ　）　Ｊに記載された方法を使用して検討し、「バー
シーズ・マニュアル・オプ・デターミネイティブ・バク
テリオロジ−（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ
　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏ
ｇｙ）第８版、１９７４に従って同定を行なった。

上記微生物は、好気的条件下、窒素源、炭素源、リン源
及び無・凌塩源を含有する液状培養基中で培養される。

この目的に好適な炭素源は、ゲルコール、しょ糖の如き
炙水化物、有機酸、アルコール及び炭化水素である。

培養基中で使用される窒素源は、硫酸アンモニウム、塩
化アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素及びアンモニ
アの如き有機性及び無機性のアンモニア塩である。

本発明で使用される無機塩は、リン酸カリウム、リン酸
ナトリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、硫酸
第一鉄、硫酸マグネシウム及び硫酸亜鉛である。

上記組成を有する培養基を、ｐＴ（，５，５ないし９．
０、＠度２０°Ｃないし４０°Ｃに維持する。

代表的には、培養は中性ｐＴ（域、温度３０°Ｃ及び２
４時間で行なわれる。

好適な生育条件下では、微生物は、細胞内に、前記化合
物（ｆｆ）を化合物（匍及びｉ１１’）に変化させる酵
素を生産する。

微生物の函体は、一般に、公知の方法（たとえば遠心分
離）に従って培養基から゛分離され、つづいてｉ’［Ｉ
ｉ反応混合物中の化合物（ＩＩ）と接触せしめられる。

別法によれば、培養基からの分離後、回転壊変機、フレ
ンチ−プレス（Ｆｒｅｎｃｈ−ｐｒｅｓｓｕｒｅ　）、
　、超音波などによって菌体を処理し、常法に従って分
離したたんばく質フラクションを化合物＋ＩＩ）の酵素
反応に使用する。

さらに、本発明の技術上及び経済上の改善は、イタ！Ｊ
−ＩＦｍ％許第８３６，４６２号に記載されている如く
、酵素又は酵素含Ｍ微生物を繊維構造体内で不動化させ
ることにより達成される。。

化合物ｆＩＩ）の酵素反応で使用される菌体の量は、一
般に、菌体／化合物ｆＩＩｌの重量比Ａθないし１／１
００となるνである。この酵素反応は好ましくＦｉ温度
３０°Ｃ，ｐＨ５，５、反応時間２４時間で行なわれる
。

かかる条件下で操作することにより、化合物（Ｔ［０が
固形物として優られ、化合物ｆｌｉｔ）が溶液として碍
られる。

このような分散液の温度を０ないし１０°Ｃの範囲に調
節するとともに、分散液のｐＨ’２４．０ないし５．５
の範囲内に調節することにより、化合物（＠を完全に又
は実質的に完全に析出させる。

本発明の工程（０）では、化合物（ＩＩＯの分離及び加
水分解のために、公知の技術を使用できる。

一般に、化合物（男はｆ過、遠心分離又は他の好適な手
段によって分離され、一方、この化合物の加水分解は、
液相中、ＩＮ水酸化ナトリウムの存在下、温度９０°Ｃ
において反応時間約１０時間で工Ｓ　（Ｃ）では、Ｌ−
Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸＋１１’）のＬ−α−ア
ミノ酸ＩＩ）への変換が公知の方法に従って行なわれる
。

溶液中に存在する化合物（ｒｙ）については、Ｄ−ヒダ
ントイン化合物を除去した後、化合物ｆｌＶ）　／　、
＋硝酸のモル比図ないし４、温度３０°Ｃ１反応時間４
ないし５時間で岨硝酸と接触させる。

別法では、Ｔ桿ｉｃ）での変換は、Ｔ程ｆｂ）で得られ
たｆ過後の溶液からの化合物（ＩＶ）の−次的な沈殿、
分′４後に行なわれる。化合物（ＩＶ）は、菌体を除去
した後、温度を１０″Ｃに、ｐＨを３．１に調節するこ
とにより沈殿され、当分野で公知の方法により分離され
る。

いずれの場合にも、変喚反応後には、工程（ｄ）におい
て、イオン交換樹ｊ指を使用して、生成されたＬ−α−
アミノ酸の分離、回収が行なわれる。

本発明の好適な具体例では、Ｌ−Ｎ−カルバミル−α−
アミノ酸の相当するＬ−α−アミノ酸への変換反応及び
Ｌ−α−アミノ酸ｉＩ）の分離は単一工程として行なわ
れる。

すなわち、Ｌ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸（ＩＶ）
及び亜硝酸ナトリウムでなる混合物を、酸性イオン交換
樹１１を充填したクロマトグラフカラムに供給し、溶液
を４ないし５時間伽環させる。反応の間に生成したＬ−
α−アミノ敵を工）は樹ｌｄ上の酸性基に固定される。

ついで、Ｌ−α−アミノ酸は、２Ｎ＊酸化アンモニウム
水溶液にょる浴出にょｐ回収される。溶出された溶欣盆
蟻縮、乾固し、中和することにより、光学的に副枠なＬ
−α−アミノ酸が得られる。

以下の実施例は本発明を説明するためのものであって、
本発明を限定するものではない。

実施例１ 以下の組成を有する培養ブロスを調製した。

組成 肉ベグトン　５ｚ 閤エキス　３？ グルコース　５ｚ 水　１石 ｐ）＋　７．２ 上記培養ブロス１００ｙｘＪを、円堆形のエルレンマイ
ヤーフラスコ（容積０．５ｎ）内に分配し、１１０℃で
３０分間殺鴫した。

との円椎フラスコに、シュードモナスａｓｓ　１４５７
５保存菌の培養物を、Ｐｔ＠ホークによって集められた
量に相当する量で接種し差。この培養物は、上記組成を
肩１〜かつ寒天（ｏｒＦｃｏ）２０？／／？で固化させ
た斜面培地で３０°Ｃにおいて２４時間予しめ培養した
ものである。

このように接種したフラスコを＠贋３０°Ｃ１軌、首振
よう（２２０ｒｐｎ＋）下、２４時間維持した。

この時間経過時、培養プロス１ｄを殺菌条件下で採取し
、上記組成の培養基１００ｍ／を収容する円雅形エルレ
ンマイヤーフラスコ（ｇ積０．５−６）に移した。

この円椎フラスコを温度３０°Ｃに２４時間維持した。

この時間経過時、遠心分雉により反応混合物から固体を
分離し、等量の生理食塩水（ＮａＣｆ　ｆ３ｙ−１水１
！）で洗浄した。

遠心分離後、水５ｏＷＬｌ中にＤＬ　−Ｎ−カルバミル
フェニルアラニン（Ｒ＝ぐ）−ＣＨ２の化合ｑ勿（ＩＩ
Ｊ　３８ｔを含有するｐＨ６，５の溶液中に、帽体２０
０’＃を懸濁させた。

この懸濁液を温度３０″Ｃで２４時間攪拌した。

この時間が経過したところで、分散液が得られた。該分
散液を温＃″１０　’Ｃ，ｐＨ５，５に調節し、生成物
（＠を完全に析出させた。

ついで、沈殿した化合物をＰ取し、水で洗浄した。この
ようにして、一定量の３．６−　Ｄ−ベンジルヒダント
インが得られた。なお、ＩＲ％ＮＭＲ及び元素分析によ
シ同定を行なった。

このＤ−ベンジルヒダントインｆ、ＩＮ　ＮａＯＨ水溶
液４０　ｙｄで温度９０″Ｃにおいて１０時間処理する
ことによって、加水分解し、ラセミ化せしめて、Ｄ−Ｎ
−カルバミルフェニルアラニン及［Ｌ−Ｎ−カルバミル
フェニルアラニンを生成サセタ。

このようにして得られたラセミ混合物を再循環させた。

一方、溶液中に存在するＬ−Ｎ−カルバミルフェニルア
ラニンを、Ｄ−ベンジルヒダントインを除去し、かつ菌
体を温度１０’Ｃ及びｐＨ３，１において遠心分離して
除去した後、沈殿させた。このようにして得られた沈曖
物をＦ取し、減王乾燥させた。

Ｌ−Ｎ−カルバミルフェニルアラニン３．８ｆＰカ得ら
れた。なお、その同定には、ＩＲ，ＮＭＲ及び元素分析
を使用すると共に、旋光能〔α〕２５°’　＝３８．５
（Ｃ＝１チ、１ｌＪｌＩＪ［（、〕によって確認した。

ついで、水１００ｍＪ中にＬ’−Ｎ−カルバミルフェニ
ルアラニン３．８　？　−＜　１８．３モル）？含’ｆ
Ｋｆる懸濁液に、Ｎａ、Ｎ０２１．６　′ｇ−（２３，
８ミリモル）を添加した。つづいてＩＮアンモニア水を
添加するととによシ、懸濁液を可溶化させた。

イオン交換樹脂（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ　ＩＲ１２０）　
３０ｇ−を充填したクロマトグラフカラム（’ｕｉ径２
０ｍｍ、長さ３０　ｒｒａｎ　）に前記＠液を供給し、
４時間循環させた。Ｌ−Ｎ−カルバミルフェニルアラニ
ンと亜硝酸との間の反応の際にＬ−α−フェニルア２ニ
ンが生成されるが、この生成物は樹脂に、吸着される。

反応終了後、カラムを水で洗浄し、Ｌ−α−フェニルア
ラニンを２Ｎ水酸化アンモニウム水溶液で溶出させた。

ついで、Ｍ出液を濃縮、乾固した。

が得られた。

実施例２ 原料物質としてＤＬ　−Ｎ−カルバミルバリン実権例１
の如く操作した。

酵素反応を温度３０°Ｃ１２４時間で行ない、分散液を
１０°Ｃに冷却させ、ｐＨ葡５．５に調節した後、Ｄ−
イングロビルヒダントイン２．３ｙ−を分離した。つい
で、Ｌ−Ｎ−カルバミルバリンの変換を行ない、相当す
るアミノ酸を分離した。

５％、ＩＮＦ４（Ｊ）を有するＬ−α−バリン１．４２
１が得られた。

実権例３ 基質としてＤＬ　−Ｎ−カルバミルロイシンで、実権例
１記載の如く操作した。

酵素反応後、ｏ−２−メチル−プロピルヒダントイン４
．２ｚがＨ％られた。この化合物の同定にはＩＲ，ＮＭ
Ｒ及び元素分析を利用した。

ついで、Ｌ−Ｎ−カルバミルロイシンを変換させ、相当
するアミノ酸を分離した。

旋光能〔α〕２０°−＋１２．０　（ｃ　＝　２．５．
１ＮＨＯＪＪを有するＬ−α−ロイシン２．７５　ｙ−
が得られた。

実施例４ 酵素触媒として、前述したり、Ｐ、Ｗａｌｌａｃｈ及び
Ｓ。

Ｇｒｉｓｏｌｉａ　の方法に従って子牛の肝臓から得ら
れた酵素アセトンパウダー２１を使用して、実権例１の
如く操作した。

酵素反応を＠度３０°Ｃで２４時間行なった。分散液を
温度１０°Ｃに冷却し、ｐＨｉ５．５に調節した麦、Ｄ
−ベンジルヒダントイン３．２ｙ−を分離した。

ついで、Ｌ−Ｎ−カルバミル−フェニルアラニンを相当
するアミノ酸に変換させたところ、旋光２０°− 能〔α）ｏ　３４−１　（ｃ＝　１−９４、水）を有す
るＬ−α−フェニルアラニン２．６８　％が得うレタ。

第１頁の続き ■Ｉｎｔ、Ｃ１，’　識別記号 ０発　明　者　フェリチェ・チェンチ 庁内整理番号

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １一般式ｆｌ） Ｏ−ＯＨ ＨＮ−０−Ｈ （式中、Ｒは芳香族基、置換芳香族基、脂肪族基えは置
   換脂肪族基である）で表わされるＬ−α−アミノ酸の製
   法において、 ｉａｌ　一般式（１１１ （式中、ｌ（は前記と同意義である）で表わさし６　Ｄ
   　−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸及びり、　−Ｎ−力
   ルバミルーα−アミノ酸形のＮ　−カルバミル−α−ア
   ミノ酸を、液状反応混合物中、ｐＨ６，０ないし７．０
   、温＃′２０°Ｃないし４０°Ｃにおいて酵素と接触さ
   せて、一般式（Ｉｌｌ）（式中、Ｒは前記と同意義であ
   る）で表わされるＤ−ヒダントイン化合物及び一般式１
   １Ｖ）（式中、Ｒは前記と同意義である）で表わされる
   Ｌ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸とし、（ｂ）＠記り
   −ヒダントイン化合物を反応混合物から分離し、加水分
   解するとともに、ラセミ化して［）−Ｎ−カルバミル−
   α−アミノ酸及びＬ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸と
   し、＋ｃｌ　一方、前記Ｌ−Ｎ−カルバミルーα−アミ
   ノ酸を相当するＬ−α−アミノ酸に盆換させ、及び （ａ）　前記反応混合物からＬ−α−アミノ酸を分離し
   、回収すること を％徴とする、Ｌ−α−アミノ酸の製法。 ２、特許請求の範囲第１項記載の・μｓ法において、前
   記一般式ｆＩ）、＋ＩＩ）、（ｔＵ）及びｆｌｌＱにお
   けるＲが下記の基の中から選ばれるものである、Ｌ−α
   −アミノ酸の製法。 ３　％許請求の範囲第１項記載の製法において、＠記工
   程ｆａ）で使用される酵素がジヒドロピリミジンヒドロ
   ラーゼである、Ｌ−α−アミノ酸の製法。 ４　特許請求の範囲第３項記載の製法において、前記酵
   素が子牛の肝臓から得られたものである、Ｌ−α−アミ
   ノ酸の製法。 ５　特許請求の範囲第３項記載の製法において、前記酵
   素が微生物によって生産されるものである、Ｌ−α−ア
   ミノ酸の製法。 ６　％許請求の範囲第５項記載の製法において、前記微
   生物がシュードモナス（Ｐｓ　ｅｕｄ　ｏｍｏｎ、ａ、
   ｓ　）属に属するものである、Ｌ−α−アミノ酸の製法
   。 ７　＠許請求の範囲第６項記載の製法において、前記微
   生物が下記保存微生物の中から選ばれるものである、Ｌ
   −α−アミノ酸の製法。 シ１−トモナス　（Ｐｓｅｕｄｏ＋ｎｏｎａｓ）ＯＢＳ
   　Ｌ４５７５シュードモナス　（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
   ｓ）ＣＢＳ　１４６７５シユードモナス　（Ｐｓｅｕｄ
   ｏ＋１ｏｎａｓ）　ＡＴＯＣ１１２９９う仁−一ト獣ス
   ・デ烏すティカ　（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ＮＣＩＢ
   　８８５９ｄｅｓ川ｏ１ｙｔｉｃａ　） ’ｘ−＋獣ス・フッ帖ソ卜し一十つ／Ｘ　（Ｐｓｅｕｄ
   ｏｍｏｎａｓ　ＡＴＯＯ１１２５０ｆｌｕｏｒｅｓｃｅ
   ｎｓ　） ８　特許請求の範囲第５項記載の製法において、前記微
   生物がバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　）　嘱に属するも
   のである、Ｌ−α−アミノ酸の製法。 ９１ｍ奸請求の範囲第８項記載の製法において、＠記倣
   生物が、 バチルス０プレビス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｂｒｅｖｉｓ
   ）　ＮＲＲＬ　Ｂ　１１８０ノチルス・スプつ’Ｃｆｆ
   −ナーモフィノ民Ｌス（しａｃｉｌｌｕｓ　５ｔｅａｒ
   ｏもｈｅ＋ｕｏｐｈｉ　１ｍ５）ＮＲＲＬ　Ｂ　１１０
   ７９ の中から選ばれるものである、Ｌ−α−アミノ酸の製法
   。 １０　特許請求の範囲第５項記載の製法において、前記
   微生物がアグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉ
   ｕｍＪ曙に属するものである、Ｌ−α−アミノ酸の製法
   。 １１　特許請求の範囲第１０項記載の製法におい　；て
   、前記微生物が、 アグロノ汐チリウム中うテイオノクター（Ａｇｒｏｂａ
   ｃｔｅｒｉｕＩＩ＋　ＮＲＲＬ　Ｂ　１．］、２９］ｒ
   ａｄｉｏｂａｃｔｅｒ　） である、Ｌ−α−アミノ酸の製法。 １２、特許請求の範囲第１項記載の製法において、前記
   工程（、ａ）における酵素反応を温度３０°Ｃ，ｐＨ６
   ，５で行なう、Ｌ−α−アミノ酸の製法。 １３′＃許請求の範囲第１項記載の・使法において、前
   記工程［ｂｌにおける加水分解を、１ＮＮａＯＨの・醪
   在下、液相中、温度９０°Ｃ及び反応時間１０時間で行
   なう、Ｌ−α−アミノ酸の製法。 １４　％許請求の範囲第１項記載の＃法において、前記
   下８（Ｃ）における反応を、岨硝酸により、温［３０°
   Ｃ及び反応時間４時間で行なう、Ｌ−α−アミノ酸の製
   法。 １５　特若午り青水の範囲第１上貝１己賊の製法におい
   て、前記工程（ｄｌにおける分離を、イオン交換樹脂に
   よる処理によって行なう、Ｌ−α−アミノ酸の製法。