JPS6013668B2 - グルタチオン・パ−オキシダ−ゼの製造法 - Google Patents
グルタチオン・パ−オキシダ−ゼの製造法Info
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- JPS6013668B2 JPS6013668B2 JP55132301A JP13230180A JPS6013668B2 JP S6013668 B2 JPS6013668 B2 JP S6013668B2 JP 55132301 A JP55132301 A JP 55132301A JP 13230180 A JP13230180 A JP 13230180A JP S6013668 B2 JPS6013668 B2 JP S6013668B2
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、グルタチオン・パーオキシダーゼの製造法に
関する。
関する。
さらに詳しくは、本発明はムコ−ル属に属し、グルタチ
オン・パーオキシダーゼを生産る能力を有する微生物を
培地に培養し、培養中にグルタチオン・パーオキシダー
ゼを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
グルタチオン・パーオキシダーゼの製造法に関する。グ
ルタチオン・パーオキシダーゼ（ＥＣ１、１１、１、９
）は、Ｍｍｓによって初めてウシの赤血球中にその存在
が報告され、〔Ｇ．Ｃ．Ｍｉｌｌｓ；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．、２２９ １８９（１９５７）〕、その後肝臓
等の組織中にも存在することが報告されている〔Ｇ．Ｃ
．Ｍｉｌｌｓ；Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｊｏｐｈ
ｙｓ．８６、１（１９６０）〕。しかしながら、微生物
起源のグルタチオン・パーオキシダーゼついての報告は
ない。
オン・パーオキシダーゼを生産る能力を有する微生物を
培地に培養し、培養中にグルタチオン・パーオキシダー
ゼを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
グルタチオン・パーオキシダーゼの製造法に関する。グ
ルタチオン・パーオキシダーゼ（ＥＣ１、１１、１、９
）は、Ｍｍｓによって初めてウシの赤血球中にその存在
が報告され、〔Ｇ．Ｃ．Ｍｉｌｌｓ；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．、２２９ １８９（１９５７）〕、その後肝臓
等の組織中にも存在することが報告されている〔Ｇ．Ｃ
．Ｍｉｌｌｓ；Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｊｏｐｈ
ｙｓ．８６、１（１９６０）〕。しかしながら、微生物
起源のグルタチオン・パーオキシダーゼついての報告は
ない。
また、グルチオン・パーオキシダーゼは過酸化水素の定
量に用いられることはよく知られており〔Ｒ，Ｌ，Ｈｅ
ａｔｈ ａｎｄ ＡＬ，Ｌ，Ｔａｐｐｅｌ；Ａ船，Ｂｉ
ｏＣｈｅｍ，、７０１８４（１９７６）〕、グルタチオ
ン・バーオキシダーゼを安価に工業的に製造する方法を
提供することが望まれている。
量に用いられることはよく知られており〔Ｒ，Ｌ，Ｈｅ
ａｔｈ ａｎｄ ＡＬ，Ｌ，Ｔａｐｐｅｌ；Ａ船，Ｂｉ
ｏＣｈｅｍ，、７０１８４（１９７６）〕、グルタチオ
ン・バーオキシダーゼを安価に工業的に製造する方法を
提供することが望まれている。
本発明者らは、グルタチオン・パーオキシダーゼの製造
方法について種々検討した結果、ムコール属に属する微
生物を培地に培養したときもこ培養物中主として菌体中
にグルタチオン・パーオキシダーゼが著量に生産される
ことを見出し、本発明を完成した。
方法について種々検討した結果、ムコール属に属する微
生物を培地に培養したときもこ培養物中主として菌体中
にグルタチオン・パーオキシダーゼが著量に生産される
ことを見出し、本発明を完成した。
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明に使用する微生物としては、ムコール属に属し、
グルタチオン・パーオキシダーゼを生産する能力を有す
るものであればいずれの菌株でもよい。
グルタチオン・パーオキシダーゼを生産する能力を有す
るものであればいずれの菌株でもよい。
具体的に好適な菌株の例はムコール・ヒェマリス（Ｍｕ
ｃｏｒｈｉｅｍａｌｉｓ）ＹＲ−０９２９（徴工研菌寄
第５７０８号）（ＮＲＲＬ１２２９３）、ムコール・シ
ルシネロイデス（Ｍｕｃｏｒｃｉｒｃｉｎｅｌｌｏｉｄ
ｅｓ）〔ムコール・ジヤバニカス（ＭｕｃｏｒＪａｖａ
ｎｉｃ聡）〕ＡＴＣＣＩ５２４２およびムコール・ルキ
シアヌス（Ｍｕｃｏｒｒｏｕｘｌａｎ船）ＹＲ−０３１
９（徴工研菌寄第２７０９号）（ＮＲＲＬ１２２９４）
である。これらの菌の属する種の菌学的性質は、次の文
献に記載されている。
ｃｏｒｈｉｅｍａｌｉｓ）ＹＲ−０９２９（徴工研菌寄
第５７０８号）（ＮＲＲＬ１２２９３）、ムコール・シ
ルシネロイデス（Ｍｕｃｏｒｃｉｒｃｉｎｅｌｌｏｉｄ
ｅｓ）〔ムコール・ジヤバニカス（ＭｕｃｏｒＪａｖａ
ｎｉｃ聡）〕ＡＴＣＣＩ５２４２およびムコール・ルキ
シアヌス（Ｍｕｃｏｒｒｏｕｘｌａｎ船）ＹＲ−０３１
９（徴工研菌寄第２７０９号）（ＮＲＲＬ１２２９４）
である。これらの菌の属する種の菌学的性質は、次の文
献に記載されている。
“Ａ ＭａｎｕａｌｏｆＳｏｉｌＦ血ｇ”第２版（１９
５７）。ムコール・ヒヱマリス（Ｍ比ｏｒｈｉｅｍａｌ
ｉｓ）ｐ３８ ムコール・シルシネロイデス（Ｍｕｃｏ
ｒｃｉｒｃｉｎｅｌｌｏｉｄｅｓ）〔ムコール・ジヤバ
ニカス（Ｍｕｃｏｒねｖａｎｉｃ聡）〕ｐ３３、ムコー
ル．ルキシヌス（Ｍｕｃ０ｒｒｏ似ｌａｎｕｓ）ｐ３３
本発明に使用される培地としては、炭素凝、窒秦源、無
機物その他の栄養素を程よく含有するものであれば、天
然培地、合成培地のいずれも用いることができる。炭素
源としては、グルコース、フラクトース・シュークロー
ス、マルトース、マンノース、磯粉、澱粉加水分解後、
糖蜜などの種々の炭水化物、あるいはグリセロール、ソ
ルビトール・マンニトールなど種々の糠アルコール、酢
酸、乳糖、ビルビン酸、フマール酸、クエン酸などの各
種有機酸、メタノール、エタノールなどの各種アルコー
ル、エチレングリコール、プロピレングリコールなど各
種グリコール、各種アミノ酸、あるいはｎ−へキサデカ
ンなどの炭化水素が使用可能である。
５７）。ムコール・ヒヱマリス（Ｍ比ｏｒｈｉｅｍａｌ
ｉｓ）ｐ３８ ムコール・シルシネロイデス（Ｍｕｃｏ
ｒｃｉｒｃｉｎｅｌｌｏｉｄｅｓ）〔ムコール・ジヤバ
ニカス（Ｍｕｃｏｒねｖａｎｉｃ聡）〕ｐ３３、ムコー
ル．ルキシヌス（Ｍｕｃ０ｒｒｏ似ｌａｎｕｓ）ｐ３３
本発明に使用される培地としては、炭素凝、窒秦源、無
機物その他の栄養素を程よく含有するものであれば、天
然培地、合成培地のいずれも用いることができる。炭素
源としては、グルコース、フラクトース・シュークロー
ス、マルトース、マンノース、磯粉、澱粉加水分解後、
糖蜜などの種々の炭水化物、あるいはグリセロール、ソ
ルビトール・マンニトールなど種々の糠アルコール、酢
酸、乳糖、ビルビン酸、フマール酸、クエン酸などの各
種有機酸、メタノール、エタノールなどの各種アルコー
ル、エチレングリコール、プロピレングリコールなど各
種グリコール、各種アミノ酸、あるいはｎ−へキサデカ
ンなどの炭化水素が使用可能である。
窒素源としてはアンモニア、あるいは塩化アンモニウム
、炭酸アンモニウム、燐酸アンモニウム、硝酸アンモニ
ウム、酢酸アンモニウムなど各種無機および有機アンモ
ニウム塩、尿素、アミノ酸およびその他の窒素化合物、
ならびにべプトン、ＮＺーアミン、肉エキス、コーンス
チープリカ−、カゼイン加水分解物、蟻加水分解物、フ
ィッシュミールあるいはその消化物、脱脂大豆あるいは
その消化物などの窒素含有有機物質などが用いられる。
、炭酸アンモニウム、燐酸アンモニウム、硝酸アンモニ
ウム、酢酸アンモニウムなど各種無機および有機アンモ
ニウム塩、尿素、アミノ酸およびその他の窒素化合物、
ならびにべプトン、ＮＺーアミン、肉エキス、コーンス
チープリカ−、カゼイン加水分解物、蟻加水分解物、フ
ィッシュミールあるいはその消化物、脱脂大豆あるいは
その消化物などの窒素含有有機物質などが用いられる。
無機物としては燐酸第一カリウム、燐酸第二カリウム、
塩化カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、硫酸
第一鉄、塩化ナトリウム、炭酸カルシウムなどが用いら
れる。培養はＰＨ６．０〜７．０、温度２５〜３ｙＣで
４〜５日間、通気燈拝しながら行う。
塩化カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、硫酸
第一鉄、塩化ナトリウム、炭酸カルシウムなどが用いら
れる。培養はＰＨ６．０〜７．０、温度２５〜３ｙＣで
４〜５日間、通気燈拝しながら行う。
このようにして培養することにより、培養物中、主とし
て菌体中にグルタチオソ・パーオキシダーゼが生成蓄積
する。
て菌体中にグルタチオソ・パーオキシダーゼが生成蓄積
する。
培養物中からのグルタチオン・パーオキシダーゼの採取
は次のごとく行なつｏ培養終了後、培養物から菌体を遠
０分離などにより取得し、ついでこの菌体を適当な主段
、例えば超音波処理、磨砕、機械的圧縮、自己消化など
の手段で破砕し、破砕液から遠心分離等によって上清液
を得る。
は次のごとく行なつｏ培養終了後、培養物から菌体を遠
０分離などにより取得し、ついでこの菌体を適当な主段
、例えば超音波処理、磨砕、機械的圧縮、自己消化など
の手段で破砕し、破砕液から遠心分離等によって上清液
を得る。
上蒲液を通常酵素精製に用いられる方法、例えば、塩析
、有機溶媒沈殿、透析、イオン交換セルロースカラムク
。
、有機溶媒沈殿、透析、イオン交換セルロースカラムク
。
マト、セフアデツクスカラムクロマト、凍結乾燥などの
方法にて処理する。かくして精製グルタチオン・パーオ
キシダーゼを採取することができる。本発明で得られる
酵素合有する性質をムコール・ヒェマリスＹＲ−０９２
９から生産されるグルタチオン・パーオキシダーゼを代
表として以下に述べるが、ムコール・シルシネロイデス
ＡＴＣＣＩ５２４２およびムコール・ルキシアヌスＹＲ
−０３１９から生産されるグルタチオン・パーオキシダ
−ゼもほぼ同機の性質をする。
方法にて処理する。かくして精製グルタチオン・パーオ
キシダーゼを採取することができる。本発明で得られる
酵素合有する性質をムコール・ヒェマリスＹＲ−０９２
９から生産されるグルタチオン・パーオキシダーゼを代
表として以下に述べるが、ムコール・シルシネロイデス
ＡＴＣＣＩ５２４２およびムコール・ルキシアヌスＹＲ
−０３１９から生産されるグルタチオン・パーオキシダ
−ゼもほぼ同機の性質をする。
グルタチオン・パーオキシダーゼの酵素活性の測定は、
酵素によって生成する酸化型グルタチオンを、グルタチ
オン・レダクターゼの存在下にＮＡＤＰＨと反応させ、
ＮＡＤＰＥの３４仇のにおける吸光度の減少速度を分光
光度計で測定することによって行なう。
酵素によって生成する酸化型グルタチオンを、グルタチ
オン・レダクターゼの存在下にＮＡＤＰＨと反応させ、
ＮＡＤＰＥの３４仇のにおける吸光度の減少速度を分光
光度計で測定することによって行なう。
反応式は次式｛１’、‘２｝で示される。
‘ィ）試薬
■ 基質：３０ｍＭクメン・ハイドロパーオキサィド水
溶液 ０．２の‘■ 緩衝液：
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）４４ｍＭ ＥＤ
ＨＡを含む） １．５の‘■ 還元型グル
タチオン：１０のＭ水溶液０．３の‘■ アジ化ナトリ
ウム：ｌｏｗＭ水溶液 ０．３の‘■ ＮＡＤＰＨ：１
６ＭＭ水溶液 ０．３の‘■ グルタチオン
・レダクターゼ溶液：１００ｍＭ
〇．３の‘リン酸緩衝液くｐＨ７
．０）でｌｕ′の‘になる様希釈調製■ 酵素溶液
０．１私（ｏ）操作上記試薬■〜
■をキュベット（ｄ＝１．０の）にとり２５℃、５分間
予備加溢する。
溶液 ０．２の‘■ 緩衝液：
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）４４ｍＭ ＥＤ
ＨＡを含む） １．５の‘■ 還元型グル
タチオン：１０のＭ水溶液０．３の‘■ アジ化ナトリ
ウム：ｌｏｗＭ水溶液 ０．３の‘■ ＮＡＤＰＨ：１
６ＭＭ水溶液 ０．３の‘■ グルタチオン
・レダクターゼ溶液：１００ｍＭ
〇．３の‘リン酸緩衝液くｐＨ７
．０）でｌｕ′の‘になる様希釈調製■ 酵素溶液
０．１私（ｏ）操作上記試薬■〜
■をキュベット（ｄ＝１．０の）にとり２５℃、５分間
予備加溢する。
次いで酵素液を加えて２５℃で３４血肌の吸光度を２〜
３分間記録し、直線部分から１分間当りの吸光度の変化
を求める（△ＯＤにｓｔ）。一方コントロールとして基
質の代りに、水を用いたものを上記の操作を行なし、吸
光度の変化を求める（△ＯＤＢｌａｎｋ）。
３分間記録し、直線部分から１分間当りの吸光度の変化
を求める（△ＯＤにｓｔ）。一方コントロールとして基
質の代りに、水を用いたものを上記の操作を行なし、吸
光度の変化を求める（△ＯＤＢｌａｎｋ）。
し一 力価の計算法
グルタチオン・パーオキシダーゼの１単位は２ｙｏで１
分間に１〆ｍｏｌｅのグルタチオン（ＧＳＨ）を酸化す
る（又は０．別ｍｏｌｅのＮＡＤＰＨを酸化する）酵素
量と定義する。
分間に１〆ｍｏｌｅのグルタチオン（ＧＳＨ）を酸化す
る（又は０．別ｍｏｌｅのＮＡＤＰＨを酸化する）酵素
量と定義する。
一方、ｌｍＭのＮＡＤＰＨの吸光係数は６．２２と報告
されている（ＴｈｅＭｅｒｋＩＭｅｘ、９版、Ｐ８２４
）から、求める酵素溶液１の【当りの力価■はＡ＝のＤ
ｔｅｓｔ−△ＯＤｂｌａｎｋ）×３＝（△ｏｏにｓｔ−
△○Ｄｂｌａｎｋ）ｘ９．６５（ｕｎｉｔ′似）６．２
２×★×０．１より求められる。
されている（ＴｈｅＭｅｒｋＩＭｅｘ、９版、Ｐ８２４
）から、求める酵素溶液１の【当りの力価■はＡ＝のＤ
ｔｅｓｔ−△ＯＤｂｌａｎｋ）×３＝（△ｏｏにｓｔ−
△○Ｄｂｌａｎｋ）ｘ９．６５（ｕｎｉｔ′似）６．２
２×★×０．１より求められる。
次に本発明で得られたグルタチオン・パーオキシダーゼ
の諸性質を示す。
の諸性質を示す。
‘１’作用
本酵素は、還元型グルタチオンの存在下にハィドロ・パ
ーオキサィドを還元し、対応するアルコールと酸化型グ
ルタチオンを生成する反応を触媒する。
ーオキサィドを還元し、対応するアルコールと酸化型グ
ルタチオンを生成する反応を触媒する。
■ 基質特異性
本酵素は、クメン・ハイドロパーオキサィド、ｔーブチ
ル・ハイドロ／ゞーオキサイド、リノレィン酸・ハイド
ロパーオキサイド、過酸化水素等に作用する。
ル・ハイドロ／ゞーオキサイド、リノレィン酸・ハイド
ロパーオキサイド、過酸化水素等に作用する。
‘３１ 至適ｐＨ
本酵素の至適ｐＨは２５００、１分間の反応でＰＨ６．
０〜７．の寸近にある。
０〜７．の寸近にある。
ｔ４｝ 安定ｐＨ範囲
本酵素の安定ｐＨ領域は４００、２畑時間の処理でＰＨ
６．０〜８．０の間にある。
６．０〜８．０の間にある。
【５｝ 作用温度の範囲
本酵素の最適温度は解７．０、１分間の反応において３
０〜３５℃付近にある。
０〜３５℃付近にある。
‘６１ 温度安定性
本酵素は、ｐＨ６．０、１び分間の処理で３７ｑ０まで
安定、４５ｑｏでは８０％程度失活する。
安定、４５ｑｏでは８０％程度失活する。
｛７｝ 阻害
２５℃、ｐＨ７．０で反応させた場合、下詑の物質によ
って阻害される。
って阻害される。
※ＰＯＭＢニパラクロロマーキューリーベンゾエイト職
分子量セファロースＣＬ−蟹ゲルｏ適法により、本酵
素の分子量は約５５０００と算出された。
分子量セファロースＣＬ−蟹ゲルｏ適法により、本酵
素の分子量は約５５０００と算出された。
■ 結晶構造および元素分析値は、本酵素が結晶化され
ていないので測定していない。（１０）コハクター（Ｃ
。
ていないので測定していない。（１０）コハクター（Ｃ
。
ｆａｃｔｏｒ）Ｘ線蟹光分析によれば本酵素は検出でき
るほどのセレンを含まない。
るほどのセレンを含まない。
（１１）沈殿係数
超遠心分離により測定した本酵素の沈殿係数はＳ沙、ｗ
＝２．２４Ｓである。
＝２．２４Ｓである。
（１２）等露点
ａｍｐｈｏｌｉ肥を用いる等露点電気泳動法により測定
した本酵素の等露点はｐＨ５．２０である。
した本酵素の等露点はｐＨ５．２０である。
（１３）アミノ酸分析本酵素に含まれる種々のアミノ酸
の量を、ラットの肝臓に由来するグルタチオン・パーオ
キシダーゼと比較して以下に示す。
の量を、ラットの肝臓に由来するグルタチオン・パーオ
キシダーゼと比較して以下に示す。
注）ａ）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，
繁盛，２５１０野心ｂ）酵素１分子に含まれるアミノ酸
残基の数ｃ）検出されず以下実施例をあげて本発明を具
体的に説明する。
繁盛，２５１０野心ｂ）酵素１分子に含まれるアミノ酸
残基の数ｃ）検出されず以下実施例をあげて本発明を具
体的に説明する。
実施例 １
ムコール−ヒェマリスＹＲ−０９２９（徴工研菌寄第５
７０８号）をグルコース１タ′ｄ‘、酵母エキス０．３
夕／ｄ‘、麦芽エキス０．３夕／ｄ‘、からなる培地（
ｐＨ６．０）３００Ｍを含む２そエルレンマヤーフラス
コに桶菌し、３０００で４観音間振顔培養する。
７０８号）をグルコース１タ′ｄ‘、酵母エキス０．３
夕／ｄ‘、麦芽エキス０．３夕／ｄ‘、からなる培地（
ｐＨ６．０）３００Ｍを含む２そエルレンマヤーフラス
コに桶菌し、３０００で４観音間振顔培養する。
この培養液６００机を上記培地と同じ組成の培地１５夕
を含む３０クジヤーフアーメンタ一に入れ、通気櫨拝（
３０仇ｐｍ）しつつ、３０こ０で４日間培養を行う。こ
の培養液１５夕を大型ヌッチェで炉過し、菌体１００夕
（ｗｅｔ）を集める。
を含む３０クジヤーフアーメンタ一に入れ、通気櫨拝（
３０仇ｐｍ）しつつ、３０こ０で４日間培養を行う。こ
の培養液１５夕を大型ヌッチェで炉過し、菌体１００夕
（ｗｅｔ）を集める。
この菌体を０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）５そ
で洗浄した後、同緩衝液２〆に懸濁する。
で洗浄した後、同緩衝液２〆に懸濁する。
この懸濁液をＤＹＮＯ−ＭＩＬＬ（ＷｍｙＡ．舷ｃｈｏ
ｆｅｎ社製、スイス）にかけ菌体を磨砕する。磨砕した
後、冷凍遠心機にて遠心分離（１２０００×夕、２び分
）し、上清液をうる。
ｆｅｎ社製、スイス）にかけ菌体を磨砕する。磨砕した
後、冷凍遠心機にて遠心分離（１２０００×夕、２び分
）し、上清液をうる。
この上清液に硫安を加え、硫安５０〜９０％飽和で沈殿
する部分を採取する。
する部分を採取する。
この沈殿のグルタチオン・パーオキシダーゼ活性収率は
約７５％で、比活性は約３倍に上昇している。
約７５％で、比活性は約３倍に上昇している。
この沈殿を約１００叫の０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
６．０）に溶解する。
６．０）に溶解する。
この溶液を同緩衝液１０そで２餌時間透析する。
透析液を同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−セルロースカ
ラム（１〆、口径６伽）に通塔する。この操作で、グル
タチオン・／ゞーオキシダーゼはＤＥＡＥ−セルロース
に吸着される。さらに、同緩衝液で不純蛋白質を洗い流
す。次に、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）から
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６。
ラム（１〆、口径６伽）に通塔する。この操作で、グル
タチオン・／ゞーオキシダーゼはＤＥＡＥ−セルロース
に吸着される。さらに、同緩衝液で不純蛋白質を洗い流
す。次に、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）から
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６。
０）までの濃度勾配液で溶出を行う。
グルタチオン・パーオキシダーゼの活性画分は単一のピ
ークとして溶出してくる。
ークとして溶出してくる。
この活性画分をあわせ、これに硫安を加えて、硫安９０
％飽和で沈殿する部分を遠心分離（１２０００×夕、２
Ｍ分）で集め、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）
１０の‘に溶解する。この溶液を同緩衝液５そで２４時
間透析する。透析後「酵素液を同緩衝液で平衡化したセ
フアロースＣＬ−述のカラム（５００の‘、口径３．５
伽）に通す。
％飽和で沈殿する部分を遠心分離（１２０００×夕、２
Ｍ分）で集め、０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）
１０の‘に溶解する。この溶液を同緩衝液５そで２４時
間透析する。透析後「酵素液を同緩衝液で平衡化したセ
フアロースＣＬ−述のカラム（５００の‘、口径３．５
伽）に通す。
溶出液を分画回収し、比活性の高い分画を集め凍結乾燥
し、グルタチオン・パーオキシダ−ゼの粉末精製酵素標
品５０の９（比活性ＩＳ単位／机９）を得る。精製酵素
は細胞抽出液に比べて比活性は約１００倍に上昇し、活
性の収率は５０％である。
し、グルタチオン・パーオキシダ−ゼの粉末精製酵素標
品５０の９（比活性ＩＳ単位／机９）を得る。精製酵素
は細胞抽出液に比べて比活性は約１００倍に上昇し、活
性の収率は５０％である。
実施例 ２
実施例１において使用菌株をムコール・シルシネロィデ
スＡＴＣＣＩ５２４２に替えて行う以外は実施例１と同
様に行い、比活性１２単位／雌の精製グルタチオン・パ
ーオキシダーゼ約４０の９を得る。
スＡＴＣＣＩ５２４２に替えて行う以外は実施例１と同
様に行い、比活性１２単位／雌の精製グルタチオン・パ
ーオキシダーゼ約４０の９を得る。
活性の収率は５０％である。実施例 ３
実施例１において使用菌株をムコール・ルキシアヌスＹ
Ｒ−０３１９（徴工研菌寄第５７０少号）に替えて行う
以外は実施例１と同様に行い、比活性１の単位／の９の
精製グルタチオン・パーオキシダーゼ約２５肌９を得る
。
Ｒ−０３１９（徴工研菌寄第５７０少号）に替えて行う
以外は実施例１と同様に行い、比活性１の単位／の９の
精製グルタチオン・パーオキシダーゼ約２５肌９を得る
。
Claims (1)
- １ ムコール属に属し、グルタチオン・パーオキシダー
ゼを生産する能力を有する微生物を培地に培養し、培養
中にグルタチオン・パーオキシダーゼを生成蓄積せしめ
、これを採取することを特徴とするグルタチオン・パー
オキシダーゼの製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55132301A JPS6013668B2 (ja) | 1980-09-25 | 1980-09-25 | グルタチオン・パ−オキシダ−ゼの製造法 |
| US06/303,137 US4657856A (en) | 1980-09-25 | 1981-09-17 | Glutathione peroxidase, process for production thereof, method and composition for the quantitative determination of lipid peroxide |
| DE8181304307T DE3174509D1 (en) | 1980-09-25 | 1981-09-18 | Glutathione peroxidase, process for production thereof, method and composition for the quantitative determination of lipid peroxide |
| EP81304307A EP0049078B1 (en) | 1980-09-25 | 1981-09-18 | Glutathione peroxidase, process for production thereof, method and composition for the quantitative determination of lipid peroxide |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55132301A JPS6013668B2 (ja) | 1980-09-25 | 1980-09-25 | グルタチオン・パ−オキシダ−ゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5758884A JPS5758884A (en) | 1982-04-08 |
| JPS6013668B2 true JPS6013668B2 (ja) | 1985-04-09 |
Family
ID=15078090
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55132301A Expired JPS6013668B2 (ja) | 1980-09-25 | 1980-09-25 | グルタチオン・パ−オキシダ−ゼの製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4657856A (ja) |
| EP (1) | EP0049078B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6013668B2 (ja) |
| DE (1) | DE3174509D1 (ja) |
Families Citing this family (11)
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|---|---|---|---|---|
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| JPS63233374A (ja) * | 1987-03-20 | 1988-09-29 | Tohoku Denshi Sangyo Kk | 過酸化脂質の測定方法およびその測定装置 |
| US5436133A (en) * | 1989-06-20 | 1995-07-25 | Oriental Yeast Co., Ltd. | Enzyme assay of biochemical substances |
| US5278055A (en) * | 1992-06-09 | 1994-01-11 | The Mead Corporation | Biocatalytic production of phenolic resins with ramped peroxide addition |
| US5958714A (en) * | 1996-10-02 | 1999-09-28 | Safety Associates, Inc. | Test kits for determining at least two specific analytes in foods and other complex matrices |
| GB201306612D0 (en) | 2013-04-11 | 2013-05-29 | Fridgeland Uk Ltd | Improvements in refrigerators |
| GB201411474D0 (en) | 2014-06-27 | 2014-08-13 | Wirth Res Ltd | An open refrigerated display case and a flow stabilising device |
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| FR3041659B1 (fr) | 2015-09-30 | 2017-10-20 | Arkema France | Procede de production de l-methionine |
| FR3041658B1 (fr) | 2015-09-30 | 2017-10-20 | Arkema France | Procede de production de l-methionine |
| GB2576513B (en) * | 2018-08-20 | 2020-12-16 | Wirth Res Limited | A refrigerated display case |
-
1980
- 1980-09-25 JP JP55132301A patent/JPS6013668B2/ja not_active Expired
-
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- 1981-09-17 US US06/303,137 patent/US4657856A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-09-18 DE DE8181304307T patent/DE3174509D1/de not_active Expired
- 1981-09-18 EP EP81304307A patent/EP0049078B1/en not_active Expired
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| Publication number | Publication date |
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| EP0049078B1 (en) | 1986-04-30 |
| DE3174509D1 (en) | 1986-06-05 |
| EP0049078A3 (en) | 1983-01-19 |
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| US4657856A (en) | 1987-04-14 |
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