JPS5931517B2 - 新規７↓−メトキシセファロスポリン誘導体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、下記ブ般式〔〕で示される７ メトキシセフアロスポリン誘導体またはその塩に関する
。

上記式中 Ｒ１、Ｒ２およびｎはつぎの意味を有する。

Ｒ１ ：カルボキシル基またはα−アミノカルボキシメ
チル基Ｒ２：水素原子またはスルホ基 ｎ：１ 本発明の目的化合物〔〕は、セフアロスポリン核の３位
の側鎖に置換シンナモイル基る点に化学構造上の特徴を
有する新規化合物である。

この化合物は抗菌活性を有し、殊にグラム陰性菌に対す
る作用がすぐれており医薬品として有用である。またこ
の化合物は他の有用なセフアロスポリン系抗生物質を製
造するための中間体としても重要である。ことに、この
化合物〔１〕は予想外に安定であるので発酵液中から純
品として採取することが容易であり、しかもこの化合物
のセフアロスポリン核の３位および７位の置換基が常法
により他の種々の置換基と化学的に容易に変換しうるこ
とは、この種の中間体として特筆すべきことである。本
発明の目的化合物から誘導される化合物としては、たと
えば３位に１−メチルテトラゾール−５−イルチオメチ
ル基を有し、７位に１・３・４−チアジアゾール一２−
イルチオアセトアミド基、シアノメチルチオアセトアミ
ド基、トリフルオロメチルチオアセトアミド基などを有
する一連のセフアロスポリン誘導体を挙げることができ
る。３位および７位の置換基の変換は任意の順序で行う
ことができる。

３位の変換は、化合物〔１〕、そのカルボキシル基にお
ける反応性誘導体または、それらの塩またはそれらの７
位の置換体と１−メチルテトラゾール−５−チオールま
たはそのアルカリ金属塩とを水またはアセトン、ジメチ
ルホルムアミド、アセトニトリル、メタノール、エタノ
ール、等の有機溶媒、またはこれらの混合溶媒中、中性
付近で反応させるか、無水有機溶媒中、三弗化ホウ素ま
たはその錯化合物の存在下で反応させることによつて行
なわれる。

また、７位の変換は化合物〔〕またはその３位の置換体
を、先ず五塩化リンの如きハロゲン化剤と、次いでメタ
ノールの如き低級アルコールと、ハロゲン化剤に対し、
２．５〜３．５モル比の割合の塩基の存在下に−５０２
〜−２０℃で反応させ、対応するイミノエーテル化合物
を生成させ、この生成物と１・３・４−チアジアゾール
一２−イルチオ酢酸、シアノメチルチオ酢酸、トリフル
オロメチルチオ酢酸またはそれらの反応性誘導体とを反
応させることによつて行なうことができる。本発明によ
れば、上記〔１〕式の化合物はつぎのようにして製造さ
れる。

（イ） 〔〕において、Ｒ１がα−アミノカルボキシメ
チル基（ＨＯＯＣＣＨ−）である化合物〔１１〕 はス
トレプトミセス属に属する７ーメトキシセフアロスポリ
ン類抗生物質生産菌をヒドロキシケイヒ酸（ＨＯＯＣＣ
Ｈ）を添加するか（添加培 養）、添加しない（無添加培養）培地で培養し、培養物
から該化合物〔１１〕を採取することによつて製造され
る。

絃に使用される菌株としては、本発明者等がさきに分離
した放線菌ストレプトミセス オガノネンシスＹ−Ｇｌ
９Ｚ（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓＯｇａｎＯｎｅｎｓｉ
ｓＳａｉｔＯｅｔＯｓＯｎＯＹ−Ｇｌ９Ｚ株）（微工研
菌寄第２７２５号、ＡＴＣＣ滝３１１６７として寄託）
が好適である。

この菌株を用いて無添加培養を行なうときは、目的化合
物〔１〕において、Ｒ２がスルホ基である化合物を与え
るが、添加培養を行なうときは、添加物が取り込まれた
対応する化合物を生成する。添加培養においては、スト
レプトミセス属 １に属するその他の７ーメトキシセフ
アロスポリン生産菌株を用いることもできる。それらの
代表的な菌株としては、ストレプトミセス・グリセウス
（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｕｓ）、ストレ
プトミセス・ビリドクロモゲネス（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙ
ｃｅｓｉｒｉｄＯｃｈｒＯｍＯｇｅｎｅｓ）、ストレプ
トミセス・フインブリアタス（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅ
ｓｆｉｍｂｒｉａｔｕｓ）、ストレプトミセス・ハルス
テツデイ（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｈａｌｓｔｅｄｉ
ｉ）、ストレプトミセス・ロチエイ（ＳｔｒｅｐｔＯｍ
ｙｃｅｓｒＯｃｈｅｉ）、ストレプトミセス・シンナモ
ネンシス（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｃｉｎｎａｍＯｎ
ｅｎｓｉｓ）、ストレプトミセス・チヤートレウシス（
ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｃｈａｒｔｒｅｕｓｉｓ）、
ストレプトミセス・ラクタムヂユランス（Ｓｔｒｅｐｔ
Ｏｒ］１ｙｃｅｓ１ａｃｔａｍｄｕｒａｎｓ）〔以上特
開昭４６−３２８６ペルキー特許第７６４１６０号参照
〕、ストレプトミセス・リツプマニ（ＳｔｒｅｐｔＯｍ
ｙｃｅｓｊｌｌｐｍａｎｌｌ）〔米国特許第３７１９５
６３号参照〕、ストレプトミセス・クラブリゲルス（Ｓ
ｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ）〔
特公昭４９−４５５９４参照〕、ストレプトミセス・ワ
ダヤメンシス（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓ険Ａｄａｙａ
ｍｅｎｓｉｓ）〔特開昭４９−２６４８８参照〕、スト
レプトミセス・ジユーモンジネンシヌ（ＳｔｒｅｐｔＯ
ｍｙｃｅｓｊｕｍＯｎｊｉｎｅｎｓｉｓ）〔特開昭４９
−４２８９３参照〕、ストレプトミセス・ヘテロモルフ
ス（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｈｅｔｅｒＯｍＯｒｐｈ
ｕｓ）、ストレプトミセス・パネイ匡ンシス（Ｓｔｒｅ
ｐｔＯｍｙｃｅｓｐａｎａｙ′Ｅｎｓｉｓ）〔特４開昭
５０−５３５９４参照〕、ストレプトミセス・チヤート
レウシス（ＳｔｒｅｐｔＯｍｙｃｅｓｃｈａｒｔｒｅｕ
ｓｉｓ）ＳＦ−１６２３〔特開昭５０−８２２９１、特
開昭５０−１２１４８８参照〕などである。

１）を添加するのが有効で ある。

これらの添加物は、そのまままたはその塩として培地に
対し、０．１〜５η／ｍｌの範囲内、好ましくは０．５
〜２η／ｍｌの割合で、培養開始前に一度にまたは培養
初期に数回に分けて添加される。培養物より本発明の目
的物質を単離採取するには、微生物の培養物より抗生物
質を単離する通常の方法が適用される。

本発明の目的化合物〔１１〕は主に培養液中に含有され
るので、遠心分離または沢過により菌体を除去した後沢
過液から所望の化合物の抽出をおこなう。すなわち適当
な溶剤に対する溶解性および溶解度の差、溶液からの析
出性および析出速度の差、種々の吸着剤に対する吸着親
和性の差、２種の液相間における分配の差などを利用す
る一般の抗生物質の単離採取に用いられる手段によつて
分離、採取、精製される。この方法は必要に応じて単独
に用いられ、あるいは任意の順序に組合せ、また反覆し
て適用できる。このようにして単離された化合物〔１１
〕は、大部分がセフアロスポリン核の３位の側鎖に硫酸
エステル化された水酸基置換シンナモイル基ノを有する
化合物である。

この化合物から対応する水酸基を有する化合物〔１１〕
を得るには、公知の方法により含水アセトン（含水量１
〜１０％）で処理して硫酸エステルを加水分解すればよ
い。（ロ）つぎに、〔〕式において、Ｒ１がカルボキシ
ル基（ＨＯＯＣ一基）である化合物〔１２〕は化合物〔
１１〕から誘導される。

すなわち、上で得られたＲ１がα−アミノカルボキシメ
チル基（ＨＯＯＣ−ＣＨ一基）である化合物７一（５ア
ミノ−５−カルボキシバレラミド）−J■■下にトリゴ
ノプシス（ＴｒｉｇＯｎＯｐｓｉｓ）属に属するＤ−ア
ミノ酸酸化酵素生産菌の菌体またはその処理物を作用さ
せると、酸化的脱アミノ化反応を生起し、化合物〔１２
〕が生成する。この反応で使用される上記トリゴノプシ
ス属菌株としては、菌株保存機関に保存されて（・るタ
イプカルチヤ一の中から選択使用することもできるし、
自然界から分離することもできる。

また、目的化合物〔１２〕の生産活性を高めるため上記
の菌株から通常の手段で得られる変異株も有利に使用さ
れ得る。上記のＤ−アミノ酸酸化酵素活性を有する。好
適な微生物としてはトリコソプシス・バリアビリス（Ｔ
ｒｉｇＯｎＯｐｓｉｓｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）を挙げる
ことができる。本菌は財団法人醗酵研究所から菌株番号
１Ｆ００７５５、ＩＦＯＯ６７ｌとして入手することが
できる。このようなＤ−アミノ酸酸化酵素活性を有する
微生物を用いて目的化合物〔１２］を製造するためには
通常、先ずこれらの微生物を培養し、得られる菌体また
はその処理物を〔１１〕で表わされるセフアロスポリン
化合物（以下出発化合物〔１１〕と称す）に適当な条件
下で作用させるのがよい。菌体を得るための培養方法と
しては、通常好気的培養が望ましく、好適には通気撹拌
液体培養により行なわれる。培地組成としては、通常微
生物の培地として使用される培地が使用される。すなわ
ち合成培地、半合成培地、あるいは天然培地が用いられ
、培地の組成はたとえば炭素源としては、グルコース、
シェークロース、マンニトール、グリセリン、デキスト
リン、でん粉、植物油などが、窒素源としては、肉工キ
ズ、ペプトン、グルテンミール、綿実粕、大豆粉、落花
生粉、魚粉、コーンスチープリカ一、乾燥酵母、酵母工
キズ、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素、そ
の他の有機または無機の窒素源が用いられる。

また金属塩としてＮａ、Ｋ．Ｍｇ．Ｃａ．Ｚｎ．Ｆｅな
どの硫酸塩、硝酸塩、塩化物、炭酸塩、リン酸塩などが
必要に応じて添加される。さらに必要に応じて、メチオ
ニン、システイン、シスチン、オレイン酸メチル、ラー
ド油、シリコン油、界面活性剤などの生成促進物質、ま
たは消泡剤が適宜使用される。培地のＰＨは約３〜１０
、好ましくは４〜６の範囲に保持すると好結果が得られ
る。特に培地中にＤ−（またはＤＬ−）アミノ酸、例え
ばＤ−（またはＤＬ−）メチオニン、Ｄ−（またはＤＬ
−）アラニン、Ｄ−（またはＤＬ）バリンなどを含有し
ている場合には優れたＤ−アミノ酸酸化酵素活性が得ら
れる。

培養温度は１８゜Ｃ〜３７゜Ｃ１好ましくは３０゜Ｇ近
辺がよく、培養時間は培養条件、特に培養装置、培地組
成、培養温度などにより異なるが、Ｄ−アミノ酸酸化酵
素活性が最大を示す時点に培養を終了するよう決定する
のがよく、通常２〜１０日間が適当である。こうして得
られた菌体またはその処理物が出発化合物〔１１〕のＤ
−アミノ酸酸化反応に使用される。

ここでいう菌体の処理物とは、菌体に適当な処理を加え
てＤ−アミノ酸酸化酵素活性を高め目的化合物〔１２〕
の製造に有利な形にしたものおよびＤ−アミノ酸酸化酵
素あるいは菌体の流失を阻止するための固定化処理をほ
どこしたものを指す。例えば本発明におけるＤアミノ酸
酸化酵素は通常菌体内に存在するので、Ｄ−アミノ酸酸
化酵素生産菌を培地から集菌し洗浄したのち物理的ある
いは化学的手段を適用して得られる無細胞抽出液、また
は無細胞抽出液から公知の酵素分離精製方法を適用して
得られる部分精製あるいは、精製された可溶性のＤ−ア
ミノ酸酸化酵素、さらに可溶性酵素を物理的あるいは化
学的手段によつて水不溶性高分子物質または無機担体に
結合させたものまたは菌体を活性化処理して得られる活
性化菌体などを指す。本発明においては前記の可溶性酵
素はその調製および再使用が困難であり実用性が限られ
ているのに対し、活性化菌体は酵素の流失が少いため回
収および再使用が可能な点で有利である。

菌体の活性化処理は、菌体に崩壊を起こさせる程ではな
いある種の緩和な損傷を与えることによりもたらされる
。

これらの活性化処理の例としては酸性ＰＨ例えばＰＨ約
３〜４で−１０℃以下で凍結させて、次いで融解させる
方法、菌体を１種またはそれ以上の有機溶媒、例えばア
セトン、ｎブタノール、２−フエニルエタノール、ジエ
チルエーテル、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエンな
どと共に水相中で処理する方法、０．１〜１０％の界面
活性剤、例えばセチルトリメチルアンモニウムハライド
、セチルピリジニウムハライド、セチルジメチルベンジ
ルアンモニウムハライドなどのカチオン界面活性剤、ド
デシルサルフエート、アルキルアリールスルフオン酸ア
ルカリ金属塩、ナトリウムデオキシコレートなどのアニ
オン界面活性剤、ゾルビタンモノラウレート、トライト
ンＸ−１００などの非イオン界面活性剤の水溶液で処理
する方法、水酸化カリウムまたは水酸化ナトリウムの希
薄溶液で処理する方法、高浸透圧溶液、例えば２Ｍ庶糖
溶液中に懸濁させ、次いで急速に水で希釈する方法など
が挙げられる。これらの活性化処理は、温度、処理時間
、ＰＨ、試薬濃度など種々の要素により左右されるので
活性化の至適条件を適宜確かめることが必要である。こ
うして得られた活性化菌体は、菌体内酵素の流失をさら
に少くするため、菌体に固定化処理をほどこしてもよい
。これは通常活性化菌体を０．０１〜０．５％グルタル
アルデヒドと接触させることによつて行なわれる。また
菌体中に通常共存するカタラーゼの作用を阻止しない時
は目的化合物〔２〕への酸化的脱カルボキシル化が不完
全となり一般式〔〕（式中Ｒ２およびｎは前記の意味を
有する）で表わされる７一（５−カルボキシ−５−オキ
ソバレラミド）−Jメ[メトキシセフアロスポリン誘導体
を共生する。

従つて選択的に目的化合物〔１２〕を得るためには、カ
タラーゼ作用を阻止することが望ましい。適当なカタラ
ーゼ阻止剤はアスコルビン酸、３−アミノ−１・２・４
−トリアゾール、アルカリ金属アジドである。特にナト
リウムアジドが好ましい。この阻止剤は出発化合物〔１
１〕の目的化合物〔２〕への変換過程中に反応混合物中
に存在させてもよいし、あるいはあらかじめ菌体を前処
理してもよい。ナトリウムアジドの使用量は１〜１００
ｍＭの程度で行なわれる。あるいはまた前記の菌体中の
カタラーゼはその菌体を前記の変換工程に使用する前に
熱処理により失活させることができる。すなわち前記の
菌体を４０℃〜６０℃で、好ましくは約５０℃で少なく
とも３時間処理すると、それらのカタラーゼ活性は顕著
に減少するが、一方Ｄ−アミノ酸酸化酵素活性はそのま
ま残存する。この熱処理は簡単な水性又は緩衝懸濁液中
でその菌体に対して行なうこともできるが、菌体をその
処理を行なうと同時に「活性化」試薬処理を受けるよう
な処理に付するのが特に便利である。例えば溶媒トルエ
ンを使つて活性化処理を５０℃で４時間行ないカタラー
ゼの阻止と前記の菌体の活性化を同時に達成することが
できる。前記の活性化菌体の酵素系と出発化合物〔１１
〕との反応は通常ＰＨ６〜８で行なわれる。

反応温度としては３０℃〜４０℃で行なうことが望まし
い。反応時間は主として酵素力価により左右されるが通
常１〜５時間である。上記の酵素反応は好気的条件下で
行なわれるので通常空気または酸素の通気下で行なうの
が好ましい。また、反応液中に小量の過酸化水素を添加
すると目的化合物〔１２〕が短時間の中に収率よく得ら
れ、且つ副生物〔〕の混入を来たさない。生成した目的
化合物〔１２〕は溶媒抽出またはイオン交換樹脂の吸着
により容易に回収できる。反応液から、例えばＰＨ２．
５、またはそれ以下に酸性とし、適当な有機溶媒、例え
ば酢酸エチル、ｎ−ブタノールなどで抽出することがで
きる。また、イオン交換樹脂と溶媒抽出の組合せを使用
すると好結果が得られる。適当なイオン交換樹脂は液体
アミンアニオン交換樹脂である。好ましい溶媒は酢酸エ
チル、酢酸ブチル、ｎ−ブタノールなどである。また固
体のイオン交換樹脂を使用して分離することもできる。
その場合の適当な溶媒としては予備的な実験で容易に決
めることができる。更に精製して純粋な化合物を得るた
めには、抗生物質の精製に通常使用される方法を用いて
精製すればよい。

目的化合物〔１２〕は遊離の酸ばかりでなく通常のアル
カリ金属塩、アルカリ土類金属塩、有機アミン塩等とし
て採取することができる。

こうして得られた目的化合物〔１２〕において、セフア
ロスポリン核の３位の側鎖が硫酸エステル化されたシン
ナモイル基であるときは、前述の如く、この化合物をア
セトン水で処理して該エステル部分を加水分解すること
により対応する水酸基を有する化合物に導くことができ
る。

以上、本発明の目的化合物〔１〕の製造方法を説明した
が、これらの方法で得られた新規７ーメトキシセフアロ
スポリン化合物の物理化学的性状並びに抗菌活性を示す
。

（Ａ） ７一（Ｄ−５−アミノ−５−カルボキシバレラ
ミド）−Jメ[メトキシ一３−（ｐ−スルホオキシシンナ
モイルオキシメチル）一△３−セフエム一４−カルボン
酸（化合物Ａ）。

（式中側鎖の番号表示は便宜的に付したものである。

以下同様）この化合物（５）のＮａ塩の物理化学的性状
は次のとおりである。

（１）白色の粉末である。

（２）明確な融点を示さず１３８〜１４０℃で褐変する
。

（３）水に易溶、メタノール、エタノール、酢酸エチル
、酢酸ブチル、ブタノールその他の有機溶媒にはほとん
ど溶けない。

（４）ニンヒドリン反応陽性の両性物質である。

（５） ＰＨ６．５の１／１００Ｍリン酸緩衝液中で測
定すると第１図に示す紫外部吸収スペクトルを与え、２
８２ｎｍに吸収極大を有する。（６）臭化カリウム錠と
して測定すると第２図に示す赤外部吸収スペクトルを与
え、３０５０、１７６０、１５００１１２１５、１１６
５、１０５０、８７０、８４５ｃＩｎ−１に吸収を示す
。（７）重水中で内部標準として３−トリメチルシリル
プロピオン酸ナトリウム（以下ＴＳＰと略記する。

）を使用して測定した核磁気共鳴スペクトルを第３図に
示すが下記のシグナルを与える。δ値（Ｐｐｍ）：１．
９０（４Ｈ、多重線）、２．４９（２Ｈ、多重線）、３
．３４〜３．６７（２Ｈ、四重線、Ｊ＝１８Ｈｚ）、３
．７６（１Ｈ、多重線、Ｊ＝５．０Ｈｚ）、３，５３（
３Ｈ１一重線）、５．００（２Ｈ１四重線、Ｊ−１３Ｈ
ｚ）、５．１６（１Ｈ、一重線）、６．４３（１Ｈ、二
重線、Ｊｌ６Ｈｚ）、７．３２（２Ｈ１二重線、Ｊ８．
５Ｈｚ）、７．６１（２Ｈ１二重線、Ｊ８．５Ｈｚ）、
７．６６（１Ｈ、二重線、Ｊｌ６Ｈｚ）（８） ５０℃
、４時間真空乾燥後の元素分析値は下記の通りである。

（推定分子式Ｃ２４Ｈ２６Ｎ３Ｏ，３ｓ２Ｎａ・２Ｈ２
０）Ｃ（％）Ｈ（％）Ｎ（％）Ｓ（％）理論値 ４１．
８８４．３６６，１１９．３１実測値 ４２．０６４．
４１６．０８９．５１（９）化合物Ａを６Ｎ一塩酸で１
００℃、１６時間加水分解後、日立８３５型高速アミノ
酸分析機で分析するとα−アミノアジピン酸の存在が示
された。

（自）化合物（４）をダウエックス５０Ｗ（Ｈ型、商品
名）でメタノール中加水分解し、高速液体クロマトグラ
フイ一〔ウオータース社６０００Ａポンプ、日本分光Ｕ
ＶＩＤＥＣＫｌＯＯ、Ｕ検出器２８０ｎｍ１リクロゾル
ブＲｐ・１８（タルク社商品名）充填、４ｍｍ×１５０
ｍｍステンレスカラム、溶媒：メタノール：酢酸：水（
２０：０．１：８０容量比）〕で分析すると、ｐ−クマ
リン酸（ＨＯＯＣ（Ｂ） ７一（４−カルボキシブチラ
ミド）−Jメ[メトキシ一３−（ｐ−スルホオキシシンナ
モイルオキシメチル）一△３ン酸（化合物Ｂ）。

セフエム ４−カノレボ 化合犠Ｂ）のＮａ塩の物理化学的性状は次のとおりであ
る。

（１）白色の粉末である。

（２）明確な融点を示さず１５０〜１６０℃で褐変する
。

（３）水に易溶、メタノール、エタノール、酢酸エチル
、酢酸ブチル、ｎ−ブタノールその他の有機溶媒にはほ
とんど溶けない。

（４）ニンヒドリン反応陰性の酸性物質である。

（５） ＰＨ６．５の１／１００Ｍリン酸緩衝液中で測
定すると第４図に示す紫外部吸収スペクトルを与え、２
８２ｎｍに吸収極大を有する。（６）臭化カリウム錠と
して測定すると、第５図に示す赤外部吸収スペクトルを
与え３４５０、１７６０、１６００、１４０５、１２２
０、１０５０、８６８、８４５０ｍ−１に吸収を示す。
（７）重水中で内部標準としてＴＳＰを使用して測定し
た核磁気共鳴スペクトルを第６図に示すが下記のシグナ
ルを与える。

δ値（Ｐｐｍ）：１．９５（２Ｈ、多重線）、２．４４
（４Ｈ１多重線）、３．３６〜３，７３（２Ｈ１四重線
、Ｊ−１８Ｈｚ）、３．５５（３Ｈ、一重線）、４．９
３（２Ｈ、二重線、Ｊ−１３Ｈｚ）、５．１９（１Ｈ、
一重線）、６．５４（１Ｈ、二重線、Ｊｌ６Ｈｚ）、７
．３５（２Ｈ１二重線、Ｊ一８．５Ｈｚ）、７．７１（
２Ｈ１二重線、Ｊ８．５Ｈｚ）、７，７５（１Ｈ、二重
線、Ｊｌ６Ｈｚ）。

（８）化合物（Ｂ）を６Ｎ塩酸で１００℃、２．５時間
加水分解後、エチルエーテルで抽出し、蒸発乾固後、Ｂ
ＳＡでシリル化を行ない測定するとｍ／Ｅ２７６のグル
タル酸ビス（トリメチルシリル）のフラグメントが存在
しグルタル酸を含む事が示された。

（９）化合物（Ｂ）をダウエツクス５０Ｗ（Ｈ型、商品
名）でメタノール中加水分解すると化合物（Ａ）の場合
と同様に、ｐ−クマリン酸の存在が示された。

以上の結果を総合し、特に赤外部吸収スペクトルにおけ
る１７６０ＣＴｆＬ−１ （環状ラクタム）、磁気共鳴
スペクトルにおける３．５５ｐｐｍ（３Ｈ１一重線、７
一０ＣＨ３）、５．１９ｐｐｍ（１Ｈ１一重線、６−Ｃ
Ｈ）、３，３６〜３．７３ｐｐｍ（２Ｈ、四重線、Ｊ−
１８Ｈｚ、２ＣＨ２）、４．９３ｐｐｍ（２Ｈ、四重線
、Ｊｌ３Ｈｚ、３−ＣＨ２）の値から７ーメトキシセフ
アロスポリン核の存在が、核磁気共鳴スペクトルの１．
９５ｐｐｍ（２Ｈ、多重線、ＴＣＨ２）、３，４４ｐｐ
ｍ（４Ｈ、多重線、７・ＩＣＨ２）の値並びに化合喚Ｂ
）の塩酸加水分解物をシリル化したもののマススペクト
ルに於て、ｍ／Ｅ２７６のフラグメントを与えるところ
から７位の４−カルボキシブチラミド基の存在が核磁気
共鳴スペクトルの７，３５ｐｐｍ（２Ｈ１二重線、Ｊ−
８．５Ｈｚ、３ξ５′−ＣＨ）、７．７１ｐｐｍ（２Ｈ
、二重線、Ｊ−８．５Ｈｚ、２′・６′−ＣＨ）、６．
５４ｐｐｍ（１Ｈ、二重線、Ｊ−１６Ｈｚ、α−ＣＨ）
、７．７５ｐｐｍ（１Ｈ、二重線、Ｊ−１６Ｈｚ、β−
ＣＨ）の値並びに化合物（Ｂ）をダウエツクス５０Ｗ（
Ｈ型、商品名）でメタノール中で処理した場合の加水分
解物をシリル化したもののマススペクトルに於てｍ／Ｅ
３Ｏ８のフラグメントを与え、且つ赤外部吸収スペクト
ルより、８６８ＣＴｒＬ−１ （Ｓ−０の伸縮振動）、
１０５０戴＝１ （Ｓ＝Ｏの伸縮振動）、１２２０ｃｍ
−”付近（ＳＯ２の伸縮振動）の吸収の値より、３位の
ｐ−スルホオキシケイ皮酸残基の存在が夫々裏付けられ
化合物（Ｂ）の構造を決定した。

（Ｃ） ７一（Ｄ−５−アミノ−５−カルボキシバレラ
ミド）−Jメ[メトキシ一 ３ −（ ｐ −ヒドロキシ
シンナモイルオキシメチル）一△３−セフエム一４−カ
ルボン酸（化合物Ｃ）。

化合撫Ｃ）のＮａ塩の物理化学的性状は次のとおりであ
る。

（１）白色の粉末である。

（２）明確な融点を示さず、１４５〜１５０℃で褐変す
る。

（３）水に易溶、メタノール、エタノール、酢酸ブチル
、酢酸エチルその他の有機溶媒にはほとんど溶けない。

（４）ニンヒドリン陽性の両性物質である。

（５） ＰＨ６．５の１／１００Ｍリン酸緩衝液中で測
定すると第７図に示す紫外部吸収スベクトルを与え、３
０７．５ｎｍに吸収極大を有する。（６）臭化カリウム
錠として測定すると第８図に示す赤外部吸収スペクトル
を与え、３２００、１７６５、１６００、１５１０、１
４０５、１２５５、１１７０） ８３６−一１ に吸収
を示す。（７）重水中で内部標準としてＴＳＰを使用し
て測定した核磁気共鳴スペクトルを第９図に示すが、下
記のシグナルを与える。

δ値（Ｐｐｍ）：１．８８（ ４Ｈ、多重線）、２．５
０（ ２Ｈ）多重線）、３．３５〜３．７３（ ２Ｈ）
四重線、Ｊ＝１８Ｈｚ）、３．５４（ ３Ｈ）一重線）
、３．７６（ＩＨ）多重線）、４．９２（ ２Ｈ、四重
線、Ｊ−１３Ｈｚ）、５．１９（ＩＨ、一重線）、６．
４１（ＩＨ）二重線、Ｊ＝１６Ｈｚ）、６．９４（ ２
Ｈ、二重線、Ｊ − ８．５Ｈｚ）、７．５９（２Ｈ）
二重線、Ｊ ＝ ８．５Ｈｚ）、７．７１（ＩＨ、二重
線、Ｊ ＝１６Ｈｚ）（８） ５０℃、４時間真空乾燥
後の元素分析値は以下の通りである。

（推定分子式Ｃ２４Ｈ２６Ｎ３ＯｌＯｓＮａ・ ２Ｈ２
０）（９）化合物（Ｃ）を６Ｎ塩酸で１００℃、１６時
間加水分解後、化合物への場合と同様に、α一アミノア
ジピン酸の存在が示された。

ＱＯ化合撫ｑをダウエツクス５０Ｗ（Ｈ型、商品名）で
メタノール中、加水分解すると化合物（Ａ）の場合と同
様に、ｐ−クマリン酸が示された。

以上の結果を総合し、特に赤外部吸収スペクトルにおけ
る１７６５ｃｒｒＬ−１ （環状ラクタム）、核磁気共
鳴スペクトルにおける３．５４ｐｐｍ（３Ｈ、一重線、
７一０ＣＨ３）、 ５．１９ｐｐｍ（ＩＨ、一重線、６
− ＣＨ）、３３５〜３．７３ｐｐｍ（ ２Ｈ、四重
線、Ｊ −１８Ｈｚ、２−ＣＨ２）、４．９２ｐｐｍ（
２Ｈ）四重線、Ｊ−１３Ｈｚ） ３−ＣＨ２）の値から
７ーメトキシセフアロスポリン核の存在が、アミノ酸分
析、史には核磁気共鳴スペクトルに於ける１．８８ｐｐ
ｍ（４Ｈ、多重線、３″・４″−ＣＨ２）、２．５０ｐ
ｐｍ（２Ｈ）多重線、！−ＣＨ２）、３．７６ｐｐｍ（
ＩＨ、多重線、５″−ＣＨ）のシグナル値から７位のα
−アミノアジピン酸残基の存在が、核磁気共鳴スペクト
ルに於ける６．９４ｐｐｍ（２Ｈ、二重線、Ｊ−８，５
Ｈｚ、３！・５１−ＣＨ）、７．５９ｐｐｍ（２Ｈ、二
重線、Ｊ−８．５Ｈｚ、２′・６／−ＣＨ）、６．４１
ｐｐｍ（１Ｈ１二重線、Ｊ＝１６Ｈｚ１αＣＨ）、７．
７１ｐｐｍ（１Ｈ１二重線、Ｊｌ６Ｈｚ、β−ＣＨ）、
並びに化合物（Ｃ）のメタノール中ダウエツクス５０Ｗ
（Ｈ型、商品名）による加水分解物をシリル化したもの
のマススベクトルがｍ／Ｅ３Ｏ８（ｐ−トリメチルシリ
１ルオキシケイ皮酸トリメチルシリルに相当する）の
フラグメントを与えること並びに元素分析値よりＳ原子
が１個であること、及び赤外部吸収スペクトルより、化
合物（Ａ）の８７０ｃＴｎ−１ （ＳＯの伸縮振動）、
１０４５ｃｍ−１ （Ｓ＝Ｏの伸縮振動）、１２１５Ｃ
Ｔ１−１附近（ＳＯ２の伸縮振動）の吸収が消失してい
ることより化合物（４）のスルホ基（−ＳＯ３Ｈ基）が
脱離された化合物（Ｃ）の構造を決定した。

Ｄ７−（４−カルボキシブチラミド）−Jメ[メトキシ一
３−（ｐ−ヒドロキシシンナモイルオキシメチル）−△
３−セフエム一４−カルボン酸（化合物Ｄ）。

化合物（自）のＮａ塩の物理化学的性状は次のとおりで
ある。

（１）白色の粉末である。

（２）非常に吸湿性であり、融点の測定は困難。

（３）水に易溶、メタノール、エタノールにわずか溶け
るが、酢酸エチル、酢酸ブチル、ｎブタノールその他の
有機溶媒にはほとんど溶けない。

（４）ニンヒドリン反応陰性の酸性物質である。

（５） ＰＨ６，５の１／１００Ｍリン酸緩衝液中で測
定すると第１０図に示す紫外部吸収スペクトルを与え、
３０７ｎｍに吸収極大を有する。（６）臭化カリウム錠
として測定すると第１１図に示す赤外部吸収スペクトル
を与え、３２００、１７６５、１７００、１６００１１
５１０、１１７０１８３５Ｃ７７１−１に吸収を示す。
（７）重水中で内部標準としてＴＳＰを使用して測定し
た核磁気共鳴スペクトルを第１２図に示すが、下記のシ
グナルを与える。δ値（Ｐｐｍ）：１．９４（２Ｈ、多
重線）、２．４４（４Ｈ１多重線）、３．３６〜３．７
４（２Ｈ１四重線、Ｊ−１８Ｈｚ）、３，５４（３Ｈ１
一重線）、４．９２（２Ｈ１四重線、Ｊ＝１３Ｈｚ）、
５．１９（１Ｈ、一重線）、６．４０（１Ｈ、二重線、
Ｊ＝１６Ｈｚ）、６．９３（２Ｈ、二重線、Ｊ８．５Ｈ
ｚ）、７．５８（２Ｈ１二重線、Ｊ８，５Ｈｚ）、７．
７１（１Ｈ、二重線、Ｊｌ６Ｈｚ）。

（８）化合物Ｄ）を６Ｎ塩酸で加水分解すると、化合物
（Ｂ）と同様にグルタル酸の存在が示された。

（９）化合物（Ｄをダウエツクス５０Ｗ（Ｈ型、商品名
）でメタノール中、加水分解すると化合物（．Ａ）と同
様にｐ−クマリン酸の存在が示された。以上の結果を総
合し、特に核磁気共鳴スペクトルにおける３．５４ｐｐ
ｍ（３Ｈ１一重線、７一０ＣＨ３）、５．１９ｐｐｍ（
１Ｈ、一重線、６一ＣＨ）、３．３６〜３．７４ｐｐｍ
（２Ｈ、四重線、Ｊ−１８Ｈｚ、２−ＣＨ２）、４．９
２ｐｐｍ（２Ｈ、四重線、Ｊ＝１３Ｈｚ、３一側鎖の−
ＣＨ２）の存在から７ーメトキシセフアロスポリン核の
存在が明らかであり、核磁気共鳴スペクトルにおける１
６９４ｐｐｍ（２Ｈ１多重線、３〃−ＣＨ２）、２．４
４ｐｐｍ（４Ｈ、多重線、ｆ−１−ＣＨ２）の存在並び
に化合物Ｄの塩酸加水分解物をシリル化したもののマス
スペクトル．に於て、ｍ／Ｅ２７６のフラグメントを与
える所から、７位の４−カルボキシブチラミド基の存在
が、核磁気共鳴スペクトルにおける６．９３ｐｐｍ（２
Ｈ、二重線、Ｊ−８．５Ｈｚ、３′・５′−ＣＨ）、７
．５８ｐｐｍ（２Ｈ１二重線、Ｊ−８，５Ｈｚ、２′・
６／−ＣＨ）、６．４０ｐｐｍ（１Ｈ１二重線、Ｊ−１
６Ｈｚ１αＣＨ）、７６７１ｐｐｍ（１Ｈ、二重線、Ｊ
ｌ６Ｈｚ、β−ＣＨ）並びに化合物Ｄのメタノール中ダ
ウエックス５０Ｗ（Ｈ型、商品名）による加水分解物を
シリル化したもののマススペクトルに於てｍ／Ｅ３Ｏ８
のフラグメントを与えることから３位のｐ−クマリン酸
の存在が裏付けられ、上記化合物（１）の構造を決定し
た。

次に化合物（，Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、旧の薄層クロマ
トグラフイ一、高速液体クロマトグラフイ一および抗菌
活性の結果を示す。１，微結晶セルローズ（アビセルＳ
Ｆｌ商品名）を使用した薄層クロマトグラフイ一に於け
るＲｆ値は次のとおりである。

２．高速液体クロマトグラフイ一に於ける溶出時間は次
のとおりである。

ポンプ：６０００Ａ（ウオーターズ社） 検出器：ＵＶＩＤＥＫｌＯＯ［［Ｕ検出器（日本分光社
）２８０ｎｍカラムリリクロゾルブＲＰ・１８（タルク
社）充填、４關×１５０ｍｍステンレスカラム展開溶媒
：アセトニトリル：酢酸：水（１０：０．２：９０容量
比）流速：１ｍ１／分 圧力：１８００Ｐ．Ｓ．Ｉ． カラム温度：３０℃ ３．プロテウス・ミラビリスとサルモネラ・ガリナリウ
ム菌に対する抗菌活性は次の通りである。

つぎに実施例を挙げて、本発明の化合物〔〕の製造法を
更に説明する。

実施例 １ でん粉１％、グルコース１％、大豆粉１．５％、イース
トエキス０．５％、リン酸二カリウム０．１％、硫酸マ
グネシウム０．０５％、塩化ナトリウム０．３％を含む
培地を５００ｍ１の坂ロフラスコに各々１００ｍ１ずつ
分注し、１２０℃、２０分間滅菌する。

それにストレプトミセス・オガノネンシスＹＧｌ９Ｚ株
を接種し、３０℃４８時間培養し、種培養とする。別に
でん粉７％、グルテンミール２％、大豆粉２％、グリセ
リン０．８％、カザミノ酸０．１％、硫酸第二鉄０．０
１％、水酸化ナトリウム４．６ｙ、アデカノール（商品
名）１ｍ１を含む培地５１に、さらにｐ−クマリン酸１
０１を含み４Ｎ一水酸化ナトリウムでＰＨ７．５に修正
した溶液５００Ｔｎ１を添加して１０ｆの発酵槽に仕込
み、１２０℃、３０分間滅菌する。これに種培養液１０
０ｍ１を接種し、３０゜Ｃで１２０時間培養する。培養
終了後、培養液をＰＨ３．Ｏに調整したのち、ラジオラ
イト（商品名）を加えてかきまぜる。これを吸引沢過し
水洗水と合せると５．６１（７）沢液が得られる。この
沢液を４Ｎ塩酸にてＰＨ３．Ｏに再調整したのち、ダイ
ヤイオンＨＰ・２０１１のカラムに吸着させ、５ｆ．の
水でカラムを洗浄後、３０％アセトン水溶液で溶出させ
る。そしてプロテウス・ミラビリスに対して抗菌活性を
示す画分を集める。この活性画分を５０℃で減圧濃縮し
、希塩酸でＰＨ３．５に修正し、アンバーライトＩＲＡ
−６８（Ｃｌ一型）１ｆ！のカラムに吸着させる。この
カラムを５１の水で洗浄したのち、１Ｍの硝酸ナトリウ
ムと０．１Ｍの酢酸ナトリウムを含む水溶液（ＰＨ７．
２）で溶出し、抗菌活性を示す画分を集める。これをＰ
Ｈ３．Ｏに修正したのち、ダイヤイオンＨＰ・２０１１
に吸着させ５１の水でカラムを洗浄後、３０％アセトン
水溶液で溶出し、抗菌活性の画分を集めると、約５００
ｍ１の溶液が得られる。これを５０℃で減圧濃縮してア
セトンを除去し、凍結乾燥すると約１１７の化合物（４
）の粗粉末が得られる。この粉末１１ｙをｎ−ブタノー
ル：酢酸：水（容量比４：１：２）混液で充填した微結
晶セルカース〔アビセル（商品名）〕カラムを用いて同
じ溶媒混液でカラムクロマトグラフイ一を行なう。

化合物（Ａ）を含む画分は抗菌活性及びアビセルＳＦ（
商品名）の薄層プレートにスポツトし、イソプロパノー
ル：水（容量比７：３）混液で展開したのちＵｖ吸収（
マナスルライト２５３６λ）、ニンヒドリン発色でＲｆ
値０．５５を示す事を確認した上集めると約１５０ｍ１
の化合物（Ａを含んだ溶媒混液が得られる。この溶媒混
液にトルエン１５０ｍ１を添加して振盪し、静置後、上
層のｎ−ブタノール、トルエンを除去する。下層の水性
区分に化合物（５）が存在し、これを５０℃で約３０ｍ
１まで減圧濃縮したのち凍結乾燥すると１．３６７の乾
燥粉末が得られる。次に高速液体クロマトグラフイ一装
置を用いて精製する〔ポンプリウオーターズ社６０００
Ａ１検出器：日本分光社ＵＶ検出器ＵＶＩＤＥＫｌＯＯ
２８Ｏｎｍｌカラム：分取用ボンダパツクＣ，８充填８
ｍＴｆＬ×１ｍステンレスカラム、溶媒：アセトニトリ
ル：酢酸：水（容量比９：０．２：９０．８）、流速９
Ｔ１１１／分、圧力３５ｋｇ／Ｃｄ〕上記粉末１．３６
７を１０ｍ１の水に溶解し、その２ｍ１を上記カラムに
注入し、溶出時間２４分から４４分までの化合物（Ａ）
を含む画分を分取する。

これを５回くりかえし合わせて５０℃で減圧濃縮して凍
結乾燥すると７５ηの白色粉末が得られる。これを、さ
らにセフアデツクスＧ・１０カラム（１．５（ＶＯ×５
０（７Ｌ）に吸着させ、蒸留水にて展開を行ない、化合
物（自）を含む画分は抗菌活性、及びアビセルＳＦの薄
層プレートにスポツトしてイソプロパノール：水（容量
比７：３）混液で展開したのち、Ｕ吸収、ニンヒドリン
発色でＲｆ値０，５５を示す事を確かめた上で集め、凍
結乾燥すると白色粉末の純粋な化合物（４）が６６η得
られた。実施例 ２グルコース２０７、リン酸第一カリ
ウム４７、硫酸マグネシウム１７、硫酸アンモニウム２
７、塩化カルシウム０．５７、ホウ酸０．１７、モリブ
デン酸アンモニウム０．０４ｔ１硫酸マンガン０．０４
７、硫酸亜鉛０．０４７、硫酸銅０．０４５７、硫酸第
一鉄０，０２５Ｖ１ピオチン２０ｍｃｇ１サイアミン塩
酸塩２Ｗ１９、ＤＬ−メチオニン１７、水１０００ｍ１
よりなるＰＨ６．Ｏの培地を１００ｍ１宛５００ａ三角
フラスコに分注し、１２０℃、２０分間滅菌して、トリ
ゴノプシス・バリアビリスＩＦＯ・０７５５株を接種し
、３０℃、７２時間振盪培養した。

培養終了後、培養液約１００ｍ１を集め、４℃、３０分
間、２０００ｒ．ｐ．ｍ．で遠心分離して菌体を集め、
ＰＨ８，ｌの０．１Ｍピロリン酸緩衝液５００ｍ１に懸
濁させ、菌体浮遊液を得た。この菌体浮遊液に５ｍ１の
トライトンＸ−１００（商品名）を加え、３７℃で３０
分間振盪し活性化して、活性化菌体を集め、ＰＨ８．ｌ
の０．１Ｍピロリン酸緩衝液に懸濁させこれを活性化菌
液（Ｄ−アミノ酸酸化酵素）とした。実施例１で得られ
た化合物（５）１０ｍｆ！７をＰＨ７．６の０．０５Ｍ
のピロリン酸緩衝液１０ｍ１に溶解し、これにナトリウ
ムアジド２〜、０．０６％過酸化水素水０．１ｍ１と上
記活性化菌液１ｍ１を加え、３７℃の水浴中で振盪攪拌
する。

反応の終了は、高速液体クロマトグラフイ一装置〔ポン
プリウオーターズ社６０００Ａ、検出器．日本分光社Ｕ
Ｖ検出器ＵＶＩＤＥＣＫｌＯＯ２８Ｏｎｍｌカラムリメ
ルク社リクロゾルブＲＰ・１８充填４ｍｍ×１５０ｍ７
７！ステンレスカラム、溶媒：アセトニトリル：酢酸：
水（１０：０．２：９０容量比）〕で３０分ごとに調べ
てその反応終了時間を知る。即ち、出発物質の化合物（
Ａ）は溶出時間２分５０秒を示し、Ｄアミノ酸酸化酵素
により酸化的脱アミノ化された化合物（８）は溶出時間
５分５２秒を示す。約３時間で反応が終了し、反応液か
ら４℃にて活性化菌体を遠心分離して上清を得る。これ
を１Ｎの塩酸水溶液にてＰＨを４．０に修正したのち５
０℃にて２ｍ１になるまで減圧濃縮する。次に高速液体
クロマトグラフイ一装置を用いて精製した。

〔ポンプリウオーターズ社６０００Ａ、検出器：日本分
光社ＵＶ検出器ＵＶＩＤＥＣＫｌＯＯ２８Ｏｎｍ、カラ
ム：分取用ボンダパツクＣｌ８充填８ｍｍ×１ｍステン
レスカラム、溶媒：アセトニトリル：酢酸：水（容量比
１０：０．２：９０容量比）、流速９ｍ１／分、圧力３
５ｋｇ／Ｃｄ〕上記溶液をカラムに注入し、溶出時間１
８分から２８分までの化合物（Ｂ）を含む画分を分取す
る。これを５０℃にて約１０ｍ１まで減圧濃縮し、凍結
乾燥すると５．５ワの純粋な化合物（Ｂ）の白色粉末が
得られた。実施例 ３ 実施例１で得られた化合物（Ａ）２５ワを０．５ｍ１の
水に溶解させ、次にアセトン４５．５ｍｅを添加すると
、溶液は白濁するが、ＩＮ塩酸０．２ｍ１を添加すると
瞬時に透明となり完全に溶解する。

室温（２２〜２３℃）に２時間放置したのち、アビセル
ＳＦの薄層プレートにスポツトし、ｎ−ブタノール：酢
酸：水（容量比４：１：２）混液で展開し、ＵＶ吸収と
ニンヒドリン発色にて検出すると、Ｒｆ値０．３９の化
合物（Ａ）はＲｆ値０．６５を示す化合物（Ｃ）に変化
する。又、高速液体クロマトグラフイ一〔ポンプリウオ
ーターズ社６０００Ａ１カラムリリクロゾルブＲＰ・１
８充填４ｍＴ１Ｌ×１５０７Ｉｔｍステンレスカラム検
出器：日本分光社ＵＶ検出器ＵＶＩＤＥＣＫｌＯＯ、２
８０ｎｍ、溶媒：アセトニトリル：酢酸：水（容量比１
５：０，５：９０）流速：１ｍ１／分〕 で展開すると溶出時間１分３８秒の化合物（自）は、溶
出時間１１分００秒の化合物（６）に変化していること
が確認された。

反応終了溶液をＩＮ一水酸化ナトリウム０．２ｍ１にて
中和したのち、２Ｔｎ１になるまで減圧濃縮する。次に
、高速液体クロマトグラフイ一により、化合物（Ｃ）の
精製を行なう。

〔ポンプリウオーターズ社６０００Ａポンプ、カラム：
分取用ボンダバックＣ，８（商品名ウオーターズ社）充
填８ｍｍ×１ｍステンレスカラム検出器：日本分光社Ｕ
検出器ＵＶＩＤＥＣＫｌＯＯ、２８０ｎｍ１溶媒：アセ
トニトリル：酢酸：水（容量比１５：０．５：９０）、
流速：９ワ／分〕 １４分から１９分の間の化合物（６）の画分を分取し、
約１０ｍ１まで５０℃で減圧濃縮し、これをＩＮ一水酸
化ナトリウムにてＰＨ５に修正したのち、凍結乾燥する
。

この粉末をセフアデツクスＧｌＯカラム（１．５ｃ７ｎ
×５０（７ｎ）に吸着させ、蒸留水に溶出させ、得られ
る抗菌活性画分をアビセルＳＦの薄層プレートにスポッ
トし、ｎ−ブタノール：酢酸：水（容量比４：１：２）
混液で展開し、ＵＶ吸収とニンヒドリン発色を有するＲ
ｆ値０．６５の画分を集めて凍結乾燥すると純粋な１４
ηの化合ＵＯの白色粉末が得られた。実施例 ４ 実施例３で得られた目的化合物０６ｍ９をＰＨ７，６の
０．０５Ｍピロリン酸緩衝液５Ｗ１１に溶解、これにナ
トリウムアジド１ワ、０．０６％過酸化水素水０．０５
Ｗ１１と、実施例２記載の方法で得られた、トリゴノプ
シス・バリアビリスＩＦＯＯ７５５株の活性化菌液（Ｄ
−アミノ酸酸化酵素含有）０，５ｍ１を加え３７℃の水
浴中でかきまぜる。

反応の終了は高速液体クロマトグラフイ一を用いて決定
する。

〔ポンプリウオーターズ社６０００Ａ１ 検出器：日本分光社ＵＶＩＤＥＣＫｌＯＯ−ＵＶ検出器
、２８０ｎｍカラムリリクロゾルブＲＰ・１８（タルク
社）充填４ｍＴＬ×１５０ｍｍステンレスカラム溶媒：
アセトニトリル：酢酸：水（容量比２０：０．２：８０
）、流速：１ｍ１／分〕 化合物（Ｃ）は、溶出時間３分２２秒を示すが、Ｄアミ
ノ酸酸化により酸化的脱アミノされた化合物Ｄは溶出時
間４分４８秒を示した。

又、化合物Ｄは、アビセルＳＦの薄層クロマトプレート
にスポットしｎ−ブタノール：酢酸：水（容量比４：１
：２）混液で展開したのち、Ｕ吸収、ニンヒドリン発色
により検出すると、Ｕ吸収、ニンヒドリン発色を有する
Ｒｆ値０．６５の化合犠Ｃ）のスポツトは完全に消失し
、Ｕ吸収を有し、ニンヒドリン発色の消失したＲｆ値０
．８９の化合物（Ｄｌのスポツトが検出される。

反応終了液をＩＮ一塩酸にてＰＨを２．５に修正したの
ち、５ｍ１の酢酸エチルで３回抽出し、夫々を合わせ、
無水硫酸ナトリウムで脱水したのち減圧にて濃縮後少量
の蒸留水に溶解したのちＩＮ水酸化ナトリウムにてＰＨ
を５に修正したのち凍結乾燥すると３．５ｍ９の純粋な
化合物（Ｄｌの白色粉末が得られた。

実施例 ５ 実施例１と同様の培養法でｐ−クマリン酸を添加せずに
、２０１の発酵槽を用いて培養した。

培養終了後、培養液をＰＨ３．Ｏに調整したのち、ラジ
オライトを加えてかきまぜる。これを吸引沢過し水洗す
る。洗液と沢液とを合せると２３１の水溶液が得られる
。この水溶液を４Ｎ一塩酸にてＰＨ３．Ｏに再調整した
のち、ダイヤイオンＨＰ２Ｏ３′のカラムに吸着させ、
２０ｅの水でカラムを洗浄後、３０％アセトン水溶液で
溶出させる。そしてプロテウス・ミラビリスに抗菌活性
を示す画分を集める。この活性画分を５０℃で減圧濃縮
し、４Ｎ一塩酸でＰＨ３．５に修正しアッパ一ライトＩ
ＲＡ−６８（Ｃｌ 型）３／？のカラムに吸着させる。
このカラムを１０１の水で洗浄したのち、１Ｍの硝酸ナ
トリウムと０．１Ｍの酢酸ナトリウムとを含む水溶液（
ＰＨ７．２）で溶出し、抗菌活性を示す画分を集める。
これをＰＨ３．Ｏに調整したのち、ダイヤイオンＨＰ−
２０１１に吸着させ、１０１の水でカラムを洗浄後、３
０％アセトン水溶液で溶出し、抗菌活性を示す画分を集
めると、約２．１１の溶液が得られる。これを５０℃で
減圧濃縮してアセトンを除去し、凍結乾燥すると約３２
７の粗粉末が得られる。この粉末１０ｙをｎ−ブタノー
ル：酢酸：水（容量比４：１：２）混液で充填した微結
晶セルロースカラムを用いて同じ溶媒混液でカラムクロ
マトグラフイ一を行なう。

この分画溶液をアビセルＳＦの薄層プレートにスポツト
し、イソプロパノール：水（容量比７：３）混液で展開
したのち、ＵＶ吸収、ニンヒドリン発色、プロテウス・
ミラビリスに対して抗菌活性を示す画分を集めると約５
００ｍ１の溶媒混液が得られる。この溶媒混液にトルエ
ン５００ｍｊに添加して振盪し、静置後、上層のｎ−ブ
タノール、トルエンを除去する。下層の水画分を、５０
℃で約７０ｍ１まで減圧濃縮したのち、凍結乾燥すると
約３．３７の乾燥粉末が得られる。高速液体クロマトグ
ラフイ一で分析すると、実施例１で得られる化合物（４
）と一致するピークが存在するので、このピークを高速
液体クロマトグラフイ一にて精製する。

〔ポンプリウオーターズ社６０００Ａ、検出器：日本分
光社ＵＶ検出器ＵＶＩＤＥＣＫｌＯＯ２８Ｏｎｍ、カラ
ム：分取用ボンダパツクＣｌ８充填８ｍｍ×１ｍステン
レスカラム、溶媒：アセトニトリル：酢酸：水（容量比
７：０．３：９０）、流速：９ｍ１／分、カラム温度：
３０℃〕上記粉末３．３ｙを１０７ｆＬ１の蒸留水に溶
解し、その２ｄを上記カラムに注入し、溶出時間６６分
から９４分までの化合物（８）を含む画分を分取する。

この操作を５回くりかえし、５回分を合わせて５０℃で
減圧濃縮して凍結乾燥すると、約７０ｍｙの白色粉末が
得られる。この粉末を再び高速液体クロマトグラフイ一
を用いて製精する。〔ポンプリウオーターズ社６０００
Ａ，検出器：日本分光社ＵＶＩＤＥＣＫｌＯＯ２８Ｏｎ
ｍ、カラムリボンダパツクＣｌ８充填８關×１ｍ、ステ
ンレスカラム、溶媒：アセトニトリル：酢酸：水（溶量
比８：０．２：９２）、流速：９ｍ１／分、カラム温度
１０℃〕上記７０７！１９の粉末を２ｍ１の蒸留水に溶
かし上記カラムに注入する。

溶出時間２２分から３５分の間の化合物Ａの画分を分取
する。５０℃で減圧濃縮後、凍結乾燥すると１０７ｒ１
９の白色粉末が得られる。

これを、さらにセフアデツクスＧ−１０カラム（１．５
ＣＷＬ×５０？）に吸着させ、蒸留水にてクロマトグラ
フイ一を行ない、化合物Ａを含む画分は、抗菌活性及び
アビセルＳＦの薄層プレートにスポツトしてイソプロパ
ノール：水（溶量比７：３）混液で展開したのち、ＵＶ
吸収、ニンヒドリン発色でＲｆ値０．５５を示すことを
確かめた上で集め凍結乾燥すると、白色粉末の純粋な化
合物Ａが５．５ヮ得られる。

実施例 ６ でん粉１％、グルコース１％、大豆粉１．５％、イース
トエキス０．５％、リン酸二カリウム０．１％、硫酸マ
グネシウム０．０５％、塩化ナトリウム０．３％を含む
培地を５００ｍ１の坂ロフラスコに各々１００ｍ１分注
して１２０℃、２０分間滅菌する。

それにストレプトミセス・オガノネンシスＹＧｌ９Ｚ株
を接種し、３０℃、４８時間培養する。別途に上記培地
を２１の坂ロフラスコに各々４００Ｔｎ１ずつ分注し、
１２０℃、２０分間滅菌したものに上記培養液を２〜３
％接種して３０℃、４８時間培養を行い種培養液とする
。別にでん粉７％、グルテンミール２％、大豆粉２％、
グリセリン０，８％、カザミノ酸０．１％、硫酸第二鉄
０．０１％、水酸化ナトリウム４２ｙ１アデカノール（
商品名）１０ｍ１を含む９０′の培地を１５０１の発酵
槽に仕込み、１２０℃、３０分間滅菌する。

これに種培養液２１を接種し、３０℃で２４時間培養す
る。別にｐ−クマリン酸２００ｙを２１のメタノールに
溶解させ、等モルの水酸化ナトリウムを含む８１の水溶
液と混合中和し、１２０℃、１０分間滅菌したのち、上
記２４時間後の発酵槽に添加し、さらに１２０時間培養
する。培養終了後、培養液をＰＨ３．Ｏに調整したのち
、フイルタープレスで沢過し水洗すると１２０１（７）
沢液が得られる。この沢液をダイヤイオンＨＰ・２０２
２′のカラムに吸着させ、水洗後、３０％アセトン水溶
液で溶出し、高速液体クロマトグラフイ一（ＨＰＬＣ）
で分析し、化合物（Ａの画分を集める。

次にこの画分をアンバーライトＩＲＡ・６８（Ｃｌ 型
）６１のカラムに吸着させ、水洗後、１Ｍの硝酸ナトリ
ウムと０．ＩＭの酢酸ナトリウムを含む溶液（ＰＨ７．
２）で溶出し、ＨＰＬＣで分析した化合物（８）の画分
を集める。この画分をＰＨ３．Ｏに修正したのち、ダイ
ヤイオンＨＲ・２０１５′のカラムに吸着させ、水洗後
、３０％アセトン水溶液で溶出し、ＨＰＬＣで分析し、
化合物（４）の画分を集める。この溶液を５０℃で減圧
濃縮すると化合物（Ａ９５７を含む２、５′の溶液が得
られる。実施例 ７ グルコース２０７、リン酸第一カリウム４７、硫酸マグ
ネシウム１７、硫酸アンモニウム２７、塩化カルシウム
０．５７、ホウ酸０．１７、モリブデン酸アンモニウム
０．０４７、硫酸マンガン０．０４７、硫酸亜鉛０．０
４７、硫酸銅０．０４５７、硫酸第一鉄０．０２５ｙ１
ビオチン２０ｍｃｇ１サイアミン塩酸塩２Ｗ１ｆｉ！、
ＤＬ−メチオニン１７、水１０００ｍ１よりなるＰＨ６
．Ｏの培地を１００ｍ１宛５００ｍ１三角フラスコに分
注し、１２０℃、２０分間滅菌して、トリゴノプシス・
バリアビリスＩＦＯ・０７５５株を接種し、３０℃、７
２時間振盪培養した。

培養終了後、培養液約１００ｍ１を集め、４℃、３０分
間、２０００ｒ．ｐ．ｍ．で遠心分離して菌体を集め、
ＰＨ８．ｌの０．１Ｍピロリン酸緩衝液５００ＷＬＩに
懸濁させ、菌体浮遊液を得た。この菌体浮遊液に５１１
１のトライトンＸ−１００（商品名）を加え、３７℃で
３０分間振盪し活性化して、活性化菌体を集め、ＰＨ８
．ｌの０．１Ｍピロリン酸緩衝液に懸濁させこれを活性
化菌液（Ｄ−アミノ酸酸化酵素）とした。実施例６で得
られた化合物（５）を含む溶液２，４１にピロリン酸５
０７を溶解し、４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でＰＨを７
．５に調整したのち、ナトリウムアジド８００Ｔ１１９
と上記トリゴノプシス・バリアビリスＩＦＯ−０７５５
株の活性化菌液５ｔを加え、さらに過酸化水素水１０ｍ
１を加え、３７℃にて撹拌し反応を行う。

ＨＰＬＣで分析し、化合物（，Ａ）が化合物（Ｂ）に変
換したのを確認したのち反応）溶液を４Ｎ塩酸にてＰＨ
３，Ｏに修正し、菌体を沢過除去する。

この▲液をダイヤイオンＰ・２０３１のカラムに吸着さ
せ水洗後、２５％アセトン水溶液で溶出し、ＨＰＬＣで
分析して化合喚Ｂ）の画分を集める。次にこの画分をダ
ウエツクス５０＋Ｗ（Ｈ型）３１のカラムを通過させ水
洗液と合せ、５０℃で減圧濃縮後、凍結乾燥する。

次にウオーターズ社の大量分取用液クロ装置（システム
５００）を用いてさらに精製を行う。

カラムリプレパツク一５００／Ｃｌ８、溶媒：メタノー
ル：ＰＨ４．Ｏ，ＯｌＭ酢酸ナトリウム緩衝液（容量比
１５：８５）化合物（Ｂ）の画分を分取し、この画分
をダイヤイオンＨＰ・２０３１のカラムに吸着させ、水
洗後、３０％アセトン水溶液で溶出し、ＨＰＬＣで分析
し、化合物（Ｂ）の画分を集め５０℃で減圧濃縮後凍結
乾燥すると２６７の化合犠Ｂ）の粉末が得られた。

次にこの化合物（Ｂ）の粉末１００ηをさらにＨＰＬＣ
を用いて精製する。カラム：分取用ボンダパツクＣｌ８
充填８Ｔ１１．ｍ×１ｍステンレスカラム溶媒：アセト
ニトリル：酢酸：水（容量比１０：０．２：９０）化合
物（８）の画分を分取し、４０℃にて減圧濃縮し、アセ
トニトリルを除去する。

次にこの画分をダイヤイオンＨＰ・２０１０ｍ１のカラ
ムに吸着させ、水洗後、３０％アセトン水溶液で溶出す
る。化合物（Ｂ）の画分をＨＰＬＣで分析して集めて４
０℃で減圧濃縮後、凍結乾燥する。この凍結乾燥物を５
５℃、４時間真空乾燥すると５５ｍ９の純粋な化合物（
Ｂ）の白色粉末が得られた。この化合物（Ｂ）の元素分
析値は以下の通りである。

（Ｃ２３Ｈ２３Ｎ２ｓ２Ｏｌ３Ｎａ・２丁Ｈ２Ｏとして
）Ｃ（％） Ｈ（％） Ｎ（％） Ｓ（％）理論値 ４
１．３８４．２３４．２０９．６０実測値 ４１．３４
４．１０４．０９９．４０実施例 ８実施例６で得られ
た化合物（Ａ）を含有する溶液２，５１のうち１０ｍ１
を取り、凍結乾燥する。

この粉末を２ｍ１の水にて溶解したのち、アセトン２０
０ｍ１を添加すると溶液は白濁するが、濃塩酸０．６ｍ
１を添加すると透明となる。ＨＰＬＣで分析して化合物
（Ａ）が化合物（Ｏに変換したのを確認したのち、４Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液を添加してＰＨ試験紙にてＰＨ
２〜３に修正し、ガラスフィルタ一で▲過したのち▲液
を４０℃で減圧濃縮し、凍結乾燥すると３００▼の粉末
が得られる。

次にＨＰＬＣを用いてさらに精製を行う。

カラム：分取用ボンダパツクＣｌ８充填８ｍｍＸ１ｍス
テンレスカラム溶媒：メタノール：酢酸：水（容量比２
３：０．１：JモV）カラム温度：２０℃ 化合物（０の画分を分取し、４０℃にて減圧濃縮し、メ
タノールを除去する。

ＰＨを４Ｎ塩酬にて３．０に修正したのちダイヤイオン
ＨＰ・２０７ｍ１のカラムに吸着させ、水洗後、３０％
アセトン水溶液で溶出し、ＨＰＬＣで分析し化合物（０
の画分を集める。この画分を４０℃にて減圧濃縮後凍結
乾燥し、５５℃、４時間真空乾燥すると５５〜の純粋な
化合物（Ｏの白色粉末が得られた。この化合物（Ｏの元
素分析値は以下の通りである。

（Ｃ２４Ｈ２７Ｎ３ＯｌＯＳ・１万Ｈ２Ｏとして）′〜
Ｖ）Ｊ−μ＝＝晶ｖ聯▼ＶＶ●↓υｈ工υｖ春−【Ｆｗ
ｉ実施例 ９実施例７の化合惣Ｂ）の凍結乾燥粉末２６
ｙのうち１７をとり、４．２ｍ１の水に溶かす。

次にアセトン５９４ｍ１を添加すると白濁するが、さら
に濃塩酸を０．６ｍＩ１添加すると透明となる。ＨＰＬ
Ｃで化合物（Ｂ｝が化合物のに変換したのを確認したの
ち、４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加し、ＰＨ試験紙
にてＰＨ２〜３に修正する。ガラスフイルタ一でＰ過し
たのち、ｆ液を４０℃で減圧濃縮し、アセトンを除去し
たのち、水１００ｍ１と酢酸エチル１００ｍ１を加え振
とうし、酢酸エチル層をとり、１００ｍ１の飽和食塩水
で洗浄後、硫酸マグネシウムで脱水し、これを４０℃で
減圧濃縮乾固する。次にシリカゲルカラムクロマトグラ
フイ一で精製を行う。上記粉末を少量のメタノールに溶
解し、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（容量比１：３）の混
合溶媒で充填した１００ｍ１シリカゲルのカラムに吸着
させる。

そしてｎ−ヘキサン：酢酸エチル（容量比１：３、次い
で１：９）の混合溶媒で段階的に溶出し、ＨＰＬＣで分
析し、化合物（１）の画分を集める。この化合物（Ｄ／
の画分を減圧乾固し、もう一度上記溶媒系でシリカゲル
のカラムクロマトグラフイ一にて精製を行う。この乾燥
物を少量のメタノールに溶解し、ｎ−ヘキサン：酢酸エ
チル（容量比１：３）で充填した７５ｍ１のシリカゲル
のカラムに吸着させｎ−ヘキサン：酢酸エチル（容量比
１：３、１：６、次いで１：９）で段階的に溶出し、Ｈ
ＰＬＣで分析し、化合物（］）の純粋な画分を集める。
これを４０℃にて３ｍ１まで減圧濃縮し、これに水約５
ｍ１を添加すると白濁するが、さらに４０℃で減圧濃縮
後、水溶液を凍結乾燥し、５５゜Ｃ、４時間真空乾燥す
ると白色の純粋な化合物◎の粉末５３ｍ９が得られた。
この化合物（１）の元素分析値は次の通りである。

（Ｃ２３Ｈ２４Ｎ２ＳＯｌＯ−Ｈ２Ｏとして）

【図面の簡単な説明】

（１）第１図、第２図および第３図は夫々化合物６の紫
外部吸収スペクトル、赤外部吸収スペクトルおよび核磁
気共鳴スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１はカルボキシル基またはα−アミノカル
   ボキシメチル基を、Ｒ＿２は水素原子またはスルホ基を
   、ｎは１を夫々意味する。 ）で示される７−メトキシセファロスポリン誘導体また
   はその塩。 ２ ７−（５−アミノ−５−カルボキシバレラミド）−
   ７−メトキシ−３−（ｐ−スルホオキシシンナモイルオ
   キシメチル）−Δ＾３−セフェム−４−カルボン酸また
   はその塩である特許請求の範囲第１項記載の７−メトキ
   シセファロスポリン誘導体またはその塩。 ３ ７−（５−アミノ−５−カルボキシバレラミド）−
   ７−メトキシ−３−（ｐ−ヒドロキシシンナモイルオキ
   シメチル）−Δ＾３−セフェム−４−カルボン酸または
   その塩である特許請求の範囲第１項記載の７−メトキシ
   セファロスポリン誘導体またはその塩。 ４ ７−（４−カルボキシブチラミド）−７−メトキシ
   −３−（ｐ−スルホオキシシンナモイルオキシメチル）
   −Δ＾３−セフェム−４−カルボン酸またはその塩であ
   る特許請求の範囲第１項記載の７−メトキシセファロス
   ポリン誘導体またはその塩。 ５ ７−（４−カルボキシブチラミド）−７−メトキシ
   −３−（ｐ−ヒドロキシシンナモイルオキシメチル）−
   Δ＾３−セフェム−４−カルボン酸またはその塩である
   特許請求の範囲第１項記載の７−メトキシセファロスポ
   リン誘導体またはその塩。