JPH10504021A - 肝細胞選択性水中油型乳剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 組織または細胞選択性搬送剤として有用な、熱・保存安定性乳剤。放射性または非放射性、合成または半合成による、ポリハロゲン化トリグリセリド（２−オレオイルグリセロール−１，３−ビス［７−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）ヘプタノエート］または２−オレオイルグリセロール−１，３−ビス［ω−（３，５−ビス−トリフルオロメチル）−ヘプタノエート］）またはフェニル酢酸塩をリポ蛋白様乳化粒子の親油性核の中に取り込ませることができる。この親油性核は、コレステロールとアポリポ蛋白類からなる燐脂質膜によって囲まれる。肝細胞選択性輸送のためには、該乳化剤はキロミクロン残渣と同様に、５０−２００ｎｍの直径範囲を持ち、かつその直径分布が狭く（３００ｎｍより大きいものが＜２％）、天然のキロミクロン残渣様の組成を有する。なお、直径分布は、重み付き個数分析法による。この乳化剤処方にコレステロールを用いるのは、アポリポ蛋白類、特にApo Ｅの付着を促進するためである。アポリポ蛋白類は、肝細胞によって認識され、それによって結合、取り込まれるのに必要である。該乳化剤を形成するにあたり、安定性および直径分布に関する必要条件は、超高エネルギー混合器、例えば、ミクロ・フルーダイザー（ミクロフルーディクス・コープ、ニュートン、マサチューセッツ州）を用いて実現できる。好ましい実施態様においては、乳化剤のオスモル濃度は、通常の生理食塩水でなく、グリセロールで調整される。

Description

【発明の詳細な説明】 肝細胞選択性水中油型乳剤 発明の背景 本発明は一般に、水中油型乳剤に関わる。特に、親油性または両親媒性である 診断薬、治療薬、または、その他の生物活性剤ないし非活性剤の組織特異的搬送 剤として機能する水中油型乳剤に関わる。 画像診断剤（Imaging agent）が、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、核磁気 共鳴法（ＭＲ）、超音波医学や、核種医学のような診断法に用いられている。こ れは、各組織タイプ間の画像コントラストを強調するためである。しかしながら 、現在用いられる画像診断剤の多くは、その作用が、血管および／または細胞外 区域に限定されている。これは現今技術の欠点である。このため、正常の血液補 給を受けるすべての組織が同じように診断薬を受けとることになる。したがって 、組織特異的画像の強調が危うくなる。細胞外空間に留まる非特異的診断薬は、 主として各組織、各構造体の解剖学的特質を識別するには有用である。しかしな がら、診断剤を標的組織の細胞内環境に輸送することのできる画像診断剤がもし あるならば、それは従来の細胞外画像診断剤で得られる通常の解剖的な視覚化に 加えて、さらに、その標的組織の代謝性、および・または、生化学的活動を評価 する一手段を与えることになろう。 前記に加えてさらに、細胞外空間に局在する画像診断薬は生体からきわめて速 やかに排除される。画像用機器の限界から、診断画像を形成するのに使用される データを収集するには、あらかじめ決められた時間が最低必要である。したがっ て、生体から急速に排除される造影剤の場合、良質の画像を実現するのに十分な 濃度勾配を維持するためには、大用量を投与しなければならない。したがって、 現在用いられている画像診断剤の多くの場合、その投与は複雑な工程となる。な ぜなら、短時間に、大用量の物質を生体に注入するという危険に対して、画像強 調の利点のバランスを取らなければならないからである。ＣＴ画像の場合、画像 診断剤は、通常、１５０から２５０ｍｌという大用量を、１．５から２．５ｍｌ ／秒の速度で患者に投与することになる。現在市販されている薬剤をこの速度で 注入すると、悪心、頭痛、痙攣や、その他の不快なかつ危険な副作用を招くこと がある。したがって、画像診断剤を一個の標的器官ないし組織タイプに濃縮させ ることができるので、実質的小用量をより低速で調節的に注入すればよい組織特 異的搬送剤が必要とされる。用量が少なければ高価な動力インジェクターが不要 であるとともに、毒性や副作用の可能性を最小にするであろうことは言うまでも ない。 放射性治療剤輸送などのような治療目的のためには、特定の組織に狙いを定め 、放射性薬剤の周囲組織に対する破壊作用を抑さえることができたら有利であろ う。家系性高コレステロール血症、肝炎、または、ヘパトーマのような病気治療 のために遺伝子治療が盛んに議論されている。しかしながら、遺伝物質を特定組 織を標的として搬送できないために、あるいは、遺伝子の異常型と代替できるほ ど十分な量を標的に搬送できないために、異常組織に対する修正的遺伝物質の輸 送はしばしば失敗している。したがって、関係分野においては、遺伝子治療を施 すのに十分な濃度で遺伝物質を、組織に対して輸送することのできる搬送剤が要 求されている。 組織特異的輸送を実現するために従来既知の方法がいくつかあるが、それらに おいては、リポソーム、抗体結合複合体、および、搬送化合物の炭水化物誘導体 が利用されている。しかしながら、これら従来の搬送剤の多くは、輸送すべき部 分と生体受容性の複合体の形を取ることができないか、または、その複合体化し た部分を、画像撮影および／または治療に有効なほど十分な量として標的組織に 蓄積することができない。 肝臓臓器の画像診断のために、現在実行可能なもっとも正確で非侵襲的なＸ線 検査法の一つとして、水溶性、尿路撮影用造影剤を使用したＣＴがある。しかし ながら、この著名な方法で通常使用される造影剤にも、他の、既知の造影剤に見 られた典型的な限界がある。それは、例えば、大用量を投与しなければならない こと、生体内で非特異的に分布すること、肝臓中にきわめて短時間（＜２分）し か留まらないことである。そのため、直径約２ｃｍより小さい病変を検出する場 合、常に成功というわけにはいかない。既知の診断薬にはこのように重大な限界 があったために、癌の早期発見や治療が不可能であった。なぜなら、多くの転移 癌は、この方法の検出限界よりも小さいからである。 水溶性の尿路造影剤が、直径２ｃｍ未満の病変部を満足できる確度で検出でき ないのは、おそらくその一部は、本剤が血管から間質空間に急速に拡散してしま うために、正常肝組織と腫瘍の間のコントラストの差が急速に失われるためであ ろう。したがって、診断用の造影剤、または、その造影剤のための搬送剤であっ て、造影剤を、特定の標的組織、例えば、肝組織の細胞内空間に輸送し、それに よって、選択的視覚化を向上させ、さらには、ＣＴの検出限界を高めることので きる搬送剤に対しては需要がある。ＣＴのための肝臓用造影剤として、水溶性造 影剤に代わる候補がいくつか研究されている。その中には、例えば、Ｘ線不透過 リポソーム、ヨード添加澱粉粒子、パーフルオロオクチルブロミド（perfluoroc tylbromide）、イオジパミド（iodipamide）エチルエステル類、エチオ化油乳剤 （ＥＯＥ−１３）がある。これらの造影剤はすべてその性質上粒状であって、そ の大きさが、肝特異性を得るためには、主に、細網内皮系（ＲＥＳ）による封鎖 作用を介して行なわれなければならない大きさである。 リポソームは人工的に調製した脂質小胞で、内部に水溶液区画を持った単層ま たは複数の脂質二重層によって形成されるが、これは、その性質上粒状であり、 したがって、包含する薬剤をＲＥＳに輸送する能力を持っている。これまで研究 者たちは、リポソームに、イオン性や非イオン性の水溶性尿路撮影用造影剤ない し肝胆撮影用造影剤を負荷すること、または、臭化ホスファチジルコリンを二重 層膜内部に取り込ませようと試みてきた。しかしながら、造影剤が二重層から失 われることを防ぐため得られたリポソームを安定化することが大きな問題である ことが判明した。さらに、中性の親油性造影剤を二重層に挿入することは、膜礎 質に対する親油性造影剤の低溶解度、またリポソーム自体の負荷能力の小ささと いう制限がある。 モノ臭化パーフルオロカーボン類の内のいくつかは、動物において、造影剤と して有効であると評価されている。これらの内、もっとも一般的なものはパーフ ルオロクチルブロミドであるが、これは、肝臓、脾臓、その他の臓器の細網内皮 細胞中に濃縮することが明らかにされている。適当なＸ線不透性を得るには、長 期の滞留時間（数週から数か月）と大用量（５−１０ｇ／ｋｇ）が必要であるが 、これだけで、画像診断の目的でモノ臭化パーフルオロカーボン類をヒトに使用 する可能性はほとんどなくなるであろう。もっとも、小用量を標的器官に特定的 に輸送する手段が開発されれば別の話である。 前記の調査造影剤の内でもっとも有望なのはＥＯＥ−１３であって、これは、 アメリカにおいて動物とヒトで広範に調べられている。ＥＯＥ−１３は生理食塩 水中に懸濁させたヨウ化けし油（ヨウ素含量は３７重量％）乳剤であるが、従来 の水溶性尿路撮影用造影剤に比べて、肝・脾臓中の実体的病変部の検出に相当有 利であることが証明された。臨床診断効力の点で受容できるものであるにも拘わ らず、発熱、悪寒、血小板減少症、低血圧、呼吸低下のような副作用が頻発する ことが報告されている。さらに、ＥＯＥ−１３調剤の滅菌過程において、問題が 生ずる。上記の問題のために、ヒトに対するＥＯＥ−１３の使用は中断された。 近年、乳剤の粒径とマクロファージ活動の間に直接の関係があることが研究者 たちによって証明された。この研究者たちは、ＥＯＥ−１３を含む、三種のヨウ 化脂質乳剤について調べた。これらは、４００−２０００ｎｍの平均粒径を持っ ていた。彼らの観察によれば、クッパー細胞が著明に膨張し、これは類洞内皮の 傷害と一緒になると、類洞の鬱血を招いた。類洞の鬱血は、しばしば、マクロフ ァージを活性化し、毒性のメディエーターを放出させる。これが、比較的径の大 きい粒子調剤を投与した場合に見られる副作用の原因の一部である。これに基づ き、研究者たちは、けし油（リピオドールＵＦ、ラボラトワール・ギュベー、フ ランス−LipiodolUF,Laboratoire Guebet，France）から得た脂肪酸のヨウ化エ チルエステルを、卵黄リン脂質で乳化し、これによって、より径の小さいより粒 径の均一な調剤を得、イントライオドール（Intraiodol）（市販されていない。 これに関しては、例えば、Acta Radiologica,Vol.30,p.407-412 & 449-457,1989 を参照のこと）と名づけた。動物およびヒトで、イントライオドールについて得 られた初期の結果では、ＥＯＥ−１３で観察されたものに比べて副作用が有意に 減少した。しかしながら、イントライオドールも、従来技術に観察されたたくさ んの欠点をそのまま継承している。その欠点として、まず、リポソーム（粒状） の混入によってＲＥＳに輸送されてしまうために、また、径や組成のために、真 の特異性を発揮できないこと、および、長期保存・熱安定性を実現できないこと がある。さらに、ＣＴ不透性に必要なヨウ素が脂肪結合に付加されていることで 、これが細胞内安定性の低下をしめすことはよく知られている。 イントライオドールを始めとして、その他の同様の水中油型乳剤も、「キロミ クロン残渣様」とか「肝細胞特異的」と呼ばれているけれども、これらの薬剤の 相当程度が、肝細胞を含んでいない脾臓にも局在する。最初の受容体を介した過 程が飽和に達して、輸送がＲＥＳ細胞の方に変った場合を除き、真の肝細胞特異 的造影剤は実質的に脾臓やその他のＲＥＳ関連器官に局在するものではない。さ らに、真の肝細胞特異的造影剤は主に胆汁系を通じて排除されるものである。前 記の乳剤はいずれも、胆汁系クリアランステストでは、肝細胞特異性を証明して いない。 したがって、この分野においては、診断薬、治療薬、その他生物活性剤ないし 非活性剤搬送のための、造影性水中油型乳剤を含む標的特異的搬送剤ないし組成 物が強く求められている。 それに基づき、本発明の目的は、改良搬送剤を提供することである。すなわち 、造影剤のような親油性剤または、水溶性薬剤の親油性誘導体を標的組織の細胞 内空間に搬送するのに有効な改良搬送剤、特に標的選択性水中油型乳剤を提供す ることである。 本発明のもう一つの目的は、標的特異的搬送剤、特に肝細胞特異的水中油型乳 剤を提供することである。すなわち、径と生体内分布特性に関してキロミクロン 残渣様の乳剤である。 さらに、本発明のもう一つの目的は、標的特異的水中油型乳剤であるが、長期 保存と、熱に対してきわめて安定であるために加熱滅菌が可能である乳剤を提供 することである。 本発明のさらにもう一つの目的は、キロミクロン残渣様で、長期保存と熱に安 定で、実質的にリポソーム混入の見られない標的特異的水中油型乳剤の調製法を 提供することである。 発明の要約 本発明は、水中油型合成乳剤であって、生体内在性リポ蛋白と類似しており、 それによって、生体の自然の脂質輸送系を利用しようとするものであるが、これ により前記およびその他の目的が達成される。本発明の水中油型乳剤は、標的選 択性搬送剤として有用である。個別の実施態様において、この水中油型乳剤は、 キロミクロン残渣をシミュレートし、それによって、乳剤の脂質核、または、周 囲の単層のいずれかに挿入された親油性ないし両親媒性化合物を、受容体を介し た経路を経て肝細胞に選択的に輸送する。ここで用いる「受容体を介した」とは 、本発明の水中油型乳剤の代謝が、自然のキロミクロン残渣の取り込みと排出を そのままなぞることを意味する。 自然の脂質輸送系を簡単に要約すると、脂質は、血漿中を主に遊離脂肪酸、ト リグリセリド、コレステロールエステルの形で輸送される。遊離脂肪酸は、血漿 アルブミンとの複合体として輸送されるが、一方トリグリセリドとコレステロー ルエステルは、血漿リポ蛋白の親油性核中に取り込まれて運ばれる。血漿リポ蛋 白の表面は、リン脂質、コレステロール、および、アポリポ蛋白という名で呼ば れる特定の蛋白から成る単分子層でできている。この蛋白は、特定の標的におい て特定の脂質の出入りを調節している。食物由来のコレステロールとトリグリセ リドは、小腸で吸収され、キロミクロンに取り込まれ、次いでこのキロミクロン が胸管に分泌されてその中を運ばれて最後に循環系に達する。一旦循環系に入る と、循環する高密度リポ蛋白のうちからアポ蛋白Ｃ−IIがキロミクロンに急速に 積換えられるされる。一旦アポ蛋白Ｃ−IIと一緒になると、このキロミクロンは いくつかの末梢組織において、例えば、脂肪、筋（骨格筋と心筋）や肺のような 組織の毛細血管床で、リポ蛋白リパーゼの作用を受ける。リポ蛋白リパーゼは核 のトリグリセリドの大部分を加水分解して、グリセロールと遊離脂肪酸に変える が、その生成物の大部分は組織に取り込まれ、貯蔵または酸化される。残余のト リグリセリドを欠いたキロミクロンは、キロミクロン残渣と呼ばれるが、これは もはやトリグリセリドをあまり含有せず、主要脂質成分としてはコレステロール エステルを、主なアポ蛋白成分としてはアポ蛋白Ｂ（APO Ｂ）とアポ蛋白Ｅ（Ap o Ｅ）を含有するようになる。 キロミクロン残渣は、肝臓によって、Apo ＢとApo Ｅを認識する受容体を介し た過程を通じて、循環系から急速に排除される。肝臓外組織においてはリポ蛋白 リパーゼが、血漿トリグリセリドの加水分解にあずかる酵素であるが、肝臓での トリグリセリドの加水分解とその残渣の肝細胞による取り込みには肝臓トリグリ セリドリパーゼがあずかる。肝臓による循環系からのキロミクロン残渣の排除は 、クッパー細胞（非実質細胞）ではなく、主に肝細胞（実質細胞）によって行な われる。 したがって、本発明の水中油型合成乳剤は、Apo ＢやApo Ｅのような血漿アポ 蛋白と結合するよう設計されたものであり、これによって「肝細胞選択的」とな るようにしたものである。本発明の水中油型乳剤は、「肝細胞特異的」に対し、 「肝細胞選択的」と名づけることにする。なぜなら、前者は、定義なしにこの分 野で従来用いられているからである。 しかしながら、Apo Ｅ結合を実現するには、油相粒子は適正な径と組成を持っ ていなければならず、また、滅菌後、および・または、保存期間を通じて適正な 径を保持していなければならない。本発明によれば、油相粒子の平均粒径は５０ から２００ｎｍであり（重み付き数）、狭い粒径分布を持つ（５０から３００ｎ ｍ）。すなわち、この分布において、この範囲から外れた直径を有する（すなわ ち、径が３００ｎｍを越える）粒子は２％以下である。この乳剤において直径１ μｍを越える粒子が検出されてはならない。さらに、乳剤にはリポソーム混入し ていてはならない。 上記に加えて、この組成は、重量にして５％までのステロール、好ましくはコ レステロールを含んでいなければならない。これは乳剤を安定化させ、Apo Ｅと の結合を容易にするためであるが、ヨウ化トリグリセリドの肝細胞選択的輸送の ためには、０．４から０．５％（w/v、重量／容量比）の範囲にあることが望ま しい。本発明の好ましい実施態様によれば、乳化剤に対するコレステロールのモ ル比が、粒径および粒子の形状安定に直接影響することが判明した。なお、乳化 剤は、リン脂質を用いるが、天然のものでも、合成でも、半合成でもどれでもよ い。キロミクロン残渣を上手に模倣する乳剤を得るためには、リン脂質に対する コレステロールのモル比は、できれば０．０５から０．７０の範囲にあることが 好ましく、特に、ヨウ化トリグリセリドの肝細胞選択的輸送のためには０．４０ であることが望ましい。 ここで用いる「肝細胞選択性」とは、注入後３０分時において、％用量／臓器 値（下記の実施例２参照）と、胆汁クリアランスと排除曲線（第１１図、および 、１３−１６図参照）に基づいて、肝臓と脾臓の取り込み量比を求めた時、その 比が＞４：１になった時に実証されるものである。肝細胞、および、それを取り 巻 く類洞空間の解剖的特徴を記載する科学文献総体を勘案すれば、約３００ｎｍを 越える径を持つ粒子は、肝細胞の表面に達することができない。肝細胞選択的搬 送剤は、主に化合物を標的組織の細胞内に輸送するものであって、細胞表面（細 胞外）や、細胞間の類洞に非特異的に組成物を輸送することはほとんどない（第 １７、１８図参照）。 本発明を組成面からみると、本発明の熱安定性、肝細胞選択的、水中油型合成 乳剤は下記の一般処方を有する。 １．５０％（w/v）以下の、親油性核成分、 ２．１０％以下の乳化剤（w/v）、 ３．５％以下のコレステロール（w/v）、 ４．５％以下の浸透圧調節剤（w/v）、 ５．必要に応じて、５％以下の抗酸化剤（w/v）、および ６．滅菌蒸留水を最終容量まで加える。 本発明の水中油型合成乳剤の親油性核に取り込まれて肝細胞に輸送される薬剤 のタイプは、親油性および／または両親媒性化合物であって、この化合物は生物 活性があっても不活性であってもよい。親油性核成分は乳剤の最大で５０％を占 めるが、約１０％と３０％の間であることが望ましい。この親油性核は、水中油 型乳剤の親油性核に局在できる製薬学的に不活性な非極性液体からなり、製薬学 的に受容可能な油脂ならば何でもよく、天然のものでも合成のものでも半合成の ものでもよい。特定の例としては、トリグリセリド類、実例としては、高純度の 天然トリグリセリドであるトリオレイン（シグマ化学、セントルイス、ミズーリ 州、から入手可能。Sigma Chemical Company,St.Louis,Mo.）、または、動物性 ・植物性の油脂、例えば、大豆油、サフラワー油、綿実油、魚油などが挙げられ るが、これらに限定されるものではない。 その他の好ましい実施態様として親油性核は、診断または治療のために使用で きる親油性活性剤または両親媒性活性剤を含む。診断目的の薬剤としては、ハロ ゲンが安定元素または放射性同位元素のどちらであってもよいハロゲン化トリグ リセリド、例えば、ヨウ化またはフッ化トリグリセリドが挙げられるが、これら に限定されるものではない。 特に好ましい実施態様としては、親油性核は少なくとも１種の薬理学的に不活 性な油と、生体内で活性ないし不活性の薬剤をモル比で０．３から２の範囲で、 さらに好ましくは１：１の割合で含む。できれば各核成分の親油性は脂質成分の 適正な混合を保証する程度であることがよい。 ヨウ化物の実施態様において、この分野において既知のヨウ素含有脂質類を使 用できる。このような脂質類は、グリセロールまたはアルキルエステルの形でヨ ウ化脂肪酸を含む。しかしながら、特に好ましい実施態様においては、ヨウ素含 有脂質類は純度のわかった合成芳香族化合物で、ヨウ素結合を分解しようとする 生体内作用に対して安定なものである。本発明を実施する上において有用な、放 射性・非放射性ハロゲン化トリグリセリドの実例としては、１９８９年１０月１ ０日発行米国特許Ｎｏ．４，８７３，０７５、１９９０年９月１８日発行米国特 許Ｎｏ．４，９５７，７２９、および、１９９２年３月３日発行米国特許Ｎｏ． ５，０９３，０４３記載のタイプのヨウ化トリグリセリドが挙げられるが、これ らに限定されるものではない。ヨウ化トリグリセリドの実例としては、２−オレ オイルグリセロール−１，３−ビス［７−（３−アミノ−２，４，６−トリヨー ドフェニル）ヘプタノエート］（2-oleoylglycerol-1,3-bis[7-（3-amino-2,4,6 -triiodophenyl）hepatanoate]（ＤＨＯＧ）、および、２−オレオイルグリセロ ール−１，３−ビス［４−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）ブ タノエート］（2-oleoylglycerol-1,3-bis[4-（3- amino-2,4,6-triiodophenyl ）butanoate]（ＤＢＯＧ）が挙げられる。 臨床的には、現在市販の走査装置でもっとも頻繁に使用されるヨウ素放射性同 位元素は¹²²Ｉ、¹²³Ｉ、¹²⁵Ｉおよび¹³¹Ｉである。もちろん、この分野において はよく知られているように、¹³¹Ｉ標識のトリグリセリドを治療目的に使用して も よい。ヨウ素のどのような放射性同位元素も、本発明の考慮の中にある。全ヨウ 素同位元素のリストについては、「化学・物理学ハンドブック」Ｂ−３０３−Ｂ −３０５の頁、３８版、ＣＲＣプレス、１９７７−１９７８（Handbook of Chem istry and Physics，38th edition，CRC Press，1977-1978）に記載されている 。なお、¹²⁷Ｉは天然に見られる安定同位元素であり、「放射性」とは見なされ ない。 フッ化物の実施態様として、特定の実例を挙げるならば、前述のヨウ化トリグ リセリドに類似の、安定ないし放射性（¹⁹Ｆ）フッ化トリグリセリド、例えば、 グリセリル−２−オレオイル−１，３−ビス（トリフルオロメチル）フェニルア セテート（glyceryl-2-oleoyl-1,3-bis（trifluoromethyl）phenyl acetate）が ある。本発明のまた別の態様として、フッ素含有脂質類は、パーフルオロ−ｔ− ブチル含有脂肪酸化合物のエステル類またはトリグリセリド類、例えば、米国特 許Ｎｏ．５，１１６，５９９およびＮｏ．５，２３４，６８０に記載されている もの、実例を挙げれば、７，７，７−トリフルオロ−６，６−ビス（トリフルオ ロメチル）−ヘプタン酸（7,7,7-trifluoro-6,6-bis(trifluoromethyl)-hepaton ic acid）や、８，８，８−トリフルオロ−７，７−ビス（トリフルオロメチル ）−オクタン酸（8,8,8-trifluoro-7,7-bis(trifluoromethyl)-octanoic acid） がある。もちろん、これらの実例は、本発明を実行する際に使用するのが相応し い親油性または両親媒性フッ化化合物の多くの特定の実例の中から、単に例示の ために挙げたものであって、いかなる点においても排除的限定的意味を持つもの ではない。 本発明のさらに別の態様として、生物活性剤は、臭素添加化合物、例えば、脂 肪酸の臭化エチルエステル類、または、モノ臭化パーフルオロカーボン類であっ てもよい。 本発明の、水中油型合成乳剤の親油性核に含まれる可能性のある治療薬として は、オリゴヌクレオチドや核酸の親油性誘導体、または、抗癌剤の親油性および ／または両親媒性誘導体、例えば、メトトレキセート、マイトマイシンＣ、フル オロデオキシウリジン、または、ドキソルビシンのエステル類がある。 非極性親油性核を取り巻く単分子層は、約１０％以下の極性脂質単分子成分か らなるが、これは乳化剤でもよい。本発明の実施に使用するには、天然、合成、 または、半合成のリン脂質が好適である。従来の生物活性剤搬送用の脂質乳剤に おいては、天然のリン脂質、例えば、大豆レシチンや卵ホスファチジルコリン（ 例えば、イントラリピド）が用いられている。本発明の好ましい実施態様におい ては乳剤成分は起源、純度、相対濃度のわかった合成、半合成および／または、 天然の成分である。従来方式の乳剤においては、卵レシチン（リン脂質の混合物 ）、および・または、未精製油（綿実、ケシなど）を不適正に使用すると、変動 しやすい再現性のない組成物ができることがある。 特に好ましい態様においては、ジオレオイルホスファチジルコリン（dioleoyl phosphatidylcholine，ＤＯＰＣ）を、乳化剤、すなわち、単分子層表面活性剤 として用いる。ＤＯＰＣは、半合成の化学的に定義された高純度のリン脂質乳化 剤である（アバンティ・ポーラー・リピド、アラバスター、アラバマ州、Avanti Polar Lipids，Alabaster，AL から入手できる）。もちろん、非経口投与に使 用できる他の表面活性剤をもって、この極性液体単分子層成分の全部または一部 を代替してもよい。天然のリン脂質が有利である。なぜなら、これらのリン脂質 は、アポリポ蛋白と相互作用を持つ可能性が高く、かつ、適当な転移温度を持っ ている、すなわち、生理的温度ではこれらのリン脂質は液状だからである。 乳剤のオスモル濃度は、５％以下の浸透圧調節剤、例えば、ＵＳＰグリセロー ルやグルコースによって４００−５００mOsm/kg に調節される。本発明の水中油 型乳剤は、血液とほぼ等張の搬送剤を提供する。これは、従来もっともよく使用 されるイオン性造影剤と好対照をなす。すなわち、従来の造影剤は血液よりも３ から５倍もオスモル濃度が高いので、注入部位に痛みや組織傷害を引き起こすこ とがあった。 この乳剤処方の中の残余のものは、バルク相、すなわち、水相から成る。本発 明の好ましい実施態様を実行する場合、水相は、非経口的投与に相応しい等級の 滅菌水である。例えば0.9％生理食塩水を用て、水相に食塩（NaCl）が含まれて いると、得られる乳剤の平均粒径は、食塩無添加乳剤のものの２倍もの大きさに なる。さらに、処方中に食塩が含まれていると、オートクレーブ殺菌後の乳剤の 時間的安定性に悪影響を及ぼすばかりか、本乳剤が平均粒径に大きな変化を起こ すことなくオートクレーブ殺菌に耐えることができるという能力に悪影響を及ぼ す。 NaClに加えてさらに非経口乳剤処方の場合しばしばｐＨ調節剤が用いられる。 例えば、NaOHや、大抵の水性バッファーのナトリウム塩がそれであるが、これら は、バルク相に過量のナトリウム・イオンを導入する。これらの薬剤は、粒径、 安定性および耐オートクレーブ性に対し有害作用をおよぼすことが判明している 。 その他の通例の添加物、例えば抗酸化剤類、バッファー類、防腐剤類、粘度調 節剤類などを組成の中に含めてもよい。特に、５％w/v 以下の抗酸化剤、例えば 、α−トコフェロール、フラビノイド類、ＢＨＴやＢＨＡの添加は望ましい。し かしながら、添加剤は、この乳剤の物理的特性、例えば、粒径、長期保存安定性 や熱安定性を損なうものであってはならない。 本発明の、水中油型乳剤を処方するのに用いられる方法は、小粒径、径の均一 分布、リポソーム混入のないことを実現する上で重要である。これらの性質は皆 、肝細胞選択性と熱安定性に貢献する。 本発明の製法に関わる方法によれば、非極性核脂質、極性脂質乳化剤、および 、その他の親油性成分（生物活性剤または不活性剤等）を含む水中油型乳剤の親 油性成分を混合し、予備混合脂質相を形成する。水溶液成分を混合してからこれ を先の予備混合脂質相に加える。予備混合脂質相と水溶液成分とをホモジネート し、水中油型粗製乳剤を形成する。この水中油型粗製乳剤を超高エネルギー乳化 処理にかけ、油相の平均粒径が５０から２００ｎｍで、粒子の９８％以上が３０ ０ｎｍ未満である水中油型乳剤を形成する。本発明の好ましい実施態様において は、この水中油型微細乳剤を次にフィルターでろ過する。 本発明の好ましい製法においては、脂質成分は最初に高速ミキサー、例えば、 ポリトロンホモジナイザー（Polytron homogenizer）（キネマチカ社、ルツェル ン、スイス、Kinematica GmbH，Lucerne，Switzerland）、または、ウルトラツ ーラックス（Ultra Turrax）、（イカ・ワークス、シンシナチ、オハイオ州、IK A-Works,Cincinati,OH）を用いて混合ないしホモジネートする。操作は１２，５ ００ｒｐｍ、５５℃で、少なくとも５分間行なう。次に、水溶液成分を、この本 格混合前の脂質成分に加え、同一ないし類似条件で、高速混合または２５，００ ０ｒｐｍでホモジネートして乳化前処理し粗製乳剤を形成する。最終処理は超高 エネルギー混合装置、例えば、ミクロフルイダイザー（Microfluidizer）高速ホ モジナイザー（モデル１１０Ｓ、ミクロフルイズ社、ニュートン、マサチューセ ッツ州、Model 110S、Microfluids Corp.，Newton，MA、米国特許Ｎｏ．４，５ ３３，２５４参照）、または、それと等価の装置、例えば、エマルジフレックス （Emulsiflex）（アベスチン社、オタワ、オンタリオ州、カナダ、Avestin Inc. ，Ottawa，Onatario，Canada）や、マントン−ゴーリン（Manton-Gaulin）（Ａ ＰＶゴーリン・ラニー、セント・ポール、APV Gaulin Rannie，St.Paul，MN）を 用いて行なう。操作は、再循環モードで、３０−６０℃で、１０，０００から３ ０，０００ｐｓｉ、好ましくは、約１２，５００−１８，２００ｐｓｉで、約２ ０分以下で行なう。処理後、乳剤を滅菌０．４５μｍ フィルターと０．２２μ ｍフィルターを連続的に通過させる。この連続濾過により大きい粒子を除去する と共に、乳剤を部分的に滅菌する。 高エネルギー混合の際の温度は例示的なものであって、実際には生物活性剤に 相応しいものを選ばなければならない。言い換えればこの温度は生物活性剤の転 移点あるいは融点温度以上でなければならない。一方、上限はその温度で組成中 の何らかの成分の変性または分解が起こるかどうかで決められる。 超高圧ホモジェナイザーを使用すると粒径分布の狭い小粒径が得られるので、 得られる乳剤はキロミクロン残渣にほぼ類似する。乳剤形成のために使用される 従来の装置、例えば、ホモジェナイザー、ソニケーター、ミルおよび震盪装置は 、脂質成分に剪断力を与えるが、超高エネルギー混合装置では乳剤成分に圧力を かけ、小孔を無理矢理通過させることによって粒径を下げる。粒径分布は、ニコ ンプ３７０ダイナミック・レーザー光線散乱オートコリレーター（Nicomp 370 D ynamic Laser Light Scattering Autocorrelator）（ニコンプ・パーティクル・ サイジング・システムズ社、サンタ・バーバラ、カリフォルニア州、Nicomp Par ticle Sizing Systems，Santa Barbara，CA）、または、同様の装置を用いて測 定することができる。本発明の実施に好適な脂質乳剤は、その平均粒径が、ニコ ンプ個数計量法による測定で、約３００ｎｍ未満、できれば５０から２００ｎｍ の範囲にあることが好ましい。粒子は、狭い粒径分布を持ち、粒子の約９８％が ５０から３００ｎｍの範囲になければならない。１μｍを越える径を持つ粒子が 検出されてはならない。 粒径分布は、最低でも９０日の保存期間の間安定でなければならない。ここで 「保存安定性」というのは、乳剤粒径の平均径が、９０日の処方後期間において 、１５％を越える変化を示さない、またはその保存期間を過ぎた場合でも２０％ を越える変化を示さないということである。乳剤は室温で２年以下の期間保存で きる。理想的な条件としては、乳剤を４から８℃で窒素雰囲気下にできれば光を 遮蔽して保存する。 好ましい実施態様では、乳剤は、例えば、熱、または冷濾過によって滅菌可能 である。１２１℃の加圧蒸気に２０分間暴露するような標準もしくは間欠オート クレーブ法が、乳剤の粒径分布に悪影響を及ぼしてはならない。ここで用いる「 熱安定性」という用語は、乳剤が標準の加熱滅菌（例えば、１２１℃の蒸気に２ ０分暴露する）を平均粒径分布に大きな変化をこうむらずに耐えることのできる 能力を意味する。本発明の組成・処方工程の重要な特性は、乳剤がオートクレー ブ後も、アポＥに結合する能力を保持しているということである。したがって本 発明の微小乳剤を定義するためにここで用いる「熱安定性」という用語は、加 熱滅菌後のアポＥに対する結合能力を含む（第３表参照）。 本発明の使用法においては、本発明の造影剤を含む水中油型乳剤は哺乳動物に 投与され、その哺乳動物はその乳剤が標的部位に到達した後Ｘ線コンピュータ断 層撮影にかけられる。また別の使用法として他の診断法、例えば、陽子磁気共鳴 画像法（ＭＲＩ）、¹⁹Ｆ−ＭＲＩ、または、シンチグラフィーに好適な生物活性 剤を含む適当な水中油型乳剤を、画像撮影のためおよび／または検出のために投 与してもよい。さらにまた別の使用法として、¹³¹Ｉ含有トリグリセリドのよう な治療薬を、本発明の水中油型乳剤に載せて標的部位に輸送してもよい。 図面の簡単な説明 付属の図面と一緒に下記の詳細な説明を読むと本発明を理解する助けになる。 その図面は、 第１図は、本発明の水中油型乳剤の、油相粒子の模式図である。 第２図は、一連のフッ化ないしヨウ化トリグリセリド、特に、１，３−ジ置換 トリアシルグリセロール類の製造スキームの例である。この化合物は本発明を実 施するのに好適である。 第３図は、本発明の乳剤について、ｎｍで表わした油相粒径の典型的な分布を 表わすグラフである。粒径は、ニコンプ重み付き個数分析法で測定した。 第４図は、本発明の乳剤について、ｎｍで表わした油相粒径の典型的な分布を 表わすグラフである。粒径は、ニコンプ重み付き強度分析法で測定した。 第５図は、微小乳剤について平均粒径（ｎｍ）を表わしたグラフであるが、こ の場合、乳剤は１０％（w/v）核脂質（５％トリオレインと５％ヨウ化トリグリ セリド（ＤＨＯＧ）、２．４％（w/v）リン脂質（ＤＰＯＣ）、および、様々な 量のコレステロールを含む）を含むので、リン脂質に対するコレステロールのモ ル比が０．３から０．６９の範囲にある。 第６図は、第５図に示した微小乳剤でリン脂質に対するコレステロールのモル 比が０．４であるものについて、平均粒径（ｎｍ）を製造後の日数の関数として 表わしたグラフである。 第７図は、第５図に示した微小乳剤で、平均粒径（ｎｍ）をオートクレーブに よる蒸気滅菌前後の時間の関数として表わしたグラフである。 第８図は、ＣＴ造影剤投与後６０分時における、腫瘍ラット（モリス・ヘパト ーマ７７７７）軸性ＣＴ画像（スライス厚３ｍｍ）である。造影剤は、本発明に よる水中油型乳剤である。 第９図は、ＣＴ造影剤投与後１時間時における、腫瘍ラット（モリス・ヘパト ーマ７７７７）軸性ＣＴ画像（スライス厚３ｍｍ）である。造影剤は、本発明に よる水中油型乳剤である。 第１０図は、本発明の放射性ヨウ化水中油型乳剤注入後の組織内の濃度（％投 与用量／臓器）を注入後時間の関数として表わした組織内の分布プロフィルのグ ラフであって、（■）は肝臓、（○）は血漿のものである。 第１１図は、本発明の放射性ヨウ化水中油型乳剤注入後の糞・尿による放射能 の累積排除を投与用量の％として表わし、これを注入後の時間（時間）の関数と して表わしたグラフである。 第１２図は、本発明の放射性ヨウ化水中油型乳剤のボーラス静注後において、 肝臓のＣＴ画像強度を、ハウンスフィールド単位（Hounsfield Units）（ＨＵ） による画像強度として表わし、これを、注入後の経過時間（時間）の関数として 表わしたグラフである。 第１３−１６図は、本発明による水中油型乳剤であるＣＴ造影剤投与後２４時 間時において、イヌの肝胆系について得たＣＴ画像である。 第１７および１８図は、搬送剤（コントロール）または本発明の放射性ヨウ化 トリグリセリド含有水中油型乳剤投与後３時間時における、コントロール動物お よび試験動物の肝臓組織のオートラジオグラフィー顕微鏡図である。 第１９図は、本発明の放射性ヨウ化水中油型乳剤の注入後において、放射性ヨ ウ化水中油型乳剤および／またはその代謝産物を、ラットの胆管と尿管に直接挿 入したカニューレを通じて採取し、胆管排出（■）、尿管排出（▼）による累積 排出（％用量）として表わし、かつ、胆汁流量（●）（ml/min）を求め、それら を、該乳剤注入後の時間（分）の関数として表わしたグラフである。 発明の詳細な説明 第１図は、本発明の油相粒子１０の模式図である。親油性脂質核１２は、乳化 剤とコレステロール１３から成る単分子層１１によって取り囲まれている。脂質 核は、薬理学的に不活性な脂肪または油、例えばトリグリセリド（例として、ト リオレイン）、および／または、親油性ないし両親媒性、生物活性ないし非活性 薬剤、例えば、放射線剤を含む。単分子層の極性部分（球体１４、例えば、燐脂 質乳化剤の極性頭部）は、基質バルクを形成する水相（特に図示せず）に面して おり、一方、単分子層の非極性部分（尾部１５）は、脂質核の方に向いている。 本発明の原理にそって輸送される、純粋親油性化合物は、単分子層下部の脂質粒 子の核の中に完全に仕舞いこまれている。一方、親油性成分と疎水性成分の両方 を持つ両親媒性化合物は、核と単分子層の両方と相互作用を持つことによって粒 子中に存在する。例えば、そのような両親媒性薬剤は、長い親油性尾部を持ち、 それによって、疎水性部分を粒子につなぎ止めていることもあろう。この親油性 尾部は、単分子層の燐脂質／コレステロール成分の親油性尾部と相互に交じり合 ったり、または、核の中に伸びることもあろう。第１図にはまた、大きな非晶構 造１６が示してある。これは、アポリポ蛋白を表わす。 下記の特定実施例において、本発明の原理に基づいて調製できる、たくさんの 水中油型乳剤の内からいくつかを例示する。 ヨウ素態様： 本発明の実施に特に好適な、放射性ないし非放射性ポリ・ハロゲン化トリグリ セリドの実例は、１９８９年１０月１０日発行米国特許Ｎｏ．４，８７３，０７ ５、１９９０年９月１８日発行米国特許Ｎｏ．４，９５７，７２９、および、１ ９９２年３月３日発行米国特許Ｎｏ．５，０９３，０４３に記載されている。こ こに引用することによって、その開示全体をここに含める。前記特許の、ヨウ化 アリール脂肪族トリグリセリド類似体は、下記のトリグリセリドの骨格を持つ。 すなわち、その骨格は３−置換 ２，４，６−トリヨードフェニル脂肪鎖（3-su bstituted 2,4,6-triiodophenyl aliphatic chain）またはモノ・ヨウ素フェニ ル脂肪鎖で１，３−ジ置換または１，２，３−トリ置換されている。好ましい実 施態様では、脂肪族鎖はすべて、このトリグリセリド骨格のヨウ化部分に結合し ようと、開放位置にあろうと、天然脂肪酸に見られる型の、飽和ないし不飽和脂 肪族炭化水素鎖である。天然の脂肪酸としては、約４−２０個の炭素を含むもの であり、例えば、パルミチン酸（１６）、パルミトレイン酸（１６：１）、オレ イン酸（１８：１）、リノレイン酸（１８：２）、アラキドン酸（２０：４）な どがある。 個々の実例としては、次のものがあるが、それらに限定されるものではない。 すなわち、グリセリル−２−パルミトイル−１，３−ジ−（３−アミノ−２，４ ，６−トリヨードフェニル）イオパノエートグリセリル−２−パルミトイル−１ ，３−ジ−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）ドデカノエート（ glyceryl-2-palmitoyl-1,3-di-(3-amino-2,4,6-triiodophenyl)iopanoateglycer yl-2-palmitoyl-1,3-di-(3-amino-2,4,6-triiodophenyl)dodecanoate）、グリセ リル−２−パルミトイル−１，３−ジ−（３−アミノ−２，４，６−トリヨード フェニル）アセテート（glyceryl-2-palmitoyl-1,3-di-(3-amino-2,4,6-triiodo phenyl)acetate）、グリセリル−２−パルミトイル−１，３−ジ−（３−アミノ −２，４，６−トリヨードフェニル）プロピオネート（glyceryl-2-palmitoyl-1 ,3-di-(3-amino-2,4,6-triiodophenyl)propionate）、グリセリル−１，２，３ −トリイオパノエート（glyceryl-1,2,3-triiopanoate）、グリセリル−１，２ ，３−トリ−１２−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）ドデカノ エ ート、グリセリル−１，３−ジ−１７−（３−アミノ−２，４，６−トリヨード フェニル）ヘプタデカノエート、グリセリル−１，２，３−トリ−３−（３−ア ミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）プロピオネート、グリセリロール−２ −パルミトイル−１，３−ジ−１５−（ｐ−ヨードフェニル）ペンタデカノエー ト（glyceryl-1,2,3-tri-12-(3-amino-2,4,6-triiodophenyl)dodecanoateglycer yl-1,2,3-tri-3-(3-amino-2,4,6- triiodophenyl)propionateglycerol-2-palmit oyl-1,3-di-15-(p-iodophenyl)pentadecanoate）、グリセリル−２−オレオイル −１，３−ジ−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）−ブチレート （glyceryl-2-oleoyl-1,3-di-(3-amino-2,4,6-triiodophenyl)butylate）、グリ セリル−２−オレオイル−１，３−ジ−（３−アミノ−２，４，６−トリヨード フェニル）−ペンタノエート、（glyceryl-2-oleoyl-1,3-di-(3-amino-2,4,6-tr iiodophenyl)pentanoate）、グリセリル−２−オレオイル−１，３−ジ−（３− アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）−ヘキサノエート（glyceryl-2-ole oyl-1,3-di-(3-amino-2,4,6-triiodophenyl)hexanoate）、グリセリル−２−オ レオイル−１，３−ジ−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）−オ クタノエート（glyceryl-2-oleoyl-1,3-di-(3-amino-2,4,6-triiodophenyl)octa noate）、グリセリル−２−オレオイル−１，３−ジ−（３−アミノ−２，４， ６−トリヨードフェニル）−ヘプタノエート（glyceryl-2-oleoyl-1,3-di-(3-am ino-2,4,6-triiodophenyl)heptanoate）、などである。 ここで報告する実験では、ヨウ化トリグリセリドは、この分野で既知の方法に したがって、合成後、ピバリン酸溶解物中で放射性同位元素置換法を用い、１２ ５１によって放射化した。もちろん、ヨウ化トリグリセリド類の放射化、または 、その合成経路における中間産物の一つの放射化は、その分野に習熟した人にと っては既知の、様々なやり方で実行することができる。実施例１： 下記の一般式を持つ、一連のヨウ化トリグリセリド類、特に、表１において化 合物１−７と特定した１，３−二置換トリアシルグリセロール類を、第２図に示 す調製設計に基づいて合成した。 第２図に、本発明の実施に好適な、一連のヨウ化ないしフッ化トリグリセリド 、 特に１，３−二置換トリアシルグリセロール（化合物２２）の、一般的反応設計 が示してある。実施例１の実際例では、化合物２２は、２−オレオイルグリセロ ール−１，３−ビス−［３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）アルカ ノエート類であって、これは、表１では化合物１−７と命名されているものであ る。これは、下記のように、２−モノオレイン（化合物２１）を、対応するω− （３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）アルカン酸（ω-(3-amino-2, 4,6-triiodophenyl)alkanoic acid）（化合物２０）の２当量と結合させて、ジ シクロヘキシルカルボジイミド／４−ジメチルアミノピリジン（ＤＣＣ／ＤＭＡ Ｐ）の介在の下で合成した。ω−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）アルカン酸の調製： ω−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）アルカン酸（化合物２ ０）の合成は、既存の文献法（例えば、Weichert,et al.,J.Med.Chem.，Vol.29, p.1674とp.2457(1986)参照）と同様のやり方で行なった。イオパノ酸は市販され ており、シーテーシー・オーガニックス、アトランタ、ジョージャ州（CTC Orga nics,Atlanta,GA）から購入した。２−オレオイルグリセロール−１，３−ビス−［３−アミノ−２，４，６−トリ ヨードフェニル）アルカノエートの調製： ２−モノオレイン（１，２，３−トリヒドロキシプロパン ２−オレエート、 １．０当量）、ω−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）アルカン 酸（２．０５−２．１当量）、および、触媒量のＤＭＡＰ（０．１当量）を、無 水CH₂Cl₂（アルコール１mmolに対し５ｍｌ）中に投じて急速に撹拌し懸濁させ、 これを、ＤＣＣ（酸に対して１．１当量）で処理した。得られた混合物を、N₂雰 囲気下室温で一晩撹拌し、CH₂Cl₂で希釈し、濾過してジシクロヘキシル尿素の沈 殿を取り除いた。瀘液を０．５N HCl、飽和 NaHCO₃水溶液、H₂O で洗い、乾燥し た（MgSO₄）。溶媒を減圧蒸発し、残留をカラム・クロマトで精製して、所望の トリアシルグリセロール類を得た。化合物１：２−オレオイルグリセロール−１，３−ビス［２−（３−アミノ−２ ，４，６−トリヨードフェニル）アセテート］ 前記の方法にしたがって、２−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニ ル）酢酸（１．５０ｇ、２．８mmol）、２−モノオレイン（４８１ｍｇ、１．３ ５mmol）、および、ＤＭＡＰ（３７ｍｇ）を無水CH₂Cl₂（２０ｍｌ）に懸濁した 混合物をＤＣＣ（６３５ｍｇ、３．１mmol）で処理すると、固体残留物（１．５ ６ｇ）が得られ、これを、シリカゲル（４．５×３０ｃｍ）とヘキサン／EtOAc ／CHCl₃（３５：１０：５）溶出によるカラム・クロマトで精製し、化合物１を 得た。これは、結晶化の難しいわずかに黄色を帯びた油状体であった。収量６０ ０ｍｇ（３２％）。ＩＲ（CHCl₃）３４３５、３３２５（アミン）、２９００、 ２８３０（脂肪族 CH）、１７３０（エステル C=0）ｃｍ^-1、¹H NMR（２７０MHz 、CDCl₃）、８．０５（s、2H、アリール 5-H's）、５．４−５．２（m、3H、CH= CH、グリセロール 2-H）、４．８０（s、4H、NH₂）、４．３２（dd、2H、グリセ ロール OCH_AH_BCH(O)CH_AH_BO）、４．２４（s、4H、PhCH₂'s）、４．１５（dd、2H 、グリセロール OCH_AH_BCH(O)CH_AH_BO）、２．３０（m、6H、CH₂CO₂および =CHCH₂ 's）、２．０−１．０（m、22H、CH₂エンベロープ）、０．８８（t、3H、CH₃） 。分析（C₃₇H₄₈O₆N₂I₆）C、H．化合物２：２−オレオイルグリセロール−１，３−ビス［３−（３−アミノ−２ ，４，６−トリヨードフェニル）プロピオネート］ 前記の方法にしたがって、３−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニ ル）プロピオン酸（１．１６ｇ、２．１mmol）、２−モノオレイン（３５６ｍｇ 、１．０mmol）、および、ＤＭＡＰ（２４ｍｇ）を無水CH₂Cl₂（１５ｍｌ）に懸 濁した混合物をＤＣＣ（４４４ｍｇ、２．１５mmol）で処理すると、残留物（１ ．５０ｇ）が得られ、これを、シリカゲル（４．５×３０ｃｍ）とヘキサン／Et OAc／CHCl₃（１６：２：１）溶出によるカラム・クロマトで精製し、化合物２を 得た。これは、結晶化の難しいわずかに黄色を帯びた油状体であった。収量１． ３ ０ｇ（９２％）。ＩＲ（CHCl₃）３４４０、３３３０（アミン）、２９０５、２ ８３０（脂肪族 CH）、１７３２（エステル C=0）ｃｍ^-1、¹H NMR（２７０MHz、 CDCl₃）８．０５（s、2H、アリール 5-H's）、５．４−５．２（m、3H、CH=CH、 グリセロール2-H）、４．８３（s、4H、NH₂'s）、４．３４（dd、2H、グリセロ ール OCH_AH_BCH(O)CH_AH_BO）、４．１５（dd、2H、グリセロール OCH_AH_BCH(O)CH_AH_B O）、３．３８（dt、4H、PhCH₂'s）、２．５５（dt、4H、OC(O)CH₂'s）、２． ３５（t、6H、オレオイル CH₂CO₂および =CHCH₂'s）、１．９９（pst、4H、CH₂' s）、１．２９（m、22H、CH₂エンベロープ）、０．８８（t、3H、CH₃）。分析（ C₃₉H₅₂O₆N₂I₆）C、H．化合物３：２−オレオイルグリセロール−１，３−ビス［イオパノエート］ 前記の方法にしたがって、イオパノ酸（８．４１ｇ、１４．７mmol）、２−モ ノオレイン（２．５０ｇ、７．０mmol）、および、ＤＭＡＰ（１７０ｍｇ）を無 水 CH₂Cl₂（７０ｍｌ）に懸濁したものにＤＣＣ（３．３３ｇ、１６．０mmol） を添加した混合物を約３日間撹拌すると、残留物（１２．６ｇ）が得られ、これ を、シリカゲル（１０×２３ｃｍ）とヘキサン／EtOAc／CHCl₃（３５：１０：５ ）溶出によるカラム・クロマトで精製し、化合物３を得た。これは、結晶化の難 しいほぼ無色の油状体であった。収量５．３７ｇ（５３％）。ＩＲ（CHCl₃）３ ４７０３３７０（アミン）、２９３０、２８６０（脂肪族 CH）、１７４０（エ ステル C=0）ｃｍ^-1、¹H NMR（２７０MHz、CDCl₃）、８．０７（d、2H、アリー ル 5-H's）、５．３２（m、2H、CH=CH）、５．１９（m、1H、グリセロール CH） 、４．８５（s、4H、NH2）、４．３０（m、2H、グリセロール OCH_AH_BCH(O)CH_AH_B O）、４．１０（m、2H、グリセロール OCH_AH_BCH(O)CH_AH_BO）、３．３２（dq、4H 、PhCH₂'s）、２．７８（m、2H、イオパノイル CHCO₂）、２．２８（t、2H、オ レオイル CH₂CO₂）、２．０５（m、4H、アリル性 CH₂'s）、１．８５（m、2H、 イオパノイル CHCH_AH_BCH₃）、１．５６（ｍ、２Ｈ、イオパノイル CHCH_AH_BCH₃） 、１．４−１．２（m、20H、CH₂エンベロープ）、０．８８（t、9H、CH₃）。分 析（C₄₃H₆₀O₆N₂I₆）C、H．化合物４：２−オレオイルグリセロール−１，３−ビス［４−（３−アミノ−２ ，４，６−トリヨードフェニル）ブタノエート］ 前記の方法にしたがって、４−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニ ル）ブタン酸（７．００ｇ、１２．６mmol）、２−モノオレイン（２．１９ｇ、 ６．１mmol）、および、ＤＭＡＰ（１６８ｍｇ）を無水CH₂Cl₂（８０ｍｌ）に懸 濁したものにＤＣＣ（２．８５ｇ、１３．８mmol）を添加した混合物を約３日間 撹拌すると、残留物（１２．５ｇ）が得られ、これを、シリカゲル（１０×２５ ｃｍ）カラムにおいて、最初に１リットルのヘキサン／EtOAc（５：１）、次に ヘキサン／EtOAc／CHCl₃（７５：１５：１０）溶出によるカラム・クロマトで精 製し、化合物４を得た。これは、結晶化の難しいわずかに黄色を帯びた油状体で あった。収量５．０８ｇ（５８％）。ＩＲ（CHCl₃）３４７０、３３７０（アミ ン）、２９３０、２８６０（脂肪族 CH）、１７４０（エステル C=0）ｃｍ^-1、¹ H NMR（２７０MHz、CDCl₃）、８．０４（s、2H、アリール 5-H's）、５．３３（ m、3H、CH=CH および、グリセロール 2-H）、４．８１（s、4H、NH₂）、４．３ ３（m、2H、グリセロール OCH_AH_BCH(O)CH_AH_BO）、４．２０（m、2H、グリセロー ル OCH_AH_BCH(O)CH_AH_BO）、３．０６（m、4H、PhCH₂'s）、２．４８（t、4H）O2C CH₂'s）、２．３３（t、2H、オレエート O₂CCH₂）、２．００（m、4H、アリル性 CH₂'s）、１．８４（m、4H、PhCH₂CH₂）、１．２６（d、CH₂、エンベロープ） 、０．８９（t、3H、CH₃）。分析（C₄₁H₅₆O₆N₂I₆）C、H．化合物５：２−オレオイルグリセロール−１，３−ビス［５−（３−アミノ−２ ，４，６−トリヨードフェニル）ペンタノエート］ 前記の方法にしたがって、５−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニ ル）ペンタン酸（１．６０ｇ、２．８mmol）、２−モノオレイン（４８０ｍｇ、 １．３mmol）、および、ＤＭＡＰ（５０ｍｇ）を無水CH₂Cl₂（４５ｍｌ）に懸濁 し、約３６時間撹拌したものにＤＣＣ（６３５ｍｇ、３．１mmol）を添加した。 処置後、残留物（１２．５ｇ）が得られ、これを、シリカゲル（４．６×４２ ｃｍ）とヘキサン／EtOAc／CHCl₃（８０：１５：５）溶出によるカラム・クロマ トで精製し、化合物５を得た。これは、結晶化の難しいわずかに黄色を帯びた油 状体であった。収量１．３５ｇ（７１％）。ＩＲ（CHCl₃）３４７５、３３７５ （アミン）、２９４０、２８５０（脂肪族 CH）、１７３８（エステル C=0）ｃ ｍ^-1、¹H NMR（３６０MHz、CDCl₃）、８．０３（s、2H、アリール 5-H's）、５ ．２６（m、3H、CH=CH および、グリセロール 2-H）、４．７９（s、4H、NH₂） 、４．３１（m、2H、グリセロール OCH_AH_BCH(O)CH_AH_BO）、４．１６（m、2H、グ リセロール OCH_AH_BCH(O)CH_AH_BO）、３．０２（m、4H、PhCH₂'s）、２．４３（t 、4H、O₂CCH₂'s）、２．３０（t、2H、オレエート O₂CCH₂）、２．０１（m、4H 、アリル性 CH₂'s）、１．８０（m、4H、PhCH₂CH₂'s）、１．６２−１．２４（m 、CH、エンベロープ）、０．８６（ｔ、３Ｈ、CH₃）。分析（C₄₃H₆₀O₆N₂I₆）C、 H.化合物６：２−オレオイルグリセロール−１，３−ビス［６−（３−アミノ−２ ，４，６−トリヨードフェニル）ヘキサノエート］ 前記の方法にしたがって、６−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニ ル）ヘキサン酸（２．１４ｇ、３．７mmol）、２−モノオレイン（６２０ｍｇ、 １．７mmol）、および、ＤＭＡＰ（７０ｍｇ）を無水CH₂Cl₂（４５ｍｌ）に懸濁 し、約４８時間撹拌したものにＤＣＣ（８０１ｍｇ、３．９mmol）を添加した。 処置後、残留物（３．２６ｇ）が得られ、これを、シリカゲル（３×２５ｃｍ） とヘキサン／EtOAc／CHCl₃（８０：１５：５）溶出によるカラム・クロマトで精 製し、化合物６を得た。これは、結晶化の難しいわずかに黄色を帯びた油状体で あった。収量２．０４ｇ（８１％）。ＩＲ（CHCl₃）３４７５、３３７５（アミ ン）、２９４０、２８５０（脂肪族 CH）、１７３８（エステル C=0）ｃｍ^-1、¹ H NMR（３６０MHz、CDCl₃）、８．０３（s、2H、アリール 5-H's）、５．３０（ m、3H、CH=CH および、グリセロール 2-H）、４．７９（s、4H、NH₂）、４．３ １（m、2H、グリセロール OCH_AH_BCH(O)CH_AH_BO）、４．１６（m、2H、グリセロー ルOCH_AH_BCH(O)CH_AH_BO）、３．０１（m、4H、PhCH₂'s）、２．３４（m、6H、O₂CC H₂'sおよび オレエート O₂CCH₂）、２．００（m、4H、アリル性 CH₂'s）、１． ７２（m、4H、PhCH₂CH₂'s）、１．６０、１．５０、１．２７（m、CH₂、エンベ ロープ）、０．８７（t、3H、CH₃）。分析（C₄₅H₆₄O₆N₂I₆）C、H．化合物７：２−オレオイルグリセロール−１，３−ビス［７−（３−アミノ−２ ，４，６−トリヨードフェニル）ヘプタノエート］ 前記の方法にしたがって、７−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニ ル）ヘプタン酸（１０．０ｇ、１６．７mmol）、２−モノオレイン（２．８３ｇ 、７．９mmol）、および、ＤＭＡＰ（１８０ｍｇ）を無水CH₂Cl₂（１２０ｍｌ） に懸濁し、約２４時間撹拌したものにＤＣＣ（３．６２ｇ、１７．５mmol）を添 加した。処置後、残留物（１４．７ｇ）が得られ、これを、シリカゲル（１０× ２５ｃｍ）とヘキサン／EtOAc／CHCl₃（８０：１５：５）溶出によるカラム・ク ロマトで精製し、化合物７を得た。これは、結晶化の難しいわずかに黄色を帯び た油状体であった。収量９．４５ｇ（７９％）。ＩＲ（CHCl₃）３４５０、３３ ５９（アミン）、２９１５、２８４０（脂肪族 CH）、１７４０（エステル C=0 ）ｃｍ^-1、¹H NMR（３６０MHz、CDCl₃）、８．０３（s、2H、アリール 5-H's） 、５．３０（m、3H、CH=CH および、グリセロール 2-H）、４．７９（s、4H、NH₂ ）、４．３１（m、2H、グリセロール OCH_AH_BCH(O)CH_AH_BO）、４．１６（m、2H 、グリセロール OCH_AH_BCH(O)CH_AH_BO）、３．００（m、4H、PhCH₂'s）、２．３２ （m、6H、O₂CCH₂'sおよび オレエート O₂CCH₂）、２．００（m、4H、アリル性 C H₂'s）、１．７２（m、4H、PhCH₂CH₂'s）、１．６１−１．２６（m、CH₂、エン ベロープ）、０．８８（t、3H、CH₃）。分析（C₄₇H₆₈O₆N₂I₆）C、H． 実施例１のヨウ化トリグリセリドを、本発明の処方によって、水中油型乳剤の 脂質核の中に取り込んだ。この方法については、下記の実施例でもっと詳細に説 明する。実施例２： 個別の実際例として、実施例１の化合物７、すなわち、ＤＨＯＧを、水中油型 乳剤に取り込み、肝細胞選択的ＣＴ剤として用いた。一般的処方は下記の通り。 １０％（w/v）全脂質 トリオレイン（ＴＯ）＋ＤＨＯＧ ＴＯ：ＤＨＯＧ（w/w）＝１：１ ２．４％（w/v）燐脂質 ＤＯＰＣ ０．５％（w/v）コレステロール コレステロール：ＤＯＰＣ（モル比）＝０．４ ５％（w/v）ＵＳＰグリセロール ０．６％（w/v）α−トコフェロール 滅菌水を基質バルクの水性相として。 実際量で表わすと、前記濃度と比率は次のように書き換えられる。 トリオレイン ５００．００ｍｇ ＤＨＯＧ ５００．００ｍｇ ＤＯＰＣの無水エタノール溶液１００mg/ml を ２．４０ｍｌ コレステロール ４７．１０ｍｇ ＵＳＰグリセロール ５００．００ｍｇ α−トコフェロール（コレステロールの直後に添加） ６１．９０ｍｇ 全体を滅菌水で１０ｍｌにする。 固相脂質と精製油を秤量し、５０ｍｌのガラス管に投入し、次に、ＤＯＰＣの エタノール液１００mg/ml の２．４０ｍｌと５ｍｌの酢酸エチルを添加した。溶 媒を、回転蒸発装置により、４０℃で約１０分間減圧蒸発させて除去した。ガラ ス管を蒸発装置から下ろし、５００．０ｍｇのトリオレインをＤＯＰＣの上部に 加えた。次に、４７．１０ｍｇのコレステロールを、ＤＯＰＣ／ＴＯの混合物に 加えた。次に、５００ｍｇのＤＨＯＧをこの脂質混合物に加えた。最後に、約３ ｍｌのCHCl₃をガラス管に加え、脂質同士が完全に混合するのを助けた。エタノ ール、酢酸エチル、または、クロロホルムのような有機溶媒は、親油性、疎油性 、または、両親媒性成分を乳剤に導入するのに必要なときにのみ用いた。 脂質の、管の壁に付着したものは、酢酸エチル：エタノール（２：１）液１ｍ ｌで洗い、管を回転蒸発装置に戻し、４０℃で約３０分間減圧蒸発させて溶媒を 除去した。この回転蒸発装置を、さらに４０−４５分間、高真空度ラインに接続 した。 この脂質混合物に、グリセロールの５００ｍｇ分液を加えた。この成分を、窒 素ガス流体の下においてポリトロンで処理した。この混合物の最初の乳化は、５ ５℃未満で、５分間１２，５００rpm で行ない、次に、水相（約６ｍｌの滅菌水 ）を加えた。この水を添加した後、ポリトロンを用い、乳剤を、５分間フルスピ ード（２５，０００rpm）で処理した。動力器から取り出した乳剤を、小量の滅 菌水ですすぎ、内容物を、気密注射筒に移した。滅菌水を加えて、最終容量１０ ｍｌの乳剤を得た。 この乳剤を、ミクロフルーダイザー１１０Ｓの標本槽に移し、連続通過モード 下、３４−３６℃で、１０分間１４，７００psi で処理した。処理後の乳剤を装 置から集め、０．４５μｍアクロディスク（Arodisc）フィルターで濾過し、さ らに、０．２２μｍアクロディスク滅菌フィルターで濾過し、滅菌した多数回投 与用瓶に直接導いた。この瓶を室温で一晩保存し、粒径測定に用いた。 本発明によれば、油相粒子の平均直径は、５０と２００ｎｍの間にあり（計量 数）、しかも、その分布は狭い。すなわち、前記の範囲（すなわち、３００ｎｍ を越えるもの）から外れる径を持つ粒子は２％以下である。本発明の乳剤の粒径 分布の典型例を第３図（ニコンプ重み付き個数分析法）と、第４図（ニコンプ重 み付き強度分析法）に示す。粒子のほとんどが存在し有している直径（個数計量 ）のみならず、大きな粒子の、少量ではあるが重要な数の存在（強度計量）を決 定 することができるように、データはニコンプ強度およびニコンプ個数重み付き形 式の両方で示す。分布において、１μｍを越える粒子があってはならない。また 、乳剤は、極小量以上のリポソームを含んでいてはならない。 乳化剤（この場合はＤＯＰＣ）に対するコレステロールのモル比は、直接粒径 に影響する。キロミクロン残留物をそのままなぞる乳剤を得るためには、燐脂質 に対するコレステロールのモル比は０．０５から０．７０の範囲にあることが好 ましく、特に、第５図、第６図に例示するように、ヨウ化トリグリセリドを肝細 胞選択的に輸送するには、０．４０であることが望ましい。 第５図は、１０％トリグリセリド乳剤について平均粒径（ｎｍ）を表わしたグ ラフであるが、この場合、乳剤は、５％（w/v）トリオレインと５％（w/v）ヨウ 化トリグリセリド（ＤＨＯＧ）、２．４％（w/v）燐脂質（ＤＰＯＣ）、および 、様々な量のコレステロールを含むので、燐脂質に対するコレステロールのモル 比が０．３から０．６９の範囲に広がる。モル比０．４の微小乳剤は、ここで示 した中でもっとも小さい平均粒径（２０２．４ｎｍ）を持ち、その他の微小乳剤 の粒径も受容可能であった。 第６図は、１０％乳剤で、平均粒径（ｎｍ）を、処方後の時間（日数）の関数 として表わしたグラフであって、この乳剤は、５％トリオレインと５％ヨウ化ト リグリセリド（ＤＨＯＧ）、２．４％（w/v）燐脂質、および、様々な量のコレ ステロールを含む。第６図において、燐脂質に対するコレステロールのモル比が ０．４（"＊"）である微小乳剤は、９０日の試験期間にわたって保存安定性を示 したが、コレステロールを含まない微小乳剤（"■"）や、燐脂質に対するコレス テロールのモル比が０．１である（"◇"）ものでは保存安定性がなかった。この ように、適当な量のコレステロールは保存安定性に寄与している。 コレステロールはさらに単分子層を安定化し、加熱滅菌後の直径変化を起こり にくくする。第７図は、実施例２の乳剤について、平均粒径（ｎｍ）を、オート クレーブによる蒸気滅菌前後の時間の関数として表わしたグラフである。データ は、重み付き強度計量法、重み付き個数計量法の両方で表わしてある。コレステ ロール無しで調製した乳剤は、オートクレーブ滅菌に耐えられなかった。実施例３： 生体内分布試験 実施例１（第１表参照）のヨウ化トリグリセリド化合物の放射性乳剤を、実施 例２に記載した方法を用いて調製した。この微小乳剤を、正常の、雌の、スプレ イグ・ドーリー（Sprague-Dawley）ラットに、２５−４５mgI/kg体重の放射線量 で静注（尾静脈）し、生体内分布試験に供した。注入後、様々な時点において（ ３０分、３時間、および、２４時間）、動物を屠殺し、適当な組織を取り出し、 血液を洗い流し、放射能を分析した。肝臓、脾臓、血液における、器官当りの投 与用量％±ＳＥＭ数値（各動物ｎ＝３の実際の臓器重量に基づく、また、血液に ついては、全体重の％を文献値から求めた）を第２表に載せる。腎、肺、骨髄、 卵巣、副腎、甲状腺、心臓、脂肪、および、筋を含むその他の組織は、一般に、 低レベルの放射能しか含んでいなかった。 ７個の類似体のいずれも、第２表に掲げる組織分布結果から明らかなように、 高度の肝特異性を示した。注入用量の放射能の６５から７８％が、投与３０分後 に肝臓に局在した。３時間では、放射能の４６から９３％が肝臓に存在した。３ 時間時における肝臓対血液比は、組織１ｇ当りの注入用量の計算に基づくと、１ １から４００の範囲にあった。長鎖類似体（化合物５−７）は、ある程度の代謝 を受け、３時間までに肝臓から排出された。一方、短鎖類似体（化合物１−４） の方は生体内代謝や、肝からの排出に対してより抵抗性が高いようであった。こ れは、２４時間時に比べて、３時間時における肝放射能の減少が比較的少ないこ とから明らかである。したがって、肝臓による摂取は、主に、乳剤搬送剤の性質 に依存するが、打ち込まれたトリグリセリド類似体がその後肝臓で代謝され、排 出されるのは、少なくともその一部は、アルキル鎖の長さを含む、そのトリグリ セリドの化学的構造によって左右されるのであろう。短鎖類似体が比較的生体内 変性に対して抵抗力が強いのは、一部は、肝リパーゼ、リソームの酸性ヒドロラ ーゼの、あまり有効な基質ではないためである。 生体内画像試験 化合物３および７を含む水中油型乳剤を、２０から７０mgI/kg 体重の用量レ ベルで、正常ラットと腫瘍ラット（モリス・ヘパトーマ７７７７）に投与し、Ｃ Ｔ評価を行なった。腫瘍の形態的特徴は、、肉眼病理解剖検査によって検証した 。 正常ラットにおいては、両化合物とも、肝臓に急速に取り込まれたので、肝臓 濃度は、５８ＨＵの平均基礎値から、６０分までにはほぼ１００ＨＵまで増加し た。化合物７（ＤＨＯＧ）では、３時間後にはＣＴ濃度が減少し始めたが、立体 障害を受けた化合物３においては高濃度のままであった。化合物３においては、 ２４時間後には、肝臓濃度はやや減少しただけだが、化合物７ではほぼ基礎値に 戻った。 直径１から１５ｍｍの範囲を持つ、低濃度性肝臓腫瘍の存在は、腫瘍ラット （モリス・ヘパトーマ７７７７）のＣＴ試験ですぐに検出することができた。ピ ーク肝臓濃度は、化合物７では２時間まで持続したが、化合物３では２４時間以 上持続した。いずれの場合も、画像特性は、コントロールの尿路造影剤（オムニ パック３００、サノフィ／ウィンスロップ、ニューヨーク、ニューヨーク州、Om nipaque 300、Sanofi/Winthrop、New York,NY、６００mgI/kg 体重の用量で）投 与後に観察されたものと、同等以上であった。しかも、本発明の造影剤は、１／ １０未満のヨウ素用量でこの画像を造りだしたのである。 第８図は、実施例２の組成物投与後６０分のときにおける、一匹の腫瘍ラット の、軸性ＣＴ画像（スライス厚３ｍｍ）である。腫瘍細胞は、肝細胞とは生理的 にはっきりと異なるので、腫瘍細胞は強調されず、強調される肝細胞に比べて低 濃度に見える。この対比差により、小さな障害部位の特定と位置決めがさらに簡 単になる。この特定例では、腫瘍の直径は４ｍｍである。第９図は、投与後１時 間時における、別の腫瘍ラットの軸性ＣＴ画像である。２個の腫瘍の存在がはっ きりと示されている。左の腫瘍は、直径１０ｍｍ、右のものは６ｍｍである。 代謝／排出試験 下記に記載する組織分布／排出試験には、実施例２に従って調製した脂質乳剤 （全核脂質含量１０％）を用いた。絶食させた、雌のスプレイグ・ドーリー・ラ ットに、放射性（¹²⁵Ｉ−ＩＴＧ）乳剤を、２５−３５mg I/kg の用量で、尾静 脈静注によって投与した。１３個の組織における放射能量を、注入後の時間の関 数として求めた。結果を第１０図に示す。すなわち、この図は、肝および血漿中 の組織内生分布を表わすグラフである。組織内の濃度を器官当りの投与用量の％ として（平均±ＳＥＭ）表わし、注入後の時間（時間）の関数としてプロットし た。（■）は肝臓、（○）は血漿のものである。 第１０図から明らかなように、雌ラットを使った組織内分布試験においても、 ＩＴＧの優れた肝臓選択輸送性が観察された。注入後３０分で、全用量の６５％ 以上が肝臓に蓄積した。その他の臓器は、通常、注入用量の２％未満しか含んで いなかった。もっとも脾臓には、全用量のほぼ１２％が蓄積した。２４時間まで には、注入用量の５％未満が肝臓に残っているだけであった。 さらに、放射性（¹²⁵Ｉ−ＩＴＧ）乳剤を雌ラットに投与し、その後ラットを 代謝ケージに９日間入れた。糞と尿を毎日収集し、その放射能を測定した。第１ １図に、％投与用量で表わした、糞および尿による放射能累積排出量を、放射性 乳剤注入後の時間（日数）の関数としてプロットした。第１１図において、各線 のマークは以下の通り。糞による排出と尿による排出とを加えたもの（■）、糞 による排出（○）、尿による排出（▼）。排出試験の成績から、ＩＴＧの大部分 は肝臓によって代謝され、胆管を通じで排出されるのは明らかである。糞による 排出は、全排出量のちょうど８０％を越えた量であるが、尿による排出は、全体 排出量の２０％に満たない。全部を合わせると、注入量の９４％を越えるものが 実験の終了時に回収され、８０％を越えるものが２日目までに排出された。 本発明の水中油型乳剤の、組織選択性ＣＴ画像性能を評価するために、絶食さ せた、一匹の雌イヌについて、実施例２の乳剤の団塊投与後２４時間まで各時点 で画像撮影を行なった。強調された肝臓像は、ラットで観察された組織分布像と 類似していた。第１２図は、肝臓のＣＴ画像強度（ＨＵ）を、注入後の時間（時 間）の関数としてプロットしたグラフである。第１２図で明らかなように、肝臓 画面の強調は、投与後６０分までに最大値に向かって上昇し、２時間まで高いレ ベルに留まっていた。しかしながら、注入後２４時間までに、肝臓の画像強度は 、造影剤注入前の値に戻った。胆嚢画像の強度は、時間と共に単調に増加し、注 入後２４時間では、ＣＴ強度は、造影剤注入前の値よりも６４２％増加した。第 １２図にプロットした数値は、肝臓の３回の連続スキャンから得た１０−１５Ｒ ＯＩ測定の平均±ＳＥＭを表わす。すべてのスキャンについてスライス厚は５ｍ ｍであった。 第１３−１６図は、投与後２４時間時におけるＣＴ画像である。第１３図では 、左上隅の胆嚢が非常に強調されている。第１４図は、ほぼ同じ時間に、同じ動 物 の、解剖学的にさらに低いレベルで取った画像を表わす。胆嚢が最大径を示し、 非常に強調されている。コレシストキニンをこのイヌに投与し、胆嚢を空にさせ た。第１５図は、コレストキニン投与５分後に得られた画像である。今度は、胆 嚢管と総胆管が不透過になっている。第１６図は、同じイヌで、コレシストキニ ン投与２０分後で見たさらに低いレベルのスライスである。対比強調は、今度は 、腸管に局在する。肝細胞から胆汁に排出された物質は集められ、胆嚢で濃縮さ れる。したがって、肝細胞で処理され、胆汁に排出されたＤＨＯＧおよび／また は、その代謝産物は胆嚢に蓄積する。本発明の水中油型乳剤に溶解させたＤＨＯ Ｇの投与後、肝組織と胆汁系の両方が、ＣＴ画像において強調された。 この生体内分布試験によって、標的組織特異性が優れること、ならびに、注入 用量の大部分が肝臓に局在することが明らかになった。代謝性クリアランス試験 のデータからは、ＩＴＧが肝細胞に輸送されることが示された。なぜなら、注入 用量の８０％以上が、胆汁を通じて糞の中に速やかに排出されたからである。肝 細胞への集中性は、ＣＴ画像試験でも確かめられた。すなわち、胆嚢の内容が、 時間と共に画像強度を驚くほど増した。これは、ＩＴＧが胆嚢の胆汁に蓄積した ためである。 本発明の乳剤の肝細胞選択性は、肝・胆系の画像撮影に好適である。したがっ て、この乳剤の使用は、肝臓リパーゼやリソーム酸性リパーゼの作用に影響を及 ぼす病気の診断、および／または、治療に特に有利である。そのような病気には 、例えば、糖尿病、癌、硬変、アルコール中毒、一次肝臓癌・転移肝臓癌、肝炎 、胆嚢炎、閉塞性黄疸、肝臓移植機能評価、繊維肝、脂肪肝、その他いろいろあ る。 前記に加え、本発明の乳剤の使用は、腎疾患に悩む患者の診断、および／また は、治療に特に好ましい。乳剤の肝細胞選択性、ならびに、その結果、前述した ように、肝細胞から選択的に胆汁に排出されることにより、投与薬に対する暴露 から腎臓が守られる。しかも、この投与薬は、ある場合には、ヨー化トリグリセ リドであるかもしれない。現在入手可能な水溶性Ｘ線造影剤は、一般に、腎臓に よって急速に体外に排除される。これら既知の薬剤の多くは、腎毒性を引き起こ す。これは、基礎疾患として腎臓病を持っている患者にとってはさらに重大な問 題となる。 さらに、本発明の乳剤の大きさ、安定性、形は、糸球体濾過によっては排除さ れない程度のものであり、また、腎の排出機構のいずれにも有利な性質を持って いない。この化合物類は、主に血管プール内に存在し、周囲の腎細胞間空間に拡 散しない。したがって、血液プール診断薬としても機能する。これによってさら に、この化合物が肝臓によって排出される間、血管漏洩を通じて腎臓組織に暴露 されることが少なくなる。腎臓の実質組織への暴露はさらに次のようにしても回 避される。すなわち、この化合物は血管床に包まれているので、腎臓の実質組織 細胞に接触することがない。実施例４： 比較のために、水中油型乳剤を、超音波微粒子法（処方４ａ）、ポリトロンに よる高速混合法プラス超音波微粒子法（処方４ｂ）によって調製した。処方４ａ 、４ｂの成分は下記の通り。 トリオレイン ５００．０ｍｇ ＤＨＯＧ ５０６．６ｍｇ ＤＯＰＣのCHCl₃溶液１００mg/ml を ２．４０ｍｌ コレステロール ４７．１ｍｇ ＵＳＰグリセロール ５００．００ｍｇ α−トコフェロール １１．９ｍｇ 全体を滅菌水で１０ｍｌにする。 処方４ａ： 溶媒、特に、CHCl₃に溶解した１００mg/ml ＤＯＰＣ２．４０ｍｌをコーレッ クス管に加えた。溶媒を窒素雰囲気下に蒸発させ、管の底部に残留が形成するま で続けた。５００ｍｇのトリオレインをＤＯＰＣの上層に加え、４７．１ｍｇの コレステロールを、ＤＯＰＣ／ＴＯの混合物に加えた。抗酸化剤として、α−ト コフェロールを、コレステロールの後に加えた。 別の小さなガラス瓶中で、５０６．６ｍｇのＤＨＯＧを、パーオキシド非含有 エーテルに溶解し、コーレックス管の脂質混合物に定量的に加えた。この管にさ らにエーテルを加え、脂質同士が完全に混合するのを助けた。この脂質を、窒素 ガスの流体下、ゆるやかに加熱しながら、エーテルを飛ばした。エーテルのほと んどが飛び去ってから、混合物を、小量の追加のエーテル中に再懸濁し、気密な ハミルトン注射筒に移した。コーレックス管をエーテルですすぎ、その洗水を注 射筒の中味に加えた。全部で約５ｍｌ容量が得られた。この内、２ｍｌが実際の 脂質成分であった。 この注射筒をシリンジ・ポンプに接続し、内容物を、０．５７ml/minの一定速 度で輸送するようにセットした。滅菌水に溶解した無水グリセロール約 ５．０ ｍｌを、ストッパー付きガラス瓶に入れ、マグネット撹拌棒を用いて、加熱プレ ートの上に置いた溶液を混ぜ合わせた。グリセロール水溶液の温度が ３７−４ ０℃になったら、脂質を、ポリエチレン管を通じて、この瓶に加えた。瓶に針で 穴を開け、窒素ガスの流れに暴露した。０．５７ml/minという特定の流速で、脂 質の添加が約１０分間行なわれた。定常に撹拌を続けると、粗製乳剤が形成され た。エーテルの痕跡が完全に消失した後、注射筒からの管を外し、瓶を窒素雰囲 気下で密封した。密封した乳剤を、定速で、はげしく撹拌しながら、３７−４０ ℃で１時間混合した。 この粗製乳剤を、瓶から気密注射筒に移し、瓶は、小量の無水グリセロールで ２度すすいだ。この乳剤と洗水を、注射筒の中で混ぜ合わせた。無水グリセロー ルを加え、最終的に１０．０ｍｌの容量を得た。乳剤は、反転によって、注射筒 中で直接混合した。 この乳剤を、二つの、別々の、５ｍｌずつの等量分液に分けた。５ｍｌ分液の 一方は、超音波微粒子法によって乳化した。この粗製乳剤を室温で水浴に入れ、 その浴中に超音波装置の振動子を浸した。超音波装置は、出力を６に合わせ、５ 分間連続モードで作動するようにセットした。この設定では、超音波装置の指針 計器上で７０−８０％の出力が得られた。この乳剤を収集し、ガラス・ストッパ ー付き瓶に窒素雰囲気下で保存した。 処方４ｂ： 粗製乳剤のもう一つの５ｍｌ分液をポリトロン・ホモジナイザーでホモジェネ ートし、最終的に乳剤とした。この乳剤をガラス・コーレックス管に入れ、小容 量のポリトロン・モーターによって、窒素雰囲気下に、２５，０００rpm で５分 間ホモジネートした。実施例５： 下記の組成を持った、水中油型乳剤を、実施例２の調製法を用いて作製した。 トリオレイン ８００ｍｇ ＤＨＯＧ ２００ｍｇ 卵ホスファチド １２０ｍｇ コレステロール １０ｍｇ グリセロール ２２５ｍｇ 全体を０．９％生理食塩水で１０ｍｌにする。 １００mg/ml の卵ホスファチドの１．２０ｍｌを５０ｍｌのガラス管に加えた 。溶媒を、回転蒸発装置により、４０℃で約４５分間減圧蒸発させて除去した。 ガラス管を回転蒸発装置から取りはずし、８００ｍｇのトリオレインを卵ホスフ ァチドの上層に加えた。次に、１０ｍｇのコレステロールを、ＤＯＰＣ／ＴＯの 混合物に加えた。次に、２００ｍｇのＤＨＯＧをこの脂質混合物に加えた。最後 に、約３ｍｌの CHCl₃をガラス管に加え、脂質同士が完全に混合するようにした 。 脂質を撹拌して混合し、さらに１ｍｌの CHCl₃を加え、管の壁に付着した材料 を洗った。脂質混合物を回転蒸発装置に戻し、４０℃で減圧下 CHCl₃を除去した 。溶媒の大部分が除去された後、真空吸引源を、直接駆動真空ポンプに切り替え 、 さらに４５分吸引した。この管を、回転蒸発装置から、高真空度ラインに移し、 さらに１．５時間吸引した。管を密栓し、窒素でフラッシュし８℃で一晩保存し た。 管と内容物を３７℃に温め、高真空度ラインに接続し、溶媒の最後の痕跡を除 去した。この脂質混合物に、グリセロールの２２５．６ｍｇ分液を加えた。この 成分を、窒素流体の下においてポリトロンで処理した。この混合物の最初の乳化 は、５５℃未満で、５分間１２，５００rpm で行ない、次に、水相をゆっくり加 えた。この水の添加後、標準ポリトロン発動機を用い、乳剤を、５分間２５，０ ００rpm で処理した。発動機から取り出した乳剤を、小量の滅菌水ですすぎ、内 容物を、気密注射筒に移した。水を加えて、最終容量１０．０ｍｌの乳剤を得た 。 この乳剤を、ミクロフルーダイザー１１０Ｓの標本槽に移し、連続通過モード 下、１０分間１４，７００ｐｓｉで処理した。処理後の乳剤を装置から集め、０ ．４５μｍアクロディスク（Arodisc）フィルターで濾過し、さらに、０．２２ μｍアクロディスク滅菌フィルターで濾過し、滅菌した多数回投与用瓶に直接導 いた。この瓶を窒素雰囲気下に保存した。実施例６： コレステロールは、単分子層を安定化し、加熱滅菌後における粒径変化を抑さ えるだけでなく、乳剤を肝細胞にぶつけるのに必要なアポ蛋白質、特に、Apo Ｅ と乳剤が会合するのを助ける。しかしながら、もっと大事なことは、本発明によ って調製される乳剤は、下記の第３表に見られるように、加熱殺菌後も、Apo Ｅ との会合能力を保持することである。実施例２−５で調製された乳剤をリポ蛋白 欠損血漿でインキュベートし、その後再単離した。ローリー法を用い、１ｍｌの 乳剤あたりのμｇ蛋白質量を測定した。なぜなら、蛋白質量は、Apo ＡＩ、Apo ＡＩＶとの会合を包括するからである。実施例２と実施例５の乳剤試料を標準オ ートクレーブで処理し、平均粒径を調べた。 実施例７： もう一つの具体的な実際例として、ＤＨＯＧ（実施例１表１の化合物７）を、 ２０％の核全脂質含量を持つ水中油型乳剤に取り込み、肝細胞選択的ＣＴ用造影 剤として用いた。一般処方は下記の通りであった。 ２０％（w/v）全脂質 トリオレイン（ＴＯ）＋ＤＨＯＧ ＴＯ：ＤＨＯＧ（w/w）＝１：１ ３．６％（w/v）燐脂質 ＤＯＰＣ ０．５％（w/v）コレステロール コレステロール：ＤＯＰＣ（モル比）＝０．４ ５％（w/v）ＵＳＰグリセロール ０．６％（w/v）α−トコフェロール 滅菌水を基質バルクの水相として使用。 実際量で表わすと、 ＤＨＯＧ １０００．３ｍｇ トリオレイン １００２．７ｍｇ コレステロール ７１．１ｍｇ α−トコフェロール ６１．２ｍｇ ＤＯＰＣ ３６０ｍｇ グリセロール ５００．７ｍｇ 滅菌水 ７．４０ｍｌ 脂質核成分を溶媒に溶かし、その溶媒を、実施例２で記した方法で除去した。 ＵＳＰグリセロールを、この脂質混合物に混ぜ、ポリトロンにより、１２，５０ ０rpm で５分間窒素雰囲気下で乳化した。滅菌水の５．５ｍｌ分液を加え、乳化 を、＜５５℃で５分間２５，０００rpm で行なった。粗製乳剤と、動力器の洗水 を混ぜ、滅菌水で１０ｍｌに調整し、これを、ミクロフルーダイザー、モデル１ １０Ｓで、３４．４−３５．４℃で、１０分間１４，７００psi で乳化した。こ の乳剤を、孔径０．４５ｐｍと０．２ｐｍの滅菌フィルターで濾過し、滅菌した 多数回投与用瓶に導いた。実施例８： さらにもう一つの具体的な実際例として、ＤＢＯＧ（実施例１表１の化合物４ ）を、２０％の核全脂質含量と３．６％ＤＯＰＣを持ち、かつ、ＤＯＰＣに対す るコレステロールのモル比が０．２７である水中油型乳剤に取り込んだ。一般処 方 は下記の通りであった。 ＤＢＯＧ １０００．５ｍｇ トリオレイン １００４．３ｍｇ コレステロール ４７．５ｍｇ α−トコフェロール ６６．２ｍｇ ＤＯＰＣ ３６０ｍｇ グリセロール ５０２．６ｍｇ 滅菌水 ７．４ｍｌ この水中油型乳剤を、実施例７で記したものと同じ条件で処理した。実施例９： 第１７と１８図は、それぞれ、コントロール動物と試験動物の肝臓組織のオー トラジオグラフィーの顕微鏡写真である。このオートラジオグラフィーは、ＴＯ 乳剤（コントロール）、または、本発明の水中油型乳剤（試験）を生きている動 物に注入後、３時間の生体内分布期間を置き、その後肝臓を灌流、固定処置を施 した後に取ったものである。第１８図のオートラジオグラフィー画像を取るため に用いた試験用水中油型乳剤は、１０％w/v の全脂質核含量を持っていた。その 内容は、実施例２と同様の処方の中に５％放射性ヨウ化２−オレオイルグリセロ ール−１，３−ビス［イオパノエート］（ＤＩＯＧすなわち、表１の化合物３で ある）と、５％ＴＯを含むものである。コントロールの乳剤は、脂質核の中に１ ０％w/v ＴＯを含み、乳剤それ自体が、肝組織に対し形態的な損傷を与えるかど うか評価するために用いた。 第１７図は、生体組織に通常見られる背景放射能のみを表わしているが、形態 的損傷は示していない。第１８図は、本発明の水中油型乳剤の肝細胞選択的輸送 、すなわち、ヨウ化トリグリセリドの細胞内局在を示している。第１８図を見る と、ヨウ化トリグリセリドに伴う放射性粒子は、細胞表面や、肝臓類洞空間や、 クッパー細胞の中ではなくて、主に、肝細胞の形態学的境界内部に局在する。し たが って、このオートラジオグラフィー試験の結果からも、本発明の水中油型乳剤は 、その内容物を、主に、肝細胞に輸送するという結論が支持される。さらに、第 １８図の肝組織は、本発明の水中油型乳剤の投与に起因する形態的な損傷を示し ていない。実施例１０： 純粋成分から成る乳剤と、天然成分から成る乳剤との比較試験 大豆油／卵ホスファチドによる処方と、トリオレイン／ＤＯＰＣによる処方を 用いて、生体内ＣＴ画像試験を行なった。これは、本発明の水中油型乳剤におい て、純粋な、合成化合物を使用する方が相対的に有利なのかどうかを評価するた めである。予備のＣＴ試験で、大豆油／卵ホスファチド処方でも結果はほとんど 変わらないということが判明した。しかしながら、ＣＴ画像では、肝細胞に輸送 される物質と、クッパー細胞に輸送される物質とを直接区別することはできない 。 もしも肝臓機能の評価を望むのであれば、造影剤は、クッパー細胞や、肝臓の その他の細胞でなく、肝細胞に輸送されなければならない。肝細胞に対する集中 輸送に関しては、肝臓の初期強調における相対的な差と、それに続く、肝臓から の強化造影剤の排出は、ＣＴ画像で観察することができ、代謝機能と関連させる ことができる。下記に記載する、生体内分布と排出試験から、大豆油／卵ホスフ ァチドによる処方は、本発明のトリオレイン／ＤＯＰＣによる処方と同じ様には 、肝細胞に向かわないことが明らかになった。 トリオレイン／ＤＯＰＣ処方と比較した場合の、大豆油／卵ホスファチド処方 によるヨウ化トリグリセリド局在曲線を評価するために、組織内生体分布試験を 行なった。大豆油／卵ホスファチド処方を選んだのは、典型的な従来の非経口栄 養補給剤、例えば、リポシン（Liposyn、アボット・ラボラトリー、ノース・シ カゴ、イリノイ州、Abbott Laboratories,North Chicago,IL）や、イントラリピ ド（Intralipid、カビビトラムＡＢ、ストックホルム、スウェーデン、Kabivitr um AB,Stockholm,Sweden）と類似のものを得るためである。実施例１０の試験で 用いた、大豆油／卵ホスファチド処方の組成は次の通りであった。 ＤＨＯＧ ５００ｍｇ 大豆油 ５００ｍｇ 卵ホスファチド １２０ｍｇ グリセロール ２５０ｍｇ 滅菌水 １０ｍｌの最終容量まで。 大豆油／卵ホスファチドによる水中油型乳剤は、実施例２と同様にして調製し た。この試験で用いたトリオレイン／ＤＯＨＣ処方は、実施例２のものと同一で ある。両乳液に痕跡量の放射性ＩＴＧを加え、その後、絶食雌ラットに、２４− ２６mgI/kgの用量で投与した。動物を様々な時点で屠殺し（３０分、３時間、２ ４時間）、１３個の組織について放射能を測定した。大豆油／卵ホスファチド処 方の結果を第４Ａから４Ｃ表に示す。トリオレイン／ＤＯＰＣ処方（実施例２） の結果を第４Ｄから４Ｆ表に示す。 第４Ａ表を見ると、注入後３０分の時点における肝臓でのヨウ化トリグリセリ ドの平均蓄積量は、器官当り注入量の７６％であった。全用量の４％未満が脾臓 に存在し、血液は注入量の２％未満しか含んでいなかった。その他の臓器の蓄積 量は、投与量の２．５％未満であった。しかしながら、注入３時間後では（第４ Ｂ表）、大豆油／卵ホスファチド乳剤として輸送されたヨウ化トリグリセリドは あまり肝臓から排除されなかった。すなわち、注入量の６５％を越えるトリグリ セリドが、この時点で、肝臓に滞在していた。一方、第４Ｅ表に見られるように 、ＴＯ／ＤＯＰＣ乳剤によって運ばれた場合、注入用量のわずか３５％しか肝臓 に残っていなかった。 生体分布動的曲線に見られるこの差は次の事実によって説明できるであろう。 すなわち、大豆油／卵ホスファチド乳剤として搬送されるヨウ化トリグリセリド の大部分は、肝細胞ではなく、ＲＥＳ細胞に輸送されるのである。もしこの放射 性物質がクッパー細胞に輸送されるのだとすれば、第１回通過排除後、画像にお いても、生体分布曲線においても、早い時点で著明な肝臓局在を示すはずである 。しかしながら、時間と共に、物質は、肝細胞に輸送されたときとほぼ同じ早さ では肝臓から排除されていない。第４Ｃ表と第４Ｆ表とを比較すれば、ＴＯ／Ｄ ＯｐＣ乳剤の方が、大豆油／卵ホスファチド乳剤よりも速やかに肝臓から排除さ れることは明らかである。 さらに、肝臓と血漿標本について、フォルクの脂質抽出分析を行ない、各標本 において、ヨウ化トリグリセリド由来の放射能がどのような形を取るのかについ てデータを集めた。 第５表のデータから、二つの処方が代謝されるやり方には違いのあることが確 実である。注入後３０分、３時間のいずれにおいても、肝臓関連の全放射能の平 均１％が水溶性で、１２％が蛋白関連であり、８７％が有機体溶解性であった。 したがって、肝臓関連トリグリセリドの大部分は、母型トリグリセリドであるこ とはまず間違いない。ＴＯ／ＤＯＰＣでの結果も同様であった。一方、血漿では 、大豆油／卵ホスファチド処方によって運ばれるヨウ化トリグリセリドの代謝が 時間と共に進行することを示すものは見られなかった。言い換えると、血漿中の 放射能の大部分（全用量の６２％）は、投与後３０分でも３時間でも依然として 有機体溶解性であった。一方、ＴＯ／ＤＯＰＣ乳剤において輸送されるＩＴＧは 、時間と共に変位を示した。すなわち、有機体溶解分画から、蛋白質関連分画、 さらには、水溶性分画へと局在部位を移動させた。 前記に加えてさらに、ラットの胆管と尿管に直接カニューレを挿入し、このラ ットに実施例２の放射標識乳剤を投与して（２７．８mgI/kg体重）、胆汁排出と 尿排出とを調べた。この方法によれば、試験化合物の投与後、胆汁と尿を、３時 間まで直接かつ連続的に収集することができた。この化合物の全体排出に対する 、胆管、尿管の相対的貢献度を測定した。結果を第１９図に挙げる。第１９図は 、実施例２の組成物の排出曲線を表わすグラフである。すなわち、胆管経由（■ ）、尿管経由（▼）による累積排出（％用量）、および、胆汁流量（●）（ml/m in）を、放射標識水中油型乳剤注入後の時間（分）の関数として示した。ヨウ化 トリ グリセリドの大部分は、胆管経由で排出され、これがまた、ヨウ化トリグリセリ ドが主に肝細胞に輸送されるというさらなる証拠となる。フッ素による実施態様 従来、肝臓の、非陽子性磁気共鳴画像は、乳化したパーフルオロカーボンを用 いて行なっていた。例えば、フルオソル（Fluosol）やパーフルオロオクチル・ ブロミドがそれである。これらは、肝臓のクッパー細胞ばかりでなく、脾臓や骨 髄の細網内皮系細胞によっても封鎖される。本発明の実施態様では、対称的に置 換されたポリフッ化トリグリセリドを、磁気共鳴造影剤と同様に効果的な形で、 キロミクロン様微小乳剤に取り込んだ。実施例１１： 別の具体的な実際例では、水中油型乳剤はフッ化トリグリセリド（ＦＴＧ）を 含有している。ただし、ＦＴＧは、グリセリル−２−オレオイル−１，３−ビス （トリフルオロメチル）フェニル・アセテートである。この水中油型乳剤は、１ ０％の全核脂質と２．４％ＤＯＰＣを含み、ＤＯＰＣに対するコレステロールの 比は０．４である。 核脂質同士を混ぜ合わせ、酢酸エチル：エタノール（２：１、v/v）に溶解し 、 回転蒸発装置に置き、減圧下に溶媒混合液を除去した。この脂質混合物にグリセ ロールを添加した後に、実施例２に記載した方法で乳化を行ない、水中油型乳剤 の最終製品を得た。実施例１２： さらに別の具体的な例として、米国特許Ｎｏ．５，１１６，５９９とＮｏ．５ ，２３４，６８０に示されているタイプのフッ化化合物を、本発明の水中油型乳 剤の中に取り込ませることができる。特に、脂質核成分は、フッ素含有脂質、例 えば、パーフルオロ−ｔ−ブチル含有脂肪酸化合物のエステルやトリグリセリド 、例えば、７，７，７−トリフルオロ−６，６−ビス（トリフルオロメチル）− ヘプタン酸（7,7,7-trifluoro-6,6-bis(trifluoromethyl)-heptanoic acid）、 または、８，８，８−トリフルオロ−７，７−ビス（トリフルオロメチル）−オ クタン酸（8,8,8-trifloro-7,7-bis(trifluoromethyl)-octanoic acid）を含ん でいてもよい。 本発明の水中油型乳剤は、ほ乳動物に対し、通常、非経口投与、静注によって 投与するのに好適である。しかしながら、筋中、皮下、腹腔内、その他の輸送経 路も、本発明の考慮の内にある。さらに、本発明の水中油型乳剤は、その他の経 路から、例えば、経口から投与してもよい。 予想される用量レベルは、ｋｇ体重当り２０から１５０mgI である。ここに報 告した放射能標識例においては、放射性形態の比活性は１６から２０μCi/ml の 範囲である。 本発明の使用法の一面として、組織内の特定細胞種の細胞内空間に薬剤を輸送 することができれば、その組織の代謝性、および／または、生化学的活性を測定 するためのプローブを提供することとなろう。本発明のこのような応用例として 、代謝的に活性な画像診断薬の細胞内輸送がある。正常状態、および、病的状態 における、細胞内薬剤と画像強調のクリアランス速度を比較することによって、 その組織の生理状態に関する情報が得られるであろう。もしも、組織から排除さ れ るのに、例えば酵素による加水分解を必要とするような化合物を、組織に輸送さ れる薬剤として選べば、その化合物は、その特定の代謝性酵素のレベルないし活 性を低下させる特定の病的条件下では、排除が有効に行なわれなくなるであろう 。 酵素濃度、および／または、活性の低下は、多くの肝臓疾患と関連するから、 本発明による化合物の細胞内輸送は、肝臓組織の代謝機能を評価する上で有力な 手段となり得よう。 本発明からさらに考慮されるものとして、この粒子の両親媒性単分子層にアポ リポ蛋白質の関連認識部位および標的部位を取り込んだアポリポ蛋白質またはペ プチドを加えれば、さらに別様の標的持異性を得ることができよう。例えば、粒 子の核にステリル・エステルを加えるならば、ＬＤＬないしＨＤＬを含む他のリ ポ蛋白の類型となるから、それによって、特定組織に対する搬送剤の標的活動に 影響を及ぼすことが考えられる。ここに、ＬＤＬないしＨＤＬを挙げたのは例示 のためであって、これに限定されるものではない。 本発明は、肝細胞選択性搬送剤として提示されているけれども、本発明の原理 を、他の組織、例えば、脾臓、副腎、前立腺、卵巣、リンパ節などに対する、組 織特異的搬送剤の製造に応用することは可能である。組織特異的標的化合物は、 各組織タイプに固有の、既存の細胞摂取経路を利用している。すなわち、その方 法は肝細胞におけるキロミクロン残留物受容体を用いて、肝臓組織の脂質代謝を 利用した場合と同様である。 さらに注意しなければならないことは、ここに示した試験において選択され、 使用された動物モデル、具体的に言えばラットとイヌであるが、これらが、ヒト の肝臓ときわめてよく似た肝臓生理を持っていることは周知のことだということ である。 本発明はこれまで特定の実施態様と応用に関連して説明されてきたけれども、 この分野に熟練した人ならば、ここに教示されていることに鑑みて、請求の範囲 に記載された発明の範囲を逸脱することなく、その精神から遊離することなく、 別様の態様を生み出すことは可能である。したがって、この開示における図面お よび説明は、発明の理解を促進するために提出されたものであって、本発明の範 囲を制限するためのものではないと理解されなければならない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ロンジノ，マーク，エー. アメリカ合衆国．48108 ミシガン，アン アーバー，カールトン ドライヴ 2829 (72)発明者 ウェイチャート，ジャメイ，ピー. アメリカ合衆国．48103 ミシガン，アン アーバー，ワインズ ドライヴ 1230 (72)発明者 バカン，ダグラス，エー. アメリカ合衆国．9211−2789 カリフォル ニア，サンディエゴ，バーンズ キャニオ ン ロード 10030 モレキュラー バイ オシステムズ，インク.

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．親油性核が極性脂質の単分子層で取り囲まれた水中油型乳剤であって、乳剤 の油相の、平均粒径が５０から２００ｎｍの間にあり、かつ、粒子の９８％を越 えるものが３００ｎｍ未満であり、親油性核が、診断的に、治療的に、生物学的 に、活性なまたは非活性な少なくとも一つの親油性ないし両親媒性薬剤を含んで おり、単分子層が乳化剤と、アポ蛋白Ｅとの会合を促進するのに十分な量のコレ ステロールとを含むことを特徴とする水中油型乳剤。 ２．親油性核が乳剤の５０％（w/v）以下を形成することを特徴とする請求項１ の水中油型乳剤。 ３．親油性核が乳剤の約１０から３０％（w/v）を形成することを特徴とする請 求項２の水中油型乳剤。 ４．少なくとも一つの親油性ないし両親媒性薬剤が製薬学的に受容可能な非極性 脂質であることを特徴とする請求項１の水中油型乳剤。 ５．製薬学的に受容可能な非極性脂質がトリグリセリドであることを特徴とする 請求項４の水中油型乳剤。 ６．トリグリセリドが、大豆油、サフラワー油、綿実油、および、魚油からなる 群から選ばれた動物性ないし植物性起源の油であることを特徴とする請求項５の 水中油型乳剤。 ７．トリグリセリドが、合成ないし半合成脂質であることを特徴とする請求項５ の水中油型乳剤。 ８．合成ないし半合成脂質がトリオレインであることを特徴とする請求項７の水 中油型乳剤。 ９．トリグリセリドがハロンゲン化トリグリセリドであることを特徴とする請求 項７の水中油型乳剤。 １０．親油性核が少なくとも一つの薬理学的に不活性な非極性脂質、および、親 油性ないし両親媒性薬剤を含むことを特徴とする請求項１の水中油型乳剤。 １１．親油性核が少なくとも一つの薬理学的に不活性な、受容可能な非極性脂質 、および、ハロゲン化トリグリセリドを含むことを特徴とする請求項１０の水中 油型乳剤。 １２．乳剤の１０％（w/v）以下が乳化剤であることを特徴とする請求項１の水 中油型乳剤。 １３．乳剤の約２．４％から４．８％（w/v）が乳化剤であることを特徴とする 請求項１２の水中油型乳剤。 １４．乳化剤が、天然、合成、または、半合成の燐脂質であることを特徴とする 請求項１２の水中油型乳剤。 １５．燐脂質が合成ないし半合成であることを特徴とする請求項１４の水中油型 乳剤。 １６．燐脂質がジオレオイルホスファチジルコリンであることを特徴とする請求 項１５の水中油型乳剤。 １７．アポ蛋白Ｅとの会合を促進するのに十分な量のコレステロールが、乳剤の 約５％（w/v）以下であることを特徴とする請求項１の水中油型乳剤。 １８．乳剤が、さらに、４００−５００mOsm/kgの浸透圧モル濃度を得るのに十 分な量の浸透圧モル濃度調節剤を含むことを特徴とする請求項１の水中油型乳剤 。 １９．浸透圧モル濃度調節剤が、５％（w/v）以下の無水グリセロールであるこ とを特徴とする請求項１８の水中油型乳剤。 ２０．さらに、乳剤の酸化を防ぐのに十分な量の抗酸化剤を含むことを特徴とす る請求項１の水中油型乳剤。 ２１．抗酸化剤がα−トコフェロールであることを特徴とする請求項２０の水中 油型乳剤。 ２２．ａ）５０％（w/v）以下の製薬学的に受容可能な、天然、合成ないし半合 成起源の脂肪、または、油であって、薬理学的に不活性な非極性脂質、および／ または、親油性ないし両親媒性の、診断的、治療的、生物学的に活性ないし 非活性な薬剤、 ｂ）１０％（w/v）以下の燐脂質乳化剤、 ｃ）約５％（w/v）以下のコレステロール、 ｄ）５％（w/v）以下の浸透圧モル濃度調節剤、および、 ｅ）残分の残分は水、 からなることを特徴とする熱安定、肝細胞選択的水中油型乳剤。 ２３．さらに、抗酸化剤を含むことを特徴とする請求項２２の水中油型乳剤。 ２４．ａ）１０％と２０％（w/v）の間の薬理学的に不活性なトリグリセリドと ポリ・ハロゲン化トリグリセリドであって、ポリ・ヨー化トリグリセリドに対す る薬理学的に不活性なトリグリセリドのモル比が１に対して０．３−３．０の範 囲にあるもの、 ｂ）約２．４％（w/v）のジオレオイルホスファチヂルコリン、 ｃ）５％（w/v）以下のコレステロールであって、ジオレオイルホスファ チヂルコリンに対するコレステロールのモル比が０．０５から０．７０の範囲に あり、 ｄ）５％（w/v）グリセロール、 ｅ）０．１％α−トコフェロール、および、 ｆ）乳剤の残りは水からなり、乳剤の油相の平均粒径が５０から２００ｎ ｍの間にあり、粒子の９８％を越えるものが３００ｎｍ未満であることを特徴と する熱安定、肝細胞選択的水中油型乳剤。 ２５．薬理学的に不活性なトリグリセリドとポリハロゲン化トリグリセリドのモ ル比が１：１であることを特徴とする請求項２４の熱安定、肝細胞選択的水中油 型乳剤。 ２６．コレステロールの量が０．４から０．５％（w/v）の範囲にあることを特 徴とする請求項２４の熱安定、肝細胞選択的水中油型乳剤。 ２７．ジオレオイルホスファチヂルコリンに対するコレステロールのモル比が０ ． ４であることを特徴とする請求項２４の熱安定、肝細胞選択的水中油型乳剤。 ２８．ポリハロゲン化トリグリセリドが、３−置換−２，４，６−トリヨードフ ェニル脂肪鎖、または、モノヨードフェニル脂肪鎖を持つ１，３−二置換トリグ リセリド骨格を有するヨウ化アリール脂肪族トリグリセリド類似体からなる群か ら選ばれた親油性の診断薬剤であることを特徴とする請求項２４の熱安定、肝細 胞選択的水中油型乳剤。 ２９．ポリハロゲン化トリグリセリドが ２−オレオイルグリセロール−１，３ −ビス［７−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）ヘプタノエート ］であることを特徴とする請求項２８の熱安定、肝細胞選択的水中油型乳剤。 ３０．ポリハロゲン化トリグリセリドが ２−オレオイルグリセロール−１，３ −ビス［７−（３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル）ブタノエート］ であることを特徴とする請求項２９の熱安定、肝細胞選択的水中油型乳剤。 ３１．ポリハロゲン化トリグリセリドが、３−置換−２，４，６−トリヨードフ ェニル飽和ないし不飽和脂肪鎖、または、モノヨードフェニル脂肪鎖を持つ１， ２，３−三置換トリグリセリド骨格を有することを特徴とする請求項２４の熱安 定、肝細胞選択的水中油型乳剤。 ３２．ポリハロゲン化トリグリセリドが、フッ化トリグリセリドであることを特 徴とする請求項２４の熱安定、肝細胞選択的水中油型乳剤。 ３３．フッ化トリグリセリドが、グリセリル−２−オレオイル−１，３−ビス（ トリフルオロメチル）フェニル・アセテートであることを特徴とする請求項３２ の熱安定、肝細胞選択的水中油型乳剤。 ３４．フッ化トリグリセリドが、グリセリル−２−オレオイル−１，３−ビス（ ３，５−ビス−ヘキサフルオロイソプロピル）フェニル・ヘプタノエートである ことを特徴とする請求項３２の熱安定、肝細胞選択的水中油型乳剤。 ３５．ポリハロゲン化トリグリセリドのハロゲン類の少なくとも一つは放射性で あることを特徴とする請求項２４の熱安定、肝細胞選択的水中油型乳剤。 ３６．次の諸工程： ａ）磁気共鳴画像用診断剤を含む、請求項２４の水中油型乳剤の画像量を 投与すること、および ｂ）水中油型乳剤の画像量が画像を取るべき部位に達したとき、その部位 の磁気共鳴画像撮影を行うこと、 からなる磁気共鳴画像法。 ３７．次の諸工程： ａ）請求項２４の水中油型乳剤の画像量を哺乳動物に投与する、ここに、 水中油型乳剤はコンピュータ断層撮影用画像診断剤を含んでおり、 ｂ）水中油型乳剤の画像量が画像を取るべき部位に達したとき、その部位 のコンピュータ断層画像撮影を行うこと、 からなるコンピュータ断層画像撮影法。 ３８．治療を要する生物の治療法であって、治療的に活性な、親油性ないし両親 媒性薬剤を含む、請求項２２の水中油型乳剤の有効量を投与する工程からなるこ とを特徴とする治療法。 ３９．次の諸工程： ａ）非極性脂質、極性脂質乳化剤、および、その他の親油成分を含む水中 油型乳剤の親油成分をあらかじめ混合して予備混合脂質相を形成し、 ｂ）予備混合脂質相と水性成分をホモジェネートして粗製水中油型乳剤を 形成し、および、 ｃ）粗製水中油型乳剤を超高エネルギー混合処理し、油相の平均粒径が５ ０から２００ｎｍの間にあり、かつ、粒子の９８％を越えるものが３００ｎｍ未 満である微細な水中油型乳剤を生成する、 からなることを特徴とする熱安定性、肝細胞選択的水中油型乳剤の製造法 ４０．さらに、微細な水中油型乳剤を、連続濾過処理する工程を含むことを特徴 とする請求項３９の方法。 ４１．次の諸工程： ａ）水中油型乳剤の親油性成分であって、トリオレインとポリハロゲン化 トリグリセリドをモル比１：１で含む親油成分、燐脂質乳化剤を含む全乳剤の５ ０％（w/v）以下の量を占めるトリオレインとポリハロゲン化トリグリセリド、 １０％（w/v）の以下の量である燐脂質、および、コレステロールを予備混合し 、コレステロールが約５％（w/v）未満を形成し、そして燐脂質に対するモル比 が０．４として存在するようにする、 ｂ）親油成分の予備混合体に水性成分を加えるが、その水性成分が５％（ w/v）以下のグリセロールと残余の水からなるものであり、 ｃ）予備混合脂質相と水性成分とをホモジェネートして、粗製水中油型乳 剤を形成し、 ｄ）粗製水中油型乳剤を、超高エネルギー混合法で処理し、油相の平均粒 径が５０から２００ｎｍの間にあり、かつ、粒子の９８％を越えるものが３００ ｎｍ未満である、微細な水中油型乳剤を生成し、および、 ｅ）微細な水中油型乳剤を、小孔径を持つフィルターに連続的に通過させて 濾過することからなる、 方法によってつくられた熱安定性、肝細胞選択性の水中油型乳剤。