JPH09187274A - ウロキナーゼ前駆体の精製方法 - Google Patents
ウロキナーゼ前駆体の精製方法Info
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- JPH09187274A JPH09187274A JP290696A JP290696A JPH09187274A JP H09187274 A JPH09187274 A JP H09187274A JP 290696 A JP290696 A JP 290696A JP 290696 A JP290696 A JP 290696A JP H09187274 A JPH09187274 A JP H09187274A
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- Japan
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- urokinase
- culture solution
- adsorbed
- urokinase precursor
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ウロキナーゼ前駆体を簡易かつ高収率で精製
する方法、特にウロキナーゼ前駆体の培養液をそのまま
供することができる精製方法の提供。 【解決手段】 ウロキナーゼ前駆体およびその産生細胞
を含有する培養液を、流動層中に浮遊する吸着粒子に接
触させ、その吸着画分を回収する工程、特に該培養液を
吸着粒子が浮遊する流動層に上方送液することにより該
吸着粒子に接触させた後、溶出用緩衝液を下方送液する
ことによりその吸着画分を溶出、回収する工程を含むこ
とを特徴とするウロキナーゼ前駆体の精製方法である。
する方法、特にウロキナーゼ前駆体の培養液をそのまま
供することができる精製方法の提供。 【解決手段】 ウロキナーゼ前駆体およびその産生細胞
を含有する培養液を、流動層中に浮遊する吸着粒子に接
触させ、その吸着画分を回収する工程、特に該培養液を
吸着粒子が浮遊する流動層に上方送液することにより該
吸着粒子に接触させた後、溶出用緩衝液を下方送液する
ことによりその吸着画分を溶出、回収する工程を含むこ
とを特徴とするウロキナーゼ前駆体の精製方法である。
Description
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は細胞培養あるいは遺
伝子工学由来により得られるウロキナーゼ(UK)前駆
体の簡易かつ高収率な精製方法に関する。
伝子工学由来により得られるウロキナーゼ(UK)前駆
体の簡易かつ高収率な精製方法に関する。
【0002】
【従来の技術】UK前駆体は、それ自身では線溶作用を
発現しないものであり、またフィブリンに対する親和性
が高く、血漿中のフィブリノーゲンに作用(分解)する
ことなく、血栓を構成するフィブリンに到達し、血栓中
の微量のプラスミンの作用により線溶活性を発現する
(特開昭60−62981号公報参照)。即ち、UK前
駆体は血栓部位に限定した線溶を惹起させ、選択的かつ
効率的に血栓を溶解する特性を有するため、血管栓塞疾
患の治療剤として有望視され、既に一部の適応症におい
て臨床使用されている。
発現しないものであり、またフィブリンに対する親和性
が高く、血漿中のフィブリノーゲンに作用(分解)する
ことなく、血栓を構成するフィブリンに到達し、血栓中
の微量のプラスミンの作用により線溶活性を発現する
(特開昭60−62981号公報参照)。即ち、UK前
駆体は血栓部位に限定した線溶を惹起させ、選択的かつ
効率的に血栓を溶解する特性を有するため、血管栓塞疾
患の治療剤として有望視され、既に一部の適応症におい
て臨床使用されている。
【0003】その精製方法としては、培養上清を陽イオ
ン交換体処理後に抗体アフィニティクロマトグラフィー
処理する方法(特開昭60−62981号公報)、固定
化ベンズアミジン処理する方法(特開平1−30488
1号公報)、キレート樹脂による処理(特開昭63−1
46789号公報)等が知られている。
ン交換体処理後に抗体アフィニティクロマトグラフィー
処理する方法(特開昭60−62981号公報)、固定
化ベンズアミジン処理する方法(特開平1−30488
1号公報)、キレート樹脂による処理(特開昭63−1
46789号公報)等が知られている。
【0004】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、大量に
産生したUK前駆体を含有する培養液を精製するに際
し、培養液をバッチ方式で処理する場合は、大量処理が
容易で、精製効率も良好であるが、操作性が悪く、自動
化工程の導入が困難である。また、カラム方式で処理す
る場合は逆に、自動化工程の導入が容易であるが、大量
処理には不向きであり、精製効率も若干劣る等の問題点
がある。さらに、培養液にはUK前駆体産生細胞/宿
主、その破砕物を含む不溶性物質が多数混入しており、
上記処理を妨げる原因となっている。
産生したUK前駆体を含有する培養液を精製するに際
し、培養液をバッチ方式で処理する場合は、大量処理が
容易で、精製効率も良好であるが、操作性が悪く、自動
化工程の導入が困難である。また、カラム方式で処理す
る場合は逆に、自動化工程の導入が容易であるが、大量
処理には不向きであり、精製効率も若干劣る等の問題点
がある。さらに、培養液にはUK前駆体産生細胞/宿
主、その破砕物を含む不溶性物質が多数混入しており、
上記処理を妨げる原因となっている。
【0005】また、最近、培養後の菌体細胞の除去や濃
縮操作等の前処理を行わず、培養原液から直接目的のタ
ンパク質を回収する方法が開発されている〔ファルマシ
ア社が開発している吸着流動床技術(Expanded Bed Ads
orption)を用いたストリームライン法等、特表平6−5
00050号公報〕。今までこのような吸着流動床技術
がUK前駆体の精製、特にヒト腎細胞培養液からUK前
駆体を回収・精製するために応用された例はなく、実際
にこの方法がUK前駆体精製の合理化、収量アップを図
るのに有用であるか、また品質を損なうことなく、短時
間に精製できる等についてはまったく知られていない。
縮操作等の前処理を行わず、培養原液から直接目的のタ
ンパク質を回収する方法が開発されている〔ファルマシ
ア社が開発している吸着流動床技術(Expanded Bed Ads
orption)を用いたストリームライン法等、特表平6−5
00050号公報〕。今までこのような吸着流動床技術
がUK前駆体の精製、特にヒト腎細胞培養液からUK前
駆体を回収・精製するために応用された例はなく、実際
にこの方法がUK前駆体精製の合理化、収量アップを図
るのに有用であるか、また品質を損なうことなく、短時
間に精製できる等についてはまったく知られていない。
【0006】本発明の目的は、UK前駆体を簡易かつ高
収率で精製する方法を提供することにある。
収率で精製する方法を提供することにある。
【0007】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意検討を行った結果、UK前駆体を含有
する培養液をUK前駆体産生細胞/宿主を含んだままの
状態で、即ちこれらを含む不溶性物質等を予め除去操作
を行うことなく、高収率でしかも簡潔にUK前駆体を精
製できることを見出して、本発明を完成した。
を達成すべく鋭意検討を行った結果、UK前駆体を含有
する培養液をUK前駆体産生細胞/宿主を含んだままの
状態で、即ちこれらを含む不溶性物質等を予め除去操作
を行うことなく、高収率でしかも簡潔にUK前駆体を精
製できることを見出して、本発明を完成した。
【0008】即ち本発明は、(1) UK前駆体およびその
産生細胞を含有する培養液を、流動層中に浮遊する吸着
粒子に接触させ、その吸着画分を回収する工程を含むこ
とを特徴とするUK前駆体の精製方法、(2) UK前駆体
およびその産生細胞を含有する培養液を、吸着粒子が浮
遊する流動層に上方送液することにより該吸着粒子に接
触させた後、溶出用緩衝液を下方送液することによりそ
の吸着画分を溶出、回収する工程を含むことを特徴とす
るUK前駆体の精製方法に関する。
産生細胞を含有する培養液を、流動層中に浮遊する吸着
粒子に接触させ、その吸着画分を回収する工程を含むこ
とを特徴とするUK前駆体の精製方法、(2) UK前駆体
およびその産生細胞を含有する培養液を、吸着粒子が浮
遊する流動層に上方送液することにより該吸着粒子に接
触させた後、溶出用緩衝液を下方送液することによりそ
の吸着画分を溶出、回収する工程を含むことを特徴とす
るUK前駆体の精製方法に関する。
【0009】
【発明の実施の形態】本発明においてUK前駆体とは、
そのままではほとんど線溶活性を有しないが、プラスミ
ン等の酵素処理により、UKに変換されて線溶活性を示
すものである。また、フィブリン存在下でも若干の線溶
活性を示すものである。例えば、その分子量は50,0
00〜55,000で、一本鎖のペプチド結合構造を有
するものである。このようなUK前駆体としては、例え
ば構成アミノ酸411個のものが挙げられる(アミノ酸
配列は特開昭60−62981号公報参照)。
そのままではほとんど線溶活性を有しないが、プラスミ
ン等の酵素処理により、UKに変換されて線溶活性を示
すものである。また、フィブリン存在下でも若干の線溶
活性を示すものである。例えば、その分子量は50,0
00〜55,000で、一本鎖のペプチド結合構造を有
するものである。このようなUK前駆体としては、例え
ば構成アミノ酸411個のものが挙げられる(アミノ酸
配列は特開昭60−62981号公報参照)。
【0010】本発明の精製に供せられるUK前駆体の調
製方法は特に制限されず、例えば細胞培養法、遺伝子工
学法等により調製される。細胞培養法は特開昭60−6
2981号公報等に、遺伝子工学法は特開昭60−18
0591号公報、特開昭61−177987号公報、特
開昭62−149625号公報、特開昭63−1056
75号公報等に開示されている。
製方法は特に制限されず、例えば細胞培養法、遺伝子工
学法等により調製される。細胞培養法は特開昭60−6
2981号公報等に、遺伝子工学法は特開昭60−18
0591号公報、特開昭61−177987号公報、特
開昭62−149625号公報、特開昭63−1056
75号公報等に開示されている。
【0011】本発明でいうUK前駆体は上記のものに限
定されず、その誘導体をも包含する。かかる誘導体とし
ては、UK前駆体のエピダーマルグロースファクタード
メインの全領域もしくはその一部を欠失、または該全領
域もしくはその一部を他のアミノ酸残基で置換されてい
る蛋白質分子等が挙げられる(特開昭63−14678
9号公報、特開平3−87180号公報、特開平3−8
7181号公報、特開平5−95786号公報、特開平
5−192142号公報等)。従って、特に言及しない
限り、本明細書においてUK前駆体とはUK前駆体自体
および上記のごときUK前駆体誘導体をも意味するもの
である。
定されず、その誘導体をも包含する。かかる誘導体とし
ては、UK前駆体のエピダーマルグロースファクタード
メインの全領域もしくはその一部を欠失、または該全領
域もしくはその一部を他のアミノ酸残基で置換されてい
る蛋白質分子等が挙げられる(特開昭63−14678
9号公報、特開平3−87180号公報、特開平3−8
7181号公報、特開平5−95786号公報、特開平
5−192142号公報等)。従って、特に言及しない
限り、本明細書においてUK前駆体とはUK前駆体自体
および上記のごときUK前駆体誘導体をも意味するもの
である。
【0012】このUK前駆体誘導体は通常、分子量4
0,000〜55,000程度で、UK前駆体自体と同
様に一本鎖ペプチド結合構造を有する。また、その線溶
活性の発現様式も上記UK前駆体自体と同じである。こ
の誘導体は、例えば遺伝子工学的な手法により調製され
る(特開昭60−146789号公報参照)。また、U
K前駆体誘導体にはUK前駆体とアネキシンVとの複合
体も含まれる。この複合体の調製方法もまた、公知であ
る(特表平5−508664号公報)。
0,000〜55,000程度で、UK前駆体自体と同
様に一本鎖ペプチド結合構造を有する。また、その線溶
活性の発現様式も上記UK前駆体自体と同じである。こ
の誘導体は、例えば遺伝子工学的な手法により調製され
る(特開昭60−146789号公報参照)。また、U
K前駆体誘導体にはUK前駆体とアネキシンVとの複合
体も含まれる。この複合体の調製方法もまた、公知であ
る(特表平5−508664号公報)。
【0013】本発明に用いられる吸着粒子は、UK前駆
体を吸着するものであり、陽イオン交換基を有する担体
(陽イオン吸着体)が挙げられる。具体的には、スルホ
基型、カルボキシル基型等の吸着粒子が例示される。ス
ルホ基型としては、スルホ−アガロース〔商品名:スト
リームラインSP,S−セファロース(共にファルマシ
ア社製)〕、スルホ−セルロース〔商品名:S−セルロ
ファイン(チッソ社製)〕、スルホプロピル−アガロー
ス〔商品名:SP−セファロース(ファルマシア社
製),SP−セルスル−ビッグビーズ(ステロジーン社
製)〕、スルホプロピル−デキストラン〔商品名:SP
−セファデックス(ファルマシア社製)〕、スルホプロ
ピル−ポリビニル〔商品名:SP−トヨパール(東ソー
社製)〕等が例示される。また、カルボキシル基型とし
ては、カルボキシメチル−アガロース〔商品名:CMセ
ルスル−ビッグビーズ(ステロジーン社製)〕、カルボ
キシメチル−デキストラン〔商品名:CM−セファデッ
クス(ファルマシア社製)〕、カルボキシメチル−セル
ロース〔商品名:CM−セルロファイン(チッソ社
製)〕等が例示される。好ましくは、スルホ基型の強陽
イオン吸着粒子であり、より好ましくは、ストリームラ
インSP(ファルマシア社製)である。また用いられる
吸着粒子の粒子径としては、通常30〜1100μm、
好ましくは100〜300μmが例示される。
体を吸着するものであり、陽イオン交換基を有する担体
(陽イオン吸着体)が挙げられる。具体的には、スルホ
基型、カルボキシル基型等の吸着粒子が例示される。ス
ルホ基型としては、スルホ−アガロース〔商品名:スト
リームラインSP,S−セファロース(共にファルマシ
ア社製)〕、スルホ−セルロース〔商品名:S−セルロ
ファイン(チッソ社製)〕、スルホプロピル−アガロー
ス〔商品名:SP−セファロース(ファルマシア社
製),SP−セルスル−ビッグビーズ(ステロジーン社
製)〕、スルホプロピル−デキストラン〔商品名:SP
−セファデックス(ファルマシア社製)〕、スルホプロ
ピル−ポリビニル〔商品名:SP−トヨパール(東ソー
社製)〕等が例示される。また、カルボキシル基型とし
ては、カルボキシメチル−アガロース〔商品名:CMセ
ルスル−ビッグビーズ(ステロジーン社製)〕、カルボ
キシメチル−デキストラン〔商品名:CM−セファデッ
クス(ファルマシア社製)〕、カルボキシメチル−セル
ロース〔商品名:CM−セルロファイン(チッソ社
製)〕等が例示される。好ましくは、スルホ基型の強陽
イオン吸着粒子であり、より好ましくは、ストリームラ
インSP(ファルマシア社製)である。また用いられる
吸着粒子の粒子径としては、通常30〜1100μm、
好ましくは100〜300μmが例示される。
【0014】接触条件としては、pH4.5〜6.5程
度、好ましくはpH5〜6程度、塩濃度0.01〜0.
3M程度、好ましくは0.1〜0.2M程度が例示され
る。吸着粒子は、予め上記のような接触条件で平衡化し
ておくことが好ましい。具体的には、0.16Mのリン
酸緩衝液(pH5.5)で平衡化しておくことが好まし
い。
度、好ましくはpH5〜6程度、塩濃度0.01〜0.
3M程度、好ましくは0.1〜0.2M程度が例示され
る。吸着粒子は、予め上記のような接触条件で平衡化し
ておくことが好ましい。具体的には、0.16Mのリン
酸緩衝液(pH5.5)で平衡化しておくことが好まし
い。
【0015】吸着粒子の平衡化、吸着層への試料の注
入、吸着粒子への接触および吸着層からの溶出は、通常
下記の方法に従って行われる。即ち、まず前述の吸着粒
子を適当なカラムに充填し沈降させた後、当該カラム下
部出口から上方向に平衡化緩衝液を送液し、吸着粒子を
浮遊させる。この際、カラム内では、カラム下から上昇
する緩衝液の流速と重力により沈降する吸着粒子が互い
の力を打ち消しあって、吸着粒子による均一な浮遊平衡
状態が形成される(これを流動層という)。ついで、か
かる流動層が形成されたカラム内に、前述のようにして
調製されたUK前駆体を含有する培養液をカラム下部出
口から上方送液により添加する。この際、目的のUK前
駆体は吸着粒子と結合し、一方、UK前駆体産生細胞/
宿主、その破砕物や培養液に由来する微粒子および夾雑
物は流動層の吸着粒子を素通りしてカラム上部出口から
排出除去され、また吸着粒子にゆるく結合した夾雑成分
も、引き続いて上方送液される洗浄用緩衝液で洗い流さ
れる。好ましくは、吸着流動床技術に従って行われる
〔Journal of Chromatography, 597 (1992), 129-14
5〕。
入、吸着粒子への接触および吸着層からの溶出は、通常
下記の方法に従って行われる。即ち、まず前述の吸着粒
子を適当なカラムに充填し沈降させた後、当該カラム下
部出口から上方向に平衡化緩衝液を送液し、吸着粒子を
浮遊させる。この際、カラム内では、カラム下から上昇
する緩衝液の流速と重力により沈降する吸着粒子が互い
の力を打ち消しあって、吸着粒子による均一な浮遊平衡
状態が形成される(これを流動層という)。ついで、か
かる流動層が形成されたカラム内に、前述のようにして
調製されたUK前駆体を含有する培養液をカラム下部出
口から上方送液により添加する。この際、目的のUK前
駆体は吸着粒子と結合し、一方、UK前駆体産生細胞/
宿主、その破砕物や培養液に由来する微粒子および夾雑
物は流動層の吸着粒子を素通りしてカラム上部出口から
排出除去され、また吸着粒子にゆるく結合した夾雑成分
も、引き続いて上方送液される洗浄用緩衝液で洗い流さ
れる。好ましくは、吸着流動床技術に従って行われる
〔Journal of Chromatography, 597 (1992), 129-14
5〕。
【0016】溶出用緩衝液としては、平衡化緩衝液が用
いられる。目的タンパク質であるUK前駆体の回収は、
送液方向を逆転し、溶出用緩衝液をカラム上部出口から
下方向に送液することにより行われる。UK前駆体の溶
出条件としては、pH7.5〜9.5程度、好ましくは
pH8〜9程度、塩濃度0.01〜0.3M程度、好ま
しくは0.1〜0.2M程度が例示される。溶出用緩衝
液としてより具体的には、0.16Mのリン酸緩衝液
(pH8.5)が例示される。上記の吸着粒子の平衡
化、吸着体への試料の注入、接触および溶出等の操作
は、ストリームラインカラム(吸着体:ストリームライ
ンSP、ファルマシア社製)を備したストリームライン
システム(ファルマシア社製)を用いることにより、よ
り簡便に効率よく、かつ再現性よく行うことができる。
いられる。目的タンパク質であるUK前駆体の回収は、
送液方向を逆転し、溶出用緩衝液をカラム上部出口から
下方向に送液することにより行われる。UK前駆体の溶
出条件としては、pH7.5〜9.5程度、好ましくは
pH8〜9程度、塩濃度0.01〜0.3M程度、好ま
しくは0.1〜0.2M程度が例示される。溶出用緩衝
液としてより具体的には、0.16Mのリン酸緩衝液
(pH8.5)が例示される。上記の吸着粒子の平衡
化、吸着体への試料の注入、接触および溶出等の操作
は、ストリームラインカラム(吸着体:ストリームライ
ンSP、ファルマシア社製)を備したストリームライン
システム(ファルマシア社製)を用いることにより、よ
り簡便に効率よく、かつ再現性よく行うことができる。
【0017】本発明の方法により得られたUK前駆体は
引き続き、通常の精製方法を施すことにより、さらに高
度に精製することができる。用いられる精製方法として
は、抗体アフィニティクロマトグラフィーによる処理
(特開昭60−62981号公報)、固定化ベンズアミ
ジン処理(特開平1−304881号公報)、キレート
樹脂による処理(特開昭63−146789号公報)等
が例示される。こうして得られた精製UK前駆体は生化
学用、薬学用、医学用の試薬として用いてもよい。医薬
品として用いる場合は医薬品製造の通常の技術に従って
行われる。例えば、加熱処理、除菌濾過、凍結乾燥、小
分け分注、製剤化等が挙げられる。また、精製工程中ま
たは精製後において、UK前駆体含有溶液中に公知の安
定化剤を添加することもできる。これら安定化剤として
は、例えばアルブミン、ゼラチン、アミノ酸(特に塩基
性アミノ酸)、有機酸またはその塩、無機酸またはその
塩、非イオン系界面活性剤、デキストラン等が挙げられ
る。
引き続き、通常の精製方法を施すことにより、さらに高
度に精製することができる。用いられる精製方法として
は、抗体アフィニティクロマトグラフィーによる処理
(特開昭60−62981号公報)、固定化ベンズアミ
ジン処理(特開平1−304881号公報)、キレート
樹脂による処理(特開昭63−146789号公報)等
が例示される。こうして得られた精製UK前駆体は生化
学用、薬学用、医学用の試薬として用いてもよい。医薬
品として用いる場合は医薬品製造の通常の技術に従って
行われる。例えば、加熱処理、除菌濾過、凍結乾燥、小
分け分注、製剤化等が挙げられる。また、精製工程中ま
たは精製後において、UK前駆体含有溶液中に公知の安
定化剤を添加することもできる。これら安定化剤として
は、例えばアルブミン、ゼラチン、アミノ酸(特に塩基
性アミノ酸)、有機酸またはその塩、無機酸またはその
塩、非イオン系界面活性剤、デキストラン等が挙げられ
る。
【0018】
【実施例】以下、本発明をより詳細に説明するため、実
施例を挙げるが、本発明はこれらの実施例によってなん
ら限定されるものではない。
施例を挙げるが、本発明はこれらの実施例によってなん
ら限定されるものではない。
【0019】実施例1 培養液の調製 培養ヒト腎細胞を0.1%ヒト血清アルブミンを添加し
た無血清培地に3日間培養し、培養液を遠心分離し、そ
の上清を回収した。この培養上清をpH5.5に調整し
た。
た無血清培地に3日間培養し、培養液を遠心分離し、そ
の上清を回収した。この培養上清をpH5.5に調整し
た。
【0020】吸着粒子処理(ストリームラインSP処
理) 0.16Mリン酸緩衝液(pH5.5)で平衡化したス
トリームラインSPカラム(C50、5×100cm:
ゲル量300ml、ファルマシア社製)に、培養液(上
清)を上方送液することにより添加した(攪拌しながら
流速300〜500cm/hで添加)。次にカラムを、
平衡化に用いた緩衝液と同じ緩衝液を上昇法で送液する
ことにより洗浄し(条件:流速300〜500cm/
h)、ついで送液方向を逆転させて、溶出用緩衝液
〔0.16Mリン酸緩衝液(pH8.5)〕を送液(流
速:100cm/h)して、UK前駆体を含有する画分
を得た。なお、溶出するUK前駆体含有画分の検出は2
80nmにおける吸光度を測定することによって行っ
た。アプライ線流速300cm/hの場合を表1に、5
00cm/hの場合を表2に示す。
理) 0.16Mリン酸緩衝液(pH5.5)で平衡化したス
トリームラインSPカラム(C50、5×100cm:
ゲル量300ml、ファルマシア社製)に、培養液(上
清)を上方送液することにより添加した(攪拌しながら
流速300〜500cm/hで添加)。次にカラムを、
平衡化に用いた緩衝液と同じ緩衝液を上昇法で送液する
ことにより洗浄し(条件:流速300〜500cm/
h)、ついで送液方向を逆転させて、溶出用緩衝液
〔0.16Mリン酸緩衝液(pH8.5)〕を送液(流
速:100cm/h)して、UK前駆体を含有する画分
を得た。なお、溶出するUK前駆体含有画分の検出は2
80nmにおける吸光度を測定することによって行っ
た。アプライ線流速300cm/hの場合を表1に、5
00cm/hの場合を表2に示す。
【0021】
【表1】
【0022】
【表2】
【0023】
【発明の効果】本発明によれば、UK前駆体を含有する
培養液をUK前駆体産生細胞/宿主、その破砕物を含ん
だままの状態で、即ちこれらを含む不溶性物質等を予め
除去操作を行うことなく、高収率でしかも簡潔にUK前
駆体を精製できる。
培養液をUK前駆体産生細胞/宿主、その破砕物を含ん
だままの状態で、即ちこれらを含む不溶性物質等を予め
除去操作を行うことなく、高収率でしかも簡潔にUK前
駆体を精製できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 大野 和雅 大阪府枚方市招提大谷2丁目25番1号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内 (72)発明者 天辻 康夫 大阪府枚方市招提大谷2丁目25番1号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内 (72)発明者 三宅 正一 大阪府大阪市都島区都島中通3−5−44 株式会社ミドリ十字都島工場内
Claims (2)
- 【請求項1】 ウロキナーゼ前駆体およびその産生細胞
を含有する培養液を、流動層中に浮遊する吸着粒子に接
触させ、その吸着画分を回収する工程を含むことを特徴
とするウロキナーゼ前駆体の精製方法。 - 【請求項2】 ウロキナーゼ前駆体およびその産生細胞
を含有する培養液を、吸着粒子が浮遊する流動層に上方
送液することにより該吸着粒子に接触させた後、溶出用
緩衝液を下方送液することによりその吸着画分を溶出、
回収する工程を含むことを特徴とするウロキナーゼ前駆
体の精製方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP290696A JPH09187274A (ja) | 1996-01-11 | 1996-01-11 | ウロキナーゼ前駆体の精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP290696A JPH09187274A (ja) | 1996-01-11 | 1996-01-11 | ウロキナーゼ前駆体の精製方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH09187274A true JPH09187274A (ja) | 1997-07-22 |
Family
ID=11542411
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP290696A Pending JPH09187274A (ja) | 1996-01-11 | 1996-01-11 | ウロキナーゼ前駆体の精製方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH09187274A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002315596A (ja) * | 2000-05-25 | 2002-10-29 | Takeda Chem Ind Ltd | 精製抗原の製造法 |
JP2010515441A (ja) * | 2007-01-15 | 2010-05-13 | アップフロント・クロマトグラフィ・アクティーゼルスカブ | 原材料からのバイオ燃料およびタンパク質の製造 |
-
1996
- 1996-01-11 JP JP290696A patent/JPH09187274A/ja active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002315596A (ja) * | 2000-05-25 | 2002-10-29 | Takeda Chem Ind Ltd | 精製抗原の製造法 |
JP2010515441A (ja) * | 2007-01-15 | 2010-05-13 | アップフロント・クロマトグラフィ・アクティーゼルスカブ | 原材料からのバイオ燃料およびタンパク質の製造 |
US8815551B2 (en) | 2007-01-15 | 2014-08-26 | Upfront Chromatography A/S | Production of biofuel and protein from a raw material |
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