JPH0775557A - ドコサヘキサエン酸含有藻類の培養方法 - Google Patents
ドコサヘキサエン酸含有藻類の培養方法Info
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- JPH0775557A JPH0775557A JP5248850A JP24885093A JPH0775557A JP H0775557 A JPH0775557 A JP H0775557A JP 5248850 A JP5248850 A JP 5248850A JP 24885093 A JP24885093 A JP 24885093A JP H0775557 A JPH0775557 A JP H0775557A
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 従属栄養で生育し、ドコサヘキサエン酸を産
生する藻類、例えばCrypthecodinium cohniiを培養する
にあたり、培養中、とくに指数増殖中期以降、培養液の
食塩濃度を前記藻類の生育に好適な食塩濃度より０．１
〜１０重量％高い値に設定して培養する。 【効果】 任意の培養時期に、藻体中にドコサヘキサエ
ン酸を多量に含む極性脂質を高濃度に含有する藻類細胞
を得ることができる。このため、効率良く、製造コスト
の安いドコサヘキサエン酸含有藻類を生産することが可
能となる。
生する藻類、例えばCrypthecodinium cohniiを培養する
にあたり、培養中、とくに指数増殖中期以降、培養液の
食塩濃度を前記藻類の生育に好適な食塩濃度より０．１
〜１０重量％高い値に設定して培養する。 【効果】 任意の培養時期に、藻体中にドコサヘキサエ
ン酸を多量に含む極性脂質を高濃度に含有する藻類細胞
を得ることができる。このため、効率良く、製造コスト
の安いドコサヘキサエン酸含有藻類を生産することが可
能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、従属栄養で生育し、ド
コサヘキサエン酸（以下、ＤＨＡと略す。）を産生する
能力のある藻類を培養し、その藻体内にＤＨＡ含有極性
脂質を豊富に蓄積せしめる前記藻類の培養方法に関す
る。
コサヘキサエン酸（以下、ＤＨＡと略す。）を産生する
能力のある藻類を培養し、その藻体内にＤＨＡ含有極性
脂質を豊富に蓄積せしめる前記藻類の培養方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】ＤＨＡは、近年、種々の生理活性を有す
る高度不飽和脂肪酸の一種として注目されている。これ
を産生する能力のある藻類として、例えばアムフィディ
ニウム（Amphidinium)属等の藻類が報告されており（J.
Protozoal 、第１７巻（２）、第２１３〜２１９頁、１
９７０年）、またイソクリシス（Isochrysis) 属のＤＨ
Ａ産生藻類の生産が試みられている（特開平４−346760
号公報）。しかしながら、それらはいずれも独立栄養で
生育する藻類であり、培養コストが高くつくだけでな
く、藻体中の油分含量が低く、満足できるＤＨＡ含有油
脂を生産できるまでには至っていない。一方、従属栄養
により生育するＤＨＡ産生藻類としてはクリプセコディ
ニウム（Crypthecodinium)属に属する藻類が知られてい
る(Phytochemistry 、第２７巻（６）、第１６７９〜１
６８３頁、１９８８年）。
る高度不飽和脂肪酸の一種として注目されている。これ
を産生する能力のある藻類として、例えばアムフィディ
ニウム（Amphidinium)属等の藻類が報告されており（J.
Protozoal 、第１７巻（２）、第２１３〜２１９頁、１
９７０年）、またイソクリシス（Isochrysis) 属のＤＨ
Ａ産生藻類の生産が試みられている（特開平４−346760
号公報）。しかしながら、それらはいずれも独立栄養で
生育する藻類であり、培養コストが高くつくだけでな
く、藻体中の油分含量が低く、満足できるＤＨＡ含有油
脂を生産できるまでには至っていない。一方、従属栄養
により生育するＤＨＡ産生藻類としてはクリプセコディ
ニウム（Crypthecodinium)属に属する藻類が知られてい
る(Phytochemistry 、第２７巻（６）、第１６７９〜１
６８３頁、１９８８年）。
【０００３】従来、従属栄養的に生育する微生物や藻類
による油脂の生産においては、菌体あるいは藻体内へ油
脂分を蓄積させる手法に関心がもたれ、研究が推進され
てきた。すなわち前記生物細胞内への油分の蓄積は一般
に主としてトリグリセリドいわゆる中性脂質の型で行わ
れ、多量に蓄積した場合、それらトリグリセリドは細胞
中で油滴のような形態で蓄積される。そして細胞内へ多
量の油分を蓄積させる方法としては、培地組成のＣ／Ｎ
比率を高くし、あるいは窒素源の欠乏状態を人為的に与
える手法等が使われてきた。（「油脂」、第２４巻
（５）、第１２６〜１３５頁、１９７１年）。
による油脂の生産においては、菌体あるいは藻体内へ油
脂分を蓄積させる手法に関心がもたれ、研究が推進され
てきた。すなわち前記生物細胞内への油分の蓄積は一般
に主としてトリグリセリドいわゆる中性脂質の型で行わ
れ、多量に蓄積した場合、それらトリグリセリドは細胞
中で油滴のような形態で蓄積される。そして細胞内へ多
量の油分を蓄積させる方法としては、培地組成のＣ／Ｎ
比率を高くし、あるいは窒素源の欠乏状態を人為的に与
える手法等が使われてきた。（「油脂」、第２４巻
（５）、第１２６〜１３５頁、１９７１年）。
【０００４】すなわち従属栄養的に生育する藻類では、
油分の大部分が主として中性脂質として藻体内に蓄積さ
れることは知られていた。例えば前記Phytochemistry、
第２７巻（６）、第１６７９〜１６８３頁、１９８８年
によれば、クリプセコディニウム コーニー（Crypthec
odinium cohnii）の培養藻体中の油分は、その約７２％
がトリアシルグリセリドを主体とする中性脂質、約２８
％がホスファチジルコリン等のリン脂質を主体とする極
性脂質として存在し、さらにかかるリン脂質の構成脂肪
酸の主要脂肪酸はＤＨＡ等の高度不飽和脂肪酸である。
油分の大部分が主として中性脂質として藻体内に蓄積さ
れることは知られていた。例えば前記Phytochemistry、
第２７巻（６）、第１６７９〜１６８３頁、１９８８年
によれば、クリプセコディニウム コーニー（Crypthec
odinium cohnii）の培養藻体中の油分は、その約７２％
がトリアシルグリセリドを主体とする中性脂質、約２８
％がホスファチジルコリン等のリン脂質を主体とする極
性脂質として存在し、さらにかかるリン脂質の構成脂肪
酸の主要脂肪酸はＤＨＡ等の高度不飽和脂肪酸である。
【０００５】したがって油分を構成する脂肪酸のうち、
ＤＨＡ等の高度不飽和脂肪酸以外のパルミチン酸、オレ
イン酸等の脂肪酸は主としてトリアシルグリセリドのよ
うな中性脂質として存在し、一方、ＤＨＡ等の高度不飽
和脂肪酸はリン脂質や糖脂質といった極性脂質の形態で
藻体中に存在する傾向があると考えられる。しかしなが
ら、ＤＨＡ産生能のある藻類を対象とし、その藻体中に
ＤＨＡ含有極性脂質を多量に蓄積せしめる試みは、これ
までに行われていなかった。
ＤＨＡ等の高度不飽和脂肪酸以外のパルミチン酸、オレ
イン酸等の脂肪酸は主としてトリアシルグリセリドのよ
うな中性脂質として存在し、一方、ＤＨＡ等の高度不飽
和脂肪酸はリン脂質や糖脂質といった極性脂質の形態で
藻体中に存在する傾向があると考えられる。しかしなが
ら、ＤＨＡ産生能のある藻類を対象とし、その藻体中に
ＤＨＡ含有極性脂質を多量に蓄積せしめる試みは、これ
までに行われていなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、従属
栄養で生育するＤＨＡ産生藻類を培養するにあたり、Ｄ
ＨＡ含有極性脂質を前記藻類の細胞内に豊富に蓄積せし
めることのできる培養方法を提供することにあり、ひい
ては効率良く、生産コストの低い工業的なＤＨＡ含有藻
類の生産法を提供することにある。
栄養で生育するＤＨＡ産生藻類を培養するにあたり、Ｄ
ＨＡ含有極性脂質を前記藻類の細胞内に豊富に蓄積せし
めることのできる培養方法を提供することにあり、ひい
ては効率良く、生産コストの低い工業的なＤＨＡ含有藻
類の生産法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意研究を行った結果、従属栄養的に培養
でき、なおかつＤＨＡを生産する能力のある単細胞藻類
の培養中に、培養液の食塩濃度を上昇させることによ
り、任意の培養時期に、藻体中のリン脂質や糖脂質等の
極性脂質濃度およびＤＨＡ含有量を顕著に上昇させるこ
とが可能であることを見出し、本発明を完成した。すな
わち本発明は、従属栄養で生育するＤＨＡ産生能のある
藻類を培養するにあたり、培養中、培養液の食塩濃度を
藻類の生育に好適な食塩濃度より０．１〜１０重量％高
い値に設定して培養することを特徴とする藻類の培養方
法に関する。
を達成すべく鋭意研究を行った結果、従属栄養的に培養
でき、なおかつＤＨＡを生産する能力のある単細胞藻類
の培養中に、培養液の食塩濃度を上昇させることによ
り、任意の培養時期に、藻体中のリン脂質や糖脂質等の
極性脂質濃度およびＤＨＡ含有量を顕著に上昇させるこ
とが可能であることを見出し、本発明を完成した。すな
わち本発明は、従属栄養で生育するＤＨＡ産生能のある
藻類を培養するにあたり、培養中、培養液の食塩濃度を
藻類の生育に好適な食塩濃度より０．１〜１０重量％高
い値に設定して培養することを特徴とする藻類の培養方
法に関する。
【０００８】本発明で用いる藻類は、従属栄養的に培養
が可能な、ＤＨＡを藻体内に産生、蓄積できる藻類であ
り、特にその種あるいは株を限定するものではない。こ
れに該当する藻類としては、例えば「微生物学辞典１９
９２年度版」（技報堂出版）によれば、有色藻門、渦鞭
毛藻綱、ペリディニウム目、クリプセコディニウム属に
属するクリプセコディニウム コーニー（Crypthecodin
ium cohnii）、トラウストキトリウム アウレウム（Th
raustochytrium aureum ）等があげられる。これらの藻
類は、American Type Culture Collection（米国、略称
ＡＴＣＣ）等の藻類研究機関より容易に入手でき、例え
ば前者ではＡＴＣＣ３００２１、同３０３３４、同３０
３３６、同５００５２、また後者ではＡＴＣＣ２８２１
１、同３４３０４等がある。
が可能な、ＤＨＡを藻体内に産生、蓄積できる藻類であ
り、特にその種あるいは株を限定するものではない。こ
れに該当する藻類としては、例えば「微生物学辞典１９
９２年度版」（技報堂出版）によれば、有色藻門、渦鞭
毛藻綱、ペリディニウム目、クリプセコディニウム属に
属するクリプセコディニウム コーニー（Crypthecodin
ium cohnii）、トラウストキトリウム アウレウム（Th
raustochytrium aureum ）等があげられる。これらの藻
類は、American Type Culture Collection（米国、略称
ＡＴＣＣ）等の藻類研究機関より容易に入手でき、例え
ば前者ではＡＴＣＣ３００２１、同３０３３４、同３０
３３６、同５００５２、また後者ではＡＴＣＣ２８２１
１、同３４３０４等がある。
【０００９】本発明の実施に当たっては、上記の従属栄
養で生育し、かつＤＨＡ産生能のある藻類をまず常法に
より培地で培養し、ついで任意の時期に培地の食塩濃度
を上昇させる。すなわち、食塩濃度が１．２〜２．５重
量％である、天然もしくは人工海水培地、あるいはグル
コース、ショ糖等の炭素源、アンモニウム塩、酵母エキ
ス、アミノ酸またはその塩等の窒素源、各種ビタミン類
およびミネラル類を含む培地を用い、ｐＨを５〜７と
し、２０〜３５℃で、好適にはその藻類の増殖曲線にお
ける指数増殖中期まで培養する。この初期の培養時のｐ
Ｈ、温度および食塩濃度がこの範囲を外れると藻類の増
殖そのものが阻害される傾向が大きくなる。
養で生育し、かつＤＨＡ産生能のある藻類をまず常法に
より培地で培養し、ついで任意の時期に培地の食塩濃度
を上昇させる。すなわち、食塩濃度が１．２〜２．５重
量％である、天然もしくは人工海水培地、あるいはグル
コース、ショ糖等の炭素源、アンモニウム塩、酵母エキ
ス、アミノ酸またはその塩等の窒素源、各種ビタミン類
およびミネラル類を含む培地を用い、ｐＨを５〜７と
し、２０〜３５℃で、好適にはその藻類の増殖曲線にお
ける指数増殖中期まで培養する。この初期の培養時のｐ
Ｈ、温度および食塩濃度がこの範囲を外れると藻類の増
殖そのものが阻害される傾向が大きくなる。
【００１０】ついで任意の培養時期、好ましくは指数増
殖中期以降、例えば対数増殖期ないし定常期の任意の時
期において、培養液の食塩濃度を上昇させる。このとき
の食塩濃度の上昇値は、その藻類の生育に好適な食塩濃
度すなわち１．２〜２．５重量％よりも０．１〜１０重
量％、好ましくは０．１〜３重量％高い値に設定し、そ
の食塩濃度で培養を継続する。食塩濃度の上昇幅が０．
１重量％に満たないとＤＨＡ含有極性脂質を高濃度に蓄
積せしめることができず、１０重量％を超えて食塩濃度
を上昇させると藻類の増殖を阻害するので好ましくな
い。なお本発明では、培地中のかかる食塩濃度の上昇に
あたっては、食塩濃度のみならず、食塩以外の他の海水
構成成分も食塩と同時に加え、海水濃度として上昇させ
てもよい。このために用いる食塩および海水構成成分
は、天然海水の濃縮物を用いるのが至便である。
殖中期以降、例えば対数増殖期ないし定常期の任意の時
期において、培養液の食塩濃度を上昇させる。このとき
の食塩濃度の上昇値は、その藻類の生育に好適な食塩濃
度すなわち１．２〜２．５重量％よりも０．１〜１０重
量％、好ましくは０．１〜３重量％高い値に設定し、そ
の食塩濃度で培養を継続する。食塩濃度の上昇幅が０．
１重量％に満たないとＤＨＡ含有極性脂質を高濃度に蓄
積せしめることができず、１０重量％を超えて食塩濃度
を上昇させると藻類の増殖を阻害するので好ましくな
い。なお本発明では、培地中のかかる食塩濃度の上昇に
あたっては、食塩濃度のみならず、食塩以外の他の海水
構成成分も食塩と同時に加え、海水濃度として上昇させ
てもよい。このために用いる食塩および海水構成成分
は、天然海水の濃縮物を用いるのが至便である。
【００１１】培地の食塩濃度を上昇させる時期は、前記
のとおり任意の培養時期でよく、例えば藻体の増殖量が
所望の量に達した時、あるいは培養工程の作業上必要な
時期等であるが、望ましくは藻体の指数増殖中期以降の
任意の段階である。これより前の培養段階においては、
急激な食塩濃度の上昇により藻類の増殖自体を阻害する
場合があり、好ましくない。なお増殖が定常期の培養藻
体にこの方法を適用すると、リン脂質や糖脂質等の極性
脂質濃度の高い藻体を高収量で得ることができるので好
ましい。
のとおり任意の培養時期でよく、例えば藻体の増殖量が
所望の量に達した時、あるいは培養工程の作業上必要な
時期等であるが、望ましくは藻体の指数増殖中期以降の
任意の段階である。これより前の培養段階においては、
急激な食塩濃度の上昇により藻類の増殖自体を阻害する
場合があり、好ましくない。なお増殖が定常期の培養藻
体にこの方法を適用すると、リン脂質や糖脂質等の極性
脂質濃度の高い藻体を高収量で得ることができるので好
ましい。
【００１２】かくして食塩濃度を上昇させた培養液で、
藻類の種類にもよるが、通常３〜５０時間程度培養すれ
ば、本発明の目的とするＤＨＡ含有極性脂質を多量に含
む藻体を得ることができる。なお食塩濃度を上昇させた
後の培養時間が３時間に満たないと藻体中の極性脂質の
含量が少なく、逆に５０時間を超えて長時間培養すると
藻体収量が低下する。
藻類の種類にもよるが、通常３〜５０時間程度培養すれ
ば、本発明の目的とするＤＨＡ含有極性脂質を多量に含
む藻体を得ることができる。なお食塩濃度を上昇させた
後の培養時間が３時間に満たないと藻体中の極性脂質の
含量が少なく、逆に５０時間を超えて長時間培養すると
藻体収量が低下する。
【００１３】本発明において培地の食塩濃度を上昇させ
て培養して得られる藻体の脂質含量は、培養時間や食塩
濃度の上昇を開始した時期等によっても異なるが、例え
ば食塩濃度上昇開始後およそ２４時間で、油分のうち極
性脂質が５０〜６５重量％、中性脂質が３５〜５０重量
％となる。なお極性脂質の内訳は、大略、リン脂質が２
０〜４０％、糖脂質が３０〜５０％、その他成分が約３
０％である。また、全脂質中の構成脂肪酸のうちＤＨＡ
含量は４５〜５０重量％であり、極性脂質中の構成脂肪
酸のうちＤＨＡ含量は６０〜７５重量％となる。これに
対し、食塩濃度を上昇させずに培養を行うと、油分含有
のうち極性脂質は２０〜３０重量％、中性脂質は７０〜
８０重量％であり、また全脂質中の構成脂肪酸のうちＤ
ＨＡ含量は２０重量％程度、極性脂質中の構成脂肪酸の
うちＤＨＡ含量は４０〜５０重量％にとどまる。
て培養して得られる藻体の脂質含量は、培養時間や食塩
濃度の上昇を開始した時期等によっても異なるが、例え
ば食塩濃度上昇開始後およそ２４時間で、油分のうち極
性脂質が５０〜６５重量％、中性脂質が３５〜５０重量
％となる。なお極性脂質の内訳は、大略、リン脂質が２
０〜４０％、糖脂質が３０〜５０％、その他成分が約３
０％である。また、全脂質中の構成脂肪酸のうちＤＨＡ
含量は４５〜５０重量％であり、極性脂質中の構成脂肪
酸のうちＤＨＡ含量は６０〜７５重量％となる。これに
対し、食塩濃度を上昇させずに培養を行うと、油分含有
のうち極性脂質は２０〜３０重量％、中性脂質は７０〜
８０重量％であり、また全脂質中の構成脂肪酸のうちＤ
ＨＡ含量は２０重量％程度、極性脂質中の構成脂肪酸の
うちＤＨＡ含量は４０〜５０重量％にとどまる。
【００１４】
実施例１ クリプセコディニウム コーニー（Crypthecodinium co
hnii) ＡＴＣＣ３０３３６を、表１に示した組成の培地
３リットルに植えつけ、３０℃にて、ｐＨを６．８に調
整しながらジャーファーメンターで通気培養した。培養
中、増殖した藻体の湿物重量を経時的に測定し、その増
殖曲線から対数増殖中期に相当する培養開始後１００時
間目に、食塩を２０ｇ／１Ｌ添加して培地中の食塩濃度
を２重量％上昇させ、さらに２４時間培養を継続した。
その後、培養藻体を遠心分離して集め、藻体を凍結乾燥
して乾燥藻体を６２ｇ得た。
hnii) ＡＴＣＣ３０３３６を、表１に示した組成の培地
３リットルに植えつけ、３０℃にて、ｐＨを６．８に調
整しながらジャーファーメンターで通気培養した。培養
中、増殖した藻体の湿物重量を経時的に測定し、その増
殖曲線から対数増殖中期に相当する培養開始後１００時
間目に、食塩を２０ｇ／１Ｌ添加して培地中の食塩濃度
を２重量％上昇させ、さらに２４時間培養を継続した。
その後、培養藻体を遠心分離して集め、藻体を凍結乾燥
して乾燥藻体を６２ｇ得た。
【００１５】この乾燥藻体６．２ｇをクロロホルム／メ
タノール＝１：１（重量）混合溶媒中でヒスコトロンに
より細胞破砕後抽出し、０．５ｇの油分を得た。抽出油
分を、シリカゲルプレートを用いた薄層クロマトグラフ
ィー（ＴＬＣ）でクロロホルム／メタノール／酢酸混合
溶媒にて展開し、極性脂質画分と中性脂質画分とに分離
した。ついでこのシリカゲルプレートより、それぞれの
スポットをかき取り、クロロホルム／メタノール＝１：
１（重量）混合溶媒にて再抽出したところ、極性脂質含
量が５２重量％、中性脂質含量が４８重量％であった。
なお極性脂質のうち、リン脂質が３０％、糖脂質が４０
％、その他が３０％であった。
タノール＝１：１（重量）混合溶媒中でヒスコトロンに
より細胞破砕後抽出し、０．５ｇの油分を得た。抽出油
分を、シリカゲルプレートを用いた薄層クロマトグラフ
ィー（ＴＬＣ）でクロロホルム／メタノール／酢酸混合
溶媒にて展開し、極性脂質画分と中性脂質画分とに分離
した。ついでこのシリカゲルプレートより、それぞれの
スポットをかき取り、クロロホルム／メタノール＝１：
１（重量）混合溶媒にて再抽出したところ、極性脂質含
量が５２重量％、中性脂質含量が４８重量％であった。
なお極性脂質のうち、リン脂質が３０％、糖脂質が４０
％、その他が３０％であった。
【００１６】また、抽出油分２００mgに硫酸／メタノー
ル混液約５mlを加えて湯浴中で１．５時間還流し、メチ
ルエステル化した後、これにヘキサンおよび水各５mlを
加えて抽出し、脂肪酸組成をガスクロマトグラフィー
（ＧＬＣ）で分析したところ、総脂肪酸中のＤＨＡ含量
は４６重量％であった。さらに上記極性脂質の構成脂肪
酸組成を同様に処理しＧＬＣ分析した結果、極性脂質中
の構成脂肪酸のうちＤＨＡ含量は７０重量％であった。
ル混液約５mlを加えて湯浴中で１．５時間還流し、メチ
ルエステル化した後、これにヘキサンおよび水各５mlを
加えて抽出し、脂肪酸組成をガスクロマトグラフィー
（ＧＬＣ）で分析したところ、総脂肪酸中のＤＨＡ含量
は４６重量％であった。さらに上記極性脂質の構成脂肪
酸組成を同様に処理しＧＬＣ分析した結果、極性脂質中
の構成脂肪酸のうちＤＨＡ含量は７０重量％であった。
【００１７】
【表１】
【００１８】 ＊ビタミンミックス水溶液 ビオチン ： ０．００３ｇ／リットル−溶液 チアミン ： １．０００ 〃 **メタルミックス水溶液 Ｎａ2 ＥＤＴＡ ： １．００ ｇ／リットル−溶液 ＦｅＣｌ3 ・６Ｈ2 Ｏ ： ０．０５ 〃 Ｈ3 ＢＯ3 ： １．００ 〃 ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏ ： ０．１５ 〃 ＺｎＣｌ2 ： ０．０１ 〃 ＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ ： ０．００５ 〃
【００１９】比較例１ 実施例１と同じ藻株（ＡＴＣＣ３０３３６）を、表１の
組成の培地３リットルに植えつけ、３０℃にて、ｐＨを
６．８に調節しながらジャーファーメンターで通気培養
した。培養中は食塩濃度を調節せず、培養開始後１２４
時間目に培養藻体を遠心分離して集め、凍結乾燥して乾
燥藻体を６０ｇ得た。この乾燥藻体６．０ｇをクロロホ
ルム／メタノール＝１：１（重量）混合溶媒にて抽出
し、０．７５ｇの油分を得た。抽出油分を実施例１と同
様に分析したところ、極性脂質含量：２５重量％、中性
脂質含量：７５重量％であった。また、抽出油分の総脂
肪酸中のＤＨＡ含量は１８重量％であり、極性脂質の構
成脂肪酸中のＤＨＡ含量は４５重量％であった。
組成の培地３リットルに植えつけ、３０℃にて、ｐＨを
６．８に調節しながらジャーファーメンターで通気培養
した。培養中は食塩濃度を調節せず、培養開始後１２４
時間目に培養藻体を遠心分離して集め、凍結乾燥して乾
燥藻体を６０ｇ得た。この乾燥藻体６．０ｇをクロロホ
ルム／メタノール＝１：１（重量）混合溶媒にて抽出
し、０．７５ｇの油分を得た。抽出油分を実施例１と同
様に分析したところ、極性脂質含量：２５重量％、中性
脂質含量：７５重量％であった。また、抽出油分の総脂
肪酸中のＤＨＡ含量は１８重量％であり、極性脂質の構
成脂肪酸中のＤＨＡ含量は４５重量％であった。
【００２０】実施例２ トラウストキトリウム アウレウム（Thraustochytrium
aureum ）ＡＴＣＣ３４３０４を、表１に示した組成の
培地３リットルに植えつけ、２５℃にて、ｐＨを６．８
に調整しながらジャーファーメンターで通気培養した。
培養中、増殖した藻体の湿物重量を経時的に測定し、そ
の増殖曲線から対数増殖中期に相当する、培養開始後１
１５時間目に、食塩を２０ｇ／１Ｌ添加して培地中の食
塩濃度を２重量％上昇させ、さらに２４時間培養を継続
した。その後、培養藻体を遠心分離して集め、藻体を凍
結乾燥して乾燥藻体を５５ｇ得た。
aureum ）ＡＴＣＣ３４３０４を、表１に示した組成の
培地３リットルに植えつけ、２５℃にて、ｐＨを６．８
に調整しながらジャーファーメンターで通気培養した。
培養中、増殖した藻体の湿物重量を経時的に測定し、そ
の増殖曲線から対数増殖中期に相当する、培養開始後１
１５時間目に、食塩を２０ｇ／１Ｌ添加して培地中の食
塩濃度を２重量％上昇させ、さらに２４時間培養を継続
した。その後、培養藻体を遠心分離して集め、藻体を凍
結乾燥して乾燥藻体を５５ｇ得た。
【００２１】この乾燥藻体５．５ｇをクロロホルム／メ
タノール＝１：１（重量）混合溶媒にて抽出し、０．６
ｇの油分を得た。さらに抽出油分を実施例１と同様に分
析したところ、極性脂質含量：５８重量％、中性脂質含
量：４２重量％であった。なお極性脂質のうち、リン脂
質が３５％、糖脂質が３５％、その他成分が３０％であ
った。また、抽出油分の総脂肪酸中のＤＨＡ含量は５０
重量％であり、極性脂質の構成脂肪酸中のＤＨＡ含量は
６５重量％であった。
タノール＝１：１（重量）混合溶媒にて抽出し、０．６
ｇの油分を得た。さらに抽出油分を実施例１と同様に分
析したところ、極性脂質含量：５８重量％、中性脂質含
量：４２重量％であった。なお極性脂質のうち、リン脂
質が３５％、糖脂質が３５％、その他成分が３０％であ
った。また、抽出油分の総脂肪酸中のＤＨＡ含量は５０
重量％であり、極性脂質の構成脂肪酸中のＤＨＡ含量は
６５重量％であった。
【００２２】比較例２ 実施例２を同じ藻株（ＡＴＣＣ３４３０４）を、表１の
組成の培地３リットルに植えつけ、２５℃にて、ｐＨを
６．８に調整しながらジャーファーメンターで通気培養
した。培養中は食塩濃度を調節せず、培養開始後１３９
時間目に培養藻体を遠心分離して集め、凍結乾燥して乾
燥藻体を５２ｇ得た。この乾燥藻体５．２ｇをクロロホ
ルム／メタノール＝１：１（重量）混合溶媒にて抽出
し、０．５ｇの油分を得た。抽出油分を実施例１と同様
に分析したところ、極性脂質含量：３０重量％、中性脂
質含量：７０重量％であった。また、抽出油分の総脂肪
酸中のＤＨＡ含量は２２重量％であり、極性脂質の構成
脂肪酸中のＤＨＡ含量は５０重量％であった。
組成の培地３リットルに植えつけ、２５℃にて、ｐＨを
６．８に調整しながらジャーファーメンターで通気培養
した。培養中は食塩濃度を調節せず、培養開始後１３９
時間目に培養藻体を遠心分離して集め、凍結乾燥して乾
燥藻体を５２ｇ得た。この乾燥藻体５．２ｇをクロロホ
ルム／メタノール＝１：１（重量）混合溶媒にて抽出
し、０．５ｇの油分を得た。抽出油分を実施例１と同様
に分析したところ、極性脂質含量：３０重量％、中性脂
質含量：７０重量％であった。また、抽出油分の総脂肪
酸中のＤＨＡ含量は２２重量％であり、極性脂質の構成
脂肪酸中のＤＨＡ含量は５０重量％であった。
【００２３】実施例３ クリプセコディニウム コーニー（Crypthecodinium co
hnii）ＡＴＣＣ３０３３６を、実施例１と同条件下で培
養し、培養開始後１００時間目に食塩を３０ｇ／１Ｌ添
加して培地中の食塩濃度を３重量％上昇させ、さらに２
４時間培養を継続した。その後、実施例１と同様の方法
で処理し、乾燥藻体５５ｇを得、その５．５ｇから０．
４ｇの油分を得た。この油分中の極性脂質含量：６０重
量％、中性脂質含量：４０重量％であった。また、抽出
油分の総脂肪酸中のＤＨＡ含量は４６重量％であり、極
性脂質の構成脂肪酸中のＤＨＡ含量は７４重量％であっ
た。
hnii）ＡＴＣＣ３０３３６を、実施例１と同条件下で培
養し、培養開始後１００時間目に食塩を３０ｇ／１Ｌ添
加して培地中の食塩濃度を３重量％上昇させ、さらに２
４時間培養を継続した。その後、実施例１と同様の方法
で処理し、乾燥藻体５５ｇを得、その５．５ｇから０．
４ｇの油分を得た。この油分中の極性脂質含量：６０重
量％、中性脂質含量：４０重量％であった。また、抽出
油分の総脂肪酸中のＤＨＡ含量は４６重量％であり、極
性脂質の構成脂肪酸中のＤＨＡ含量は７４重量％であっ
た。
【００２４】実施例４ 実施例３において、定常期に相当する培養開始後１３０
時間目に食塩を３ｇ／Ｌ添加すること以外はすべて同じ
条件で処理し、乾燥藻体８０ｇを得、その８．０ｇから
０．８ｇの油分を得た。この油分中の極性脂質含量：５
１重量％、中性脂質含量：４９重量％であった。また、
抽出油分の総脂肪酸中のＤＨＡ含量は４５重量％であ
り、極性脂質の構成脂肪酸中のＤＨＡ含量は７０重量％
であった。
時間目に食塩を３ｇ／Ｌ添加すること以外はすべて同じ
条件で処理し、乾燥藻体８０ｇを得、その８．０ｇから
０．８ｇの油分を得た。この油分中の極性脂質含量：５
１重量％、中性脂質含量：４９重量％であった。また、
抽出油分の総脂肪酸中のＤＨＡ含量は４５重量％であ
り、極性脂質の構成脂肪酸中のＤＨＡ含量は７０重量％
であった。
【００２５】
【発明の効果】本発明によれば、従属栄養で生育しＤＨ
Ａ産生能のある藻類の培養において、任意の培養時期
に、極性脂質濃度が高く、ＤＨＡを多く含み、かつＤＨ
Ａ含量の多い極性脂質を多量に蓄積する藻体を得ること
ができるため、効率良く、また製造コストの安いＤＨＡ
含有藻類を生産することが可能になる。
Ａ産生能のある藻類の培養において、任意の培養時期
に、極性脂質濃度が高く、ＤＨＡを多く含み、かつＤＨ
Ａ含量の多い極性脂質を多量に蓄積する藻体を得ること
ができるため、効率良く、また製造コストの安いＤＨＡ
含有藻類を生産することが可能になる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 7/64 Ｃ１２Ｒ 1:89）
Claims (4)
- 【請求項１】 従属栄養で生育するドコサヘキサエン酸
産生能のある藻類を培養するにあたり、培養中、培養液
の食塩濃度を前記藻類の生育に好適な食塩濃度より０．
１〜１０重量％高い値に設定して培養することを特徴と
するドコサヘキサエン酸含有藻類の培養方法。 - 【請求項２】 藻類の生育に好適な食塩濃度が１．２〜
２．５重量％である請求項１に記載の培養方法。 - 【請求項３】 前記食塩濃度の上昇時期が培養の指数増
殖中期以降である請求項１または２に記載の培養方法。 - 【請求項４】 藻類がクリプセコディニウム（Crypthec
odinium)属に属する単細胞藻類である請求項１ないし３
のいずれかに記載の培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24885093A JP3506740B2 (ja) | 1993-09-09 | 1993-09-09 | ドコサヘキサエン酸含有藻類の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24885093A JP3506740B2 (ja) | 1993-09-09 | 1993-09-09 | ドコサヘキサエン酸含有藻類の培養方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0775557A true JPH0775557A (ja) | 1995-03-20 |
| JP3506740B2 JP3506740B2 (ja) | 2004-03-15 |
Family
ID=17184358
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24885093A Expired - Fee Related JP3506740B2 (ja) | 1993-09-09 | 1993-09-09 | ドコサヘキサエン酸含有藻類の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3506740B2 (ja) |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| WO2011073377A1 (de) * | 2009-12-18 | 2011-06-23 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Methode zur optimierung eines biopharmazeutischen produktionsprozesses |
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