JPH07508042A

JPH07508042A - 新規２’−０−アルキルヌクレオシドおよびホスホロアミダイトの製造法およびその使用

Info

Publication number: JPH07508042A
Application number: JP6504646A
Authority: JP
Inventors: マッギー，ダニエル，ピーター・クロード; クック，フィリップ・ダン; グイノッソ，チャールズ・ジョン
Original assignee: アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド
Priority date: 1992-07-23
Filing date: 1993-07-20
Publication date: 1995-09-07
Anticipated expiration: 2015-03-06
Also published as: DE69333344T2; AU4684993A; ATE256143T1; EP1223173A3; JP2000095793A; EP0651759A4; EP0651759A1; DE69333842D1; JP3015464B2; CA2140428C; EP1223173B1; EP0651759B1; WO1994002501A1; EP1223173A2; ATE299509T1; JPH1087689A; DE69333344D1; CA2140428A1; DE69333842T2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】新規２−０−アルキルウリノンドおよびホスホロアミダイトの製造法およびその使用関連特許出願本特許出願は、１９９２年１０月２７［］提出の米国特許出願箱’１６７、２６７号の一部継続出願であり、その特許出願は１９９２年７月２３日提出の米国特許出願箱９１８．３６２号および１９９１年１月１１日提出の特許出願１１Ｓ９１１００２４３号の一部継続出願であり、特許出願ｔｌｓ９１１００２４３号は、１９９０年１月１１日提出の特許出願第６４３．３５８号および１９９０年８月１３日提出の特許出願第５６６、９７７号の一部継続出願である。これらの出願は本出願の譲受人に譲渡されており、これらの特許文献をすべて参照文献としてここに引用する。

発明分野大発明は２′−Ｏ−アルキルウリノンおよびンチジンホスホロアミダイトの製造方法に関する。本発明はまた、２−０−アルキル、３−０−アルキルおよび２° 、３′−ジーＯ−アルキル　２．６−シアミツプリンリボシド、２’−０−アルキルグアノシンおよび２−０−アルキルグアノノン類似体、これらの化合物のホスホロアミダイトの製造方法およびこれらの使用法に関する。

背景技術数多くのオリゴヌクレオチド類似体が製造されている。これまで合成されたオリゴヌクレオチドの一つの群は２゛−〇−置換オリゴヌクレオチドである。そのようなオリゴヌクレオチドはある種の独特かつ有用な性質を有している。ギャップを持つ２゛修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドと題され１９９１年１２月２４日に提出された米国特許出願箱８１４．９６１号（本出願の譲受人に譲渡されており、全内容が参照文献としてここに引用されている）においては、２゛置換ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドに導入され、徊補標的鎖へのオリゴヌクレオチドの結合が増強される一方、標的鎖を破壊するＲＮアーゼＨの発現を可能にしている。

最近の論文（Ｓｐｒｏａｔ、　Ｂ、Ｓ、、　Ｂｅ１ｊｃｒ、　Ｂ、　ａｎｄ　Ｉｒ１ｂａｒｒｅｎ、＾、、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓよびスブライセオソームの構造研究のための有用なアンチセンスプローブとしての２°−０−メチル置換オリゴヌクレオチドの更なる使用を示している。

２−０−メチルおよびエチルヌクレオチドならびにこれらの製造方法は、多くの著者により報告されている。

Ｒｏｂｉｎｓ、　Ｍ、Ｊ、、　Ｎａ１ｋ、　Ｓ、Ｒ，ａｎｄ　Ｌｅｅ、＾、Ｓ、に、、　Ｊ、　Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、、　３９：１８９１　（P９７４）はジアゾメタンによる塩化第一スズ触媒モノメチル化を経る２′−〇−および３ ′−０−メチルグアノシンの低収員合成を報告している。その後、Ｒｏｂｉｎｓ、　Ｍ、Ｊ、、　ｌ１ａｎｓｓｋｃ。

Ｆ、　ａｎｄ　［１ｅｒｎｉｃｒ、　Ｓ、Ｅ、、　Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｃｍ、、　５９：３３６０　（１９８１）により報告されているごとく、”アデノシン、シチジンおよびウリジンの２°−０−および３゛−ローメチルエーテル合成のための簡便で高収量の方法が考案された。、、、Ｌ、かじながら、グアノシンでは著しく困難である゛。前述の論文において、著者らは２°−０−および３′− 〇−メチルグアノシンの改良合成法を報告している。グアノシンの代わりに２，６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（２−アミノアデノシン）の塩化第一スズ触媒ジアゾメタンメチル化を達成することにより合成法が改良された。ジアミノプリン部分は次にアデノノンデアミナーゼにより対応するグアノシン部分に還元された。Ｓｉｎｇｅｒ　ａｎｄ　ＫｕｓＩＩｌｉｅｒｅｋ、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１５：　５０５２　（１９７６）による別のジアゾ化反応においては、グアノシンのジアゾエタン処理の結果、２′および３’　− ０−エチルグアノシンの混合物が得られたことが報告されている。このアルキル化では複素環式塩基もアルキル化されている。アルキル化生成物は塩基で処理して複素環式塩基からエチル基が除去された。得られた生成物はグアノシンと同一のＵＶスペクトルを持つが、グアノシンのＲｆとは異なったＲｆを持つことから同定された。

２゛−〇−メチルヌクレオシドの別の改良合成がＩｎｏｕｅ、　Ｉｌ、　、　１ｌａｙａｓｅ、　Ｙ、　Ｉｍｕｒａ、＾、漁ｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　１５：６１３１（１９８７）により報告されている。この合成法はＡｇ２Ｏ存在下にＣＨ，Ｉを使用している。この方法はグアノシンを除いたすべての通常のヌクレオチドに対して有用であることが証明されている。これらの著者により報告されているごとく、グアノシンはこの合成法では処理できない。従つて、これらの著者は、ここでもジアゾメタンを用いてグアノシンの２°−０− メチル化を行わなければならなかった。グアニン塩基部分のアミノ官能性のメチル化を避けるため、グアニン塩基部分はイソブチリル基で保護された。さらに、糖部分の３′−〇官能性のメチルエステル化を避けるため、糖部分の３°および５′　ヒドロキシル両方の保護にＴＩＰＤＳ（テトライソプロピルジシロキサン）が使用された。

５ｐｒｏａｔ　ｅｔ　ａｌ、　（上記文献）および５ｐｒｏａｔ、　Ｂ、Ｓ、、　Ｉｒ１ｂａｒｒｅｎ、　ＡｌＭ、、　Ｇａｒｃｉａ。

Ｒ，Ｇ、　ａｎｄ　Ｂｅ１ｊｃｒ、　Ｂ、、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　１９ニア３３　（１９９１）は２゛−メ`ルグアノシン（および２−０−アリルグアノシン）の合成を提出している。５ｐｒｏａｔ　ｅｔａｌ、のこれら両方の論文においては、２−０−メチルグアノシンおよび２°−Ｏ−アリルグアノシンの別の合成経路が示されている。彼らは従来知られていた合成法に対してこの別の合成法を”非常に毒性でありかつ爆発する可能性のある試薬ジアゾメタンの使用を避け“また、”酸化銀／ヨウ化メチルを使用するより優れている”と特徴付けている。５ｐｒｏａｔ　ｅｔ　ａｌ、の合成法と同じ方法がＢ、Ｓ、　５ｐｒｏａｔ　ａｎｄ＾、■、メチルリボヌクレオシド−３°−０−ホスホロアミダイトの合成が記載されている。ここに記載されているウリジンホスホロアミダイト合成ではアルキル化に先だって出発ヌクレオシドの塩基および糖の両方の保護を必要としている。塩基および糖の保護基がウリジンの適所に導入された後にのみアルキル化される。アルキル化後、塩基保護基が除去され、続いて５°−〇−ジメトキシトリチル化およびホスファイト化（ｐｈｏｓｐｈｉｔｙｌａｔｉｏｎ）される。５ｐｒｏａｔおよび１．ａｍｏｎｄにより記載されているウリジンホスホロアミダイト合成は、塩基および糖が保護された２゛−０−メチルウリジン類似体を利用している（すなわち必要としている）。この類似体は次に保護シチジン類似体に変換され、糖から保護基が除去され、類似体はジメトキシトリチル化され最後にホスファイト化される。５ｐｒｏａｔおよびＬａｌ１ｌｏｎｄの教示によるグアノシンホスホロアミダイト合成は、３°および５°糖ヒドロキシル基が保護された２−アミノ−６−クロロヌクレオシドから出発している。このヌクレオシドは２．６−ジクロロ誘導体に変換される。ジクロロ化合物は次に２°−０−アルキル化される。〇−アルキル化後、ジクロロ化合物はジアジド中間体に変換される。ジアジド中間体は次にジアミノ中間体に変換される。このジアミノ中間体は次に脱アミノ化されてグアノシン類似体となる。グアノシン類似体の２−アミノ基は保護された後ジメトキシトリチル化され最後にホスファイト化される。このグアノシン法はまた５ｐｒｏａｔ、ｅｔ、ａｌ、、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、１９９１１９ニア３３により報告されている。

上記の合成法は複数の工程および多くの試薬による処理を含んでいる（ウリジンに対して９の異なった試薬処理、シチジンに対しては１０およびグアノシンに対しては１２）。シチジンおよびグアノシン化合物に対して必要とされる少なくとも一つの試薬は入手が容易ではな（従って非常に高価な試薬である。

別のグループは他の２゛−０−アルキル化ヌクレオシドの製造を教示している。

２゛−〇−メチルチオメチルグアノシンが■ａｎｓｓｋｅ、　Ｆ、　、　Ｍａｄｅｊ、　Ｄ、　ａｎｄ　Ｒｏｂｉｎｓ、　Ｍ、　Ｊ、　、　Ｔｅｔ窒≠■ ｅｄｒｏｎ、４０：１２５　（１９８７）により報告されている。それはグアノシンの９−β−Ｄ−アラビノフラノノルグアニン（すなわちグアノシンのアラビノ類似体）への変換の際の酸化工程の小副成物として産生された。２°−０−メチルチオメチル部分の付加は酸化工程で使用したＤＭＳＯ溶媒からのアルチファクトである。２，６−シアミノブリンリボンドの２°−〇−メチルチオメチル誘導体もｌ１ａｎｓｓｋｅ　ｅｔ　ａｔ、の論文に報告されている。それもまたＤＭＳＯ溶媒からのアルチファクトとして得られている。

さらに、Ｇｌａｄｋａｙａ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｋｈｉｍ、　Ｐｒ１ｒ、　５ｏｃｄｉｎ、、１９８９．４．５６ｇ、は、Ｎ１−メチル−２°−０−（テトラヒドロピラン−２−イル）および２′−〇−メチルシアノソンを開示する。５ｐｏｒｔ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、１９９１．　１９．７３３．は、２“−０−アリルグアノシンの製造を教示する。

グアノシンのアリル化はさらに別の合成経路を必要とした。Ｉｒ１ｂａｒｒｅｎ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、八ｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　１９９０，８７．７７４７．もまた２−０−アリルオリゴリボヌクレオチドについて研究している。Ｉｒ１ｂａｒｒｅｎ、　Ｃｔ　ａｌは、オリゴリボヌクレオチドに２−〇−メチルー１２°−０−アリル−および２°−０−ジメチルアリル−置換ヌクレオチドを取り込まぜ、これらのＲＮＡ類似体のアンチセンス分析における影響を研究した。Ｉｒ１ｂａｒｒｅｎは、２°−０−アリル含有オリゴリボヌクレオチドはＲＮＡおよびＤＮＡ特異的ヌクレアーゼのいずれによる消化に対しても耐性であり、ＲＮＡ／ＤＮＡに二重の特異性を持つヌクレアーゼに対しては２ °−０−メチルオリゴリボヌクレオチドよりわずかに強い耐性を示すことを見いだした。しかし１．、Ｊ・ら、Ｉｒ１ｂａｒｒｃｎは、２’−０−ジメチルアリル含有オリゴリボヌクレオチドは２゛−〇−メチルオリゴリボヌクレオチドと比べて相補ＲＮＡ配列へのハイブリッド形成が劣っていることを見いだした。従って、Ｉｒ１ｂａｒｒｅｎは、アルキル化ＲＮＡプローブ（特に、２−０−アリルシチジン含有オリゴリボヌクレオチドより優れたもの）を製造するためのさらなる試みにおいては、５未満の炭素原子を含む２°−０−アルキル基に限られるべきであることを示唆している。

２′−〇−アルキル置換ヌクレオチドを含むある種のオリゴヌクレオチドは、ヒトの医薬として使用するための有力な候補である。長鎖アルキル基を持つもの（すなわち４またはそれ以上の炭素原子）は特に有用である。例えば、長鎖アルキル基は鎖ハイブリッド形成により反対側の鎖に対して官能基を適当な配位に適応させるであろう。従って、場合によっては、２°−〇−長鎖アルキルグアノシンヌクレオチド等の２°−０−長鎖アルキルヌクレオチドが非常に望ましい。大規模な治療試験での使用および最終的にヒト医薬として使用するには、大量のこれらのオリゴヌクレオチドが合成されなければならない。大量のオリゴヌクレオチドのためには、オリゴヌクレオチドの合成に使用される大皿の２゛−〇−アルキルヌクレオシドボスホロアミダイトが必要とされる。従って、そのようなオリゴヌクレオチドの合成に使用される出発ホスホロアミダイトの価格および純度の両方を考慮に入れなくてはならない。一般的前提として、合成工程の数が増加すると製造費用が増加する。さらに、工程の数が増加すると品質管理の問題が増大する。この観点から、ヌクレオシドおよびヌクレオシドボスホロアミダイトを合成するだめの新規かつ改良された方法に対する強い要望が存在することは明らかである。

発明の目的２−０−アルキル化ヌクレオシドおよびヌクレオシド類似体の合成法を提供するのが本発明の目的である。

２′−〇−および３°−０−アルキル化２，６−シアミツブリンリボシド化合物の合成法を提供するのが本発明の目的である。

２°−０−アルキルヌクレオシドホスホロアミダイトの新規かつ改良された合成法を提供するのが本発明の目的である。

２゛−０−アルキルグアノノンホスホロアミダイトの新規かつ改良された合成法を提供するのが本発明の目的である。

２−０−アルキルウリジンホスホロアミダイトの新規かつ改良された合成法を提供するのが本発明の目的である。

２゛−０−アルキルウリジンホスホロアミダイトの新規かつ改良された合成法を提供するのが本発明の目的である。

２．６−ジアミツー９−　（２’−０−アルキル−β−〇−リボフラノシル）プリンホスホロアミダイトの新規カリ改良された合成法を提供するのが本発明の目的である。

本発明の改良されたホスホロアミダイト合成を利用する新規かつ改良されたオリゴヌクレオチド合成を提供するのが本発明の目的である。

本明細書および付随する請求の範囲から、当業者にはこれらおよびその他の目的が明らかになるであろう。

発明の要約本発明は構造： ■ （式中ＸはＲ１（Ｒ２）。であり。

Ｒ１はＣ３ｃｚｏアルキル、Ｃ４Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２゜アルキニルであり。

Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、二１・口、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、０−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｎ）［−アルキル、Ｎ−ジアルキル、０−アリール、Ｓ−アリール、Ｎｌｌ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、Ｎ−フタルイミド、イミダゾール、アンド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソノアネート、スルホキノド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インターノコレータ−、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するだめの基であり：およびｎはＯから約６までの整数である）を有する化合物を含む。

本発明の別の実施態様においては、構造：■ （式中ＸはＲ１（Ｒ２）−であり；Ｒ３はＣ１−Ｃ２゜アルキルであり：Ｒ２はＮＨ，、Ｈ−イミダゾール、Ｎ−フタルイミドであり；Ｙはヒドロキシル保護基であり；Ｚはリン酸または活性化されたリン酸基であり；ＱｌおよびＱ２は独立してＨまたはグアノシン保護基であり：およびｎはＯから約６までの整数である）を有する化合物も提供される。

本発明のさらに別の実施態様においては、構造：■ （式中ＸはＲ１（Ｒ２）。であり：Ｒ２はＣ３Ｃ２゜アルキル、Ｃ４Ｃ２゜アルケニルまたはＣｍ　Ｃｍ。アルキニルであり：Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニトロン、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、０−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、０−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、Ｎｌｌ−アラルキル、アミ八イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アンド、ヒドラジ人ヒドロキシルアミノ、イソノアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するだめの基であり、およびｎはＯから約６までの整数である）を有する化合物が提供される。

本発明には式Ｉ、■および■の化合物のような、２°−０および３°−０−モノアルキルまたは２’　、　３’−ジー０−アルキル置換グアノシン保護基の製造のための簡便な方法もまた含まれる。これまでジアゾメタンによる製造法を除いてグアノシンの直接アルキル化は難しいことが示されている。本発明は２．６− シアミへ９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（すなわち２．６−シアミツプリンリボシドまたは２−アミノアデノシンンの直接２′および３−０−アルキル化を提供し、それは次に２゛−０−アルキル化２．６−シアミツプリンリボシドを脱アミノ化して対応する２°−〇−アルキル化シアノンンとすることにより達成される。所望ならば、このアルキル化はヌクレオシドのへテロ環式または糖部分のいずれにも保護基を使用することな（実施できる。

さらにメチルアルキル化生成物のみを得るであろうジアゾメタンの使用と異なり、本発明で実施されるアルキル化はメチルアルキル化のみに制限されるわけではなく、多くのアルキル置換グアノシンおよび２，４−ジアミノプリンリボシド化合物を得るために使用できる。式Ｒ−Ｌ　（式中、Ｒはアルキル基であり、Ｌは脱離基である）を有し本発明において使用される必要な化合物は、市販品として入手可能であるか、文献に既知であるか、または、既知の文献化合物と類似の方法により製造できる。

本発明の２工程アルキル化法は５ｐｒｏａｔ　ｅｔ　ａｌ、の６エ程法とさらに区別される。

前に参照したＮｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　１８：４１（１９９０）およびＮｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａ品±、　１９ニア３３（１９９１）の論文を参照されたい。これらの方法においては、２−アミノ− ６−クロロプリンリボシドは最初に３゛および５゛位の両方が保護されなければならず、２．６−ジクロロ誘導体へ変換され、６プリン位が保護され、２−０− メチルまたは２°−０−アリル誘導体に誘導され、２．６−ジアミノ誘導体へ変換され、３′および５゛位の両方が脱保護され、そして最終的に脱アミノ化して２°−０−メチルまたは２°−０−アリルグアノノン生成物が得られる。

本発明の方法に従うと、２．６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンのりボフラノソル糖部分の２′または３′（または２′および３°の両方）ヒドロキシルからプロトンの除去を達成するのに十分に強い塩基の存在下、式Ｒ −Ｌ　（式中、Ｒはアルキル基であり、Ｌは脱離基である）を有する適当な化合物により、２．６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン上で直接アルキル化を行う。Ｒ−Ｌ基または塩基の量を化学量論量（または当量）に制限することによりアルキル化をモノアルキル化に制限できる。もしくは過剰のＲ− Ｌ基および塩基を使用して２゛および３゛位の両方を同時にアルキル化することにより、ジアルキル化（２°および３゛位の両方に）が実施できる。

理論に束縛されることを望むものではないが、アルキル化は３゛位に比べて２′ 位で優先することが観察されている。一般的に２゛と３°アルキル化生成物は約７：３から約８：２の比であることが得られている（ＴＬＣにより決定された）。ＴＬＣならびに分取的規模のクロマトグラフィーにおいて、一般的に２゛生成物は３゛生成物より速いＲｆを有する。２−０−および３′−〇−生成物をお互いにまたは２°−０−１３′−〇−ジアルキル化生成物から分離するためにこのＲｆの相違を利用することができる。従って、２°および３°アルキル化生成物は、所望ならばシリカゲルクロマトグラフィー等の方法により分離できる。

一般的にプロピルより長いアルキル基に対しては、２′生成物に対する３°生成物の脱アミノ化の速度を２′−〇−および３゛−〇−生成物の分離にさらに利用できる。すなわち、２′−〇−および３−０−アルキル化２．６−ジアミツー９ −（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンの混合物をアデノシンデアミナーゼで脱アミノ化させる。２゛−ｏ−生成物の酵素的脱アミノ化は３′−〇−生成物の脱アミノ化より容易に起こる。この脱アミノ化の速度の相違を利用し、より遅いまたは脱アミノ化されていない３°生成物〔すなわち、２．６−ジアミツー９−（３ −０−アルキル化−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン〕がら脱アミノ化された２ ′生成物（すなわち、２゛−ｏ−アルキル化グアノシン）を分離することができる。さらに、結晶化等の方法を用いて２′−〇−アルキル化シアミノプリンリボンド生成物を対応する３−０−アルキル化ジアミノプリンリボシド生成物から分離することにより、２°生成物を対応する３′生成物から分離した。

アルキル化に使用される好適な塩基は水素化ナトリウムである。別の適当な塩基を使用してもよいが、そのような塩基は２．６−シアミツプリンリボシド出発物質の２゛（または３′）ヒドロキシル部分からプロトンを除去するのに十分な塩基強度を持っていなくてはならない。理論に束縛されることを望むものではないが、一般的には２，６−シアミツブリンリボシド出発物質の２′ヒドロキシル部分のプロトンのｐＫ、よりも約１０ｐＫ、大きなｐＫ、値を持つ塩基が使用されるであろう。特に、水素化ナトリウムのｐＫｂよりも大きなｐＫｂを持つ塩基が便宜上選択されるであろう。そのような塩基はＭａｒｃｈ、Ｊ、　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１ｌｉｌｅｙ−Ｉｎｔｃｒｓｃｉｅｎｃｅ、　Ｊｈｏｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９８５．の２２０ページ、表１に与えられているような塩基の群から選択できる。

本発明のアルキル化反応は典型的にはＤＭＦを溶媒として実施される。池の適した溶媒としては、ＤＭＳＯ，Ｎ−メチルピロリドンおよびスルホロンが挙げられる。

好適には脱アミノ化はデアミナーゼ酵素を使用して達成される。特に好適であるものはアデノシンデアミナーゼである。特に使用に適したものは、Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｗｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｔｓ、　ＭＯ，から入手可能なアデノシンデアミナーゼ　タイプ■である。別の脱アミノ試薬を用いてもよい。本発明の脱アミノ反応は、典型的には有機溶媒および水性緩衝液を含む混合溶媒中で実施される。有機溶媒として使用するのに適しているものは、ＤＭＳＯ，Ｎ−メチルピロリドンおよびスルホロンである。本発明の好適な実施態様では、脱アミノ化はＤＭＳＯを有機溶媒として使用して達成される。水性緩衝液としての使用に適したものは、デアミナーゼ酵素を使用するｐ　Ｉ−１範囲に適合するｐ　Ｉ−１を持つ緩衝液である。好適であるものはリン酸ナトリウムおよびトリス緩ｌＩｉ液等のリン酸緩衝液である。

３゛生成物をな（すことにより３°生成物に対する２′生成物の割合を高めるため、２．６−シアミツプリンリポシドの糖部分の３°および５′ヒドロキシルの保護にＴＩＰＤＳ（テトライソプロピルシロキサン）保護基を使用する。同様に、塩基安定性の非移動性２°−〇−保護基の使用により、排他的３゛生成物を得ることができる。そのような塩基安定性の非移動性２−０−保護基には、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロビラン−４−イル（Ｍｔｈｐ）、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル−４−メトキシピペリジン −４−イル（ＣＬｍｐ）、トリフェニルメチル（トリチル）、モノ−、ジーおよび１・１ルメトキソトリチルおよびその他の類似の保護基が含まれるが、それらに限られるわけではない。

本発明に従うと、２°−０−アルキル化グアノシン、シチジン、およびウリジンホスボロアミダイトを含む２°−０−アルキル化ヌクレオシドホスホロアミダイトを製造するための改良された方法も提供される。

本発明の方法に従うと、２゛−０−アルキル化グアノシン３°−０−ホスホロアミダイトの製造は、２．６−ジアミツー９−（リボフラノシル）プリンをアルキル化して２．６−ジアミツー９−（２−〇−アルキル化すボフラノシル）プリンを生成させ；該２．６−ジアミツー９−（２°−〇−アルキル化リボフラノシル）プリンを脱アミノ化して２′−〇−アルキル化グアノシンを形成し：該２゛− 〇−アルキル化シアノンンの５゛−ヒドロキシル部分を保護し；および該５′− 保護２′−〇−アルキル化グアノシンの３′−位をホスファイト化する工程を含む。

さらに本発明に従うと、非保護シチジンをアルキル化して２′−〇−アルキル化シチジンを形成し；該２゛−０−アルキル化シチジンの５°−ヒドロキシル部分を保護し；および該５゛−保護２′−〇−アルキル化ンチジンの３−位をホスファイト化する工程により、２−０−アルキル化シチジン３゛−〇−ホスホロアミダイトを製造することができる。

２′−〇−アルキル化ウリジン３°−０−ホスホロアミダイトは、ウリジンを酸化ジアルキルスズで処理してウリジンの２’　、　３’−０−ジアルキルスタニレン誘導体を生成させ；該ウリジンのスタニレン誘導体をアルギル化して２’− ０−アルキル化ウリジンを生成させ；該２°−０−アルキル化ウリジンの５′− ヒドロキシル部分を保護し；および該５−保護２°−０−アルキル化ウリジンの３′−位をホスファイト化する工程を含む方法により製造することができる。

２°−０−アルキル化グアノシンの３−０−ホスホロアミダイトおよび２．６− ジアミツー９−（２’−〇−アルキルーβ−Ｄ−リボフラノシル）プリンは、２ −ＮＩ！２．　５’　−０１（保護２′−〇−アルキルグアノシンまたは２−　Ｎ　Ｉ−Ｉ　、、６−ＮＨ２および５°−ＯＨ保護２゜６−ジアミツー９−（２ °−０−アルキル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンを、２−シアノエチルＮ、　Ｎ−ジイソプロピルアミノクロロホスフィン等の当業者には既知の市販品として入手可能な試薬とを反応させることにより、本発明のいくつかの実施態様で提供されるであろう。

ＮＨ２部分（おのおの２−または２−および６−　Ｎ　Ｈ２）および５’　−ＯＨ部分を保護し、続いてシアノエチルＮ、　Ｎ−ジイソプロピルアミノクロロホスフィンと反応させる等の、本分野では既知の方法により、２−酸アルキル化グアノシンおよび２°−０−アルキル−２，６−シアミツプリンリポシドをその３ ’−００位でホスファイト化してホスホロアミダイトを得ることができる。

ここで提供されるような本発明の化合物は、当業者には既知の方法によりオリゴマー内に取り込ませることができる。

本発明の方法に従うと、２．６−ジアミツー９−（リボフラノシル）プリンをアルキル化して２，６−ジアミツー９−（２°−０−アルキル化リボフラノシル）プリンを生成させ；該２．６−ジアミツー９−（２−〇−アルキル化すボフラノシル）プリンを脱アミノ化して２′−〇−アルキル化グアノシンを生成させ；該２′−〇−アルキル化グアノシンの５゛一ヒドロキシル部分を保護い該５°−保護２′−〇−アルキル化グアノシンの３゛−位をホスファイト化して２°−〇− アルキル化グアノシン３゛−ｏ−ホスホロアミダイトを生成させ：およびホスホロアミダイトカップリング条件を使用して該２′−〇−アルギル化グアノシン３ −０−ホスホロアミダイトをオリゴヌクレオチドの５°−ヒドロキシル部分とカップリングさせる工程を含む方法により、オリゴヌクレオチド内に少な（とも一つの２′−〇−アルキル化シアノンンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを製造することができる。

さらに本発明に従うと、オリゴヌクレオチドの配列内に少なくとも一つの２’　 −０−アルキル化シチジンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの製造法が提供され、該方法は、シチジンをアルキル化して２°−〇−アルキル化シチジンを提供い該２°−０−アルキル化ンチジンの５°−ヒドロキシル部分を保護し；該５゛−保護２゛−ｏ−アルキル化シチジンの３゛−位をホスファイト化して２’ −０−アルキル化ンチジン３°−０−ホスホロアミダイトを生成させ；およびホスホロアミダイトカップリング条件を使用して該２°−〇−アルキル化シチジン　３゛−ｏ−ホスホロアミダイトをオリゴヌクレオチドの５゛　−ヒドロキシル部分とカップリングさせる工程を含む。

さらに本発明に従うと、オリゴヌクレオチドの配列内に少なくとも一つの２’　 −０−アルキル化ウリジンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの製造法が提供され、該方法は、ウリジンを酸化ジアルキルスズで処理してウリジンの２°、３°−〇−シアルキルスタニレン誘導体を生成させ；該スタニレン誘導体をアルキル化して２゜−０−アルキル化ウリジンを生成させ；該２′−〇−アルキル化ウリジンの５゛−ヒドロキシル部分を保護い該５゛−保護　２′−０−アルキル化ウリジンの３°−位をボスファイト化して２°−０−アルキル化ウリジン３゛ −〇−ホスホロアミダイトを生成させ；およびホスホロアミダイト化学を使用して該２°−〇−アルキル化ウリジン　３−０−ホスボロアミダイトをオリゴヌクレオチドの５°−ヒドロキシル部分とカップリングさせる工程を含む。

さらに本発明に従うと、オリゴヌクレオチドの配列内に少なくとも一つの２゛− ０−アルキル化　２．６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの製造法がｌＪ２供され、該方法は、２８６−ジアミツー９−（β−ｐ−リボフラノシル）プリンをアルキル化して２°− ０−アルキル化　２，６−シアミツー〇−（β−ｐ−リボフラノシル）プリンを提供し；該２′−０−アルキル化　２．６−ジアミツー９−（β−ｐ−リボフラノシル）プリンの５′−ヒドロキシル部分を保護し、該５′−保護２′−〇−アルキル化　２．６−ジアミツー９−（β−ｐ−リボフラノシル）プリンの３°− 位をホスファイト化して２′−〇−アルキル化　２，６−ジアミツー９−（β− ｐ−リボフラノシル）プリン３′−〇−ホスホロアミダイトを生成させ；およびホスホロアミダイト化学を使用して該２゛−０−アルキル化　２．６−ジアミツー９−（β−ｐ−リボフラノシル）プリン３゜−０−ホスホロアミダイトをオリゴヌクレオチドの５゛−ヒドロキシル部分とカップリングさせる工程を含む。

本発明のオリゴマーは、少なくとも一つの構造・（式中ＸはＲ１（Ｒ２）−であり：Ｒ１はＣｘ　Ｃｔ。アルキル、Ｃ４−Ｃ２゜アルケニルまたはＣ２ＣＯＧアルキニルであり；Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、０−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、０−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、また（まオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり：Ｔ３およびＴ、は独立してＯＨまたは該構造に連結されている該オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオシドのさらなるヌクレオチドまたはヌクレオノドであり、およびｎはＯから約６までの整数である）を有するサブユニットを含んでいてもよい。

本発明のさらに別の実施態様においては、本発明のオリゴマーは少なくとも一つの構造：（式中ＸはＲ１（Ｒ４）、であり；Ｒ，はＣ，−Ｃ２゜アルキル、Ｃ２−Ｃ２゜アルケニルまたはＣＩ　Ｃ２０アルキニルであり：Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、０−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール、Ｎ　Ｉ（−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アンド、ヒドラジ人ヒドロキシルアミノ、イソノアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、フンシュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬ノコ学的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；Ｔ３およびＴ、は独立してＯＨまたは該構造に連結されている該オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオシドのさらなるヌクレオチドまたはヌクレオシドであり；およびｎは０から約６までの整数である）を有するサブユニットを含んでいてもよい。

そのようなオリゴマーおよびオリゴヌクレオチドは、固相合成または当業者には既知の他の手段により製造されるであろう。

本発明の文脈において、術語”ヌクレオシド”は互いに連結されている（標準的には部上の“アノマー”炭素で）糖および塩基を示す。αおよびβ糖の両方とも本発明に包含されている。本発明の好適な実施態様において、ヌクレオシド糖はペントフラノシル糖であるが、炭素環式または４゛−デオキシ−４°−チオ糖類似体等のその他の糖も使用されるであろう。

本発明の文脈において、術語“オリゴヌクレオチド”または“オリゴマー”とは、天然のホスホジエステル結合により連結された天然に存在する塩基およびフラノシル基から形成されるポリヌクレオチドを示している。もちろん、本発明のオリゴヌクレオチドは少なくとも一つの２゛−〇−アルキルグアノシンまたはその誘導体を含んでいるであろう。従って、この術語は実際上、天然に存在するサブユニットまたはそれらに近い同族体から形成された天然に存在する化学種または合成種を意味している。術語”オリゴヌクレオチド”または”オリゴマー”はまた、天然に存在するオリゴヌクレオチドと類似の部分を有するが、天然に存在しない部分も有する部分も表している。従って、オリゴヌクレオチドは変形された糖、変形された塩基部分または変形された糖量結合を有していてもよい。これらの例としては、ホスホロチオエートおよび当該分野での使用が知られているその他の硫黄含有化学種がある。いくつかの好適な実施態様に従うと、オリゴヌクレオチドの少なくともいくつかのホスホンエステル結合は、オリゴヌクレオチドの安定性、またはメツセンジャーＲＮΔが位置している細胞の領域内へ浸透するオリゴヌクレオチドの能力を増強させるように機能する構造により置換されている。そのような置換は、好ましくはホスホロチオエート結合、ホスホトリエステル、メチルホス小ネート結合、短鎖アルキルまたはシクロアルキル構造または短鎖複素原子または複素環式構造を含む。その他の好適な置換は、ＣＨ，−ＮＨ−０ −ＣＨ２、Ｃ）［ｚ−Ｎ　（ＣＩ（ａ）−０−ＣＨ２、ＣＨ，−０−Ｎ　（ＣＨ：１）−ＣＨ２、ＣＨ。

Ｎ　（ＣＨ３）　Ｎ　（ＣＨｓ）　ＣＨ２およびＯ−Ｎ　（ＣＨｓ）−ＣＨＩ− ＣＨ！構造（ホスポジエステル糖量結合がこれらの構造で置き換えられている）である。モルホリノ構造もまた好適である。Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ、　１．　Ｅおよび１ｆｅｌｌｅｒ、　［１，Ｄ、　、　１９９１年７月２３日に発行された米国特許第５．０３４．５０６号。蛋白質−核酸（ＰＮＡ）主鎖等の他の好適な実施態様においては、オリゴヌクレオチドのホスホジエステル主鎖はポリアミド主鎖に置き換えられており、塩基は直接的にまたは間接的にポリアミド主鎖のアザ窒素原子に結合されている。Ｐ、　Ｅ、　Ｎ１ｅｌｓｅｎ、　ｅｔ　ａｔ、　、　５ｃｉｅｎｃｅ　１９９１２５４１４９７゜別の好適な実施態様に従うと、ホスホジエステル結合は同時に実質的に非イオン性および非キラルであるその池の構造または、キラルおよび鏡像異性体に特異的である構造で置換されている。当業者は本発明の実施に使用するための他の結合を選択することができるであろう。

オリゴヌクレオチドはまた、少なくともいくつかの修飾された塩基形を含む化学種を含むことができる。従って、天然で通常観察される以外のプリンおよびピリミジンを用いてもよい。適した塩基は米国特許第３．６８７．８０８号に記載されているが、それらに制限されるわけではない。同様に、本発明の本質的教義から離れない限り、本発明の２′−０−アルキル修飾に加えて、ヌクレオチドサブユニットのフラノシル部上での修飾もまた有効であろう。そのような修飾の例は２゛−ハロゲン−置換ヌクレオチドである。本発明において有用である糖部分の２゛位での修飾のいくつかの特定の例は、ＯＨ，５ｌ−（、ＳＣＨ３、Ｆ、ＯＣＮ、Ｏ（ＣＨＩ）。

ＮＨ２、Ｃ１１Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦｚ、ＯＣＦ、、Ｓ−または、Ｎ−アルキル；Ｓ −または、Ｎ−アルケニル：５ＯＣＨ３，５ＯｚＣＨｓ；０ＮＯ２：ＮＯ２：Ｎｓ；ＮＨ２，ヘテロシクロアルキル：へテロシクロアルカリール；アミノアルキルアミノ：ポリアルキルアミノ；置換シリル、ＲＮＡ切断基；コンジュゲート；レポーター基：インターカレークー；オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基：またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基、および同様な特性を持つその他の置換基である。ンクロブチル等の糖模倣体もまたペントフラノシル基の代わりに使用できる。オリゴヌクレオチドは本発明の精神に矛盾しないかぎりその他の修飾を含んでいてもよい。そのようなオリゴヌクレオチドは天然のオリゴヌクレオチドとは構造的には異なっているにもかかわらず、機能的には交換できるものとして最もよ（表現される。オリゴヌクレオチド中のサブユニットとして有効に機能する限り、全てのそのようなオリゴヌクレオチドは本発明に包含される。

好ましくは、本発明のオリゴヌクレオチドは約６から約５０ヌクレオチドの長さである。本発明のより好適な実施態様においては、オリゴヌクレオチドは約１２から約２０ヌクレオチドの長さである。

さらに本発明で使用される限り、術語”アルキル化”とは本発明のヌクレオシドホスホロアミダイトの前駆体へのアルキル、アルケニルまたはアルキニル部分、好ましくはアルキル部分の付加を意味している。ヌクレオシド糖の２゛位のアルキル化は、エーテル結合を介して糖の２“位ヘアルキル部分を連結する。

好適なアルキル部分には、非置換および置換直鎖ＣＩ　Ｃ２０アルキルおよび非置換および置換分岐鎖ＣＩ　Ｃ２０アルキルが含まれる。好適なアルケニル基には非置換および置換直鎖Ｃ２Ｃ２ｆｌアルケニルおよび非置換および置換分岐鎖Ｃ２−Ｃ２゜アルケニルが含まれる。好適なアルキニル基には非置換および置換直鎖Ｃ２Ｃ２０アルキニルおよび非置換および置換分岐鎖Ｃ２−Ｃ２゜アルキニルが含まれる。従って、好適なアルキル化基には、Ｃ１からＣ２゜の直鎖または分岐鎖低級アルキルまたは置換低級アルキル、Ｃ２からＣ２゜の直鎖または分岐鎖低級アルケニルまたは置換低級アルケニル、Ｃ２からＣ２０の直鎖または分岐鎖低級アルキニルまたは置換低級アルキニルが含まれるが、それらに制限されるわけではない。

本発明のアルキル基には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデノル、ドデシル、トリデシル、テトラゾール、ペンタデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、ノナデシルおよびエイコシル、イソプロピル、２−ブチル、イソブチル、２−メチルブチル、イソペンチル、２−メチル−ペンチル、３−メチルペンチル、２−エチルヘキシルおよび２−プロピルペンチル等のＣ，−Ｃ２゜直鎖および分岐鎖アルキルが含まれるがそれらに制限されるわけではない。アルケニル基にはビニル、アリル、およびクロチルを含む（しかしそれらに制限されるわけではない）、上記アルキル基から誘導される不飽和基が含まれるが、それらに制限されるわけではない。

アルキニル基にはエチニルおよびプロパルギルを含む（しかしそれらに制限はされるわけではない）、上記アルキル基から誘導される少なくとも一つの三重結合を含む不飽和基が含まれる。

上記の置換基にはハロゲン（ＣＩ、Ｂｒ、Ｆ）　、ヒドロキシル（ＯＨ）　、チオール（ＳＨ）、ケト（Ｃ−Ｏ）、カルボキシル（ｃｏｏＩ−■）、ニトレート（ＯＮ０２）、ニトロ（ＮＯ２）、ニトロソ（ＮＯ）、ニトリル（ｃＮ）、トリフルオロメチル（ＣＦ、）、トリフルオロメトキシ（ＯＣＦ３）　、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、Ｎト■−アラルキル、アミノ（ＮＨ２）、アジド（Ｎｓ）　、ヒドラジノ（Ｎ　ＨＮ　Ｈｚ）、ヒドロキシルアミノ（ＯＮＨ２）　、イソシアネート（ＯＣＮ）　、スルホキシド（ＳＯ）、スルホン（ＳＯ２）、スルフィド（Ｓ− ）、ジスルフィド（Ｓ−３）、メシル、複素環式、脂環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、およびオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基が含まれるが、必然的にそれらに制限されるわけではない。そのような化合物には、３−ペンテン−２−オン、３−メチル−２−ブタノール、２−シアノオクチル、３−メ！・キシ−４−ヘプタナール、３−ニトロブチル、４−イソプロポキシドデシル、４−アジド−２−ニトロデシル、５−メルカプトノニル、４−アミノ−１−ペンテニルならびにその他の置換基が含まれる。これらの置換基はブロックまたは保護された形で導入し、後に脱保護して元の置換化合物にすることができる。例えば、アミノ置換の保護形としてのフタルイミド基の使用が以下に例示されている。

その池の適した置換基には、コレステロール、リン脂質、ビオチン、フェナントロリン、フェナジン、フェナントロリン、アントラキノン、アクリドン、ピレン、スチルベン、オキサゾロ−ピリドカルバゾール、アントラキノン、ツェナトリジン、フェナジン、アジドベンゼン、ソラーレン、ポルフィリン、コール酸、葉酸、フルオレセイン、ローダミン、クマリンおよび色素類を含むインターカレーター、レポーター基、レポーター酵素およびコンジュゲート：ステロイド、親油性分子、ペプチド、蛋白質、ビタミン、ＲＮＡ切断複合体、金属キレータ−、アルキル化剤および架橋剤が含まれる。

一つの特に好適である置換基はＣＦ３である。さらに特に好適な置換基はフタルイミドおよびイミダゾールである。先に指摘したごとく、フタルイミド基の使用は保護されたアミノ官能性をアルキル基上に導入することを可能にする。オリゴヌクレオチド合成の中間体として本発明に従って製造されたグアノシン類似体を利用すると、オリゴヌクレオチド合成完了後、フタルイミド基を除去して、オリゴヌクレオチド配列内のグアノシンヌクレオチドにつなぎ留められたアミノ官能性を得ることができる。アルキル官能性上の置換基としてのイミダゾール部の使用は、オリゴヌクレオチド配列内のグアノシンヌクレオチド上に示唆された核酸切断官能性（イミダゾール）を導入することになる。

アリール基にはフェニル、トリル、ベンジル、ナフチル、アントラシル、フェナントリル、ピレニルおよびキシリルが含まれるが、それらに制限されるわけではない。ハロゲンにはフッ素、塩素および臭素が含まれる。好適な複素環式基にはイミダゾール、テトラゾール、トリアゾール、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジンおよびモルホリンが含まれるが、それらに制限されるわけではない。アミンには一級および二級アミンおよびフタルイミドのような”マスクされたアミン” を含む、上記すべてのアルキル、アルケニル、アルキニル、およびアリール基のアミンが含まれる。アミンにはまた、ポリアルキルアミノ化合物およびアミノプロピルアミンのようなアミノアルキルアミン、およびさらにイミダゾール−１゜２　または４−イル−プロピルアミンのような複素環−アルキルアミンを含むことも意味するつもりである。ＲＮＡ切断複合体とは、例えば、インターカレーターまたはＲＮＡの小ＦＥ　（ｍｉｎｏｒ　ｇｒｏｏｖｅ）に結合する基であろう。インターカレーターとは、オリゴヌクレオチドの近（の塩基間にそれ自身を挿入する分子である。

レポーター分子とは、全体の分子の同定を視覚的にまたはその他の方法で助ける分子である。架橋剤は効果的に二つの基を連結する。

本発明に適した脱離基には塩素、臭素およびヨウ素等のハライド、トシル、ブロンル、メシル、メシルおよびトリフイル等のスルホネ−１・およびオキソニウムイオンが含まれる。本発明の好適な実施例において、脱離基はハライドである。

さらにその他の適した脱離基が当業者にはよく知られている。

本発明の方法に従うと、アルキル化は塩基、好ましくは水素化ナトリウム等の水素化金属の存在下で好適に実施される。ウリジンの２’　、　３’　−０−ジアルキルスタニレン誘導体のアルキル化は、金属ハライド等の塩の存在下で好適に実施される。

本発明のいくつかの実施態様においてはフッ化セシウムおよびヨウ化ナトリウムが好適である。さらに、５′ヒドロキシル保護基として好適であるのはジメトキシトリチル基である。ホスファイト化試薬は好適にはビスーＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノシアノエチルポスファイトであり、ホスファイト化反応は好適にはＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ−ヒドロテトラゾリド（ｈｙｄｒｏｔｅｔｒａｚｏｌｉｄｃ）の存在下で実施される。

ウリジンのアルキル化を達成するには、２’３’−０−（ジブチルスタニレン）ウリジンがアルキル化される。ジブチルスタニレン誘導体はＷａｇｎｅｒ、Ｄ、、　Ｖｅｒｈｅｙｄｅｎ、Ｊ。

Ｐ、１１．　ａｎｄ　Ｍｏｆｆａｔ、Ｊ、Ｇ、、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｃｍ、　１９７４．３９＋２４の方法を使用して酸化ジブチルスズとの反応によりウリジンから一工程で製造された。これらの著者により指摘されているごと＜、２’ ３°−ジー０−（ジブチルスタニレン）ヌクレオシドはアルキル化に、対して活性化されている。ジブチルスタニレン誘導体を用いることにより、ウラシル塩基を同時にアルキル化する事なく糖ヒドロキシルのアルキル化が達成される。従って、ジブチルスクニレン基は保護基としてではな（活性化基として働いている。

Ｎ４−ベンゾイル−５−０−（４，４°−ジメトキシトリフェニルメチル）−２ °−０−メチルシチジン　３−０−β−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノホスホロアミダイトの合成には、中間体Ｎ４−ベンゾイル−２°−〇−メチルシチジンの製造に二つの方法が比較された。方法ＡではＴ　Ｉ　ＰＳ−ＣＩ試薬で３°−５゛部位を保護して２゛位上でのみメチル化を可能とする。方法Ｂ（本発明の好適な方法）ではシチジンを直接メチル化し、続いて得られた２′および３′異性体の混合物を分離する。全収率は同程度である。方法Ｂを用いると、２°−〇−異性体は混合物から結晶化可能であり、濾過し、残った母液は２゛および３′異性体の分離に先だってジメトキシトリチル化工程に供するか、もしくは、アルキル化シチジンの全部をジメトキシトリチル化工程に供し、２゛異性の分離はこの工程後にのみ行うことができる。

グアノノンのアルキル化の達成には、２′、６−シアミツプリンが例えば１９９２年１０月２７日に出願された代理人摘要録番号ｒｓＩｓ−７１０に記載されている方法によりアルキル化される。

本発明のホスホロアミダイ）・のアミノ部分は、そのようなホスホロアミダイトに対して現在使用されている種々のアミンから選択できる。そのようなアミンには種々の米国特許（主にＭ、　Ｃａｒｕｔｈｃｒｓおよびその共同研究者）に記載されているように脂肪族およびヘテロアリールアミンの両方が含まれる。これらの特許には１９８７年５月２６日に発行された米国特許第４．６６８．７７７す、１９８４年７月３０に発行された第４．４５８．０６６号、１９８３年１１月１５０に発行された第４．４１．５．７３２号、１９８５年２月１９日に発行された第４．５００．７０７号（これらは全てここに参照文献として引用されている）が含まれる。一つの好適なアミノ基はジイソプロピルアミノである。

ホスホロアミダイトのアミノ部分に加え、ホスホジエステルおよびホスホロチオエート結合に対して追加のリン保護基が使用される。一つの好適な保護基はシアノエヂル基である。その他のリン保護基としてはメトキシおよび２−（メチルスルホニル）エチルが挙げられる。さらに、通常ホスホロアミダイトカップリング化学に対して活性化剤が使用される。一つの好適な活性化剤はＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノヒドロテトラゾリドである。これらの機能を果たすその他の適切な基は先に示した特許ならびに１９８８年２月１６日に発行された米国特許第４．７２５．６７７号およびＢｃｒｎｅｒ、Ｓ、、　Ｍｕｈｌｃｇｇｅｒ、に、、ａｎｄ　Ｓｃｌｉｇｃｒ、　Ｉｌ、、　Ｎｕｃｌｃｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｃｓｃａｒモ■@１９８９゜１７：８５３；　Ｄａｈｌ、口」、、Ｎ１ｅｌｓｃｎ、Ｊ、ａｎｄ　Ｄｈａｌ、Ｏ，、Ｎｕｃｌｃｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１X８７゜１５：１７２９；およびＮ１ｅｌｓｏｎ、Ｊ、　Ｍａｒｕｇｇ、Ｊ、Ｅ、、　Ｖａｎ　Ｂｏｏｍ、Ｊ、１１．、　ｌ１ｏｎｎｃｎｓ、Ｊ、、@Ｔａａｇａａｒｄ、Ｍ、　ａｎｄ　Ｄａｈｌ、０．、　Ｊ、　Ｃｈｃｍ、Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　刊８６．２６　（これらは全てここに参照文献として引用されている）に記載されている。

ホスホロチオエート結合での使用に対してはボウケージ試薬がＢｃａｕｃａｇｃ、　Ｓ、　Ｌ。

ａｎｄ　Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ、Ｍ、Ｈ，、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　１９ｇ１．２２：１８５９ならびにＺｏｎ、Ｇ、　ａ獅■ ＳＬｅｃ、Ｊ、、Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ　ｏｌ’ｉｇｏｎｕｃｌｃｏｔｉｄｅｓ：　Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｃｏｔｉｄｃｓ　ａｎп@Ａｎａｌｏｇｓ＾Ｐｒａｃｔｉｃａｌ＾ｐｐｒｏａｃｈ；　Ｅｃｋｓｔｅｉｎ、Ｆ、　Ｅｄ、　；　ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ、　０ｘｆｏｒｄ、　１９９１　（■f状硫黄による硫化もまた記載されている）に記載されている。

アンチセンス療法では標的ＲＮＡまたはＤＮＡと特異的にハイブリッド形成可能なオリゴヌクレオチドが使用される。本発明のオリゴヌクレオチドは好適には標的領域に特異的にハイブリッド形成可能である。ここで”特異的にハイブリッド形成可能”とは標的ＤＮＡまたはＲＮＡと安定なデユーブレックスを形成することができることを意味している。標的ＤＮＡまたはＲＮＡとの結合、または安定なデユーブレックス形成により、アンチセンスオリゴヌクレオチドはこれらの核酸の遺伝的発現を選択的に阻害でき、または標的ＤＮＡまたはＲＮＡの破壊または遺伝子発現の活性化等のいくつかの他の出来事を誘導することができる。標的とされたＲＮＡの破壊はＲＮアーゼＴ−１活性化またはオリゴヌクレオチドへの鎖切断基の連結により達成することができる。アンチセンス療法は本分野では既知である。例えば、”乳頭腫ウィルスのアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤 ”と題され１９９１年１２月３日に出願されたＰＣＴ／１Ｊｓ９１／Ｑ５７２０および”ヘルペスウィルスの影響を調節するためのオリゴヌクレオチド療法”と題され１９９１年２月２５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１１０１３２７を参照されたい。

本発明のいくつかの実施態様では、本発明の化合物のオリゴヌクレオチド部分は標的配列と少な（とも６０％は相補的である。本発明の好適な実施態様では、本発明の化合物のオリゴヌクレオチド部分は標的配列と少な（とも８０％は相補的である。標的配列に対し本発明の化合物のオリゴヌクレオチド部分が１００％相補的であるのが最も好適である。本発明の好適な実施態様においては、オリゴヌクレオチド部分はカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）　、乳頭腫ウィルス、エプスタイン　バーウィルス、ライノウィルス、肝炎ウィルス、ヒト免疫不全ウィルス、単純ヘルペスウィルス、インフルエンザウィルスおよびサイトメガロウィルスからのＤＮＡまたはＲＮＡと特異的にハイブリッド形成することができる。

選択された蛋白質をコードしている選択されたＲＮＡまたはＤＮＡ配列と、該蛋白質をコードしている該選択されたＲＮＡまたはＤＮＡ配列に特異的にハイブリッド形成可能なヌクレオチド塩基配列を有する本発明の２′−〇−アルキルグアノシンまたは２，６−シアミツプリン含有オリゴヌクレオチドとを接触させることにより、本発明の２゛−０−アルキルグアノシン含有オリゴヌクレオチドおよび２，６−シアミツプリン含有オリゴヌクレオチドを蛋白質の産生の調節に使用することができ本発明のオリゴヌクレオチドは診断、治療および研究試薬として使用できる。

治療に使用するためには、望ましくない蛋白質の産生により特徴づけられる疾患を持つ動物と、該蛋白質をコードしている選択されたＲＮＡまたはＤＮＡ配列に特異的にハイブリッド形成可能なヌクレオチド塩基配列を有する本発明のオリゴヌクレオチドとを接触させる。

実施例以下の実施例は本発明を例示しているが、本発明を制限するものではない。種々の実施例において、命名４，４−ジメトキントリフェニルメチルおよびジメトキシトリチルは本発明の種々のヌクレオシドおよびヌクレオチドの５゛−ヒドロキシル部分上に位置するＤＭＴ保護基を参照するために同じ意味で使用される。

ＮＭＲスペクトルは下記の装置で測定された：　’Ｉ−ｌ−１−Ｎ　：　Ｖａｒｉａｎ　Ｇｅｍ１ｎｉ−２００（１９９，９７５Ｍｌｌｚ）、　”　Ｃ−ＮＭＲ：　ｖａｒｉａｎ　Ｇｅｍ１ｎｉ−２００（５０，２８９Ｍｌｌｚ）。ＮＭＲスペクトルは重水素化クロロホルム（テトラメチルシランを内部標準として）またはジメチルスルホキシド−ｄ６を溶媒として用いて記録した。以下の略号が個々のシグナルの多重度を示している：ｓ＝シングレット、ｄ−ダブレット、ｔ＝ニトリブレットｑ＝カルチット、Ａ１３ｑ＝ａｂカルテント、ｍ＝マルチプレット、ｄｄ＝ダブルダブレット、ｂｒ　ｓ＝ニブロードシングレット。マススペクトルは、ファブイオン化（７ｋＶ　ＸＱ原子）を用いＶＧ　７Ｏ−３ＥＱ装ｊｉ　（’／Ｇ　ａｎａｌｙｔｉｃａｌ、Ｆｉｓｏｎｓ）により得られた。カラムクロマトグラフィーのための溶媒比は容量／容量により与えられている。特に指定しない限り、溶媒の留去は汽空下（６ｏトール）３０℃で実施された。融点は未補正のまま報告されている。

実施例１２．６−シアミノー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンＲｏｂｉｎｓ、　Ｍ、　Ｊ、　、　１ｌａｎｓｋｅ、　ＦおよびＢｃｒｉｎｅｒ、Ｓ、Ｅ、、　Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｃｍ、、５９：３３６O（１９８１）により記載されている方法の改良法に従９て、グアノシン水和物（４９ｇ１Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅ＋＊１ｃａｌ　Ｃｏ、　）、トルエン（２００ｍｌ）　、　ヘキサメチルジシラザン（Ｉ（ｉ０＋ａＬ　４．３当量）およびトリフルオロメタンスルホン酸（３，７ｍ１）をステンレス鋼パールボンベに入れる。ボンベを密封し、１７０℃の油浴に約１／３沈めて５日間加熱する。ボンベはドライアイス −アセトン中で冷却して開いた。内容物はメタノール（ＭｅＯ■４）を用いて２リツトルの丸底フラスコに移し、溶媒はＢｕｃｈｉｉエバポレーターで蒸発させた。残渣に１　：　Ｉ　Ｈ２０／ＭｅＯＨ（６００ｍｌ）を加え生じる褐色の懸濁液は４−５時間還流した。得られた懸濁液はＢｕｃｈｉｉエバポレーターで蒸発させてメタノールを除去した（約１／２の容量まで）。追加のｎｚｏ（約３００ｍ１）を加え、混合物を加熱して活性炭処理し、セライト濾過パッドを通して濾過した。冷却により結晶が生成した。濾過して固形物を単離し、■１□０で洗浄して真空下９０℃で乾燥すると生成物を黄褐色固形物として１９た（４３．７ｇ、収率８９％）。この化合物のＵＶおよびＮＭＲスペクトルを文献値と比較した。

Ｒｏｂｉｎｓ、　ａｔ　ａｌ　（上記文献）の方法のこの変法は、シラザン試薬および出発物質のグアノシン水和物に水和されている水から反応系中でアンモニア分子が発生されるので反応混合物に液体アンモニアを使用する必要がない。さらに、クロロトリメチルシランの使用（反応を無水条件下で実施し、予備的エバポレーションまたは、バールボンベの開放および再密封を乾燥窒素雰囲気下で行う必要がある）が必要とされない。

実施例２２．６−ジアミツー９−（２°−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンおよび２．６−ジアミツー９−　（３−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）　（１５０ｍｌ）に溶解した２、６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（１０，５ｇ）に水素化ナトリウム（Ｎ　ａ　１４）　（２，１ｇ）を加えた。１０分間撹拌後、ヨードプロパン（６ｍｌ）を加えた。この溶液を４５分間室温で撹拌した後さらにＮ　ａ　１−１　（６００ｍｇ）を添加した。反応混合物は一夜撹拌し、エタノール（Ｅ　ｔ　ＯＨ）　（５ｍｌ）の添加により反応を停止させた。反応混合物は真空上蒸発させ、残渣を１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ□Ｃ１，に懸濁し、５→１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２ＣＩ２を溶出液として用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。２’　、　３’−ジー０−プロピル生成物が最初に溶出し、続いて２’−０−プロピル生成物および次ぎに３゛−０−プロピル生成物が溶出した。

２°−０−プロピル生成物を含む分画を集め、溶媒を留去すると粗発泡体を得た。この発泡体をＨｚＯ（４ｈｌ）から結晶化させ、冷Ｈ，Ｏで洗浄して乾燥させると２．９ｇの２′−０−プロピル化合物が得られた。母液を蒸発させて再クロマトグラフィーを行い、結晶化させるとさらに２．４ｇの２′−０−プロピル化合物が得られた。第二の母液を蒸発させると、４ｇの２゜および３°−０−プロピル化合物の混合物が油状物として得られた。主生成物として３°−０−プロピル生成物を含む分画を蒸発させ、残渣を水から結晶化させた。（２°。

３゛−ンー〇−プロピル化合物の単離および同定は下記実施例１７を参照されたい。）２．６−ジアミツー９−（２−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンＣ，４６，９１；）七　６．２；Ｎ、２５．２５、実測値：Ｃ，４７，０９；Ｈ。

６．３７；Ｎ、２５．３３゜２．６−ジアミツー９−（３°−〇−プロピルーβ−Ｄ−リボフラノシル）プリン実施例３２′−〇−プロピルグアノシン２．６−ジアミツー９−　（２’−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンおよび２，６−ジアミツー９−（３’−０−プロピル−β−Ｄ−リポフラノシルメシリンの混合物（４，６ｇ）およびアデノシンデアミナーゼ（２００ｍｇ、　Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓタイプ■）を０．１Ｍ　トリス緩衝液（１５０ｍｌ、ｐＨ７，４）　、ＤＭＳＯ（１００ｍｌ）および０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（１０ｍｌ）中で一夜室温で撹拌した。さらに０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（３ｈｌ）およびＤＭＳＯ（２０ｍｌ）に溶解したアデノシンデアミナーゼ（１４０ｍｇ）を加え、反応液をさらに２４時間撹拌した。真空下溶媒を蒸発させ、残渣を５→２０％ＭｅＯ）Ｉ／ＣＨ，ＣＩ２を用いるシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを行った。

生成物含有分画を真空下蒸発させ、■］２０から結晶化すると２．６ｇの生成物を得た、５°、　０−ＣＨ２）　、３．　８５　（ｍ、１）　、４．　２　（ｍ、１）　、４．　２３　（ｍ。

ＨＩ　９　Ｎ　６０　Ｂとして、計算値：Ｃ，４７，９９；Ｉ七　５．　８９；Ｎ、２１．　５３実測値：Ｃ，４７，９０，Ｈ，５，８５：Ｎ、２１．　４４゜実施例４Ｎ２−イソブチリル−２゛−〇−プロピルグアノシンビリジン（５０ｍｌ）に溶解した２゛−０−プロピルグアノシン（３，６ｇ）を水浴で冷却し、塩化トリメチルシリル（８，４ｍｌ、　５当量）を加えた。反応混合物を３０分間撹拌し塩化イソブチリル（５，８ｍｌ、　５当Ｍ）を加えた。反応液を４時間撹拌しその間に室温まで暖めた。溶液を冷却し、Ｈｔｏ　（１０ｍｌ）を加えさらに３０分間撹拌した。１ＮＨｓＯＨ（１０ｍｌ）を加え、溶液は真空下蒸発させた。残渣は生成物の溶出に１０％Ｍ　ｅ　Ｏ＋−１／　ＣＨ２ＣＩ　２を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。生成物含有分画を蒸発させ、２．５ｇの生成物を発泡体として得た。

分析用試料はＣＨｔ　Ｃｌ　２”　６％Ｍ　ｅ　Ｏ）Ｉ　／　ＣＨ２Ｃｌ　ｔで溶出するシリカでの再りＣ旦ｚ）　、　２．７５　［ｍ、　１．　ＣＨ（ＣＨ３）　２］　、　３．５２　（ｍ、　６．０ＣＨｚ）　。

Ｈ，６，４８；Ｎ、１７．３２　実測値：Ｃ，５０，８１；Ｈ，６，６２；Ｎ。

１７０４゜実施例５Ｎ２−イソブチリル−５゛−ジメトキシトリチル−２°−０−プロピルグアノシンＮ２−イソブチリル−２−０−プロピルグアノシン（２，６４ｇ）をピリジンと共沸させた後ピリジン（１８０ｍｌ）に可溶化した。室温で撹拌しながら塩化ジメトキシトリチル（２，４ｇ、　１．１当量）およびジメチルアミノピリジン（５０ｍｇ）を加えた。反応混合物は一夜撹拌した後真空下蒸発させた。残渣をＣＩ、ＣＬ／２ｘ希Ｎａ、ＣＯ，に分配させた。有機相を乾燥しくＭｇ５０４）、蒸発させた。残渣はシリカゲルクロマトグラフィー　（１：　Ｉ　ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ−＋５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ。

１％ＴＥＡ）により精製し、４．１ｇの生成物を得た。ＩＩ−Ｉ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ（ｍ、１）、４．　３（ｍ、１）、４．　４（ｍ、１）、５．　１８（ｄ、１．　３゜０として、計算値：Ｃ，６３，８３；Ｉ−Ｌ　６．　２０．Ｎ、　９．　８０　実測値・Ｃ１６４，２２；Ｈ，６，３５；Ｎ、９．５５゜実施例６Ｎ２−イソブチリル−５゛−ジメトキシトリチル−２′−〇−プロピルグアノシン　３°−β−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイトＮ２ −イソブチリル−５゛−ジメトキシトリデル−２゛−０−プロピルグアノシン（４，１ｇ）、ビス−（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエチルホスファイト（３，７ｍｌ、　２当量）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（０，５ｇ、　０．５当量）のＣＨｚＣ１ｔ溶液を室温で一夜撹拌した。溶液を希Ｎａ、ＣＯ３続いて希Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＣｌと分配させ、Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ４で乾燥した。真空下溶媒を蒸発させ、残渣はシリカゲルクロマトグラフィー（１２０ｇ、　１％ＴＥＡを含むＥｔＯＡｃ）により精製し、５．２ｇの生成物を発泡体として得た。”　Ｐ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ　ｓ）δ　１５０、　５．　１５０．　８゜実施例７２．６−ジアミツー９−（２’−０−ペンチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンおよび２，６−ジアミツー９−　（３’−０−ペンチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン実施例２の方法により、２．６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（１０ｇ）が水素化ナトリウム（１，７ｇ、　１．２当量）およびブロモペンタン（５，３ｍｌ、　１．２当量）のＤＭＦ　（９０ｍｌ）溶液で処理された。シリカゲルクロマトグラフィーにより以下の化合物が得られた。

最初に溶出する成分（同定はされていないが２．３−ジー（０−ペンチル）化合物と信じられる）は油状物として単離された（７００ｍｇ）。発泡体として単離された次の成分（３，３ｇ）がＭ　ｅ　ＯＨから結晶化され２．８ｇの２．６− ジアミツー９−（２−０−ベンチルーβ−ローリボフラノシル）プリンを得た。

固形物として単離された第三の成分（２００ｍｇ）はＭｅＯＨから結晶化され８０ｍｇの２．６−ジアミツー９−（３′−〇−ペンチルーβ−Ｄ−リポフラノツル）プリンを得た。第一および第二の成分の混合物を含む分画を蒸発させ、残渣をＭｅＯＨから結晶化させてさらに９００ｍｇの２゛−〇−化合物を得た。別の分画から２−〇−ペンチルおよび３°−０−ペンチル化合物の混合物を１．２ｇ得た。

２．６−ジアミツー９−（２’−０−ペンチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン３３および３．　６　（ＡＢＸ、２．１１−５°）、３．９３　（ｂｒ　ｓ、１）、４゜（ｃＪ、１．旦−１’　）、６．８　（＋）ｒ　ｓ、２．　２−ＮＨ２）および７．９３（ｓ、１．ｌ−１−８）。

２．６−シアミノー９−（３°−０−ペンチル−β−Ｄ−リボフラノシルメシリン’ＩＩ　Ｎ〜ｉＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）　δ０．８７　（１３，ＣＨ３）　、　１．３　（ｍ。

４、　ＣＨ２）　、　１．５５　（ｍ、　２．　ＣＨ２）　、　３．５　（ｍ、　２．０−ＣＨ２）、３゜５°　−０）、１）　、５．　７０　（ｃｌ、１．　１１−１°）、５．　７５　（ｂｒ　ｓ、２．　６−ＮＨｚ）、６．　７６　（ｂｒ　ｓ、　２．　２−ＮＨ２）および７．９３　（ｓ、１．旦−８）。

実施例８２゛−０−ペンチルグアノシン実施例３の方法に従い０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（５０ｍ１．　ｐＨ６、０）およびＤＭＳｏ　（２５ｍｌ）中、３５℃にて２．６−ジアミツー９−（２ °−〇−ペンチルーβ−Ｄ−リボフラメシル）プリン（１，９ｇ）をアデノシンデアミナーゼ（２０に分けて添加−最初に５０ｍｇ、２回目に８０ｍｇ）で処理すると１．４ｇの生成物を得た。’ＩＩ　ＮＭＲ（Ｄ実施例９Ｎ２−イソブチリル−２゛−０−ペンチルグアノシン実施例４の方法に従いピリジン（３５ｍｌ）に溶解した２−０−ペンチルグアノシン（２，３ｇ）を塩化トリメチルシリル（４，１５ｍ１，５当量）および塩化イソブチリル（３゜４ｍｌ、　５当ＩＩ）で処理し生成物を発泡体として得た（２．３ｇ）。分析用試料はＥｔＯＡｃ　／　Ｈｅ　ｘから結晶化させた。ｍ、ｐ、１７８−１８０℃。’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄａ）　δ　０．　７５　（ｔ、３．　（、ｌ−１３）、１．　１　［ｍ、１０．　２ｘＣＨ２，ＣＨ（ＣＨ３）２］　、１．　４　（ｍ、２．　ＣＨ２）　、２．’７４　［ｍ、１．　ＣＨ（ＣＬ！、３）　２コ　、３．　５６　（ｍ、４．　ＱＣ）［２，Ｈ−５’　）、３．　９３　（ｍ、１　、其 −４’）、４．２５（ｍ、１）、４．３４（ｍ、１）、５．０５（ｔ、１゜５° 　−〇旦）　、５．　１７　（ｄ、１．、　３’−０其）、５゜８８　（ｄ、１．其−１゛）。

８、　２７　（ｓ、ｉ、　Ｈ−８）、１１．６５　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）および１２゜０５　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）。元素分析　Ｃ＋ａｌ１２ｏＮｓＯａとして、計算値、Ｃ１５３、８９；Ｈ，６，９０、Ｎ、１６．　５４　実測値：Ｃ，５３，７５；Ｈ，６゜９２：Ｎ、１６．４０゜実施例１ＯＮ２−イソブチリル−５′−ジメトキシトリチル−２′−〇−ペンチルグアノシン実施例５の方法に従いピリノン（５０ｍｌ）中でＮ２−イソブチリル−２−０ −ペンチルグアノシン（２，３ｇ）を塩化ジメトキシトリチル（１，７ｇ、　１．１当量）およびジメチルアミノピリジン（触媒として１００ｍｇ）で処理すると、発泡体として生成物が得られた（２．９ｇ）。ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ一旦。

）６０．８３　（ｔ、　ａ、　ＣＨ，）。

１、　２　［ｍ、１０．　２ｘＣ旦２＋　ｃ旦（ＣＨ３）　ｚ］　、１．　４８　（ｍ、２．　ＣＨ，）。

２、７８　［ｍ、　１．　Ｃ）−１（Ｃ旦ｓ）２］　、　３．４．３．６　（ｍ、　４．　ＱＣＣＨ２旦−５°）、３．　７５（ｓ、６．０Ｃ１１３）、４．　０７（ｍ、１）、４．　２７（ｍ。

１）、４．　４２（ｍ、１）、５．　２（ｂｒ　ｄ、１．　３’　−０Ｈ）、５．　９５（ｄ、］、、　Ｈ−１°）、６．　８５．　７．　２５．　７．　３８　（ｍ、１３．　ＤＭＴｒ）。

８、　１５　（ｓ、１．旦−８）、１１．　６７　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）および１２゜１　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）。元素分析　Ｃ４ｏＨ４ｔＮｓＯａ　・１／２Ｈ２０として、計算値・Ｃ，６５，３８；Ｈ，６，５８；Ｎ、９．　５３　実測値：Ｃ，６５，３７；Ｈ，６，５９、Ｎ、９．　３９゜実施例１１Ｎ２−イソブチリル−５゛−ジメトキシトリチル−２′−〇−ペンチルグアノシン　３°−β−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト実施例６の方法に従いＮ２−イソブチリル−５゛−ジフトキントリチル−２′−〇− ペンチルグアノシン（１，７ｇ）をビス−（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）− ２−シアノエチルホスファイト（１，４８ｇ）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（２００ｍｇ）で処理して生成物を得た（１．４ｇ）ｏ ”ＰＮＭＲ（ＣＤＣＩａ）　６　１５０゜５．１５０．８５゜実施例１２２．６−ジアミツー９−（２’−０−ノニル−β−Ｄ−リポフラノシルメシリン実施例２の方法に従いＤＭＦ　（７００ｍｌ）中で２．６−ジアミツー９−（β −Ｄ−リボフラノシル）プリン（５０ｇ、　１８０ミリモル）を水素化ナトリウム（８’、　８ｇ、　２２０ミリモル）およびブロモノナン（５９ｇ、　５４．４ｍｌ、　２８５ミリモル）で処理すると（Ｎａｌ−１添加の間、ＤＭＦ中のジアミノ化合物は水浴で冷却された）８３ｇの粗生成物を得た。５０ｇの粗生成物がシリカゲルクロマトグラフィーで精製された。２°−０−ノニルおよび３゛− ０−ノニル生成物を含む分画が合併され、２°および３゛生成物の７７　：　２３混合物が得られた（２９ｇ）。純粋な２°−０−ノニル生成物はクロマトグラフィーにより＝６Ｈｚ）　、５．　７６　（ｓ、２．　２−ＮＨ２）　、５．　８３　（ｄ、１．　Ｈ−１°。

Ｊ＝６Ｈｚ）、６．８１　（ｓ、　２．　６−ＮＨ２）および７．　９６　（ｓ、１．旦−８）。

実施例１３２′−〇−ノニルグアノシン実施例３の方法に従い０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（５０鎮１．　ｐＨ７，４）　、０．１Ｍ　トリス緩衝液（１８００ｍｌ、　ｐＨ７、４）およびＤＭＳＯ（１０８０ｍｌ）中、２，６−ジアミツー９−（２’−０−ノニル−β−Ｄ− リボフラノシル）プリンおよび２．６−ジアミツー９−（３’−０−ノニル−β −Ｄ−リボフラノシル）プリンの混合物（約８０：２０の混合物、２９ｇ）をアデノシンデアミナーゼ（１，６ｇ）で処理すると６０ｇの生成物を油状物として得た。分析用生成物はシリカゲルクロマトグラフィーおよびＥｔＯＡｃからの再結晶によ２　［ｍ、２．　ＯＧＨｚ　ＣＨ２（ＣＨｚ）　ｓ］　、３．　２７　３．　６１　［ｍ、４゜旦−５’　、Ｏ−ＣＨ２（ＣＨｚ）　？］　、３．　９５　（ｍ、１、旦−４’　）、４．　１０−４．１３　（ｍ、　２．旦−２°、　Ｈ−３’　）　、　５．１３−６．０６　（ｍ、　２゜３′−〇旦　５゛−０旦）、　５．８０　（ｄ、　１．旦−１’　、　Ｊ＝６．４Ｈｚ）。

６、　４７　（Ｓ、２．　２−ＮＨｚ）、７．９８　（ｓ、１．８一旦）および１０．６４　（ｓ、１．　Ｎ＋アミド）。元素分析　Ｃ＋　ｓ　Ｈｓ　＋　Ｎ　ｓ　Ｏ３として、計算値：Ｃ１５５、７３；Ｈ，７，６３；Ｎ、１７．　１０　実測値：Ｃ，５５，６７；Ｈ，７゜６６；Ｎ：　１７．０２゜実施例１４Ｎ２−イソブチリル−２°−０−ノニルグアノシン実施例４の方法に従いピリジン（３６０＋ｎｌ）に溶解した２゛−〇−ノニルグアノシン（１４，７ｇ）を塩化トリメチルシリル（２３，４＋ｎｌ）および塩化イソブチリル（３０，軸ｌ）で処理し、粗生成物を得た（３７ｇ）。組物質はシリカゲルクロマトグラフィー（９０／１０　ＣＨＣＩｓ／ＭｅＯＨで溶出）により精製され、ＥｔＯＡｃから再結晶して１４．６ｇの生成物が得られた。ｍ、ｐ、１６８−１６９℃。Ｉ）（ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　δ　０．　８５　［ｔ、ａ、ＣＨ、（ノニル）］、１゜１４　［ｍ、　１８．０　ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨｚ）　ａ、　ＣＨ（Ｃ旦ｓ）　２］　、　１．４０（ＣＨｓ）　！］　、　３．３１−３．６３　［ｍ、　４．　Ｈ５’　、　ＯＣＨｔ　（ＣＨｔ）　？］。

３’　）、５．　１０　（ｔ、１．　５°−〇旦、Ｊ＝５Ｈｚ）、５．１８　（ｄ、１゜３’　−ＯＨ、Ｊ＝４Ｈｚ）、　５．９１　（ｄ、　１．旦−１°、Ｊ＝６．６Ｈｚ）。

８、　３１　（ｓ、１．　８一旦）、１１．　７３　（ｓ、１．　Ｃ鵞アミド）および１２゜１１　（ｓ、１．　Ｎ！７ミＦ）　。元素分析　ＣｔｓＨｓｔＮ＊Ｏｓとして、計算値：ｃ。

５７．６０：Ｈ，７，７８；Ｎ、１４．６０　実測値二Ｃ，５７，６３；Ｈ，７゜９２：Ｎ、１４．６２゜実施例１５Ｎ２−イソブチリル−５゛−ジメトキシトリチル−２′−０−ノニルグアノシン実施例５の方法に従いピリジン（２００ｉ＋１）中でＮ２−イソブチリル−２° −〇−ノニルグアノシン（１４，６ｇ、　３０．４ミリモル））を塩化ジメトキシトリチル（１２，１ｇ、　１．１当量）で処理するとクロマトグラフ前は１６ｇの、クロマトグラフ後は１１．５ｇの紫色ノ発泡体ヲ得り。’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄｓ）　６　０．８４　［ｔ、３゜ＣＨ，（ノニル）、Ｊ＝７Ｈｚ］　、１．１６　［ｍ、１８，０−ＣＨｌ　ＣＨｌ−（ＣＨｌ）　ｓ、　ＣＨ（ＣＨｓ）　ｚ］　、　１．４３　［ｍ、　２．　ＯＣＨｔ　ＣＨ，−（ＣＨｚ）　ｓ］　、　２．７７　［ｍ、　１．　ＣＨ（ＣＨｓ）　Ｊ　、３．１８　３．６３　［ｍ。

４、旦−５°、Ｏ−ＣＨ２（ＣＨ４）　７］　、３．　７４　（ｓ、６．　ＤＭＴｒ　Ｏ−ＣＨ３）　、　４．０６　（ｍ、　１、旦−４’　）　、　４．２７　（ｍ、　１．旦−３°）、４゜４２　（ｍ、　１．旦−２’　）　、　５．１９　（ｄ、　１．３’−０旦、Ｊ＝５Ｈｚ）、５゜９４　（ｄ、１．旦−１’　、Ｊ＝５．　７Ｈｚ）、６．　８３−７．　３８　（ｍ、１３゜ＤＭＴｒ芳香族）、８．　１４　（ｓ、１．８−８）、１１．　６５（ｓ、１．　Ｃ，アミド）および１２．　１１　（ｓ、１．　Ｎ＋アミド）。元素分析Ｃａ　４　Ｈｓ　ｓ　Ｎ　ｓ　Ｏａとして、計算値：Ｃ，６７、５９：Ｈ，７，２７；Ｎ、８．　９６実測値：Ｃ，６７，５９：Ｈ，７，１１；Ｎ、８．８０゜実施例１６Ｎ２−イソブチリル−５−ジメトキシトリチル−２−〇−ノニルグアノシン　３゛−β−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト実施例６の方法に従いＮ２−イソブチリル−５°−ジメトキシトリチル−２゛−０−ノニルグアノシン（２，１ｇ）をビス−（Ｎ、　Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエチルホスファイト（１，５ｇ）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（０，２ｇ）で処理して生成物を得た（２．０ｇ）。”Ｐ　ＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）　６１５０．７および１５０．４（シアステレオマー）。

実施例１７２．６−ジアミツー９−（２°、３°−ジー０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンＤＭＦ中、２．６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（１０ｇ）　、ＮａＨ（３ｇ）および１−ブロモプロパン（１０ｍｌ）を使用して実施例２の方法を繰り返した。

反応溶媒を蒸発後、反応生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製した。より遅く移動する４、３ｇの２′−〇−プロピル生成物が発泡体として得られた。

この発泡体を水から結晶化させると３．６ｇの生成物が得られた。ｍ、ｐ、１６５−１６７℃。１且　ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄａ）δ　０．８０および０．９２　（ｔ、　６゜ＣＨ３）、１．６および１．４５　（ｍ、　４．　ＣＨ１）、　３．７　３．４５　（ｂｒｍ、６）、４．０７（ｍ、２）、４．５（ｄｄ、１）、５．５５（ｂｒ　ｔ、１゜５°−０旦）、　５．８　（ｂｒ　ｓ、　２．６−ＮＨｚ）　、５．８５　（ｄ、　１．旦−１°）、６．　８４　（ｂｒ　ｓ、　２．　２　ＮＨｚ）および８．０　（Ｓ、１．旦二８）。

元素分析Ｃ＋５ＨｚｓＮｓＯ４として計算値：Ｃ，５２，４５；Ｈ，７，１５；Ｎ、２２．９４　実測値：Ｃ，５２，１８；Ｈ，７，１９；Ｎ、２２．７５゜実施例１８Ｎ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６−ジアミツー９−　（２’−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン実施例４の方法に従い、ピリジン（３６ｍｌ）中、２．６−ジアミツー９−（２ °−０−プロピル−β−Ｄ−リポフラノシルメシリン（２，０ｇ）を塩化トリメチルシリル（３，９■１．５当量）および塩化イソブチリル（３，２ｍｌ、　５当量）で処理すると、シリカゲルクロマトグラフィー後に発泡体を得た。発泡体をＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから結晶化させて２．２ｇの生成物を得た。ｍ、ｐ、１４０−１４２℃。’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−山）δ　０．７７　（ｔ、　３．　ＣＨ３）、　１．０７．１．１６　Ｃｄ、　１２．２ｘＣＨ（ＣＨ３）　ｇ］　、　１．５　（ｍ、　２．　ＣＨ２）　、　２．９．３．０３　［ｍ、　２．２ｘＣＨ（ＣＨｓ）　２］　、　３．４　（ｍ、１．旦−５”　）、　３．５８　（ｍ、　３．　ＱＣＣＨ２旦−５’　）　、　３．９５　（ｍ、１．旦−４’　）、　４．３　（ｍ、　１）、　４．５（ｍ、１）、　５．０２　（ｔ、１．５’　 −０旦）、　５．　２　（ｄ、１．３’　−０旦）。

６、０３　（ｄ、　１．旦−１’　）　、　８．５８　（ｓ、　１．旦−８）、　１０．３９　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）および１０．５７　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）。

実施例１９Ｎ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６−ジアミツー９−（５°−〇−ジメトキシトリチルー２′−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン実施例５の方法に従いピリジン（５０ａ＋１）中でＮ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６ −ジアミツー９−（２’−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（１，９ｇ）を塩化ジメトキシトリチル（１，５ｇ、　１．１当量）およびジメチルアミノピリジン（触媒として２０ｍｇ）で処理すると、発泡体として生成物が得られた（２．８ｇ）。

ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）δ　０．７９　（ｔ、　３．　ＣＨｓ）、　１．０７．　１゜１６　［ｄ、１２，２ｘＣＨ（ＣＨ３）２］　、　１．５　（ｍ、　２．　ＣＨｌ）、　２．９゜３、０３　［ｍ、　２．２ｘＣＨ（ＣＨｓ）　ｘ］、　３．５８　（ｍ、　３．　ＱＣＣＨ７旦−５’　）　、　４．　１５　（ｍ、１．其−４’　）、　４．４　（ｍ、　４）、　４．６　（ｍ、１）。

５、　１５　（ｄ、１．　３’　−０旦）、６．　１５　（ｄ、１．旦二１°）、　６．　８−７゜実施例２ＯＮ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６−ジアミツー９−（５−０−ジメトキシトリチル−２°−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノンノリプリン　３′−β− ／アノエチルーＮ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイトＮ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６−ジアミツー９−（５°−０−ジメトキシトリチル−２゛−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（２，６ｇ）をビス−（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエチルホスファイト（１，７ｇ）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（３０ｈｇ）で室温で一夜処理した。反応混合物は希ＮａＩＣＯｓ／ＣＨＣｌ２続いてＮ　ａ　２　ＣＯｓ／　Ｎ　ａ　ＣＩと分配させ、ＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層を蒸発させると発泡体を得た。発泡体をＣＨｚＣＩ　２　（約８１１）に溶解してゆっ（リヘキサン（５００ａ＋１）に加えた。固形物を濾過し、乾燥させると生成物が粉末として得られた（３．　Ｉｇ）。”Ｐ　ＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）δ　１５０．８および１５１．３゜実施例２１２．６−ジアミツー９−　［２’　−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３− イル］−β−Ｄ−リボフラノシル］プリンおよび２．６−ジアミツー９−　［３ ’−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イル］−β−Ｄ−リボフラノシル］プリンＤＭＦ　（２０ｇ）中、２，６−ジアミツー９−（β−トリボフラノシル）プリン（１４，２ｇ）を水素化ナトリウム（３ｇ、　１．５当量）およびト（３−ブロモプロピル）フタルイミド（５，３ｍｌ　１．５当量）にて−夜７０ ℃で処理した。反応混合物をＨ，Ｏおよびヘキサン（ＩＸ）間に分配し、次に水層をＣＨ，ＣＩ２で４回抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて残渣を得た。この残渣はＭ　ｅ　ＯＨ／　ＣＨ！　ＣＩ　！で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製された。最初に２’−０−（Ｎ−フタルイミド）プロピル生成物、続いて混合分画および次に３’−０−（Ｎ−フタルイミド）プロピル生成物が溶出された。各分画を蒸発させると全て発泡体として３．４ｇの２゜−０−（Ｎ−フタルイミド）プロピル生成物、３．０ｇの２°および３″生成物の混合物および１４ｇの３’−０−（Ｎ−フタルイミド）プロピル生成物が得られた。３°−０−（Ｎ−フタルイミド）プロピル生成物はＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨから結晶化されて２７０ｍｇの固形物が得られた。

２．６−ジアミツー９−　［２−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イル］−β−Ｄ−リポフラメシル］プリン ’　ＨＮ　Ｍ　Ｒ（Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏ一旦、ｌ）δ　１．８　（ｔｑ、　２．−ＣＨｌ）、３．４−３、　５８　（ｍ、６．　２ＸＣＨ２，Ｈ５°）、３．　９　（ｍ、１）、４．　２６　（ｍ。

１）、４．３７（ｍ、１）、５．０５（ｂｒ　ｄ、１．３’−０Ｈ）、５．４２．６−ジアミツー９−　［３−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イル］ −β−Ｄ−リボフラノシル］プリンｍ、ｐ、２２０−２２２°Ｃ，’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄｏ）　６　１．　８５　（ｔｑ。

２、−ＣＨ−Ｎ）　、　３．６−３．６７　（ｍ、　４．−０−ＣＨｓ、Ｈ５° ）、３゜８５（ｍ、１）、３．９２（ｍ、１）、４．６（ｍ、１）、５．３３（ｄ、１゜２゛−〇旦）、　５．４５　（ｂｒ　ｔ、１．５°−０Ｈ）　、　５．６５　（ｄ、１．旦−１’　）、　５．７３　（ｂｒ　ｓ、　２、ＮＨ，）、６．７５　（ｂｒ　ｄ、　２゜Ｎ旦ｚ）　、　７．８−７．　８５　（ｍ、４．　Ａｒ）および７．８５　（ｓ、１．旦−８）。

元素分析　Ｃ２１Ｉ−＋　２　ｓ　Ｎ　ｔ　０６として、計算値：Ｃ，５３，７３；Ｈ，４，９４、Ｎ。

２０．８８　実測値　Ｃ，５３，５９；Ｉ−１，４，８９；Ｎ、２０．　６３゜実施例２２２°−０−（（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イル］シアノンン実施例３の方法に従いＯ，１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（３＋ｎｌ、　ｐＨ７、４）　、０．０５Ｍ　）リス緩衝液（６５ｍｌ、　ｐＨ７，４）およびＤＭＳＯ（４５ｍｌ）中、２．６−ジアミツー９−　［２’−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３ −イル〕−β−Ｄ−リボフラノシル］プリン（３，１ｇ）をアデノシンデアミナーゼ（２００ｍｇ）にて、５日間室温で処理した。シリカゲルクロマトグラフィーからの生成物含有分画を蒸発させると、濃縮に伴い白色結晶が生成した。結晶を濾過し、Ｍ　ｅ　Ｏ）（で洗浄すると１．１ｇの生成物が得られた。

分析用試料はＭ　ｅ　ＯＨから再結晶された。ｍ、ｐ、１９２−１９４℃。ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄＪδ　１．．８２　（ｍ、２．　ＣＨｓ）、３．　４５　３．　６７（ｍ、６．８−５’　、　ＱＣＣＨ２ＮＣＣＨｓ、３．　９　（ｍ、１）、４．　３　（ｍ、２゜其−２°、旦−３’　）、５．　１　（ｍ、２．５’ および３°−０Ｈ）　、５．８　（ｄ。

■、其−１°）、６．　５　（ｂｒ　ｓ、２．　ＮＨ２）　、７．　８３　（ｓ、４．フタル）。

Ｃ２１Ｈ２２Ｎ６０□・１／２Ｈ１０として、計算値：Ｃ，５２，６１；Ｈ，４，８３’、Ｎ。

１７．５３　実測値：Ｃ，５２，５２；比　４．　７８；Ｎ、１７．３８゜実施例２３Ｎ２−イソブチリル−２’−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン実施例４の方法に従い、ピリジン（３５＋ｎｌ）中、２°−０−［（Ｎ −フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン（７，２ｇ、粗生成物）を塩化トリメチルシリル（１１，６吐５当量）および塩化イソブチリル（８ｍｌ、　５当量）で処理すると発泡体として生成物を得た。分析用試料はＥｔＯＡｃからの結晶化により得られた。ｍ、ｐ、１６６−１６８°Ｃｏ１１−Ｉ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｓ）６１．　１５　［ｄ、６．−ＣＨ（ＣＨｓ）　２］　、　１．８５　（ｍ、　２．　ＣＨｓ）　、　２．８　［ｍ、　１．　ＣＨ（Ｃｔｌｓ）　ｉ］　。

３、４５−３．７　（ｍ、　６．旦−５’　、ＱＣ旦、、ＮＣＣＨｓ　、　３．９５　（ｍ、　１）。

：Ｃ，５４，０４；Ｈ，５，３２：Ｎ、１５．２９　実測値：Ｃ，５４，４６；１’Ｌ　５．　３９；Ｎ、１４．　９８゜実施例２４Ｎ２−イソブチリル−５°−ジメトキシトリチル−２’　−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン実施例５の方法に従いピリジン（５０ｍｌ）中でＮ２−イソブチリル−２°−０ −［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン（１，２ｇ）を塩化ジメトキシトリチル（８２０ｍｇ、　１．１当量）およびジメチルアミノピリジン（触媒として２０ｍｇ）で処理され、溶出液として１：Ｉ　Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、次にＥｔＯＡｃ続いて５％ＭｅＯＨ／１％ＴＥＡ含有ＥｔＯＡｃが用いられた。生成物含有分画を蒸発させると生成物が発泡体として得られた（１．７ｇ）。

’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−共。）６１．１［ｄ、、　６．−ＣＩ−１（ＣＨｓ）　２］　、　１．８５　（ｍ、　２．　ＣＨ２）　、　２．７５　［ｍ。

１、　ＣＨ（ＣＨｓ）　２］　、　３．４５　３．７　（ｍ、　６．旦−５’　、ＱＣ旦、、ＮＣＣＨｓ　、　３．７５　（ｓ、　６．　ＱＣＣＨｓ、　４．０　（ｍ、　１）、　４．３２　（ｍ、　１）。

４．４　（ｍ、１）、５．２　（ｄ、１，３°−０Ｈ）、５．９３　（ｄ、１．Ｈ−１°　）、６．８３，７．２．７．３５　（ｍ、１３．ＤＭＴｒ）、７．７８　（ｓ。

４、フタル）、８．　１５　（ｓ、１．旦−８）、１１．　６　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）および１２．　０５　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）　、元素分析　Ｃ４ａＨ４ａＮａｏ＋ｏとして、計算値：Ｃ，６４，１８；比　５．　６２；Ｎ、　９．　７６　実測値：Ｃ，６４，４２；Ｈ，５，７８；Ｎ、９．５３゜実施例２５Ｎ２−イソブチリル−５′−ジメトキシトリチル−２°−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン　３゛−β−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト実施例６の方法に従いＮ２−イソブチリル−５°−ジメトキシトリチル−２’− ０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン（１，６ｇ）をビス −（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエチルホスファイト（１，４８ｇ）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（２０ｈｇ）で処理し生成物を得た（２．０ｇ）。３１ｐＮＭＲ（ＣＤＣＩ＋）δ　１５０．９゜実施例２６Ｎ２−ジメチルアミノメチリデン−５゛−ジメトキシトリチル−２’　−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イル］シアノシンＤＭＦ中、２’　−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン（９００ｍｇ）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド　ジメチルアセクール（２ｍｌ）で処理した。反応混合物は２時間撹拌し、５２℃で高真空上蒸発させた。残渣を一度ビリジンと共沸させた後にピリジン溶液とした。塩化ジメトキシトリチル（７１３ｍｇ、　１．１当量）およびジメチルアミノピリジン（触媒として２０ｍｇ）を加えた。反応混合物は一夜撹拌し、Ｎａ２ＣＯ３／ＣｌＩ２Ｃ１２に分配し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、実施例５に従ってシリカゲルクロマトグラフィーにより精製すると１．７ｇの生成物が灰色がかった白色の固形物として得られた。’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ）δ　１，８８　（ｍ、　２．　ＣＨ２）　、　３．１　［ｄ、　６．　Ｎ＝ＣＨＮ　（ＣＨ３）　！］　、　３．３　（ｍ。

２、旦−５’　）　、　３．６７　（ｍ、　４．　ＱＣＣＨ＋　ＮＣｚ）　、３．７８　（Ｓ、　６．２８５、　７．　２５．　７．　３９　（ｍ、１３．　ＤＭＴｒ）　、７．　８５　（ｓ、４．フタル）　、７．　９５　（ｓ、１．旦− ８）　、８．　５　［Ｓ、１．　Ｎ＝ＣＨＮ　（ＣＨｓ）　ｔ］および１１．３９　（ｓ、１．　ＮＨ２）。元素分析　Ｃ＜５Ｈ４ｓＮｔＯｏ’　１／２ＨａＯとシア計算値：Ｃ，６４，５８；Ｈ，５，５４；Ｎ、１１゜７１　実測１ｉａ：Ｃ。

６４゜１０；Ｈ，５，６５；Ｎ、１１．４７゜実施例２７Ｎ２−ジメチルアミノメチリデン−５゛−ジメトキシトリチル−２°−０−（（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イル］シアノンン　３゛−β−シアノエチル− Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイトＮ２−ジメチルアミノメチリデン−５゛−ジメトキシトリチル−２−〇−［（Ｎ −フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン（１，７ｇ）　、ビス＝（Ｎ、　Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエチルホスファイト（１，４ｍ１）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（１７０ｍｇ）を室温で一夜撹拌した。反応混合物はＣＨｔＣＩ　ｚおよびＮａｘＣＯｓ　（２ｘ）間に分配させた。有機層はＭｇ５Ｏａで乾燥し、蒸発させると油状物を得た。油状物を最小量のＣＩ（ＩＣＩ２に溶解してヘキサン（約９０ｈｌ）に滴加すると生成物が沈澱した。固形物を分離し、乾燥させると２．１ｇの生成物が得られた。

３１Ｐ　ＮＭＲ（ＣＤＣＩ、）δ　１５０．４．１５０．６゜実施例２８２．６−ジアミツー９−［２°−０−Ｃ（Ｎ−フタルイミド）ベンター５−イル］−β−Ｄ−リボフラノノル］プリンＤＭＦ　（６０ｍｌ）中、２，６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（６゜７ｇ）を水素化ナトリウム（１，３ｇ）およびＮ−（５−ブロモペンチル）フタルイミド（７，８ｇ、　１．１当量）で３日間室温で処理した。反応混合物をＨ，ＯおよびＣＨ２Ｃｌ。

間に分配し、次にＣＨＩＣｌ、で４回抽出した。合併した有機層をＭｇ５Ｏ，で乾燥し、蒸発させた。この残漬は５％→１０％Ｍ　ｅ　ＯＨ／　ＣＨｘ　ＣＩ　ｔで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製された。２’−０−（Ｎ −フタルイミド）ペンチル含有分画を集め、蒸発させると２．２ｇの生成物が黄色発泡体として得られＮ　７０　ｓとして計算値：Ｃ，５５，５０；比　５．　４７；Ｎ、１９．　７１　実測値：Ｃ，５５，４４；Ｈ，５，５１；Ｎ、１９．３０゜実施例２９２’　−０−［（Ｎ−フタルイミド）ペンタ−５−イルコグアノシン実施例３の方法に従い０．１Ｍ　トリス緩１ｊｆ＆（６０吐ｐＨ７，４）　、０．１ＭＮａＰＯ４緩衝液（２吐ｐＨ７，４）およびＤＭＳＯ（４ｈｌ）中、２．６−ジアミツー９−　［２’−０−［（Ｎ−フタルイミド）ペンタ−５−イル］−β−Ｄ− リボフラノシル］プリンおよび２．６−ジアミツー９−　［３−０−［（Ｎ−フタルイミド）ペンタ−５−イル］−β−Ｄ−リボフラノシル］プリン異性体の混合物（２，２ｇ）がアデノシンデアミナーゼ（６０■ｇ）により５日間室温にて処理された。シリカゲルクロマトグラフィーからの生成物含有分画を蒸発させると、生成物（１，０ｇ）が粗白色固形物として得られた。分析用試料はＭｅＯＨを加えることにより結晶化させて調製された。ｍ、ｐ、１７８−１８０℃。１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄｏ）δ　１．　２４　（ｍ、２．　Ｃ旦ｚ）　、１．　５　（ｍ、４゜２ｘＣ旦２）　、　３．５　３．６　（ｍ、　６．旦−５’　、ＱＣ旦、、ＮＣ旦ｚ）、３゜８７（ｍ、１、旦−４’　）　、　４．２５　（ｍ、　２．旦−２゛、旦−３’）、５．１（ｍ、２．５’および３′−０旦）、５．　７８　（ｄ、１．旦−１’）、６．５（ｂｒ　ｓ、２．　Ｎ旦２）　、７．　８４　（ｍ、４．　フタール）　、７．　９８　（ｓ、１゜１／２Ｈ２０として計算値ＩＣ，５４，４３；Ｈ，５，３６；Ｎ、１６．５６　実測値：Ｃ，５４，７９；Ｈ，５，２４；Ｎ、　１６．６１゜実施例３ＯＮ２−イソブチリル−２°−〇−［（Ｎ−フタルイミド）ペンタ−５−イルコグアノシン実施例４の方法に従い、ピリジン（３５ｍｌ）中、２°−０−［（Ｎ− フタルイミド）ペンタ−５−イルコグアノシン（１，６ｇ、粗生成物）を塩化トリメチルシリル（２，０■１．５当量）および塩化イソブチリル（１，６８Ｉｌｌ、　５当量）で処理すると発泡体として生成物を得た。この発泡体はＥｔＯＡｃと２回共沸させ、続いてＥｔＯＡｃを加え加熱することにより白色結晶が得られた（９５ｈｇ）、ｍ、ｐ、２０２−２０４℃Ｏ’Ｈ３、９（ｍ、１）　、４．　２５　（ｍ、１）　、４．　３　（ｍ、１）　、５．　０７　（ｔ、１゜Ｎａｐｓ’１／２Ｈ２０として、計算値：Ｃ，５６，１４；Ｈ，５，７６；Ｎ、１４゜５５　実測値：Ｃ，５６，４５；Ｈ，５，７４；Ｎ、１４．　４１゜実施例３１Ｎ２−イソブチリル−５′−ジメトキントリチル−２’−０−［（Ｎ−フタルイミド）ペンタ−５−イル］シアノンン実施例５の方法に従いピリジン（５ｈｌ）中でＮ２−イソブチリル−２°−０− （（Ｎ−フタルイミド）ペンタ−５−イルコグアノシン（０，９５ｇ）を塩化ジメトキシトリチル（６２０＋ｎｇ、　１．１当量）およびジメチルアミノピリジン（触媒として２ｈｇ）で処理され、溶出液として１％ＴＥＡ含有ＥｔＯＡｃ続いて５％ＭｅＯＨＥｔＯＡｃ／１％ＴＥＡ含有ＣＨｚＣＩｚが用いられた。生成物含有分画を蒸発させると生成物（ｍ、１）　、４．　３３　（ｍ、１）　、４．　４　（ｍ、１）　、５．　１８　（ｄ、１．　３゜分析　Ｃ４８Ｈ５゜Ｎ、Ｏ，。・１／２Ｈ，Ｏとして計算値：Ｃ，６５，５２；Ｈ，５，８４；Ｎ、９．　５５　実測値：Ｃ，６５，５５；Ｈ，５，９４；Ｎ、９．２０゜実施例３２２．６−ジアミツー９−　［３’、５’　−０−（テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−β−Ｄ−リボフラノンメシプリン２．６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（１０，５ｇ）のピリジン（１００園１）ＷＩ！、ＩＩｌ液に１．３−ジクロロテトライソプロピルジシロキサン（Ｔ　Ｉ　Ｐ　Ｄ　Ｓ、　１２．６ｇ）を加えた。反応液は室温で３時間撹拌し、さらに１．３ｇの１．３−ジクロロテトライソプロピルジシロキサンを加えて一夜撹拌した。反応混合物を氷水に注ぎ、不溶性生成物を濾過して集めた。分析用試料はＥｔＯＡｃ／ヘキサンから再結晶した、ｍ、ｐ、１７０− １７２℃。元素分析　Ｃｚ２Ｈ＜ｏＮｓｏｓｓｉ２　・１／２ＨｚＯとして、計算値：Ｃ，４９，５；Ｈ，７，７４，Ｎ、１５．　７実測値：Ｃ，４９゜５７＋Ｈ，７，８２；Ｎ、１５．５９゜実施例３３２．６−シアミノー９−　［３’、５°−０−（テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル）−２−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］プリン２．６−シアミノー９−　［３”、５’−０−（テトライソプロピルジシロキサン− １，３−ジイル］−β−Ｄ−リボフラメシル］プリン（８，８ｇ）のＤＭＦ　（１２０ｍｌ）溶液およびヨウ化メチル（３ｍ１．３当量）の混合物を水浴で冷却し、ＮａＨ（油中６０％、　１．０ｇ、１．５当量）を加えた。２０分後、反応をＭｅＯＨで停止させて飽和ＮＨ４Ｃ］およびＣＨ２Ｃｌ２間に分配させた。有機層を１回ＮＨ，ＣＩで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥して蒸発させた。残渣は熱ＥｔＯＨ／Ｈ２０から結晶化させて生成物を結晶として実施例３４２．６−ジアミツー９−（２°−〇−メチルーβ−Ｄ−リボフラノシル）プリン２．６−ジアミツー９−　［３’、５’−０−（テトライソプロピルジシロキサン−１，３−ジイル］−２’−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］プリン（８，５ｇ）のＴＨＦ（５０■ｌ）溶液にフッ化テトラブチルアンモニウムのＬＭ　Ｔｌ−ＩＦ溶液（＾１ｄｒｉｃｈ、　２０ＩＩｌ）を加えた。

反応混合物は２時間撹拌して濾過した。フィルターケーキを２回ＥｔＯＡｃで洗浄して風乾すると４．０ｇの粗生成物が得られた。分析用試料は熱ＭｅＯＨから／２Ｈ，０として、計算値：Ｃ，４３，２８；Ｈ，５，６１；Ｎ、２７．　５２　実測値：Ｃ，４３，５１：Ｈ，５，６２；Ｎ、２７．　２６゜実施例３５２′−〇−メチルグアノンン０．１Ｍリン酸ナトリウム緩１ｉｆ＆、（２０１）ｎｌ、　ｐＨ７、４）およびＤＭＳＯ（２５ｍｌ）中、室温で４日間にて２．６−ジアミツー９−（２’−０ −メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（９，５ｇ）をアデノシンデアミナーゼ（タイプ■、Ｓｉｇｍａ）で処理した。得られた懸濁液を冷却して濾過し、得られるフィルターケーキを）Ｉ！Ｏで洗浄し乾燥すると白色固形物が得られた（４．０ｇ）。固形物を熱Ｈ２０から再結晶すると２．９ｇの生成物が得られた。ｍ、ｐ、２３６−２３８℃。ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ一旦６）６３．３　（ｓ、　３．０ＣＨ３）　、　３．５３および３．６　（ＡＢＸ、　２゜旦−５’　）、３．　８７　（ｍ、ｌ、其−４°）、４．　１５　（ｍ、１．旦−２°）４゜２５　（ｍ、１．旦−３’　）　、５．　１３　（ｔ、１．　５°　−〇其）、５．　２３　（ｄ。

１．３°　−０Ｈ）、５．　８（ｄ、１．１１−１’　）、６．　４８（ｂｒ　ｓ、２．　Ｎ１４２）　、　７．９６　（ｓ、１．１−１　８）および１０．６８　（ｂｒ　ｓ、１．　Ｎ旦）。

元素分析　Ｃ目Ｈ＋５ＮｓＯｓ・ｌ／２１（２０として、計算値：Ｃ，４３，１４；Ｈ，５゜２６；Ｎ、２２．８６　実測値・Ｃ，４３，５９；Ｉ−１，５，３４；Ｎ、２３．　０４゜実施例３６Ｎ２−イソブチリル−２−０−メチルグアノシンピリジン（１０００１１）に溶解した２°−０−メチルグアノシン（３，５ｇ）を塩化トリメチルシリル（９ｍｌ、６当量）および塩化イソブチリル（６，２ｍ１）により室温で４日間処理した。反応混合物を水浴で冷却しｌ−１ｚｏ　（２０ｍｌ）を加えさらに２０分間撹拌を続けた。Ｎ　Ｈ４０Ｈ（２０ｍｌ）を加え３０分間撹拌した後反応混合物を蒸発させた。

残渣を■（２０中で摩砕して濾過し、濾液を実施例４の方法に従って７リカゲルクロマトグラフイーにより精製すると生成物を灰色がかった白色の固形物として得る（１．５ｇ）。ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−亘、）δ　１．　ｉ　［ｄ、　（３，ＣＨ（Ｃ１（３）２］、　２．７７　［ｍ、　１．　ＣＨ（ＣＨｓ）　ｚ］、　３．３３　３．６　（ｍ、　５゜Ｏ旦）、　５．９　（ｄ、１．其−１’　）　、　８．２８　（ｓ、１．　Ｈ−８）および１１゜実施例３７Ｎ２−イソブチリル−５°−ジメトキシトリチル−２′−〇−メチルグアノシン実施例５の方法に従いピリジン（５０ｍｌ）中でＮ２−イソブチリル−２′−０ −メチルグアノシン（１，５ｇ）を塩化ジメトキシトリチル（１，５ｇ、　１．１当量）およびジメチルアミノピリジン（触媒として１００ｍｇ）で処理すると、発泡体として生成物が得られた（２．６ｇ）。ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−見、）６１．１４　［ｄ、　６．　ＣＨ（ＣＨ３）　！］　、　２．７５　［ｍ、１．　Ｃ旦（ＣＨｓ）　ｔ］　、　３．５　（ｍ、　２．旦−５’）、３．７４（ｓ、６，０ＣＨｓ）、４．０５（ｍ、１）、４．３３（ｍ。

実施例３８Ｎ２−イソブチリル−５′−ジメトキシトリチル−２−〇−メチルシアノンン　３′−β−シシアエヂルーＮ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト実施例６の方法に従いＮ２−イソブチリル−５゛−ジメトキシトリチル−２゛−０−メチルグアノシン（２０ｇ）をビス−（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエチルホスファイト（１０，８ｇ）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（１，６ｇ）で処理して生成物を得た（１５．７ｇ）　。”　Ｐ　ＮＭＲ（ＣＤ　ＣＩ　ｇ）　δ　１４８゜９７および１４７．９６゜実施例３９Ｎ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６−ジアミツー９−（２’−０−メチル− β−Ｄ−リボフラノシル）プリン実施例４の方法に従い、ピリジン（２０ｍ　ｌ　）中、２，６−ジアミツー９− 　（２’−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（７００ｍｇ）を塩化トリメチルシリル（２，１ｍｌ、　７当ｆｉ＆）および塩化イソブチリル（１，２５ｍ１．５当ＩＩＬ）で処理すると、シリカゲルクロマトグラフィー後に発泡体を得た（９００ｍｇ）。

実施例４ＯＮ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２，６−ジアミツー９−（５’−０−ジメトキトリチルー２゛−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン実施例５の方法に従いピリジン（３０ｍｌ）中でＮ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２，６−ジアミツー９−（２’−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（９００ｍｇ）を塩化ジメトキシトリチル（１，０ｇ）およびジメチルアミノピリジン（触媒として２０ｍｇ）で処理すると、反応生成物が発泡体として得られた（７００ｍｇ）。ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ一旦６）６０．　９６−１．　１６　［ｍ、１２．　２ｘＣＨ（ＣＨｓ）！］、２．９および３．０５　［ｍ、　２．２ｘＣＨ（ＣＩ、Ｉ）　ｔ］−３，１８および３．３７　（ＡＢＸ。

２、旦−５’　）　、３．　３８　（ｓ、３．　ＱＣＣＨ３，３，７（ｓ、６，０ＣＴ（ｓ）　。

４、　０５　（ｍ、１．■−４°）　、４．　４４　（ｍ、２．旦−２′、旦− ３’）、５゜２４　（ｄ、１．３’　−０旦）、　６．０６　（ｄ、１．旦二１ °）、　６．７８．７、実施例４１Ｎ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６−ジアミツー９−　（５’−０−ジメトキトリチルー２°−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン　３゛−β− シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイトＮ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２，６−ジアミツー９−　（５−０−ジメトキトリチルー２′−〇−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（６００ｍｇ）をビス−（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエチルホスファイト（５００７ｚｇ）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（８０ＩＩ１ｇ）で室温にて一夜処理した。反応混合物は希Ｎａ２ＣＯ３／ＣＨＣＬ続いてＮａ２ＣＯｘ／ＮａＣｌに分配させ、ＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層を蒸発させると発泡体を得た（５００ｍｇ）　。”　Ｐ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ　ｓ）δ　１５１．１（ダブレット）。

実施例４２２．６−ジアミツー９−（２’−０−オクタデシル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンＤＭＦ　（１１）に２，６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（５０ｇ、　１８０ミリモル）および水素化ナトリウム（７ｇ）を加えて２時間沸騰させた。１５０℃でヨードオクタデカン（１００ｇ）を加え、反応混合物は放置してＲＴまで冷却した。

反応混合物はＲＴで１１日間撹拌した。溶媒を留去し、残渣は５％ＭｅＯＨ／ＣＨｚＣ１ｚで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーで精製された。生成物を含む分画を蒸発させると生成物が得られた（ｌ１ｇ）。’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄａ）δ　０．８４　（ｔ、　３．　ＣＨｓ）　、　１．２２　［ｍ、　３２．０− ＣＨ２−ＣＨｚ　−（ＣＩ＋２）　ｔｅｌ　、１．　８６　（ｍ、２．　ＯＣＩＩ＊　ＣＨｔ　）　、３．　２５　（ｍ、２゜Ｏ−ＣＨ１）、３．　９３　（ｄ、１．　４’旦）、４．　２５　（ｍ、１．　３’　Ｈ）。

４、　３８　（ｔ、１．　２°ＩＩ）、５．　０８　（ｄ、１．　３’　−〇旦）、５．　４８　（ｔ。

１、５’　−０旦）、　５．７５　（ｓ、　２．６−ＮＨｚ）　、　５．８４　（ｄ、１．　１゜一旦）　、　６．８　（ｓ、２．　２　ＮＨｚ）および７．９５　（ｓ、１．８−Ｈ）。

実施例４３２−０−オクタデシルグアノシン実施例３の方法に従いＯ，１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（５０ｉ１．　ｐＨ７、４）　、０．１Ｍ　トリス緩衝液（１０００ｍｌ、　ｐＨ７、４）およびＤＭＳＯ（１００ｈｌ）中、２．６−ジアミツー９−（２’−０−オクタチンルーβ− ｐ−リボフラノシル）プリン（１０ｇ）がアデノシンデアミナーゼ（１，５ｇ）で処理された。３日目、５日目および７日目に追加のアデノシンデアミナーゼ（各々、５００ｍｇ、　８８０ｍｇおよび２００ｍｇ）を加えた。反応液は総計で９日間撹拌され、シリカゲルクロマトグラフィーによる精製により生成物が得られた（２ｇ）ｏ分析用試料はＭｅＯＨから再結晶された。’Ｉ−Ｉ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄｓ）δ　０．　８４　（ｔ、３．　ＣＨ３）　、１．　２２　［：ｓ、３２．０−ＣＨ２−ＣＨｔ　−（ＣＨ２）　ｔｅｌ　、５．　０７　（ｍ、２．３’　ＯＨ５’　ＯＨ）、５．　７８　（ｄ。

１、１’　−Ｈ）　、　６．４３　（ｓ、　２．　ＮＨｚ）　、　７．９７　（ｓ、　１．８　Ｈ）および１０．　６４　（ｓ、１．　Ｎ旦２）。元素分析　Ｃ２ａ　Ｉ（４ｏ　Ｎ　ｓ　Ｏｓとして、計算値：Ｃ，６２，８０，Ｉ−［、９，１６；Ｎ、１２．９５　実測値：Ｃ，６２，５４；Ｉ七　９．１８；Ｎ、１２．９５゜実施例４４Ｎ２−イソブチリル−２°−〇−オクタデシルグアノノン実施例４の方法に従いピリジン（１５０ｍｌ）に溶解した２°−０−オクタデシルシアノンン（１，９ｇ）が塩化トリメチルシリル（２ｇ、　５当量）および塩化イソブチリル（２ｇ。

５当量）で処理された。粗生成物はシリカゲルクロマトグラフィー（３％ＭｅＯ＋−（／ＥｔＯＡｃで溶出）により精製され１２ｇの生成物が得られた。’ＩＩ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ）　６　０．８５　（ｔ、３．’　ＣＨ３）　、１．　１５　［ｍ、３８．０　ＣＨ２Ｃ）−１２（ＣＨ２）１６．ＣＨ（ＣＨ３）　２］　、２．　７７　［ｍ、１゜ＣＨ（ＣＨ３）　２］　、４．　２５　（ｍ、２．　２’旦、３°　Ｈ）　、５．　０８　（ｔ、１゜（ｓ、１．　Ｎ旦、）。

元素分析　Ｃ３□ｌ−１ｓｓＮｓＯａとして、５゛１算値ＩＣ，６３，４７；Ｈ，９，０９；Ｎ、１１．、　５７　実測値：Ｃ，６３，５３；Ｉ七　９．２０゜Ｎ、１１．５２゜実施例４５２．６−ジアミツー９−　［２−０−（イミダゾ−ルートイル）ブチル−β−Ｄ −リボフラノシル］プリン２、６−シ７　ミ／　−９−（β−Ｄ−ＩＪボフラノシル）ブメシ／　（５，０ｇ）　（７）ＤＭＦ　（４００ｍｌ）溶液を水素化す）　ＩＪ　Ｉ’／ム（０，７８ｇ）で処理した。さらに３０分撹拌後追加の水素化ナトリウム（２，６ｇ）を加え、続いて直ちにプロモブヂルーイミダゾール（９，９ｇ）のＤＭＦ　（２５ｍｌ）溶液を加えた。反応混合物は一夜撹拌した後１−１２０で反応を停止させた。反応混合物はセライトを通して濾過し、蒸発させると曲状の生成物を得た。Ｔ　Ｌ　Ｃは異性体の混合物であることを示した。

実施例４６２’−０−（イミダゾール−１−イル）ブチルグアノシン実施例３の方法に従イＯ，ＩＭ　ト！Ｊ　７．緩衝液（ｐＨ７、４）　、０．１ＭＮ　ａ　Ｐ　ＯＪ！？ｉｊＨ（ｐｉｆ７．４）およびＤＭＳＯ中、２．６−ジアミツー９−　［２’ −０−（イミダゾール−１−イル）ブチル−β−Ｄ−リボフラノシル］プリンおよび２，６−ジアミツー９−　［３’−０−（イミダゾール−１−イル）ブチル −β−Ｄ−リボフラノンメシプリンのＮ９物がアデノノンデアミナーゼにより９日間ＲＴにて処理された。生成物含有分画がシリカゲルクロマトグラフィーにより精製され、生成物含有分画を蒸発させることにより生成物が得られた。

実施例４７Ｎ２−イソブチリル−２°−０−（イミダゾール−１−イル）ブチルグアノシン実施例４の方法に従い、ピリジン中、２’−０−（イミダゾール−１−イル）ブチルグアノシンを塩化トリメチルシリル（５当１１）および塩化イソブチリル（５当量）で処理すると生成物が得られた。

実施例４８Ｎ２−イソブチリル−５′−ンメトキシトリチル−２°−０−（イミダゾール− １−イル）ブチルグアノノン実施例５の方法に従いピリジン中でＮ２−イソブチリル−２’−０−（イミダゾール−１−イル）ブチルグアノシンを塩化ジメトキシトリチル（１，１当量）およびジメチルアミノピリジン（触媒として）で処理された。シリカゲルクロマトゲラフィー後、生成物含有分画を蒸発させることにより生成物が得らるであろう。

実施例４９２°、３−０−ジブチルスタニレンウリジン１１１ａｇｎｅｒ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　１９７４．３９．２４．のプロトコールを使用し、無水メタノール中、ウリジン（４５ｇ、　０．１８４モル）を酸化ジ−ｎ −ブチルスズ（４５ｇ、　０゜１８１モル）と加熱還流した。溶媒を濾過し、得られた２゛、３°−０−ジブチルスタニレンーウリジンを真空下１００℃で４時間乾燥させると８１ｇの収態であった（９３％）。

実施例５０２°−０−［ペンチルーω−（Ｎ−フタルイミド）］ウリジンた。この化合物（２０ｇ、　４２．１ミリモル）の無水ＤＭＦ　（５００ｍｌ）溶液に、２５ｇ　Ｃ８４，２ミＩＪモ／ｌ／）　＋７）Ｎ　（５−ブロモヘンチル）フタルイミド（Ｔｒａｎｓ　Ｗｏｒｌｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ。

Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、　Ｍａｒｙｌａｎｄ）および１２．７５ｇ　（８５ミリモル）のフッ化セシウム（Ｃｓ　Ｆ）を加えた。混合物は室温で７２時間撹拌した。反応混合物を蒸発させ、続いて両度トルエンと共沸させて残渣をＥｔＯＡｃおよび水（各々４００ｍ１）間に分配させた。ＥｔＯＡｃ層を濃縮し、シリカゲルカラム（７００ｇ）に加えた。ＣＨ２Ｃｌ　２−ＣＩ（＋ＯＨ（２０：　１、ｖ　／　ｖ　）で溶出すると、０−ペンチル−ω−Ｎ−フタルイミドウリジンの２ °−および３゛−異性体の混合物を含む分画が得られた（５０％の収量）。

実施例５１５゛−０−ジメトキシトリチル−２’−０−［ペンチルーω−（Ｎ−フタルイミド）］ウリジン２°−０−［ペンチル−ω−（Ｎ−フタルイミド）］ウリジンの異性体混合物を乾燥ピリジン中、室温で塩化ＤＭＴと６時間反応させた。Ｃ１（ａ　ＯＨを過剰のＤＭＴ−Ｃ１のの分解に使用し、０．５％Ｅｔ、Ｎ含有ＣＩｈＣ１，および水に分配させた。

有機層を乾燥しくＩｖ１ｇｓｏ４）、残渣はシリカカラムに加えた。カラムをＣＨ，ＣＩ２：　ＣＨ３０Ｈ（２０：　１、ｖ　／　ｖ　）で溶出すると、生成物の２゛および３゛異性が分離された。

実施例５２５′−〇−ジメトキントリチルー２’−０−［ペンチル−ω−（Ｎ−フタルイミド）］］ウリジンー３−０−β−シアノエチルＮＮ−ジイソプロピルホスホロアミダイト５゛−０−ノメトキントリヂルー２−０−［ペンチル−ω−（Ｎ−フタルイミド）］ウリジンをテフロン撹拌子を含む乾燥丸底フラスコに加えた。フラスコはアルゴンでバーンした。ヌクレオシドを溶解するのに十分員の無水メチレンクロリドをフラスコに加えた。前もって真空乾燥したＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノヒドロテトラゾリド（６０ｆ）＋ｎｇ、　０．０１４モル）をアルゴン下で加えた。ビスーＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ−シアノエチルホスファイトはシリンジから加えられた。反応液はアルゴン雰囲気下、２５℃で１６時間撹拌された。反応完了により反応液を分岐ロートに移した。反応フラスコはメチレンクロリドで洗い出した（２ｘ５０ｍｌ）。合併させた有機層は２回飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させた後１％トリエチルアミンを含むトルエンを加えた。得られたホスホロアミダイトは３：１→に１　ヘキサン／１％トリエチルアミン含有酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製された。選択された分画を合併し、減圧上濃縮して乾燥すると白色発泡体が得られた。”Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣＩ、、Ｔ（３Ｐ　Ｏ４標準）は正しいジアステレオマーであることを示した。

実施例５３２゛−０−ペンチルウリジン実施例５０および５１の方法を使用し、ＤＭＦ　（９００１１）中で２゛、３° −０−ジブチルスタニレンーウリジン（１９，１ｇ）をブロモペンクン（１７ｍｌ、　１．３当量）およびヨウ化ナトリウム（４，５ｇ）で処理した。ＣＨ３０Ｈ／ＣＨ２Ｃ１２５％→１０％を使用するシリカゲルカラムでの精製により、生成物の２°および３°異性体の混合物が黒ずんだ油状物として得られた（９．８ｇ）。

実施例５４５′−０−ジメトキシトリチル−２゛一種ペンチルウリジン実施例５１の方法に従い、２’−０−ペンチルウリジンおよび３゛−０−ペンチルウリジンの混合物（９，８ｇ）を塩化ジメトキシトリチル（１０，５ｇ）と反応させた。粗生成物はシリカゲルカラム（１０１００Ｏで精製された。Ｈｅｘ、−ＥｔＯＡｃ　（３：　１→１：１）による溶出により５５ｇの２−〇−ペンチル異性体および３ｇの３’　−０−ペンチル異性体が得られた。Ｃｓ５Ｈ３ｔＮｚＯ８’１／２Ｈ２０として、計算値：Ｃ１６７，５１；Ｉ七　６．　５５；Ｎ、４．　５　実測値：Ｃ，（３７・４８；Ｈ，６，５５；Ｎ、４．　５゜実施例５５５°−０−ジメトキシトリチル−２゛−０−ペンチルウリジン−３’−０−（β −シシアエチルＮ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）保護５゛−０−ジメトキシトリチル−２′−〇−ペンチルウリジン（４，６ｇ、　０．００７モル）をテフロン撹拌子を含む乾燥丸底フラスコに加えた。フラスコはアルゴンでパージした。ヌクレオシドを溶解するのに十分量の無水メチレンクロリドをフラスコに加えた。前もって真空乾燥したＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノヒドロテトラゾリド（６００ｍｇ、　０．０１４モル）をアルゴン下で加えた。ビス−（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−シアノエチルホスファイト（４，５ｇ、　４．７ｍｌ、　２当量）はンリンジから加えられた。

反応液はアルゴン雰囲気下、２５°Ｃで１６時間撹拌された。反応完了をＴＬＣにより確認後反応液を分岐ロートに移し、反応フラスコはメチレンクロリドで洗い出した（２ｘ５０＋ａｌ）。合併させた有機層は２回飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させた後１％トリエチルアミンを含むトルエンを加えた。得られたホスホロアミダイトは３：１ →１：１ヘキサン／酢酸エチル（１％トリエチルアミン含有）で溶出するシリカゲルフラノツユクロマトグラフィー（３００ｇ）により精製された。選択された分画を合併し、減圧下１縮して乾燥すると２．６７ｇの生成物を白色発泡体として得た。３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ　ｓ、Ｈ、Ｐ　Ｏ４標準）は正しいジアステレオマーであることを示した。

実施例５６２−０−メチルウリジン実施例４９の方法に従い、ウリジン（８，５ｇ）が酸化ジブチルスズ（８，２ｇ、　１当量）で処理された。得られた２’　、　３’−０−ジブチルスタニレンウリジンが実施例５０に従ってヨードメタン（１６ｍｌ）により４２℃で処理され、２°および３′アルキル化生成物の混合物が発泡体として得られた（３．５ｇ）。

実施例５７５’　−０−（４，４°−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−メチルウリジン２−０−メチルウリジン（８，０ｇ、　０．０３１モル）をピリジン（１００ａ＋１）と減圧上蒸発させて油状物とした。この残渣に４．４゛−ジメトキシトリフェニルメチルクロリド（ＤＭＴ−ＣＩ、　１１．５ｇ、０．３４モル）およびピリジン（１００ｍｌ）を加えた。混合物は２５℃で１．５時間撹拌し、続いてメタノール（１０ｎ＋１）を添加して３０分で反応を停止させる。混合物は減圧上濃縮し、残渣をシリカゲル（２５０ｇ）のクロマトグラフィーにかける。ヘキサン−酢酸エチル−トリエチルアミン（８０：２０：１）、続いて酢酸エチル−トリエチルアミン（９９：１）で溶出させた。適当な分画を合わせ減圧上蒸発させ乾燥すると（２５°Ｃ１０，２ｍｍＨｇで１時間）１７、　４　ｇ　（１００％）　＋７）黄褐色の発泡体が得られた。ＴＬＣ純度９８％（Ｒｆ　０゜２３、ヘキサン−酢酸エチル　４　：　１）：　ＰＭＲ，（ＤＭＳＯ）δ１１．　４　（Ｈ−Ｎ３）、７．　７８　（１−［−６）、７．　６−６、　８　（Ｂｚ）、５．　８　（Ｈ−１°）。

５．３（Ｈ５’）、５．２５（１−１０３’）、３．７（ＣＨｓＯＢｚ）、３゜４　（ＣＨｓＯ２°）。

実施例５８５°−０−（１１，４−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−メチルウリジン−３’−０−（β−シシアエチルＮ、Ｎ−ノイソブロピルホスホロアミダイト）生成物は５’　−０−（４，４−ジメトキシトリフェニルメチル）−２° −０−メチルウリジンから実施例５４に従って製造された。クロマトグラフィー溶出液として酢酸エチル−ヘキサン−トリエチルアミン（５９：４０：１）が使用され生成物を発泡体として６０％の収率で与えた。均質なジアステレオマー、ＲｆＯ，５８；０．４４［酢酸エヂルーヘキサンートリエチルアミン（５９：４０：１）］。！＋ｐ　ＮＭＲ（ＣＤＣＩ、、Ｈ３ＰＯ４標準）δ１４８．１１；１４８．６１　（ジアステレオマー）。

実施例５９２゛−０−プロピルウリジン実施例４９の方法に従い、ウリジン（１０ｇ）が酸化ジブチルスズ（１０，２ｇ、　１当量）で処理された。得られた２”　、　３’−０−ジブチルスタニレンウリジンが実施例５０に従ってヨードメタン（８ｍ１２当量）により１１０℃で処理され、２′および３゛異性の混合物を発泡体として与えた（５．５ｇ）。

実施例６０５−０−　（４，４−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−プロピルウリジン２−０−プロピルウリジンおよび３°−０−プロピルウリジンの混合物（３，６ｇ）を実施例５１に従って塩化ジメトキシトリチル（４，２ｇ、　１．０当Ｊりと反応させた。残漬はＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ　（１：　１．１％トリエチルアミン）で溶出するシリカゲルでクロマトグラフを行なった。適当な分画を合わせ、減圧上蒸発させて乾燥すると４、　２ｇ（７）白色発泡体を得る。元素分析Ｃ３ｓＨｓ６ＮｚＯｓ　・ｌ／２ＨｚＯとシテ、計算値：Ｃ，６７、３３；Ｈ，６，１６：Ｎ、４．　７６　実測値：Ｃ＋　６７．１５；１−１．　６．　２４　；Ｎ、４．　４４゜実施例６１５°−０−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）−２−〇−プロピルウリジンー３°−０−（β−ンシアエチルＮ、Ｎ−９イソプロピルホスホロアミダイト）生成物は中間体５’　−０−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’− ０−プロピルウリジン（４７０ｍｇ）から実施例５４に従って製造され、発泡体として得られた（４７７ｍｇ）。

実施例６２２゛−０−ノニルウリジン実施例４９の方法に従い、ウリジン（２２，５ｇ）が酸化ジブチルスズ（２２，５ｇ、　１当量）で処理された。得られた２゛、３°−０−ジブチルスタニレンウリジンが実施例５０に従ってヨードノナン（１１ｍＬ１．３当量）により１３０−１４０℃で処理され、２゛および３゛異性を油状物として与えた（１１．２ｇ）。

実施例６３５’　−０−（４，４−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−ノニルウリジン２′−０−ノニルウリジンおよび３′−〇−ノニルウリジンの混合物（１１，２ｇ）を実施例５１に従って塩化ジメトキシトリチル（１０，５ｇ）と反応させた。残渣はＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ（３：１→１：１．１％トリエチルアミン）で溶出するシリカゲルでクロマトグラフを行なった。適当な分画を合わせ、減圧上蒸発させて乾燥すると５．２ｇの白色発泡体を得る。分析用試料はトルエン／Ｅ　ｔ　ＯＡｃ　（３：　１．１％トリエチルアミン）を用いて再クロマトグラフされた。元素分析Ｃ３・Ｈ４＠Ｎ２０ｇとして、計）Ｅｒｔｉ：Ｃ，６９，６２；ＩＩ、７．　１９；Ｎ、４．　１６　実測値：Ｃ，６９，６６：Ｈ，７，１８；Ｎ、４．０６゜実施例６４５’　−０−（４，４°−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−ノニルウリジン−３°−０−（β−ンシアエチルＮ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）生成物は中間体５’　−０−（４，４°−ジメトキシトリチル）−２’ −０−ノニルウリジン（３゜１ｇ）から実施例５４に従って製造され、発泡体として得られた（２．４９ｇ）。

実施例６５２′−０−へキセニルウリジン実施例４９の方法に従い、ウリジン（１０，５ｇ）が酸化ジブチルスズ（１０，５ｇ、　１当量）で処理された。得られた２゛、３°−０−ジブチルスタニレンウリジンが実施例５０に従って６−ブロモヘキセン（３，５ｍｌ、ｌ、　２当量）およびヨウ化ナトリウム（３，３ｇ５１当量）により１１５℃で処理され、２゛および３゛異性を発泡体として与えた（３゜３ｇ）。

実施例６６５−０−　（４，４°−ジメトキシトリフェニルメチル）−２°−０−へキモニルウリジン２゛−０−ヘキセニルウリジンおよび３°−０−へキセニルウリジンの混合物（３，１ｇ）を実施例５１に従って塩化ジメトキシトリチル（３，５ｇ、　１．１当量）と反応させた。残ｔｌｉはＨｃｘ／ＥｔＯＡｃ　（３：　１→ １　：　１．１％トリエチルアミン）で溶出するシリカゲルでクロマトグラフを行なった。適当な分画を合わせ、減圧上蒸発させて乾燥すると２．３ｇの白色発泡体を得る。元素分析　Ｃｓ　ｓ　Ｈ４０Ｎ　ｘ　Ｏｍ・Ｉ／２Ｈ２○として、計算値　Ｃ，６７、８０；Ｈ，６，４８；Ｎ、４．　３４）　実測値：Ｃ１６８，７７；Ｉ七　６．４１　：Ｎ、／１．４５゜実施例６７５’　−０−（４，４°−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−へキセニルウリジン−３’　−０−（β−シシアエチルＮ、Ｎ−ノイソプロピルホスホロアミダイト）生成物は中間体５’　−０−（４，４’−ジメトキシトリチル） −２’−０−へキセニルウリジンから実施例５４に従って製造された。

実施例６８５°−０−ジメトキシトリチル−２’−０−［ヘキシル−ω−（Ｎ−フタルイミド）］］ウリジンー３−０−β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）実施例５０から５２と類似の方法により、Ｎ−（６−プロモヘキシル）フタルイミド（Ｎ−フタルイミド置換へキシル基）がウリジンの２′−位に導入され続いてのンメトキントリチル化およびホスファイト化により表記ヌクレオチドを与える。

実施例６９５°−０−ジメトキシトリチル−２’−０−［デシル−ω−（Ｎ−フタルイミド）］］ウリジンー３′−０−β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）実施例５０から５２と類似の方法により、Ｎ−（１０−プロモデンル）フタルイミド（Ｎ−フタルイミド置換デシル基）がウリノンの２°−位に導入され続いてのジメトキシトリチル化およびホスファイト化により表記ヌクレオチドを与える。

実施例７ＯＮ４−ベンゾイル−２°−０−メチルノチジン、方法Δ工程１．３゛、５’−０ −［（１，１，３，３−テトライソプロピル）−１，３−ジシロキサンジイル］ンチジンシチジン（４０ｇ、　０．１６５モル）および１．３＝ジクロロ−１，１，３，３−テトライソプロピルノンロキサン（Ｔ　Ｉ　ＰＳ−ＣＩ、　５０ｇ、０．１５９モル）を乾燥ピリジノ（２５０ｍｌ）に撹拌しながら加えた。２５℃で１６時間撹拌後、反応液を減圧上濃縮して油状物とした。油状物をメチレンクロリド（８００ｍｌ）に溶解し飽和炭酸水素ナト戸ンム（２ｘ３００ｍｌ）で洗浄した。有機層はシリカゲル（２００ｇ）洗浄カラムを通過させる。生成物はメチレンクロリド−メタノール（９７：３）による溶出により回収された。

適当な分画を合わせ、減圧上蒸発させ２５°Ｃ１０，２ｍｍＨｇで１時間乾燥させると５９．３ｇ　（７７％）の油状物が得られた。ＴＬＣ純度９５％（Ｒｆ　Ｏ。

５９、酢酸エチル−メタノール　９：１）。生成物は酢酸エチルから白色結晶として結晶化されるであろう、ｍｐ２４２−２４４℃。４１　ＰＭＲ（ＤＭＳＯ）ｄ　７．　７　（ｌ（−６）、５．　６８　（Ｈ−５）、５．　６１　（ＨＯ− ２’　）、５．　５５　（Ｈ−１”Ｉ。

工程２．Ｎ４−ベンゾイル−３’　、　５’　−０−［（１，１，３，３−テトライソプロピル）−１，３−ジシロキサンジイル］シチジン３’　、　５−０−　［（１，１，３，３−テトライソプロピル）−１，３−ジシロキサンジイルコシチジン（５８ｇ、　０．１２モル）およびトリエチルアミン（１５，６ｇ、　０．１６モル）のジメチルアセトアミド（４００ｍｌ）溶液を撹拌しながら５℃にて塩化ベンゾイル（１８，５ｇ、　０．１３モル）を３０分以上かけて加えた。混合物は１６時間放置して室温まで暖めた後、撹拌しながら氷水（３，５Ｌ）に注いだ。生じた固形物を集め、氷水で洗浄しく３ｘ５０ｈｌ）、４５℃１０．２ｍｍＨｇで５時間乾燥させると７７ｇ（１００％）の固形物が得られた。ＴＬＣ純度　約９０％（Ｒｆ　０．６３、クロロホルム−メタノール９　：　１）　；　ＰＭＲ（ＣＤＣＩｓ）　ｄ　８．３２　（Ｈ−６）　；ｍｐｌｏｏ−１０１℃。

工程３．Ｎ４−ベンゾイル−２−０−メチル−３’　、　５’　−０−［（１，１，３，３−テトライソプロピル）−１，３−ジシロキサンジイルコシチジンＮ４−ベンゾイル−３′、　５’　−０−［（１，１，３，３−テトライソプロピル）−１，３−ジシロキサンジイルコシチジン（１６６ｇ、　０．２５モル、純度９０％）、酸化銀（１５０ｇ、　０．６５モル）およびトルエン（３００ｍｌ）の混合物を減圧上蒸発させた。さらにトルエン（５０ｈｌ）を加え、１００ｍ１をさらに蒸発させた。窒素雰囲気下、ヨウ化メチルを一度に加え反応液は４０ ℃で１６時間撹拌した。銀塩を集め酢酸エチルで洗浄した（３ｘ１５０ｍｌ）。

合併した濾液は減圧上濃縮した。残渣を最小量のメチレンクロリドに溶解し、ンリガゲル（１ｋｇ）に加えてヘキサン−酢酸エチル（３：２→１：１）で溶出した。適当な分画を合わせ、減圧上濃縮し、４５℃１０．２ｍｍＨｇで１時間乾燥させるとｌｌ１ｇ（６６％）の油状物が得られた。ＴＬＣ純度　約９０％（ＲｆＯ，５９、ヘキサン−酢酸エチル　３：２）。ＰＭＲ（ＣＤＣｌ　ｓ）　ｄ８、　８　（ｂｒ　ｓ、１．　ｔＩ−Ｎ’）　、８．　４０　（ｄ、１．　ｌ−１− ６）、８．　０−７゜４（ｍ、６．Ｈ−５およびＢｚ）　、５．８６　（ｓ、１．　ｌ−１−１’　）　、　３．　７４（ｓ、３．　ＣＨｓｏ　２°）。

工程４．Ｎ４−ベンゾイル−２゛−０−メチルンヂジンＮ４−ベンゾイル−２′ −〇−メチルー３°、　５’　−０−［（１，１，３，３−テトライソプロピル）−１，３−ジンロキサンノイル］ンチジン（ｌｌ１ｇ、　０．１８モル）のメタノール（１６０ｍｌ）およびテトラヒドロフラン（６４０ｍｌ）溶液をフッ化テトラブチルアンモニウム（３６８ｍｌ。

１Ｍテトラヒドロフラン溶液）で処理した。反応液は２５℃で１６時間撹拌した。

アンバーライトＩＲＣ−５０樹脂でｐＨを７に調節した。混合物を濾過し、樹脂は熱メタノール（２ｘ２００ｍｌ）で洗浄した。合わせた濾液を減圧上濃縮し、シリカゲル（１７５ｇ）に吸着させ、シリカゲルでクロマトグラフを行った（５００ｇ。

酢酸エチル−メタノール　１９：１→４；１）。適当な分画を合わせ、減圧上濃縮し、４０℃１０．２ｍｍＨｇで２時間乾燥させると２８ｇ（４２，４％、シチジンから２１５％）の固形物が得られた。ＴＬＣ均質ＣＲｆ　Ｏ，３７、酢酸エチル）。

ｍｐ　１７８−１８０℃（エタノールから再結晶）　。））ＭＲ（ＣＤＣＩ　、）　ｄｌｌ、２２（ｂｒ　ｓ、１．Ｈ−Ｎ’）、８．５５（ｄ、１．Ｈ−６）、８．１−７．　２　（ｍ、　６．　Ｈ−５およびＢｚ）、　５．８９　（ｄ、１．　Ｈ−１°）、５゜２　（ｍ、２．　ｌｏ−３’　、５’　）　、３．　４８　（ｓ、３．　ＣＨ３０−２’　）。

実施例７１Ｎ４−ベンゾイル−２゛−〇−メチルシチジン、方法　Ｂ工程１．２−０−メチルンチジンシチジン（１００ｇ、　０．４１モル）は暖かいジメチルホルムアミド（６５℃ 、　１１２５ｍ１）に溶解された。撹拌しながらこの溶液を０℃まで冷却した。

ゆっくりし、安定した窒素ガスの流れを反応を通して確保する。水素化ナトリウム（油中に６０％、３回へキサンで洗浄、　１８ｇ、０．４５モル）を加え混合物は０℃で４５分間撹拌した。ヨウ化メチル（９２，２５ｇ、　４０．５ｍｌ、　０．６５モル）のジメチルホルムアミド（４００ｍｌ）溶液を０℃で４時間以上かけて少しずつ添加した。混合物は２５℃で７時間撹拌したｉ＆濾過した。濾液を減圧上濃縮して乾固させ続いてメタノール（２ｘ２０ｈｌ）と共沸させた。

残渣はメタノール（３５０ｍｌ）に溶解した。溶液はシリカゲル（１７５ｇ）に吸着させ蒸発乾固させた。この混合物はジクロロメタン（５００ｍｌ）とスラリー状としシリカゲルカラム（１ｋｇ）の上端にのせた。カラムはジクロロメタン −メタノールの濃度勾配で溶出させた（１０：１→２：１）。より極性の低い２ ’　、　３’　−ジメチル副産物を除き、同時に溶出される２°および３゛−０ −メチル生成物含有分画を合わせ減圧上蒸発させるとシロップ状が得られた。シロップは最小量の熱エタノール（約１５０ｍ１）に溶解し、放置して２５℃まで冷却させた。生じた沈澱物（２′より不溶性）を集めエタノール（２ｘ２５ｍｌ）で洗浄し乾燥すると１５．２ｇの純粋な２゛−０−メチルンチジンを得る；ｍｐ２５２−２５４°Ｃ；　ＴＬＣ均質（Ｒｆｏ　５０、ジクロロメタン−メタノール　３．１．３′異性体のＲｆｏ、５０およびジメチル生成物はり　８０）。

濾液を蒸発させると１８ｇの異性体およびヨウ化ナトリウムの混合物が得られる。

工程２．Ｎ４−ベンゾイル−２゛−０−メチルシチジン純粋な２゛−０−メチルンチジン（１５，２ｇ、　０．０６０モル）を安息香酸無水物（１４，７ｇ、　０゜１２モル）のジメチルホルムアミド（２００ｍｌ）溶液に溶解した。溶液は２５℃で４８時間撹拌した後減圧下蒸発乾固させた。残渣はメタノール（２ｘ２００ｍｌ）と摩砕して集め、その後１０分間暖かいエーテル（３００＋ｎｌ）と摩砕した。固形物を集め熱２−プロパツール（５０ｍｌ）で摩砕し４℃で１６時間放置した。固形物を集め乾燥すると１７ｇの生成物が得られた。２゛−０−メチルンチジン粗濾液残渣（１８ｇ）が上記のごとくジメチルホルムアミド（２５０ｍｌ）中で安息香酸無水物（１７，３ｇ、　０．０７６モル）で処理され同様に摩砕されるとさらに６．７ｇの純粋な生成物が得られ総計で２３．７ｇ（メチレンから１６％）の固形物が得られた。：ＴＬＣ均質（Ｒｆｏ　２５、クロロホルム−メタノール　５：１、方法Ａを使用して作製された物質と同時にスポット）。

実施例７２Ｎ４−ベンゾイル−５°−０−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）− ２’−０−メチルシチジンＮ４−ペンソイル−２°−０−メチルシチジン（２８ｇ、　０．０７７モ／ｌ／）をピリジン（４０ｈｌ）と−緒に減圧上蒸発させて油状物とした。この残渣に４，４−ジメトキシトリフェニルメチルクｏ＋）　ｌ’　（ＤＭＴ−Ｃ１，２８，８ｇ、０．０８５モル）およびビリジ：／　（４００＋ａｌ）を加えた。混合物は２５℃で２時間撹拌した後メタノール（ｌｈｌ）を加えて３０分で反応を停止させた。この混合物は減圧下濃縮し、残渣はシリカゲルでクロマトグラフを行った（５００ｇ、ヘキサン−酢酸エチル−トリエチルアミン　６ｏ：４０・１、続いて酢酸エチル−トリエチルアミン　９９：１）。適当な分画を合ゎ也減圧下濃縮し、４０°Ｃ／領　２ｍｍＨｇで２時間乾燥させると２６ｇ（７４％）の発泡体が得られた：ＴＬＣ均質（ＲｆＯ，４５、酢酸エチル）；ＰＭＲ（ＤＭＳＯ）　ｄ　１１．　３　（Ｈ−Ｎ４）、８．　４−６．　９　（１−１−６，Ｈ− ５゜Ｂｚ）　、５．　９５　（＋−１−１°）　、５．　２　（Ｉ（Ｏ−３°）、３．　７　（ｓ、６゜Ｃ１１３０−ｔ　ｒ　ｉ　Ｌ、　）　、３．　５　（Ｓ、３、Ｃｌ−１ｓＯ２’　）。

実施例７３Ｎ４−ベンゾイル−５’−０−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）− ２’−０−メチルシチジン−３’−０−（β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）この生成物は中間体化合物Ｎ４−ベンゾイル−５’ −０−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）−２°−０−メチルシチジン（２２，０ｇ、　０．０３３３モル）から出発する実施例３８の方法に従って合成され、クロマトグラフィー溶出液として酢酸エチル−ヘキサン−トリエチルアミン（５９：４０：１）を用いると生成物が８３％の収率で固形発泡体として得られた（２３．６ｇ）　：ＴＬＣ均質ジアステレオマー（Ｒｆ　Ｏ。

４６：０．３３、酢酸エチル−ヘキサン−トリエチルアミン　５９：４０：１）；”Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ、）Ｈ３ＰＯ４標準）ｄ１５０．３４　：１５１．０２（ジアステレオマー）。

実施例７４シチジ：／　（１０，１ｇ、　０．０４１５モル）　、水素化ナト’Ｊウム（２，Ｏｇ、１．２当量）　、ヨー）’ノナン（９，８ｍｌ、　１．２当ｊｌ）をＤＭＦ　（１００ｍｌ）中で実施例７１、工程１の方法に従って反応させ、２°および３′異性体が付着性の発泡体として得られた（１１．６ｇ）。

実施例７５Ｎ４−ベンゾイル−２゛−０−ノニルシチジン２−０−ノニルシチジンおよび３ °−０−ノニルシチジンの混合物（１１，５ｇ）が実施例７１、工程２の方法によりＮ４−ベンゾイル−２′−〇−ノニルシチジンに変換された。

実施例７６Ｎ４−ベンゾイル−５°−０−（ジメトキシトリチル）−２’−０−ノニルシチジンＮ４−／＜　ン”／イルー２’　−０−／　ニルシｆ　’）　ン（２，６７ｇ、　０．００５６モル）が実施例７２の方法に従って塩化ジメトキシトリチル（２，０ｇ、　１．１当量）で処理されて、４．２ｇの純粋な生成物を与えた。

元素分析　Ｃ４６１−Ｉ　Ｓ　！　Ｎ　ｓ　Ｏａ・１／２Ｈ２０として、計算値：Ｃ，７０，３９；ＩＩ、（３，９３：Ｎ、５．　’３５　実測値：Ｃ，７１，２０；Ｈ。

（３，８８：Ｎ、５．４１゜実施例７７Ｎ４−ベンゾイル−５’−０−（ジメトキシトリチル）−２°−０−ノニルシチジン−３’−０−（β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）本生成物は中間体化合物Ｎ４−ベンゾイル−５°−０−（４，４°−ジメトキシトリフェニルメチル）−２°−０−ノニルシチジン（４，１ｇ、　０．００５３モル）がら出発し、実施例３８の方法に従ってビスーＮ、Ｎ−ジイソプロピノげミノ−シアノエチルホスファイト（３，３１１）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノヒドロテトラゾリド（４５０ｍｇ）で処理して製造された。本生成物はシリカゲルカラムからクロマトグラフィー溶出液としてヘキサン−ＥｔＯＡｃ　（３：　１→１：１．１％トリエチルアミン）を用いて溶出され、生成物が固形発泡体とＩ、テｌうｔｔり（４，２１ｇ）　。”Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ。

Ｈ３Ｐ０．標準）はジアステレオマーを示した。

実施例７８２′−ローペンチルシチジンシチジン（１０ｇ、　０．０４１モル）、水素化ナトリウム（２，４ｇ、　１．５当量）、ブロモペンタン（７，６ｍｌ、　１．５当量）をＤＭＳＯ（９０ｍｌ）中で実施例７１、工程１の方法に従って反応させ、２°および３゛異性を発泡体として得た（７．６ｇ）。

実施例７９Ｎ４−ベンゾイル−２°−０−ペンチルシチジン２−０−ペンチルシチジンおよび３−ローペンチルシチジンの混合物（７，５ｇ）が実施例７１、工程２の方法によりＮ４−ベンゾイル−２′−ローペンチルシチジンに変換され実施例８ＯＮ４−ベンゾイル−５−〇−（ジメトキシトリチル）−２’−０−ペンデルシチジンＮ４−ベンゾイル−２゛−ローペンチルシチジン（３，０ｇ、　０．００７モル）が実施例７２の方法に従って塩化ジメトキシトリチル（２，７ｇ、　１．１当Ｉｔ）で処理されて、３．５ｇの純粋な生成物を与えた。元素分析　Ｃ４□ Ｈ４、Ｎユ０８・１．／２１１．０として、計算値：Ｃ，６９，２１；Ｈ，６，３６；Ｎ、５．　７６　実測値：Ｃ，６９，５１、Ｈ。

６．３０：Ｎ、５．７１゜実施例８１Ｎ４−ベンゾイル−５’−０−（ジメトキシトリチル）−２’−０−ペンチルシチジン−３°−０−（β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）本生成物は中間体化合物Ｎ４−ベンゾイル−５’　−０−（４，４’− ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−ペンチルシチジン（３，５ｇ、　０．００４８モル）から出発し、実施例３８の方法に従ってビスーＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノーンアノエチルホスファイト（２゜９ｇ、　３．１ｍｌ、　２当量）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノヒドロテトラゾリド（４００ｍｇ。

０．５当量）で処理して製造された。本生成物はシリカゲルカラムからクロマトグラフィー溶出液としてヘキサン−ＥｔＯＡｃ（３：１→１：１．１％トリエチルアミン）を用いて溶出され、生成物が固形発泡体として得られた（３．２４ｇ）。３ＩＰ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ、Ｈ３ＰＯ４標準）はジアステレオマーを示した。

実施例８２２′−〇−プロピルシチジンＤＭＦ　（１５０ｍｌ）中、シチジン（１６，５ｇ、　０．０６８モル）を水素化ナトリウム（４，５ｇ）およびブロモプロパン（１５ｍｌ）で室温にて３日間処理した。得られた反応混合物は直接次の工程に使用した〈実施例８３参照）。

実施例８３Ｎ４−ベンゾイル−２′−０−プロピルシチジン水浴中の実施例８２の２−〇− プロピルシチジン反応混合物にピリジン（６ｈｌ）および塩化トリメチルシリル（６０ｍｌ）を加えた。反応液は３０分間撹拌し、続いて塩化ベンゾイル（５５ｍｌ）を加えた。生じた反応混合物は２．５時間撹拌した後、水浴で冷却した。

ＨｚＯ（１００ｍｌ）およびａＮＨ４０Ｈ（１００ｍ１）が加えられた。３０分間撹拌後、反応混合物を蒸発させて残渣をＨ，ＯおよびＣｌ−１２ＣＬ間に分配させた。有機層は両度希Ｎａ、ＣＯ，で、一度希１１ＣＩで洗浄し、Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ＜で乾燥して蒸発させた。得られた残渣はシリカゲルカラム（１５０ｇ）に加え、最初にＣｌ−１２Ｃ１２Ｔ、次１．−５　カラ１０　％ノＭ　ｅ　ＯＨを含むＣＨｚＣ］ｚを溶出溶媒として溶出した。生成物を含有する分画を蒸発させると発泡体となった。発泡体をＥｔＯＡｃ／ヘキサンから結晶化させると反応生成物の結晶がいくつかのバッチで得られた（総計で６．５ｇ）。

実施例８４Ｎ４−ベンゾイル−５’−０−（ジメトキシトリチル）−２’−０−プロピルシチジンＮ４−ベンゾイル−２゛−０−プロピルシチジン（３，０ｇ、　０．００７モル）が実施例７２の方法に従って塩化ジメトキシトリデル（１，５ｇ）で処理されて、１．５ｇの純粋な生酸物を与えた。元素分析　ＣｌｏｔｌｕＮｊＯｓ　・Ｉ／２１１２０として、ｔ１算値：Ｃ，（３８゜４５．Ｉ七　６．　１８；Ｎ、５．　９９　実測値＋Ｃ，６８，３９；Ｉ−１，５，９９；Ｎ、５．　９５゜実施例８５Ｎ４−ベンゾイル−５’−０−（ジメトキシトリチル）−２’−０−プロピルシチジン−３’　−０−（β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ノイソプロピルホスホロアミダイト）本生成物は中間体化合物Ｎ４−ベンゾイル−５’　−０−（４，４’ −ノメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−プロピルシチジン（３，８ｇ、　０．００５５モル）から出発し、実施例３８の方法に従ってビスーＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノーンアノエチルホスファイト（３゜５ｍｌ、　２当量）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノヒドロテトラゾリド（５００ｍｇ、　０．５当量）で処理して製造された。本生成物はシリカゲルカラムからクロマトグラフィー溶出液としてヘキサン−ＥｔＯＡｃ　（１：　１．１％トリエチルアミン）を用いて溶出され、生成物が固形発泡体として得られた（４．７２ｇ）。３１Ｐ− ＮＭＲ（ＣＤ　ｓ　ＣＮ　、Ｈｓ　Ｐ　Ｏ＜標準）はジアステレオマーを示した。

実施例８６Ｎ２．　Ｎａ−ジイツブチリルアミノー９−　（２−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシルメシリンＮ２．　Ｎａ−ジアミツー９−（２’−０−メチル−β−Ｄ −リボフラノシル）プリン（１，６ｇ、　５．３９ミリモル、実施例３４参照）をピリジン（２５＋ｎｌ）と共沸した。残渣をピリジン（４０ｍｌ）に懸濁して水浴で冷却し、塩化トリメチルシリル（４，８ｍ１）を加えた。

反応混合物を３０分撹拌した後塩化ブチリル（２，８ｍｌ、　５当ＩＮ）を添加した。得られた反応混合物は室温で４時間撹拌した。撹拌しなからＮ２０　（１０ｍｌ）および濃ＮＨ４ＯＨ（］００ｍ１を加えて反応を停止さぜた。３０分後、反応混合物を蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムで精製した（生成物の溶出にＣＩ−ｈｃｌ、→１０％Ｍｅ　ＯＨ／（ｊ（、ＣＩ　２を用いて）。適当な分画を蒸発させると生成物が油状物として得られた（２．４ｇ）。

実施例８７Ｎ２．　Ｎａ−ジイツブチリルアミノー９−（５”Ｏ−ジフトキントリチル−２゛−ｏ−メチル−β−〇−リボフラノシル）プリンＮ２．　Ｎａ−ジイツブヂリルアミ／−９−（２°−０−メチル−β−〇−リボフラノシル）プリン（２，４ｇ）をピリジン（２５ｍｌ）と共沸し、ピリジンに再溶解した。塩化ジメトキシトリデル（１，８ｇ、　１当量）およびジメヂルアミノビリジン（５ｍｇ）を加え、得られた溶液は一夜室温で撹拌した。一部溶媒を留去して残渣をＣＨｚＣｌ　２および希Ｎａ２ＣＯ３間に分配させた。有機層を希Ｎａ、Ｃｏ、で洗浄し、Ｍｇ５Ｏ，で乾燥して蒸発させた。残渣は１％トリエチルアミンを含むヘキサン／ＥｔＯＡｃ　（１：１）で溶出するシリカゲルカラムで精製した。適当な分画を蒸発させると生成物が発泡体として得られた（２．４ｇ）。

実施例８８Ｎ２．　Ｎａ−シイツブチリルアミノー９〜［５’−０−ジメトキシトリチル− ２°−０−メチル−３’　−０−（β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミド）−β−Ｄ−リボフラノシル］プリンＮ２．　Ｎａ−ジイツブチリルアミノー９−（５−０−ジメトキシトリチル−２ °−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（１，７ｇ、　０．００２３モル）をビスーＮ。Ｎ−ジイソプロピルアミノ−シアノエチルホスファイト（１，４８ｍ１．２当量）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノヒドロテトラゾリド（２００ｍｇ）で−夜室温にて処理した。反応混合物は希Ｎａ２ＣＯ３／　ＣＨ２ＣＩ　２間に分配させ、有機層をＭｇ５Ｏ，で乾燥して蒸発させた。残渣はシリカゲルカラムに加え、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ　（３：　１→１：１，１％トリエチルアミンを含む）で溶出すると生成物が固形発泡物として得られた（１．７３ｇ）。”　Ｐ　Ｎ　Ｍ　Ｒ（ＣＤ　ｓ　ＣＮ　、　Ｉ（ｓ　Ｐ　Ｏ＜標準）はジアステレオマーを示した。

実施例８９オリゴヌクレオチド合成本発明のヌクレオシドホスホロアミダイトが一度合成されたら、それらは次にＡｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　Ｉｎｃ、　３８０ＢまたはＭｉｌｌｉＧｅｎ／Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ　７５００または８８００のような標準固相自動化核酸合成機により合成されたオリゴヌクレオチド内へ取り込ませることができる。

所望のオリゴヌクレオチドを提供するためこれらの合成機は標準ホスホロアミダイトカップリングの化学を使用している（例えば、Ｍ、　Ｃａｒｕ２４、　Ｊ、Ｓ、Ｃｏｈｅｎ、　ｅｄ、、　ＣＲＣＰｒｅｓｓ、Ｉｎｃ、　Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、　ＦＬ、　１９８９を参照されたい）。

ボーケージ試薬（例えば、Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　１９９０，１１２．１２５３を参照されたい）または元素状硫黄（例えば、Ｔｅｔｒａｈｃｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　１９８１．２２．１８５９を参照されたい）も同様にホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの提供に使用できる。

実施例９０Ａ、　２−修飾オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションの熱力学の評価本発明の２°−修飾オリゴヌクレオチドが、これらに相補的なＲＮＡまたはＤＮＡ配列にハイブリダイズする能力は、熱溶融分析により決定することができる。

ＲＮＡ相補鎖は、Ｔ７　ＲＮＡポリメラーゼにおよび、Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、　Ｉｎｃ。

３８０Ｂにより合成されたテンプレート・プロモータＤＮＡから合成する。ＲＮＡ種は、Ｆ　Ｐ　Ｌ　Ｃ（ＬＫＢ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ、　Ｉｎｃ）を用いてイオン交換により精製する。天然アンチセンス・オリゴヌクレオチドまたは特定の位置に２゛−ｏ−アルキルグアノシンを含むものを化学量論的濃度でＲＮＡまたはＤＮＡ相補鎖に加え、２本鎖からランダムコイルへの転移における吸収（２６０Ｂｍ）深色性をＧ１１ｆｏｒｄ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅｌ１分光光度計を用いてモニターする。これらの測定は、０．１Ｍまたは１．ＯＮｌのイオン強度を得るため１０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７，４）　、Ｏ，１ｍＭ　ＥＤＴＡ、およびＮａＣｌの緩衝液中で実施する。データは、１／Ｔｍ対１ｎ［ｃｔ］（ここでＣｔは全オリゴヌクレオチド濃度）を表わすグラフにより分析することができる。

この分析から熱ノＪ学パラメータを決定する。形成されたヘテロ２本鎖の２本鎖の安定性に関して得られた情報に基づき、オリゴヌクレオチド類似体中への２− ０−アルキルグアノシンの配置を、そのヘリックス安定性に対する効果について評価する。ハイブリッドの安定性を著しく変化させる修飾は、自由エネルギー（デルタＧ）の減少を示し、これらの修飾のアンチセンス　オリゴヌクレオチドとしての有用性に関する決定を行う。

Ｂ、２゛−修飾オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションの正確性２′−〇 −アルキルグアノシン修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドの、絶対的特異性をもって標的ｍＲＮＡとハイブリダイズする能力は、全細胞ＲＮＡの存在下における精製標的ｍＲＮＡのノーザンプロット分析により示すことができる。標的ｍＲＮＡは、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼプロモーターの下流に配置された標的ｍＲＮＡのｃＤＮＡを含むベクターから合成する。合成したｍＲＮＡをアガロースゲル中で電気泳動し、適当な支持膜にトロセルロース等）に転移させる。この支持膜をブロッキングして、３２Ｐ−標識したアンチセンスオリゴヌクレオチドをプローブとして用いる。ストリンジエンシーは、プロットを繰り返し、より高い温度において、またはより低いイオン強度の洗浄緩衝液により洗浄することにより決定する。ヘテロ２本鎖の形成の存在を評価するためにオートラジオグラフィーを行い、オートラジオダラムをレーザー密度計（ＬＫＢ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ、　Ｉｎｃ、）により定量化する。全細胞ＲＮＡを標準的方法により単離し、アガロース電気泳動、膜転移、および標識した２°−修飾オリゴヌクレオチドをプローブとして用いて分析することにより、ハイブリッド形成の特異性を決定する。ストリンジエンシーは修飾していないアンチセンス・オリゴヌクレオチドについてあらかじめ決定し、特異的に標的とするｍＲＮＡのみが２゛−修飾オリゴヌクレオチドとへテロ２本鎖を形成しうる条件を用いた。

実施例９１−ヌクレアーゼ耐性Ａ、血清および細胞質ヌクレアーゼに対する２−修飾オリゴヌクレオチドの耐性の評価血清ヌクレアーゼに対する天然のホスホロチオエートおよび２−修飾オリゴヌクレオチドの耐性は、このオリゴヌクレオチドを種々の濃度のウシ胎児血清またはヒト成人血清を含む培養液中でインキュベートすることにより評価された。標識したオリゴヌクレオチドを種々の時間インキュベートし、プロテアーゼにで処理し、次に２０％ポリアクリルアミド尿素変性ゲルにおける電気泳動、およびそれに続くオートラジオグラフィーによって分析する。オートラジオダラムをレーザー密度計で定量化する。修飾の位置および既知のオリゴヌクレオチドの長さに基づいて、特定の２′−修飾がヌクレアーゼ分解に及ぼす影響を決定することができる。細胞質ヌクレアーゼについては、ＨＬ６０細胞株が使用された。ポスト・ミトコンドリア上清を密度差遠心分離により調製し、標識したオリゴヌクレオチドをこの上清中で種々の時間インキュベートした。インキュベートの後、血清核酸溶解分解について上述したように、分解についてオリゴヌクレオチド類似体を評価する。オートラジオグラフィーの結果を、未修飾ホスホロチオエートと２′ −修飾オリゴヌクレオチドとの比較のために定量化した。

Ｂ、特定のエンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼに対する２−修飾オリゴヌクレオチドの耐性の評価天然のおよび２−修飾オリゴヌクレオチドの、特定のヌクレアーゼ（エンドヌクレアーゼ、３’、５’−エキソヌクレアーゼおよび５゛、３°−エキソヌクレアーゼ）に対する耐性の評圃を行い、修飾結合の分解に対する実際の効果を決定した。

修飾オリゴヌクレオチドを、種々の選択されたヌクレアーゼに特異的な限定された反応緩衝液中でインキュベートした。生成物をプロテアーゼにで処理した後、尿素を加え、尿素を含む２０％ポリアクリルアミドゲルによる分析を実施した。

ゲル生成物はステインズオール試薬（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、　）で染色して可視化した。レーザー密度計を用いて分解の程度を定量化した。特定のヌクレアーゼについて、２゛−修飾の効果を決定し、血清および細胞質系から得られた結果と比較した。

手　続　補　正　書

Claims

【特許請求の範囲】

１．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり；Ｒ１はＣ３−Ｃ２０アルキル、Ｃ４−Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２０アルキニルであり；Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、Ｎ−フタルイミド、イミダゾール、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；およびｎは０から約６までの整数である）を有する化合物。
２．Ｒ１がＣ４−Ｃ２０アルキルである請求項１に記載の化合物。
３．Ｒ１がＣ５−Ｃ２０アルキルである請求項１に記載の化合物。
４．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり；Ｒ１はＣ３−Ｃ２０アルキルであり；Ｒ２はＮＨ２、イミダゾールまたはＮ−フタルイミドであり；Ｙはヒドロキシル保護基であり；Ｚはリン酸または活性化されたリン酸基であり；Ｑ１およびＱ２は独立してＨまたはグアノシン保護基であり；およびｎは０から約６までの整数である）を有する化合物。
５．Ｙがトリチル、メトキシトリチル、ジメトキシトリチルまたはトリメトキシトリチルである請求項４に記載の化合物。
６．Ｚがβ−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−イソプロピルホスホロアミデートである請求項４に記載の化合物。
７．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり；Ｒ１はＣ３−Ｃ２０アルキル、Ｃ４−Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２０アルキニルであり；Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；およびｎは０から約６までの整数である）を有する化合物。
８．２′−Ｏ−プロピルグアノシン、２′−Ｏ−ペンチルグアノシン、２′−Ｏ −ノニルグアノシン、２′−Ｏ−オクタデシルグアノシン、２′−Ｏ−（Ｎ−フタルイミド）−ペンチルグアノシン、または２′−Ｏ−（イミダゾール−１−イル）ブチルグアノシンである化合物。
９．２′−Ｏ−アルキル化グアノシン３′−Ｏ−ホスホロアミダイトの製造方法であって：２，６−ジアミノ−９−（リボフラノシル）プリンをアルキル化して２，６−ジアミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル化リボフラノシル）プリンを生成させ；該２，６−ジアミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル化リボフラノシル）プリンを脱アミノ化して２′−Ｏ−アルキル化グアノシンを生成させ；該２′−Ｏ−アルキル化グアノシンの５′−ヒドロキシル部分を保護し；そして該５′−保護２′−Ｏ− アルキル化グアノシンの３′−位をホスファイト化する；の各工程を含む方法。
１０．該アルキル化が塩基の存在下で行われる請求項９に記載の方法。
１１．該塩基が水素化金属である請求項１０に記載の方法。
１２．該保護工程がジメトキシトリチル甚を付加する請求項９に記載の方法。
１３．該ホスファイト化工程がビス−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノシアノエチルホスファイトで実施される請求項９に記載の方法。
１４．該ホスファイト化工程がＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ−ヒドロテトラゾリド存在下で実施される請求項１３に記載の方法。
１５．さらに該５′−ヒドロキシル部分の保護に先だって、該２′−Ｏ−アルキル化グアノシンのＮ２−アミノ部分を保護することを含む請求項９に記載の方法。
１６．該脱アミノ化工程がアデノシンデアミナーゼを用いて実施される請求項９に記載の方法。
１７．２′−Ｏ−アルキルグアノシンの製造方法であって：２，６−ジアミノプリンリボシドを塩基および式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒは該アルキル基であり、Ｌは脱離基である）を有する化合物で処理して２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドおよび３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドを生成させ；および該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドを脱アミノ化して２′ −Ｏ−アルキルグアノシンを得る；ことを含む方法。
１８．さらに該３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドから該２ ′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドを分離することを含む請求項１７に記載の方法。
１９．該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドの脱アミノ化の速度が該３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノブリンリボシドの脱アミノ化の速度に比べて加速される条件下で該脱アミノ化を実施することにより、該３′− Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドから該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドが分離される請求項１８に記載の方法。
２０．該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドがアデノシンデアミナーゼにより脱アミノ化される請求項１７に記載の方法。
２１．該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドの脱アミノ化の該加速された速度が酵素アデノシンデアミナーゼの使用により達成される請求項１９に記載の方法。
２２．該塩基が水素化ナトリウムである請求項１７に記載の方法。
２３．該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドが結晶化またはクロマトグラフィーにより該３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドから物理的に分離される請求項１７に記載の方法。
２４．該アルキル基がＣ１−Ｃ２０の直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和アルキル、Ｃ１−Ｃ２０の脂環式、Ｃ１−Ｃ２０の直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和の置換アルキルまたはＣ１−Ｃ２０の置換脂環式である請求項１７に記載の方法。
２５．該Ｃ１−Ｃ２０の直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和の置換アルキルまたはＣ１−Ｃ２０置換脂環式の置換基が、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトレート、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、複素環式、脂環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基である請求項２４に記載の方法。
２６．２′−Ｏ−アルキルグアノシンの製造方法であって：２．６−ジアミノプリンリボシドを塩基および式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒは該アルキル基であり、Ｌは脱離基である）を有する化合物で処理して２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドを生成させ；および該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドをアデノシンデアミナーゼで処理する；ことを含む方法。
２７．該アルキル基がＣ１−Ｃ２０の直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和アルキルまたはＣ１−Ｃ２０の直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和の置換アルキルである請求項２６に記載の方法。
２８．該Ｃ１−Ｃ２０の直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和の置換アルキルの置換基がハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトレート、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、複素環式、脂環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基である請求項２７に記載の方法。
２９．該塩基が水素化ナトリウムである請求項２６に記載の方法。
３０．さらに、該２，６−ジアミノプリンリボシドの該塩基および式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒは該アルキル基であり、Ｌは脱離基である）を有する該化合物による処理により生じたさらにアルキル化された生成物から該２′−Ｏ−アルキル−２，６ −ジアミノプリンリボシドを分離することを含む請求項２６に記載の方法。
３１．該アルキル基がＣ１−Ｃ２０の飽和の直鎖アルキルまたはＣ１−Ｃ２０の飽和の直鎖置換アルキルである請求項２７に記載の方法。
３２．２′−Ｏ−アルキルグアノシンの３′−Ｏ−ホスホロアミダイトの製造方法であって：２，６−ジアミノプリンリボシドを塩基および式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒは該アルキル基であり、Ｌは脱離基である）を有する化合物で処理して２′−Ｏ−アルキル− ２，６−ジアミノプリンリボシドを生成させ；該２′−Ｏ−アルキル−２，６− ジアミノプリンリボシドをアデノシンデアミナーゼで処理して２′−Ｏ−アルキルグアノシンを生成させ；該２′−Ｏ−アルキルグアノシンの２−ＮＨ２部分を保護基で保護し；該２′−Ｏ−アルキルグアノシンの５′−ＯＨ部分を別の保護基で保護し；および該保護２′−Ｏ−アルキルグアノシンの３′−ＯＨ部分をホスファイト化する；ことを含む方法。
３３．該保護２′−Ｏ−アルキルグアノシンが２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノクロロホスフィンでホスファイト化される請求項３２に記載の方法。
３４．該塩基が水素化ナトリウムである請求項３２に記載の方法。
３５．２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシド、３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドおよび２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル− ２，６−ジアミノプリンリボシドの製造方法であって：２，６−ジアミノプリンリボシドを塩基および式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒは該アルキル基であり、Ｌは脱離基である）を有する化合物で処理して、２′−Ｏ−アルキル −２，６−ジアミノプリンリボシド、３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドまたは２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドの少なくとも一つを生成させ；および該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシド、３′−Ｏ−アルキル −２，６−ジアミノプリンリボシドまたは２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドの一つを単離する；ことを含む方法。
３６．さらに、該２，６−ジアミノプリンリボシドに十分な式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒは該アルキル基であり、Ｌは脱離基である）を有する化合物および塩基を加えて、該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシド、３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドおよび２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドの少なくとも二つの混合物を生成させ；および該混合物から該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシド、３′− Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドおよび２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノブリンリボシドの少なくとも一つを分離する；ことを含む請求項３５に記載の方法。
３７．さらに、該混合物から結晶化により該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシド、３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドまたは２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドの少なくとも一つを分離することを含む請求項３６に記載の方法。
３８．さらに、該混合物からクロマトグラフィーにより該２′−Ｏ−アルキル− ２，６−ジアミノプリンリボシド、３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドまたは２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドの少なくとも一つを分離することを含む請求項３６に記載の方法。
３９．２，６−ジアミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンの３′−０−ホスホロアミダイトの製造方法であって：２，６−ジアミノプリンリボシドを塩基および式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒは該アルキル基であり、Ｌは脱離基である）を有する化合物で処理して２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドを生成させ；該２，６−ジアミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル −β−Ｄ−リボフラノシル）プリンの２および６−ＮＨ２部分を保護基で保護し；該２，６−ジアミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンの５′−ＯＨ部分を別の保護基で保護し；および該保護２，６−ジアミノ −９−（２′−Ｏ−アルキル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンの３′−ＯＨ部分をホスファイト化する；ことを含む方法。
４０．２，６−ジアミノプリンリボシドの改良製造方法であって：液体アンモニアを除外し、無水条件（ｎｏｎ−ａｎｈｙｄｒｏｕｓ）にした密封容器中、グアノシン水和物をヘキサメチルジシラザンおよびトリフルオロメタンスルホン酸で処理し；および結晶化により該２，６−ジアミノプリンリボシドを単離する；ことを含む方法。
４１．２′−Ｏ−アルキル化シチジン３′−Ｏ−ホスホロアミダイトの製造方法であって：非保護シチジンをアルキル化して２′−Ｏ−アルキル化シチジンを生成させ該２ ′−Ｏ−アルキル化シチジンの５′−ヒドロキシル部分を保護し；および該５′ −保護２′−Ｏ−アルキル化シチジンをホスファイト化する；の各工程を含む方法。
４２．該アルキル化が塩基の存在下で行われる請求項４１に記載の方法。
４３．該塩基が水素化金属である請求項４２に記載の方法。
４４．該保護工程がジメトキシトリチル基を付加する請求項４１に記載の方法。
４５．該ホスファイト化工程がビス−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノシアノエチルホスファイトで実施される請求項４１に記載の方法。
４６．該ホスファイト化工程がＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ−ヒドロテトラゾリドの存在下で実施される請求項４５に記載の方法。
４７．さらに該５′−ヒドロキシル部分の保護に先だって、該２′−Ｏ−アルキル化シチジンのＮ４−アミノ部分を保護することを含む請求項４１に記載の方法。
４８．２′−Ｏ−アルキル化ウリジン３′−Ｏ−ホスホロアミダイトの製造方法であって：ウリジンを酸化ジアルキルスズで処理してウリジンの２′，３′−Ｏ−ジアルキルスタニレン誘導体を生成させ；該ウリジンのスタニレン誘導体をアルキル化して２′−Ｏ−アルキル化ウリジンを生成させ；該２′−Ｏ−アルキル化ウリジンの５′−ヒドロキシル部分を保護し；および該５′−保護２′−Ｏ−アルキル化ウリジンをホスファイト化する；の各工程を含む方法。
４９．該アルキル化が塩の存在下で行われる請求項４８に記載の方法。
５０．該塩が金属ハライドである請求項４８に記載の方法。
５１．該保護工程がジメトキシトリチル基を付加する請求項４８に記載の方法。
５２．該ホスファイト化工程がビス−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノシアノエチルホスファイトで実施される請求項４８に記載の方法。
５３．該ホスファイト化工程がＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ−ヒドロテトラゾリドの存在下で実施される請求項５２に記載の方法。
５４．該酸化ジアルキルスズが酸化ジブチルスズである請求項４８に記載の方法。
５５．２′−Ｏ−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン３′−Ｏ−ホスホロアミダイトの製造方法であって：２，６−ジアミノ −９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンをアルキル化して２′−０−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンを提供し；該２′ −Ｏ−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンの５′−ヒドロキシル部分を保護し；および該５′−保護２′−Ｏ−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンをホスファイト化する；の各工程を含む方法。
５６．該アルキル化が塩基の存在下で行われる請求項５５に記載の方法。
５７．該塩基が水素化金属である請求項５６に記載の方法。
５８．該保護工程がジメトキシトリチル基を付加する請求項５５に記載の方法。
５９．該ホスファイト化工程がビス−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノシアノエチルホスファイトで実施される請求項５５に記載の方法。
６０．該ホスファイト化工程がＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ−ヒドロテトラゾリドの存在下で実施される請求項５９に記載の方法。
６１．さらに該５′−ヒドロキシル部分の保護に先だって、該２′−Ｏ−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンのＮ２およびＮ６−アミノ部分を保護することを含む請求項５５に記載の方法。
６２．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり；Ｒ１はＣ３−Ｃ２０アルキル、Ｃ４−Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２０アルキニルであり；Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；Ｔ３およびＴ５は独立してＯＨまたは該構造に連結された該オリゴマーのさらなるサブユニットであり；およびｎは０から約６までの整数である）を有するサブユニットを少なくとも一つ含むオリゴマー。
６３．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり；Ｒ１はＣ１−Ｃ２０アルキル、Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２０アルキニルであり；Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；Ｔ３およびＴ５は独立してＯＨまたは該構造に連結された該オリゴマーのさらなるサブユニットであり；およびｎは０から約６までの整数である）を有するサブユニットを少なくとも一つ含むオリゴマー。
６４．少なくとも一つの２′−Ｏ−アルキル化グアノシンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの製造方法であって：２，６−ジアミノ−９−（リボフラノシル）プリンをアルキル化して２，６−ジアミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル化リボフラノシル）プリンを生成させ；該２，６−ジアミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル化リボフラノシル）プリンを脱アミノ化して２′−Ｏ−アルキル化グアノシンを生成させ；該２′−Ｏ−アルキル化グアノシンの５′−ヒドロキシル部分を保護し；該５′−保護２′−Ｏ−アルキル化グアノシンの３′−位をホスファイト化して２′−Ｏ−アルキル化グアノシン３′−ホスホロアミダイトを生成させ；およびホスホロアミダイトカップリング条件を用いて該２′−Ｏ−アルキル化グアノシン３′−ホスホロアミダイトとオリゴヌクレオチド上の５′−ヒドロキシル部分をカップリングさせる；ことを含む方法。
６５．オリゴヌクレオチド配列内に少なくとも一つの２′−Ｏ−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの製造方法であって：２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンをアルキル化して２ ′−０−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンを提供し；該２′−Ｏ−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンの５′−ヒドロキシル部分を保護し；該５′−保護２′−Ｏ−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンの３′−位をホスファイト化して２′−Ｏ−アルキル化２，６− ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン３′−Ｏ−ホスホロアミダイトを生成させ；およびホスホロアミダイト化学を用いて該２′−Ｏ−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン３′−ホスホロアミダイトとオリゴヌクレオチド上の５′−ヒドロキシル部分をカップリングさせる；ことを含む方法。
６６．蛋白質の合成を調節する方法であって、構造：▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり；Ｒ１はＣ３−Ｃ２０アルキル、Ｃ４−Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２０アルキニルであり；Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；Ｔ３およびＴ５は独立してＯＨまたは該構造に連結された該オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオシドのさらなるヌクレオチドまたはヌクレオシドであり；およびｎは０から約６までの整数である）を有するサブユニットを少なくとも一つ含むオリゴマーを、該蛋白質をコードしているｍＲＮＡと特異的にハイブリッド形成させることを含む方法。
６７．該オリゴヌクレオチドが医薬として受容可能な担体中に存在する請求項６６に記載の方法。
６８．蛋白質の合成を調節する方法であって、構造：▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり；Ｒ１はＣ１−Ｃ２０アルキル、Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２０アルキニルであり；Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；Ｔ３およびＴ５は独立してＯＨまたは該構造に連結された該オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオシドのさらなるヌクレオチドまたはヌクレオシドであり；およびｎは０から約６までの整数である）を有するサブユニットを少なくとも一つ含むオリゴマーを、該蛋白質をコードしているｍＲＮＡと特異的にハイブリッド形成させることを含む方法。
６９．該オリゴヌクレオチドが医薬として受容可能な担体中に存在する請求項６８に記載の方法。