JPH07126183A - ビタミンｋ依存性タンパク質を含有する治療用途に適した薬剤的組成物 - Google Patents

ビタミンｋ依存性タンパク質を含有する治療用途に適した薬剤的組成物

Info

Publication number
JPH07126183A
JPH07126183A JP6019626A JP1962694A JPH07126183A JP H07126183 A JPH07126183 A JP H07126183A JP 6019626 A JP6019626 A JP 6019626A JP 1962694 A JP1962694 A JP 1962694A JP H07126183 A JPH07126183 A JP H07126183A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
protein
factor
plasma
adsorbent particles
source material
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP6019626A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2573467B2 (ja
Inventor
Theodore S Zimmerman
エス． ジィンマーマン テオドール
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Scripps Research Institute
Original Assignee
Scripps Clinic and Research Foundation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23875410&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JPH07126183(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Scripps Clinic and Research Foundation filed Critical Scripps Clinic and Research Foundation
Publication of JPH07126183A publication Critical patent/JPH07126183A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2573467B2 publication Critical patent/JP2573467B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/3272—Polymers obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B01J20/3274—Proteins, nucleic acids, polysaccharides, antibodies or antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • B01D15/3809—Affinity chromatography of the antigen-antibody type, e.g. protein A, G, L chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3206—Organic carriers, supports or substrates
    • B01J20/3208—Polymeric carriers, supports or substrates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3206—Organic carriers, supports or substrates
    • B01J20/3208—Polymeric carriers, supports or substrates
    • B01J20/3212—Polymeric carriers, supports or substrates consisting of a polymer obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/36—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against blood coagulation factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/42—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the development mode, e.g. by displacement or by elution
    • B01D15/424—Elution mode
    • B01D15/426—Specific type of solvent

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【目的】 血漿または濃縮物から活性で高い純度で精製
され濃縮されたかたちのタンパク質Ａを含有する治療用
途に適した薬剤的組成物を提供すること。 【構成】 (a).ビタミンＫ依存性タンパク質からなる群
から選ばれるタンパク質Ａに特異的なモノクローナル抗
体に結合した吸着体粒子上に、前記タンパク質Ａと１種
またはそれ以上の他のタンパク質Ｂとの混合物からなる
源物質から前記タンパク質Ａを吸着し、(b).カオトロピ
ック試薬を含有する緩衝水溶液を用いて、吸着体粒子か
ら前記タンパク質Ａを欠いた源物質を除去し、さらに、
(c).溶離液を用いて前記吸着体粒子から吸着したタンパ
ク質Ａを溶離することにより、濃縮されたかたちのタン
パク質Ａの組成物を回収する、各ステップを具備してプ
ロテアーゼインヒビターの介在なくして実行される方
法、により得られる活性で高い純度で精製され濃縮され
たかたちのタンパク質Ａを含有する治療用途に適した薬
剤的組成物。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、第IX因子および他のビ
タミンＫ依存性タンパク質である第II因子、第VII 因
子、第Ｘ因子、プロトロビン、タンパク質Ｃ並びにタン
パク質Ｓの分離および精製により得られる治療用途に適
した薬剤的組成物に関する。特には、高純度タンパク質
を血漿または濃縮物からクロマトグラフ吸着および濃縮
技術により分離して得られる治療用途に適した薬剤的組
成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】血液凝固因子は正常な凝固機構におい
て、生命の維持に必要な役割を果たしている。例えば、
第IX因子欠乏症の患者は重大な出血問題を示している
（血友病Ｂ）。従って、科学研究用だけでなく、治療に
用いる量の第IX因子および他のビタミンＫ依存性タンパ
ク質の単離を可能にすることが望まれていた。この目的
に対して種々の方法が文献に記載されている。本発明に
係る薬剤的組成物ないしタンパク質は、高純度でかつ高
収率で得られ、特に他の血漿因子による汚染の比較的低
い点において従来技術より優れているものである。さら
に、多くの工程を必要とする従来技術では、時間がかか
るのと全工程でのタンパク質の損失が避けられない。
【０００３】従来方法の一つとして、Ｓ．Ｐ．Ｂａｊａ
ｊ等による「人間のプロトロビン、第IX因子および第Ｘ
因子の精製のための簡単化した処理方法」、Ｐｒｅｐａ
ｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｙ，１１（４），
３９７〜４１２（１９８１年）がある。この方法では、
血漿をクエン酸バリウムへの吸着およびそれからの溶
離、硫酸アンモニウム分画、ＤＥＡＥ−セフアデックス
クロマトグラフィー、そして、ｐＨ７．５のクエン酸ナ
トリウム緩衝液の中でのヘパリン−アガロースクロマト
グラフィーによってプロトロビン、第Ｘ因子および第IX
因子を分離するものである。第IX因子の報告された収率
は、８０〜２２０ユニット／mgの比活性で約３５％であ
った。他の方法として、Ｊ．Ｐ．Ｍｉｌｅｔｉｃｈ等に
よる「硫酸塩化したデキストラン球体を用いての人間の
血液凝固因子の第II、第IXおよび第Ｘの精製」、Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，第８０巻、頁
２２１〜２２８に記載のものがある。この方法では、新
鮮な冷凍血漿を解凍し、クエン酸バリウムにより沈澱、
ジイソプロピルフルオロリン塩酸とトリス−塩酸中での
再懸濁、硫酸アンモニウムによる沈澱、ＤＥ−５２セル
ロースへのクロマトグラフィー、そして得られた分画の
選択的な硫酸塩化したデキストラン球体への適用の手順
で行うものである。第IX因子を含む分画の濃度は第Ｖ因
子１ｗｔ％と同じ程度に不純物が混じっているとされて
いる。Ｂ．Ｏｓｔｅｒｕｄ等による「人間の血液凝固因
子IX」、Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、２５３巻、Ｎo.１７、頁５９４６〜５９５１（１９
７８年）、では、第IX因子の精製を以下の手順、硫酸バ
リウムへの吸着およびそれからの溶離、ＤＥＡＥ−セル
ロースバツチクロマトグラフィー、ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動、そしてヘパリン−アガロースのアフイニ
テイ−クロマトグラフで行っている。第IX因子活性は、
２０７ユニット／mgであり、収率は記載されていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】以上のことから、改良
された方法で得られる活性で高い純度で精製され濃縮さ
れたかたちのタンパク質Ａを含有する治療用途に適した
薬剤的組成物を提供することを目的としている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に本発明に係る活性で高い純度で精製され濃縮されたか
たちのタンパク質Ａを含有する治療用途に適した薬剤的
組成物は、(a).ビタミンＫ依存性タンパク質からなる群
から選ばれるタンパク質Ａに特異的なモノクローナル抗
体に結合した吸着体粒子上に、前記タンパク質Ａと１種
またはそれ以上の他のタンパク質Ｂとの混合物からなる
源物質から前記タンパク質Ａを吸着し、(b).カオトロピ
ック試薬を含有する緩衝水溶液を用いて、前記吸着体粒
子から前記タンパク質Ａを欠いた源物質を除去し、さら
に、(c).溶離液を用いて前記吸着体粒子から吸着したタ
ンパク質Ａを溶離することにより、変性されておらず高
い純度で濃縮されたかたちのタンパク質Ａの組成物を回
収する、各ステップを具備してプロテアーゼインヒビタ
ーの介在なくして実行される方法、により得ることがで
きることを特徴とする。
【０００６】ここで、前記源物質が血漿、血漿分画また
は血漿濃縮であること、あるいは、前記タンパク質Ａを
生産するための遺伝子を含む細胞により表わせるもので
あること、を特徴とすることができる。
【０００７】また、別の本発明に係る活性で高い純度で
精製され濃縮されたかたちの第IX因子を含有する治療用
途に適した薬剤的組成物は、(a).第IX因子に特異的なモ
ノクローナル抗体に結合した吸着体粒子上に、前記第IX
因子と１種またはそれ以上の他のタンパク質との混合物
からなる源物質から前記第IX因子を吸着し、(b).カオト
ロピック試薬を含有する緩衝水溶液を用いて、前記吸着
体粒子から前記第IX因子を欠いた源物質を除去し、さら
に、(c).溶離液を用いて前記吸着体粒子から吸着した第
IX因子を溶離することにより、変性されておらず高い純
度で濃縮されたかたちの第IX因子を回収する、各ステッ
プを具備してプロテアーゼインヒビターの介在なくして
実行される方法、により得ることができることを特徴と
している。
【０００８】また、別の本発明に係る活性で高い純度で
精製され濃縮されたかたちで得られるタンパク質Ａを含
有する治療用途に適した薬剤的組成物は、(a).ビタミン
Ｋ依存性タンパク質からなる群から選ばれるタンパク質
Ａに特異的なモノクローナル抗体に結合した吸着体粒子
上に、前記タンパク質Ａと１種またはそれ以上の他のタ
ンパク質Ｂとの混合物である血漿、血漿分画または血漿
濃縮の源物質から前記タンパク質Ａを吸着し、(b).塩化
リチウムを含有する緩衝水溶液を用いて、前記吸着体粒
子から前記タンパク質Ａを欠いた源物質を除去し、さら
に、(c).溶離液を用いて前記吸着体粒子から吸着したタ
ンパク質Ａを溶離することにより、変性されておらず高
い純度で濃縮されたかたちのタンパク質Ａの組成物を回
収する、各ステップを具備して、４℃で、キレ−ト化合
物の存在下で、プロテア−ゼインヒビタ−の介在なくし
て実行されることを特徴とする。
【０００９】本発明によれば、タンパク質に特異的な抗
体を用いての吸着操作でタンパク質を高度に精製された
かたちで得られる。
【００１０】上記構成において、ステップ(a) の段階
は、血漿または濃縮物のような源物質からのタンパク質
の免疫吸着を含む。ここで用いられる吸着体はタンパク
質に特異的なモノクローナル抗体であり、そのモノクロ
ーナル抗体は適当な基質、例えばアガロース球体に結合
されている。タンパク質を吸着した後、基質粒子を非吸
着タンパク質を除去するために大量の緩衝溶液で洗浄す
る。吸着したタンパク質を溶液で処理し溶離させる。回
収されたタンパク質は高純度、即ち不純物はほとんどな
く、治療に用いることも更に精製することもできる。
【００１１】本発明に係るプロセスでは第IX因子の精製
が１５００倍の程度で得られ、これは従来技術を通じて
大きな改良である。比活性は約３４．８ユニット／mgで
あり、さらに第IX因子の収率はこの新規な方法において
平均約５０％、高くて約７０％である。
【００１２】本発明は、ビタミンＫ依存性タンパク質と
して知られている第II因子、第VII因子、第IX因子、第V
因子、プロトロンロビン、タンパク質Ｃおよびタンパ
ク質Ｓのあらゆるタンパク質精製フオームにおける回収
に容易に適用できる。血漿、血漿分画、血漿濃縮物が典
型的な源物質として含まれる。タンパク質はまた、ＤＮ
Ａ組み換え技術、即ち、バクテリア、酵母または他の細
胞の中へタンパク質を生産するための遺伝子を組み入れ
たタンパク質の混合物からも精製することができる。こ
のような遺伝子組み込み技術は当該技術分野に通常の技
術を有するものであれば公知のことであり、また、示さ
れたタンパク質が１種またはそれ以上のタンパク質、細
胞の残骸等の混合状態であることは理解される。
【００１３】
【実施例】以下の説明は、従来一つの操作で達成される
とは知られていなかった純度と濃度にまで第IX因子の分
離と精製を達成するためになされ、用いられる本発明の
具体例の詳細を提供するものである。この説明は、第IX
因子の精製に適用される本発明の好適例であり、本発明
を限定するものでなく、当該技術分野の領域内にある変
化応用は本発明の範囲に属すると考えるべきである。そ
の他のビタミンＫ依存性タンパク質は同様の操作により
精製されるが、その操作は用いられる抗体を生じさせる
第IX因子に代わる他のタンパク質を用いる範囲で改変さ
れる。
【００１４】Ａ．第IX因子に対するモノクローナル抗体
の調製 第IX因子に吸着するモノクローナル抗体は、続いて分離
基質に結合されるが、そのモノクローナル抗体は種々の
公開されている方法により高度に精製される第IX因子の
調製することに始まる段階的手順により調製される。第
IX因子の精製は血漿源から得られる物質を用いて達成さ
れるが、純度が充分に高くないものは高濃度で用いられ
る。
【００１５】抗凝血性の正常な血漿の精製はＯｓｔｅｒ
ｕｄ等により示された方法、硫酸バリウムへの吸着およ
び溶離、ＤＥＡＥ−セルロースバツチクロマトグラフィ
ー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、そしてヘパリン
−アガロースカラムによるアフイニテイ−クロマトグラ
フイーの順序で行なわれた。この方法による順序は、高
度に精製された第IX因子を提供する。
【００１６】以下の手順に従って、血漿から得られた高
度に精製された第IX因子をマウスに注射した。他の手順
でも同様の効果を期待できる。第０日目、前記タンパク
質１００μg を０．０５Ｍトリス、０．１５Ｍ塩化ナト
リウムを含むｐＨ７．３の緩衝液０．１mlに溶解（また
は懸濁）させ、完全なフロインド補佐剤の同容量で振と
うして調製した組成物をマウスの腹膜を通して注射し
た。第１５日目、完全なフロインド補佐剤を不完全なフ
ロインドの補佐剤に代えた以外は同様のタンパク質５６
μg を再び注射した。第２２、３０、３８および１２４
日目、第１５日目の注射を繰り返した。第２３９日目、
マウスに精製した第IX因子のみを注射した。第２４３日
目、マウスの脾臓を取り出し、値法に従って溶かした。
この方法はＪ．Ｐ．Ｂｒｏｗｎ等による「モノクローナ
ル抗体との免疫沈降反応により同定される正常および悪
性の人細胞のタンパク質抗源」、ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ
ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，２２５
巻、頁４９８０〜４９８３（１９８０年）に記載されて
いる。この標準的手法は３５％ポリエチレングリコール
１０００を５０％ポリエチレングリコールに代える程度
おいて変化させられる。
【００１７】陽性クローンは、正常人血漿の等量と各ク
ロークからの上清液を培養し、第IX因子活性を分析する
ことにより同定される。クローンは、上清液が実質的に
第IX因子凝血活性を中和したならば陽性と見なされる。
クローンが陽性であると決定した後、それらは少なくと
も２度ザブクローン化し、第IX因子に対する抗体を生産
する安定なクローンを得、少なくとも細胞の注入４日目
に０．５mlのプリスタン（ｐｒｉｓｔａｎｅ）で腹膜を
通じて前もって処理したＢａｌｂ／ｃマウスの腹腔中に
注射した。ハイブリドーム細胞を牛の胎児の血清を含ま
ないＤｅｌｂｅｃｃｏで修飾されたＥａｇｌｅ媒質０．
５mlにおいて、マウス１匹当り約５×１０6 細胞の濃度
になるように注射した。マウスの腹が膨れるのを確認し
て、腹水液をヘパリン中に約１０ユニット／mlで集め
た。多数のマウスからの腹水液は次のモノクローナル免
疫グロブリン（ＩｇＧ）の単離のために適当な容量に分
けて貯蔵した。ヘパリン処理腹水液をすぐに使用しない
場合には、−７０℃で貯蔵し、使用直前に解凍するのが
よい。腹水液からのＩｇＧの最終収率は、腹水液１００
ml当たり約１ｇのＩｇＧである。
【００１８】第IX因子を精製する目的のためのモノクロ
ーナルＩｇＧの特異性は、後述するようにモノクローナ
ルＩｇＧが分離基質体にカップリングすることにより、
そして、分離基質に結合したＩｇＧが血漿から第IX因子
を除きその第IX因子が続くチオシアン酸ナトリウムを含
む溶液で溶離されることを示すことにより評価される。
【００１９】モノクローナルＩｇＧは、続く免疫吸着体
を調整するのに用いられ、採取後すぐまたは貯蔵溶液の
冷凍部分を解凍したヘパリン処理した腹水液から単離さ
れる。新鮮または凍結物に関わりなく使用され、溶液を
４℃とし、等容量のリン酸緩衝液の塩溶液（ＰＢＳ）で
処理し、以下に示す組成物とする。希釈腹水を４℃で撹
拌しながら等容量の飽和硫酸アンモニウム（ＳＡＳ）
（水中に過剰の硫酸アンモニウムを入れ沸とうさせ、４
℃に冷却し、不溶の結晶をろ過し水酸化アンモニウムで
ｐＨ７．０に調整して得る）を滴下しながら加え沈澱さ
せた。沈澱物と上清液を２時間以上撹拌し、４℃にて遠
心分離した。遠心分離は好ましくは、６０分間、１４，
０００rpm （３０，０００×ｇ）で行なう。腹水の上清
液はＳＡＳでさらに２回沈澱させ、その沈澱物と上清液
を第１回目と同様に撹拌し、遠心分離した。３回目の沈
澱から得られたペレットを希釈した腹水液と等量のＰＢ
Ｓで再懸濁した後、ＰＢＳに対し充分に透析した。透析
袋に凝固物が現われた時、２０℃で遠心分離により除い
た。透析されたＩｇＧを室温で５％の水酸化アルミニウ
ム水溶液と共に撹拌して吸着させ、吸着後２０℃で遠心
分離した。吸着処理は第１回目の後少なくとも３回以
上、それぞれ２．５％水酸化アルミニウム溶液を用いて
繰り返される。吸着されたＩｇＧは４℃にして、上記の
如くＳＡＳで再沈澱させた。沈澱させたペレットは使用
するまで−２０℃で貯蔵される。モノクローナルＩｇＧ
精製の他の方法は、ここで用いた方法と同様にもしくは
よりよいものであり、例えば、Ｂｒｕｃｋ，Ｃ．，Ｐｏ
ｒｔｅｔｅｌｌｅ，Ｄ．，Ｇｌｉｍｅｕｒ，Ｃ．，Ｂｏ
ｌｌｅｎ，Ａ．の記述による「ＤＥＡＥアフイニテイ−
ゲルブル−クロマトグラフイ−による腹水液からのマウ
スモノクローナル抗体の一段階精製」がＪｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｃｔｈｏｄ
ｓ，５３巻、頁３１３〜３１９（１９８２年）に記載さ
れている。
【００２０】Ｂ．免疫吸着体の調製 免疫吸着体は、フカップリングのためのモノクローナル
ＩｇＧを調製し、カップリングのための固体基質を調製
し、モノクローナルＩｇＧを固体基質に結合させるため
２つの成分を反応させることにより好適に調製される。
【００２１】(i) カップリングのためのＩｇＧの調製 新しく沈澱させたＩｇＧまたは以前に冷凍した沈澱を解
凍したものを用いることができる。その物質をＰＢＳに
対して透析し、ＰＢＳ中にある間に、ＩｇＧの容量と濃
度（Ａ280 ／１．４＝mg／ml ＩｇＧ）を決定する。次
いで、ＩｇＧ溶液５０ml当たり、ジイソプロピルフルオ
ロリン酸塩の１０〜３０μl 、好ましくは２０μl で処
理した。得られた溶液を３０分間、ドラフト中室温で撹
拌し、その処理したＩｇＧを使用直前にカップリング緩
衝液に対し一晩透析した。見い出されている最も好適な
カップリング用緩衝液は、好ましくは水酸化ナトリウム
でｐＨ９に調整された０．２５Ｍ重炭酸ナトリウム溶液
である。
【００２２】(ii) カップリングのための固体基質の調
製 モノクローナル抗体はタンパク質、特には第IX因子自体
に高い親和性を有するものでなければあらゆる物質に結
合されるが、そのような物質として、ガラズビーズ、ア
ガロースおよびそれらの誘導体が好ましい。最も好まし
くは、架橋結合されたアガロースで、セフアロース４Ｂ
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．の登録商標）とし
て知られたゲル市で市販されている。
【００２３】好ましい免疫吸着体樹脂を調製する方法
は、一般に文献に記載の方法と同様であり、例えば、
Ｊ．Ｐｏｒａｔｈ等による方法、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、８６巻、頁５３〜５
６（１９７３年）がある。見い出された最も好適な方法
は、以下の如くである。即ち、容量約２リットルのセフ
アロース４Ｂを酸で洗浄した２リットル用の焼結グラス
フィルターロートに入れた。樹脂を水洗し、ろ過して水
気のある状態にした。水洗した樹脂を回転子を入れた大
容量（約４リットル）のガラスビーカーに移した。次い
で、５Ｍの３塩基性リン酸カリウム溶液の１部と５Ｍの
３塩性リン酸カリウム溶液の２部を混合して調製した７
５０mlの冷リン酸カリウム緩衝溶液を樹脂に加えた。充
分に冷却した水を加えて最終容量を３リットルとした。
次に、この混合物を４℃に冷却し、マグネチックスター
ラ上の水−水浴中で４〜１０℃に保持した。ドラフト内
で、臭化シアンを回転子を入れた栓付きガラスビンの３
０mlの水中に加えた。混合物を溶液になるまで迅速に撹
拌した。この臭化シアン溶液を先の冷セフアロース混合
物に２分間以上撹拌しなが加えた。撹拌を続けて８分間
行ない、その溶液を４リットルの耐圧ビンに固定した冷
２リットル焼結ガラスフィルターロートに移した。次い
で、臭化シアン処理した樹脂を約２０リットルの冷水で
（ろ液のｐＨが中性になるまで）洗浄した。水洗した樹
脂は冷却したカップリング用緩衝液と速やかに平衝状態
とし、大きな回転子を入れた４リットルのプラスチック
ビーカーに移した。
【００２４】(iii) モノクローナル抗体の固体基質への
カップリング 上記の如く調製した固体基質樹脂は、ＰＢＳと平衝状態
にある時は使用できる状態にあり、それ以後は貯蔵され
るべきではない。従って、樹脂混合物は、カップリング
反応用緩衝液に対して前もって１晩透析したＩｇＧと結
合させた。この結合した樹脂／ＨｇＧ懸濁混合物を２４
時間４℃で撹拌した。カップリング時の上清液の無希釈
サンプルのＡ280 は、標準試料として牛の血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）を用いてまたは標準試料としてＢＳＡと共
にバイオ−ラド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）タンパク質分析（ブ
ラッドフオード試薬）により決定される。次に、カップ
リングしたリガンドのパーセンテージを計算する。上記
した手順が行なわれる時、この値は通常約９５％であ
る。抗体とカップリングしなかった樹脂上に残っている
活性サイトは、０．１Ｍグリシンを含有する冷カップリ
ング用緩衝液で焼結ガラスフイルターロート上の樹脂を
洗浄することによりブロックされる。次いで、この樹脂
を樹脂と抗体を結合させた時のそれぞれのカップリング
用緩衝液と等容量になるように上記溶液で再懸濁した。
懸濁液をゆっくり４℃で１晩撹拌した。次いで、この樹
脂をＰＢＳで充分に洗浄した。その組成を以下に示す。
カップリングし、ブロックされた上記樹脂は、付加的に
０．５Ｍカルシウムイオン、好ましくは塩化カルシウム
を含むＰＢＳで予備溶離される。樹脂を再びＰＢＳのみ
で洗浄し、４℃で貯蔵するかまたは使用できる用意がで
きるまで、室温で連続したポンプの働いているカラム内
におかれる。セフアロースに対するＩｇＧのカップリン
グ密度は、セフアロース球体１リットル当り２〜５ｇＩ
ｇＧ、好ましくは、３〜４ｇＩｇＧであろう。
【００２５】Ｃ．第IX因子の分離と精製 人や動物の血漿および市販の第IX因子の濃縮物のような
第IX因子の試料調製は、本発明の方法を用いることがで
き、本方法は物質の特定のタイプに限定されない。好適
な物質、成功した結果を与えたものとしては、それぞれ
目的とするタンパク質を含む人の血漿、血漿分画および
濃縮物、市販または一部実験室で精製されたものであ
る。以下の記載では、正常な人の血漿を用いたもので詳
細を説明する。 新しく採取したものでない血漿は通常
の手段でクエン酸塩化され冷凍保存される。使用基準が
できた時、３５〜４０℃、好ましくは３７℃の温度で解
凍し、カラムに直接入れる。
【００２６】本発明の説明では最初に直接にクロマトグ
ラフ用カラムに免疫吸着体とカップリングする粒子を入
れて使用したが、適当な容器の中へ抗体と結合する樹脂
粒子を入れてバツチ法で分離し、その後再構成した濃縮
物または血漿を加え、上記で概要を示したように目的と
するタンパク質を回収する方法も本発明の範囲にあるも
のである。以下、さらに詳細に説明する。
【００２７】クロマトグラフ工程を遂行するには、以下
の具体例が好ましい。
【００２８】カラムに充填した、例えばＡｍｉｃｏｎ
８６００１（Ａｍｉｃｏｎ Ｃｏｒｐ．， Ｌｅｘｉｇ
ｔｏｎ，Ｍａｓｓ．の登録商標）樹脂を、ぜん動性ポン
プで速やかに流れるようにする。人の血漿を第IX因子源
として使用する時、抗体を保持する球体の各容量に対し
約３〜７、好ましくは５部の血漿が処理される。血漿は
ゆっくりとカラムに注がれ、流速は免疫吸着体上に血漿
からの第IX因子の望ましい量が吸着される接触時間を与
えるものである。より長い接触時間がタンパク質の少な
くとも約５０％、好ましくは７５％、より好ましくは、
９５％以上を吸着させるのに必要であり、その時間は１
〜６時間、好ましくは２〜４時間で一般的に満足され
る。
【００２９】源物質をカラムに入れた後、５０部のトリ
ス−塩化リチウム緩衝液（０．１Ｍリジン塩基と０．５
Ｍ塩化リチウム、ｐＨ８）で洗浄し、溶離タンパク質を
有効に除去する。除去率は好ましくは少なくとも９０
％、より好ましくは最大の除去である。次いで、第２の
洗浄をトリス−塩酸緩衝液（０．０５Ｍトリス−塩酸、
ｐＨ８）でカラムからリチウムイオンを最大限に除去す
る条件で行なう。約２〜４時間の接触時間で満足され
る。
【００３０】精製第IX因子の溶離は、ジエチルアミン、
塩化カルシウム、チオシアン酸ナトリウム塩、臭化カリ
ウム、酢酸（好ましくは濃度約０．１〜１．０Ｍ）また
はｐＨ２〜３、好ましくは約２．２の塩酸−グリシン混
合物の如き溶離液を含む緩衝液で行なわれる。他の適当
な溶離剤は、当該技術分野の通常の技術で簡単に同定す
ることができる。直線的な濃度勾配の溶離液が良い結果
を与えるが、本発明の目的を達成するためには必要はな
く、一定のイオン濃度を有する溶液がさらに適当であ
る。流出速度はセフアロースの充填によりカラム内の圧
力を上げないでタンパク質の溶離を効果的に行うべきで
ある。このように、第IX因子をチオシアン酸ナトリウム
で溶離する時、チオシアン酸ナトリウムの溶離液を２Ｍ
〜４Ｍ、好ましくは３Ｍを流し、その流速は３リットル
カラムにおいて平方インチ当たり９ポンド以上の導入部
の圧力を与え、圧力の上昇をしないように行なう。ジエ
チルアミンの溶離では、０．３〜０．７Ｍ、好ましくは
０．５Ｍの濃度で行なわれる。ジエチルアミンを溶離液
として用いた場合、分画はジエチルアミンを中和するた
めに１Ｍグラシン中に集められるべきである。続いて、
そのカラムはＰＢＳまたは中性緩衝液で洗浄される。
【００３１】第IX因子活性を含む分画を貯蔵し、その全
容量および活性を決定する。溶離された第IX因子を溶液
のイオンを除くためにＰＢＳに対して透析し、次いで分
析する。溶離された第IX因子は濃度約１０〜３０ユニッ
ト／mlであり、治療または分析に用いることができる。
【００３２】第IX因子を集めた液は限外ろ過のような通
常の方法により１０〜２０mlに濃縮することができる。
この目的のためには、窒素圧５０ｐｓｉ下でＹＭ−１０
メンブランとアミコン撹拌セル（Ａｍｉｃｏｎ ｓｔｉ
ｒｒｅｄ ｃｅｌｌ）がよいことがわかった。ゆっくり
とした撹拌を窒素圧を低下した後３０分間続け、濃縮液
の容量と活性を決定した。ために液は温度を４℃に保つ
ならば短期間、例えば１晩貯蔵してもよい。
【００３３】上記した免疫吸着体カラムはカラムから精
製しタンパク質を除く溶離により再生される。カラムは
このように何回でも繰り返し使用できる。
【００３４】分析は通常の部分トロンボプラスチン時間
分析（Ｐａｒｔｉａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎ
ｔｉｍｅ ａｓｓａｙ）で行なわれる。
【００３５】すべての緩衝液において、ＥＤＴＡ ４ナ
トリウム塩の１０ｍＭを含んだもの、および／またはす
べての処理行程を４℃で行なうことは、第IX因子の活性
およびタンパク質分解を最小にする。
【００３６】緩衝液の組成を以下に示す。
【００３７】リン酸緩衝塩溶液 １．６ｇのリン酸ナトリウム１塩基性１水和物 ８．４ｇのリン酸ナトリウム２塩基性無水物 ６１．４ｇの塩化ナトリウム 水を加えて７リットルとする。ｐＨを７．２に調整。
【００３８】上記で説明した手順で７回の実験を行な
い、平均回収率５２％、その範囲３２％〜７１％であっ
た。精製度は平均２４００倍、比活性は３４．８ユニッ
ト／mgであった。以下の実施例１で示すデータは、上で
述べた本発明で得られたものの代表である。冷凍された
正常人の血漿を３７℃で解凍し、次いで４℃で処理した
ものである。
【００３９】実施例１ 実験Ａ： 第IX因子活性の１．５ユニット／ml、０．０
２１ユニット／mgを含む人の血漿１００mlを免疫吸着体
カラムに入れ、最初に血漿を次いで第IX因子を上述した
方法に従って溶離した。溶離された第IX因子は３１ユニ
ット／mgの比活性を有しており、約１５００倍の精製度
を示した。第IX因子の回収率６３．３％。溶離分画のピ
ークにおいては、第IX因子の濃度の１２倍であった。
【００４０】実験Ｂ： 第IX因子活性の０．９４ユニッ
ト／ml、０．０１３ユニット／mgを含む人の血漿１００
mlを、すべての緩衝液にＥＤＴＡ ４ナトリウム塩の１
０ｍＭを含ませた以外は上記手順と同様にして回収し
た。溶離した第IX因子は１７ユニット／mgの比活性を有
し、約１３００倍の精製度を示した。回収率は６１％、
溶離分画のピークにおいては、第IX因子の濃度の８倍で
あった。
【００４１】
【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば、
血漿または濃縮物から、平均回収率５２％、その範囲３
２％〜７１％、精製度平均２４００倍、比活性３４．８
ユニット／mgの、すなわち、活性で高い純度で精製され
濃縮されたかたちの、タンパク質Ａを含有する治療用途
に適した薬剤的組成物を得ることができた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ０７Ｋ 16/36 8318−4Ｈ 17/02 8318−4Ｈ

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 (a).ビタミンＫ依存性タンパク質からな
    る群から選ばれるタンパク質Ａに特異的なモノクローナ
    ル抗体に結合した吸着体粒子上に、前記タンパク質Ａと
    １種またはそれ以上の他のタンパク質Ｂとの混合物から
    なる源物質から前記タンパク質Ａを吸着し、(b).カオト
    ロピック試薬を含有する緩衝水溶液を用いて、前記吸着
    体粒子から前記タンパク質Ａを欠いた源物質を除去し、
    さらに、(c).溶離液を用いて前記吸着体粒子から吸着し
    たタンパク質Ａを溶離することにより、変性されておら
    ず高い純度で濃縮されたかたちのタンパク質Ａの組成物
    を回収する、各ステップを具備してプロテアーゼインヒ
    ビターの介在なくして実行される方法、により得ること
    ができることを特徴とする、活性で高い純度で精製され
    濃縮されたかたちのタンパク質Ａを含有する治療用途に
    適した薬剤的組成物。
  2. 【請求項２】 前記源物質が血漿、血漿分画または血漿
    濃縮であることを特徴とする請求項１に記載の薬剤的組
    成物。
  3. 【請求項３】 前記源物質が前記タンパク質Ａを生産す
    るための遺伝子を含む細胞により表わせるものであるこ
    とを特徴とする請求項１に記載の薬剤的組成物。
  4. 【請求項４】 (a).第IX因子に特異的なモノクローナル
    抗体に結合した吸着体粒子上に、前記第IX因子と１種ま
    たはそれ以上の他のタンパク質との混合物からなる源物
    質から前記第IX因子を吸着し、(b).カオトロピック試薬
    を含有する緩衝水溶液を用いて、前記吸着体粒子から前
    記第IX因子を欠いた源物質を除去し、さらに、(c).溶離
    液を用いて前記吸着体粒子から吸着した第IX因子を溶離
    することにより、変性されておらず高い純度で濃縮され
    たかたちの第IX因子を回収する、各ステップを具備して
    プロテアーゼインヒビターの介在なくして実行される方
    法、により得ることができることを特徴とする、活性で
    高い純度で精製され濃縮されたかたちの第IX因子を含有
    する治療用途に適した薬剤的組成物。
  5. 【請求項５】 (a).ビタミンＫ依存性タンパク質からな
    る群から選ばれるタンパク質Ａに特異的なモノクローナ
    ル抗体に結合した吸着体粒子上に、前記タンパク質Ａと
    １種またはそれ以上の他のタンパク質Ｂとの混合物であ
    る血漿、血漿分画または血漿濃縮の源物質から前記タン
    パク質Ａを吸着し、(b).塩化リチウムを含有する緩衝水
    溶液を用いて、前記吸着体粒子から前記タンパク質Ａを
    欠いた源物質を除去し、さらに、(c).溶離液を用いて前
    記吸着体粒子から吸着したタンパク質Ａを溶離すること
    により、変性されておらず高い純度で濃縮されたかたち
    のタンパク質Ａの組成物を回収する、各ステップを具備
    して、４℃で、キレ−ト化合物の存在下で、プロテア−
    ゼインヒビタ−の介在なくして実行されることを特徴と
    する方法、により得ることができることを特徴とする、
    活性で高い純度で精製され濃縮されたかたちのタンパク
    質Ａを含有する治療用途に適した薬剤的組成物。
JP6019626A 1983-03-04 1994-02-16 第ｉｘ因子タンパク質を含有する治療用途に適した薬剤的組成物 Expired - Lifetime JP2573467B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US47241383A 1983-03-04 1983-03-04
US472413 1983-03-04

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP59038886A Division JPH0794478B2 (ja) 1983-03-04 1984-03-02 ビタミンｋ依存性タンパク質を含む薬剤組成物を調整する方法及びそれに用いる免疫吸着体

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH07126183A true JPH07126183A (ja) 1995-05-16
JP2573467B2 JP2573467B2 (ja) 1997-01-22

Family

ID=23875410

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP59038886A Expired - Lifetime JPH0794478B2 (ja) 1983-03-04 1984-03-02 ビタミンｋ依存性タンパク質を含む薬剤組成物を調整する方法及びそれに用いる免疫吸着体
JP6019626A Expired - Lifetime JP2573467B2 (ja) 1983-03-04 1994-02-16 第ｉｘ因子タンパク質を含有する治療用途に適した薬剤的組成物

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP59038886A Expired - Lifetime JPH0794478B2 (ja) 1983-03-04 1984-03-02 ビタミンｋ依存性タンパク質を含む薬剤組成物を調整する方法及びそれに用いる免疫吸着体

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP0118256B1 (ja)
JP (2) JPH0794478B2 (ja)
AU (2) AU2529584A (ja)
CA (1) CA1252744A (ja)
DE (1) DE3485711D1 (ja)
DK (1) DK170806B1 (ja)
NL (1) NL930143I2 (ja)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8327860D0 (en) * 1983-10-18 1983-11-16 Fujisawa Pharmaceutical Co Monoclonal antiprotein c antibody
US4902614A (en) * 1984-12-03 1990-02-20 Teijin Limited Monoclonal antibody to human protein C
JPH0619352B2 (ja) * 1985-06-10 1994-03-16 帝人株式会社 ヒト・プロテインｃの測定方法
DE3751605D1 (de) * 1986-01-06 1996-01-04 Blood Systems Inc Therapeutisches Blutprodukt, Mittel und Verfahren zu dessen Erzeugung.
USH1148H (en) 1987-04-17 1993-03-02 Method of separating activated human protein C
DE3882411T2 (de) * 1987-04-17 1993-12-16 Teijin Ltd Verfahren zur Trennung von aktiviertem menschlichem Protein C.
DK0573605T3 (da) 1991-03-01 2001-01-02 Rhone Poulenc Rorer Int Fremstilling af faktor IX
DE19549262C2 (de) * 1995-02-08 1997-10-09 Martin Dr Kohlmeier Präparat zur Abschätzung des Entstehungsrisikos eines beschleunigten Verlustes kognitiver Fähigkeiten
CN1209548A (zh) * 1998-06-08 1999-03-03 南开大学 碳化树脂dna免疫吸附剂的制备方法
KR101364001B1 (ko) * 2004-12-23 2014-02-17 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 관심있는 비타민 ｋ-의존성 단백질을 포함한 조성물 중의단백질 오염물질의 양의 감소

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4361509A (en) * 1981-12-14 1982-11-30 Scripps Clinic And Research Foundation Ultrapurification of factor VIII using monoclonal antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
AU641119B2 (en) 1993-09-16
JP2573467B2 (ja) 1997-01-22
AU2529584A (en) 1984-09-06
JPH0794478B2 (ja) 1995-10-11
JPS6034916A (ja) 1985-02-22
AU2705788A (en) 1989-05-04
EP0118256A2 (en) 1984-09-12
NL930143I1 (nl) 1994-01-03
EP0118256A3 (en) 1986-12-10
CA1252744A (en) 1989-04-18
DK170806B1 (da) 1996-01-22
EP0118256B1 (en) 1992-05-13
NL930143I2 (nl) 1998-09-01
DK151784D0 (da) 1984-03-05
DK151784A (da) 1984-09-05
DE3485711D1 (de) 1992-06-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0083483B1 (en) Ultrapurificated factor viii : c preparation
USRE32011E (en) Ultrapurification of factor VIII using monoclonal antibodies
EP0792281B1 (en) Process for purification of factor viii
US4629567A (en) Alpha-1-antiprotease purification
US6627737B1 (en) Factor IX purification methods
US5639857A (en) Ultrapurification of factor IX and other vitamin k-dependent proteins
US5055557A (en) Ultrapurification of factor IX and other vitamin K-dependent proteins
JP2573467B2 (ja) 第ｉｘ因子タンパク質を含有する治療用途に適した薬剤的組成物
JPH0545600B2 (ja)
EP0253331B1 (en) Thrombin-binding substance and process for its preparation
Velander et al. TECHNOLOGICAL CHALLENGES FOR THE LARGE-SCALE PURIFICATION OF PROTEIN C
CA1151542A (en) Process for preparing the third component of the complement from human blood plasma
JPS5838151B2 (ja) カリクレインの精製法
JPH0260316B2 (ja)
EP0217061B1 (en) Ultrapurification of factor VIII
JP2945181B2 (ja) 免疫グロブリンｍの精製方法
AU759379B2 (en) Novel factor IX purification methods
JPS5810522A (ja) 不活化トロンビンゲルによるアンチトロンビン３の精製法
JPH028710B2 (ja)
JPS61246131A (ja) 新しいタイプのプラスミノ−ゲン活性化因子及びその調製方法
JPH0643440B2 (ja) ヒトα２―プラスミンインヒビターの分離回収法
JPS5855043A (ja) カリクレインの吸着剤

Legal Events

Date Code Title Description
EXPY Cancellation because of completion of term