JPH05227969A - ウシ成長ホルモン放出因子前駆体および関連のdna化合物 - Google Patents
ウシ成長ホルモン放出因子前駆体および関連のdna化合物Info
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/61—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 ウシ成長ホルモン放出因子(bGRF)、b
GRF前駆体、およびリーダーペプチドを随伴するbG
RF前駆体をコードするDNA化合物、並びにbGRF
前駆体、およびリーダーペプチドを伴うbGRF前駆体
ポリペプチド、およびそれらの酸およびカルボン酸付加
塩、並びにbGRF前駆体を含有する医薬組成物。 【効果】 このDNA化合物のいずれかを組み込んだ発
現ベクターを用いて原核性または真核性細胞内でbGR
Fポリペプチドを生産できる。組換え法また他の方法で
得られるポリペプチドは種々の動物の成長ホルモンの放
出誘導に有用である。
GRF前駆体、およびリーダーペプチドを随伴するbG
RF前駆体をコードするDNA化合物、並びにbGRF
前駆体、およびリーダーペプチドを伴うbGRF前駆体
ポリペプチド、およびそれらの酸およびカルボン酸付加
塩、並びにbGRF前駆体を含有する医薬組成物。 【効果】 このDNA化合物のいずれかを組み込んだ発
現ベクターを用いて原核性または真核性細胞内でbGR
Fポリペプチドを生産できる。組換え法また他の方法で
得られるポリペプチドは種々の動物の成長ホルモンの放
出誘導に有用である。
Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明はウシ成長ホルモン放出因
子および関連のDNA化合物に関する。
子および関連のDNA化合物に関する。
【0002】
【従来技術と発明が解決すべき課題】成長ホルモン放出
因子(GRF)はヒトおよび動物の成長ホルモン産生を
誘導するのに有用である。ウシGRF(bGRF)は獣
医学の分野での使用において特に有益である。成熟bG
RFのアミノ酸配列が解明された[エシェら(Esc
h),BBRC 117:772−779 (198
3)]。しかしながら、本発明以前には、天然のbGR
Fのアミノ酸配列は解明されていなかった。
因子(GRF)はヒトおよび動物の成長ホルモン産生を
誘導するのに有用である。ウシGRF(bGRF)は獣
医学の分野での使用において特に有益である。成熟bG
RFのアミノ酸配列が解明された[エシェら(Esc
h),BBRC 117:772−779 (198
3)]。しかしながら、本発明以前には、天然のbGR
Fのアミノ酸配列は解明されていなかった。
【0003】
【課題を解決するための手段】本発明は従来不明であっ
た、2つの形のbGRF前駆体およびbGRFペプチド
を含むポリペプチド化合物を提供する。本発明はまた、
本発明のポリペプチド化合物および成熟bGRFをコー
ドするDNA化合物を提供する。
た、2つの形のbGRF前駆体およびbGRFペプチド
を含むポリペプチド化合物を提供する。本発明はまた、
本発明のポリペプチド化合物および成熟bGRFをコー
ドするDNA化合物を提供する。
【0004】本発明はウシ成長ホルモン放出因子をコー
ドするDNA配列、bGRF前駆体をコードするDNA
配列、およびbGRFリーダーペプチドをコードするD
NA配列を含む、DNA化合物を提供する。また本発明
は、bGRF前駆体および、bGRF前駆体に結合した
bGRFリーダーペプチドを含む、ポリペプチド化合物
を提供する。本発明のポリペプチド化合物は式1:
ドするDNA配列、bGRF前駆体をコードするDNA
配列、およびbGRFリーダーペプチドをコードするD
NA配列を含む、DNA化合物を提供する。また本発明
は、bGRF前駆体および、bGRF前駆体に結合した
bGRFリーダーペプチドを含む、ポリペプチド化合物
を提供する。本発明のポリペプチド化合物は式1:
【化7】 または式4:
【化8】 で示される化合物、その薬学上許容し得る酸またはカル
ボン酸付加塩である。本発明のDNA化合物には成熟b
GRF、bGRF前駆体、およびbGRFリーダーペプ
チドをコードするDNA配列が含まれる。好ましい成熟
bGRFをコードするDNA配列は、式3:
ボン酸付加塩である。本発明のDNA化合物には成熟b
GRF、bGRF前駆体、およびbGRFリーダーペプ
チドをコードするDNA配列が含まれる。好ましい成熟
bGRFをコードするDNA配列は、式3:
【化9】 で示される。bGRF前駆体をコードする好ましいDN
A配列は式2:
A配列は式2:
【化10】 で示される。リーダーペプチド配列に先行される好まし
いbGRF前駆体をコードするDNA配列は式5:
いbGRF前駆体をコードするDNA配列は式5:
【化11】 で示される。
【0005】本発明はまた、bGRF前駆体を含むポリ
ペプチド化合物を活性成分とする医薬組成物を提供す
る。最後に、本発明は成長ホルモンの放出を誘導する方
法であって、bGRF前駆体を含むポリペプチド化合物
を与えることからなる方法を提供するものである。本発
明の組成物および方法はヒト、ブタ、ウシ、ヒツジ、ト
リおよび魚等の種々の動物での成長ホルモンの放出誘導
に有用である。本発明組成物および方法の好ましい使用
対象はウシである。以下に本発明を詳細に説明する。本
明細書に開示し、特許請求している本発明をより明瞭か
つ理解し易くするために、本明細書で使用する語句およ
び略語を以下のごとく定義する。
ペプチド化合物を活性成分とする医薬組成物を提供す
る。最後に、本発明は成長ホルモンの放出を誘導する方
法であって、bGRF前駆体を含むポリペプチド化合物
を与えることからなる方法を提供するものである。本発
明の組成物および方法はヒト、ブタ、ウシ、ヒツジ、ト
リおよび魚等の種々の動物での成長ホルモンの放出誘導
に有用である。本発明組成物および方法の好ましい使用
対象はウシである。以下に本発明を詳細に説明する。本
明細書に開示し、特許請求している本発明をより明瞭か
つ理解し易くするために、本明細書で使用する語句およ
び略語を以下のごとく定義する。
【0006】定義 GRF:成長ホルモン放出因子活性を有するポリペプチ
ド。 GRF(1−29)NH2:完全な能力に必要なGRF
の最小部分。 E.coli(大腸菌)における高レベル発現:クローン化
遺伝子にコードされているGRF類似体の生産であっ
て、遺伝子産物がクーマシーブルー染色によって検出可
能なレベルでの生産。 単離されたDNA配列:天然のゲノムDNA内での位置
とは異なる位置にある、構築または合成されたDNA配
列。この定義には、天然状態以外のあらゆる形で存在す
る単離されたDNA配列が包含される。例えば、DNA
配列をプラスミドまたはファージベクターに挿入し、あ
るいはそれが由来するまたは他の生物のゲノムに挿入
し、遺伝子用量を増大させる。 成熟bGRF:bGRF(1−44);式6:
ド。 GRF(1−29)NH2:完全な能力に必要なGRF
の最小部分。 E.coli(大腸菌)における高レベル発現:クローン化
遺伝子にコードされているGRF類似体の生産であっ
て、遺伝子産物がクーマシーブルー染色によって検出可
能なレベルでの生産。 単離されたDNA配列:天然のゲノムDNA内での位置
とは異なる位置にある、構築または合成されたDNA配
列。この定義には、天然状態以外のあらゆる形で存在す
る単離されたDNA配列が包含される。例えば、DNA
配列をプラスミドまたはファージベクターに挿入し、あ
るいはそれが由来するまたは他の生物のゲノムに挿入
し、遺伝子用量を増大させる。 成熟bGRF:bGRF(1−44);式6:
【化12】 bGRF前駆体:bGRF(1−76);式1:
【化13】 図面の説明 図面は等尺で記載されていない。図1はプラスミドpH
S507の制限部位および機能地図である。
S507の制限部位および機能地図である。
【0007】発明の詳しい説明 本発明は成熟成長ホルモン放出因子、bGRF前駆体、
およびbGRF前駆体に結合したbGRFリーダーペプ
チドをコードする、単離されたDNA化合物を提供する
ものである。本発明はまたポリペプチド化合物を提供す
るものである。成熟bGRFの形のアミノ酸構造は既に
決定されているが[エッシェら(Eschet al.)Biochem.
Biophys.Res.Commun.127:772(1983)] 、本発明は従来
知られていなかったbGRF前駆体を提供するものであ
る。本発明は式1で示される前駆体化合物および薬学上
許容される酸またはカルボン酸付加塩を提供する。bG
RF前駆体は大腸菌によって高レベルに産生し得る、b
GRF活性を持った化合物への当該技術分野の要求を満
たすものであり、特に有用である。化合物は大腸菌内に
おける成熟GRFの発現が遭遇する重大な分解から免れ
る程度の大きさである[キルシナーら(Kirschner et a
l.) J.Biotech. 12:247, 248 (1989)参照]。
およびbGRF前駆体に結合したbGRFリーダーペプ
チドをコードする、単離されたDNA化合物を提供する
ものである。本発明はまたポリペプチド化合物を提供す
るものである。成熟bGRFの形のアミノ酸構造は既に
決定されているが[エッシェら(Eschet al.)Biochem.
Biophys.Res.Commun.127:772(1983)] 、本発明は従来
知られていなかったbGRF前駆体を提供するものであ
る。本発明は式1で示される前駆体化合物および薬学上
許容される酸またはカルボン酸付加塩を提供する。bG
RF前駆体は大腸菌によって高レベルに産生し得る、b
GRF活性を持った化合物への当該技術分野の要求を満
たすものであり、特に有用である。化合物は大腸菌内に
おける成熟GRFの発現が遭遇する重大な分解から免れ
る程度の大きさである[キルシナーら(Kirschner et a
l.) J.Biotech. 12:247, 248 (1989)参照]。
【0008】本発明の他のポリペプチド化合物は前駆体
のアミノ末端にリーダーペプチドが結合した形のbGR
F前駆体である。式4で示される化合物およびその薬学
上許容される酸またはカルボン酸付加塩である。式4の
化合物は哺乳類細胞での生産に特に有用である。リーダ
ーペプチドはポリペプチド生産物を分泌させる。リーダ
ーペプチドの切断は分泌後に起こる。
のアミノ末端にリーダーペプチドが結合した形のbGR
F前駆体である。式4で示される化合物およびその薬学
上許容される酸またはカルボン酸付加塩である。式4の
化合物は哺乳類細胞での生産に特に有用である。リーダ
ーペプチドはポリペプチド生産物を分泌させる。リーダ
ーペプチドの切断は分泌後に起こる。
【0009】本発明の全ペプチド化合物は固相ペプチド
合成や組換え法等の当該技術分野で周知の化学的方法で
製造され得る。両方法共、本明細書で引用する米国特許
4,617,149に記載されている。高収率が望まれ
る場合には組換え法が好ましい。あらゆる望ましいDN
A配列の構築のための一般的な方法が引用のブラウンら
[Brown et al., Methods in Enzymology 68:109 (197
9)]によって示された。DNA配列はABS(Applied Bi
osystems, 850Lincoln Centre Drive, Foster City, CA
94404)等の自動DNA合成装置を用いて合成すること
ができる。DNA配列はまたポリメラーゼ鎖反応によっ
ても製造することができる。米国特許公開番号0258
017、1987年3月2日公開、参照。
合成や組換え法等の当該技術分野で周知の化学的方法で
製造され得る。両方法共、本明細書で引用する米国特許
4,617,149に記載されている。高収率が望まれ
る場合には組換え法が好ましい。あらゆる望ましいDN
A配列の構築のための一般的な方法が引用のブラウンら
[Brown et al., Methods in Enzymology 68:109 (197
9)]によって示された。DNA配列はABS(Applied Bi
osystems, 850Lincoln Centre Drive, Foster City, CA
94404)等の自動DNA合成装置を用いて合成すること
ができる。DNA配列はまたポリメラーゼ鎖反応によっ
ても製造することができる。米国特許公開番号0258
017、1987年3月2日公開、参照。
【0010】大部分のアミノ酸が1以上のDNAトリプ
レットによってコードされるので、本発明のポリペプチ
ド化合物のアミノ酸配列は複数の異なるDNA配列によ
ってコードされる。これらの異なるDNA配列は同じア
ミノ酸配列をコードするので、本発明はこれらの異なる
配列をも包含する。当業者は大腸菌内でのポリペプチド
の発現はメチオニン残基から始まることを知っている。
本発明のポリペプチドはメチオニンから始まらない。従
って、この化合物は幾つかの方法で製造することができ
る。ポリペプチド化合物の発現後、メチオニンまたはメ
チオニンと余分のアミノ酸からなるリーダー配列を周知
の幾つかの方法のいずれかで除去する。例えば米国特許
4,745,069および4,782,139;ビラら
(Villa et al.) Eur.J.Biochem. 171:137 (1988);セ
リら(Geli et al.) Gene 80:129 (1989) および欧州
特許公開No.0199018参照。
レットによってコードされるので、本発明のポリペプチ
ド化合物のアミノ酸配列は複数の異なるDNA配列によ
ってコードされる。これらの異なるDNA配列は同じア
ミノ酸配列をコードするので、本発明はこれらの異なる
配列をも包含する。当業者は大腸菌内でのポリペプチド
の発現はメチオニン残基から始まることを知っている。
本発明のポリペプチドはメチオニンから始まらない。従
って、この化合物は幾つかの方法で製造することができ
る。ポリペプチド化合物の発現後、メチオニンまたはメ
チオニンと余分のアミノ酸からなるリーダー配列を周知
の幾つかの方法のいずれかで除去する。例えば米国特許
4,745,069および4,782,139;ビラら
(Villa et al.) Eur.J.Biochem. 171:137 (1988);セ
リら(Geli et al.) Gene 80:129 (1989) および欧州
特許公開No.0199018参照。
【0011】他の製造工程も当業者には周知である。例
えば、化合物はSV40誘導ベクターを用いて真核性細
胞で製造することができる。真核性細胞での発現はbG
RF前駆体cDNAによって達成される。そのような方
法は米国特許4,775,624に記載されている。幾
つかの発現の変法がサムブルック(J.Sambrook)、フリッ
ツ(E.F.Fritsch)、マニアティス(T.maniatis)のMolecul
ar Cloning : A Laboratory Manual 16.3-17.44 (1989)
に記載されている。サッカロミセス・セレビシエ(Sacc
haromyces cerevisiae)内での遺伝子発現は文献[1Cur
rent Protocolsin Molecular Biology:アウスベル(F.
M.Ausubel)、ブレント( R.Brent)、キングストン(
R.E.Kingston)、ムーア( D.D.Moore)、セイドマン
( J.D.Seidman)、スミス( J.A.Smith)、ストラール
( K.Struhl) 1989]に記載されている。本発明のDN
A配列は本発明のポリペプチド化合物および成熟bGR
Fをコードしている。成熟bGRFのアミノ酸配列は既
知であるがそれをコードするDNAは本発明以前は未知
であった。
えば、化合物はSV40誘導ベクターを用いて真核性細
胞で製造することができる。真核性細胞での発現はbG
RF前駆体cDNAによって達成される。そのような方
法は米国特許4,775,624に記載されている。幾
つかの発現の変法がサムブルック(J.Sambrook)、フリッ
ツ(E.F.Fritsch)、マニアティス(T.maniatis)のMolecul
ar Cloning : A Laboratory Manual 16.3-17.44 (1989)
に記載されている。サッカロミセス・セレビシエ(Sacc
haromyces cerevisiae)内での遺伝子発現は文献[1Cur
rent Protocolsin Molecular Biology:アウスベル(F.
M.Ausubel)、ブレント( R.Brent)、キングストン(
R.E.Kingston)、ムーア( D.D.Moore)、セイドマン
( J.D.Seidman)、スミス( J.A.Smith)、ストラール
( K.Struhl) 1989]に記載されている。本発明のDN
A配列は本発明のポリペプチド化合物および成熟bGR
Fをコードしている。成熟bGRFのアミノ酸配列は既
知であるがそれをコードするDNAは本発明以前は未知
であった。
【0012】本発明のポリペプチド化合物には、その薬
学上許容される非毒性の酸付加塩およびその薬学上許容
される非毒性のカルボン酸付加塩が包含される。「薬学
上許容される非毒性酸付加塩」という語句は、例えば、
塩酸、フッ化水素酸、硫酸、スルホン酸、酒石酸、フマ
ル酸、臭化水素酸、グリコール酸、クエン酸、マレイン
酸、りん酸、クエン酸、酢酸、硝酸、安息香酸、アスコ
ルビン酸、p−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン
酸、ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸等の有機およ
び無機酸付加塩の両方を包含する。好ましくは酸付加塩
は塩酸、酢酸、またはクエン酸から調製される。上記の
塩のいずれも常法に従って調製される。
学上許容される非毒性の酸付加塩およびその薬学上許容
される非毒性のカルボン酸付加塩が包含される。「薬学
上許容される非毒性酸付加塩」という語句は、例えば、
塩酸、フッ化水素酸、硫酸、スルホン酸、酒石酸、フマ
ル酸、臭化水素酸、グリコール酸、クエン酸、マレイン
酸、りん酸、クエン酸、酢酸、硝酸、安息香酸、アスコ
ルビン酸、p−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン
酸、ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸等の有機およ
び無機酸付加塩の両方を包含する。好ましくは酸付加塩
は塩酸、酢酸、またはクエン酸から調製される。上記の
塩のいずれも常法に従って調製される。
【0013】「カルボン酸付加塩」という語句は例え
ば、アミン、アンモニウム、4級アンモニウム、および
カルシウム、マグネシウム、ナトリウム、カリウム、リ
チウム等のアルカリ金属およびアルカリ土類金属塩を含
む。本発明はまた活性成分として、配列式4で示される
ポリペプチド化合物またはその薬学上許容される酸また
はカルボン酸付加塩と、固体または液体担体とを含有す
る医薬組成物を提供する。本発明はまた、配列式4で示
されるポリペプチド化合物またはその薬学上許容される
酸またはカルボン酸付加塩の有効量を投与することから
なる成長ホルモンの放出誘導法を提供する。本発明の前
駆体化合物の用量を成長ホルモンの放出刺激が要求され
る期間、受容体に投与する。受容体の体重および投与の
方式は、特定の応答を誘導するのに必要な用量の規模に
影響を及ぼすであろう。ウシの場合、好ましい用量は約
3mg/日と見積もられる。
ば、アミン、アンモニウム、4級アンモニウム、および
カルシウム、マグネシウム、ナトリウム、カリウム、リ
チウム等のアルカリ金属およびアルカリ土類金属塩を含
む。本発明はまた活性成分として、配列式4で示される
ポリペプチド化合物またはその薬学上許容される酸また
はカルボン酸付加塩と、固体または液体担体とを含有す
る医薬組成物を提供する。本発明はまた、配列式4で示
されるポリペプチド化合物またはその薬学上許容される
酸またはカルボン酸付加塩の有効量を投与することから
なる成長ホルモンの放出誘導法を提供する。本発明の前
駆体化合物の用量を成長ホルモンの放出刺激が要求され
る期間、受容体に投与する。受容体の体重および投与の
方式は、特定の応答を誘導するのに必要な用量の規模に
影響を及ぼすであろう。ウシの場合、好ましい用量は約
3mg/日と見積もられる。
【0014】本発明のポリペプチド化合物の非経口投与
では、注射に適した剤形は滅菌水溶液または分散剤、お
よび滅菌注射溶液または分散剤として再構築することが
できる滅菌粉剤である。担体は水、エタノール、ポリオ
ール(例えばグリセロール、プロピレングリコール、液
状ポリエチレングリコール等)、その適当な混合物、ま
たは植物油等の溶媒または分散媒である。適当な流動性
は、例えば、分散剤の場合、レシチン等によるコーティ
ングにより、必要な粒子径を維持することにより、また
は界面活性剤を用いることで保持し得る。微生物作用か
らの予防は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェ
ノール、ソルビン酸等の種々の抗細菌または抗真菌性物
質で保証される。多くの場合、糖類、塩化ナトリウム等
の等張化剤を加えることが望ましいであろう。注射用製
剤の長期的な吸収は、例えばモノステアリン酸アルミニ
ウムおよびゼラチンのような吸収遅延化剤を用いて行う
ことができる。
では、注射に適した剤形は滅菌水溶液または分散剤、お
よび滅菌注射溶液または分散剤として再構築することが
できる滅菌粉剤である。担体は水、エタノール、ポリオ
ール(例えばグリセロール、プロピレングリコール、液
状ポリエチレングリコール等)、その適当な混合物、ま
たは植物油等の溶媒または分散媒である。適当な流動性
は、例えば、分散剤の場合、レシチン等によるコーティ
ングにより、必要な粒子径を維持することにより、また
は界面活性剤を用いることで保持し得る。微生物作用か
らの予防は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェ
ノール、ソルビン酸等の種々の抗細菌または抗真菌性物
質で保証される。多くの場合、糖類、塩化ナトリウム等
の等張化剤を加えることが望ましいであろう。注射用製
剤の長期的な吸収は、例えばモノステアリン酸アルミニ
ウムおよびゼラチンのような吸収遅延化剤を用いて行う
ことができる。
【0015】滅菌注射溶液は本発明化合物を、必要量の
適当な溶媒に、所望により様々な他の物質と一緒に導入
することで調製される。所望により、より効率の良い分
布のために、化合物をポリマーマトリクス、リポソー
ム、ミクロスフェアー等の徐放性または標的化デリバリ
ー(到達)システムに組み込んでもよい。化合物は機械
的放出装置、浸透圧ポンプ、または連続的、またはパル
ス的なデリバリーを与える他の放出装置またはシステム
を介して到達させることができる。ペプチド化合物の医
薬投与技術はまだ初期段階なので、この技術分野では重
要な発展が予期される。本発明化合物はこれらの新らし
い方法に有用であろう。
適当な溶媒に、所望により様々な他の物質と一緒に導入
することで調製される。所望により、より効率の良い分
布のために、化合物をポリマーマトリクス、リポソー
ム、ミクロスフェアー等の徐放性または標的化デリバリ
ー(到達)システムに組み込んでもよい。化合物は機械
的放出装置、浸透圧ポンプ、または連続的、またはパル
ス的なデリバリーを与える他の放出装置またはシステム
を介して到達させることができる。ペプチド化合物の医
薬投与技術はまだ初期段階なので、この技術分野では重
要な発展が予期される。本発明化合物はこれらの新らし
い方法に有用であろう。
【0016】投与の容易さと用量の均一化のために本発
明化合物を一回投与剤形に製剤化することが好ましい。
本明細書中、一回投与剤形とは、処置すべき対象のため
の単一用量として物理的に独立した単位を意味する。各
単位は所望の治療効果を産生すると計算された、既定量
の化合物と薬学上許容される担体とを含有する。具体的
な単位用量は直接には(a)特定化合物の特有の性質お
よび(b)達成すべき特定の治療効果に基づいて決定さ
れる。以下に実施例を挙げ本発明を説明する。これらの
実施例は本発明の範囲を限定する意図ではない。
明化合物を一回投与剤形に製剤化することが好ましい。
本明細書中、一回投与剤形とは、処置すべき対象のため
の単一用量として物理的に独立した単位を意味する。各
単位は所望の治療効果を産生すると計算された、既定量
の化合物と薬学上許容される担体とを含有する。具体的
な単位用量は直接には(a)特定化合物の特有の性質お
よび(b)達成すべき特定の治療効果に基づいて決定さ
れる。以下に実施例を挙げ本発明を説明する。これらの
実施例は本発明の範囲を限定する意図ではない。
【0017】
【実施例】実施例1 bGRF前駆体の大腸菌内での発現 プラスミドpHS507はNRRLから、受託番号B−
18766(寄託日:1991年2月9日)の下でE.
coli株DH5α/pHS507として入手可能である。
bGRF前駆体は本明細書で引用する米国特許4,82
8,988の方法を用いて発現される。
18766(寄託日:1991年2月9日)の下でE.
coli株DH5α/pHS507として入手可能である。
bGRF前駆体は本明細書で引用する米国特許4,82
8,988の方法を用いて発現される。
【0018】実施例2 bGRF前駆体の精製 S SepharoseR(Pharmacia,800 Centennial Ave., Pis
cataway, NJ 08854)を用いて陽イオン交換カラムを調
製する。カラムは物質50gに対して樹脂1Lを含有す
る。流速0.1L/cm2/時でカラムにbGRF含有物
質を負荷し、2カラム容量の0.05N酢酸−7M尿素
中0.1M塩化ナトリウムで洗浄する。それぞれ3カラ
ム容量の酢酸−尿素中0.25−1.6M塩化ナトリウム
線状グラジエントを用いてポリペプチドを溶離し、0.
1カラム容量の画分を採取する。ポリペプチド含有画分
を電気伝導度、O.D.276、HPLC、ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動によって同定する。次いで画分を
プールする。等量の酢酸−尿素溶液を、プールした画分
に加える。次いで、指示通り、酢酸−尿素によって樹脂
1Lに対してタンパク質が50gとなるようにした物質
をSSepharoseR樹脂を含有するカラムに適用する。流
速は0.02L/cm2/時である。bGRF前駆体画分
を酢酸−尿素中0.25M塩化ナトリウム線状グラジエ
ントで溶離する。0.1カラム容量の画分を集める。画
分を前記と同様に分析し前駆体含有画分をプールする。
cataway, NJ 08854)を用いて陽イオン交換カラムを調
製する。カラムは物質50gに対して樹脂1Lを含有す
る。流速0.1L/cm2/時でカラムにbGRF含有物
質を負荷し、2カラム容量の0.05N酢酸−7M尿素
中0.1M塩化ナトリウムで洗浄する。それぞれ3カラ
ム容量の酢酸−尿素中0.25−1.6M塩化ナトリウム
線状グラジエントを用いてポリペプチドを溶離し、0.
1カラム容量の画分を採取する。ポリペプチド含有画分
を電気伝導度、O.D.276、HPLC、ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動によって同定する。次いで画分を
プールする。等量の酢酸−尿素溶液を、プールした画分
に加える。次いで、指示通り、酢酸−尿素によって樹脂
1Lに対してタンパク質が50gとなるようにした物質
をSSepharoseR樹脂を含有するカラムに適用する。流
速は0.02L/cm2/時である。bGRF前駆体画分
を酢酸−尿素中0.25M塩化ナトリウム線状グラジエ
ントで溶離する。0.1カラム容量の画分を集める。画
分を前記と同様に分析し前駆体含有画分をプールする。
【0019】先にプールした画分の5倍容量のカラム容
量で、0.02Mグリシン、pH2.5中でSephadexR
G−15(Pharmacia)カラムを調製する。O.D.27
6ピークを含有する画分を単離する。次いで、10%ア
セトニトリル−0.02Mグリシン、pH2.5中のSP
20SS樹脂(Sephabeads, Mitsubishi Chemical, To
kyo)含有カラムを調製する。プールしたbGRF前駆体
含有溶液をアセトニトリル中10%に調製し、流速1.
5−2カラム容量/時でカラムに適用する。カラムを2
カラム容量のアセトニトリル−グリシン緩衝液で洗浄す
る。3カラム容量の50%アセトニトリル−0.02M
グリシンと3カラム容量の10%アセトニトリル−0.
02Mグリシンとの混合によって形成されるグラジエン
トによって溶離する。0.1カラム容量の画分を採取し
bGRF前駆体に関して分析する。次いで、bGRF前
駆体含有物質を0.25M酢酸で平衡化したSephadexR
G−15カラムでクロマトグラフする。次いでO.D.
276ピークを単離し以後の使用まで凍結乾燥してお
く。
量で、0.02Mグリシン、pH2.5中でSephadexR
G−15(Pharmacia)カラムを調製する。O.D.27
6ピークを含有する画分を単離する。次いで、10%ア
セトニトリル−0.02Mグリシン、pH2.5中のSP
20SS樹脂(Sephabeads, Mitsubishi Chemical, To
kyo)含有カラムを調製する。プールしたbGRF前駆体
含有溶液をアセトニトリル中10%に調製し、流速1.
5−2カラム容量/時でカラムに適用する。カラムを2
カラム容量のアセトニトリル−グリシン緩衝液で洗浄す
る。3カラム容量の50%アセトニトリル−0.02M
グリシンと3カラム容量の10%アセトニトリル−0.
02Mグリシンとの混合によって形成されるグラジエン
トによって溶離する。0.1カラム容量の画分を採取し
bGRF前駆体に関して分析する。次いで、bGRF前
駆体含有物質を0.25M酢酸で平衡化したSephadexR
G−15カラムでクロマトグラフする。次いでO.D.
276ピークを単離し以後の使用まで凍結乾燥してお
く。
【図1】 プラスミドpHS507の制限部位および機
能地図である。
能地図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 C07K 13/00 8619−4H // C12P 21/02 C 8214−4B C07K 99:00 (72)発明者 ジン・チャン アメリカ合衆国60616イリノイ州シカゴ、 ウエスト・トゥエンティフォース・プレイ ス318番 (72)発明者 マーク・ルイス・ヘイマン アメリカ合衆国46250インディアナ州イン ディアナポリス、スーザン・ドライブ・イ ースト5740番 (72)発明者 ハンセン・マックスウェル・シウン アメリカ合衆国46032インディアナ州イン ディアナポリス、コール・ポーター・レイ ン4760番
Claims (6)
- 【請求項1】 式1: 【化1】 で示されるアミノ酸配列をコードする単離されたDNA
配列を含むDNA化合物。 - 【請求項2】 式2: 【化2】 で示される請求項1の単離されたDNA配列。
- 【請求項3】 式3: 【化3】 で示される単離されたDNA配列を含むDNA化合物。
- 【請求項4】 式1: 【化4】 で示されるポリペプチド化合物。
- 【請求項5】 式4: 【化5】 で示されるポリペプチド化合物。
- 【請求項6】 式1: 【化6】 で示されるポリペプチド化合物、またはその薬学的に許
容し得る酸またはカルボン酸付加塩と、薬学的に許容し
得る固体または液体担体とを含有する医薬組成物。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US68835491A | 1991-04-19 | 1991-04-19 | |
US688354 | 1991-04-19 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH05227969A true JPH05227969A (ja) | 1993-09-07 |
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ID=24764090
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Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP4094119A Withdrawn JPH05227969A (ja) | 1991-04-19 | 1992-04-14 | ウシ成長ホルモン放出因子前駆体および関連のdna化合物 |
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---|---|
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JP (1) | JPH05227969A (ja) |
KR (1) | KR920019933A (ja) |
CN (1) | CN1066193A (ja) |
AU (1) | AU660665B2 (ja) |
BR (1) | BR9201408A (ja) |
CA (1) | CA2066335A1 (ja) |
CS (1) | CS111292A3 (ja) |
FI (1) | FI921724A (ja) |
HU (1) | HUT64594A (ja) |
IE (1) | IE921248A1 (ja) |
IL (1) | IL101580A0 (ja) |
MX (1) | MX9201776A (ja) |
NO (1) | NO921489L (ja) |
NZ (1) | NZ242344A (ja) |
YU (1) | YU40492A (ja) |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2297375A1 (en) * | 1997-07-24 | 1999-02-04 | Valentis, Inc. | Ghrh expression system and methods of use |
CN107253991B (zh) * | 2017-05-25 | 2020-07-28 | 中山大学 | 一种基于时间分辨荧光免疫分析技术的斜带石斑鱼生长激素特异性定量检测试剂盒 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ZA844380B (en) * | 1983-07-05 | 1985-01-30 | Salk Inst For Biological Studi | Dna encoding a grf precursor |
EP0213472A1 (en) * | 1985-08-12 | 1987-03-11 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Method for producing fusion proteins |
ZA866026B (en) * | 1985-08-12 | 1988-04-27 | Syntex Inc | Bovine growth hormone releasing factor derivative |
FR2622455B1 (fr) * | 1987-11-04 | 1991-07-12 | Agronomique Inst Nat Rech | Application du facteur de stimulation de la secretion de l'hormone de croissance humaine, de ses fragments actifs et des analogues correspondants, pour augmenter la production laitiere et le poids des nouveau-nes chez les mammiferes |
NZ238233A (en) * | 1990-05-29 | 1992-12-23 | Lilly Co Eli | Dna coding for precursor forms of porcine growth hormone releasing factor (pghrf) and related polypeptides |
-
1992
- 1992-04-13 IL IL101580A patent/IL101580A0/xx unknown
- 1992-04-13 NZ NZ242344A patent/NZ242344A/en unknown
- 1992-04-13 CS CS921112A patent/CS111292A3/cs unknown
- 1992-04-13 ZA ZA922695A patent/ZA922695B/xx unknown
- 1992-04-14 JP JP4094119A patent/JPH05227969A/ja not_active Withdrawn
- 1992-04-14 NO NO92921489A patent/NO921489L/no unknown
- 1992-04-15 MX MX9201776A patent/MX9201776A/es unknown
- 1992-04-15 BR BR929201408A patent/BR9201408A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-04-16 FI FI921724A patent/FI921724A/fi not_active Application Discontinuation
- 1992-04-16 EP EP19920303465 patent/EP0509831A1/en not_active Withdrawn
- 1992-04-16 KR KR1019920006371A patent/KR920019933A/ko not_active Application Discontinuation
- 1992-04-16 CN CN92102684A patent/CN1066193A/zh active Pending
- 1992-04-16 CA CA002066335A patent/CA2066335A1/en not_active Abandoned
- 1992-04-16 AU AU14977/92A patent/AU660665B2/en not_active Ceased
- 1992-04-16 IE IE124892A patent/IE921248A1/en not_active Application Discontinuation
- 1992-04-17 HU HU9201321A patent/HUT64594A/hu unknown
- 1992-04-17 YU YU40492A patent/YU40492A/sh unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
YU40492A (sh) | 1994-06-10 |
CN1066193A (zh) | 1992-11-18 |
AU1497792A (en) | 1992-10-22 |
NO921489L (no) | 1992-10-20 |
FI921724A (fi) | 1992-10-20 |
HU9201321D0 (en) | 1992-07-28 |
AU660665B2 (en) | 1995-07-06 |
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HUT64594A (en) | 1994-01-28 |
ZA922695B (en) | 1993-10-13 |
MX9201776A (es) | 1992-10-01 |
KR920019933A (ko) | 1992-11-20 |
NZ242344A (en) | 1993-11-25 |
BR9201408A (pt) | 1992-12-01 |
IL101580A0 (en) | 1992-12-30 |
CA2066335A1 (en) | 1992-10-20 |
CS111292A3 (en) | 1992-11-18 |
IE921248A1 (en) | 1992-10-21 |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A300 | Application deemed to be withdrawn because no request for examination was validly filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 19990706 |