JPH04149191A - ステビオサイド糖転移化合物及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、新規なステビオサイド糖転移化合物及びその
製造方法に関する。

〔従来の技術〕

ステビアは、南米パラグアイ産のキク科に属する多年生
草木でその集中にはステビオサイドを主とする高甘味成
分を含有し、近年天然のダイエツト甘味料として需要が
増大している。

ステビア甘味料は、砂糖の１００〜３００倍の甘味りを
有し、熱にも安定で食品加工に適する特徴をイしながら
、ステビア甘味料中量も含有量の高い；テビオサイドは
甘味以外の雑味や甘味の発現力１糖と比較して遅くかつ
甘味に持続性があるなどイの甘味質に問題点があった。

このようなステビオサイドの甘味質を改善すイ方法とし
て、従来ステビオサイドにα−グルフシル糖化合物を転
移することが提案され（特開昭５〜５０７０号、特開昭
６１−２８３６３号）、実用化されてぃＺがいまだに満
足出来るほどの甘味質に改善されていないのが現状であ
る。

〔発明が解決しようとする課題〕

このように、甘味質の改善されたステビア甘味料は今だ
存在せず、当該甘味質の改善が食品業界での大きな課題
となっていた。

そこで本発明者らは、甘味質の改善されたステビア甘味
料を開発することか重要かつ急務の課題であるとの認識
を持つに至り研究に着手した。

すなわち、本発明は、新規なステビオサイド糖転移化合
物及びその製造方法を提供することを目的とするもので
ある。

〔課題を解決するための手段］ ステビア甘味料のこのような技術的背景を踏まえ、本発
明者らは安全で、甘味質の優れたステビア甘味料を開発
することを目標として鋭意研究を積み重ねた結果、新規
なステビオサイド糖転移物質を製造することに成功し、
本発明を完成するに至った。

即ち、本発明のステビオサイド糖転移化合物は、次式（
■）： （式中、Ｒ＋、　Ｒｘ、Ｒｓ及びＲ４のうち、一つはα
−Ｄ−グルコピラノシル基（以下「α−ＧＩＣＪ　とい
う）を表し、残りは水素原子を表す。）で示されるもの
である。

本発明の化合物としては、以下の４種の化合物が挙げら
れる。

ｌｍ＝ １３−０−（β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−
β−Ｄ−グルコピラノシル）−１９−０−（α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル〕−ステビオール（Ｒ４＝α−Ｇｌｃ、　Ｒ＋−Ｒｔ
＝Ｒｓ＝）り （本頁以下余白） ｈ ２ｍ　： １３−０−（α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−
β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−グル
コピラノシル）−１９−０−（β−Ｄ−グルコピラノシ
ル〕−ステビオール（Ｒｘ＝ａ−Ｇｌｃ、　ＲＲ３・Ｒ
，＝Ｈ） （本頁以下余白） １３−０−（α−Ｄ−グルコピラノシル−（１−３）−
β−Ｄ−グルコピラノシル−（１−＋２）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシル）　−１９−０−Ｃβ−Ｄ−グルコピラ
ノシルクーステビオール（Ｒ１＝α−ＧＩＣ，Ｒ２＝Ｌ
＝Ｌ＝Ｈ） Ｕｔ−＋ ４ＮＬｂ： １３−０−（α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）−
〔α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）〕−β−Ｄ−
グルコピラノシル）　−１９−０−（β−Ｄ−グルコビ
ラノシル〕−ステビオール（Ｒ３＝α−Ｇｌｃ。

Ｒ，＝Ｒ２＝Ｒ，＝Ｈ） 本発明の化合物のうち、１ｍ、２ｍ及び３ｏ＋は、例え
ば、ステビオサイドとマルトースとをβ〜アミラーゼ製
剤の存在下に反応させることにより製造することができ
る。

また、本発明の化合物のうち、４　ＮＬｂは、例えば、
ステビオサイドとマルトースとをα−グルコシダーゼ製
剤の存在下に反応させることにより製造することができ
る。

前記反応はともに、バッチ式あるいは固定化酵素を用い
る連続式のいずれでもよい。また反応時間は、長すぎる
と目的物質以外の副産物ができて甘味質が恩くなるため
３２時間以内が適当である。

ｐＨは酵素反応が進行しうる範囲であればいずれでもよ
く、好ましくは３．０〜８．０である。

〔実施例〕

以下に、実施例を記載して、本発明を具体的に説明する
。

実施例Ｉ Ｊ）ステビオサイドに対する糖転移反応ステビア葉から
抽出したステビオサイド１．Ｏｇとマルトース１．０ｇ
に５０ｍＭ０ｍＭ酢酸パフ　（ｐＨ＝　５．４５）５０
ｉ及びビイオザイム（ｂｉｏｚｙｍｅ）　Ｌ　（大野製
薬製）２０００単位を加えて、５０°Ｃで２４時間イン
キュベートして反応を行った。１０分煮沸して酵素を失
活させた。

２）糖転移生成物の分離 １）で得られた反応混合物を濾過した後、多孔性樹脂カ
ラムクロマト’ｙ”　ラフ　イー　（ＤＩＡＩＯＮ　Ｈ
Ｐ−２０）に付し、水、メタノールで順次溶出させた。

メタノール画分を高速液体クロマトグラフィー（以下ｒ
ＨＰＬＣＪ　という）（カラム：　０ＤＳ−１２０Ｔ　
（２１，５ｍｍｘ３０ａｎ、　Ｔｏｓｏｈ）　；移動相
二メタノールー水（５５：　４５）；流速：６．Ｏｉ／
分；カラム温度：６０°Ｃ；検出：指差屈折計）に付し
、本発明の化合物１ｍ２０■、２ｍ１１■及び３ｍ２３
■を得た。ＨＰＬＣ分析図を第１図に示す。

３）分析結果 各種物理化学的分析の結果を第１表に示す。

（本頁以下余白） 第 表 ［α１乙’（ｃ、　　メタノール） １、ｍ ＋９０．５°　（１，ＩＩＸ）） ＨＲ−Ｆ油枢（ｎｅｇａｔ　１ｖｅ） ０田、　ａ　　　　　　　　９６５．４２３７ｃａｌｃ
ｄ　ｆｏｒ　Ｃｔ４ＨｕＯ２ｓ）アルカリカｍｍ￥　　
　　　　　　　　ステビオールＥオンド（５％　ＫＯＨ
ａｔ　　８０°α　ｌｈｒ）Ｅｌ−ＭＳ　（ａｃｅｔａ
ｔｅ） ３３１．６１９ 了ツマ−）＋（ＣＩＤ６Ｎ）；δ （各山Ｊ七） ５、９９　（７，９） ５、２６　（７，５） ５、１２　（７，７） ５、羽（３，７） 了ツマ−Ｃ（ＣＪｓＮ）；δ ９５．５ ９７．９ １０６、７ １００．４ Ｃａｔｔａｃｈｅｄ　（２−ＧＩＣ ｏ、８ （Ｃ”°−６） メチル化分Ｖゝ ｔｅｒｍｉｎａｌ　Ｇｌｃ ２−１ｉｎｋｅｄ　Ｇｌｃ ６−１ｉｎｋｅｄ　Ｇｌｃ ｍ ＋８ａ５°　（０，７５’） ■６．４２１６ ２ｍａ” ３３１、６１α９０７ ６．０７　（７，７） ５、　Ｚ２　（７，３） ５、　（Ｘ）　（７，７） ５、４８　（３，７） ５．８ ９７．４ １０６、５ １００、４ ＠６ （σ−６） ｔｅｒＴＩｌｉｒｋｌｌ　Ｇｌｃ ２−１ｉｎｋｅｄ　Ｇｌｃ ６−１ｉｎｋｅｄ　Ｇｌｃ ｍ ＋７９．８°　（０，８８） 匠、４１９３ ３ｍａ” ３３１．６１９．匍７ ６．０９（７，７） ５、２０　（７，７） ５、０９　（７，５） ５．９１　（３，０） ％、８ ９７．９ １０Ｇ、　５ １０１、８ ５．７ （Ｃ”−３） ｔｅｒｍｉｎａｌ　Ｇｌｃ ２−１ｉｎｋｅｄ　Ｇｌｃ ３−１ｉｎｋｅｄ　Ｇｌｃ 性状 白色粉末 白色粉末 白色粉末 ａ）：次式（■）： ｂ）； Ｃ）； において、Ｒ３が水素原子、Ｒ２がα−Ｇｌｃである化
合物。

前記式（ＩＩ）において、Ｒ１がα−ＧＩＣ，Ｒ２が水
素原子である化合物。

ＧＣ−ＭＳ条件 装置：　ＪＥＯＬ　ＪＭＳ−ＳＸ　１０１カラム　：　
ｆｕｓｅｄ　５ｉｌｉｃａ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｃｏ
ｌｕｍｎ（０，２２ｍｍ　Ｘ　２５ｍ） 液　相　：　ＣＰ−３ｉｌ　４３ＣＢ　（ＯＶ−１に類
似）キャリヤーガス　：　　Ｈｅ　　（３，Ｏｍｊ’／
分）注入温度＝３００℃ カラム温度　　：　　１８５−２００　　（２，０℃／
分）イオン化電圧　　：　　７０ｅＶ なお、第１４．１５．１６図にＧＣ−ＭＳのチャートを
示す。

本発明の化合物１ａ＋、２ｍ及び３１１Ｉの質量スペク
トルを、それぞれ第２図、第３図及び第４図に示す。

本発明の化合物１ｍ、２ｍ及び３ｍの’　ｆ（−ＮＭＲ
スペクトルを、それぞれ第５図、第６図及び第７図に示
す。本発明の化合物１ｍ、２ｍ及び３［［ｌの”　Ｃ−
ＮＭＲスペクトルを、それぞれ第８図、第９図及び第１
０図に示す。

実施例２ １）ステビオサイドに対する糖転移反応ステビア葉から
抽出したステビオサイド１仰とマルトース２０．０ｇに
５０ｍＭ酢酸バッフｙ　　（ｐ）ｔ＝５．４５）１０〇
−及びトランスグルコシダーゼ＋Ｌ（大野製薬製）　２
０００単位を加えて、５０°Ｃで６時間インキユベート
シて反応を行った。１０分煮沸して酵素を失活させた。

２）糖転移生成物の分離 １）で得られた反応混合物を濾過した後、多孔性樹脂カ
ラムクロマトグラフィー（ＤＩＡＩＯＮ　ＨＰ−２０）
に付し、水、メタノールで順次溶出させた。メタノール
画分をＨＰＬＣ（カラム：　０ＤＳ−１２０Ｔ（２１，
５ｍｍＸ　３０ａｎ、　Ｔｏｓｏｈ）　；移動相：メタ
ノール−水（５５：　４５）；流速：６．Ｏｍｊ／分；
カラム温度＝６０°Ｃ；検出：Ｒ１（指差屈折計））に
付し、混合物４ＮＬ２６２■を得た。ＨＰＬＣ分析図を
第１１図に示す。

３）分析結果 ４ＮＬを５％水酸化カリウム水溶液８０°Ｃ１時間加水
分解を行なうとステビオールビオサイド（４ＮＬＰＩ）
と未知物質４　ＮＬ−Ｐ２か得られた。４　ＮＬ−Ｐ２
については各種物理化学的分析結果（第２表）より次式
の様に構造決定した。

第２表 性状、白色粉末 １α〕乙’　（ｃ＝０．４５．　　メタノール）＋１１
．０°ＣＥｌ−ＭＳ　（ａｃｅｔａｔｅ） 了ツマ−Ｈ（Ｃ，ＤＩＮ）；δ （ｅａｃｈ　ｄ、　　Ｊ　Ｈ２） ３３１　［（Ｇｌｃ）Ａｃ４ド、　９０７［（Ｇｌｃ）
ｓＡｃ＋。ド５．１９（８，０）、　５．１１（７，，
５）、　５．５０（３，９）γツマーＣ（Ｃ，Ｄ、Ｎ）
；δ　　　　９８．１．　１０５，５．　１００．１Ｃ
ａｔｔａｃｈｅｄ　α−Ｇｌｃ　　８４，６メチル化分
析”　　　ｔｅｒｍｉｎａｌ　Ｇｌｃ　　２．６−１ｉ
ｎｋｅｄ　Ｇｌｃａ、）　　ＧＣ−ＭＳ条件 装置：　ＪＥＯＬ　ＪＭＳ−ＳＸ　１０１カラム　：　
ｆｕｓｅｄ　５ｉｌｉｃａ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｃｏ
ｌｕｍｎ（０，２２ｍｍ　ｘ　２５ｍ） 液　相　：　ＣＰ−３ｉｔ　４３ＣＢ　（ＯＶ−１に類
似）キャリヤーガス　：　　Ｈｅ　　（３，Ｏｍｔ’／
分）注入温度：３００°Ｃ カラム温度　　：　　１８５−２００　　（２，Ｏ’Ｃ
／分）イオン化電圧：　　７０ｅＶ なお、第１８図にＧＣ−ＭＳのチャートを示す次式４　
ＮＬ−Ｐ２ （本頁以下余白） ｌ１ ４ＮＬの各種物理化学的分析結果を第３表に示す。

’Ｈ−ＮＭＲ，”Ｃ−ＮＭＲおよびアルカリ分解でステ
ビオールビオサイドが生成する事、メチル化分析で２位
結合グルコース、６位結合グルコースが検出される事よ
り、４ＮＬの１成分（４ＮＬａ）は１ｍと同定された。

４ＮＬの他成分４　ＮＬｂについては、アルカリ分解で
４　ＮＬ−Ｐ２か生成する事、メチル分析で２゜６位結
合グルコースか生成する事、４ＮＬの’　ｌ（−ＮＭＲ
。

１２Ｃ−ＮＭＲで１ｍに帰属しないピークより次式の様
に構造決定した。

第３表 ４ＮＬ分析結果 アルカリ分解＋　４ＮＬ−ＰＩ　＋　４ＮＬ−Ｐ２（５
％ＫＯＨ水溶液８０°Ｃ１１時間）メチル化分析１ ｔｅｒｍｉｎａｌ　　Ｇｌｃ、　　２−１ｉｎｌｅｄ　
　Ｇｌｃ。

２．６−１ｉｎｋｅｄ　　Ｇｌｃ ６−１ｉｎｋｅｄ　Ｇｌｃ。

了ツマ−Ｈ（ＣｓＤｉＮ）；δ１ （ｅａｃｈ　ｄ、　　Ｊ　Ｈｚ） 　ＮＬａ ５．９９　（７，９）。

５．２６　（７，５）。

５、１２　（７，７）。

５．３３　（３，７）。

　ＮＬｂ ６、０５（８，Ｏ） ５、１９（７，７） ５、１０（７，７） ５、５０（３，９） 了ツマ−Ｃ（Ｃ６Ｄ６Ｎ）；δ ９５．５　　　　　９６．２ ９７．９　　　　　９８．１ １０６．７　　　　　１０５．５ １００．４　　　　　１００．０ Ｃａｔｔａｃｈｅｄ （２−ＧＩＣ６７，８ （Ｃ”　−〇） ８４．６ （Ｃ’−１） ａ） ＧＣ−ＭＳ条件 装置：　ＪＥＯＬ　ＪＭＳ−３Ｘ　１０１カラム　：　
ｆｕｓｅｄ　５ｉｌｉｃａ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｃｏ
ｌｕｍｎ（０，２２ｍｍ　ｘ　２５ｍ） 液　相　：　ＣＰ−３ｉｌ　４３ＣＢ　（ＯＶ−１ｆ：
類似）キャリヤーガス　：　Ｈｅ　　（３，０ｉ／分）
注入温度：３００°Ｃ カラム温度　　：　　１８５−２００　　（２，０°Ｃ
／分）イオン化電圧：　　７０ｅＶ なお、第１７図（ａ）、第１７図（ｂ）にＧＣ−ＭＳの
チャートを示す。

ｂ）第１２図より４　ＮＬａ（１ｍ）と４　ＮＬｂに帰
属した。

Ｃ）第１３図より４　ＮＬａ（１ｍ）と４　ＮＬｂに帰
属した。

４　ＮＬｂ構造 〔発明の効果〕 本発明によれば、１ｍは優れた甘味かし、２ｍと４　Ｎ
Ｌｂは甘味がし、３ｍは苦味がするという甘味料、苦味
料として有用な新規ステビオサイド糖転移化合物を提供
することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第１１図は、ＨＰＬＣ分析図である。第２図
ないし第４図は、本発明の化合物の質量スペクトルを示
す図である。第５図ないし第７図及び１２図は、本発明
の化合物の’　Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。 第８図ないし第１０図及び第１３図は、本発明の化合物
の”Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。第１４図な
いし第１８図は本発明及び４　ＮＬ−Ｐ２のメチル化分
析のＧＣ−ＭＳの図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２、Ｒ＿３及びＲ＿４のうち、一
   つはα−Ｄ−グルコピラノシル基を表し、残りは水素原
   子を表す。） で示されるステビオサイド糖転移化合物。 ２、ステビオサイドとマルトースとをβ−アミラーゼ製
   剤の存在下に反応させることを特徴とする、請求項１の
   式（ I ）において、Ｒ＿１、Ｒ＿２及びＲ＿４のうち
   、一つがα−Ｄ−グルコピラノシル基を表し、残りが水
   素原子を表し、Ｒ＿３が水素原子を表すステビオサイド
   糖転移化合物の製造方法。 ３、ステビオサイドとマルトースとをα−グルコシダー
   ゼ製剤の存在下に反応させることを特徴とする、請求項
   １の式（ I ）において、Ｒ＿１、Ｒ＿２及びＲ＿４が
   水素原子を表し、Ｒ＿３がα−Ｄ−グルコピラノシル基
   を表すステビオサイド糖転移化合物の製造方法。