JPH027635B2 - - Google Patents

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JPH027635B2
JPH027635B2 JP56190071A JP19007181A JPH027635B2 JP H027635 B2 JPH027635 B2 JP H027635B2 JP 56190071 A JP56190071 A JP 56190071A JP 19007181 A JP19007181 A JP 19007181A JP H027635 B2 JPH027635 B2 JP H027635B2
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JP
Japan
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tryptophan
resistant
azaserine
producing
culture
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JP56190071A
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English (en)
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JPS5894391A (ja
Inventor
Osamu Kurahashi
Masahiro Kamata
Hitoshi Ei
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Ajinomoto Co Inc
Original Assignee
Ajinomoto Co Inc
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Publication date
Application filed by Ajinomoto Co Inc filed Critical Ajinomoto Co Inc
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Priority to DE8282110586T priority patent/DE3273233D1/de
Priority to EP82110586A priority patent/EP0081107B1/en
Priority to US06/444,172 priority patent/US4560652A/en
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Publication of JPH027635B2 publication Critical patent/JPH027635B2/ja
Granted legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
    • C12P13/227—Tryptophan
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/832—Bacillus
    • Y10S435/839—Bacillus subtilis

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  • Organic Chemistry (AREA)
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  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法によるＬ−トリプトフアン
（以下、トリプトフアンと記す）の製造法に関す
る。 従来トリプトフアンの製造法としては、トリプ
トフアンの前駆物質であるアントラニル酸、イン
ドール或いは３−インドールピルビン酸よりトリ
プトフアンを製造する方法が知られている。 これら前駆物質を使用する方法に対し、前駆物
質を使用しないで、糖類等を炭素源とし、バチル
ス属に属しトリプトフアンアナログに耐性を有す
る変異株を使用して直接発酵法によりトリプトフ
アンを生産する方法（特公昭53−39517）が開発
されている。 そこで、本発明者らはバチルス属の微生物を用
いて更に糖類等の炭素源からトリプトフアンを直
接発酵法により安価に製造する方法を開発すべく
研究を行なつた結果、バチルス属の上記のような
トリプトフアンアナログ耐性の他に更にアゼセリ
ン（Ｏ−ジアゾアセチル−Ｌ−セリン）に耐性を
有する微生物の中に、従来知られているものより
更に大量のトリプトフアンを生産する能力を有す
る菌株があることを見い出した。この発明はこの
知見に基づいて更に研究の結果完成されたもので
ある。 本発明の方法で使用される変異株は、バチルス
属に属しトリプトフアンアナログ及びアゼセリン
に耐性を有し、かつトリプトフアンを生産する能
力を有する微生物であり、例えば、次のような変
異株が使用される。 バチルス・ズブチリス AJ11709 FERM−
P6225（５−Ｆ−Trpr、ASr） バチルス・ズブチリス AJ11710 FERM−
P6226（５−Ｆ−Trpr、Leu-、ASr） バチルス・ズブチリス AJ11716 FERM−
P6227（５−Ｆ−Trpr、IMr、ASr） ５−Ｆ−Trpr：５−フルオロトリプトフアン耐
性 ASr：アザセリン耐性 Leu-：Ｌ−ロイシン要求性 IMr：インドールマイシン耐性 これら本発明で使用される変異株は、バチルス
属のトリプトフアンアナログ耐性、トリプトフア
ン生産菌を親株とし、これに通常の変異誘導操
作、例えば、紫外線照射あるいはＮ−メチル−
N′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（以下、
NGと略す。）、亜硝酸等の化学薬剤処理を施し、
変異処理した菌株を親株が生育できないような量
のアゼセリンを含有する平板寒天培地で培養し、
該平板培地上に生育するコロニーを分離すること
によつて得られる。 上記の親株としてはトリプトフアンアナログ耐
性の他にトリプトフアン生産に有用な性質を有す
るトリプトフアン生産菌、例えば、Ｌ−アルギニ
ン、Ｌ−リジン、Ｌ−ロイシンもしくはＬ−フエ
ニルアラニン要求性のトリプトフアン生産菌（特
公昭53−39517号公報）、再にはトリプトフアンア
ナログ耐性でかつインドールマイシン耐性のトリ
プトフアン生産菌（特開昭56−92796号公報）等
が使用される。具体例としては次のようなトリプ
トフアンアナログ耐性のトリプトフアン生産菌が
使用される。 バチルス・ズブチリス FT−145 FERM−
P1783（５−Ｆ−Trpr） バチルス・ズブチリス FFL−５ FERM−
P1786（５−Ｆ−Trpr＋Leu-） バチルス・ズブチリス AJ11483 FERM−
P5286（５−Ｆ−Trpr＋IM） その他、本発明の変異株はバチルス属の野性株
を親株とし、これにアゼセリン耐性を付与した後
トリプトフアンアナログ耐性を付与することによ
つても誘導することができる。この場合にも再に
トリプトフアン生産に有用な性質、例えば、Ｌ−
フエニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−ロイシ
ン、Ｌ−ヒスチジン等のアミノ酸に対する栄養要
求性、あるいはフエニルアラニンアナログ耐性等
を付与することが望ましい。 以下の実験例にて、本発明のアザセリン耐性ト
リプトフアン生産菌のアザセリンに対する耐性度
を示す。 実験例 第１表に示す組成の最少培地及び最少培地に
100μｇ／mlのアザセリンを添加した寒天培地を
調製し、加熱滅菌した後直径8.5cmのフレートに
移してプレート寒天培地を作つた。 上記アザセリン含有のプレートに最少寒天プレ
ート上に生育したバチルス・ズブチリス
AJ11709、AJ11710及びAJ11716を夫々各プレー
ト当り106個宛接種し、30℃で48時間プレート培
養を行い、プレート上に生育したコロニー数を測
定した。その結果を第２表に示す。
【表】
【表】 尚、本発明でいうアザセリン耐性とは、106個
の変異株をアザセリンを100μｇ／ml含む最少培
地で上記培養条件下で培養した場合に500個以上
のコロニーを生成するものをいう。 本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機
塩類、その他必要に応じてアミノ酸、ビタミン等
の有機微量栄養素を含有する通常の栄養培地が使
用される。炭素源としてはグルコース、シユーク
ロース、マルトース、澱粉水解物、糖蜜等が使用
され、その他エタノール、酢酸、クエン酸等も単
独あるいは上記他の炭素源と併用して用いられ
る。窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アン
モニウム、リン酸アンモニウム等のアンモニウム
塩、硝酸塩、尿素、ペプトン等有機あるいは無機
の窒素源が使用される。有機微量栄養素としては
アミノ酸、ビタミン、脂肪酸、核酸、再に、これ
らのものを含有するペプトン、カザミノ酸、酵母
エキス、大豆蛋白分解物等が使用され、生育にア
ミノ酸等を要求する栄養要求性変異株を使用する
場合には要求される栄養素を補添することが必要
である。無機塩類としてはリン酸塩、マグネシウ
ム塩、カルシウム塩、鉄塩、マンガン塩等が使用
される。 培養は通常の培養条件下で行えば良く、PHを５
ないし９、温度を20ないし40℃に制御しつつ１〜
４日間振盪培養又は通気撹拌培養することにより
培養液中に著量のトリプトフアンが蓄積される。
培養中にPHが下がる場合には、炭酸カルシウムを
別殺菌して加えるか又はアンモニア水、アンモニ
アガス等のアルカリで中和する。又、有機酸を炭
素源とする場合はPHの上昇を鉱酸又は有機酸で中
和する。 培養液からトリプトフアンを採取する方法は、
公知のトリプトフアン回収方法に従つて行えば良
く、培養液から菌体を除去した後濃縮晶析する方
法、あるいはイオン交換クロマトグラフイー等に
よつて採取される。 以下、実施例にて説明する。 実施例 １ 下記第３表に示した組成のトリプトフアン生産
用培地20mlを500ml容のフラスコに分注し、それ
に第３表に示す微生物をそれぞれ1/3スラント量
植えつけ30℃で96時間振盪培養した。それぞれの
培養液中のトリプトフアン生成量は第４表の如く
であつた。
【表】
【表】

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. １ バチルス属に属し、トリプトフアンアナログ
    及びアザセリンに耐性を有し、かつＬ−トリプト
    フアン生産能を有する微生物を液体培地中に好気
    的に培養し、培養液中にＬ−トリプトフアンを生
    成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする
    Ｌ−トリプトフアンの製造法。
JP56190071A 1981-11-27 1981-11-27 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法 Granted JPS5894391A (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP56190071A JPS5894391A (ja) 1981-11-27 1981-11-27 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法
DE8282110586T DE3273233D1 (en) 1981-11-27 1982-11-16 Process for producing l-tryptophan by fermentation
EP82110586A EP0081107B1 (en) 1981-11-27 1982-11-16 Process for producing l-tryptophan by fermentation
US06/444,172 US4560652A (en) 1981-11-27 1982-11-24 Process for producing L-tryptophan by fermentation

Applications Claiming Priority (1)

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JP56190071A JPS5894391A (ja) 1981-11-27 1981-11-27 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法

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Publication Number Publication Date
JPS5894391A JPS5894391A (ja) 1983-06-04
JPH027635B2 true JPH027635B2 (ja) 1990-02-20

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US (1) US4560652A (ja)
EP (1) EP0081107B1 (ja)
JP (1) JPS5894391A (ja)
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Also Published As

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JPS5894391A (ja) 1983-06-04
DE3273233D1 (en) 1986-10-16
EP0081107A2 (en) 1983-06-15
EP0081107B1 (en) 1986-09-10
EP0081107A3 (en) 1984-02-01
US4560652A (en) 1985-12-24

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