JP2578463B2 - 発酵法によるl−リジンの製造法 - Google Patents

発酵法によるl−リジンの製造法

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Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は発酵法によるL−リジンの製造法に関する。
L−リジンは飼料,医薬品,食品など広い分野で種々
の用途を有する。
従来の技術 従来、コリネ型グルタミン酸生産菌の各種栄養要求性
株や、各種薬剤耐性株,各種薬剤感受性株などによるL
−リジンの製造法が知られている。また抗生物質耐性株
を用いる方法(U.S.P 3687810)や、バチルス属細菌の
生産する抗菌性物質に耐性を有する菌株を用いる方法
(特開昭59−169497)も知られている。
しかしながら、イツリン類縁物質に対して耐性を有す
る菌株についての報告はない。また、特開昭59−16949
7)に記載されたバチルス属細菌の生産する抗菌性物質
に耐性を有する菌株を用いる方法において、その目的と
するところはバチルス属細菌の混入によるリジン生産菌
の生育阻害の防止であり、リジン生産菌のリジン生産能
向上を目的とするものではない。
発明が解決しようとする課題 飼料,医薬品,食品またはその原料など広い分野で種
々の用途を有するL−リジンを工業的に安価に製造する
方法の開発が望まれている。
課題を解決するための手段 本発明者は、L−リジンを工業的に安価に製造するた
めに、発酵法によるL−リジンの製造法について鋭意検
討を行った。その結果、L−リジン生産菌の生産能が、
イツリン類縁物質に対する耐性を付与することにより向
上することを見出し本発明を完成した。
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明は、コリネ型グルタミン酸生産菌に属し、イツ
リン類縁物質に耐性を有し、かつL−リジン生産能を有
する微生物を培地に培養し、培養物中にL−リジンを生
成蓄積させ、該培養物よりL−リジンを採取することを
特徴とする発酵法によるL−リジンの製造法を提供す
る。
本発明でいうイツリン類縁物質とは、バチルス属細菌
の生産する抗生物質であり、イツリン−A,イツリン−C,
マイコスチリン,バシロマイシン−Lなどが例示される
〔バイオキミカ・エ・バイオフィジカ・アクタ(Biochi
m.Biophys.Acta)684,207〜211(1982)〕。
本発明の変異株の親株としては、コリネバクテリウム
属またはブレビバクテリウム属などのコリネ型グルタミ
ン酸生産菌に属し、リジン生産能を有する菌株ならいず
れでもよい。具体的にはコリネバクテリウム・グルタミ
クムH−3149(微工研条寄第158号)およびコリネバク
テリウム・グルタミクムH−4412(微工研条寄第1069
号)などが挙げられる。
本発明における変異株の誘導は、例えば上記親株をN
−メチル−N′−ニトロ−N−ニトロソグアニジン250
μg/mlで30℃、30分処理し、親株が生育阻害を示す濃度
のイツリン類縁物質を含む最少培地寒天平板上に生育す
る変異株を取得することにより行うことができる。この
ようにして取得したイツリン類縁物質に対する耐性変異
株を培養し、L−リジン生産能を調べることによりL−
リジン生産能が向上した変異株を分離することができ
る。
以下に親株および親株より誘導したイツリン類縁物質
(イツリンAおよびイツリンCの1:1混合物)耐性変異
株の例を示す。
親 株 コリネバクテリウム・グルタミクムH−3149
(FERM BP−158) チアリジン耐性,リファンピシン耐性,ストレプトマイ
シン耐性,6−アザウラシル耐性 耐性株 コリネバクテリウム・グルタミクムH−4933 チアリジン耐性,リファンピシン耐性,ストレプトマイ
シン耐性,6−アザウラシル耐性,イツリン類縁物質耐性 親 株 コリネバクテリウム・グルタミクムH−4412
(FERM BP−1069) チアリジン耐性,リファンピシン耐性,ストレプトマイ
シン耐性,6−アザウラシル耐性,β−ナフトキノリン耐
性 耐性株 コリネバクテリウム・グルタミクムH−4934 チアリジン耐性,リファンピシン耐性,ストレプトマイ
シン耐性,6−アザウラシル耐性,β−ナフトキノリン耐
性,イツリン類縁物質耐性 得られたイツリン類縁物質耐性変異株であるコリネバク
テリウム・グルタミクムH−4934株は、昭和63年1月14
日付で工業技術院微生物工業技術研究所(微工研)にFE
RM BP−1655として寄託されている。
上記各菌株をイツリン(イツリンAおよびイツリンC
の1:1混合物)200μg/mlを含む最少寒天平板〔グルコ−
ス10g/l,塩化アンモニウム1g/l,尿素2g/l,KH2PO41g/l,K
2HPO43g/l,MgCl2・2H2O0.4g/l,FeSO4・7H2O10mg/l,MnS
O4・4H2O10mg/l,ZnSO4・7H2O1mg/l,CuSO4・5H2O1mg/
l,(NH46Mo7O24・4H2O1mg/l,ビオチン50μg/l,寒天2
0g/l,pH7.2〕上で24時間培養したときの生育度を第1表
に示す。
本発明の方法において用いられる菌の培養に際して
は、一般にアミノ酸の発酵生産に用いられる培地が使用
される。すなわち菌が資化しうる炭素源,窒素源,無機
塩類,成育因子などを含有する合成培地または天然培地
が適宜用いられる。
炭素源としては、グルコース,フラクトース,シュク
ロース,糖蜜,澱粉加水分解物などの糖類の他,酢酸,
フマール酸,クエン酸などの各種有機酸,エタノール,
グリセロール,マンノースなどのアルコール類などが使
用できる。
窒素源としては、アンモニア,塩化アンモニウム,硫
酸アンモニウム,酢酸アンモニウム,燐酸アンモニウム
などの各種無機塩類や有機酸のアンモニウム塩,アミン
類,その他含窒素化合物ならびにペプトン,肉エキス,
コーン・スティープ・リカー,カゼイン加水分解物,大
豆粕加水分解物,各種発酵菌体およびその消化物などが
用いられる。
無機物としては、燐酸第一カリウム,燐酸第二カリウ
ム,燐酸マグネシウム,硫酸マグネシウム,塩化ナトリ
ウム,硫酸第一鉄,硫酸マンガン,硫酸銅,炭酸カルシ
ウムなどが用いられる。
その他、ビオチン,チアミン,ニコチン酸,β−アラ
ニン,パントテン酸などのビタミン類や、ロイシン,バ
リン,アスパラギン酸,グルタミン酸などのアミノ酸
類,ストレプトマイシンなどの各種抗生物質を添加する
場合がある。
培養は振盪培養または深部通気撹拌培養などの好気的
条件下で行う。培養温度は20〜40℃、好ましくは25〜38
℃の範囲である。培地のpHは5〜9の範囲で、好ましく
は中性付近に保持する。培地のpH調整は炭酸カルシウ
ム,無機または有機の酸,アルカリ溶液,アンモニア,p
H緩衝液などによって行う。
培養期間は通常1〜7日間で、培養液中にL−リジン
が生成蓄積する。
培養終了後、培養液から菌体などの沈澱物を除去し、
イオン交換処理法,濃縮法,塩析法,等電点沈澱法など
を併用することにより、培養液からL−リジンを回収す
ることができる。
以下に本発明の実施例を示す。
実施例1 コリネバクテリウム・グルタミクムH−3149,H−441
2,H−4933,H−4934を下記の種培地20ml(300ml容三角フ
ラスコ)に植菌し、30℃にて24時間振盪培養(220rpm)
した。この種培養液2mlを下記の生産培地20ml(300ml容
三角フラスコ)に植菌し、30℃にて72時間振盪培養(22
0rpm)した。培養終了後、L−リジンの生成量を酸性銅
ニンヒドリンを用いる比色法によって測定した。その結
果、培養液中のL−リジン生成量は塩酸塩として、各々
44mg/ml,52mg/ml,53mg/ml,54mg/mlであった。H−4933
株を用いて得た培養液1000mlを遠心分離し、得られた上
清液を硫酸でpH1.5に調整した後、強酸性イオン交換樹
脂ダイヤイオンSK−1B(H+型,三菱化成工業社製)のカ
ラムに通し、L−リジンを吸着させ、カラムを水洗後、
2規定のアンモニア水で溶出して、L−リジン画分を集
めた。集めた画分を濃縮し、濃縮液を塩酸でpH2.0に調
整した後、エタノールを添加しながら冷却することによ
り、L−リジン塩酸塩を晶出させ、結晶42gを得た。
発明の効果 本発明によりL−リジンを工業的に安価に供給するこ
とができる。

Claims (1)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】コリネ型グルタミン酸生産菌に属し、イツ
    リン類縁物質に耐性を有し、かつL−リジン生産能を有
    する微生物を培地に培養し、培養物中にL−リジンを生
    成蓄積させ、該培養物よりL−リジンを採取することを
    特徴とする発酵法によるL−リジンの製造法。
JP63023542A 1988-02-03 1988-02-03 発酵法によるl−リジンの製造法 Expired - Lifetime JP2578463B2 (ja)

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