JPH0240318B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0240318B2 JPH0240318B2 JP61309081A JP30908186A JPH0240318B2 JP H0240318 B2 JPH0240318 B2 JP H0240318B2 JP 61309081 A JP61309081 A JP 61309081A JP 30908186 A JP30908186 A JP 30908186A JP H0240318 B2 JPH0240318 B2 JP H0240318B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture
- medium
- tank
- cells
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 26
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000005192 partition Methods 0.000 claims description 11
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims description 7
- 238000012136 culture method Methods 0.000 claims description 5
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 2
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 50
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 7
- 238000005273 aeration Methods 0.000 abstract description 6
- 230000005484 gravity Effects 0.000 abstract description 5
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 4
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 abstract description 4
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 abstract description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 abstract description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 abstract description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 abstract description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 abstract description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 abstract description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 abstract 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 abstract 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 abstract 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 abstract 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 abstract 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 abstract 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 abstract 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 abstract 1
- MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-N selenous acid Chemical compound O[Se](O)=O MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 abstract 1
- 229960001407 sodium bicarbonate Drugs 0.000 abstract 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 abstract 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 8
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 4
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 238000001139 pH measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 229940082569 selenite Drugs 0.000 description 1
- MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-L selenite(2-) Chemical compound [O-][Se]([O-])=O MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M27/00—Means for mixing, agitating or circulating fluids in the vessel
- C12M27/18—Flow directing inserts
- C12M27/24—Draft tube
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M27/00—Means for mixing, agitating or circulating fluids in the vessel
- C12M27/18—Flow directing inserts
- C12M27/20—Baffles; Ribs; Ribbons; Auger vanes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
- C12M29/06—Nozzles; Sprayers; Spargers; Diffusers
- C12M29/08—Air lift
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
- C12M29/10—Perfusion
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M33/00—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus
- C12M33/22—Settling tanks; Sedimentation by gravity
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は動物、植物の細胞、組織、器官など、
及び微生物の培養、特に使用する培地より比重の
重い細胞を培養するに適した気泡塔型潅流培養方
法及びそのための装置に関する。
及び微生物の培養、特に使用する培地より比重の
重い細胞を培養するに適した気泡塔型潅流培養方
法及びそのための装置に関する。
従来の技術
従来、動物、植物の細胞や器官の培養、微生物
の培養において用いられる装置のほとんどは、回
分式のものである。かかる回分式の装置を用いる
場合には培養槽に投入した培地中の栄養源が細胞
増殖等に利用され枯渇すると培養は終了する。従
つて、多くの細胞を入手するためには、大型の装
置が必要となる。
の培養において用いられる装置のほとんどは、回
分式のものである。かかる回分式の装置を用いる
場合には培養槽に投入した培地中の栄養源が細胞
増殖等に利用され枯渇すると培養は終了する。従
つて、多くの細胞を入手するためには、大型の装
置が必要となる。
回分培養の場合、通気撹拌培養が一般的でイン
ペラーとスパージヤーにより撹拌と通気を行う方
法と、気泡によつて回転運動を起し撹拌する気泡
方式が知られており、それぞれに適した培養装置
が知られている。このうち気泡塔培養装置とは培
養装置の下部より空気等を通気することにより通
気ならびに撹拌を行う方式の培養装置である〔遺
伝38 (8)、72−79（1984）〕。
ペラーとスパージヤーにより撹拌と通気を行う方
法と、気泡によつて回転運動を起し撹拌する気泡
方式が知られており、それぞれに適した培養装置
が知られている。このうち気泡塔培養装置とは培
養装置の下部より空気等を通気することにより通
気ならびに撹拌を行う方式の培養装置である〔遺
伝38 (8)、72−79（1984）〕。
しかしながら回分式培養法では培養系内でのPH
の低下、代謝産物による生育阻害、栄養源の枯渇
などの要因からある程度以上の生育細胞密度とす
ることは困難である。最近、回分培養より高い細
胞密度の得られる潅流培養装置が開発されてい
る。潅流培養装置とは培地の供給と培養上清の抜
出しとを連続的に行う培養装置をいう。この型式
の培養装置には回転するフイルターによつて細胞
と上清とを分離し、上清を排出し、新鮮培地を加
える回転濾過塔型、インペラー型回分培養槽に細
胞沈殿管を設けることによつて細胞と上清とを分
離する細胞沈殿管型、及び中空繊維（ホロフアイ
バー）中に通気するか培地を通すホロフアイバー
型とがある〔遺伝38 (8)、72−79（1984）〕。
の低下、代謝産物による生育阻害、栄養源の枯渇
などの要因からある程度以上の生育細胞密度とす
ることは困難である。最近、回分培養より高い細
胞密度の得られる潅流培養装置が開発されてい
る。潅流培養装置とは培地の供給と培養上清の抜
出しとを連続的に行う培養装置をいう。この型式
の培養装置には回転するフイルターによつて細胞
と上清とを分離し、上清を排出し、新鮮培地を加
える回転濾過塔型、インペラー型回分培養槽に細
胞沈殿管を設けることによつて細胞と上清とを分
離する細胞沈殿管型、及び中空繊維（ホロフアイ
バー）中に通気するか培地を通すホロフアイバー
型とがある〔遺伝38 (8)、72−79（1984）〕。
又、特公昭61−36915には少なくとも一部の培
養液中の細胞を沈降させて得られる培養上清を培
養装置外に排出しながら新鮮培地を加えて培養す
る浮遊細胞の高濃度培養法が記載されており、そ
のための装置の一例として上記細胞沈殿管型の培
養装置が記載されている。
養液中の細胞を沈降させて得られる培養上清を培
養装置外に排出しながら新鮮培地を加えて培養す
る浮遊細胞の高濃度培養法が記載されており、そ
のための装置の一例として上記細胞沈殿管型の培
養装置が記載されている。
発明が解決しようとする問題点
上記潅流培養装置中、回転濾過塔型及び細胞沈
殿管型はインペラーにより撹拌を行う型式のもの
である。ところが動物細胞のような剪断力に感受
性の細胞に対しては、インペラーによる撹拌は好
ましくなく気泡塔方式の撹拌が優れていると考え
られている。又、ホロフアイバー型は大型化が困
難と考えられる。一方、気泡塔方式では大型化は
容易にできる。
殿管型はインペラーにより撹拌を行う型式のもの
である。ところが動物細胞のような剪断力に感受
性の細胞に対しては、インペラーによる撹拌は好
ましくなく気泡塔方式の撹拌が優れていると考え
られている。又、ホロフアイバー型は大型化が困
難と考えられる。一方、気泡塔方式では大型化は
容易にできる。
本発明の気泡塔型潅流培養方法及び装置では従
来の潅流培養装置におけるかかる問題点を回避で
きる。
来の潅流培養装置におけるかかる問題点を回避で
きる。
問題点を解決するための手段
本発明は気泡塔による細胞の浮遊培養において
少なくとも一部の培養液中の細胞を沈降させて得
られる培養上清を培養装置外に排出しながら新鮮
培地を加えて培養することを特徴とする浮遊細胞
の潅流培養方法及び気泡塔型培養装置において、
気泡により培養液を撹拌循環させる培養空間（以
下、該空間を培養槽という）と隔壁により隔てら
れ、隔壁上部は培養槽とは連通せず、隔壁下部は
培養槽と連通した空間（以下、該空間を上清分離
槽という）を設け、かつ培養槽への培地の供給及
び上清分離槽からの培養上清の抜出しを可能にし
た気泡塔型潅流培養装置に関する。
少なくとも一部の培養液中の細胞を沈降させて得
られる培養上清を培養装置外に排出しながら新鮮
培地を加えて培養することを特徴とする浮遊細胞
の潅流培養方法及び気泡塔型培養装置において、
気泡により培養液を撹拌循環させる培養空間（以
下、該空間を培養槽という）と隔壁により隔てら
れ、隔壁上部は培養槽とは連通せず、隔壁下部は
培養槽と連通した空間（以下、該空間を上清分離
槽という）を設け、かつ培養槽への培地の供給及
び上清分離槽からの培養上清の抜出しを可能にし
た気泡塔型潅流培養装置に関する。
気泡塔培養装置には種々の型式があるが、いず
れの型式においても気体の上昇に伴つて上部に流
動する部分と、上端から下に向つて流動する隔壁
によつて隔てられた下降部分との２つの部分から
なつている。上昇流は、気泡の発生に伴つて生
じ、隔壁の上端に達し、あふれ出し下降流となる
ことで槽内での回転運動を生じ撹拌される。細胞
等はこの対流によつて分散し、均一な溶存酸素及
び栄養分の補給を受ける。この２つの槽に上端を
閉鎖し、下端を開放したもう一つの部屋、すなわ
ち上清分離槽をつくると、この槽内は撹拌の影響
をほとんど受けることがなく静置されたと同様の
状態になる。この撹拌の影響の乏しい槽の上端
は、比重の重い細胞粒子が下部へ沈降し気泡槽内
の撹拌部分へもどつて行くため清澄な液となる。
従つて、この清澄な上清をゆつくりとした速度で
系外に排出してもその清澄度は、ほとんど変らな
い。系外に排出する速度と培養槽部分に添加する
速度とを同じにすると一定量の連続培養が進行す
ることになる。
れの型式においても気体の上昇に伴つて上部に流
動する部分と、上端から下に向つて流動する隔壁
によつて隔てられた下降部分との２つの部分から
なつている。上昇流は、気泡の発生に伴つて生
じ、隔壁の上端に達し、あふれ出し下降流となる
ことで槽内での回転運動を生じ撹拌される。細胞
等はこの対流によつて分散し、均一な溶存酸素及
び栄養分の補給を受ける。この２つの槽に上端を
閉鎖し、下端を開放したもう一つの部屋、すなわ
ち上清分離槽をつくると、この槽内は撹拌の影響
をほとんど受けることがなく静置されたと同様の
状態になる。この撹拌の影響の乏しい槽の上端
は、比重の重い細胞粒子が下部へ沈降し気泡槽内
の撹拌部分へもどつて行くため清澄な液となる。
従つて、この清澄な上清をゆつくりとした速度で
系外に排出してもその清澄度は、ほとんど変らな
い。系外に排出する速度と培養槽部分に添加する
速度とを同じにすると一定量の連続培養が進行す
ることになる。
上清分離槽下端に沈降する比重の重い細胞粒子
が効率よく培養槽中へもどるようにするために培
養槽と上清分離槽との間の隔壁の下端を培養槽下
端の上昇流と下降流の分岐点より上に設けること
が好ましい。
が効率よく培養槽中へもどるようにするために培
養槽と上清分離槽との間の隔壁の下端を培養槽下
端の上昇流と下降流の分岐点より上に設けること
が好ましい。
気泡培養槽でこのような上清分離槽を付加でき
る形状としては、その機能を満足するものであれ
ば、いかなる形状でもよく、第１図及び第２−１
及び２−２に示した型が好ましいものとして例示
される。
る形状としては、その機能を満足するものであれ
ば、いかなる形状でもよく、第１図及び第２−１
及び２−２に示した型が好ましいものとして例示
される。
第１図は、気泡塔の形状を二重円筒管とし、中
心の内円筒下部より気体を発し、上昇流を引き起
す。その外側の部分は内円筒上端よりあふれた培
養液が下降流となる部分である。さらにその外側
に、ジヤケツト様の上清分離槽をもうけた。
心の内円筒下部より気体を発し、上昇流を引き起
す。その外側の部分は内円筒上端よりあふれた培
養液が下降流となる部分である。さらにその外側
に、ジヤケツト様の上清分離槽をもうけた。
第２−２図は、第１図と異なり、上清分離槽を
中心に設けた場合である。第３図に培養液の流れ
の方向を矢印で示した。第３−３図に示したよう
に培養槽の底を中心を高く盛り上げその２番目の
槽の下より気体を発生させると太い矢印のように
流動する。一部細胞は、中心へも押し出される
が、下部突起の下へともどり再び上昇流にまき込
まれることになる。
中心に設けた場合である。第３図に培養液の流れ
の方向を矢印で示した。第３−３図に示したよう
に培養槽の底を中心を高く盛り上げその２番目の
槽の下より気体を発生させると太い矢印のように
流動する。一部細胞は、中心へも押し出される
が、下部突起の下へともどり再び上昇流にまき込
まれることになる。
第２−１図は、円筒である必要はなく、箱形で
もよく、分離板で３つの部屋を造ればよい。第３
−２図に示すように下端中央の穴より気体を発生
させると太い矢印のように流動する。上清は、細
い矢印で示したように外部へ排出されている。
もよく、分離板で３つの部屋を造ればよい。第３
−２図に示すように下端中央の穴より気体を発生
させると太い矢印のように流動する。上清は、細
い矢印で示したように外部へ排出されている。
以上のように、隔壁に隔てられ下部を開放した
上清分離槽を通常の培養槽につけることによつて
細胞を含まない上清を分離することができる。
上清分離槽を通常の培養槽につけることによつて
細胞を含まない上清を分離することができる。
第１図に記載した装置を例に示すと、培養量２
の装置の場合、上清分離槽は１の容量が適当
である。上清分離槽の内径110mm、培養槽１３の
内径80mm、内円筒５の内径57mmとした。装置の高
さは、培養槽１３が560mm、内円筒５が370mm、上
清分離槽１０が500mmとしたものを示した。
の装置の場合、上清分離槽は１の容量が適当
である。上清分離槽の内径110mm、培養槽１３の
内径80mm、内円筒５の内径57mmとした。装置の高
さは、培養槽１３が560mm、内円筒５が370mm、上
清分離槽１０が500mmとしたものを示した。
これらの培養装置は第１図、第２図に示したよ
うに、コンデンサー１、接種口２、培地添加口
３、サンプリングライン４、内円筒５又は分離板
１６、接続金具６、パツキング７、通気口８、通
気ライン９、排液ライン１１、固定部品１２など
の他、温度制御のための温度センサー、ヒータ
ー、PH測定や溶存酸素測定用のセンサー類、気体
流量制御のための流量計などを取付けることがで
きる。
うに、コンデンサー１、接種口２、培地添加口
３、サンプリングライン４、内円筒５又は分離板
１６、接続金具６、パツキング７、通気口８、通
気ライン９、排液ライン１１、固定部品１２など
の他、温度制御のための温度センサー、ヒータ
ー、PH測定や溶存酸素測定用のセンサー類、気体
流量制御のための流量計などを取付けることがで
きる。
一般的には、清澄な上清液を得るために培養槽
容量２に対し、上清分離槽容量を0.5〜２とする
ことが好ましい。
容量２に対し、上清分離槽容量を0.5〜２とする
ことが好ましい。
実施例
実施例 １
第１図に示した気泡塔型潅流培養装置を用い、
ヒトリンパ芽球細胞であるナマルバ細胞を用いて
培養を行つた。
ヒトリンパ芽球細胞であるナマルバ細胞を用いて
培養を行つた。
ナマルバ細胞は、RPMI−1640培地に3μｇ／ml
のトランスフマリン、5μｇ／mlのインスリン、
５ｍＭピルビン酸ソーダ、1.25×10-8M亜セレン
酸、１mg／mlガラクトース、４ｍＭグルタミン、
10ｍＭヘペス、25u／mlペニシリンＧ、25μｇ／
mlストレプトマイシン、0.1ｇ／dl重曹を加えた
無血清培地で培養した。
のトランスフマリン、5μｇ／mlのインスリン、
５ｍＭピルビン酸ソーダ、1.25×10-8M亜セレン
酸、１mg／mlガラクトース、４ｍＭグルタミン、
10ｍＭヘペス、25u／mlペニシリンＧ、25μｇ／
mlストレプトマイシン、0.1ｇ／dl重曹を加えた
無血清培地で培養した。
２培養槽に上記培地1.9を仕込み、1.3×
106cells／mlのナマルバ細胞を接種し、空気及び
５％CO2を含む空気を流量比を適宜調節しながら
1.2〜2.4／hrの流量で通気した。１日目500
ml／day、２日目から８日目まで１／day8日目
より後２／dayの流速で培地添加口より添加
し、上清分離槽上端の排液口より上清を排出させ
た。
106cells／mlのナマルバ細胞を接種し、空気及び
５％CO2を含む空気を流量比を適宜調節しながら
1.2〜2.4／hrの流量で通気した。１日目500
ml／day、２日目から８日目まで１／day8日目
より後２／dayの流速で培地添加口より添加
し、上清分離槽上端の排液口より上清を排出させ
た。
細胞密度は５日目で4.1×106cells／ml、８日目
で７×106cells／ml、14日目で１×107cells／ml、
以後徐々に細胞数が増加し18日後には1.2×
107cells／mlに達した。
で７×106cells／ml、14日目で１×107cells／ml、
以後徐々に細胞数が増加し18日後には1.2×
107cells／mlに達した。
実施例 ２
ナマルバ細胞を第１図に示した装置を用い培養
した。培地として実施例１に示した培地に0.1
ｇ／dlとなるようにpluronic F68を加えた培地を
用いた。２培養槽に上記培地２を仕込み、ナ
マルバ細胞を1.3×106cells／mlとなるように接種
した。通気は空気及び５％CO2を含む空気を流量
比を適宜調節しながら1.2〜2.4／hrの流量で行
つた。
した。培地として実施例１に示した培地に0.1
ｇ／dlとなるようにpluronic F68を加えた培地を
用いた。２培養槽に上記培地２を仕込み、ナ
マルバ細胞を1.3×106cells／mlとなるように接種
した。通気は空気及び５％CO2を含む空気を流量
比を適宜調節しながら1.2〜2.4／hrの流量で行
つた。
潅流する培地量は、24時間後より1000ml／day
で３日目まで通気し、３日後より10日目まで200
mlずつ増やし、10日後までに２／dayとした。
その後、２日ごとに200mlずつ流量を増加させ20
日目に４／dayとした。細胞数は８日目で８×
106cells／ml、15日目で1.1×107cells／ml、20日
目で1.5×107cells／mlとなつた。
で３日目まで通気し、３日後より10日目まで200
mlずつ増やし、10日後までに２／dayとした。
その後、２日ごとに200mlずつ流量を増加させ20
日目に４／dayとした。細胞数は８日目で８×
106cells／ml、15日目で1.1×107cells／ml、20日
目で1.5×107cells／mlとなつた。
発明の効果
本発明方法及び装置により剪断力に感受性の細
胞の培養及び大量培養が可能となる。
胞の培養及び大量培養が可能となる。
第１図及び第２図は本発明の気泡塔型灌流培養
装置の好ましい具体例を示す。第３図は本装置中
の培養液及び培養上清の動きを示す。
装置の好ましい具体例を示す。第３図は本装置中
の培養液及び培養上清の動きを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 気泡塔による細胞の浮遊培養において少なく
とも一部の培養液中の細胞を沈降させて得られる
培養上清を培養装置外に排出しながら新鮮培地を
加えて培養することを特徴とする浮遊細胞の潅流
培養方法。 ２ 気泡塔型培養装置において、気泡により培養
液を撹拌循環させる培養空間（以下、該空間を培
養槽という）と隔壁により隔てられ、隔壁上部は
培養槽とは連通せず、隔壁下部は培養槽と連通し
た空間（以下、該空間を上清分離槽という）を設
け、かつ培養槽への培地の供給及び上清分離槽か
らの培養上清の抜出しを可能にした気泡塔型潅流
培養装置。 ３ 該隔壁の下端を培養槽下端の上昇流と下降流
の分岐点より上に設けた特許請求の範囲第１項記
載の気泡塔型潅流培養装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61309081A JPS63164879A (ja) | 1986-12-27 | 1986-12-27 | 気泡塔型潅流培養方法及びその装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61309081A JPS63164879A (ja) | 1986-12-27 | 1986-12-27 | 気泡塔型潅流培養方法及びその装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63164879A JPS63164879A (ja) | 1988-07-08 |
| JPH0240318B2 true JPH0240318B2 (ja) | 1990-09-11 |
Family
ID=17988656
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61309081A Granted JPS63164879A (ja) | 1986-12-27 | 1986-12-27 | 気泡塔型潅流培養方法及びその装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63164879A (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0567738A3 (en) * | 1992-05-01 | 1995-09-06 | American Cyanamid Co | Controlling perfusion rates in continuous bioreactor culture of animal cells |
| US5443985A (en) * | 1993-07-22 | 1995-08-22 | Alberta Research Council | Cell culture bioreactor |
| KR100420784B1 (ko) * | 2001-02-09 | 2004-03-02 | (주)에스티알바이오텍 | 고정화된 미생물을 이용한 세포외 분비 유용물질의연속생산을 위한 개량된 고정화세포 분리장치 |
| WO2020189417A1 (ja) * | 2019-03-15 | 2020-09-24 | エイブル株式会社 | 培養システム及び培養方法 |
-
1986
- 1986-12-27 JP JP61309081A patent/JPS63164879A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63164879A (ja) | 1988-07-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4974816A (en) | Method and apparatus for biological processing of metal-containing ores | |
| JP3244701B2 (ja) | バイオマス粒子の生育方法および装置 | |
| US5766949A (en) | Method and apparatus for cultivating anchorage dependent monolayer cells | |
| EP0353893A2 (en) | Cell culture bioreactor | |
| US5007620A (en) | Apparatus for biological processing of metal-containing ores | |
| US3969190A (en) | Apparatus and method for microbial fermentation in a zero gravity environment | |
| Jensen | Production of anchorage‐dependent cells—problems and their possible solutions | |
| JPH0240318B2 (ja) | ||
| US20210054328A1 (en) | Cell Expansion Vessel Systems and Methods | |
| CN210012649U (zh) | 一种分段填料式好氧生物反应池 | |
| WO1986000636A1 (en) | Cell growth | |
| JP2690144B2 (ja) | 膜型細胞培養装置 | |
| EP0229289B1 (en) | Method of culturing animal cells | |
| JPH0416153B2 (ja) | ||
| US5151362A (en) | Apparatus containing a septum which impedes cell permeation for cell culture and method of use | |
| EP0420153B1 (en) | Centrifugal separator, method of separating animal cells from animal cell-containing suspension using said centrifugal separator, and method of culturing animal cells in suspension using said centrifugal separator | |
| US5102790A (en) | Method for culturing animal cells | |
| JPH0255119B2 (ja) | ||
| JPH03160983A (ja) | 培養装置 | |
| JPH0367578A (ja) | 培養装置 | |
| US20220033752A1 (en) | Bioreactor for cell culture | |
| CN213738789U (zh) | 一种一体化生物高效脱氮处理设备 | |
| RU2803177C1 (ru) | Аппарат для выращивания микроорганизмов | |
| CN212151996U (zh) | 养殖水净化设备 | |
| JPH0428352B2 (ja) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |