JPH01187089A

JPH01187089A - パルミトレイン酸及びそのグリセライドの製造方法

Info

Publication number: JPH01187089A
Application number: JP62115391A
Authority: JP
Inventors: Kazumi Okita; 大北　一三; Masami Kashiwagi; 柏木　雅美; Hideo Kamiyama; 英夫上山
Original assignee: Shikibo Ltd; Shikishima Boseki KK
Current assignee: Shikibo Ltd; Shikishima Boseki KK
Priority date: 1987-05-12
Filing date: 1987-05-12
Publication date: 1989-07-26

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）パルミトレイン酸（以下、ＰＯＡという）は、最近人体
に有益な作用をするものとして注目されるに至った。例
えば、特開昭５９−１７２４１１号公報によれば、ＰＯ
Ａは養毛剤の有効成分とされ、特開昭５９−１７５４２
５号公報によれば、ＰＯＡは血管を補強する作用がある
とされている。

この発明は、このような有益な作用をするＰＯＡ及びそ
のグリセラードの製造方法に関するものである。

（従来技？１ｆ）ＰＯＡはグリセラードとしてタラ肝油、イワシ油、ニシ
ン油、鯨油などの海産動物の油の中に含まれている。多
いものでは、これらの油に含まれている全脂肪酸の中の
約２０重量％を占めるといわれる。このように天然に存
在することが判明していても、今まではこれからＰＯＡ
を工業的に分−離しようとの試みがなされず、従ってＰ
ＯＡを大量に効率よく取得できるような方法は開発され
ていなかった。

（発明か解決しようとする問題点）この発唄は、天然物の中からＰＯＡを工業的に有利に分
離することを目的とし、ＰＯＡの工業的に有利な製造方
法を提供しようとするものである。

また、この発明は、こうして得られたＰＯＡを食品等に
供しようとの目的で、ＰＯＡをグリセラードとして利用
しようとの考えに基づき、ＰＯＡのグリセラードを工業
的に有利に製造する方法を提供しようとするものである
。

Ｃ問題を解決するための手段）天然の油脂からＰＯＡを得るには、一般に分離と加水分
解とを行なわなければならないが、この発明者は初めに
油脂の加水分解を行なうと、ＰＯＡが、そこに共存する
他の脂肪酸と溶解度の差によってあらかた分離できて、
便利であることを見出した。また、油脂の加水分解は、
これを酵素によって行なうと、ＰＯＡの酸化を防ぎ得る
ので有利であり、しかもその酵素としである種の微生物
から得られたリパーゼが好適であることを見出した。

この発明は、このような知見と確認とに基づいて完成さ
れたものである。

また、この発明者は、こうして得られたＰＯＡを利用す
るには、ＰＯＡを再びグリセラードの形にしなければな
らないことを知り、そのためのエステル化方法を探究し
た。その結果、ＰＯＡをグリセリンと混合し、減圧下に
加熱するのが好都合であることを確認した。これがＰＯ
Ａをグリセラードとする方法の一つである。

それとは別に、この発明者は、ＰＯＡをグリセラードに
するには、ある種の微生物から得られた酵素を利用する
のが好都合であることを見出した。

この知見に基づいて完成されたのがＰＯＡをグリセラー
ドとするもう一つの方法である。

（ＰＯＡの製造方法）まず、ＰＯＡの製造方法は、マカデミアナツツ、オリー
ブ、鯨及びミルクから得られた油脂をアスペルギルス、
ムコル、リゾプス、ペニシリウム、プシユードモナス、
クロモバクテリウム、アルスロバクタ−、ジオトリカム
又はカンジダ属の微生物に由来するリパーゼによって加
水分解し、加水分解物を有機溶媒に溶解した溶液を１５
〜−５５℃に冷却して液状部分を分離し、次いで液状部
分を減圧蒸溜することを特徴とするものである。

この方法では、原料としてマカデミアナツツ、オリーブ
、鯨及びミルクから得られた油脂を原料として用いる。

これらのものを原料として用いるのは、これらのものが
大量のＰＯＡを含み、かつＰＯＡと共存する他の脂肪酸
がＰＯＡと分離するに適したものばかりだからである０
原料としてマカデミアナツツを用いた場合を例に取ると
、まずマカデミアナツツを粗砕し、これを圧搾して油脂
を絞り出す。これは他のものを原料とした場合も同様で
ある。

こうして得た油脂をまず酵素によって加水分解する。酵
素としてはアスペルギルス、ムコル、リゾプス及びペニ
シリウム属に属するかび類、プシユードモナス、クロモ
バクテリウム及びアルスロバクタ−属に属するバクテリ
ヤ、カンジダ及びジオトリカム属に属する酵母菌等の微
生物に由来するリパーゼを用いる。これらのうちではカ
ンジダ属に由来するものが好適である〇このようなリパーゼは市販されている。例えばカンジダ
属由来のリパーゼは大野製薬社製の商品名ＡＹ“アマノ
“３０である。そのほか、多糖産業社製の商品ＭＹであ
る＠上記の油脂を加水分解する際には、まず油脂に水とリパ
ーゼとを加える。水の量は油脂に対し、１０〜２００重
量襲とし、リパーゼの量は油脂に対し普通０．００５−
０．５重量％とするが、好ましいのは０．０１〜０．１
重量％である。こうして得られた混合物を温度３７〜５
０℃、ＰＨ４，５〜８．３に２４−７２時間設置する。

放置の間攪拌振盪する。

その間にリパーゼが油脂を加水分解させる。その後静止
し、得られた生成物を２層に分離し、グリセリン及びリ
パーゼの含まれた水層を除去する。

こうして加水分解されたものを次に有機溶媒に溶解する
。有機溶媒としては種々のものを用いることができる。

例えば、アセトン、メタノール、エタノール、イソプロ
ピルアルコール、ヘキサン等を用いることができる。こ
れら有機溶媒の量は溶媒の種類によって異なるが、加水
分解物の量の１５−２０倍（重量）、好ましくは２−８
倍とする。すると、加水分解物の大部分は溶媒に溶解す
る。こうして加水分解物の有機溶媒溶液が得られる。

次いで、上記の有機溶媒溶液を冷却する。冷却する温度
は１５〜−５５℃の範囲、好ましくは−１０〜−２５℃
の範囲である。メタノールの場合は０〜１０℃である。

このような温度に６時間以上維持すると、溶液内には沈
澱を生じ、液状部分と固状部分とに分れる。そこで固状
部分を除去し、液状部分を分離する。固状部分はパルミ
チン酸やステアリン酸のような飽和脂肪酸であり、液状
部分はＰＯＡやオレイン酸が含まれている。

分離した液状部分は、その中に有機溶媒を含んでいるの
で、まず揮発し易い有機溶媒を蒸溜により除く。このと
き、さきの冷却により面状部分が除かれており、従って
凝固しやすい飽和脂肪酸が殆んど除かれているので、蒸
溜の際に溜出物が固化することが防がれ、蒸溜を円滑に
行なうことができる。有機溶媒を除いたあとの残溜物は
、殆んどが不飽和脂肪酸の混合物である。

こうして得た不飽和脂肪酸混合物は、これを減圧蒸溜に
付する。減圧の程度は、水銀柱でＩＩｆ１１〜１５麿の
範囲が適当であるが、中でも７ｆｌ〜１０寵が好ましい
。このとき加熱温度は１９０〜２１０℃とする。すると
、ＰＯＡは１８０℃前後の蒸溜分として得られる。

こうして得られたＰＯＡは、必要があればカラムクロマ
トグラフィーにより９９％以上の純度のものにすること
もできる。カラム充填剤としては、オクタデシルを持っ
たシリカゲルを用いるのがよい。また、展開液としては
種々のものを用いることができるが、アセトニトリル：
酢酸：水からなり、その比率が１０−４０　：　１　：
　０．５〜２の混合液、とりわけ１ｕｌｌの混合液、又
はエタン−ル：酢酸：水からなり、その比率が８〜ｌＯ
：１：１〜０．５の混合液、とりわけ４．１：１：０．
５の混合液が適している。

（ＰＯＡ製造方法の発明の効果）この発明方法によれば、マカデミアナツツ、オリーブ、
鯨及びミルクから得られた油脂をアスペルギルス、ムコ
ル、リゾプス、ペニシリウム、プシユードモナス、クロ
モバクテリウム、アルスロバクタ−、ジオトリカム又は
カンジダ属の微生物に由来するリパーゼによって加水分
解するので、温和な条件で加水分解ができ、従って生成
されたＰＯＡを酸化などによって変質させることなく、
効率よく取得することができる。また、最初に加水分解
を行ない、その後にこの加水分解物を有機溶媒に溶解し
、この溶液を１５〜−５５℃に冷却して液状部分を分離
するので、得られたＰＯＡを変質させることなく、そこ
に混在する飽和脂肪酸から容易に分離できる。こうして
分離した液状部分をあとは減圧蓋部してＰＯＡとするか
ら、ＰＯＡが効率よくかつ容易に得られる。この発明は
、こ・のような利点をもたらしている。

（グリセラードの製造方法）この出願は、上述のようにして得られたＰＯＡをさらに
グリセラードにする方法を含んでいる０その方法は、在
来の化学的手法そのものを用いる方法と、酵素を利用す
る方法とに分かれている。

その方法で利用される酵素は、アスペルギルス、ムコル
、リゾプス及びペニシリウム属に属するかび類、プシユ
ードモナス、クロモバクテリウム又はアルスロバクタ−
属に属するバクテリヤ、及びカンジダ及びジオトリカム
属に属する酵母に由来するリパーゼを用いることを特徴
としている。

ＰＯＡのグリセラードは、油脂として天然物中に存在す
るが、必ずしもＰＯＡだけのトリグリセラードとはなっ
ていないので、そのままＰＯＡのトリグリセラードを抽
出することは困難である。

今までは、ＰＯＡのグリセラードは格別の用途がなかっ
たので、その製造方法としては格別に見るべきものがな
かった。天然物中に存在するのであれば、それをそのま
ま抽出すれば足りるが、油脂としての抽出は実際には容
易でない。それよりも、天然物中に存在する油脂を一旦
加水分解して脂肪酸の形で分離し、これをグリセリンと
して反応させるという迂遠な方法を採る方が、ＰＯＡの
グリセラードの製造方法として容易であることが判明し
た。この点にＰＯＡの特殊性がある。だから、上述のよ
うな工程を経てＰＯＡのグリセラードを得ることは発明
であると考えられる。

在来の化学的手法による本発明のＰＯＡグリ七ラビライ
ド造方法は、上述のようにして得られたＰＯＡにグリセ
リンを加えて、減圧下に加熱することを特徴とするもの
である。

在来の化学的手法による場合には、加えるグリセリンの
量をＰＯＡに対し当モルよりもやや少な目とする。次い
で、この混合物を加熱する。加熱は１４０−２００℃の
範囲とし、好ましくは１６０〜１７０℃とする。この際
、混合物を減圧下に置き、留出する水を除く。減圧は水
銀柱で５ｆｌ〜２０闘、好ましくは？ｆｉ〜ｌｏｗとす
る。

在来の化学的手法による場合には、上記混合物中に触媒
を添加してもよい。触媒としては５ｕＣＮ２、ＺｕＣｌ
ｔ等のような金属塩、　又はβ−ナフタレンスルフォン
酸等の芳香族スルフォン酸を用いることができる。

これとは別に、酵素を利用する方法は、前述のようにし
て得られたＰＯＡにグリセリンを加え、前述のリパーゼ
によってエステル化することを特徴とするものである。

酵素を利用する方法では、加えるグリセリンの量を、Ｐ
ＯＡの１重量部に対し２−１０重量部、好ましくは４〜
６重量部とする。これにさらに、前述のリパーゼを少量
の水、具体的には０．０５〜０．５重量部の水で溶解し
て加える。リパーゼの量は、脂肪酸に対し０．０１〜０
．５重量％とする。この場合のリパーゼは、プシユード
モナス属に由来するものが最適である。

このとき、リパーゼの性質に応じて緩衝液を加え、門を
調節することが好ましい。緩衝液としては、例えば、酢
酸緩衝液、りん酸緩衝液を用いることができる。

こうして得られた混合物を温度８７〜５０℃に維持し、
２４〜７２時間振盪して、ＰＯＡをエステル化する。す
ると、ＰＯＡはエステル化されてグリセラードとなる。

加えたグリセリンの量が充分であれば、ＰＯＡはトリグ
リセラードとなる。

生成した反応混合物を分液ロートに移し、反応混合物の
０６４〜１０倍量の水を加え、激しく振盪後静置して２
層に分離し、グリセリン及びリパーゼの溶解した水層を
除去する。さらに、メタノールを加えて激しく振盪した
後、静置して下層の不溶解部分を採り、グリセラードを
得る。

（グリセラード製造方法の発明の効果）この発明に係る
エステル化方法によれば、在来の化学的手法に従った場
合には、減圧黒部をするだけで容易にＰＯＡのグリセラ
ードを得ることができ、また酵素を使用する場合には、
放置又は振盪するだけで容易にＰＯＡのグリセラードを
得ることができる。こうして得られたＰＯＡのグリセラ
ードは、ＰＯＡの含有量が多く、従ってＰＯＡの生理活
性と薬理効果が期待できるので、健康食品の添加物とし
て有用なものとなる。このようにＰＯＡの含有量の多い
ものは、今までに得られなかったことを考えると、この
発明による利益は大きい。

次に、実施例を挙げてこの発明方法の詳細をさらに具体
的に説明する。

実施例１マカデミアナツツを粗砕後、圧搾し、ナツツオイルを絞
り出した。このナツツオイル６０ｙにカンジダ属に由来
するリパーゼ（大野製薬社製）０．０５％（４５００）
を水６０ｙに溶解して添加し、３７°Ｃで２４時間反応
させて加水分解を行なった。反応後、分液ロートに移し
て静置し、２層に分離し、グリセリン、リパーゼの含ま
れた水層を除去した。

こうして得られた加水分解物１００ｙをアセトン８００
−に溶解し、この溶液を一２５℃の冷凍庫に２４時間放
置してのち、沈澱を戸別して液状部分を分離した。

次いで液状部分中のアセトンをエバポレーターで留去し
、残留物を水銀柱７ａ＋の減圧下に１８０℃で減圧黒部
し、初留より８０％分取し、これをＰＯＡとした。収率
は７９％であった。

次いで、上記ＰＯＡＩ（ｌにグリセリン４０ｙを加え、
さらにプシユードモナスに由来するリパーゼ（大野製薬
社製Ｐアマ／）　０．０１　？（７５Ｕ）を、陀４．５
の１０分の１モル酢酸緩衝液２１１ｉに溶解して加え、
この混合物を３７℃で４８時間振盪した。混合液を分液
ロートに移し、水を２０ｍｅ加え、激しく振盪したのち
静置し水層を除去した。

次いで、メタノールを加えて激しく振盪したのち、不溶
解部分のトリグリセラードを得た。ＰＯＡの含有率は７
０重量％であった。

実施例２実施例１で得たナツツオイル蒸留品を、オクタデシル基
を持ったシリカゲルで逆相クロマトグラフィーを行ない
、ＰＯＡの精製品を得た。

このとき、充填剤を２６℃ｗφ、２５ｃＩｎのカラムに
充填し、２ｇ！をチャージし、展開液を６００ｄ流した
。ＰＯＡは１６０〜２１０−の間に溶出した。展開液は
、アセトニトリル：酢醗：水の比が１９＝１：１とされ
た。ＰＯＡ含有の溶出分の溶媒を留去し、純度９９％の
ＰＯＡを得た。

このＰＯＡを実施例１と全く同様に処理して、ＰＯＡの
トリグリセラードを得た。ＰＯＡの含有率は９８重量％
であった。

実施例８実施例１で得られたナツツオイル６０ｆに、プシユード
モナス属起源のリパーゼ（大野製薬社製Ｐアマノ）０．
１％（４５０Ｕ）を■６．５のりん酸緩衝液に溶解して
添加し、４０℃で４８時間加水分解を行なった。反応後
、生成物を分液ロートに移して２層に分離し、グリセリ
ン及びリパーゼの溶解している水層を除去した。こうし
て得られた加水分解物１００ｙをヘキサンａｏｏｙに溶
解し、−２０℃の低温に２４時間保持し、沈澱を除いて
液状部分を分離した。

この液状部分をエバポレーターにかけて、ヘキサンを留
去した後、溶液を減圧蓋部し、初留より３０％重量分を
分取し、さらに減圧蓋部をくり返してＰＯＡを得た。Ｐ
ＯＡの収率は７０％であったＯこのＰＯＡＩ（ｌにグリセリン４（ｌと、カンジダに由
来するリパーゼ（大野製薬社製）０．０１ｙ（１５０Ｕ
）をＰＨ６，５の３０分の１モルりん酸緩衝液５ｙに溶
解したものとを加え、この混合物を４８時間８７℃で振
盪し、以下、実施例１と同様に操作してＰＯＡのトリグ
リセラードを得た。ＰＯＡの含有率は９０重量％であっ
た。

実施例４実施例１のようにして得られたナツツオイル６０ノに、
ムコル属起源のリパーゼ（大野製薬社製ＭＡＰ−１０）
０．１％（２６０Ｕ）を■６．５のりん酸緩衝液に溶解
して添加し、３７℃で４８時間加水分解を行なった。反
応後、生成物を分液ロートに移し、２層に分離し、グリ
セリン及びリパーゼの溶解している水層を除去した。こ
うして得られた加水分解物１００２をヘキサン８００−
に溶解し、この溶液を一２５℃の低温に２４時間保持し
、そこに析出した沈澱を一過して、液状部分を分離し、
エバポレーターでヘキサンを除去した。

次いで上記残留物を７　ｔｘｒｆｉＢ、１８０℃で減圧
蓋部し、初留より２５％重量分を分取してＰＯＡを得た
。収率は７８％であった。

上記のＰＯＡＩ（ｌにグリセリン８０ｙを加え、さらに
プシユードモナスに由来するリパーゼ（大野製薬社製Ｐ
アマノ）０．００５Ｆ（３７，５Ｕ）を陀４．５の１０
分の１モル酢酸緩衝液２１１１１に溶解した溶液を加え
、この混合物を４８時間３１℃で振盪した。以下、実施
例１と同様にしてＰＯＡのトリグリセラードを得た。Ｐ
ＯＡ含有率は８０重量％であった。

実施例５実施例１と全く同様にしてＰＯＡを得た。

このＰＯＡｌｏｙにグリセリン４０ｙを加え、さらにカ
ンジダ起源のリパーゼ（大野製薬社製）０．０１ｙ（１
５０Ｕ）をＰＯＡ５の１０分の１モル酢酸緩衝液５ｙに
溶解したものを加え、この混合物を５０℃で４８時間振
盪した。以下、実施例１と同様にして、ＰＯＡのトリグ
リセラードを得た。

ＰＯＡの含有率は７８重量％であった。

実施例６実施例１で得られたナツツオイルの加水分解物１００ｙ
を、メタノール１５０−に溶解し、０℃に１２時間保持
してのち、沈澱を除去して液状部分を分離した。

この液状部分を１５ｗＨＩ？、２００℃で減圧蓋部し、
初留より３０％重量分を分取してＰＯＡを得た。

このＰＯＡＩ（ｌにグリセリン２０ｙを加え、さらにリ
ゾプス起源のリパーゼ（大阪細菌研究所社製）０．０２
ｙ（４００）をＰＨａ５０８０分の１モルりん酸緩衝液
２−に溶解したものを加え、この混合物を７２時間５０
℃で振盪した。以下、実施例１と同様にしてＰＯＡのト
リグリセラードを得た。ＰＯＡ含有率は６８重量％であ
った。

実施例７実施例１と全く同様に処理してＰＯＡを得た。

このＰＯＡｌｏｏＰにグリセリン１０ｐを加え、コノ混
合物をフラスコに入れ、１６０℃、’１ｗａＨｇで攪拌
しながら８時間減圧蓋部してＰＯＡのエステル化を行な
い、ＰＯＡのトリグリセラードを得た。このトリグリセ
ラード中のＰＯＡ含有率は７０重量％であった。

Claims

【特許請求の範囲】１、アカデミアナッツ、オリーブ、鯨及びミルクから得
られた油脂をアスペルギルス、ムコル、リゾプス、ペニ
シリウム、プシユードモナス、クロモバクテリウム、ア
ルスロバクター、ジオトリカム、又はカンジダ属の微生
物に由来するリパーゼによつて加水分解し、加水分解物
を有機溶媒に溶解した溶液を１５〜−５５℃に冷却して
液状部分を分離し、次いで液状部分を減圧蒸溜すること
を特徴とする、パルミトレイン酸の製造方法。２、マカデミアナッツ、オリーブ、鯨及びミルクから得
られた油脂をアスペルギルス、ムコル、リゾプス、ペニ
シリウム、プシユードモナス、クロモバクテリウム、ア
ルスロバクター、ジオトリカム又はカンジダ属の微生物
に由来するリパーゼによつて加水分解し、加水分解物を
有機溶媒に溶解した溶液を１５〜−５５℃に冷却して液
状部分を分離し、次いで液状部分を減圧蒸溜してパルミ
トレイン酸を分離し、パルミトレイン酸にグリセリンを
加えて減圧下に加熱することを特徴とする、パルミトレ
イン酸グリセラードの製造方法。３、マカデミアナッツ、オリーブ、鯨及びミルクから得
られた油脂をアスペルギルス、ムコル、リゾプス、ペニ
シリウム、プシユードモナス、クロモバクテリウム、ア
ルスロバクター、ジオトリカム又はカンジダ属の微生物
に由来するリパーゼによつて加水分解し、加水分解物を
有機溶媒に溶解した溶液を１５〜−５５℃に冷却して液
状部分を分離し、次いで液状部分を減圧蒸溜してパルミ
トレイン酸を分離し、パルミトレイン酸にグリセリンを
加え、アスペルギルス、ムコル、リゾプス、ペニシリウ
ム、プシユードモナス、クロモバクテリウム、アルスロ
バクター、ジオトリカム又はカンジダ属の微生物に由来
するリパーゼによつてエステル化することを特徴とする
、パルミトレイン酸グリセラードの製造方法。