JP6877420B2 - ｔｏｌｌ様受容体アゴニストを含む抗体コンジュゲート - Google Patents

ｔｏｌｌ様受容体アゴニストを含む抗体コンジュゲート Download PDF

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哲郎 宇野
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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年１０月２９日に出願された米国仮出願第６２／２４７８９６号明細書の利益を主張するものであり、この仮出願は参照によってその全体が本明細書に組み込まれるものとする。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によってその全体が本明細書に組み込まれるものとする。２０１６年１０月５日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、ＰＡＴ０５７０６４−ＷＯ−ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、５５，５２５バイトのサイズである。
技術分野
本発明はｔｏｌｌ様受容体アゴニストを含む抗体コンジュゲート、および癌を治療するためのこのようなコンジュゲートの使用を提供する。
自然免疫は即時性の非特異的免疫応答であり、この免疫応答は、これらに限定されないが、細菌またはウイルスなどの病原体を含む外界からの刺激を排除する。適応免疫は遅延性ではあるがより特異的な免疫応答であり、この免疫応答は、長期免疫または防御免疫を宿主に与え、かつナイーブＴリンパ球がＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞および／またはＣＤ８＋細胞障害性Ｔ細胞に分化および活性化し、細胞性免疫および体液性免疫を促進することを伴う。樹枝状細胞またはマクロファージなどの自然免疫系の抗原提示細胞は、食菌し、外来抗原をプロセシングし、それをＴ細胞に対して細胞表面で提示し、それによってＴ細胞応答を活性化することにより、自然免疫系と適応免疫系との間の重要な結び付きとして作用する
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）はパターン認識受容体（ＰＲＲ）であり、樹枝状細胞、マクロファージ、単球、ナチュラルキラー細胞、およびＴリンパ球に主に発現する。ＴＬＲは、細菌、真菌、原生動物、およびウイルス由来の病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に結合し、侵入病原体に対する第１の防御線として作用する。ＴＬＲの活性化により、樹枝状細胞の抗原取込み、成熟、およびＴ細胞刺激能が高められる。ＴＬＲは、細胞外Ｎ末端ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ドメイン、それに続くシステインリッチ領域、膜貫通ドメイン、およびＴｏｌｌ／ＩＬ−１受容体（ＴＩＲ）ドメインと名付けられた保存領域を含む細胞内（細胞質性）尾部を含む。ＬＲＲドメインは、リガンド結合および関連するシグナル伝達にとって重要であり、ＰＲＲの一般的な特長である。ＴＩＲドメインは、タンパク質−タンパク質相互作用において重要であり、自然免疫と関連する。ＴＬＲは、炎症性反応に関与する遺伝子の発現を誘導するのに不可欠であり、抗原特異的獲得免疫の発達において重要な役割を果たす。
疾患、特に癌を治療するための新規の免疫療法が依然として必要とされている。
本発明は、疾患、特に癌の治療に有用な、ｔｏｌｌ様受容体アゴニストを含む抗体コンジュゲート、その薬学的に許容される塩、これらの医薬組成物、およびこれらの組合せを提供する。本発明はさらに、癌を治療し、予防し、または緩和する方法であって、有効量の本発明の抗体コンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。本発明はまた、ＴＬＲ７アゴニストおよびリンカーを含む化合物であって、抗ＨＥＲ２抗体にコンジュゲートし、それによって本発明の免疫賦活コンジュゲートを作製する化合物を提供する。さまざまな本発明の実施形態が、本明細書において述べられる。
本発明の１つの態様において、化合物は式（Ｉ）の構造およびその薬学的に許容される塩を有し、これらはＴＬＲ７アゴニストである。
Figure 0006877420
 （式中、
ＲＤは
Figure 0006877420
 でありかつＲＥはＨである、またはＲＥは
Figure 0006877420
 でありかつＲＤはＨであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２ＳＳ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−Ｎ３、
Figure 0006877420
 、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−ＳＨ、−ＳＲ７、−ＯＨ、−ＳＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ６は２−ピリジルまたは４−ピリジルであり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
本発明の１つの態様において、化合物は式（Ｉ）の構造およびその薬学的に許容される塩を有し、これらはＴＬＲ７アゴニストである。
Figure 0006877420
 （式中、
ＲＤは
Figure 0006877420
 でありかつＲＥはＨである、またはＲＥは
Figure 0006877420
 でありかつＲＤはＨであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−Ｎ３、
Figure 0006877420
 、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−ＳＨ、−ＳＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ６は２−ピリジルまたは４−ピリジルであり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
本発明の１つの態様において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の構造およびこれらの薬学的に許容される塩を有する。
Figure 0006877420
 （式中、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２ＳＳ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｎ３、
Figure 0006877420
 、−ＳＨ、−ＳＲ７、−ＯＨ、−ＳＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 、または−ＣＯ２Ｈであり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ６は２−ピリジルまたは４−ピリジルであり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
本発明の１つの態様において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の構造およびこれらの薬学的に許容される塩を有する。
Figure 0006877420
 （式中、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｎ３、
Figure 0006877420
 、−ＳＨ、−ＳＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 、または−ＣＯ２Ｈであり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ６は２−ピリジルまたは４−ピリジルであり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
本発明の他の態様は、式（ＩＩ）の構造を有する抗体コンジュゲートおよびその薬学的に許容される塩である。
Figure 0006877420
 （式中、
Ｒ５０は
Figure 0006877420
 であり、＊はＡｂへの連結点を示し、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２ＳＳ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 、−Ｓ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
Ｒ１２はＨ、メチル、またはフェニルであり、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
本発明の他の態様は、式（ＩＩ）の構造を有する抗体コンジュゲートおよびその薬学的に許容される塩である。
Figure 0006877420
 （式中、
Ｒ５０は
Figure 0006877420
 であり、＊はＡｂへの連結点を示し、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 、−Ｓ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
Ｒ１２はＨ、メチル、またはフェニルであり、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
本発明の他の態様は、式（ＩＩａ）または式（ＩＩｂ）の構造を有する式（ＩＩ）の抗体コンジュゲートおよびこれらの薬学的に許容される塩である。
Figure 0006877420
 （式中、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２ＳＳ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 、または−Ｓ−であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
本発明の他の態様は、式（ＩＩａ）または式（ＩＩｂ）の構造を有する式（ＩＩ）の抗体コンジュゲートおよびこれらの薬学的に許容される塩である。
Figure 0006877420
 （式中、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 、または−Ｓ−であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
本発明の他の態様は、治療有効量の、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、もしくは式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート、またはこれらの薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
本発明の他の態様は、ＨＥＲ２陽性癌を治療する方法であって、有効量の、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、もしくは式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート、またはこれらの薬学的に許容される塩をこのような治療を必要とする対象に投与することを含む方法である。ＨＥＲ２陽性癌は、胃癌、食道癌、胃食道接合部腺癌、結腸癌、直腸癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸管癌、子宮癌、子宮内膜癌、膀胱癌、尿路癌、膵臓癌、肺癌、前立腺癌、骨肉腫、神経芽細胞腫、膠芽腫、および頭頸部癌のいずれかとすることができる。ＨＥＲ２陽性癌は、高ＨＥＲ２発現（例えば、ＩＨＣスコア３＋を有する）または低ＨＥＲ２発現（例えば、ＩＨＣスコア２＋を有する）を有し得る。
本発明の他の態様は、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、もしくは式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲートまたはこれらの薬学的に許容される塩の、ＨＥＲ２陽性癌を治療するための医薬の製造における使用である。
本発明の他の態様は、医療方法において使用するための抗体コンジュゲートであり、医療方法はＨＥＲ２陽性癌を治療するためのものであり、抗体コンジュゲートは、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、もしくは式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート、またはこれらの薬学的に許容される塩である。さらに、本発明の更なる態様は、抗ＨＥＲ２抗体単独と比較したときに、長期のＨＥＲ２陽性癌を抑制するおよび／またはＨＥＲ２陽性癌の再発を低下させる方法において使用するための抗体コンジュゲートである。
本明細書に記載の抗体コンジュゲートは、高ＨＥＲ２発現腫瘍（例えば、ＩＨＣスコア３＋を有する）だけではなく低ＨＥＲ２発現腫瘍（例えば、ＩＨＣスコア２＋を有する）の治療にも使用することができる。
Ｎ８７異種移植腫瘍モデルにおいて、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ２−（Ｃ−１）コンジュゲートで単回処理を行った後の結果を示すグラフである。未処理の動物（白丸）と比較して、腫瘍の退行が、１ｍｇ／ｋｇ（黒ひし形）、２．５ｍｇ／ｋｇ（黒三角）、５ｍｇ／ｋｇ（黒丸）、および１０ｍｇ／ｋｇ（黒四角）を含むすべての被験用量で観察された。未処理の動物（白丸）と比較して、Ｎ８７胃腫瘍の退行は、１０ｍｇ／ｋｇの非コンジュゲート抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ単独（白三角）またはアイソタイプ対照抗体−（Ｃ−１）コンジュゲート（白ひし形）で処理されたＮ８７異種移植マウスにおいて観察されなかった。データは、（投薬後の）経時的な平均腫瘍体積（平均＋／−ＳＥＭ）を表す。 ヒトＮ８７異種移植腫瘍を、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−１）または抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）の単回用量で処理した後の結果を示すグラフである。未処理の動物（白丸）と比較して、ヒトＮ８７異種移植腫瘍の退行が、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−１）１ｍｇ／ｋｇ（黒四角）または抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）１ｍｇ／ｋｇ（黒三角）で処理した後に観察されたが、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−１）０．３ｍｇ／ｋｇ（黒丸）または抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）０．３ｍｇ／ｋｇ（黒ひし形）で処理すると腫瘍の静止状態が生じた。未処理の動物（白丸）と比較して、Ｎ８７胃腫瘍の退行は、アイソタイプ対照抗体−（Ｃ−５）コンジュゲート（白ひし形）で処理されたＮ８７異種移植マウスにおいて観察されなかった。データは、（投薬後の）経時的な平均腫瘍体積（平均＋／−ＳＥＭ）を表す。 ヒトＮ８７異種移植腫瘍を、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）の単回用量で処理した後の結果を示すグラフである。未処理の動物（白丸）と比較して、ヒトＮ８７異種移植腫瘍の退行が、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）５ｍｇ／ｋｇ（黒四角）または抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）３ｍｇ／ｋｇ（黒丸）で処理した後に観察されたが、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）１ｍｇ／ｋｇ（黒三角）で処理すると腫瘍の静止状態が生じた。データは、（投薬後の）経時的な平均腫瘍体積（平均＋／−ＳＥＭ）を表す。 ヒトＮ８７異種移植腫瘍を、別の化合物がコンジュゲートされた抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１の単回用量で処理した後の結果を示すグラフである。未処理の動物（白丸）と比較して、ヒトＮ８７異種移植腫瘍の最初の退行、それに続く静止状態が、１ｍｇ／ｋｇの、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）（黒三角）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−６０）（白三角）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５９）（黒四角）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−６１）（白四角）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−３５）（黒六角形）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−３７）（白六角形）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−６４）（黒ひし形）、または抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−６２）（白ひし形）で処理した後に観察された。データは、（投薬後の）経時的な平均腫瘍体積（平均＋／−ＳＥＭ）を表す。 （図５Ａおよび図５Ｂ）ＭＭＣマウス***腫瘍（ｒａｔＨＥＲ２陽性）を、抗ｒａｔＨＥＲ２−（Ｃ−４６）コンジュゲートの単回用量で処理した後の結果を示すグラフである。結果より、腫瘍の完全な退行が、抗ｒａｔＨＥＲ２−（Ｃ−４６）コンジュゲートで処理された８匹のマウスのうち７匹に観察された（図５Ａ）が、裸の抗ｒａｔＨＥＲ２抗体で処理された８匹のマウスのうちでは３匹のみで観察された（図５Ｂ）。治療は、ＭＭＣ乳癌同系モデルにおいて、腫瘍の平均サイズが２００ｍｍ３に達したときに開始した。データは、（投薬後の）経時的な平均腫瘍体積（平均＋／−ＳＥＭ）を表す。 ヒトＨＣＣ１９５４***異種移植腫瘍を、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）の単回用量で処理した後の結果を示すグラフである。未処理の動物（白丸）と比較して、ヒトＨＣＣ１９５４異種移植腫瘍の退行が、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）１０ｍｇ／ｋｇ（黒四角）または抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）３ｍｇ／ｋｇ（黒丸）で処理した後に観察されたが、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）１ｍｇ／ｋｇ（黒三角）で処理すると腫瘍の静止状態が生じた。未処理の動物（白丸）と比較して、腫瘍の退行は、アイソタイプ対照抗体−（Ｃ−５）コンジュゲート（白ひし形）または非コンジュゲート抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１単独（白三角）１０ｍｇ／ｋｇで処理されたＨＣＣ１９５４異種移植マウスにおいて観察されなかった。データは、（投薬後の）経時的な平均腫瘍体積（平均＋／−ＳＥＭ）を表す。 ヒトＳＫＯＶ３卵巣異種移植腫瘍を、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）の単回用量で処理した後の結果を示すグラフである。未処理の動物（白丸）と比較して、ヒトＳＫＯＶ３異種移植腫瘍の退行が、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）１０ｍｇ／ｋｇ（黒四角）で処理した後に観察されたが、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）３ｍｇ／ｋｇ（黒丸）で処理すると、最初に腫瘍の退行が、それに続いて腫瘍の再増殖が生じた。未処理の動物（白丸）と比較して、腫瘍の退行は、アイソタイプ対照抗体−（Ｃ−５）コンジュゲート（白ひし形）または非コンジュゲート抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１単独（白三角）１０ｍｇ／ｋｇで処理されたＳＫＯＶ３異種移植マウスにおいて観察されなかった。データは、（投薬後の）経時的な平均腫瘍体積（平均＋／−ＳＥＭ）を表す。 （図８Ａ〜図８Ｃ）Ｎ８７（図８Ａ）、ＨＣＣ１９５４（図８Ｂ）、およびＳＫＯＶ３（図８Ｃ）異種移植腫瘍でのＨＥＲ２発現を示す代表的な免疫組織化学（ＩＨＣ）画像を示す写真である。腫瘍は、３＋（Ｎ８７およびＨＣＣ１９５４）および２＋（ＳＫＯＶ３）のように、そのＨＥＲ２発現レベルに基づいてスコア化した。
列挙されたさまざまな本発明の実施形態が、本明細書において述べられる。各実施形態で定められた特徴は、他の定められた特徴と組み合わせ、本発明の更なる実施形態を提供してもよいことは認識されるであろう。
本出願の本文全体を通して、明細書の本文（例えば、表１）と配列表との間に相違がある場合は、明細書の本文を優先するものとする。
定義
本明細書において使用される「Ｃ４〜Ｃ６アルキル」という用語は、４から６個の炭素原子を含む、完全に飽和された、分岐鎖または直鎖の炭化水素を指す。「Ｃ４〜Ｃ６アルキル」の非限定例としては、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、およびヘキシルがある。
本明細書において使用される「ＨＥＲ２」（ＥＲＢＢ２、ＮＥＵ、ＮＧＬ、ＴＫＲ１、ＣＤ３４０、ｐ１８５、ＭＬＮ１９、ＨＥＲ−２／ｎｅｕとしても知られている）は、上皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体ファミリーの膜通過チロシンキナーゼ受容体を指す。ＨＥＲ２は、細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内チロシンキナーゼドメインを含む。ＨＥＲ２は、それ自体にリガンド結合ドメインを有さず、したがって増殖因子に結合できないが、ＨＥＲ２は、ＨＥＲ１またはＨＥＲ３などの他のリガンド結合ＥＧＦ受容体ファミリーメンバーに強固に結合し、ヘテロ二量体を形成し、リガンド結合を安定化し、キナーゼが介在する下流シグナル伝達経路の活性化を促進する。ヒトＨＥＲ２／ＮＥＵ遺伝子は染色***置１７ｑ１２にマップされ、ＨＥＲ２／ＮＥＵ遺伝子のゲノム配列はＧｅｎＢａｎｋでＮＧ＿００７５０３．１に見い出すことができる。ヒトには５種類のＨＥＲ２アイソフォーム、すなわち、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥが存在し、本明細書において使用される「ＨＥＲ２」という用語は、すべてのＨＥＲ２アイソフォームをまとめて指す。本明細書において使用されるヒトＨＥＲ２タンパク質はまた、その完全長全体の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列がＨＥＲ２アイソフォーム、すなわち、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥと同一であるタンパク質を含み、このようなタンパク質は、ＨＥＲ２の機能のうちの少なくとも１つをさらに有する。最も長いアイソフォームであるヒトＨＥＲ２アイソフォームＡのｍＲＮＡおよびタンパク質配列は、
ホモ・サピエンスｅｒｂ−ｂ２受容体チロシンキナーゼ（ＥＲＢＢ２）、転写変異体１、ｍＲＮＡ［ＮＭ＿００４４４８．３］
Figure 0006877420
Figure 0006877420
 受容体チロシンタンパク質キナーゼｅｒｂＢ−２アイソフォーム、前駆体［ホモ・サピエンス］［ＮＰ＿００４４３９．２］
Figure 0006877420
 である。
他のヒトＨＥＲ２アイソフォームのｍＲＮＡおよびタンパク質配列は、ＧｅｎｅＢａｎｋで以下の受け入れ番号で見い出すことができる。
ＨＥＲ２アイソフォームＢ：ＮＭ＿００１００５８６２．２（ｍＲＮＡ）→ＮＰ＿００１００５８６２．１（タンパク質）；
ＨＥＲ２アイソフォームＣ：ＮＭ＿００１２８９９３６．１（ｍＲＮＡ）→ＮＰ＿００１２７６８６５．１（タンパク質）；
ＨＥＲ２アイソフォームＤ：ＮＭ＿００１２８９９３７．１（ｍＲＮＡ）→ＮＰ＿００１２７６８６６．１（タンパク質）；
ＨＥＲ２アイソフォームＥ：ＮＭ＿００１２８９９３８．１（ｍＲＮＡ）→ＮＰ＿００１２７６８６７．１（タンパク質）。
本明細書において使用される「抗体」という用語は、タンパク質、または抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子由来のポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナルもしくはモノクローナルの、複数鎖もしくは一本鎖の、または完全な免疫グロブリンとすることができ、かつ天然源由来または組換え源由来であってもよい。天然発生「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互に連結された、少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと省略される）および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は３つのドメイン、すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと省略される）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は１つのドメイン、すなわち、ＣＬからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに再分化することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより一定に保たれた領域が組み入れられている。ＶＨおよびＶＬはそれぞれ３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなり、アミノ末端からカルボキシル末端まで、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で配列している。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫グロブリンが、免疫系のさまざまな細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１構成成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または因子に結合するのを介在し得る。抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、またはキメラ抗体とすることができる。抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）、またはサブクラスのものとすることができる。
「抗体フラグメント」または「抗原結合フラグメント」という用語は、抗原エピトープと（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）特異的に相互作用する能力を保持する抗体の少なくとも一部分を指す。抗体フラグメントの例としては、これらに限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、ジスルフィドリンクＦｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＨ領域およびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、直鎖抗体、ｓｄＡｂなどの単一ドメイン抗体（ＶＬまたはＶＨのいずれか）、ラクダＶＨＨドメイン、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によってリンクされた２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントなどの抗体フラグメントから形成される多特異的抗体、ならびに単離されたＣＤＲまたは抗体の他のエピトープ結合抗体フラグメントがある。抗原結合フラグメントはまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ（maxibodies）、ミニボディ（minibodies）、ナノボディ（nanobodies）、イントラボディ（intrabodies）、ディアボディ（diabodies）、トリアボディ（triabodies）、テトラボディ（tetrabodies）、ｖ−ＮＡＲ、およびビス−ｓｃＦｖに組み込むことができる（例えば、Hollinger and Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136, 2005を参照のこと）。抗原結合フラグメントはまた、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドをベースにした骨格にグラフトすることができる（フィブロネクチンポリペプチドミニボディが記載されている、米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照のこと）。「ｓｃＦｖ」という用語は、軽鎖可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントと重鎖可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントとを含む融合タンパク質を指し、軽鎖可変領域と重鎖可変領域は、例えば合成リンカー、例えば短いフレキシブルポリペプチドリンカーを介し隣接してリンクされ、かつ一本鎖ポリペプチドとして発現することが可能であり、ｓｃＦｖは、それが由来する完全抗体の特異性を保持する。特に指定がない限り、本明細書において使用されるｓｃＦｖは、ＶＬおよびＶＨ可変領域を次のいずれかの順序で有していてもよく、例えば、ポリペプチドのＮ末端およびＣ末端に対して、ｓｃＦｖはＶＬ−リンカー−ＶＨを含んでいてもよく、またはＶＨ−リンカー−ＶＬを含んでいてもよい。
本明細書において使用される「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性および結合親和性を与える抗体可変領域内のアミノ酸配列を指す。例えば、一般的には、３つのＣＤＲが各重鎖可変領域に（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、かつ３つのＣＤＲが各軽鎖可変領域に（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）にそれぞれ存在する。所与のＣＤＲの厳密なアミノ酸配列境界は、Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）、Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）に記載のものを含む多数の周知のスキームのいずれかを使用して決定することができる。所与のＣＤＲ領域（例えば、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、またはＬＣ ＣＤＲ３）に関するＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームの組合せでは、いくつかの実施形態において、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの一部として定義されたアミノ酸残基とともにＫａｂａｔ ＣＤＲの一部として定義されたアミノ酸残基に一致する。
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンへ特異的に結合可能な、あるいは分子と相互作用可能な任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、一般的に、アミノ酸または炭水化物もしくは糖側鎖などの分子の化学的活性表面基からなり、特異的な３次元構造特性ならびに特異的な電荷特性を有することができる。エピトープは「直鎖」または「立体配座」であってもよい。立体配座エピトープおよび直鎖エピトープは、前者への結合は変性溶媒存在下で喪失するが、後者は喪失しないという点で区別される。
本明細書において使用される「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という語句は、抗体、二重特異性抗体などを含むポリペプチドを指し、これらは実質的に同一のアミノ酸配列を有する、または同じ遺伝的供給源に由来する。この用語はまた、単一分子組成の抗体分子の調製物も含む。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す。
本明細書において使用される「ヒト抗体」という語句は、フレームワーク領域とＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含む。さらに抗体が定常領域を含む場合、その定常領域もまた、例えばヒト生殖細胞系配列もしくはヒト生殖細胞系配列の突然変異型のようなヒト配列、または例えばKnappik, et al. (2000. J Mol Biol 296, 57-86)に記載のようなヒトフレームワーク配列分析由来のコンセンサスフレームワーク配列を含む抗体に由来する。免疫グロブリン可変ドメイン、例えばＣＤＲの構造および場所は、周知のナンバリングスキーム、例えば、Ｋａｂａｔナンバリングスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキーム、またはＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの組合せ（例えば、Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services (1991), eds. Kabat et al.、Al Lazikani et al., (1997) J. Mol. Bio. 273:927 948を参照のこと）を使用して定義してもよい。Kabat et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th edit., NIH Publication no. 91-3242 U.S. Department of Health and Human Services、 Chothia et al., (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917、 Chothia et al., (1989) Nature 342:877-883、およびAl-Lazikani et al., (1997) J. Mal. Biol. 273:927-948。
本発明のヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダムなもしくは位置特異的な突然変異誘発によってまたはｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞突然変異によって導入された突然変異、または安定性もしくは生成を促進するための保存的な置換）を含んでよい。しかし、本明細書において使用される「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上にグラフトされた抗体を含むことを意図しない。
本明細書において使用される「組換えヒト抗体」という語句は、例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニックもしくは導入染色体（transchromosomal）である動物（例えばマウス）またはそれから調製されたハイブリドーマから単離された抗体、ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞、例えばトランスフェクトーマ（transfectoma）から単離された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、およびヒト免疫グロブリン遺伝子配列のすべてまたは一部分を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを伴う任意の別の手法によって調製、発現、作製、または単離された抗体などの、組換え手法によって調製、発現、作製、または単離されたすべてのヒト抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかし、ある特定の実施形態において、このような組換えヒト抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列のトランスジェニック動物を使用するときは、ｉｎ ｖｉｖｏ体細胞突然変異誘発）を行うことができ、したがって、組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系ＶＨ配列およびＶＬ配列に由来しかつ関連すると同時に、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト抗体生殖細胞系レパートリー内に天然に存在しないことがある配列である。
本明細書において使用される「Ｆｃ領域」という用語は、ＣＨ３、ＣＨ２、および抗体の定常ドメインにおけるヒンジ領域の少なくとも一部分を含むポリペプチドを指す。任意選択で、Ｆｃ領域は、一部の抗体クラスに存在するＣＨ４ドメインを含んでいてもよい。Ｆｃ領域は、抗体における定常ドメインのヒンジ領域全体を含んでいてもよい。１つの実施形態において、本発明は、抗体のＦｃ領域およびＣＨ１領域を含む。１つの実施形態において、本発明は、抗体のＦｃ領域であるＣＨ３領域を含む。他の実施形態において、本発明は、Ｆｃ領域、ＣＨ１領域、および抗体の定常領域由来のカッパ／ラムダ領域を含む。１つの実施形態において、本発明の結合分子は、定常領域、例えば重鎖定常領域を含む。１つの実施形態において、このような定常領域は、野生型定常領域と比較して修飾されている。すなわち本明細書において開示されるポリペプチドは、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３）および／または軽鎖定常領域ドメイン（ＣＬ）のうちの１つまたは複数に改変または修飾を含んでいてもよい。修飾の例としては、１つまたは複数のドメインにおける１つまたは複数のアミノ酸の、付加、欠失、または置換がある。このような変化は、エフェクター機能、半減期などを最適化するように含まれていてもよい。
本明細書において使用される「結合特異性」という用語は、１つの抗原決定基と反応し、かつ別の抗原決定基とは反応しない個々の抗体結合位置の能力を指す。抗体結合位置は、分子のＦａｂ部分にあり、かつ重鎖および軽鎖の超可変領域から構築される。抗体の結合親和性は、単一の抗原決定基と単一の抗体結合位置との間の反応の強さである。それは、抗原決定基と抗体結合位置との間に影響を及ぼす引力と反発力との合計である。
本明細書において使用される「親和性」という用語は、単一の抗原位置における抗体と抗原との間の相互作用の強度を指す。各抗原位置内では、抗体「アーム」の可変領域が、多数の位置において弱い非共有結合力を介して抗原と相互作用し、相互作用が強い程、親和性は高い。
「保存的配列修飾」という用語は、アミノ酸配列を含む抗体または抗体フラグメントの結合特性に顕著な影響を与えないまたはそれを変えないアミノ酸修飾を指す。このような保存的修飾としては、アミノ酸の置換、付加、および欠失がある。修飾は、位置特異的突然変異誘発およびＰＣＲ介在性突然変異誘発などの当技術分野において既知の標準的な技法によって、本発明の抗体または抗体フラグメントに導入することができる。保存的なアミノ酸置換は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置換されたものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸がある。したがって、抗体内の１つまたは複数のアミノ酸残基は、同一の側鎖ファミリー由来の他のアミノ酸残基と置換することができ、かつ改変された抗体は、本明細書の記載の機能性アッセイを使用して試験することができる。
「相同性」または「同一性」という用語は、２つの高分子間の、例えば、２つのＤＮＡ分子もしくは２つのＲＮＡ分子などの２つの核酸分子間の、または２つのポリペプチド分子間のサブユニット配列の同一性を指す。２つの分子両方におけるサブユニット位置が同一の単量体サブユニットで占められるときに、例えば、２つのＤＮＡ分子における位置がそれぞれアデニンで占められる場合、これらはその位置で相同または同一である。２つの配列間の相同性は、マッチするまたは相同な位置数の一次関数であり、例えば、２つの配列における位置の半数（例えば、長さがサブユニット１０個のポリマーにおける５個の位置）が相同である場合、２つの配列は５０％相同であり、位置の９０％（例えば、１０個中９個）がマッチしているまたは相同である場合、２つの配列は９０％相同である。「配列同一性」の百分率は、最適に整列された２つの配列を比較ウィンドウ上で比較することによって決定することができ、比較ウィンドウにおけるアミノ酸配列のフラグメントは、２つの配列を最適に整列させるために、参照配列（付加は欠失を含まない）と比較して、付加または欠失（すなわちギャップまたはオーバーハング）を含んでいてもよい。百分率は、両方の配列において同一のアミノ酸残基となっている位置の数を決定し、マッチする位置の数を得、マッチする位置の数を比較ウィンドウの位置の総数で除し、その計算結果に１００を乗じ、配列同一性の百分率を得ることによって算出することができる。結果は、クエリー配列に対する対象配列の同一性百分率である。
「癌」および「癌性」という用語は、典型的には、無秩序な細胞増殖を特徴とする哺乳動物の生理的状態を指す、または述べる。癌の例としては、これらに限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫（髄芽細胞腫および網膜芽細胞腫を含む）、肉腫（脂肪肉腫および滑膜細胞肉腫を含む）、神経内分泌腫瘍（カルチノイド腫瘍、ガストリノーマ、および島細胞癌を含む）、中皮腫、神経鞘腫（聴神経腫を含む）、髄膜腫、腺癌、黒色腫、および白血病またはリンパ性悪性疾患がある。このような癌のより具体的な例としては、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮性扁平上皮細胞癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、線肺癌、および肺扁平上皮癌腫を含む肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化管癌を含む胃癌、膵臓癌、膠芽腫、神経芽細胞腫、子宮頸管癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路癌、肝癌腫、乳癌、結腸癌、直腸癌、直腸結腸癌、子宮内膜または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌（kidney or renal cancer）、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌腫、肛門癌腫、陰茎癌腫、睾丸癌、食道癌、胆道腫瘍、ならびに頭頸部癌がある。
「ＨＥＲ２陽性癌」または「ＨＥＲ２発現癌」は、その細胞表面にＨＥＲ２タンパク質が存在している細胞を含む癌である。癌細胞上のＨＥＲ２の存在を検出または決定するための多数の方法が当技術分野において既知である。例えば、いくつかの実施形態において、細胞表面上のＨＥＲ２の存在は、免疫組織化学（ＩＨＣ）、フローサイトメトリ、ウエスタンブロッティング、免疫蛍光アッセイ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素リンク免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ホモジニアス時間分解蛍光法（ＨＴＲＦ）、または陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）によって決定してもよい。
本明細書において使用される「組合せ」または「薬学的組合せ」という用語は、１つを超える活性成分を混合してまたは組み合わせて得られる生成物を意味し、活性成分の固定された組合せと固定されていない組合せの両方を含む。「固定された組合せ」という用語は、活性成分、例えば本発明の化合物、および１つまたは複数の追加の治療剤を、単一の実態または投薬量の形態で、対象へ同時に投与することを意味する。「固定されていない組合せ」という用語は、活性成分、例えば本発明の化合物、および１つまたは複数の追加の治療剤を、個別の実態として、同時に、平行して、または連続的に、患者へ特に時間を制限せずに投与することを意味し、このような投与によって、治療有効用レベルの活性成分が対象の体内に与えられる。後者はまた、カクテル療法、例えば、３つ以上の活性成分の投与に適用する。
本明細書において使用される「組成物」または「医薬組成物」という用語は、本発明の化合物と、担体、安定化剤、希釈剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、および／または賦形剤などの、少なくとも１つの、任意選択で１つを超える薬学的に許容される別の化学構成成分との混合物を指す。
本明細書において使用される「光学異性体」または「立体異性体」という用語は、本発明の所与の化合物に関して存在し得る種々の立体異性体配置のいずれかを指し、幾何異性体を含む。置換基は、炭素原子のキラル中心で連結してもよいことは理解されよう。「キラル」という用語は、その鏡像パートナーに重ね合わせることができない特性を有する分子を指すが、「アキラル」という用語は、その鏡像パートナーに重ね合わせることができる分子を指す。したがって、本発明は、化合物の、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはラセミ体を含む。「エナンチオマー」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である一対の立体異性体である。一対のエナンチオマーの１：１の混合物は「ラセミ」混合物である。この用語は、必要に応じて、ラセミ混合物を示すために使用する。「ジアステレオ異性体」は、少なくとも２個の不斉原子を有するが、互いに鏡像ではない立体異性体である。絶対立体化学は、Ｃａｈｎ−ｌｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ Ｒ−Ｓシステムに従って明示される。化合物が純粋なエナンチオマーであるとき、各キラル炭素における立体化学はＲまたはＳのいずれかによって明示され得る。絶対配置が未知である分割された化合物は、ナトリウムＤ線の波長で平面偏光を回転させる方向（右旋性または左旋性）により（＋）または（−）で示すことができる。本明細書に記載の特定の化合物は、１つまたは複数の不斉中心または軸を含み、したがって、エナンチオマー、ジアステレオマー、および絶対立体化学に関して（Ｒ）−または（Ｓ）−として定義され得る別の立体異性形態を生じ得る。
本明細書において使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、当業者に既知であるように、任意のかつすべての、溶媒、分散媒体、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、防腐剤（例えば、抗細菌剤、抗真菌剤）、等張化剤、吸収遅延剤、塩類、防腐剤、薬物、薬物安定化剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、風味剤、色素など、およびこれらの組合せを含む（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329を参照のこと）。任意の従来の担体が活性成分に不適合である場合を除いて、治療用組成物または医薬組成物での使用が考慮される。
本明細書において使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の生物学的活性および特性を妨げることなく、かつそれを投与する対象に顕著な刺激を与えることがない塩を指す。
本明細書において使用される「対象」という用語は、哺乳動物および非哺乳動物を含む。哺乳動物の例としては、これらに限定されるものではないが、ヒト、チンパンジー、類人猿、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサギ、イヌ、ネコ、ラット、マウス、およびモルモットなどがある。非哺乳動物の例としては、これらに限定されるものではないが、鳥および魚などがある。しばしば、対象はヒトである。
「このような治療を必要とする対象」という用語は、このような治療から生物学的、医学的、またはクオリティライフの点で利益を得る対象を指す。
本明細書において使用される「治療有効量」という用語は、対象の生物学的または医学的反応、例えば、酵素もしくはタンパク質活性の減少もしくは阻害、または症状の緩和、状態の軽減、疾患における進行の減速もしくは遅延、または疾患の予防などを引き出すであろう本発明の抗体コンジュゲートの量を指す。１つの非限定的実施形態において、「治療有効量」という用語は、対象に投与したときに、状態または障害もしくは疾患を、少なくとも部分的に、軽減、阻害、予防、および／または緩和するのに効果的である本発明の抗体コンジュゲートの量を指す。
本明細書において使用される「ＴＬＲ７アゴニスト」という用語は、Tｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）を活性化することが可能な化合物または抗体コンジュゲートを指す。
本明細書において使用される「治療（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、予防的におよび／もしくは治療的に、疾患もしくは状態の症状を軽減、低下、もしくは緩和する、更なる症状を予防する、症状の根本となる代謝的原因を緩和もしくは予防する、疾患もしくは状態を阻害する、疾患もしくは状態の発症を阻止する、疾患もしくは状態を取り除く、疾患もしくは状態の退行をもたらす、疾患もしくは状態によって生じる状態を取り除く、または疾患もしくは状態の症状を停止する方法を指す。
本明細書において提供される化合物名は、ＣｈｅｍＤｒａｗ Ｕｌｔｒａ ｖｅｒｓｉｏｎ １２．０（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ（登録商標））またはＪＣｈｅｍ ｖｅｒｓｉｏｎ ５．３．１（ＣｈｅｍＡｘｏｎ）を使用して得た。
特に指定がない限り、「本発明の化合物（ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）」、「本発明の化合物（ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）」、または「本明細書において提供される化合物」という用語は、式（Ｉ）の化合物およびその副式（subformulae）の化合物（すなわち、式（Ｉａ）および式（Ｉｂ）の化合物）、ならびにこれらの薬学的に許容される塩、立体異性体（ジアステレオ異性体およびエナンチオマーを含む）、互変異性体、および同位体で標識された化合物（重水素置換物を含む）を指す。
特に指定がない限り、「本発明の抗体コンジュゲート」という用語は、式（ＩＩ）の抗体コンジュゲートおよびその副式の抗体コンジュゲート（すなわち、式（ＩＩａ）および式（ＩＩｂ）の化合物）、ならびにこれらの薬学的に許容される塩、立体異性体（ジアステレオ異性体およびエナンチオマーを含む）、互変異性体、および同位体で標識された化合物（重水素置換物を含む）を指す。
本明細書において使用される「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」という用語、ならびに本発明の文脈（特に請求の範囲の文脈）において使用される類似の用語は、本明細書において特に指示がない限りまたは明らかに文脈と矛盾しない限り、単数と複数の両方を包含するように解釈するべきである。
本発明の免疫賦活化合物
本発明の免疫賦活化合物は、式（Ｉ）の構造を有するＴＬＲ７アゴニストである。
Figure 0006877420
 （式中、
ＲＤは
Figure 0006877420
 でありかつＲＥはＨである、またはＲＥは
Figure 0006877420
 でありかつＲＤはＨであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２ＳＳ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−Ｎ３、
Figure 0006877420
 、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−ＳＨ、−ＳＲ７、−ＯＨ、−ＳＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ６は２−ピリジルまたは４−ピリジルであり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
本発明の化合物の特定の態様および実施例は、以下の追加で述べられた実施形態のリストで提供される。各実施形態で定められた特徴は、他の定められた特徴と組み合わせ、本発明の更なる実施形態を提供してもよいことは認識されるであろう。
実施形態１．式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容される塩。
（式中、
ＲＤは
Figure 0006877420
 でありかつＲＥはＨである、またはＲＥは
Figure 0006877420
 でありかつＲＤはＨであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−Ｎ３、
Figure 0006877420
 、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−ＳＨ、−ＳＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ６は２−ピリジルまたは４−ピリジルであり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
実施形態２．式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の構造およびこれらの薬学的に許容される塩を有する式（Ｉ）の化合物。
Figure 0006877420
 （式中、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２ＳＳ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−Ｎ３、
Figure 0006877420
 、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−ＳＨ、−ＳＲ７、−ＯＨ、−ＳＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ６は２−ピリジルまたは４−ピリジルであり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
実施形態３．式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の化合物およびその薬学的に許容される塩。（式中、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−Ｎ３、
Figure 0006877420
 、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−ＳＨ、−ＳＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ６は２−ピリジルまたは４−ピリジルであり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
実施形態４．式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の構造およびこれらの薬学的に許容される塩を有する式（Ｉ）の化合物。
Figure 0006877420
 （式中、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｎ３、
Figure 0006877420
 、−ＳＨ、−ＳＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 、または−ＣＯ２Ｈであり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ６は２−ピリジルまたは４−ピリジルであり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
実施形態５．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。
（式中、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−であり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
実施形態６．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、
Ｒ１は−ＮＨＲ２であり、Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ− −（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−であり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
実施形態７．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、
Ｒ１は−ＮＨＲ２であり、
Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−であり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
実施形態８．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。
（式中、
Ｒ１は−ＮＨＲ２であり、
Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択される。）
実施形態９．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、
Ｒ１は−ＮＨＲ２であり、
Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ５は
Figure 0006877420
 であり、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択される。）
実施形態１０．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、
Ｒ１は−ＮＨＲ２であり、
Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は−ＯＮＨ２または−ＮＨ２であり、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択される。）
実施形態１１．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、
Ｒ１は−ＮＨＲ２であり、
Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 であり、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択される。）
実施形態１２．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ１は−ＮＨＲ２である。）
実施形態１３．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ１は−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３である。）
実施形態１４．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ２はＣ４アルキルである。）
実施形態１５．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ２はＣ５アルキルである。）
実施形態１６．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ２はＣ６アルキルである。）
実施形態１７．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ３はＬ１ＯＨである。）
実施形態１８．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｌ１は−（ＣＨ２）−である。）
実施形態１９．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｌ１は−（ＣＨ２ＣＨ２）−である。）
実施形態２０．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−＊、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−＊、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−＊、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−＊、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−＊、または−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ ＊であり、＊はＲ４への連結点を示す。）
実施形態２１．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、
Ｌ２は−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ ＊−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−＊、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−＊、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−＊、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−＊、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−＊、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−＊、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−＊、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−＊であり、＊はＲ４への連結点を示す。）
実施形態２２．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−＊または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−＊であり、＊はＲ４への連結点を示す。）
実施形態２３．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、
Ｌ２は−（ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−＊または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−＊であり、＊はＲ４への連結点を示す。）
実施形態２４．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、
Ｌ２は−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−＊、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−＊、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２−＊、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２ＳＳ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−＊、または−（ＣＨ２）ｎＸ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−＊であり、＊はＲ４への連結点を示す。）
実施形態２５．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ４は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態２６．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ４は−ＯＮＨ２、
Figure 0006877420
 、または−ＮＨ２である。）
実施形態２７．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ４は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態２８．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｎ３、
Figure 0006877420
 、−ＳＨ、−ＳＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨＣＨ（＝Ｏ）、または-ＮＨＣＨ（＝Ｓ）である。）
実施形態２９．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ４は
Figure 0006877420
Figure 0006877420
 である。）
実施形態３０．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ４は−ＳＲ７または−ＯＨである。）
実施形態３１．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ５は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態３２．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ１は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態３３．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ１は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態３４．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ１は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態３５．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ２は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態３６．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ２は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態３７．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ２は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態３８．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ２は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態３９．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ２は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態４０．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ３は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態４１．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ３は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態４２．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ３は
Figure 0006877420
実施形態４３．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ３は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態４４．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｘ３は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態４５．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｒ６は２−ピリジルまたは４−ピリジルである。）
実施形態４６．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択される。）
実施形態４７．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、各Ｒ７はＨである。）
実施形態４８．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、各Ｒ７はＣ１〜Ｃ６アルキルである。）
実施形態４９．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、各ｍは独立に１、２、３、および４から選択される。）
実施形態５０．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、各ｍは１または２である。）
実施形態５１．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、各ｎは独立に１、２、３、および４から選択される。）
実施形態５２．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、各ｎは２または３である。）
実施形態５３．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
実施形態５４．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、各ｔは独立に１、２、３、４、５、および６から選択される。）
実施形態５５．
１−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン；
（２Ｒ）−２−アミノ−３−（（１−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）チオ）プロパン酸；
（６Ｒ）−６−（２−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−２−オキソエチル）−５−オキソチオモルホリン−３−カルボン酸；
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン；
（２Ｓ）−２−アミノ−３−（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）チオ）プロパン酸；
（６Ｒ）−６−（２−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−２−オキソエチル）−５−オキソチオモルホリン−３−カルボン酸；
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
１−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン；
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
１−（２−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン；
（２Ｒ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，１９−ジオキソ−１０，１３，１６−トリオキサ−４−チア−７−アザノナデカン−１−酸；
（２Ｒ，５Ｓ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，１９−ジオキソ−１０，１３，１６−トリオキサ−４−チア−７−アザノナデカン−１−酸；
（２Ｒ，５Ｒ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，１９−ジオキソ−１０，１３，１６−トリオキサ−４−チア−７−アザノナデカン−１−酸；
（１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１４−ジオキソ−４，７，１０−トリオキサ−１７−チア−１３−アザイコサン−２０−酸；
（１６Ｒ，１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１４−ジオキソ−４，７，１０−トリオキサ−１７−チア−１３−アザイコサン−２０−酸；
（１６Ｓ，１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１４−ジオキソ−４，７，１０−トリオキサ−１７−チア−１３−アザイコサン−２０−酸；
１−（２１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２１−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコシル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン；
（２Ｒ）−２−アミノ−２８−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，２８−ジオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５−ヘキサオキサ−４−チア−７−アザオクタコサン−１−酸；
（２Ｒ，５Ｓ）−２−アミノ−２８−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，２８−ジオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５−ヘキサオキサ−４−チア−７−アザオクタコサン−１−酸；
（２Ｒ，５Ｒ）−２−アミノ−２８−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，２８−ジオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５−ヘキサオキサ−４−チア−７−アザオクタコサン−１−酸；
（２８Ｒ）−２８−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２５−カルボキシ−１，２３−ジオキソ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−２６−チア−２２−アザノナコサン−２９−酸；
（２５Ｒ，２８Ｒ）−２８−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２５−カルボキシ−１，２３−ジオキソ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−２６−チア−２２−アザノナコサン−２９−酸；
（２５Ｓ，２８Ｒ）−２８−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２５−カルボキシ−１，２３−ジオキソ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−２６−チア−２２−アザノナコサン−２９−酸；
１−（（１−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン；
（２Ｒ）−２−アミノ−３−（（２−（（（１−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−２−オキソエチル）チオ）ペンタン二酸；
Ｎ−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド；
（１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−（カルボキシメチル）−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１４−ジアザイコサン−２０−酸；
（１６Ｓ，１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−（カルボキシメチル）−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１４−ジアザイコサン−２０−酸；
（１６Ｒ，１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−（カルボキシメチル）−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１４−ジアザイコサン−２０−酸；
（２０Ｒ）−２０−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１７−カルボキシ−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１８−チア−１０，１４−ジアザヘンイコサン−２１−酸；
（１７Ｒ，２０Ｒ）−２０−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１７−カルボキシ−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１８−チア−１０，１４−ジアザヘンイコサン−２１−酸；
（１７Ｓ，２０Ｒ）−２０−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１７−カルボキシ−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１８−チア−１０，１４−ジアザヘンイコサン−２１−酸；
５−（４−（（４−（３−アミノプロピル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン；
１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロパン−１−オン；
Ｎ−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド；
（２Ｒ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，９，１９−トリオキソ−１３，１６−ジオキサ−４−チア−７，１０−ジアザノナデカン−１−酸；
（２Ｒ，５Ｓ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，９，１９−トリオキソ−１３，１６−ジオキサ−４−チア−７，１０−ジアザノナデカン−１−酸；
（２Ｒ，５Ｒ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，９，１９−トリオキソ−１３，１６−ジオキサ−４−チア−７，１０−ジアザノナデカン−１−酸；
（１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１１，１４−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１３−ジアザイコサン−２０−酸；
（１６Ｒ，１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１１，１４−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１３−ジアザイコサン−２０−酸；
（１６Ｓ，１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１１，１４−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１３−ジアザイコサン−２０−酸；
４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）−Ｎ−（２−（２−（２−（２−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）ピペラジン−１−カルボキサミド；
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
１−（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン；
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
１−（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン；
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
Ｎ−（２１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２１−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコシル）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド；
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート；
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸；
（Ｓ）−１−（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン；
１−（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン；
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
（Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸；
１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−（アミノオキシ）エタノン；
１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−アミノエトキシ）プロパン−１−オン；
Ｎ−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド；
（Ｓ）−１−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−（アミノオキシ）エタノン；
（Ｓ）−１−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロパン−１−オン；
（Ｓ）−Ｎ−（２−（２−（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド；
Ｎ−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド；
５−（４−（（４−（２−（２−（アミノオキシ）エトキシ）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン；
Ｎ−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド；
５−（４−（（４−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン；
Ｎ−（２−（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド；
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート；
（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート；
（Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸；
（Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸；
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）アミノ）−５−オキソペンタノエート；
（Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）アミノ）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸；
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート；
（Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸；
ペルフルオロフェニル５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート；
ペルフルオロフェニル３−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）プロパノエート；
ペルフルオロフェニル３−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）プロパノエート；
（Ｓ）−２−アミノ−６−（３−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）プロパンアミド）ヘキサン酸、および
Ｎ−（１５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデシル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド
から選択される、式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。
実施形態５６．
１−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン；
１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン；
１−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、および
１−（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン
から選択される、式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。
実施形態５７．
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸；
４−（（Ｒ）−６−アミノ−２−（（Ｓ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）ヘキサンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート；
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート；
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸；
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸；
Ｎ−（２−（（５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−メチル−５−オキソペンタン−２−イル）ジスルファニル）エチル）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド；
１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−４−メチル−４−（メチルチオ）ペンタン−１−オン；
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸；
（２Ｒ，２’Ｒ）−３，３’−（（２−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−オキソエトキシ）イミノ）プロパン−１，３−ジイル）ビス（スルファンジイル））ビス（２−アミノプロパン酸）；
（Ｒ）−２−アミノ−６−（（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）メチル）−１７−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１０，１７−ジオキソ−８，１４−ジオキサ−４−チア−７，１１−ジアザヘプタデカ−６−エン酸、および
２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オール
から選択される、式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。
さらに、重い同位体、特に重水素（すなわち、２ＨまたはＤ）で置換すると、より優れた代謝安定性、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期の増加、または必要とされる投薬量の減少、または治療指数の改善より生じる特定の治療的利点が得られることがある。本文脈における重水素は、式（Ｉ）の化合物の置換基と見なされることは理解されよう。このような重い同位体、特に重水素の濃度は、同位体濃縮係数によって定義されてもよい。本明細書において使用される「同位体濃縮係数」という用語は、特定の同位体の、同位体存在度と天然存在度との間の比を意味する。本発明の化合物における置換基が重水素を示す場合、このような化合物の各指定された重水素原子に関する同位体濃縮係数は、少なくとも３５００（各指定された重水素原子での重水素組み込み率５２.５％）、少なくとも４０００（重水素組み込み率６０％）、少なくとも４５００（重水素組み込み率６７.５％）、少なくとも５０００（重水素組み込み率７５％）、少なくとも５５００（重水素組み込み率８２.５％）、少なくとも６０００（重水素組み込み率９０％）、少なくとも６３３３.３（重水素組み込み率９５％）、少なくとも６４６６.７（重水素組み込み率９７％）、少なくとも６６００（重水素組み込み率９９％）、または少なくとも６６３３.３（重水素組み込み率９９.５％）である。
本発明による薬学的に許容される溶媒和物としては、結晶化溶媒が同位体置換されていてもよいもの、例えば、Ｄ２Ｏ、ｄ６−アセトン、ｄ６−ＤＭＳＯがある。
式（Ｉ）およびその副式の化合物を作製する方法
式（Ｉ）およびその副式の化合物を調製する一般的な手順を本明細書において述べる。この記載された反応において、反応性官能基、例えば、ヒドロキシ基、アミノ基、イミノ基、チオール基、またはカルボキシ基は、これらが最終生成物において所望される場合は、反応におけるこれらの不要な関与を避けるように保護してもよい。本文の範囲内で、本発明の化合物の特に所望される最終生成物の構成要素ではない容易に除去可能な基のみを、文脈上他を示すことがない限り、「保護基」と示す。このような保護基による官能基の保護、保護基自体、およびこれらの開裂反応は、例えば、J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973、T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999、"The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981、"Methoden der organischen Chemie" (Methods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974、H.-D. Jakubke and H. Jeschkeit, "Aminosauren, Peptide, Proteine" (Amino acids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982、およびJochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides and Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974などの標準的な参考文献に記載されている。保護基の特徴は、例えば、加溶媒分解、還元、光分解、または生理学的状態下での代替方法（例えば、酵素的切断によって）によって容易に除去することができる（すなわち、望ましくない２次反応が起こらない）ことである。
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される式（Ｉ）およびその副式の化合物は、式（Ｉ）およびその副式の化合物の遊離塩基形態を、化学量論量の適切な薬学的に許容される有機酸もしくは無機酸または好適な陰イオン交換試薬と反応させることによって、薬学的に許容される酸付加塩として調製される。
このような反応は、典型的には、水中もしくは有機溶媒中、または２種類の混合物中で行われる。一般的には、実施可能である場合、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性媒体の使用が望ましい。
あるいは、式（Ｉ）およびその副式の塩形態は、出発材料または中間体の塩を使用して調製される。
少なくとも１つの造塩基（salt-forming group）を有する本発明の化合物の塩は、当業者に既知の方法で調製してもよい。例えば、酸性基を有する本発明の化合物の塩は、例えば化合物を、好適な有機カルボン酸のアルカリ金属塩、例えば２−エチルヘキサン酸ナトリウムなどの金属化合物と、水酸化ナトリウムもしくは水酸化カリウム、炭酸ナトリウムもしくは炭酸カリウム、または炭酸水素ナトリウムもしくは炭酸水素カリウムなどの対応する水酸化物、炭酸塩、または炭酸水素塩などの有機アルカリ金属またはアルカリ土類金属の化合物と、対応するカルシウム化合物と、またはアンモニアもしくは好適な有機アミンと処理することによって形成されてもよく、好ましくは化学量論量のまたはわずかに過剰の塩形成剤が使用される。本発明の化合物の酸付加塩は、慣用の方法で、例えば、化合物を酸または好適な陰イオン交換試薬で処理することによって得られる。酸性および塩基性造塩基、例えば、遊離カルボキシル基および遊離アミノ基を含む本発明の化合物の内部塩は、例えば、酸付加塩などの塩を例えば弱塩基を用いて等電点に中和することによって、またはイオン交換体を用いて処理することによって形成してもよい。
塩は、当業者に既知の方法に従って、遊離化合物に変換することができる。金属およびアンモニウム塩は、例えば、好適な酸および酸付加塩で処理することによって、例えば、好適な塩基性の薬剤で処理することによって変換することができる。
すべての上述の方法ステップは、具体的に挙げられたものを含む当業者に既知の反応条件下で、例えば使用される試薬に対して不活性でありかつこれらを溶解する溶媒もしくは希釈剤を含む溶媒もしくは希釈剤の非存在下もしくは慣例的には存在下で、触媒、縮合剤、もしくは中和剤、例えばＨ＋形態の陽イオン交換体などの例えばイオン交換体の非存在下もしくは存在下で、反応および／もしくは反応物の性質に依存して、低温、通常温度、もしくは高温で、例えば約−８０℃〜約１５０℃、例えば−８０℃〜−６０℃、室温、−２０℃〜４０℃、もしくは還流温度を含む約−１００℃〜約１９０℃の温度範囲で、大気圧下、もしくは密閉容器中で、必要に応じて加圧下で、ならびに／または不活性雰囲気中で、例えばアルゴンもしくは窒素雰囲気下で行うことができる。
式（Ｉ）およびその副式の化合物の薬学的に許容される酸付加塩としては、これらに限定されるものではないが、酢酸塩、アジピン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、臭化物塩／臭化水素酸塩、カンファースルホン酸塩、カンシル酸塩、カプリン酸塩、塩化物塩／塩酸塩、クロロテオフィリネート（chlorotheophyllinate）、クエン酸塩、エジシル酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプテート（gluceptate）、グルコヘプトン酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸塩、グリコール酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、メチル硫酸塩、ムケート（mucate）、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、２−ナプシル酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、トリフェナテート（trifenatate）、トリフェニル酢酸塩、およびキシナホ酸塩の形態がある。
式（Ｉ）およびその副式の化合物の特定の薬学的に許容される酸付加塩を形成するために使用される有機酸または無機酸としては、これらに限定されるものではないが、酢酸、アジピン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、炭酸、カンファースルホン酸、カプリン酸、クロロテオフィリネート（chlorotheophyllinate）、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、Ｄ−グリセロ−Ｄ−グロ−ヘプトニック酸、ガラクタル酸、ガラクタル酸／粘液酸、グルセプト酸（gluceptic acid）、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸（glutamatic acid）、グルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩化水素酸、ヨウ化水素酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリル硫酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、メシル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフトエ酸、１−ヒドロキシ基−２−ナフトエ酸、ナフタレンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オクタデカン酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸塩、リン酸、ポリガラクツロン酸、プロピオン酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、スルホサリチル酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、およびトリフェニル酢酸がある。
１つの実施形態において、本発明は、酢酸塩、アジピン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、臭化物塩／臭化水素酸塩、カンファースルホン酸塩、カンシル酸塩、カプリン酸塩、塩化物塩／塩酸塩、クロロテオフィロネート（chlortheophyllonate）、クエン酸塩、エジシル酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプテート（gluceptate）、グルコヘプトン酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸塩、グリコール酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、メチル硫酸塩、ムケート（mucate）、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、２−ナプシル酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、トリフェナテート（trifenatate）、トリフェニル酢酸塩、またはキシナホ酸塩の形態の３−（３−フルオロ−４−（３−（ピペリジン−４−イル）プロポキシ）フェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミンを提供する。
１つの実施形態において、本発明は、酢酸塩、アジピン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、臭化物塩／臭化水素酸塩、カンファースルホン酸塩、カンシル酸塩、カプリン酸塩、塩化物塩／塩酸塩、クロロテオフィロネート、クエン酸塩、エジシル酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプテート、グルコヘプトン酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸塩、グリコール酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、メチル硫酸塩、ムケート、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、２−ナプシル酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、トリフェナテート、トリフェニル酢酸塩、またはキシナホ酸塩の形態の３−（４−（（（１ｒ，４ｒ）−４−アミノシクロヘキシル）メトキシ）−３−フルオロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミンを提供する。
１つの実施形態において、本発明は、酢酸塩、アジピン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、臭化物塩／臭化水素酸塩、カンファースルホン酸塩、カンシル酸塩、カプリン酸塩、塩化物塩／塩酸塩、クロロテオフィロネート、クエン酸塩、エジシル酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプテート、グルコヘプトン酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸塩、グリコール酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、メチル硫酸塩、ムケート、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、２−ナプシル酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、トリフェナテート、トリフェニル酢酸塩、またはキシナホ酸塩の形態の３−（４−（（４−アミノビシクロ［２．２．２］オクタン−１−イル）メトキシ）−３−フルオロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミンを提供する。
１つの実施形態において、本発明は、酢酸塩、アジピン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、臭化物塩／臭化水素酸塩、カンファースルホン酸塩、カンシル酸塩、カプリン酸塩、塩化物塩／塩酸塩、クロロテオフィロネート、クエン酸塩、エジシル酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプテート、グルコヘプトン酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸塩、グリコール酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、メチル硫酸塩、ムケート、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、２−ナプシル酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、トリフェナテート、トリフェニル酢酸塩、またはキシナホ酸塩の形態の３−（４−（（４−アミノビシクロ［２．２．２］オクタン−１−イル）メトキシ）−３−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミンを提供する。
１つの実施形態において、本発明は、酢酸塩、アジピン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、臭化物塩／臭化水素酸塩、カンファースルホン酸塩、カンシル酸塩、カプリン酸塩、塩化物塩／塩酸塩、クロロテオフィロネート、クエン酸塩、エジシル酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプテート、グルコヘプトン酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸塩、グリコール酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、メチル硫酸塩、ムケート、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、２−ナプシル酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、トリフェナテート、トリフェニル酢酸塩、またはキシナホ酸塩の形態の４−（（２−クロロ−４−（６−メトキシ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）フェノキシ）メチル）ビシクロ［２．２．２］オクタン−１−アミンを提供する。
更なる好適な酸付加塩のリストは、例えば、“Remington's Pharmaceutical Sciences”, 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985)、および“Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use”by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)で見い出すことができる。
任意の特定の反応に好適な溶媒は、具体的に挙げられたものを含み、または方法の説明において特に指示がない限り、例えば、水、低級アルキル−低級アルカン酸エステル、例えば、酢酸エチルなどのエステル、脂肪族エーテル、例えばジエチルエーテル、または環状エーテル、例えばテトラヒドロフランもしくはジオキサンなどのエーテル、ベンゼンまたはトルエンなどの液体芳香族炭化水素、メタノール、エタノール、または１−もしくは２−プロパノールなどのアルコール、アセトニトリルなどのニトリル、塩化メチレンもしくはクロロホルムなどのハロゲン化炭化水素、ジメチルホルムアミドもしくはジメチルアセトアミドなどの酸アミド、複素環式窒素塩基、例えばピリジンもしくはＮ−メチルピロリジン−２−オンなどの塩基、低級アルカン酸無水物、例えば、酢酸無水物などのカルボン酸無水物、シクロヘキサン、ヘキサンもしくはイソペンタン、メチルシクロヘキサンなどの環状、直鎖、もしくは分岐の炭化水素、またはこれらの溶媒の混合物、例えば水溶液から選択してもよい。このような溶媒混合物はまた、例えば、クロマトグラフィーまたは分割による後処理で使用してもよい。
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）およびその副式の化合物は、溶媒和物（例えば水和物）として調製または形成される。ある特定の実施形態において、式（Ｉ）およびその副式の化合物の水和物は、ジオキシン、テトラヒドロフラン、またはメタノールなどの有機溶媒を使用して、水性溶媒／有機溶媒混合物から再結晶化することによって調製される。さらに、その塩を含む本発明の化合物はまた、その水和物の形態で得ることができ、またはその結晶化に使用した他の溶媒を含むことができる。
本発明の化合物は、薬学的に許容される溶媒（水を含む）との溶媒和物を本質的にまたは意図的に形成してもよく、したがって、本発明は溶媒和物形態と非溶媒和物の両方を含む。「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物（その薬学的に許容される塩を含む）の、１つまたは複数の溶媒分子との分子複合体を指す。このような溶媒分子、例えば、水、エタノールなどは、薬学分野において通常使用されるものであり、これが受容者に無害であることは既知である。「水和物」という用語は、溶媒分子が水である複合体を指す。
本発明の化合物の任意の不斉原子（例えば、炭素など）はラセミ体でまたはエナンチオマー的に富化されて、例えば、（Ｒ）−、（Ｓ）−、または（Ｒ，Ｓ）−配置で存在することができる。ある特定の実施形態において、各不斉原子は、（Ｒ）−または（Ｓ）−配置において、少なくとも５０％エナンチオマー過剰、少なくとも６０％エナンチオマー過剰、少なくとも７０％エナンチオマー過剰、少なくとも８０％エナンチオマー過剰、少なくとも９０％エナンチオマー過剰、少なくとも９５％エナンチオマー過剰、または少なくとも９９％エナンチオマー過剰である。不飽和二重結合を有する原子における置換基は、可能であれば、シス−（Ｚ）−またはトランス−（Ｅ）−型で存在していてもよい。
その結果、本明細書において使用される本発明の化合物は、可能性がある、異性体、回転異性体、アトロプ異性体、互変異性体、またはこれらの混合物のうちの１つの形態で、例えば、実質的に純粋な幾何（シスまたはトランス）異性体、ジアステレオマー、光学異性体（対掌体）、ラセミ体、またはこれらの混合物とすることができる。
任意の得られた異性体混合物は、例えば、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶化によって、構成要素の物理化学的な違いに基づき、純粋なまたは実質的に純粋な、幾何もしくは光学異性体、ジアステレオマー、ラセミ体に分離することができる。
任意の得られた最終生成物または中間体のラセミ体は、既知の方法によって、例えば、光学活性酸または塩基を用いて得たそのジアステレオマー塩を分離し、光学的に活性な酸性または塩基性化合物を遊離することによって、光学的対掌体に分割することができる。したがって、特に、塩基性部分を使用し、例えば、光学的に活性な酸、例えば、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジ−Ｏ，Ｏ’−ｐ−トルオイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、またはカンファー−１０−スルホン酸を用いて形成された塩を分別結晶化することによって、本発明の化合物をその光学的対掌体に分割してもよい。ラセミ生成物はまた、キラルクロマトグラフィー、例えば高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって、キラル吸着剤を使用して分割することもできる。
ある特定の実施形態において、式（Ｉ）またはその副式の化合物は、それらの個々の立体異性体として調製される。他の実施形態において、式（Ｉ）またはその副式の化合物は、化合物のラセミ混合物を光学的に活性な分割剤と反応させ、一対のジアステレオ異性体化合物を形成し、ジアステレオマーを分離し、光学的に純粋なエナンチオマーを回収することによって、それらの個々の立体異性体として調製される。ある特定の実施形態において、エナンチオマーの分割は、式（Ｉ）もしくはその副式の化合物の共有ジアステレオマー誘導体を使用して、または分離可能な複合体（例えば、結晶性ジアステレオマー塩）を使用することによって行われる。ジアステレオマーは、個別の物理的特性（例えば、融点、沸点、溶解度、反応性など）を有し、これらの相違点を利用して容易に分離される。ある特定の実施形態において、ジアステレオマーは、クロマトグラフィーによって、または溶解度の違いに基づいた分離／分割技法によって分離される。次いで、光学的に純粋なエナンチオマーは、分割剤とともに、ラセミ化を起こさない任意の実用的手段によって回収される。これらのラセミ混合物由来の化合物の立体異性物を分割するのに適用可能な技法のより詳細な説明は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions,”John Wiley And Sons, Inc., 1981に見い出すことができる。
本発明に従って入手可能な異性体混合物は、当業者に既知の方法で個々の異性体に分離することができ、ジアステレオ異性体は、例えば、多相溶媒混合物間の分配、再結晶、および／または例えばシリカゲルでのクロマトグラフィー分離、もしくは例えば逆相カラムでの中圧液体クロマトグラフィーによって分離することができ、ラセミ体は、例えば、光学的に純粋な塩形成試薬を用いて塩を形成し、このようにして入手可能なジアステレオ異性体混合物を、例えば分別結晶化の手法によって、または、光学的活性カラム材料でのクロマトグラフィーによって分離することで分離することができる。
出発材料および手順の選択によって、本発明の化合物の特定の実施形態は、可能な異性体のうちの１つの形態でまたはこれらの混合物として、例えば、不斉炭素原子の数によって、純粋な光学異性体として、またはラセミ体およびジアステレオ異性体混合物などの異性体混合物として存在する。本発明は、ラセミ混合物、ジアステレオ異性体混合物、および光学的に純粋な形態を含むすべてのこのような可能な異性体を含むこと意味する。光学的に活性な（Ｒ）−および（Ｓ）−異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を使用して調製してもよい、または従来の技法を使用して分割してもよい。化合物が二重結合を含む場合は、置換基は、ＥまたはＺ配置であってもよい。化合物が二置換シクロアルキルを含む場合は、シクロアルキル置換基は、シス−またはトランス配置を有していてもよい。すべての互変異性形態もまた、含まれることが意図される。
中間体および最終生成物は、標準的な方法に従って、例えば、クロマトグラフィー法、分配法、および（再）結晶化などを使用して、後処理および／または精製することができる。本発明はまた、方法の任意の段階で中間体として入手可能な化合物を出発材料として使用し、かつ残りの方法ステップを行う、または出発材料を反応条件下で形成する、もしくは誘導体の形態で、例えば保護形態でもしくは塩形態で使用する、または本発明による方法によって入手可能な化合物を方法条件下で生成しかつｉｎ ｓｉｔｕでさらに加工する方法の形態に関する。本発明の化合物を合成するために利用されるすべての出発材料、ビルディングブロック、試薬、酸、塩基、脱水剤、溶媒、および触媒は、市販である、または当業者に既知の有機合成法によって生成することができる。
式（Ｉ）およびその副式（式（Ｉａ）および式（Ｉｂ））の化合物は、本明細書の記載の一般的なスキームで述べられかつ実施例に示される方法によって作製される。
スキーム１Ａは、式（Ａ１）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、リンカー−Ｒ４部分は、アミド結合によって中間体（ｉｎｔ−Ａ１）に連結している。スキーム１Ａにおいて、リンカーは、末端カルボニル部分を有する任意のリンカー（Ｌ’）（すなわち−Ｌ’−Ｃ（＝Ｏ））である。また、スキーム１Ａにおいて、Ｒ１は本明細書に記載のとおりであり、かつＲ４は、チオール、ジスルフィド、アミン、ケトン、ジケトン、アジド、またはアルキンと反応することができる反応性部分である。スキーム１Ｂは、式（Ａ１）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、リンカー−Ｒ４部分は、アミド結合によって中間体（ｉｎｔ−Ａ１）に連結している。スキーム１Ｂにおいて、リンカーは、末端カルボニル部分を有する任意のリンカー（Ｌ’）（すなわち−Ｌ’−Ｃ（＝Ｏ））である。また、スキーム１Ｂにおいて、Ｒ１は本明細書に記載のとおりであり、かつＲ４部分はアミノ基（ヒドロキシルアミンまたはアミンなど）を有し、かつＲＢは保護されたアミノ基を有する部分であり、Ｐｒｏｔは、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、およびＣｂｚなどの保護基である。
Figure 0006877420
 このようなアミド結合の形成は、加熱、ＥＤＣＩカップリング、ＨＡＴＵカップリング、ＨＢＴＵカップリング、ＴＢＴＵカップリング、またはＴ３Ｐカップリングを使用して達成することができる。
スキーム２Ａは、式（Ａ２）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、リンカー−Ｒ４部分は、アミド結合によって中間体（ｉｎｔ−Ａ２）に連結している。スキーム２Ａにおいて、リンカーは、末端カルボニル部分を有する任意のリンカー（Ｌ’）（すなわち−Ｌ’−Ｃ（＝Ｏ））である。また、スキーム２Ａにおいて、Ｒ１は本明細書に記載のとおりであり、かつＲ４は、チオール、ジスルフィド、アミン、ケトン、ジケトン、アジド、またはアルキンと反応することができる反応性部分である。スキーム２Ｂは、式（Ａ２）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、リンカー−Ｒ４部分は、アミド結合によって中間体（ｉｎｔ−Ａ２）に連結している。スキーム２Ｂにおいて、リンカーは、末端カルボニル部分を有する任意のリンカー（Ｌ’）（すなわち−Ｌ’−Ｃ（＝Ｏ））である。また、スキーム２Ｂにおいて、Ｒ１は本明細書に記載のとおりであり、かつＲ４部分はアミノ基（ヒドロキシルアミンまたはアミンなど）を有し、かつＲＢは保護されたアミノ基を有する部分であり、Ｐｒｏｔは、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、およびＣｂｚなどの保護基である。
Figure 0006877420
 このようなアミド結合の形成は、加熱、ＥＤＣＩカップリング、ＨＡＴＵカップリング、ＨＢＴＵカップリング、ＴＢＴＵカップリング、またはＴ３Ｐカップリングを使用して達成することができる。
スキーム３Ａは、式（Ｉａ）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、−Ｌ２−Ｒ４部分は、アミド結合によって中間体（ｉｎｔ−Ａ１）に連結している。このようなアミド結合の形成は、加熱、ＥＤＣＩカップリング、ＨＡＴＵカップリング、ＨＢＴＵカップリング、ＴＢＴＵカップリング、またはＴ３Ｐカップリングを使用して達成することができる。スキーム３Ａにおいて、リンカー（Ｌ２）は、末端カルボニル部分を有するリンカー部分（ＬＡ）（すなわち−ＬＡ−Ｃ（＝Ｏ））を含む。スキーム３Ｂは、式（Ｉ）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、−Ｌ２−Ｒ４部分は、アミド結合によって中間体（ｉｎｔ−Ａ１）に連結している。このようなアミド結合の形成は、加熱、ＥＤＣＩカップリング、ＨＡＴＵカップリング、ＨＢＴＵカップリング、ＴＢＴＵカップリング、またはＴ３Ｐカップリングを使用して達成することができる。スキーム３Ｂにおいて、リンカー（Ｌ２）は末端カルボニル基を有するリンカー部分（ＬＡ）（すなわち−ＬＡ−Ｃ（＝Ｏ））を含み、ＲＢは保護されたアミノ基を有する部分であり、Ｐｒｏｔは、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、およびＣｂｚなどの保護基である。
Figure 0006877420
 スキーム４Ａは、式（Ｉｂ）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、−Ｌ２−Ｒ４部分は、アミド結合によって中間体（ｉｎｔ−Ａ２）に連結している。このようなアミド結合の形成は、加熱、ＥＤＣＩカップリング、ＨＡＴＵカップリング、ＨＢＴＵカップリング、ＴＢＴＵカップリング、またはＴ３Ｐカップリングを使用して達成することができる。スキーム４Ａにおいて、リンカー（Ｌ２）は、末端カルボニル部分を有するリンカー部分（ＬＡ）（すなわち−ＬＡ−Ｃ（＝Ｏ））を含む。スキーム４Ｂは、式（Ｉｂ）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、−Ｌ２−Ｒ４部分は、アミド結合によって中間体（ｉｎｔ−Ａ２）に連結している。このようなアミド結合の形成は、加熱、ＥＤＣＩカップリング、ＨＡＴＵカップリング、ＨＢＴＵカップリング、ＴＢＴＵカップリング、またはＴ３Ｐカップリングを使用して達成することができる。スキーム４Ｂにおいて、リンカー（Ｌ２）は末端カルボニル基を有するリンカー部分（ＬＡ）（すなわち−ＬＡ−Ｃ（＝Ｏ））を含み、ＲＢは保護されたアミノ基を有する部分であり、Ｐｒｏｔは、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、およびＣｂｚなどの保護基である。
Figure 0006877420
スキーム３および４において、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−Ｎ３、
Figure 0006877420
 、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−ＳＨ、−ＳＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
Figure 0006877420
 であり、
ＲＢは−ＯＮＨ−であり、
ＬＡは−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｌ２は−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ１、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は本明細書で定義されたとおりである。
スキーム５は、式（Ｂ１）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、−リンカー−Ｒ４部分は中間体（ｉｎｔ−Ａ１）の第２級アミンをアルキル化することによって中間体（ｉｎｔ−Ａ１）に連結される。スキーム５において、リンカー（ＬＡ）は、最初に末端アルデヒドで官能化され（すなわち、−ＬＡ−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ）、次いで中間体（ｉｎｔ−Ａ１）の第２級アミンと反応させる。また、スキーム５において、Ｒ１は本明細書に記載のとおりであり、かつＲ４は、チオール、ジスルフィド、アミン、ケトン、ジケトン、アジド、またはアルキンと反応することができる反応性部分である。
Figure 0006877420
 このようなＮ−アルキル化は、ＮａＣＮＢＨ３、ＮａＢＨ４、またはＮａＢＨ（ＯＡＣ）３などの還元剤を使用して達成することができる。
スキーム６は、式（Ｂ２）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、リンカー−Ｒ４部分は中間体（ｉｎｔ−Ａ２）の第２級アミンをアルキル化することによって中間体（ｉｎｔ−Ａ２）に連結される。スキーム６において、リンカー（ＬＡ）は、最初に末端アルデヒドで官能化され（すなわち、−ＬＡ−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ）、次いで中間体（ｉｎｔ−Ａ２）の第２級アミンと反応させる。また、スキーム６において、Ｒ１は本明細書に記載のとおりであり、かつＲ４は、チオール、ジスルフィド、アミン、ケトン、ジケトン、アジド、またはアルキンと反応することができる反応性部分である。
Figure 0006877420
 このようなＮ−アルキル化は、ＮａＣＮＢＨ３、ＮａＢＨ４、またはＮａＢＨ（ＯＡＣ）３などの還元剤を使用して達成することができる。
スキーム７は、式（Ｉａ）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、−Ｌ２−Ｒ４部分は中間体（ｉｎｔ−Ａ１）の第２級アミンをアルキル化することによって中間体（ｉｎｔ−Ａ１）に連結される。スキーム７において、リンカー部分ＬＡは、最初に末端アルデヒドで官能化され（すなわち、−Ｌ’−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ）、次いで中間体（ｉｎｔ−Ａ１）の第２級アミンと反応させ、それによって、末端−ＣＨ２−基を有するリンカー部分ＬＡを含む、リンカーＬ２が形成される。このようなＮ−アルキル化は、ＮａＣＮＢＨ３、ＮａＢＨ４、またはＮａＢＨ（ＯＡＣ）３などの還元剤を使用して達成することができる。
Figure 0006877420
 スキーム８は、式（Ｉｂ）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、−Ｌ２−Ｒ４部分は中間体（ｉｎｔ−Ａ２）の第２級アミンをアルキル化することによって中間体（ｉｎｔ−Ａ２）に連結される。スキーム８において、リンカー部分（ＬＡ）は、最初に末端アルデヒドで官能化され（すなわち、−Ｌ’−Ｃ（＝Ｏ）Ｈ）、次いで中間体（ｉｎｔ−Ａ２）の第２級アミンと反応させ、それによって、末端−ＣＨ２−基を有するリンカー部分ＬＡを含む、リンカーＬ２が形成される。このようなＮ−アルキル化は、ＮａＣＮＢＨ３、ＮａＢＨ４、またはＮａＢＨ（ＯＡＣ）３などの還元剤を使用して達成することができる。
Figure 0006877420
 スキーム７および８において、
Ｒ４はスキーム３および４で定義されたとおりであり、
ＬＡは（ＣＨ２）（ｎ−１）−、−（（ＣＨ２）（ｎ−１）Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）（ｎ−１）Ｘ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）（ｎ−１）ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）（ｎ−１）ＮＨＣ（＝Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、または−（（ＣＨ２）（ｎ−１）Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎであり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、または−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ１およびＲ７は、本明細書で定義されたとおりである。
スキーム９は、式（Ａ１）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、−リンカー−Ｒ４部分は、アミド結合によって中間体（ｉｎｔ−Ａ１）に連結している。スキーム９において、リンカーは、末端カルボニル部分を有する任意のリンカー（Ｌ’）（すなわち−Ｌ’−Ｃ（＝Ｏ））である。また、スキーム９において、Ｒ１は本明細書に記載のとおりであり、Ｒ４は
Figure 0006877420
 であり、ＲＣは
Figure 0006877420
 である。
Figure 0006877420
 このようなアミド結合の形成は、加熱、ＥＤＣＩカップリング、ＨＡＴＵカップリング、ＨＢＴＵカップリング、ＴＢＴＵカップリング、またはＴ３Ｐカップリングを使用して達成することができる。
スキーム１０は、式（Ａ２）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、−リンカー−Ｒ４部分は、アミド結合によって中間体（ｉｎｔ−Ａ２）に連結している。スキーム１０において、リンカーは、末端カルボニル部分を有する任意のリンカー（Ｌ’）（すなわち−Ｌ’−Ｃ（＝Ｏ））である。また、スキーム１０において、Ｒ１は本明細書に記載のとおりであり、Ｒ４は
Figure 0006877420
 であり、ＲＣは
Figure 0006877420
 である。
Figure 0006877420
 このようなアミド結合の形成は、加熱、ＥＤＣＩカップリング、ＨＡＴＵカップリング、ＨＢＴＵカップリング、ＴＢＴＵカップリング、またはＴ３Ｐカップリングを使用して達成することができる。
スキーム１１は、式（Ｉａ）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、−Ｌ２−Ｒ４部分は、アミド結合によって中間体（ｉｎｔ−Ａ１）に連結している。スキーム１１において、リンカー（Ｌ２）は、末端カルボニル部分を有するリンカー部分（ＬＡ）（すなわち−ＬＡ−Ｃ（＝Ｏ））を含む。このようなアミド結合の形成は、加熱、ＥＤＣＩカップリング、ＨＡＴＵカップリング、ＨＢＴＵカップリング、ＴＢＴＵカップリング、またはＴ３Ｐカップリングを使用して達成することができる。
Figure 0006877420
スキーム１２は、式（Ｉｂ）の特定の化合物を作製するのに使用される非限定的な合成スキームを示し、−Ｌ２−Ｒ４部分は、アミド結合によって中間体（ｉｎｔ−Ａ２）に連結している。スキーム１２において、リンカー（Ｌ２）は、末端カルボニル部分を有するリンカー部分（ＬＡ）（すなわち−ＬＡ−Ｃ（＝Ｏ））を含む。このようなアミド結合の形成は、加熱、ＥＤＣＩカップリング、ＨＡＴＵカップリング、ＨＢＴＵカップリング、ＴＢＴＵカップリング、またはＴ３Ｐカップリングを使用して達成することができる。
Figure 0006877420
スキーム１１および１２において、
Ｒ４は
Figure 0006877420
 であり、
ＲＣは
Figure 0006877420
 であり、
ＬＡは−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−であり、
Ｌ２は−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−であり、Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ１およびＲ７は、本明細書で定義されたとおりである。
中間体
本発明の式（Ｉ）の化合物およびその副式の化合物（すなわち、式（Ｉａ）および式（Ｉｂ）の化合物）を作製するのに使用される中間体の合成は以下のとおりである。
中間体１
５−（２−メトキシ−４−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１）の合成
Figure 0006877420
 ステップ１：メチル４−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンゾエート（３）の調製
丸底フラスコに、４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２−アミン（１、市販品、１．０当量）、メチル４−（ブロモメチル）−３−メトキシベンゾエート（２、市販品、１．０当量）、炭酸セシウム（１．０当量）、およびＤＭＦ（１．０Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、次いで、溶媒を真空中で除去した。得られた混合物にＥｔＯＡｃを添加し、溶媒を真空中で除去した。この混合物にＤＣＭを添加し、溶媒を真空中で除去した。次いで、粗製反応混合物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（０〜１０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ勾配）によって精製し、メチル４−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンゾエート（３）を固形物として得た。
ステップ２：（４−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシフェニル）メタノール（４）
ＴＨＦ中の水素化リチウムアルミニウム（ＬＡＨ）（１．０当量、粉末）のスラリー（０．３Ｍ）を丸底フラスコ中で調製し、０℃に冷却し、１５分間激しく撹拌した。この混合物に、メチル４−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンゾエート（３、１．０当量、前ステップから得たもの）を一度に添加した。氷浴を外し、反応混合物を室温で４時間撹拌し、追加のＬＡＨを、反応が完了するまで添加した。Ｅｔ２Ｏを反応混合物に添加し、次いで、混合物をエルレンマイヤーフラスコに移し、激しく撹拌しながら０℃に冷却した。次いで、反応物を、飽和硫酸ナトリウム溶液をゆっくりと添加することによってクエンチした。白色沈殿物が得られ、その混合物を、セライトを含むフリットに通してろ過し、ＴＨＦおよびＥｔ２Ｏで洗浄した。次いで、揮発性物質を真空中で除去し、その材料をさらに精製せずに次のステップで使用した。
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５）
塩化チオニル（１０．０当量）を、ＤＣＭ中の（４−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシフェニル）メタノール（４、１．０当量、ステップ２から得たもの）（０．１Ｍ）を含む丸底フラスコに、０℃で添加した。次いで、氷浴を外し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。次いで、反応混合物を冷却して０℃に戻し、ＮａＯＨ（１．０Ｍ、４０．０当量）および飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）を添加することによってゆっくりとクエンチした。材料を分液漏斗に移し、ＤＣＭで３回洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、揮発性物質を真空中で除去した。次いで、得られた粗製生成物を、丸底フラスコ中のＤＭＦ（０．１Ｍ）に溶解し、さらに精製せずに使用した。この材料に、ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（１．０当量）およびヒューニッヒ塩基（１．２当量）を添加し、室温で１８時間撹拌した。次いで、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、分液漏斗に移し、飽和ＮａＣｌ（水溶液）で２回、水で２回洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、揮発性物質を真空中で除去した。粗製反応混合物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（０〜１０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ勾配）によって精製し、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５）を固形物として得た。
ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（７）
丸底フラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５、１．０当量、ステップ３から得たもの）、市販のペンチルアミン（６、３．０当量）、ヒューニッヒ塩基（５．０当量）、およびＤＭＳＯ（０．５Ｍ）を入れた。反応混合物を１２０℃に加熱し、１８時間撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、水を添加した。次いで、この混合物を凍結し、揮発性物質の大部分を凍結乾燥によって除去した。粗製反応混合物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（０〜１０％ＭｅＯＨ（ＭｅＯＨは０．７Ｎ ＮＨ３を含む）：ＤＣＭ勾配）によって精製し、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（７）を固形物として得た。
ステップ５：５−（２−メトキシ−４−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１）
ジオキサン中のＨＣｌ（４．０Ｍ、２０．０当量）を、丸底フラスコ中の、ＤＣＭ中のｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（６、１．０当量、ステップ４から得たもの）の溶液（０．１Ｍ）に０℃で添加した。次いで、氷浴を外し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、ＭｅＯＨ中のＮＨ３（０．７Ｎ）を反応混合物に添加し、揮発性物質を真空中で除去した。ＭｅＯＨ中のＮＨ３（０．７Ｎ）を添加し、揮発性物質を真空中で除去することをさらに２回繰り返した。次いで、粗製反応混合物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（０〜２０％ＭｅＯＨ（ＭｅＯＨは０．７Ｎ ＮＨ３を含む）：ＤＣＭ勾配）によって精製し、５−（２−メトキシ−４−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.91 (d, 1H), 6.74 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.52 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.61 (s, 2H), 3.54 (t, 2H), 3.35 (s, 3H), 3.22 (m, 4H), 2.69 (m, 4H), 1.51 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.18 (m, 2H), 0.89 (s, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝４３８．３。
中間体２
（Ｓ）−２−（（２−アミノ−５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）ヘキサン−１−オール（Ｉｎｔ−２）の合成
Figure 0006877420
 ステップ１：エチル３−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンゾエート（９）の調製
丸底フラスコに、４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２−アミン（１、市販品、１．０当量）、エチル３−（ブロモメチル）−４−メトキシベンゾエート（８、市販品、１．０当量）、炭酸セシウム（１．０当量）、およびＤＭＦ（１．０Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。次いで、溶媒を真空中で除去した。得られた混合物にＥｔＯＡｃを添加し、溶媒を真空中で除去した。この混合物にＤＣＭを添加し、溶媒を真空中で除去した。次いで、粗製反応混合物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（０〜１０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ勾配）によって精製し、エチル３−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンゾエート（９）を固形物として得た。
ステップ２：（３−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシフェニル）メタノール（１０）
ＴＨＦ中のＬＡＨ（１．０当量、粉末）のスラリー（０．３Ｍ）を丸底フラスコ中で調製し、０℃に冷却し、１５分間激しく撹拌した。この混合物に、エチル３−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンゾエート（９、１．０当量、ステップ１から得たもの）を一度に添加した。次いで、氷浴を外し、反応混合物を室温で４時間撹拌した（反応がこの時までに完了しなかった場合は、追加のＬＡＨを添加し、反応が完了するまで撹拌を継続した）。次いで、反応混合物を、Ｅｔ２Ｏを使用してエルレンマイヤーフラスコに移した。混合物を０℃に冷却し、激しく撹拌した。次いで、反応物を、飽和硫酸ナトリウム溶液をゆっくりと添加することによってクエンチした。白色沈殿物が得られ、その混合物を、セライトを含むフリットに通してろ過し、ＴＨＦおよびＥｔ２Ｏで洗浄した。次いで、揮発性物質を真空中で除去し、その材料をさらに精製せずに次のステップで使用した。
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１１）
塩化チオニル（１０．０当量）を、ＤＣＭ中の（３−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシフェニル）メタノール（１０、１．０当量、ステップ２から得たもの）（０．１Ｍ）を含む丸底フラスコに、０℃で添加した。次いで、氷浴を外し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。次いで、反応混合物を０℃に冷却し、ＮａＯＨ（１．０Ｍ、４０．０当量）および飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）を添加することによってゆっくりとクエンチした。材料を分液漏斗に移し、ＤＣＭで３回洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、揮発性物質を真空中で除去した。次いで、得られた粗製生成物を、丸底フラスコ中のＤＭＦ（０．１Ｍ）に溶解し、さらに精製せずに使用した。この材料に、ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（１．０当量）およびヒューニッヒ塩基（１．２当量）を添加し、室温で１８時間撹拌した。次いで、反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、分液漏斗に移し、飽和ＮａＣｌ（水溶液）で２回、水で２回洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、揮発性物質を真空中で除去した。粗製反応混合物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（０〜１０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ勾配）によって精製し、ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１１）を固形物として得た。
ステップ４：（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１２）
丸底フラスコに、ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（（２−アミノ−４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１１、１．０当量、ステップ３から得たもの）、市販の（Ｓ）−２−アミノヘキサン−１−オール（３．０当量）、ヒューニッヒ塩基（５．０当量）、およびＤＭＳＯ（０．５Ｍ）を入れた。反応混合物を１２０℃に加熱し、１８時間撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、水を添加した。次いで、この混合物を凍結し、揮発性物質の大部分を凍結乾燥によって除去した。粗製反応混合物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（０〜１０％ＭｅＯＨ（ＭｅＯＨは０．７Ｎ ＮＨ３を含む）：ＤＣＭ勾配）によって精製し、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１２）を固形物として得た。
ステップ５：例１ − （Ｓ）−２−（（２−アミノ−５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）ヘキサン−１−オール（Ｉｎｔ−２）
ジオキサン中のＨＣｌ（４．０Ｍ、２０．０当量）を、丸底フラスコ中の、ＤＣＭ中の（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１２、１．０当量、ステップ４から得たもの）の溶液（０．１Ｍ）に０℃で添加した。次いで、氷浴を外し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、ＭｅＯＨ中のＮＨ３（０．７Ｎ）を反応混合物に添加し、揮発性物質を真空中で除去した。ＭｅＯＨ中のＮＨ３（０．７Ｎ）を添加し、揮発性物質を真空中で除去することをさらに２回繰り返した。次いで、粗製反応混合物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（０〜２０％ＭｅＯＨ（ＭｅＯＨは０．７Ｎ ＮＨ３を含む）：ＤＣＭ勾配）によって精製し、（Ｓ）−２−（（２−アミノ−５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）ヘキサン−１−オール（Ｉｎｔ−２）を固形物として得た。1H (CD3OD): δ 7.50 (d, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.09 (d, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.29 (d, 1H), 5.69 (d, 1H), 5.40 (d, 1H), 4.34 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.51 (m, 2H), 3.42 (s, 2H), 3.12 (m, 4H), 2.56 (m, 2H), 1.48 (m, 1H), 1.21 (m, 3H), 0.96 (m, 2H), 0.83 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝４６８．３。
中間体３
５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−３）の合成
Figure 0006877420
 ５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−３）を、ステップ４において市販のＮ−ペンチルアミンを（Ｓ）−２−アミノヘキサン−１−オールの代わりに使用したことを除き、（Ｓ）−２−（（２−アミノ−５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）ヘキサン−１−オール（Ｉｎｔ−２）の合成に従って調製した。1H NMR (CD3OD): δ 7.42 (d, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.09 (d, 1H), 6.70 (s, 1H), 6.25 (d, 1H), 5.54 (d, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.52 (t, 2H), 3.46 (s, 2H), 3.14 (m, 4H), 2.60 (m, 4H), 1.48 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.13 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝４３８．３。
本発明の抗体コンジュゲート
本発明の抗体コンジュゲートはＴＬＲ７アゴニストを含み、かつ式（ＩＩ）の構造を有する。
Figure 0006877420
 （式中、
Ｒ５０は
Figure 0006877420
 であり、＊はＡｂへの連結点を示し、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２ＳＳ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 、−Ｓ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
Ｒ１２はＨ、メチル、またはフェニルであり、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
本発明の化合物の特定の態様および実施例は、以下の追加で述べられた実施形態のリストで提供される。各実施形態で定められた特徴は、他の定められた特徴と組み合わせ、本発明の更なる実施形態を提供してもよいことは認識されるであろう。
実施形態５８．式（ＩＩ）の抗体コンジュゲート。（式中、
Ｒ５０は
Figure 0006877420
 であり、＊はＡｂへの連結点を示し、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 、−Ｓ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
Ｒ１２はＨ、メチル、またはフェニルであり、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
実施形態５９．式（ＩＩａ）または式（ＩＩｂ）の構造を有する式（ＩＩ）の抗体コンジュゲートおよびこれらの薬学的に許容される塩。
Figure 0006877420
 （式中、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２ＳＳ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 、−Ｓ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
Ｒ１２はＨ、メチル、またはフェニルであり、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
実施形態６０．式（ＩＩａ）または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲートおよびこれらの薬学的に許容される塩。（式中、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 、−Ｓ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
Ｒ１２はＨ、メチル、またはフェニルであり、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
実施形態６１．式（ＩＩａ）または式（ＩＩｂ）の構造を有する式（ＩＩ）の抗体コンジュゲートおよびこれらの薬学的に許容される塩。
Figure 0006877420
 （式中、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 、または−Ｓ−であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
実施形態６２．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
実施形態６３．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２であり、
Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
実施形態６４．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２であり、
Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−であり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
実施形態６５．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２であり、
Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎであり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 であり、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
ｙは１〜１６の整数である。）
実施形態６６．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ１は−ＮＨＲ２であり、
Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−であり、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ１は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ２は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ３は
Figure 0006877420
 であり、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である。）
実施形態６７．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｒ１は−ＮＨＲ２である。）
実施形態６８．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｒ１は−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３である。）
実施形態６９．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｒ２は−Ｃ４アルキルである。）
実施形態７０．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｒ２は−Ｃ５アルキルである。）
実施形態７１．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｒ２は−Ｃ６アルキルである。）
実施形態７２．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｒ３はＬ１ＯＨである。）
実施形態７３．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｌ１は−（ＣＨ２）−である。）
実施形態７４．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｌ１は−（ＣＨ２ＣＨ２）−である。）
実施形態７５．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎである。）
実施形態７６．式（Ｉ）、式（Ｉａ）、または式（Ｉｂ）の化合物。（式中、Ｌ２は−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−である。）
実施形態７７．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。）
実施形態７８．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｌ２は−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２ＳＳ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、または−（ＣＨ２）ｎＸ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−である。
実施形態７９．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｒ４０は
Figure 0006877420
 、または−Ｓ−である。）
実施形態８０．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。（式中、
Ｒ４０は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態８１．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｒ４０は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態８２．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｒ４０は
Figure 0006877420
 、または−Ｓ−である。）
実施形態８３．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｒ４０は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態８４．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｒ４０は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態８５．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｒ４０は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態８６．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｘ１は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態８７．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｘ１は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態８８．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｘ１は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態８９．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｘ２は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態９０．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｘ２は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態９１．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｘ２は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態９２．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。（式中、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態９３．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。（式中、
Ｘ２は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態９４．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｘ３は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態９５．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｘ３は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態９６．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｘ３は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態９７．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｘ３は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態９８．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、Ｘ３は
Figure 0006877420
 である。）
実施形態９９．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、各ｍは独立に１、２、３、および４から選択される。）
実施形態１００．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、各ｍは１または２である。）
実施形態１０１．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、各ｎは独立に１、２、３、および４から選択される。）
実施形態１０２．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、各ｎは２または３である。）
実施形態１０３．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される。）
実施形態１０４．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、各ｔは独立に１、２、３、４、５、および６から選択される。）
実施形態１０５．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、ｙは１〜１６の整数である。）
実施形態１０６．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、ｙは１〜８の整数である。）
実施形態１０７．式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、ｙは１〜４の整数である。）
実施形態１０８．
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
 から選択される、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
（式中、ｙは１〜４の整数であり、Ａｂは抗ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントである。）
実施形態１０９．
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
 から選択される、式（ＩＩ）、式（ＩＩａ）、または式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲート。
また、本発明の抗体コンジュゲートを評価する分析的方法論のいくつかの態様に関する手順が提供される。このような分析的方法論および結果によって、コンジュゲートが、有利な特性、例えば、コンジュゲートをより容易に製造し、より容易に患者に投与し、より有効にし、および／または患者に対して潜在的に安全にする特性を有することを実証できる。１つの例はサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による分子サイズの決定であり、試料中に存在する高分子量の不純物（例えば、二量体、多量体、または凝集抗体）または低分子量の不純物（例えば、抗体フラグメント、分解産物、または個々の抗体鎖）の量に対する、試料中の所望の抗体種の量が決定される。一般的に、例えば、凝集体は、これらに限定されないが、クリアランス率、免疫原性、および毒性などの、抗体試料の他の特性に影響を与えるために、大量の単量体および少量の例えば凝集抗体を有するのが望ましい。更なる例は、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）による疎水性の決定であり、試料の疎水性を、特性が既知の一連の標準抗体と比較して評価する。一般的に、疎水性が、これらに限定されないが、凝集、時間経過による凝集、表面への付着、肝毒性、クリアランス率、および薬学動態的曝露などの、抗体試料の他の特性に影響を与えるために、低疎水性であることが望ましい。Damle, N.K., Nat Biotechnol. 2008; 26(8):884-885、Singh, S.K., Pharm Res. 2015; 32(11):3541-71を参照のこと。疎水性相互作用クロマトグラフィーで測定したときに、疎水性インデックスのスコアが高いほど（すなわち、ＨＩＣカラムからの溶出が速いほど）、コンジュゲートの疎水性が低いことを示す。実施例７０および表３で示されるように、被験抗体コンジュゲートの大部分は、０．８を超える疎水性インデックスを示す。いくつかの実施形態において、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって決定される０．８以上の疎水性インデックスを有する抗体コンジュゲートが提供される。
抗ＨＥＲ２抗体
本明細書において提供される抗体コンジュゲートは、ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する抗体またはその抗体フラグメント（例えば抗原結合フラグメント）（抗ＨＥＲ２抗体）を含む。ＨＥＲ２の過剰発現は、胃癌、食道癌、結腸癌、直腸癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸管癌、子宮癌、子宮内膜癌、膀胱癌、膵臓癌、肺癌、前立腺癌、骨肉腫、神経芽細胞腫、または頭頸部癌などの多くのタイプの癌で観察される。抗ＨＥＲ２抗体を含む抗体コンジュゲートは、ＨＥＲ２陽性癌または腫瘍を特異的に標的化することができる。
いくつかの実施形態において、本明細書において提供される抗体コンジュゲートは、ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する、モノクローナル抗体またはその抗体フラグメント、例えば、ヒトまたはヒト化抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する抗体またはその抗体フラグメントは、トラスツズマブ、ペルツズマブ、マルゲツキシマブ、もしくはＨＴ−１９、またはこれらの抗体フラグメント、またはこれらの位置特異的システイン突然変異体から選択することができる。
トラスツズマブ（商品名ＨｅｒｃｅｐｔｉｎまたはＨｅｒｃｌｏｎ）は、ＨＥＲ２受容体の細胞外ドメインの膜近傍部分に結合するヒト化モノクローナル抗体である（Hudis CA, N Engl J Med. 2007; 357(1):39-51）。トラスツズマブの重鎖および軽鎖可変領域におけるアミノ酸配列は、米国特許第５，８２１，３３７号明細書に記載されている。トラスツズマブは、ヒトＨＥＲ２の残基５５７−５６１、５７０−５７３、および５９３−６０３によって形成されるループ領域と相互作用する（Cho et al., Nature 421: 756-760, 2003）。トラスツズマブは、ＨＥＲ２受容体の二量化を阻止することにより、ＨＥＲ２受容体のエンドサイトーシス破壊を促進することにより、細胞外ドメインのシェディングを阻害することにより、場合によってはＨＥＲ２シグナル伝達を干渉する（Hudis CA, N Engl J Med. 2007; 357(1):39-51）。抗ＨＥＲ２抗体の別の重要な作用機構は、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）の介在である。ＡＤＣＣにおいて、抗ＨＥＲ２抗体は腫瘍細胞に結合し、次いで、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）相互作用を介してマクロファージなどの免疫細胞を動員する。トラスツズマブは、保存ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を有し、抗体依存性細胞毒性に関与する免疫エフェクター細胞を動員することが可能である（Hudis CA, N Engl J Med. 2007; 357(1):39-51）。トラスツズマブは、その腫瘍がＨＥＲ２を過剰発現し、その転移性疾患に対して１種または複数種の化学療法を受けた患者における転移性乳癌の治療に対して米国ＦＤＡの承認を１９９８年９月に取得した。
ペルツズマブ（２Ｃ４、Ｏｍｎｉｔａｒｇ、Ｐｅｒｊｅｔａとも呼ばれる）は、ＨＥＲ２受容体の細胞外ドメインに結合し、ＨＥＲ２が他のＨＥＲ受容体と二量化するのを阻害する、ヒト化モノクローナル抗体である。ペルツズマブの重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、米国特許第７，５６０，１１１号明細書に記載されている。ペルツズマブは、ヒトＨＥＲ２の領域２４５-３３３内の残基、特に、残基Ｈｉｓ ２４５、Ｖａｌ ２８６、Ｓｅｒ ２８８、Ｌｅｕ ２９５、Ｈｉｓ ２９６、またはＬｙｓ ３１１と主に相互作用する（Franklin et al., Cancer Cell 5: 317-328, 2004）。ペルツズマブは、乳癌および前立腺癌細胞株におけるＨＥＲ１−ＨＥＲ２およびＨＥＲ３−ＨＥＲ２複合体の形成を撹乱する点で、トラスツズマブよりも効果的であることが示された（Agus et al., J Clin Oncol. 2005; 23(11):2534-43. Epub Feb 7, 2005）。ペルツズマブは、その活性化に完全Ｆｃ領域を必要としないために、有効性のための抗体依存性細胞毒性は必要としない（Agus et al., J Clin Oncol. 2005; 23(11):2534-43. Epub Feb 7, 2005）。ペルツズマブは、転移疾患で抗ＨＥＲ２療法または化学療法を受けたことがないＨＥＲ２陽性転移性乳癌を呈する患者の治療における、トラスツズマブおよびドセタキセルとの併用に対して２０１２年６月に米国ＦＤＡの承認を受けた。
マルゲツキシマブ（ＭＧＡＨ２２とも呼ばれる）は、別の抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体である（http://www.macrogenics.com/products-margetuximab.htmlを参照のこと）。マルゲツキシマブのＦｃ領域が最適化されて、免疫エフェクター細胞上の活性化性ＦｃγＲへの結合が高まったが、抑制性ＦｃγＲへの結合が低下するようになった。マルゲツキシマブは現在のところ、その腫瘍が、ＨＥＲ２を免疫組織化学によるレベル２＋で発現し、かつＦＩＳＨによるＨＥＲ２遺伝子増幅の形跡がない、再発性または難治性の進行性乳癌を呈する患者の治療に対して臨床試験中である。
ＨＴ−１９は、トラスツズマブまたはペルツズマブのエピトープとは異なるヒトＨＥＲ２のエピトープに結合し、かつトラスツズマブと同程度にＨＥＲ２シグナル伝達の阻害を示し、トラスツズマブおよびペルツズマブとの併用でＨＥＲ２の分解を促進する、別の抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体である（Bergstrom D. A. et al., Cancer Res. 2015; 75:LB-231）。
他の好適な抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体としては、これらに限定されるものではないが、米国特許第９，０９６，８７７号明細書、同第９，０１７，６７１号明細書、同第８，９７５，３８２号明細書、同第８，９７４，７８５号明細書、同第８，９６８，７３０号明細書、同第８，９３７，１５９号明細書、同第８，８４０，８９６号明細書、同第８，８０２，０９３号明細書、同第８，７５３，８２９号明細書、同第８，７４１，５８６号明細書、同第８，７２２，３６２号明細書、同第８，６９７，０７１号明細書、同第８，６５２，４７４号明細書、同第８，６５２，４６６号明細書、同第８，６０９，０９５号明細書、同第８，５１２，９６７号明細書、同第８，３４９，５８５号明細書、同第８，２４１，６３０号明細書、同第８，２１７，１４７号明細書、同第８，１９２，７３７号明細書、同第７，８７９，３２５号明細書、同第７，８５０，９６６号明細書、同第７，５６０，１１１号明細書、同第７，４３５，７９７号明細書、同第７，３０６，８０１号明細書、同第６，３９９，０６３号明細書、同第６，３８７，３７１号明細書、同第６，１６５，４６４号明細書、同第５，７７２，９９７号明細書、同第５，７７０，１９５号明細書、同第５，７２５，８５６号明細書、同第５，７２０，９５４号明細書、同第５，６７７，１７１号明細書に記載の抗ＨＥＲ２抗体がある。
いくつかの実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、表１に記載の任意のＶＨドメインのアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む。他の好適な抗ＨＥＲ２抗体または抗体フラグメント（例えば抗原結合フラグメント）は、突然変異しているが、ＶＨドメインの少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントが表１に記載の配列に示されるＶＨ領域と同一であるアミノ酸を含むことができる。ある特定の実施形態において、本開示はまた、ＨＥＲ２に特異的に結合する抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、表１に挙げられるＶＨ ＣＤＲのうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲを含む抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。特定の実施形態において、本発明は、ＨＥＲ２に特異的に結合する抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、表１に挙げられるＶＨ ＣＤＲのいずれかのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはこれら超のＶＨ ＣＤＲを含む（あるいは、からなる）抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。
いくつかの実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、表１に記載の任意のＶＬドメインのアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む。他の好適な抗ＨＥＲ２抗体または抗体フラグメント（例えば抗原結合フラグメント）は突然変異しているが、ＶＬドメインの少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントが表１に記載の配列に示されるＶＬ領域と同一であるアミノ酸を含むことができる。本開示はまた、ＨＥＲ２に特異的に結合する抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、表１に挙げられるＶＬ ＣＤＲのうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲを含む抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。特に、本発明は、ＨＥＲ２に特異的に結合する抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、表１に挙げられるＶＬ ＣＤＲのいずれかのアミノ酸配列を有する１つ、２つ、３つ、またはこれら超のＶＬ ＣＤＲを含む（あるいは、からなる）抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。
Figure 0006877420
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Figure 0006877420
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本明細書において開示される他の抗ＨＥＲ２抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は突然変異しているが、ＣＤＲ領域の少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントが表１に記載の配列に示されるＣＤＲ領域と同一であるアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、表１に記載の配列に示されるＣＤＲ領域と比較したときに、１、２、３、４、または５つ以下のアミノ酸がＣＤＲ領域で突然変異されている突然変異アミノ酸配列が含まれる。
また、ＨＥＲ２に特異的に結合する抗体またはその抗体フラグメントの、ＶＨ、ＶＬ、完全長重鎖、および完全長軽鎖をコードする核酸配列、例えば表１の核酸配列が本明細書において提供される。このような核酸配列は、哺乳動物細胞において発現させるために最適化することができる。
本明細書において開示される他の抗ＨＥＲ２抗体は、アミノ酸また核酸が突然変異しているが、少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセントが表１に記載の配列と同一であるアミノ酸をコードしているものを含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１に記載の配列に示される可変領域と比較したときに、１、２、３、４、または５つ以下のアミノ酸が可変領域で突然変異され、同時に実質的に同一の治療的活性を保持している突然変異アミノ酸配列を含む。
提供された各抗体はＨＥＲ２に結合するため、ＶＨ、ＶＬ、完全長軽鎖、および完全長重鎖の配列（アミノ酸配列およびアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列）を「混合および合致」させ、本明細書において開示される他のＨＥＲ２結合抗体を作製することができる。このような「混合および合致」されたＨＥＲ２結合抗体は、当技術分野において既知の結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ、例示に記載のアッセイ）を使用して試験することができる。鎖を混合および合致させるときに、特定のＶＨ／ＶＬ対由来のＶＨ配列は、構造的に類似するＶＨ配列と置き換えられるはずである。特定の完全長重鎖／完全長軽鎖対由来の完全長重鎖配列は、構造的に類似する完全長重鎖配列と置き換えられるはずである。特定のＶＨ／ＶＬ対由来のＶＬ配列は、構造的に類似するＶＬ配列と置き換えられるはずである。特定の完全長重鎖／完全長軽鎖対由来の完全長軽鎖配列は、構造的に類似する完全長軽鎖配列と置き換えられるはずである。
したがって、１つの実施形態において、本発明は、配列認識番７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有し、抗体がＨＥＲ２に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合領域を提供する。他の実施形態において、本発明は、（ｉ）配列番号９、２１、２３、３０、または３２のいずれかのアミノ酸配列を含む完全長重鎖および配列番号１９のアミノ酸配列を含む完全長軽鎖を有する単離されたモノクローナル抗体、または（ｉｉ）その抗原結合部分を含む機能性タンパク質を提供する。
他の実施形態において、本開示は、表１に記載のような、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、またはこれらの組合せを含むＨＥＲ２結合抗体を提供する。抗体のＶＨ ＣＤＲ１におけるアミノ酸配列は、配列番号１、４、および６に示される。抗体のＶＨ ＣＤＲ２におけるアミノ酸配列は、配列番号２および５に示される。抗体のＶＨ ＣＤＲ３におけるアミノ酸配列は、配列番号３に示される。抗体のＶＬ ＣＤＲ１におけるアミノ酸配列は、配列番号１１および１４に示される。抗体のＶＬ ＣＤＲ２におけるアミノ酸配列は、配列番号１２および１５に示される。抗体のＶＬ ＣＤＲ３におけるアミノ酸配列は、配列番号１３におよび１６に示される。
各抗体がＨＥＲ２と結合し、かつ抗原結合特異性が主にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域によって提供されると仮定すると、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を「混合および合致させる」ことができる（すなわち、異なる抗体由来のＣＤＲを混合および合致させることができるが、本明細書において開示される他のＨＥＲ２結合分子を作製するために、各抗体はＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含まなければならない）。このような「混合および合致」されたＨＥＲ２結合抗体は、当技術分野において既知の結合アッセイ、および実施例に記載のもの（例えばＥＬＩＳＡ）を使用して試験することができる。ＶＨ ＣＤＲ配列を混合および合致させるときに、特定のＶＨ配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列は、構造的に類似するＣＤＲ配列と置き換えられるはずである。同様に、ＶＬ ＣＤＲ配列を混合および合致させるときに、特定のＶＬ配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３配列は、構造的に類似するＣＤＲ配列と置き換えられるはずである。新規のＶＨおよびＶＬ配列は、１つまたは複数のＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ領域配列を、本開示のモノクローナル抗体に関して本明細書において示されるＣＤＲ配列由来の構造的に類似する配列で置換することによって作製できるということは当業者であれば容易に明らかであろう。
したがって、本開示は、配列番号１、４、および６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２および５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１１および１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１２および１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、ならびに配列番号１３および１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合領域であって、抗体がＨＥＲ２に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合領域を提供する。
ある特定の実施形態において、ＨＥＲ２に特異的に結合する抗体は、表１に記載の抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）である。
いくつかの実施形態において、ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域を含む。
いくつかの実施形態において、ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態において、ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態において、ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態において、ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態において、ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態において、ヒトＨＥＲ２に特異的に結合する抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態において、本開示は、ヒトＨＥＲ２のエピトープに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、ヒトＨＥＲ２のエピトープに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、エピトープが、配列番号２６の残基５５７−５６１、５７０−５７３、および５９３−６０３のうちの１つまたは複数を含む抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、ヒトＨＥＲ２のエピトープに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、エピトープが、配列番号２６の残基２４５−３３３のうちの１つまたは複数を含む抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、ヒトＨＥＲ２のエピトープに特異的に結合する抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）であって、エピトープが、配列番号２６の以下の残基：Ｈｉｓ ２４５、Ｖａｌ ２８６、Ｓｅｒ ２８８、Ｌｅｕ ２９５、Ｈｉｓ ２９６、またはＬｙｓ ３１１のうちの１つまたは複数を含む抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）を提供する。
抗原における所望のエピトープが決定されると、そのエピトープに対する抗体を、例えば本発明において述べられる技法を使用して産生することが可能である。あるいは、発見プロセス中に、抗体を産生および特性評価することによって、所望のエピトープに関する情報を解明してもよい。この情報から、その後、同一のエピトープに対する結合に関して抗体を競合的にスクリーニングすることが可能である。これを達成するためのアプローチは、交差競合試験を行い、相互に競合的に結合する抗体、例えば、抗原に対する結合に関して競合する抗体を見い出すことである。その交差競合性に基づいて抗体を「ビニング」するハイスループットプロセスは、国際公開第２００３／４８７３１号パンフレットに記載されている。当業者であれば理解するであろうように、実際には、抗体が特異的に結合できるものすべてがエピトープであり得る。エピトープは、抗体が結合する残基を含むことができる。
フレームワークまたはＦｃ領域の修飾
本明細書において開示される、抗体および抗体コンジュゲートは、例えば、抗体／抗体コンジュゲートの特性を改善するように、ＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基に修飾を含む、修飾抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでいてもよい。
いくつかの実施形態において、フレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させる。例えば、１つのアプローチは、１つまたは複数のフレームワーク残基を対応する生殖細胞系配列に「復帰変異」させることである。このような残基は、抗体フレームワーク配列を、抗体が由来する生殖細胞系配列と比較することによって識別することができる。フレームワーク領域配列を所望の生殖細胞系配置と「合致」させるために、残基を、例えば位置特異的突然変異誘発によって、対応する生殖細胞系配列に「復帰変異」させることができる。このような「復帰変異」した抗体はまた、本発明に包含されることが意図される。
別の種類のフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内またはさらに１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の１つまたは複数の残基を突然変異させ、Ｔ細胞エピトープを除去し、それによって抗体の潜在的な免疫原性を低下させることを伴う。このアプローチはまた、「脱免疫法（deimmunization）」とも呼ばれ、更なる詳細はＣａｒｒらによる米国特許公開第２００３０１５３０４３号明細書に記載されている。
さらにまたはあるいは、フレームワークまたはＣＤＲ領域内で修飾を行うために、本明細書において開示される抗体を、Ｆｃ領域内に修飾を含むように、典型的には、血中半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、および／または抗体依存性細胞毒性などの１つまたは複数の抗体機能特性を改変するように操作されていてもよい。
さらに、本明細書において開示される抗体は、化学的に修飾されていてもよく（例えば、１つまたは複数の化学的部分を抗体に連結することができる）、またはそのグリコシル化を改変し、１つまたは複数の抗体機能特性を再び改変するように修飾してもよい。これらの各実施形態は、以下で詳細に述べられる。
１つの実施形態において、ＣＨ１のヒンジ領域を修飾し、ヒンジ領域のシステイン残基の数が改変される、例えば、減少または増加するようにする。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒらによって米国特許第５，６７７，４２５号明細書にさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域におけるシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖の集合を促進するように、または抗体の安定性を高めるもしくは低下させるように改変される。
いくつかの実施形態において、本明細書において開示される抗体コンジュゲートに有用な抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、１つまたは複数のシステイン残基を薬物部分にコンジュゲートするための位置として導入するように修飾された抗体などの、修飾されたまたは操作された抗体を含む（Junutula JR, et al.: Nat Biotechnol 2008, 26:925-932）。１つの実施形態において、本発明は、１つまたは複数のアミノ酸の、本明細書に記載の位置におけるシステインとの置換を含む、修飾された抗体またはその抗体フラグメントを提供する。システイン置換の位置は抗体の定常領域にあり、したがって、さまざまな抗体に適用可能であり、かつその位置は安定なかつ均質なコンジュゲートが得られるように選択される。修飾された抗体またはフラグメントは、２つ以上のシステイン置換を有することができ、これらの置換は、本明細書に記載のとおりに、抗体を修飾およびコンジュゲートする他の方法と組み合わせて使用することができる。システインを、抗体の特定の場所に挿入する方法は、当技術分野において既知であり、例えば、Lyons et al, (1990) Protein Eng., 3:703-708、国際公開第２０１１／００５４８１号パンフレット、国際公開第２０１４／１２４３１６号パンフレット、国際公開第２０１５／１３８６１５号パンフレットを参照のこと。ある特定の実施形態において、修飾された抗体または抗体フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸の、抗体または抗体フラグメントにおける重鎖の位置１１７、１１９、１２１、１２４、１３９、１５２、１５３、１５５、１５７、１６４、１６９、１７１、１７４、１８９、２０５、２０７、２４６、２５８、２６９、２７４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９３、３２０、３２２、３２６、３３３、３３４、３３５、３３７、３４４、３５５、３６０、３７５、３８２、３９０、３９２、３９８、４００、および４２２から選択されるその定常領域での、システインとの置換を含み、その位置はＥＵシステムに従って番号付けされている。いくつかの実施形態において、修飾された抗体または抗体フラグメントは、１つまたは複数のアミノ酸の、抗体または抗体フラグメントにおける軽鎖の位置１０７、１０８、１０９、１１４、１２９、１４２、１４３、１４５、１５２、１５４、１５６、１５９、１６１、１６５、１６８、１６９、１７０、１８２、１８３、１９７、１９９、および２０３から選択されるその定常領域での、システインとの置換を含み、その位置はＥＵシステムに従って番号付けされており、その軽鎖はヒトカッパ軽鎖である。ある特定の実施形態において、修飾された抗体またはその抗体フラグメントは、２つ以上のアミノ酸の、その定常領域での、システインとの置換の組合せを含み、その組合せは、抗体重鎖の位置３７５、抗体重鎖の位置１５２、抗体重鎖の位置３６０、または抗体軽鎖の位置１０７での置換を含み、その位置はＥＵシステムに従って番号付けされている。ある特定の実施形態において、修飾された抗体またはその抗体フラグメントは、１つのアミノ酸の、その定常領域でのシステインとの置換を含み、その置換は、抗体重鎖の位置３７５、抗体重鎖の位置１５２、抗体重鎖の位置３６０、抗体軽鎖の位置１０７、抗体軽鎖の位置１６５、または抗体軽鎖の位置１５９であり、その位置はＥＵシステムに従って番号付けされおり、軽鎖はカッパ鎖である。
特定の実施形態において、修飾された抗体またはその抗体フラグメントは、２つのアミノ酸の、その定常領域での、システインとの置換の組合せを含み、その修飾された抗体またはその抗体フラグメントは、抗体重鎖の位置１５２および３７５にシステインを含み、その位置はＥＵシステムに従って番号付けされている。
他の特定の実施形態において、修飾された抗体またはその抗体フラグメントは、１つのアミノ酸の、抗体重鎖の位置３６０における、システインとの置換を含み、その位置はＥＵシステムに従って番号付けされている。
他の特定の実施形態において、修飾された抗体またはその抗体フラグメントは、１つのアミノ酸の、抗体軽鎖の位置１０７における、システインとの置換を含み、その位置はＥＵシステムに従って番号付けされており、その軽鎖はヒトカッパ鎖である。
更なる実施形態において、本明細書において開示される抗体コンジュゲートに有用な抗体または抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、Ｐｃｌ、ピロリシン、ペプチドタグ（Ｓ６、Ａ１、およびｙｂｂＲタグなど）を含む１つまたは複数の他の反応性アミノ酸（システイン以外）、および非天然アミノ酸が、天然の配列のうちの少なくとも１つのアミノ酸の代わりに導入され、その結果、抗体または抗原結合フラグメントに反応性位置が与えられて、式（Ｉ）またはその副式の薬物部分にコンジュゲートするように修飾された抗体などの、修飾されたまたは操作された抗体を含む。例えば、抗体または抗体フラグメントは、Ｐｃｌもしくはピロリシン（W. Ou et al. (2011) PNAS 108 (26), 10437-10442、国際公開第２０１４１２４２５８号パンフレット）または非天然アミノ酸（J.Y. Axup, et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 109 (2012), pp. 16101-16106、再検討に関しては、C.C. Liu and P.G. Schultz (2010) Annu Rev Biochem 79, 413-444、C.H. Kim, et al., (2013) Curr Opin Chem Biol. 17, 412-419を参照のこと）を薬物へコンジュゲートするための部位として組み込むように修飾することができる。同様に、酵素的コンジュゲート法のためのペプチドタグを、抗体に導入することができる（Strop P. et al. Chem Biol. 2013, 20(2):161-7、Rabuka D., Curr Opin Chem Biol. 2010 Dec;14(6):790-6、Rabuka D,et al., Nat Protoc. 2012, 7(6):1052-67）。１つの他の例は、コエンザイムＡ類似体をコンジュゲートするための４’−ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ（ＰＰＴａｓｅ）の使用である（国際公開第２０１３１８４５１４号パンフレット）。このような修飾されたまたは操作された抗体の、ペイロード（payload）またはリンカー−ペイロードとの組合せをコンジュゲートするための方法は、当技術分野において既知である。
他の実施形態において、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期を減少させるために突然変異される。より具体的には、１つまたは複数のアミノ酸の突然変異を、Ｆｃ−ヒンジフラグメントのＣＨ２−ＣＨ３ドメインインターフェース領域中に導入し、天然のＦｃ−ヒンジドメインＳｐＡ結合と比較して、抗体がブドウ球菌タンパク質Ａ（ＳｐＡ）結合を欠損するようにする。このアプローチは、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号明細書にさらに詳細に記載されている。
さらに他の実施形態において、Ｆｃ領域は、少なくとも１つのアミノ酸残基を別のアミノ酸残基で置き換え、抗体のエフェクター機能を改変することによって改変される。例えば、１つまたは複数のアミノ酸を別のアミノ酸残基で置き換え、抗体は、エフェクターリガンドに対する親和性を改変されるが、親抗体の抗原結合能力は保持するようにすることができる。親和性が改変されたエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１構成成分とすることができる。このアプローチは、例えば、ともにＷｉｎｔｅｒらによる、米国特許第５，６２４，８２１号明細書および同第５，６４８，２６０号明細書に記載されている。
他の実施形態において、アミノ酸残基から選択される１つまたは複数のアミノ酸を別のアミノ酸残基と置き換え、抗体は、Ｃ１ｑ結合が改変され、および／または補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）が低下されるもしくは消失するようにすることができる。このアプローチは、例えば、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号明細書に記載されている。
他の実施形態において、１つまたは複数のアミノ酸残基が改変され、その結果、補体を固定する抗体の能力が改変される。このアプローチは、例えば、Ｂｏｄｍｅｒらによって国際公開第９４／２９３５１号パンフレットに記載されている。アロタイプアミノ酸残基としては、これらに限定されるものではないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ３サブクラスの重鎖の定常領域、ならびにJefferis et al., MAbs. 1:332-338 (2009)に記載されているようなカッパアイソタイプの軽鎖の定常領域がある。
さらに他の実施形態において、Ｆｃ領域は、例えば、１つまたは複数のアミノ酸残基を修飾し、活性化Ｆｃγ受容体に対する抗体の親和性を高めることによって、または抑制性Ｆｃγ受容体に対する抗体の親和性を低下させることによって、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）および／または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を介在する抗体の能力が高まるように修飾される。ヒト活性化Ｆｃγ受容体としては、ＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂがあり、ヒト抑制性Ｆｃγ受容体としてはＦｃγＲＩＩｂがある。このアプローチは、例えば、Ｐｒｅｓｔａによって国際公開第００／４２０７２号パンフレットに記載されている。さらに、ＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩ、およびＦｃＲｎに関するヒトＩｇＧ１の結合位置はマップされており、結合が改善された変異体が記載されている（Shields et al., J. Biol. Chem. 276:6591-6604, 2001を参照のこと）。ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ機能を高めるようなモノクローナル抗体におけるＦｃ介在エフェクター機能の最適化が記載されている（Strohl, W.R., Current Opinion in Biotechnology 2009; 20:685-691を参照のこと）。いくつかの実施形態において、抗体コンジュゲートは、ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ機能を促進する突然変異または突然変異の組合せ、例えば、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｌ、Ｐ２４７Ｉ、Ｄ２８０Ｈ、Ｋ２９０Ｓ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ｄ、Ｓ２９８Ｖ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ａ３３９Ｄ、Ａ３３９Ｑ、Ａ３３９Ｔ、Ｐ３９６Ｌ（すべての位置はＥＵナンバリングによる）から選択される１つまたは複数の突然変異を含む、免疫グロブリン重鎖を含む。
他の実施形態において、Ｆｃ領域は、例えば、１つまたは複数のアミノ酸を修飾し、典型的にはＦｃαＲＩなどの親抗体を認識しない活性化受容体に対する抗体の親和性を高めることによって、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰを介在する抗体の能力が高まるように修飾される。このアプローチは、例えばBorrok et al., mAbs. 7(4):743-751に記載されている。特定の実施形態において、抗体コンジュゲートは、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ機能を促進する１つまたは複数の抗体配列の突然変異または融合を含む、免疫グロブリン重鎖を含む。
さらに他の実施形態において、抗体のグリコシル化が修飾される。例えば、脱グリコシル化抗体を作製することができる（すなわち、抗体がグリコシル化を失う）。グリコシル化は、例えば、「抗原」に対する抗体の親和性を高めるように改変することができる。このような炭水化物の修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化のうちの１つまたは複数の位置を改変することによって達成することができる。例えば、１つまたは複数のアミノ酸置換を行って、１つまたは複数の可変領域フレームワークグリコシル化位置を消失させ、それによって、その位置におけるグリコシル化を消失することができる。このような脱グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を高め得る。このようなアプローチは、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０号明細書および同第６，３５０，８６１号明細書に記載されている。
さらに、またはあるいは、フコシル残基量が少ない低フコシル化抗体または二分性ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体などの、改変型のグリコシル化を有する抗体を作製することができる。このような改変されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を高めることが実証されている。このような炭水化物の修飾は、例えば、グリコシル化機構が改変された宿主細胞において抗体を発現させることにより達成することができる。グリコシル化機構が改変された細胞は、当技術分野で記載されており、本発明の組換え抗体を発現させ、それによって、グリコシル化が改変された抗体を生成する宿主細胞として使用することができる。例えば、Ｈａｎｇらによる欧州特許第１，１７６，１９５号明細書には、フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子が機能的に撹乱された細胞株が記載されており、このような細胞株において発現された抗体が、低フコシル化を示すようになる。Ｐｒｅｓｔａによる国際公開第０３／０３５８３５号パンフレットには、フコースをＡｓｎ（２９７）リンク炭水化物に連結させる能力が低下し、また結果としてその宿主細胞において発現した抗体に低フコシル化が生じた、変異体ＣＨＯ細胞株であるＬｅｃｌ３細胞が記載されている（Shields et al., (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740も参照のこと）。Ｕｍａｎａらによる国際公開第９９／５４３４２号パンフレットでは、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、ベータ（１，４）−ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））が発現するように操作され、操作された細胞株で発現した抗体が、二分性ＧｌｃＮａｃ構造の増加を示し、その結果、抗体のＡＤＣＣ活性が高まるようにした細胞株が記載されている（Umana et al., Nat. Biotech. 17:176-180, 1999も参照のこと）。
他の実施形態において、抗体は、その生物学的半減期が増加するように修飾される。さまざまなアプローチが可能である。例えば、Ｗａｒｄの米国特許第６，２７７，３７５号明細書に記載のような、次の突然変異：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆのうちの１つまたは複数を導入することができる。あるいは、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号明細書および同第６，１２１，０２２号明細書に記載のように、生物学的半減期を増加するために、抗体を、ＩｇＧのＦｃ領域におけるＣＨ２ドメインの２個のループから得られるサルベージ受容体結合エピトープを含むように、ＣＨ１またはＣＬ領域内で改変することができる。
抗ＨＥＲ２抗体の生成
抗ＨＥＲ２抗体およびその抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）は、これらに限定されないが、組換え発現、化学合成、および抗体四量体の酵素消化などの、当技術分野において既知の任意の手段によって生成することができるが、完全長モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマまたは組換え製品によって得ることができる。組換え発現は、例えば、哺乳動物宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆虫宿主細胞など、当技術分野において既知の任意の適切な宿主細胞由来とすることができる。
また、本明細書に記載の抗体をコードしているポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載のような相補性決定領域を含む、重鎖もしくは軽鎖可変領域をまたはセグメントをコードしているポリヌクレオチドが本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域をコードしているポリヌクレオチドは、核酸配列の少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％が配列番号８のポリヌクレオチドと同一である。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域をコードしているポリヌクレオチドは、核酸配列の少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％が配列番号１８のポリヌクレオチドと同一である。
いくつかの実施形態において、重鎖をコードしているポリヌクレオチドは、核酸配列の少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％が配列番号１０、２２、または２４のいずれかのポリヌクレオチドと同一である。いくつかの実施形態において、軽鎖をコードしているポリヌクレオチドは、核酸配列の少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％が配列番号２０または３４のポリヌクレオチドと同一である。
本明細書において開示されるいくつかのポリヌクレオチドは、抗ＨＥＲ２抗体の可変領域をコードする。本明細書において開示されるいくつかのポリヌクレオチドは、抗ＨＥＲ２抗体の可変領域と定常領域の両方をコードする。いくつかのポリヌクレオチド配列は、抗ＨＥＲ２抗体の重鎖と軽鎖の両方の可変領域を含むポリペプチドをコードする。いくつかのポリヌクレオチドは、本明細書において開示される任意の抗ＨＥＲ２抗体の重鎖および軽鎖の可変領域とそれぞれが実質的に同一である２つのポリペプチドセグメントをコードする。
ポリヌクレオチド配列は、抗ＨＥＲ２抗体またはその結合フラグメントをコードしている既存の配列（例えば、以下の実施例で述べられるような配列）をｄｅ ｎｏｖｏ固相ＤＮＡ合成することによって、またはＰＣＲ突然変誘発することによって生成できる。核酸の直接化学合成は、Narang et al., Meth. Enzymol. 68:90, 1979のホスホトリエステル法、Brown et al., Meth. Enzymol. 68:109, 1979のホスホジエステル法、Beaucage et al., Tetra. Lett., 22:1859, 1981のジエチルホスホロアミダイト法、および米国特許第４，４５８，０６６号明細書の固相支持体法などの、当技術分野において既知の方法によって達成することができる。ＰＣＲによるポリヌクレオチド配列への突然変異の導入は、例えばPCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H.A. Erlich (Ed.), Freeman Press, NY, NY, 1992、PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al. (Ed.), Academic Press, San Diego, CA, 1990、Mattila et al., Nucleic Acids Res. 19:967, 1991、およびEckert et al., PCR Methods and Applications 1:17, 1991に記載のように実施することができる。
また、上述の抗ＨＥＲ２抗体を生成するための発現ベクターおよび宿主細胞が提供される。さまざまな発現ベクターを使用し、抗ＨＥＲ２抗体鎖または結合フラグメントをコードしているポリヌクレオチドを発現することができる。ウイルス系および非ウイルス性の両方の発現ベクターを使用し、哺乳動物宿主細胞において抗体を生成することができる。
非ウイルス性のベクターおよびシステムとしては、典型的には、タンパク質またはＲＮＡを発現させるための発現カセットを有する、プラスミド、エピソームベクター、およびヒト人工染色体がある（例えば、Harrington et al., Nat Genet 15:345, 1997を参照のこと）。例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）細胞において抗ＨＥＲ２ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを発現するのに有用な非ウイルス性ベクターとしては、ｐＴｈｉｏＨｉｓ Ａ、Ｂ、およびＣ、ｐｃＤＮＡＴＭ３．１／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓＡ、Ｂ、およびＣ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、ＭＰＳＶベクター、ならびに他のタンパク質を発現させるための当技術分野において既知のいくつかの他のベクターがある。有用なウイルス性ベクターとしては、レトロウイルス系、アデノウイルス系、アデノ随伴ウイルス系、ヘルペスウイルス系のベクター、ＳＶ４０系、パピローマウイルス系、ＨＢＰエプスタインバーウイルス系のベクター、ワクシニアウイルスベクター、およびセムリキ森林熱ウイルス（ＳＦＶ）が挙げられる。Brent et al., supra; Smith, Annu. Rev. Microbiol. 49:807, 1995およびRosenfeld et al., Cell 68:143, 1992を参照のこと。
発現ベクターの選択は、ベクターを発現することになる宿主細胞に依存する。典型的には、発現ベクターは、抗ＨＥＲ２抗体鎖またはフラグメントをコードしているポリヌクレオチドに作動可能にリンクされた、プロモーターおよび他の制御配列（例えば、エンハンサー）を含む。いくつかの実施形態において、誘導性プロモーターを使用し、誘導条件下以外で挿入された配列の発現を阻止する。誘導性プロモーターとしては、例えば、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモーター、または熱ショックプロモーターがある。形質転換された生物の培養物を、非誘導条件下で個体群を偏らせることなく増加させ、発現生成物が宿主細胞により良好に許容される配列をコードすることができる。プロモーターに加えて、他の制御要素もまた、抗ＨＥＲ２抗体鎖またはフラグメントを効率的に発現するのに必要とされ得る、または望まれ得る。要素としては、典型的には、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接するリボソーム結合位置または他の配列がある。さらに、使用時に、適切なエンハンサーを細胞系に封入することによって、発現の効率を増強してもよい（例えば、Scharf et al., Results Probl. Cell Differ. 20:125, 1994およびBittner et al., Meth. Enzymol., 153:516, 1987を参照のこと）。例えば、ＳＶ４０エンハンサーまたはＣＭＶエンハンサーを使用し、哺乳動物宿主細胞の発現を高めてもよい。
発現ベクターはまた、分泌シグナル配列位置を提供し、挿入される抗ＨＥＲ２抗体配列によってコードされるポリペプチドとの融合タンパク質を形成し得る。多くの場合、挿入された抗ＨＥＲ２抗体配列をシグナル配列にリンクしてから、ベクターに封入する。抗ＨＥＲ２抗体の軽鎖および重鎖可変ドメインをコードしている配列を受容するために使用されるベクターはまた、その定常領域または一部分をコードすることもある。このようなベクターによって、定常領域との融合タンパク質としての可変領域が発現し、それにより、完全抗体またはそのフラグメントが生成する。典型的には、このような定常領域はヒトである。
抗ＨＥＲ２抗体鎖を担持しかつ発現するための宿主細胞は、原核性または真核性のどちらかとすることができる。大腸菌（E.coli）は、本開示のポリヌクレオチドをクローニングしかつ発現させるのに有用な１つの原核宿主である。使用に好適な他の微生物宿主としては、バチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）などの桿菌、ならびにサルモネラ属、セラチア属、およびさまざまなシュードモナス種などの他の腸内細菌科がある。これらの原核宿主のうち、１つは、典型的には宿主細胞に適合する発現調節配列（例えば、複製起点）を含む発現ベクターを作製することもできる。さらに、ラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ベータ−ラクタマーゼプロモーター系、またはラムダファージに由来するプロモーター系などの、いくつものさまざまな周知のプロモーターが存在する。プロモーターは、典型的には、任意選択でオペレーター配列ともに発現を調節し、かつリボソーム結合位置配列などを有して、転写および翻訳を開始および完了する。酵母などの他の微生物を使用し、本明細書において開示される抗ＨＥＲ２ポリペプチドを発現することもできる。バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞を使用することもできる。
いくつかの特定の実施形態において、哺乳動物宿主細胞を使用し、本開示の抗ＨＥＲ２ポリペプチドが発現および生成される。例えば、これらは、内因性免疫グロブリン遺伝子を発現するハイブリドーマ細胞株（例えば、ミエローマハイブリドーマクローン）または外因性発現ベクターを担持する哺乳動物細胞株（例えば、ＳＰ２／０ミエローマ細胞）のいずれかとすることができる。これらとしては、任意の正常な死滅の、または正常なもしくは異常な不死の、動物またはヒト細胞がある。例えば、さまざまなＣＨＯ細胞株、Ｃｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、ミエローマ細胞株、形質転換されたＢ細胞、およびハイブリドーマを含む、完全な免疫グロブリンを分泌することができるいくつかの好適な宿主細胞株が開発されている。ポリペプチドを発現させるための哺乳動物組織細胞培養の使用は、一般的には、例えば、Winnacker, From Genes to Clones, VCH Publishers, N.Y., N.Y., 1987で論じられている。哺乳動物宿主細胞用の発現ベクターは、複製起点、プロモーター、およびエンハンサーなどの発現調節配列（例えば、Queen et al., Immunol. Rev. 89:49-68, 1986を参照のこと）、ならびにリボソーム結合位置、ＲＮＡスプライス位置、ポリアデニル化位置、および転写ターミネーター配列などの必要なプロセシング情報位置を含むことができる。発現ベクターは通常、哺乳動物遺伝子または哺乳動物ウイルスに由来するプロモーターを含む。好適なプロモーターは、構成的、細胞種類特異的、段階特異的、および／またはモジュレート可能もしくは制御可能であってもよい。有用なプロモーターとしては、これらに限定されるものではないが、メタロチオネインプロモーター、構成的アデノウイルス主要後期プロモーター、デキサメタゾン誘導性ＭＭＴＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＭＲＰ ｐｏｌＩＩＩプロモーター、構成的ＭＰＳＶプロモーター、テトラサイクリン誘導性ＣＭＶプロモーター（ヒト極初期ＣＭＶプロモーターなど）、構成的ＣＭＶプロモーター、および当技術分野において既知のプロモーター−エンハンサーの組合せがある。
目的のポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを導入する方法は、細胞宿主の種類に応じて変化する。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションが、原核細胞に対して一般的に使用されるが、リン酸カルシウム処理またはエレクトロポレーションを、他の細胞宿主に対して使用してもよい（Sambrook et al., supraを参照のこと）。他の方法としては、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム処理、リポソーム媒介性形質転換、インジェクションおよびマイクロインジェクション、弾道法、ビロソーム、免疫リポソーム、ポリカチオン：核酸コンジュゲート、ネイキッドＤＮＡ、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質ＶＰ２２との融合（Elliot and O'Hare, Cell 88:223, 1997）、ＤＮＡの薬剤促進性取込み、ならびにｅｘ ｖｉｖｏでの形質導入がある。組換えタンパク質を長期的に高収率で生成するには、安定な発現がしばしば望ましい。例えば、抗ＨＥＲ２抗体鎖または結合フラグメントを安定に発現する細胞株を、ウイルス性の複製起点または内因性発現要素と、選択マーカー遺伝子とを含む、本明細書において開示される発現ベクターを使用して調製することができる。ベクターの導入後、細胞を富化培地中で１〜２日間成長させてから、選択培地に切り替えてもよい。選択マーカーの目的は、選択に対する耐性を与えることであり、その存在によって、選択培地中で導入された配列を上手く発現する細胞が増殖する。耐性のある安定にトランスフェクトされた細胞を、細胞の種類に対して適切な組織培養技法を使用して繁殖させることができる。
式（ＩＩａ）および式（ＩＩｂ）の抗体コンジュゲートを作製する方法
式（ＩＩ）の免疫賦活コンジュゲートを形成するための一般的な反応スキームを以下のスキーム１３に示す。
Figure 0006877420
 （式中、ＲＧ１は、チオールと反応し、スクシンイミド環を与えるマレイミド、またはケトンと反応し、オキシムを与えるヒドロキルアミンなどの、式（Ｉａ）の化合物の適合性のＲ４基と反応し、対応するＲ４０基を形成する反応基であり、Ｒ１、Ｒ４、Ｌ２、Ａｂ、およびＲ４０は本明細書で定義されたとおりである。）
式（ＩＩｂ）の免疫賦活コンジュゲートを形成するための一般的な反応スキームを以下のスキーム１４に示す。
Figure 0006877420
 （式中、ＲＧ１は、チオールと反応し、スクシンイミド環を与えるマレイミド、またはケトンと反応し、オキシムを与えるヒドロキルアミンなどの、式（Ｉｂ）の化合物の適合性のＲ４基と反応し、対応するＲ４０基を形成する反応基であり、Ｒ１、Ｒ４、Ｌ２、Ａｂ、およびＲ４０は本明細書で定義されたとおりである。）
治療的使用および治療方法
提供された抗体コンジュゲートは、これらに限定されないが、ＨＥＲ２陽性癌などの癌の治療を含むさまざまな用途に有用である。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体コンジュゲートは、腫瘍成長の阻害、腫瘍体積の減少、分化の誘導、および／または腫瘍、例えば、ＨＥＲ２固形腫瘍における腫瘍原性の低下に有用である。使用方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｖｏでの方法とすることができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体コンジュゲートのいずれかを対象に投与することによって、それを必要とする対象、例えばヒト患者において、疾患、例えばＨＥＲ２陽性癌を、治療、予防、または緩和する方法が本明細書において提供される。対象、例えばヒト患者における、疾患を治療または予防する本発明の抗体コンジュゲートの使用もまた提供される。さらに、対象での疾患の治療または予防における抗体コンジュゲートの使用が提供される。いくつかの実施形態において、対象における疾患を治療または予防するための医薬の製造に使用するための抗体コンジュゲートが提供される。ある特定の実施形態において、抗体コンジュゲートで治療される疾患は、癌、例えばＨＥＲ２陽性癌である。抗体コンジュゲートで治療することができるさまざまな癌は、上記の定義の項で列挙される。ＨＥＲ２陽性癌は、ＨＥＲ２タンパク質がその細胞表面に存在している細胞を含む任意の癌とすることができる。例えば、ＨＥＲ２陽性癌は、胃癌、食道癌、胃食道接合部腺癌、結腸癌、直腸癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸管癌、子宮癌、子宮内膜癌、膀胱癌、尿路癌、膵臓癌、肺癌、前立腺癌、骨肉腫、神経芽細胞腫、膠芽腫、神経内分泌腫瘍、および頭頸部癌のいずれかの原発腫瘍または転移のどちらかとすることができる。ある特定の実施形態において、癌は、抗体コンジュゲートの、抗体、抗体フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）が結合するＨＥＲ２発現細胞によって特徴づけられる。ある特定の実施形態において、癌は、ＨＥＲ２発現に加えて、多数のヒト上皮増殖因子受容体の同時発現によって特徴づけられる。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌は、高ＨＥＲ２発現を有し得、例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ）スコア３＋を有し、このスコアは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｔｓ（ＡＳＣＯ／ＣＡＰ）のＩＨＣスコアによって決定して、３０％を超える浸潤性腫瘍細胞における均一で強い膜染色として定められる（English et al., Mol Diagn Ther. 2013 Apr; 17(2): 85-99を参照のこと）。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ２陽性癌は、比較的低いＨＥＲ２発現を有し得、例えば、ＩＨＣスコア２＋を有し、このスコアは、少なくとも１０％の細胞に、不均一であるか強度が弱いかのいずれかであるが、明らかな周辺分布を伴う完全な膜染色があるものとして、または非常にまれに３０％以下の腫瘍細胞が完全な膜染色を示す腫瘍として、ＡＳＣＯ／ＣＡＰ ＩＨＣスコアによって定義される（English et al., Mol Diagn Ther. 2013 Apr; 17(2): 85-99を参照のこと）。
いくつかの実施形態において、それを必要とする対象におけるＨＥＲ２陽性癌を治療する方法であって、治療有効量の、本発明に記載の任意の抗体コンジュゲートのいずれかを対象に投与することを含む方法が提供される。ＨＥＲ２陽性癌は、ＨＥＲ２タンパク質がその細胞表面に存在している細胞を含む任意の癌とすることができる。いくつかの実施形態において、使用される抗体コンジュゲートは、抗ＨＥＲ２抗体単独と比較したときに、長期のＨＥＲ２陽性癌を抑制することおよび／またはＨＥＲ２陽性癌の再発を低下させることが可能である。
また、本明細書に記載の抗体コンジュゲートは、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、消化管潰瘍、メネトリエ病、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分泌性アデノーマ（secreting adenomas）、またはタンパク質損失症候群（protein loss syndrome）、腎性障害、血管原性障害、加齢黄斑変性症、推定眼ヒストプラスマ症候群、または加齢黄斑変性症などの眼疾患、骨関節炎、くる病、および骨粗鬆症などの骨関連病態、全身性過粘稠血症候群、オスラーウェーバーランデュ疾患、慢性肺閉塞性疾患、熱傷後の浮腫、外傷、放射線、脳卒中、低酸素症または虚血、糖尿病性腎症、パジェット疾、（例えば、ヒト皮膚のＵＶ照射によって生じた）光老化、良性前立腺肥大、アデノウイルス、ハンタウイルス、ボレリア・ブルグドルフェリ（Borrelia burgdorferi）、エルジニア種、および百日咳菌（Bordetella pertussis）から選択される微生物病原体を含む特定の微生物感染症、血小板凝集によって生じる血栓、子宮内内膜症、卵巣過剰刺激症候群、子癇前症、機能不全性子宮出血、または機能性子宮出血などの生殖状態、急性および慢性腎症（増殖性糸球体腎炎を含む）、過形成性瘢痕形成、内毒素性ショックおよび真菌症、家族性腺腫症ポリポーシス、骨髄異形成症候群、再生不良性貧血、虚血性傷害、肺、腎、または肝線維症、乳児肥厚性幽門狭窄症、尿閉塞性症候群、乾癬性関節炎などのさまざまな非悪性疾患または障害を治療するために使用してもよいことが考慮される。
このような抗体コンジュゲート投与する方法としては、これらに限定されるものではないが、非経口（例えば静脈内）投与、例えば、ボーラスもしくは連続注入としての長時間の注射、経口投与、筋肉内投与、腫瘍内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、脳脊髄内（intracerobrospinal）、皮下投与、関節内投与、滑液内投与、リンパ節への注射、またはくも膜下腔内投与がある。
疾患の治療に関して、本発明の抗体コンジュゲートの適切な投薬量は、治療しようとする疾患の種類、疾患の重症度および経過、疾患の反応性、薬歴、患者の病歴などのさまざまな因子に依存する。抗体コンジュゲートは１回で、または数日から数カ月継続する一連の治療にわたって、または治癒するまで、もしくは疾患状態の縮小（例えば、腫瘍サイズの減少）に達するまで投与することができる。最適な投薬スケジュールは、患者体内における薬物蓄積の測定値から算出することができ、特定の抗体コンジュゲートの相対的効力に応じて変化するであろう。いくつかの実施形態において、投薬量は、体重１ｋｇ当たり、０．０１ｍｇ〜２０ｍｇ（例えば、０．０１ｍｇ、０．０２ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．０６ｍｇ、０．０７ｍｇ、０．０８ｍｇ、０．０９ｍｇ、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、または２０ｍｇ）であり、１日１回以上、毎週１回以上、毎月１回以上、または毎年１回以上投与することができる。ある特定の実施形態において、本発明の抗体コンジュゲートは、２週毎に１回または３週毎に１回投与される。ある特定の実施形態において、本発明の抗体コンジュゲートは、１回だけ投与される。治療医師であれば、体液または組織における薬物の測定された滞留時間および濃度に基づいて、投薬の反復速度を推定することができる。
組合せ療法
ある特定の場合において、本発明の抗体コンジュゲートは、他の抗癌剤、抗アレルギー剤、抗嘔気剤（または制吐剤）、疼痛緩和剤、細胞保護剤、およびこれらの組合せなどの他の治療剤と組み合わせることができる。
組合せ療法における使用に考えられる一般的な化学療法剤としては、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射液（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射液（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射液（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシウレア（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イフォスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、フェニックス（イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを含むポリフェプロサン２０（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用塩酸トポテカン（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））、エキセメスタン（Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標））、レトロゾール（Ｆｅｍａｒａ（登録商標））およびフルベストラント（Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標））がある。
本明細書で使用される「薬学的組合せ」という用語は、１つの投薬単位形態中の固定された組合せ、または、２つ以上の治療剤を同時に、もしくは特に時間間隔によって、組合せパートナーが協調的な、例えば相乗的な効果を示す場合はその時間間隔内に個別に独立して投与してもよい場合、非固定的組合せもしくは組合せ投与用のパーツキットを指す。
「組合せ療法」という用語は、２つ以上の治療剤の投与し、本開示に記載の治療的状態または障害を治療することを指す。このような投与は、固定比の活性成分を有する単一のカプセルなどの、実質的に同時様式でこれらの治療剤を同時投与することを含む。あるいは、このような投与は、活性成分毎に、複数のまたは個別の容器（例えば、カプセル、粉末、および液体）中で同時投与することを含む。粉末および／または液体は、所望の用量に復元または希釈してから投与してもよい。さらに、このような投与はまた、ほぼ同時か異なる時間のいずれかで、連続様式にて各種類の治療剤を使用することも含む。いずれの場合にも、治療計画は、本明細書に記載の状態または障害の治療において組合せ薬物の有益な効果を提供するであろう。
組合せ療法は、「相乗作用」を与え、かつ「相乗的」であること、すなわち、活性成分を一緒に使用したときに達成される効果は、化合物を個別に使用して生じる効果の合計よりも大きいことを証明することができる。相乗効果は、活性成分が、（１）同時配合して投与される、または単位投与配合剤を組み合わせて同時に送達される、（２）個別の配合剤として交互に、または同時に送達される、または（３）いくつかの他の計画によるものであるときに達成することができる。交互療法において送達される場合、化合物が例えば、個別の注射筒の異なる注射液によって連続的に投与または送達されるときに、相乗効果を達成することができる。一般的に、交互療法中は、有効投薬量の各活性成分が連続的に、すなわち、順次に投与されるが、組合せ療法では、有効投薬量の２つ以上の活性成分が一緒に投与される。
１つの実施形態において、本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、１つもしくは複数の他の抗ＨＥＲ２抗体、例えば上述の、トラスツズマブ、ペルツズマブ、マルゲツキシマブ、もしくはＨＴ−１９と、または他の抗ＨＥＲ２コンジュゲート、例えば、アドトラスツズマブエムタンシン（Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）またはＴ−ＤＭ１としても知られている）と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによって癌を治療する方法を提供する。
１つの実施形態において、本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、これらに限定されないが、ＥＧＦＲ阻害剤、Ｈｅｒ３阻害剤、ＩＧＦＲ阻害剤、およびＭｅｔ阻害剤などの、１つもしくは複数のチロシンキナーゼ阻害剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによって癌を治療する方法を提供する。
例えば、チロシンキナーゼ阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、塩酸エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、リニファニブ（Ｎ−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）フェニル］−Ｎ’−（２−フルオロ−５−メチルフェニル）尿素、ＡＢＴ８６９としても知られ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈから入手可能）、リンゴ酸スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））、ボスチニブ（４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル、ＳＫＩ−６０６としても知られ、米国特許第６，７８０，９９６号明細書に記載されている）、ダサチニブ（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））、パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、ザクチマ（ＺＤ６４７４）、およびイマチニブまたはメシル酸イマチニブ（Ｇｉｌｖｅｃ（登録商標）およびＧｌｅｅｖｅｃ（登録商標））がある。
上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、エルロチニブ塩酸塩（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））、Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［［（３’’Ｓ’’） −テトラヒドロ−３−フラニル］オキシ］−６−キナゾリニル］−４（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（Ｔｏｖｏｋ（登録商標））、バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（登録商標））、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））、（３Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−１−（（４−（（３−メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）メチル）ピペリジン−３−オール（ＢＭＳ６９０５１４）、カネルチニブ二塩酸塩（ＣＩ−１０３３）、６−［４−［（４−エチル−１−ピペラジニル）メチル］フェニル］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（ＡＥＥ７８８、ＣＡＳ４９７８３９−６２−０）、ムブリチニブ（ＴＡＫ１６５）、ペリチニブ（ＥＫＢ５６９）、アファチニブ（Ｇｉｌｏｔｒｉｆ（登録商標））、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、Ｎ−［４−［［１−［（３−フルオロフェニル）メチル］−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ］−５−メチルピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−６−イル］−カルバミン酸、（３Ｓ）−３−モルホリニルメチルエステル（ＢＭＳ５９９６２６）、Ｎ−（３，４−ジクロロ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［［（３ａα，５β，６ａα）−オクタヒドロ−２−メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール−５−イル］メトキシ］−４−キナゾリナミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ７８１６１３−２３−８）、および４−［４−［［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール（ＰＫＩ１６６、ＣＡＳ１８７７２４−６１−４）がある。
ＥＧＦＲ抗体としては、これらに限定されるものではないが、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））、マツズマブ（ＥＭＤ−７２０００）、ニモツズマブ（ｈＲ３）、ザルツムマブ、ＴｈｅｒａＣＩＭ ｈ−Ｒ３、ＭＤＸ０４４７（ＣＡＳ ３３９１５１−９６−１）、およびｃｈ８０６（ｍＡｂ−８０６、ＣＡＳ ９４６４１４−０９−１）がある。
他のＨＥＲ２阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２、（２Ｅ）−Ｎ−［４−［［３−クロロ−４−［（ピリジン−２−イル）メトキシ］フェニル］アミノ］−３−シアノ−７−エトキシキノリン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）ブター２−エンアミド、国際公開第０５／０２８４４３号パンフレットに記載されている）、ラパチニブまたはラパチニブトシル酸塩（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））、（３Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−１−（（４−（（３−メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）メチル）ピペリジン−３−オール（ＢＭＳ６９０５１４）、（２Ｅ）−Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［［（３Ｓ）−テトラヒドロ−３−フラニル］オキシ］−６−キナゾリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（ＢＩＢＷ−２９９２、ＣＡＳ ８５０１４０−７２−６）、Ｎ−［４−［［１−［（３−フルオロフェニル）メチル］−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ］−５−メチルピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−６−イル］−カルバミン酸、（３Ｓ）−３−モルホリニルメチルエステル（ＢＭＳ ５９９６２６、ＣＡＳ ７１４９７１−０９−２）、カネルチニブ二塩酸塩（ＰＤ１８３８０５またはＣＩ−１０３３）、およびＮ−（３，４−ジクロロ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［［（３ａα，５β，６ａα）−オクタヒドロ−２−メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール−５−イル］メトキシ］−４−キナゾリナミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ ７８１６１３−２３−８）がある。
ＨＥＲ３阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、ＬＪＭ７１６、ＭＭ−１２１、ＡＭＧ−８８８、ＲＧ７１１６、ＲＥＧＮ−１４００、ＡＶ−２０３、ＭＰ−ＲＭ−１、ＭＭ−１１１、およびＭＥＨＤ−７９４５Ａがある。
ＭＥＴ阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、カボザンチニブ（ＸＬ１８４、ＣＡＳ８４９２１７−６８−１）、フォレチニブ（ＧＳＫ１３６３０８９、以前はＸＬ８８０であった、ＣＡＳ ８４９２１７−６４−７）、チバンチニブ（ＡＲＱ１９７、ＣＡＳ １０００８７３−９８−２）、１−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−Ｎ−（５−（７−メトキシキノリン−４−イルオキシ）ピリジン−２−イル）−５−メチル−３−オキソ−２−フェニル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキサミド（ＡＭＧ４５８）、クリゾチニブ（Ｘａｌｋｏｒｉ（登録商標）、ＰＦ−０２３４１０６６）、（３Ｚ）−５−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イルスルホニル）−３−（｛３，５−ジメチル−４−［（４−メチルピペラジン−１−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロール−２−イル｝メチレン）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（ＳＵ１１２７１）、（３Ｚ）−Ｎ−（３−クロロフェニル）−３−（｛３，５−ジメチル−４−［（４−メチルピペラジン−１−イル）カルボニル］−１Ｈ−ピロール−２−イル｝メチレン）−Ｎ−メチル−２−オキソインドリン−５−スルホンアミド（ＳＵ１１２７４）、（３Ｚ）−Ｎ−（３−クロロフェニル）−３−｛［３，５−ジメチル−４−（３−モルホリン−４−イルプロピル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］メチレン｝−Ｎ−メチル−２−オキソインドリン−５−スルホンアミド（ＳＵ１１６０６）、６−［ジフルオロ［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］メチル］−キノリン（ＪＮＪ３８８７７６０５、ＣＡＳ ９４３５４０−７５−８）、２−［４−［１−（キノリン−６−イルメチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピラジン−６−イル］−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］エタノール（ＰＦ０４２１７９０３、ＣＡＳ ９５６９０５−２７−４）、Ｎ−（（２Ｒ）−１，４−ジオキサン−２−イルメチル）−Ｎ−メチル−Ｎ’−［３−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−５−オキソ−５Ｈ−ベンゾ［４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］ピリジン−７−イル］スルファミド（ＭＫ２４６１、ＣＡＳ ９１７８７９−３９−１）、６−［［６−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジン−３−イル］チオ］−キノリン（ＳＧＸ５２３、ＣＡＳ １０２２１５０−５７−７）、および（３Ｚ）−５−［［（２，６−ジクロロフェニル）メチル］スルホニル］−３−［［３，５−ジメチル−４−［［（２Ｒ）−２−（１−ピロリジニルメチル）−１−ピロリジニル］カルボニル］−１Ｈ−ピロール−２−イル］メチレン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（ＰＨＡ６６５７５２、ＣＡＳ ４７７５７５−５６−７）がある。
ＩＧＦＲ阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、ＢＭＳ−７５４８０７、ＸＬ−２２８、ＯＳＩ−９０６、ＧＳＫ０９０４５２９Ａ、Ａ−９２８６０５、ＡＸＬ１７１７、ＫＷ−２４５０、ＭＫ０６４６、ＡＭＧ４７９、ＩＭＣＡ１２、ＭＥＤＩ−５７３、およびＢＩ８３６８４５がある。例えば、再検討に関しては、JNCI, 104; 975 (2012)を参照のこと。
他の実施形態において、本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、これらに限定されないが、ＭＥＫ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ阻害剤、ＳＨＰ２阻害剤、またｍＴｏＲ、およびＣＤＫ阻害剤などの、１つまたは複数の繁殖シグナル伝達経路阻害剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによって癌を治療する方法を提供する。
例えば、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、ＸＬ−５１８（ＧＤＣ−０９７３としても知られている、Ｃａｓ Ｎｏ．１０２９８７２−２９−４、ＡＣＣ Ｃｏｒｐ．から入手可能）、２−［（２−クロロ−４−ヨードフェニル）アミノ］−Ｎ−（シクロプロピルメトキシ）−３，４−ジフルオロ−ベンズアミド（ＣＩ−１０４０またはＰＤ１８４３５２としても知られ、国際公開第２００００３５４３６号パンフレットに記載されている）、Ｎ−［（２Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ］−３，４−ジフルオロ−２−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］−ベンズアミド（ＰＤ０３２５９０１としても知られ、国際公開第２００２００６２１３号パンフレットに記載されている）、２，３−ビス［アミノ［（２−アミノフェニル）チオ］メチレン］−ブタンジニトリル（Ｕ０１２６としても知られ、米国特許第２，７７９，７８０号明細書に記載されている）、Ｎ−［３，４−ジフルオロ−２−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］−６−メトキシフェニル］−１−［（２Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル］−シクロプロパンスルホンアミド（ＲＤＥＡ１１９またはＢＡＹ８６９７６６としても知られ、国際公開第２００７０１４０１１号パンフレットに記載されている）、（３Ｓ，４Ｒ，５Ｚ，８Ｓ，９Ｓ，１１Ｅ）−１４−（エチルアミノ）−８，９，１６−トリヒドロキシ−３，４−ジメチル−３，４，９，１９−テトラヒドロ−１Ｈ−２−ベンゾオキサシクロテトラデシン−１，７（８Ｈ）−ジオン］（Ｅ６２０１としても知られ、国際公開第２００３０７６４２４号パンフレットに記載されている）、２’−アミノ−３’−メトキシフラボン（ＰＤ９８０５９としても知られ、Ｂｉａｆｆｉｎ ＧｍｂＨ＆Ｃｏ．，ＫＧ，Ｇｅｒｍａｎｙから入手可能）、ベムラフェニブ（ＰＬＸ−４０３２、ＣＡＳ ９１８５０４−６５−１）、（Ｒ）−３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−６−フルオロ−５−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）−８−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−４，７（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン（ＴＡＫ−７３３、ＣＡＳ １０３５５５５−６３−５）、ピマセルチブ（ＡＳ−７０３０２６、ＣＡＳ １２０４５３１−２６−９）、およびトラメチニブジメチルスルホキシド（ＧＳＫ−１１２０２１２、ＣＡＳ １２０４５３１−２５−８０）がある。
ＢＲＡＦ阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、ベムラフェニブ（またはＺｅｌｂｏｒａｆ（登録商標））、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０（Ｓｙｍａｎｓｉｓから入手可能）、ダブラフェニブ（またはＧＳＫ２１１８４３６）、ＬＧＸ ８１８、ＣＥＰ−３２４９６、ＵＩ−１５２、ＲＡＦ ２６５、レゴラフェニブ（ＢＡＹ ７３−４５０６）、ＣＣＴ２３９０６５、またはソラフェニブ（またはソラフェニブトシル酸塩もしくはＮｅｘａｖａｒ（登録商標））、またはイピリムマブ（またはＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１、もしくはＹｅｒｖｏｙ）がある。
ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、４−［２−（１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−［［４−（メチルスルホニル）ピペラジン−１−イル］メチル］チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル］モルホリン（ＧＤＣ０９４１、ＲＧ７３２１、ＧＮＥ０９４１、ピクトレリシブ、またはピクチリシブとしても知られ、国際公開第０９／０３６０８２号パンフレットおよび同第０９／０５５７３０号パンフレットに記載されている）、２−メチル−２−［４−［３−メチル−２−オキソ−８−（キノリン−３−イル）−２，３−ジヒドロイミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］フェニル］プロピオニトリル（ＢＥＺ２３５またはＮＶＰ−ＢＥＺ２３５としても知られ、国際公開第０６／１２２８０６号パンフレットに記載されている）、４−（トリフルオロメチル）−５−（２，６−ジモルホリノピリミジン−４−イル）ピリジン−２−アミン（ＢＫＭ１２０またはＮＶＰ−ＢＫＭ１２０としても知られ、国際公開第２００７／０８４７８６号パンフレットに記載されている）、トザセルチブ（ＶＸ６８０またはＭＫ−０４５７、ＣＡＳ ６３９０８９−５４−６）、（５Ｚ）−５−［［４−（４−ピリジニル）−６−キノリニル］メチレン］−２，４−チアゾリジンジオン（ＧＳＫ１０５９６１５、ＣＡＳ ９５８８５２−０１−２）、（１Ｅ，４Ｓ，４ａＲ，５Ｒ，６ａＳ，９ａＲ）−５−（アセチルオキシ）−１−［（ジ−２−プロペニルアミノ）メチレン］−４，４ａ，５，６，６ａ，８，９，９ａ−オクタヒドロ−１１−ヒドロキシ−４−（メトキシメチル）−４ａ，６ａ−ジメチル−シクロペンタ［５，６］ナフト［１，２−ｃ］ピラン−２，７，１０（１Ｈ）−トリオン（ＰＸ８６６、ＣＡＳ ５０２６３２−６６−８）、８−フェニル−２−（モルホリン−４−イル）−クロメン−４−オン（ＬＹ２９４００２、ＣＡＳ １５４４４７−３６−６）、（Ｓ）−Ｎ１−（４−メチル−５−（２−（１，１，１−トリフルオロ−２−メチルプロパン−２−イル）ピリジン−４−イル）チアゾール−２−イル）ピロリジン−１，２−ジカルボキサミド（ＢＹＬ７１９またはアルペリシブとしても知られている）、２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパンアミド（ＧＤＣ００３２、ＲＧ７６０４、またはタセリシブとしても知られている）がある。
ｍＴｏＲ阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、テムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標））、リダホロリムス（正式にはデフェロリムスとして知られる、（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、ＡＰ２３５７３およびＭＫ８６６９としても知られ、国際公開第０３／０６４３８３号パンフレットに記載されている）、エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）またはＲＡＤ００１）、ラパマイシン（ＡＹ２２９８９、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ（登録商標））、シマピモッド（ＣＡＳ １６４３０１−５１−３）、（５−｛２，４−ビス［（３Ｓ）−３−メチルモルホリン−４−イル］ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−２−メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）、２−アミノ−８−［トランス−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ０４６９１５０２、ＣＡＳ １０１３１０１−３６−４）、およびＮ２−［１，４−ジオキソ−４−［［４−（４−オキソ−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル）モルホリニウム−４−イル］メトキシ］ブチル］−Ｌ−アルギニルグリシル−Ｌ−α−アスパルチルＬ−セリン−、内塩（ＳＦ１１２６、ＣＡＳ ９３６４８７−６７−１）がある。
ＣＤＫ阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、パルボシクリブ（ＰＤ−０３３２９９１としても知られている、Ｉｂｒａｎｃｅ（登録商標）、６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−｛［５−（１−ピペラジニル）−２−ピリジニル］アミノ｝ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン）がある。
さらに他の実施形態において、本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、これらに限定されないが、ＩＡＰ阻害剤、ＢＣＬ２阻害剤、ＭＣｌ１阻害剤、ＴＲＡＩＬ剤、ＣＨＫ阻害剤などの、１つまたは複数のプロアポトーシス剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによって癌を治療する方法を提供する。
例えば、ＩＡＰ阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、ＬＣＬ１６１、ＧＤＣ−０９１７、ＡＥＧ−３５１５６、ＡＴ４０６、およびＴＬ３２７１１がある。ＩＡＰ阻害剤の他の例としては、これらに限定されるものではないが、国際公開第０４／００５２８４号パンフレット、国際公開第０４／００７５２９号パンフレット、国際公開第０５／０９７７９１号パンフレット、国際公開第０５／０６９８９４号パンフレット、国際公開第０５／０６９８８８号パンフレット、国際公開第０５／０９４８１８号パンフレット、米国特許出願公開第２００６／００１４７００号明細書、米国特許出願公開第２００６／００２５３４７号明細書、国際公開第０６／０６９０６３号パンフレット、国際公開第０６／０１０１１８号パンフレット、国際公開第０６／０１７２９５号パンフレット、および国際公開第０８／１３４６７９号パンフレットに開示されているものがあり、これらすべてが参照によって本明細書に組み込まれるものとする。
ＢＣＬ−２阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、４−［４−［［２−（４−クロロフェニル）−５，５−ジメチル−１−シクロヘキセン−１−イル］メチル］−１−ピペラジニル］−Ｎ−［［４−［［（１Ｒ）−３−（４−モルホリニル）−１−［（フェニルチオ）メチル］プロピル］アミノ］−３−［（トリフルオロメチル）スルホニル］フェニル］スルホニル］ベンズアミド（ＡＢＴ−２６３としても知られ、国際公開第０９／１５５３８６号パンフレットに記載されている）、テトロカルシンＡ、アンチマイシン、ゴシポール（（−）ＢＬ−１９３）、オバトクラックス、エチル−２−アミノ−６−シクロペンチル−４−（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチル）−４Ｈクロモン−３−カルボキシレート（ＨＡ１４−１）、オブリメルセン（Ｇ３１３９、Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、Ｂａｋ ＢＨ３ペプチド、（−）−ゴシポール酢酸（ＡＴ−１０１）、４−［４−［（４’−クロロ［１，１’−ビフェニル］−２−イル）メチル］−１−ピペラジニル］−Ｎ−［［４−［［（１Ｒ）−３−（ジメチルアミノ）−１−［（フェニルチオ）メチル］プロピル］アミノ］−３−ニトロフェニル］スルホニル］−ベンズアミド（ＡＢＴ−７３７、ＣＡＳ ８５２８０８−０４−９）、およびナビトクラックス（ＡＢＴ−２６３、ＣＡＳ ９２３５６４−５１−６）がある。
ＤＲ４（ＴＲＡＩＬＲ１）およびＤＲ５（ＴＲＡＩＬＲ２）を含むプロアポトーシス受容体アゴニスト（ＰＡＲＡ）としては、これらに限定されるものではないが、デュラネルミン（ＡＭＧ−９５１、ＲｈＡｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ）、マパツムマブ（ＨＲＳ−ＥＴＲ１、ＣＡＳ ６５８０５２−０９−６）、レキサツムマブ（ＨＧＳ−ＥＴＲ２、ＣＡＳ ８４５８１６−０２−６）、アポマブ（Ａｐｏｍａｂ（登録商標））、コナツムマブ（ＡＭＧ６５５、ＣＡＳ ８９６７３１−８２−１）、およびチガツズマブ（ＣＳ１００８、ＣＡＳ ９４６４１５−３４−５、Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓａｎｋｙｏから入手可能）がある。
チェックポイントキナーゼ（ＣＨＫ）阻害剤としては、これらに限定されるものではないが、７−ヒドロキシスタウロスポリン（ＵＣＮ−０１）、６−ブロモ−３−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−５−（３Ｒ）−３−ピペリジニルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−アミン（ＳＣＨ９００７７６、ＣＡＳ ８９１４９４−６３−６）、５−（３−フルオロフェニル）−３−ウレイドチオフェン−２−カルボン酸 Ｎ−［（Ｓ）−ピペリジン−３−イル］アミド（ＡＺＤ７７６２、ＣＡＳ ８６０３５２−０１−８）、４−［（（３Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−３−イル）アミノ］−３−（１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−６−クロロキノリン−２（１Ｈ）−オン（ＣＨＩＲ１２４、ＣＡＳ ４０５１６８−５８−３）、７−アミノダクチノマイシン（７−ＡＡＤ）、イソグラヌラチミド、デブロモヒメニアルジシン、Ｎ−［５−ブロモ−４−メチル−２−［（２Ｓ）−２−モルホリニルメトキシ］−フェニル］−Ｎ’−（５−メチル−２−ピラジニル）尿素（ＬＹ２６０３６１８、ＣＡＳ ９１１２２２−４５−２）、スルホラファン（ＣＡＳ ４４７８−９３−７、４−メチルスルフィニルブチルイソチオシアネート）、９，１０，１１，１２−テトラヒドロ−９，１２−エポキシ−１Ｈ−ジインドロ［１，２，３−ｆｇ：３’，２’，１’−ｋｌ］ピロロ［３，４−ｉ］［１，６］ベンゾジアゾシン−１，３（２Ｈ）−ジオン（ＳＢ−２１８０７８、ＣＡＳ １３５８９７−０６−２）、ならびにＴＡＴ−Ｓ２１６Ａ（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＬＹＲＳＰＡＭＰＥＮＬ（配列番号３３））、およびＣＢＰ５０１（（ｄ−Ｂｐａ）ｓｗｓ（ｄ−Ｐｈｅ−Ｆ５）（ｄ−Ｃｈａ）ｒｒｒｑｒｒ）がある。
更なる実施形態において、本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、１つまたは複数の免疫調節物質（例えば、共刺激分子の活性化剤または免疫チェックポイント分子の抑制因子のうちの１つまたは複数）と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによって癌を治療する方法を提供する。
ある特定の実施形態において、免疫調節物質は、共刺激分子の活性化剤である。１つの実施形態において、共刺激分子のアゴニストは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３、またはＣＤ８３リガンドのアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または可溶性融合物）から選択される。
ある特定の実施形態において、免疫調節物質は、免疫チェックポイント分子の阻害剤である。１つの実施形態において、免疫調節物質は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、および／またはＴＧＦＲベータの阻害剤である。１つの実施形態において、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、もしくはＣＴＬＡ４、またはこれらの任意の組合せを阻害する。「阻害」または「阻害剤」という用語は、所与の分子、例えば免疫チェックポイント阻害剤のある特定のパラメーター、例えば活性を低下させることを含む。例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、またはこれら超の活性、例えばＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１活性の阻害は、この用語に含まれる。したがって、阻害は、１００％である必要はない。
阻害分子の阻害は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはタンパク質レベルで実施することができる。いくつかの実施形態において、抑制性核酸（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ）を使用し、抑制性分子の発現を阻害することができる。他の実施形態において、抑制性シグナルの阻害剤は、ポリペプチド、例えば可溶性リガンド（例えば、ＰＤ−１−ＩｇまたはＣＴＬＡ−４ Ｉｇ）、または抑制性分子に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメント、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、および／またはＴＧＦＲベータ、またはこれらの組合せに結合する抗体またはそのフラグメント（本明細書において「抗体分子」とも称される）である。
１つの実施形態において、抗体分子は、完全抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ））である。さらに他の実施形態において、抗体分子は、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥの重鎖定常領域から選択される、具体的には、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４の重鎖定常領域、より具体的には、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４（例えば、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４）の重鎖定常領域から選択される重鎖定常領域（Ｆｃ）を有する。１つの実施形態において、重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４である。１つの実施形態において、定常領域は、改変される、例えば突然変異され、抗体分子の特性が修飾される（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つまたは複数が増加または減少される）。
ある特定の実施形態において、抗体分子は、二重特異性または多重特異性抗体分子の形態である。１つの実施形態において、二重特異性抗体分子は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に対する第１の結合特異性および第２の結合特異性、例えばＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、またはＰＤ−Ｌ２に対する第２の結合特異性を有する。１つの実施形態において、二重特異性抗体分子は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１およびＴＩＭ−３に結合する。他の実施形態において、二重特異性抗体分子は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１およびＬＡＧ−３に結合する。他の実施形態において、二重特異性抗体分子は、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１に結合する。さらに他の実施形態において、二重特異性抗体分子は、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ２に結合する。他の実施形態において、二重特異性抗体分子は、ＴＩＭ−３およびＬＡＧ−３に結合する。上述の分子の任意の組合せは多重特異性抗体分子、例えば、ＰＤ−１またはＰＤ−１に対する第１の結合特異性、ならびにＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、またはＰＤ−Ｌ２のうちの２つ以上に対する第２および第３の結合特異性を含む三重特異性抗体に作製することができる。
ある特定の実施形態において、免疫調節物質は、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１の阻害剤である。他の実施形態において、免疫調節物質は、ＰＤ−Ｌ１、例えばヒトＰＤ−Ｌ１の阻害剤である。１つの実施形態において、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１の阻害剤は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に対する抗体分子である。ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤は、単独で、または他の免疫調節物質と組み合わせて、例えばＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、またはＣＴＬＡ４の阻害剤と組み合わせて投与することができる。例示的な実施形態において、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１の阻害剤、例えば抗ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体分子は、ＬＡＧ−３阻害剤、例えば抗ＬＡＧ−３抗体分子と組み合わせて投与される。他の実施形態において、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１の阻害剤、例えば抗ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１抗体分子は、ＴＩＭ−３阻害剤、例えば抗ＴＩＭ−３抗体分子と組み合わせて投与される。さらに他の実施形態において、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１の阻害剤、例えば抗ＰＤ−１抗体分子は、ＬＡＧ−３阻害剤、例えば抗ＬＡＧ−３抗体分子、およびＴＩＭ−３阻害剤、例えば抗ＴＩＭ−３抗体分子と組み合わせて投与される。
免疫調節物質のＰＤ−１阻害剤（例えば、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、および／またはＴＧＦＲのうちの１つまたは複数）との他の組合せもまた、本発明の範囲内である。当技術分野において既知のまたは本明細書において開示される抗体分子のいずれかは、上述のチェックポイント分子阻害剤の組合せで使用することができる。
１つの実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、またはピディリズマブから選択される抗ＰＤ−１抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブの代替名称としては、ＭＤＸ−１１０６、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、またはＢＭＳ−９３６５５８がある。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４）である。ニボルマブは、ＰＤ１を特異的にブロックする完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ニボルマブ（クローン５Ｃ４）およびＰＤ１に特異的に結合する他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号明細書および国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットに開示されている。
他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ペムブロリズマブである。ペムブロリズマブ（商品名ＫＥＹＴＲＵＤＡ、以前はランブロリズマブであった、Ｍｅｒｃｋ ３７４５、ＭＫ−３４７５、またはＳＣＨ−９００４７５としても知られている）は、ＰＤ１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ペムブロリズマブは、例えば、Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44、国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレット、および米国特許第８，３５４，５０９号明細書に開示されている。
いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はピディリズマブである。ピディリズマブ（ＣＴ−０１１、Ｃｕｒｅ Ｔｅｃｈ）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピディリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ−１モノクローナル抗体は、国際公開第２００９／１０１６１１号パンフレットに開示されている。他の抗ＰＤ１抗体は、米国特許第８，６０９，０８９号明細書、米国特許出願公開第２０１００２８３３０号明細書、および／または米国特許出願公開第２０１２０１１４６４９号明細書に開示されている。他の抗ＰＤ１抗体としては、ＡＭＰ ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）がある。
いくつかの実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の細胞外またはＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、ＡＭＰ−２２４である。
いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、例えば国際公開第２０１３／０１７９１７４号パンフレットに開示され、かつ本明細書において開示される配列（またはそれに対して実質的に同一または類似の配列、例えば、指定配列に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、またはこれら超える同一の配列）を有するＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、またはＭＤＸ−１１０５ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ（Ａ０９−２４６−２とも称される）から選択される。
１つの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＭＤＸ−１１０５である。ＢＭＳ−９３６５５９としても既知であるＭＤＸ−１１０５は、国際公開第２００７／００５８７４号パンフレットに記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
１つの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０抗体は、国際出願第２０１０／０７７６３４号パンフレットに記載の抗ＰＤ−Ｌ１である。
１つの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＭＤＰＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）である。ＭＤＰＬ３２８０Ａは、ＰＤ−Ｌ１に結合するヒトＦｃ最適化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＭＤＰＬ３２８０ＡおよびＰＤ−Ｌ１に対する他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第７，９４３，７４３号明細書および米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号明細書に開示されている。
他の実施形態において、ＰＤ−Ｌ２阻害剤は、ＡＭＰ−２２４である。ＡＭＰ−２２４は、ＰＤ１とＢ７−Ｈ１との間の相互作用をブロックするＰＤ−Ｌ２ Ｆｃ融合可溶性受容体（Ｂ７−ＤＣＩｇ、Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ、例えば国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレットおよび国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレットに開示されている）である。
１つの実施形態において、ＬＡＧ−３阻害剤は、抗ＬＡＧ−３抗体分子である。１つの実施形態において、ＬＡＧ−３阻害剤は、ＢＭＳ−９８６０１６である。
さらに他の実施形態において、本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、これらに限定されないが、インターフェロン、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ７、またはＩＬ２１などの、１つまたは複数のサイトカインと組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによって癌を治療する方法を提供する。
さらに他の実施形態において、本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、１つまたは複数のＳＴＩＮＧ受容体アゴニスト（インターフェロン遺伝子の刺激物質）、例えば、国際公開第２０１４／１８９８０５号パンフレットに記載の化合物と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによって癌を治療する方法を提供する。
他の実施形態において、本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、１つまたは複数の血管新生阻害剤、例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、アキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ（登録商標））、ブリバニブアラニネート（ＢＭＳ−５８２６６４、（Ｓ）−（（Ｒ）−１−（４−（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）−５−メチルピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−６−イルオキシ）プロパン−２−イル）２−アミノプロパノエート）、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））、スニチニブリンゴ酸塩（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））、セディラニブ（ＡＺＤ２１７１、ＣＡＳ ２８８３８３−２０−１）、バルガテフ（ＢＩＢＦ１１２０、ＣＡＳ ９２８３２６−８３−４）、フォレチニブ（ＧＳＫ１３６３０８９）、テラチニブ（ＢＡＹ５７−９３５２、ＣＡＳ ３３２０１２−４０−５）、アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１、ＣＡＳ ８１１８０３−０５−１）、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、ポナチニブ（ＡＰ２４５３４、ＣＡＳ ９４３３１９−７０−８）、チボザニブ（ＡＶ９５１、ＣＡＳ ４７５１０８−１８−０）、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３−４５０６、ＣＡＳ ７５５０３７−０３−７）、バタラニブ二塩酸塩（ＰＴＫ７８７、ＣＡＳ ２１２１４１−５１−０）、ブリバニブ（ＢＭＳ−５４０２１５、ＣＡＳ ６４９７３５−４６−６）、バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（登録商標）またはＡＺＤ６４７４）、モテサニブ二リン酸塩（ＡＭＧ７０６、ＣＡＳ ８５７８７６−３０−３、Ｎ−（２，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１Ｈ−インドール−６−イル）−２−［（４−ピリジニルメチル）アミノ］−３−ピリジンカルボキサミド、国際公開第０２／０６６４７０号パンフレットに記載されている）、ドビチニブ二乳酸塩（ＴＫＩ２５８、ＣＡＳ ８５２４３３−８４−２）、リンファリブ（Ｌｉｎｆａｎｉｂ）（ＡＢＴ８６９、ＣＡＳ ７９６９６７−１６−３）、カボザンチニブ（ＸＬ１８４、ＣＡＳ ８４９２１７−６８−１）、レスタウルチニブ（ＣＡＳ １１１３５８−８８−４）、Ｎ−［５−［［［５−（１，１−ジメチルエチル）−２−オキサゾリル］メチル］チオ］−２−チアゾリル］−４−ピペリジンカルボキサミド（ＢＭＳ３８７０３、ＣＡＳ ３４５６２７−８０−７）、（３Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−１−（（４−（（３−メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）メチル）ピペリジン−３−オール（ＢＭＳ６９０５１４）、Ｎ−（３，４−ジクロロ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［［（３ａα，５β，６ａα）−オクタヒドロ−２−メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール−５−イル］メトキシ］−４−キナゾリンアミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ ７８１６１３−２３−８）、４−メチル−３−［［１−メチル−６−（３−ピリジニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］アミノ］−Ｎ−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−ベンズアミド（ＢＨＧ７１２、ＣＡＳ ９４０３１０−８５−０）、またはアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによって癌を治療する方法を提供する。
他の実施形態において、本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、１つまたは複数の熱ショックタンパク質阻害剤、例えば、タネスピマイシン（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン、ＫＯＳ−９５３および１７−ＡＡＧとしても知られ、ＳＩＧＭＡから入手可能であり、米国特許第４，２６１，９８９号明細書に記載されている）、レタスピマイシン（ＩＰＩ５０４）、ガネテスピブ（ＳＴＡ−９０９０）、［６−クロロ−９−（４−メトキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イル］アミン（ＢＩＩＢ０２１またはＣＮＦ２０２４、ＣＡＳ ８４８６９５−２５−０）、トランス−４−［［２−（アミノカルボニル）−５−［４，５，６，７−テトラヒドロ−６，６−ジメチル−４−オキソ−３−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−インダゾール−１−イル］フェニル］アミノ］シクロヘキシルグリシンエステル（ＳＮＸ５４２２またはＰＦ０４９２９１１３、ＣＡＳ ９０８１１５−２７−５）、５−［２，４−ジヒドロキシ−５−（１−メチルエチル）フェニル］−Ｎ−エチル−４−［４−（４−モルホリニルメチルエステル）フェニル］−３−イソキサゾールカルボキサミド（ＡＵＹ９２２、ＣＡＳ ７４７４１２−４９−３）、または１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７−ＤＭＡＧ）と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによって癌を治療する方法を提供する。
他の実施形態において、本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、１つまたは複数のＨＤＡＣ阻害剤または他のエピジェネティック修飾剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによって癌を治療する方法を提供する。例示的なＨＤＡＣ阻害剤としては、これらに限定されないが、ボリノスタット（Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標））、ロミデプシン（Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標））、トリコスタチン（Ｔｒｅｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ）Ａ（ＴＳＡ）、オキサムフラチン、ボリノスタット（Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標）、スベロイルアニリドヒドロキサム酸）、ピロキサミド（シベロイル−３−アミノピリジンアミドヒドロキサム酸）、トラポキシンＡ（ＲＦ−１０２３Ａ）、トラポキシンＢ（ＲＦ−１０２３８）、シクロ［（αＳ，２Ｓ）−α−アミノ−η−オキソ−２−オキシランオクタノイル−Ｏ−メチル−Ｄ−チロシル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−プロリル］（Ｃｙｌ−１）、シクロ［（αＳ，２Ｓ）−α−アミノ−η−オキソ−２−オキシランオクタノイル−Ｏ−メチル−Ｄ−チロシル−Ｌ−イソロイシル−（２Ｓ）−２−ピペリジンカルボニル］（Ｃｙｌ−２）、サイクリック［Ｌ−アラニル−Ｄ−アラニル−（２Ｓ）−η−オキソ−Ｌ−α−アミノオキシランオクタノイル−Ｄ−プロリル］（ＨＣ−毒素）、シクロ［（αＳ，２Ｓ）−α−アミノ−η−オキソ−２−オキシランオクタノイル−Ｄ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−（２Ｓ）−２−ピペリジンカルボニル］（ＷＦ−３１６１）、クラミドシン（（Ｓ）−サイクリック（２−メチルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｄ−プロリル−η−オキソ−Ｌ−α−アミノオキシランオクタノイル）、アピシジン（シクロ（８−オキソ−Ｌ−２−アミノデカノイル−１−メトキシ−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−イソロイシル−Ｄ−２−ピペリジンカルボニル）、ロミデプシン（Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標）、ＦＲ−９０１２２８）、４−フェニルブチレート、スピルコスタチンＡ、ミルプロイン（バルプロ酸）、エンチノスタット（ＭＳ−２７５、Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［Ｎ−（ピリジン−３−イル−メトキシカルボニル）−アミノ−メチル］−ベンズアミド）、デプデシン（４，５：８，９−ジアンヒドロ−１，２，６，７，１１−ペンタデオキシ−Ｄ−トレオ−Ｄ−イド−ウンデカ−１，６−ジエニトール、４−（アセチルアミノ）−Ｎ−（２−アミノフェニル）−ベンズアミド（ＣＩ−９９４としても知られている）、Ｎ１−（２−アミノフェニル）−Ｎ８−フェニル−オクタンジアミド（ＢＭＬ−２１０としても知られている）、４−（ジメチルアミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）ベンズアミド（Ｍ３４４としても知られている）、（Ｅ）−３−（４−（（（２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−メチル）フェニル）−Ｎ−ヒドロキシアクリルアミド、パノビノスタット（Ｆａｒｙｄａｋ（登録商標））、モセチノスタット、およびベリノスタット（ＰＸＤ１０１としても知られている、Ｂｅｌｅｏｄａｑ（登録商標）、または（２Ｅ）−Ｎ−ヒドロキシ−３−［３−（フェニルスルファモイルｌ）フェニル］プロパ−２−エンアミド）、またはチダミド（ＣＳ０５５またはＨＢＩ−８０００としても知られている、（Ｅ）−Ｎ−（２−アミノ−５−フルオロフェニル）−４−（（３−（ピリジン−３−イル）アクリルアミド）メチル）ベンズアミド）がある。他のエピジェネティック修飾剤としては、これらに限定されないが、ＥＺＨ２（ｚｅｓｔｅホモログ２のエンハンサー）、ＥＥＤ（胚性外胚葉発達）、またはＬＳＤ１（リシン特異的ヒストン脱メチル化酵素１ＡまたはＫＤＭ１Ａ）の阻害剤がある。
さらに他の実施形態において、本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、１つまたは複数のインドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、例えば、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９としても知られている）、α−シクロヘキシル−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ａ］イソインドール−５−エタノール（ＮＬＧ９１９としても知られている）、または（４Ｅ）−４−［（３−クロロ−４−フルオロアニリノ）−ニトロソメチリデン］−１，２，５−オキサジアゾール−３−アミン（ＩＮＣＢ２４３６０としても知られている）と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによって癌を治療する方法を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを、上述の阻害剤、活性化剤、免疫調節物質、アゴニスト、または修飾剤のいずれか２つ以上と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することによって癌を治療する方法を提供する。例えば、本発明の抗体コンジュゲートは、１つまたは複数のチェックポイント阻害剤および／または１つまたは複数の免疫活性化剤と組み合わせて使用することができる。
上記治療的計画に加えて、患者は、癌細胞の外科的切除および／または放射線療法を受けていてもよい。
医薬組成物
本明細書に記載の１つまたは複数の抗体コンジュゲートを含む医薬組成物または滅菌組成物を調製するために、提供された抗体コンジュゲートを、薬学的に許容される担体または賦形剤と混合することができる。
治療剤および診断剤の配合剤は、例えば、凍結乾燥粉末、スラリー、水性溶液、ローション、または懸濁液の形態で、生理的に許容される担体、賦形剤、または安定化剤と混合することによって調製できる（The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y., 2001、Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y., 2000、Avis, et al. (eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY, 1993、Lieberman, et al. (eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY, 1990、Lieberman, et al. (eds.) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY, 1990、Weiner and Kotkoskie, Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 2000を参照のこと）。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体コンジュゲートを含む医薬組成物は凍結乾燥製剤である。ある特定の実施形態において、抗体コンジュゲートを含む医薬組成物は、抗体コンジュゲート、ヒスチジン、スクロース、およびポリソルベート２０を含む、バイアル中の凍結乾燥品である。ある特定の実施形態において、抗体コンジュゲートを含む医薬組成物は、抗体コンジュゲート、コハク酸ナトリウム、およびポリソルベート２０を含む、バイアル中の凍結乾燥品である。ある特定の実施形態において、抗体コンジュゲートを含む医薬組成物は、抗体コンジュゲート、トレハロース、クエン酸塩、およびポリソルベート８を含むバイアル中の凍結乾燥品である。凍結乾燥品は、例えば、注射用の水、生理食塩水で復元することができる。特定の実施形態において、溶液は、ｐＨ約５．０で、抗体コンジュゲート、ヒスチジン、スクロース、およびポリソルベート２０を含む。他の特定の実施形態において、溶液は、抗体コンジュゲート、コハク酸ナトリウム、およびポリソルベート２０を含む。他の特定の実施形態において、溶液は、ｐＨ約６．６で、抗体コンジュゲート、トレハロース無水物、クエン酸塩無水物、クエン酸、およびポリソルベート８を含む。静脈内投与に関しては、通常は、得られた溶液を担体溶液でさらに希釈することになる。
治療用物質に関する投与計画の選択は、実体における血清または組織の代謝回転率、症状のレベル、実体の免疫原性、および生物学的マトリックス中の標的細胞への接近しやすさを含むいくつかの因子に依存する。ある特定の実施形態において、投与計画は、患者に送達される治療用物質の量を最大に高め、その量は許容される副作用レベルと一致する。したがって、生物学的な送達量は、特定の実体および治療される状態の重症度に一部依存する。適切な用量の抗体、サイトカイン、および小分子を選択する際の指針が利用可能である（例えば、Wawrzynczak, Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK, 1996、Kresina (ed.), Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, N.Y., 1991、Bach (ed.), Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, N.Y., 1993、Baert et al., New Engl. J. Med. 348:601-608, 2003、Milgrom et al., New Engl. J. Med. 341:1966-1973, 1999、Slamon et al., New Engl. J. Med. 344:783-792, 2001、Beniaminovitz et al., New Engl. J. Med. 342:613-619, 2000、Ghosh et al., New Engl. J. Med. 348:24-32, 2003; Lipsky et al., New Engl. J. Med. 343:1594-1602, 2000を参照のこと）。
適切な用量の決定は、例えば、治療に影響することまたは治療に影響すると予測されることが当技術分野において既知のまたは疑われるパラメーターまたは因子を使用して、医師によって行われる。一般に、用量は最適用量よりも若干低い量から開始し、その後、任意のマイナスの副作用と比較して所望のまたは最適な効果が得られるまで少しずつ増加させる。重要な診断尺度としては、例えば、炎症症状のものまたは生成された炎症性サイトカインレベルがある。
本発明の医薬組成物における活性成分の実際の投薬量レベルは、患者に対して毒性とならずに、所望の、特定の患者に対する治療的応答、組成物、および投与様式を達成するのに有効である活性成分の量を得るように変化させることができる。選択される用量レベルは、使用される本発明の特定の組成物、またはそのエステル、塩、もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の***速度、治療期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、および／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康、および以前の病歴、ならびに医薬分野において既知の同様の因子などを含むさまざまな薬物動態因子に依存することになる。
本発明の抗体コンジュゲートを含む組成物は、連続注入によって、または、例えば、１日間隔、１週間隔、または１週当たり１〜７回、隔週毎に１回、３週毎に１回、４週毎に１回、５週毎に１回、６週毎に１回、７週毎に１回、もしくは８週毎に１回の用量によって、与えることができる。用量は、静脈内、皮下、局所、経口、経鼻、直腸、筋肉内、大脳内で、または吸入によって与えてもよい。特定の投薬手順は、重大な望ましくない副作用を回避する最大用量または用量頻度を伴うものである。
本発明の抗体コンジュゲートに関して、患者に投与される投薬量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ患者体重であってもよい。投薬量は、０．００１ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇの間、０．００５ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの間、０．０１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの間、０．０２ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間、０．０５から５ｍｇ／ｋｇの間、０．１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間、０．１ｍｇ／ｋｇから８ｍｇ／ｋｇの間、０．１ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇの間、０．１ｍｇ／ｋｇから２ｍｇ／ｋｇの間、０．１ｍｇ／ｋｇから１ｍｇ／ｋｇ患者体重であってもよい。抗体コンジュゲートの投薬量は、患者体重キログラム（ｋｇ）に、投与される用量ｍｇ／ｋｇを乗じたものを使用して算出してもよい。
本発明の抗体コンジュゲートの用量は反復してもよく、かつ投与は１日未満、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２カ月、７５日、３カ月、４カ月、５カ月、または少なくとも６カ月空けてもよい。いくつかの実施形態において、本発明の抗体コンジュゲートは、週に２回、週に１回、２週毎に１回、３週毎に１回、４週毎に１回、または低頻度で投与される。特定の実施形態において、本発明の抗体コンジュゲートの用量は、２週間毎に反復する。
特定の患者に対する有効量は、治療される状態、患者の全身的健康、投与方法、投与経路、投与用量、および副作用の重症度などの因子に応じて変化し得る（例えば、Maynard et al., A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Raton, Fla., 1996、Dent, Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ., London, UK, 2001を参照のこと）。
投与経路は、例えば、局所もしくは皮膚適用、皮下、静脈内、腹腔内、大脳内、筋肉内、眼内、動脈内、脳脊髄内、病変内の投与による注射もしくは注入によるもの、または持続放出系もしくは埋込み体によるものであってもよい（例えば、Sidman et al., Biopolymers 22:547-556, 1983、Langer et al., J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277, 1981、Langer, Chem. Tech. 12:98-105, 1982、Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688-3692, 1985、Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030-4034, 1980、米国特許第６，３５０，４６６号明細書、および同第６，３１６，０２４号明細書を参照のこと）。必要に応じて、組成物はまた、可溶化剤もしくは注射位置での疼痛を軽減するためのリドカインなどの局所麻酔薬、またはその両方を含んでもよい。さらに、肺投与はまた、例えば、吸入器または噴霧器、およびエアロゾル化剤を含む配合剤の使用によって用いることもできる。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号明細書、同第５，９８５，３２０号明細書、同第５，９８５，３０９号明細書、同第５，９３４，２７２号明細書、同第５，８７４，０６４号明細書、同第５，８５５，９１３号明細書、同第５，２９０，５４０号明細書、および同第４，８８０，０７８号明細書、ならびに国際公開第９２／１９２４４号パンフレット、国際公開第９７／３２５７２号パンフレット、国際公開第９７／４４０１３号パンフレット、国際公開第９８／３１３４６号パンフレット、および国際公開第９９／６６９０３号パンフレットを参照のこと。これらそれぞれが参照によってその全体が本明細書に組み込まれるものとする。
このような追加成分の例は、当技術分野において既知である。
第２の治療剤、例えば、サイトカイン、ステロイド、化学療法剤、抗生物質、または放射線とともに同時投与または治療する方法は、当業界で既知である（例えば、Hardman et al., (eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10.sup.th ed., McGraw-Hill, New York, N.Y.、Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice:A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., Pa、Chabner and Longo (eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., Pa.を参照のこと）。治療用物質の有効量は、症状を、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも約３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少させ得る。
本発明の抗体コンジュゲートと組み合わせて投与することができる追加の治療法（例えば、予防剤または治療剤）を、本発明の抗体コンジュゲートから５分未満空けて、３０分未満空けて、１時間空けて、約１時間空けて、約１〜約２時間空けて、約２時間〜約３時間空けて、約３時間〜約４時間空けて、約４時間〜約５時間空けて、約５時間〜約６時間空けて、約６時間〜約７時間空けて、約７時間〜約８時間空けて、約８時間〜約９時間空けて、約９時間〜約１０時間空けて、約１０時間〜約１１時間空けて、約１１時間〜約１２時間空けて、約１２時間〜約１８時間空けて、１８時間〜２４時間空けて、２４時間〜３６時間空けて、３６時間〜４８時間空けて、４８時間〜５２時間空けて、５２時間〜６０時間空けて、６０時間〜７２時間空けて、７２時間〜８４時間空けて、８４時間〜９６時間空けて、または９６時間〜１２０時間空けて投与してもよい。２つ以上の治療法を、同じ患者の１回の来院のうちに投与してもよい。
ある特定の実施形態において、本発明の抗体コンジュゲートは、ｉｎ ｖｉｖｏでの適切な分布が確実になるように配合することができる。例示的な標的化部分としては、葉酸またはビオチン（例えば、Ｌｏｗらの米国特許第５，４１６，０１６号明細書を参照のこと）、マンノシド（Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038）、抗体（Bloeman et al., (1995) FEBS Lett. 357:140、Owais et al., (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180）、サーファクタントタンパク質Ａ受容体（Briscoe et al., (1995) Am. J. Physiol. 1233:134）、ｐ１２０（Schreier et al, (1994) J. Biol. Chem. 269:9090）がある。K. Keinanen; M. L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123、J. J. Killion; I. J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273も参照のこと。
本発明は、本発明の抗体コンジュゲートを含む医薬組成物を、単独で、または他の治療法と組み合わせて、それを必要とする対象に投与する手順を提供する。本発明の組合せ療法の治療法（例えば、予防剤または治療剤）は、対象へ同時にまたは連続的に投与することができる。本発明の組合せ療法の治療法（例えば、予防剤または治療剤）はまた、周期的に投与することもできる。周期的療法は、ある期間中、第１の治療法（例えば、第１の予防剤または治療剤）を投与し、続いて、ある期間中、第２の治療法（例えば、第２の予防剤または治療剤）を投与し、かつこの連続的投与、すなわち周期を反復して、治療法（例えば、薬剤）のうちの１つに対する耐性の発生を減少させること、治療法（例えば、薬剤）のうちの１つの副作用を回避もしくは減少させること、および／または治療法の有効性を改善することを伴う。
本発明の組合せ療法の治療法（例えば、予防剤または治療剤）は、平行して対象に投与することができる。
「平行して」という用語は、まったく同時に治療法（例えば、予防剤または治療剤）を投与することに限定されず、むしろ、本発明の抗体またはそのフラグメントを含む医薬組成物が対象に、順次に、かつ本発明の抗体または薬物コンジュゲートが他の治療法と一緒に作用し、それらを別の治療法で投与した場合よりも利益が高まるような時間間隔内で投与されることを意味する。例えば、各治療法を同時に、または異なる時点で任意の順序で連続的に投与してもよいが、同時に投与しない場合は、これらを十分に近い時間で投与して、所望の治療的または予防的効果を得るようにするべきである。各療法は、任意の適切な形態で、かつ任意の好適な経路によって、対象に個別に投与することができる。種々の実施形態において、治療法（例えば、予防剤または治療剤）は、５分未満空けて、１５分未満空けて、３０分未満空けて、１時間未満空けて、約１時間空けて、約１〜約２時間空けて、約２時間〜約３時間空けて、約３時間〜約４時間空けて、約４時間〜約５時間空けて、約５時間〜約６時間空けて、約６時間〜約７時間空けて、約７時間〜約８時間空けて、約８時間〜約９時間空けて、約９時間〜約１０時間空けて、約１０時間〜約１１時間空けて、約１１時間〜約１２時間空けて、２４時間空けて、４８時間空けて、７２時間空けて、または１週間空けて対象に投与される。他の実施形態において、２つ以上の治療法（例えば、予防剤または治療剤）は、同じ患者の１回の来院のうちに投与される。
組合せ療法の予防剤または治療剤は、同じ医薬組成物中で対象に投与することができる。あるいは、組合せ療法の予防剤または治療剤は、個別の医薬組成物中で対象に平行して投与することができる。予防剤または治療剤は、同じまたは異なる投与経路によって対象に投与されてもよい。
本明細書に記載の実施例および実施形態は単に例示を目的とするものであり、その点を考慮したさまざまな修飾または変更が、当業者によって示唆されることになり、かつ本出願の趣旨および範囲内ならびに添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれるべきであることは理解されよう。
実施例
本発明は、下記の実施例でさらに述べられ、その実施例が特許請求の範囲で述べられる発明の範囲を限定することは意図されない。
１−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−１）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、ＨＢＴＵ（１．２当量）、ヒューニッヒ塩基（３．０当量）、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（１．２当量）、およびＤＭＳＯ（０．１Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、１−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−１）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CDCl3): δ 7.35 (d, 1H), 7.12 (d, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.72 (s, 2H), 6.69 (d, 1H), 6.40 (s, 1H), 5.46 (t, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.82 (m, 6H), 3.40 (m, 4H), 3.21 (m, 2H), 2.67 (m, 4H), 1.39 (m, 2H), 1.26 (m, 2H), 1.14 (m, 2H), 0.86 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５８９．３。
（２Ｒ）−２−アミノ−３−（（１−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）チオ）プロパノエート（Ｃ−２）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、１−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−１、１．０当量）を入れ、ＡＣＮ−ＰＢＳ緩衝液（１：２、０．０２Ｍ）に溶解した。この混合物に、ＤＰＢＳ緩衝液に溶解したＬ−システイン（２．０当量）（０．０７Ｍ）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、（２Ｒ）−２−アミノ−３−（（１−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）チオ）プロパノエート（Ｃ−２）を、固形物として、ジアステレオマー混合物のＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.26 (m, 2H), 4.02 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.78 (m, 6H), 3.55 (m, 2H), 3.44 (m, 1H), 3.23 (m, 3H), 3.12 (m, 2H), 2.76 (m, 2H), 2.53 (m, 1H), 1.53 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７１０．３。
（６Ｒ）−６−（２−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−２−オキソエチル）−５−オキソチオモルホリン−３−カルボン酸（Ｃ−３）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、（２Ｒ）−２−アミノ−３−（（１−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）チオ）プロパノエート（Ｃ−１）を入れ、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．５、５ｎＭ ＥＤＴＡを含む１００ｍＭリン酸塩）およびアセトニトリル（１：１、０．０１２Ｍ）に溶解した。次いで、反応混合物を４０℃で６時間撹拌した。この時点で、粗製反応混合物を室温に冷却し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．５Ｍ ＮＨ４ＯＡｃ：Ｈ２Ｏ中の１０ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ、Ｃ１８カラム）で精製し、（６Ｒ）−６−（２−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−２−オキソエチル）−５−オキソチオモルホリン−３−カルボン酸（Ｃ−３）を、固形物として、レジオ−およびジアステレオマー（regio- and diastereomers）混合物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.38 (d, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 6.74 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.52 (s, 2H), 4.24 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.82 (m, 1H), 3.67 (s, 2H), 3.60 (m, 4H), 3.54 (t, 2H), 3.43 (m, 2H), 3.18 (m, 1H), 3.01 (m, 1H), 2.87 (m, 1H), 2.58 (m 7H), 1.50 (m, 2H), 1.29 (m, 2H), 1.17 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７１０．４。
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−４ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−４ｂ）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、１−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−１、１．０当量）、Ｌ−システイン（１．０当量）、およびＰＢＳ：ＭｅＣＮ（２：１、０．００８Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで、１Ｍ ＮａＯＨ（２０．０当量）を反応混合物に添加した。次いで、反応物をさらに３時間撹拌し、次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ中の０．５ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ：Ｈ２Ｏ中の１０ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ、Ｃ１８カラム）で精製し、３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−４ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−４ｂ）の混合物を、これらそれぞれのジアステレオマー（下記の化合物（Ｃ−４ａＳＲ）、（Ｃ−４ａＲＲ）、（Ｃ−４ｂＲＲ）、および（Ｃ−４ｂＲＲ））として、固形物として得た。1H NMR (DMSO): δ 7.88 (s, 1), 7.26 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.77 (d, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.46 (s, 1H), 6.01 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.36 (m, 17H), 2.29 (m, 8H), 1.90 (s, 2H), 1.39 (m, 2H), 1.21 (m, 2H), 1.09 (m, 2H), 0.81 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７２８．４。
Figure 0006877420
 （Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−４ａＳＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−４ａＲＲ）
Figure 0006877420
 （Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−４ｂＲＲ）
Figure 0006877420
 （Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−４ｂＳＲ）。
１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−５）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアルデヒド（４．０当量）、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１３．０当量）、およびＭｅＯＨ（０．０４Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−５）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CDCl3): δ 7.32 (d, 1H), 7.12 (d, 1H), 6.87 (d, 1H), 6.72 (s, 2H), 6.70 (d, 1H), 6.41 (d, 1H), 5.45 (t, 1H), 5.31 (s, 2H), 4.07 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.73 (t, 2H), 3.40 (m, 4H), 3.17 (m, 6H), 2.89 (m, 4H), 1.39 (m, 2H), 1.26 (m, 2H), 1.14 (m, 2H), 0.86 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５６１．３。
注記：２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアルデヒドは、１−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１．０当量）、デスマーチンペルヨージナン（１．５当量）、およびＤＣＭ（０．１Ｍ）を丸底フラスコに添加し、室温で２時間撹拌することによって調製した。次いで、反応混合物をろ過し、揮発性物質を真空中で除去し、生成物をさらに精製することなく使用した。
（２Ｓ）−２−アミノ−３−（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）チオ）プロパノエート（Ｃ−６）の合成
Figure 0006877420
 （２Ｓ）−２−アミノ−３−（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）チオ）プロパノエート（Ｃ−６）を、化合物（Ｃ−５）を化合物（Ｃ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例２と同様の手順に従って調製し、（２Ｓ）−２−アミノ−３−（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）チオ）プロパノエート（Ｃ−６）を、固形物として、ジアステレオマー混合物のＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.21 (m, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.78 (m, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.56 (m, 2H), 4.21 (m, 1H), 4.09 (s, 1H), 4.03 (m, 1H), 3.95 (m, 3H), 3.75 (m, 2H), 3.54 (t, 2H), 3.43 (m, 1H), 3.34 (m, 1H), 3.22 (m, 2H), 3.03 (m, 6H), 2.84 (m, 2H), 2.63 (m, 1H), 1.52 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.18 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６８２．４。
（６Ｒ）−６−（２−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−２−オキソエチル）−５−オキソチオモルホリン−３−カルボン酸（Ｃ−７）の合成
Figure 0006877420
 （６Ｒ）−６−（２−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−２−オキソエチル）−５−オキソチオモルホリン−３−カルボン酸（Ｃ−７）を、化合物（Ｃ−５）を化合物（Ｃ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例３と同様の手順に従って調製し、（６Ｒ）−６−（２−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−２−オキソエチル）−５−オキソチオモルホリン−３−カルボン酸（Ｃ−７）を、固形物として、レジオ−およびジアステレオマー混合物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.91 (d, 1H), 6.72 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.51 (s, 2H), 4.13 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.88 (m, 1H), 3.58 (s, 2H), 3.52 (t, 2H), 3.40 (m, 2H), 3.16 (m, 1H), 2.99 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.67 (m 10H), 1.49 (m, 2H), 1.29 (m, 2H), 1.17 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６８２．３。
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−８ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−８ｂ）の合成
Figure 0006877420
 ３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−８ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−８ｂ）を、化合物（Ｃ−５）を化合物（Ｃ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４と同様の手順に従って調製し、化合物（Ｃ−８ａ）および（Ｃ−８ｂ）の混合物を、これらそれぞれのジアステレオマー（下記の化合物（Ｃ−８ａＳＲ）、（Ｃ−８ａＲＲ）、（Ｃ−８ｂＲＲ）、および（Ｃ−８ｂＲＲ））として、固形物として得た。1H NMR (DMSO): δ 7.81 (s, 1), 7.33 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.76 (d, 1H), 6.69 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.37 (m, 17H), 2.35 (m, 8H), 1.90 (s, 2H), 1.41 (m, 2H), 1.20 (m, 2H), 1.08 (m, 2H), 0.80 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７００．４。
Figure 0006877420
 （Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−８ａＳＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−８ａＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−８ｂＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−８ｂＳＲ）。
１−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−９）の合成
Figure 0006877420
 １−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−９）を、３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパノエートを３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエートの代わりに使用したことを除いて、実施例１と同様の手順に従って調製し、１−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−９）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.82 (s, 2H), 6.81 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.38 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.86 (m, 4H), 3.67 (m, 4H), 3.56 (m, 4H), 3.24 (m, 4H), 2.61 (t, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.20 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６３３．３。
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１０ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１０ｂ）の合成
Figure 0006877420
 ３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１０ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１０ｂ）を、化合物（Ｃ−９）を化合物（Ｃ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４と同様の手順に従って調製し、化合物（Ｃ−１０ａ）および（Ｃ−１０ｂ）の混合物を、これらそれぞれのジアステレオマー（下記の化合物（Ｃ−１０ａＳＲ）、（Ｃ−１０ａＲＲ）、（Ｃ−１０ｂＲＲ）、および（Ｃ−１０ｂＲＲ））として、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。粗製反応混合物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製した。1H NMR (CD3OD): δ 7.35 (d, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.77 (m, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.56 (s, 2H), 4.32 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.86 (m, 3H), 3.72 (m, 3H), 3.54 (m, 10H), 3.21 (m, 4H), 2.67 (m, 4H), 1.52 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７７２．４。
Figure 0006877420
 （Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１０ａＳＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１０ａＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１０ｂＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１０ｂＳＲ）。
１−（２−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−１１）の合成
Figure 0006877420
 １−（２−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−１１）を、３−（２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパノエートを３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエートの代わりに使用したことを除いて、実施例１と同様の手順に従って調製し、１−（２−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−１１）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.80 (s, 2H), 6.24 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.32 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.74 (t, 2H), 3.64 (m, 2H), 3.58 (m, 12H), 3.64 (m, 4H), 3.20 (m, 4H), 2.68 (m, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.32 (m, 2H), 1.20 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７２１．４。
（２Ｒ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，１９−ジオキソ−１０，１３，１６−トリオキサ−４−チア−７−アザノナデカン−１−酸（Ｃ−１２ａ）および（１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１４−ジオキソ−４，７，１０−トリオキサ−１７−チア−１３−アザイコサン−２０−酸（Ｃ−１２ｂ）の合成
Figure 0006877420
 （２Ｒ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，１９−ジオキソ−１０，１３，１６−トリオキサ−４−チア−７−アザノナデカン−１−酸（Ｃ−１２）および（１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１４−ジオキソ−４，７，１０−トリオキサ−１７−チア−１３−アザイコサン−２０−酸（Ｃ−１２ｂ）を、化合物（Ｃ−１１）を化合物（Ｃ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４と同様の手順に従って調製し、化合物（Ｃ−１２ａ）および（Ｃ−１２ｂ）の混合物を、これらそれぞれのジアステレオマー（下記の化合物（Ｃ−１２ａＳＲ）、（Ｃ−１２ａＲＲ）、（Ｃ−１２ｂＲＲ）、および（Ｃ−１２ｂＲＲ））として、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。粗製反応混合物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製した。1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57(s, 2H), 4.34 (s, 2H), 4.23 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.86 (m, 4H), 3.76 (m, 4H), 3.58 (m, 14H), 3.27 (m, 4H), 3.22 (m, 2H), 2.84 (m, 1H), 2.71 (m, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝８６０．４。
Figure 0006877420
 （２Ｒ，５Ｓ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，１９−ジオキソ−１０，１３，１６−トリオキサ−４−チア−７−アザノナデカン−１−酸（Ｃ−１２ａＳＲ）；
Figure 0006877420
 （２Ｒ，５Ｒ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，１９−ジオキソ−１０，１３，１６−トリオキサ−４−チア−７−アザノナデカン−１−酸（Ｃ−１２ａＲＲ）；
Figure 0006877420
 （１６Ｒ，１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１４−ジオキソ−４，７，１０−トリオキサ−１７−チア−１３−アザイコサン−２０−酸（Ｃ−１２ｂＲＲ）；
Figure 0006877420
 （１６Ｓ，１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１４−ジオキソ−４，７，１０−トリオキサ−１７−チア−１３−アザイコサン−２０−酸（Ｃ−１２ｂＳＲ）。
１−（２１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２１−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコシル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−１３）の合成
Figure 0006877420
 １−（２１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２１−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコシル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−１３）を、１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコサン−２１−酸を３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエートの代わりに使用したことを除いて、実施例１と同様の手順に従って調製し、１−（２１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２１−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコシル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−１３）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.38 (d, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.07 (d, 1H), 6.84 (d, 1H), 6.82 (s, 2H), 6.25 (d, 1H), 5.59 (s, 2H), 4.36 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.65 (m, 32H), 3.20 (m, 4H), 2.71 (m, 2H), 1.55 (m, 2H), 1.32 (m, 2H), 1.21 (m, 2H), 0.89 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝８５３．５。
（２Ｒ）−２−アミノ−２８−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，２８−ジオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５−ヘキサオキサ−４−チア−７−アザオクタコサン−１−酸（Ｃ−１４ａ）および（２８Ｒ）−２８−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２５−カルボキシ−１，２３−ジオキソ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−２６−チア−２２−アザノナコサン−２９−酸（Ｃ−１４ｂ）の合成
Figure 0006877420
 （２Ｒ）−２−アミノ−２８−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，２８−ジオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５−ヘキサオキサ−４−チア−７−アザオクタコサン−１−酸（Ｃ−１４ａ）および（２８Ｒ）−２８−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２５−カルボキシ−１，２３−ジオキソ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−２６−チア−２２−アザノナコサン−２９−酸（Ｃ−１４ｂ）を、化合物（Ｃ−１３）を化合物（Ｃ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４と同様の手順に従って調製し、化合物（Ｃ−１４ａ）および（Ｃ−１４ｂ）の混合物を、これらそれぞれのジアステレオマー（下記の化合物（Ｃ−１４ａＳＲ）、（Ｃ−１４ａＲＲ）、（Ｃ−１４ｂＲＲ）、および（Ｃ−１４ｂＲＲ））として、固形物として、ＨＣｌ塩として得た（ＲＰ−ＨＰＬＣ精製後、生成物をアセトニトリルに溶解し、過剰の２Ｎ ＨＣｌで処理し、次いで凍結乾燥した）。1H NMR (CD3OD): δ 7.47 (s, 1H), 7.39 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.25 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.38 (s, 2H), 4.32 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.77 (m, 4H), 3.76 (m, 4H), 3.64 (m, 28H), 3.55 (m, 5H), 3.31 (m, 4H), 3.12 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.72 (s, 2H), 2.62 (m, 1H), 1.54 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.20 (m, 2H), 0.89 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝９９２．４。
Figure 0006877420
 （２Ｒ，５Ｓ）−２−アミノ−２８−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，２８−ジオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５−ヘキサオキサ−４−チア−７−アザオクタコサン−１−酸（Ｃ−１４ａＳＲ）；
Figure 0006877420
 （２Ｒ，５Ｒ）−２−アミノ−２８−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，２８−ジオキソ−１０，１３，１６，１９，２２，２５−ヘキサオキサ−４−チア−７−アザオクタコサン−１−酸（Ｃ−１４ａＲＲ）；
Figure 0006877420
 （２５Ｒ，２８Ｒ）−２８−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２５−カルボキシ−１，２３−ジオキソ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−２６−チア−２２−アザノナコサン−２９−酸（Ｃ−１４ｂＲＲ）；
Figure 0006877420
 （２５Ｓ，２８Ｒ）−２８−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２５−カルボキシ−１，２３−ジオキソ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサオキサ−２６−チア−２２−アザノナコサン−２９−酸（Ｃ−１４ｂＳＲ）。
１−（（１−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−１５）の合成
Figure 0006877420
 ステップ１：１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）プロパン−１−オンを、３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）プロパノエートを３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエートの代わりに使用したことを除いて、実施例１と同様の手順に従って調製した。
ステップ２：丸底フラスコに、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）プロパン−１−オン（１．０当量）、ＣｕＳＯ４（０．２５当量）、Ｌ−アルコルビン酸ナトリウム塩（１．１当量）、１−（プロパ−２−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（２．２当量）、およびｔ−ＢｕＯＨ／水の混合物（１：１、ｖ／ｖ、０．０１２Ｍ）を入れた。反応混合物を真空下に置き、その後、Ｎ２を流した（これをさらに４回繰り返した）。次いで、反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、１−（（１−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−１５）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.94 (s, 1H), 7.37 (d, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.85 (s, 2H), 6.81 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.73 (s, 2H), 4.52 (t, 2H), 4.36 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.85 (t, 2H), 3.84 (m, 4H), 3.66 (t, 2H), 3.54 (m, 6H), 3.27 (m, 4H), 2.63 (t, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７５８．４。
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１６ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１６ｂ）の合成
Figure 0006877420
 ３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１６ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１６ｂ）を、化合物（Ｃ−１５）を化合物（Ｃ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４と同様の手順に従って調製し、化合物（Ｃ−１６ａ）および（Ｃ−１６ｂ）の混合物を、これらそれぞれのジアステレオマー（下記の化合物（Ｃ−１６ａＳＲ）、（Ｃ−１６ａＲＲ）、（Ｃ−１６ｂＲＲ）、および（Ｃ−１６ｂＲＲ））として、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。粗製反応混合物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製した。1H NMR (CD3OD): δ 7.91 (s, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.44 (m, 2H), 4.34 (s, 2H), 4.25 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 4.83 (m, 6H), 3.68 (t, 2H), 3.55 (m, 6H), 3.25 (m, 2H), 2.86 (m, 1H), 2.64 (m, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝８９７．４。
Figure 0006877420
 （Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１６ａＳＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１６ａＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１６ｂＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−１６ｂＳＲ）。
Ｎ−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド（Ｃ−１７）の合成
Figure 0006877420
 Ｎ−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド（Ｃ−１７）を、３−（２−（２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）エトキシ）エトキシ）プロパノエートを３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエートの代わりに使用したことを除いて、実施例１と同様の手順に従って調製し、Ｎ−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド（Ｃ−１７）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.80 (s, 2H), 6.24 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.37 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.84 (m, 4H), 3.40 (m, 4H), 3.56 (m, 6H), 3.48 (t, 2H), 3.20 (m, 6H), 2.69 (t, 2H), 2.45 (t, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７４８．４。
（１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−（カルボキシメチル）−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１４−ジアザイコサン−２０−酸（Ｃ−１８ａ）および（２０Ｒ）−２０−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１７−カルボキシ−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１８−チア−１０，１４−ジアザヘンイコサン−２１−酸（Ｃ−１８ｂ）の合成
Figure 0006877420
 （１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−（カルボキシメチル）−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１４−ジアザイコサン−２０−酸（Ｃ−１８ａ）および（２０Ｒ）−２０−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１７−カルボキシ−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１８−チア−１０，１４−ジアザヘンイコサン−２１−酸（Ｃ−１８ｂ）を、化合物（Ｃ−１７）を化合物（Ｃ−１））の代わりに使用したことを除いて、実施例４と同様の手順に従って調製し、化合物（Ｃ−１８ａ）および（Ｃ−１８ｂ）の混合物を、これらそれぞれのジアステレオマー（下記の化合物（Ｃ−１８ａＳＲ）、（Ｃ−１８ａＲＲ）、（Ｃ−１８ｂＲＲ）、および（Ｃ−１８ｂＲＲ））として、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。粗製反応混合物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製した。1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.07 (d, 1H), 6.80 (d, 1H), 6.25 (d, 1H), 5.57(s, 2H), 4.35 (s, 2H), 4.19 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.76 (m, 3H), 3.60 (s, 4H), 3.53 (m, 4H), 3.41 (m, 1H), 3.36 (m, 2H), 3.22 (s, 2H), 2.70 (t, 2H), 2.42 (2H), 1.53 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝８８７．４。
Figure 0006877420
 （１６Ｓ，１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−（カルボキシメチル）−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１４−ジアザイコサン−２０−酸（Ｃ−１８ａＳＲ）；
Figure 0006877420
 （１６Ｒ，１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−（カルボキシメチル）−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１４−ジアザイコサン−２０−酸（Ｃ−１８ａＲＲ）；
Figure 0006877420
 （１７Ｒ，２０Ｒ）−２０−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１７−カルボキシ−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１８−チア−１０，１４−ジアザヘンイコサン−２１−酸（Ｃ−１８ｂＲＲ）；
Figure 0006877420
 （１７Ｓ，２０Ｒ）−２０−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１７−カルボキシ−１，１１，１５−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１８−チア−１０，１４−ジアザヘンイコサン−２１−酸（Ｃ−１８ｂＳＲ）。
５−（４−（（４−（３−アミノプロピル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｃ−１９）の合成
Figure 0006877420
 ５−（４−（（４−（３−アミノプロピル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｃ−１９）を、２ステップ順序で調製した。第１のステップにおいて、丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、ｔｅｒｔ−ブチル（３−ブロモプロピル）カルバメート（１．２当量）、ヒューニッヒ塩基（２．４当量）、およびＤＭＦ（０．２Ｍ）を入れた。混合物を６０℃に加熱し、次いで、１８時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物を室温に冷却し、ＩＳＣＯクロマトグラフィー（０〜２０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ）で精製し、中間体ｔｅｒｔ−ブチル（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）カルバメートを得た。第２のステップにおいて、（Ｉｎｔ−１）の合成における最後のステップと同様の手順を使用し、５−（４−（（４−（３−アミノプロピル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｃ−１９）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.24 (d, 1H), 7.10 (d, 1H), 6.85 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.42 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.52 (s, 2H), 3.35 (m, 2H), 2.80 (t, 2H), 2.51 (m, 4H), 2.45 (m, 4H), 1.72 (m, 2H), 1.40 (m, 2H), 1.28 (m, 4H), 1.15 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝４９５．３。
１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロパン−１−オン（Ｃ−２０）の合成
Figure 0006877420
 １−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロパン−１−オン（Ｃ−２０）を、２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザテトラデカン−１４−酸をｔｅｒｔ−ブチル（３−ブロモプロピル）カルバメートの代わりに使用したことを除いて、実施例１９の手順に従って調製し、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロパン−１−オン（Ｃ−２０）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.24 (d, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 6.12 (d, 1H), 5.42 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.76 (t, 2H), 3.59 (m, 12H), 3.37 (t, 2H), 2.76 (t, 2H), 2.66 (t, 2H), 2.45 (m, 4H), 1.41 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 1.16 (m, 2H), 0.89 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５９７．４。
Ｎ−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（Ｃ−２１）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロパン−１−オン（Ｃ−２０）（１．０当量）、ＤＩＥＡ（１０．０当量）、およびＤＭＦ（０．００４Ｍ）を入れ、混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、別のフラスコに２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセテート（１．５当量）、ＤＩＥＡ（１０．０当量）、およびＤＭＦ（０．００６Ｍ）を入れた。この混合物をまた、室温で１５分間撹拌し、次いで、２つの溶液を混合し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、Ｎ−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（Ｃ−２１）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3CN): δ 7.30 (d, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.82 (s, 2H), 6.74 (s, 1H), 6.68 (d, 1H), 6.21 (d, 1H), 6.08 (t, 1H), 515.38 (s, 2H), 4.08 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.70 (t, 2H), 3.41 (m, 14H), 3.29 (m, 2H), 2.55, (t, 2H), 2.38 (m, 4H), 1.41 (m, 2H), 1.26 (m, 2H), 1.13 (m, 2H), 0.85 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７３４．４。
（２Ｒ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，９，１９−トリオキソ−１３，１６−ジオキサ−４−チア−７，１０−ジアザノナデカン−１−酸（Ｃ−２２ａ）および（１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１１，１４−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１３−ジアザイコサン−２０−酸（Ｃ−２２ｂ）の合成
Figure 0006877420
 （２Ｒ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，９，１９−トリオキソ−１３，１６−ジオキサ−４−チア−７，１０−ジアザノナデカン−１−酸（Ｃ−２２ａ）および（１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１１，１４−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１３−ジアザイコサン−２０−酸（Ｃ−２２ｂ）を、化合物（Ｃ−２１）を化合物（Ｃ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４と同様の手順に従って調製し、化合物（Ｃ−２２ａ）および（Ｃ−２２ｂ）の混合物を、これらそれぞれのジアステレオマー（下記の化合物（Ｃ−２２ａＳＲ）、（Ｃ−２２ａＲＲ）、（Ｃ−２２ｂＲＲ）、および（Ｃ−２２ｂＲＲ））として、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。粗製反応混合物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製した。1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.08 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57(s, 2H), 4.34 (s, 2H), 4.20 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.82 (m, 9H), 3.56 (m, 9H), 3.38 (m, 3H), 3.21 (m, 2H), 2.70 (t, 2H), 1.54 (m, 2H), 1.32 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.89 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝８７３．４。
Figure 0006877420
 （２Ｒ，５Ｓ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，９，１９−トリオキソ−１３，１６−ジオキサ−４−チア−７，１０−ジアザノナデカン−１−酸（Ｃ−２２ａＳＲ）；
Figure 0006877420
 （２Ｒ，５Ｒ）−２−アミノ−１９−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−（カルボキシメチル）−６，９，１９−トリオキソ−１３，１６−ジオキサ−４−チア−７，１０−ジアザノナデカン−１−酸（Ｃ−２２ａＲＲ）；
Figure 0006877420
 （１６Ｒ，１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１１，１４−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１３−ジアザイコサン−２０−酸（Ｃ−２２ｂＲＲ）；
Figure 0006877420
 （１６Ｓ，１９Ｒ）−１９−アミノ−１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１６−カルボキシ−１，１１，１４−トリオキソ−４，７−ジオキサ−１７−チア−１０，１３−ジアザイコサン−２０−酸（Ｃ−２２ｂＳＲ）。
４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）−Ｎ−（２−（２−（２−（２−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）ピペラジン−１−カルボキサミド（Ｃ−２３）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１当量）、４−ニトロフェニル（２−（２−（２−（２−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（０．９当量）、トリエチルアミン（３．０当量）、およびＤＭＳＯ（０．０１Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）−Ｎ−（２−（２−（２−（２−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）ピペラジン−１−カルボキサミド（Ｃ−２３）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.96 (s, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.85 (s, 2H), 6.79 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.74 (s, 2H), 4.53 (t, 2H), 4.35 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.86 (t, 2H), 3.85 (m, 4H), 3.54 (m, 12H), 3.22 (m, 6H), 1.53 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝８１７．４。
注記：４−ニトロフェニル（２−（２−（２−（２−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート
Figure 0006877420
 は下記の手順を使用して調製した。
ステップ１：トリエチルアミン（２．５当量）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（１．１当量）を、ＣＨ２Ｃｌ２中の２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタンアミン（１．０当量）の溶液（０．０５Ｍ）に添加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をＲＰ−Ｃ１８ ＩＳＣＯを使用して精製し、次いで、凍結乾燥し、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメートを得た。
ステップ２：ｔ−ＢｕＯＨ中の、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（１当量）および１−（プロパ−２−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（２．０当量）の溶液（０．０８Ｍ）に、Ｎ２ガスを５回流し、次いで、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム塩（１．０当量、Ｈ２Ｏ中０．１６Ｍ）およびＣｕＳＯ４（０．２当量、Ｈ２Ｏ中０．０３Ｍ）を添加した。反応混合物に再びＮ２ガスを５回流し、次いで、室温で４時間撹拌した。次いで、反応混合物をＩＳＣＯ ＲＰ−Ｃ１８で精製し、凍結乾燥し、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（２−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメートを得た。
ステップ３：ＴＦＡ中のｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（２−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメートの溶液（０．０２Ｍ）を真空中で濃縮し、１−（（１−（２３−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１−ヘプタオキサトリコシル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンを得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝３５４．２。
ステップ４：４−ニトロフェニルカルボノクロリジダート（１．１０当量）およびトリエチルアミン（２．５０当量）を、ＣＨ２Ｃｌ２中の１−（（１−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１当量）の溶液（０．０１Ｍ）に添加し、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。次いで、反応混合物を真空中で濃縮し、ＲＰ−Ｃ１８ ＩＳＣＯで精製し、次いで、凍結乾燥し、４−ニトロフェニル（２−（２−（２−（２−（４−（（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメートを得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５１９．２。
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２４ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２４ｂ）の合成
Figure 0006877420
 ３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２４ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２４ｂ）を、化合物（Ｃ−２３）を化合物（Ｃ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４と同様の手順に従って調製し、化合物（Ｃ−２４ａ）および（Ｃ−２４ｂ）の混合物を、これらそれぞれのジアステレオマー（下記の化合物（Ｃ−２４ａＳＲ）、（Ｃ−２４ａＲＲ）、（Ｃ−２４ｂＲＲ）、および（Ｃ−２４ｂＲＲ））として、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。粗製反応混合物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製した。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝９５６．４。
Figure 0006877420
 （Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２４ａＳＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２４ａＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２４ｂＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１−オキソ−５，８，１１−トリオキサ−２−アザトリデカン−１３−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２４ｂＳＲ）。
１−（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−２５）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）アセトアルデヒド（４．０当量）、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１３．０当量）、およびＭｅＯＨ（０．０４Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、１−（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−２５）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.16 (d, 1H), 6.96 (d, 1H), 6.83 (s, 2H), 6.76 (d, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.53 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.84 (s, 2H), 3.78 (m, 2H), 3.71 (m, 2H), 3.64 (m, 2H), 3.54 (m, 2H), 3.35 (m, 4H), 3.27 (t, 2H), 2.95 (m, 4H), 1.52 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６０５．４。
注記：２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）アセトアルデヒドは、１−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（１．０当量）、デスマーチンペルヨージナン（１．５当量）、およびＤＣＭ（０．１Ｍ）を丸底フラスコに添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌することによって調製した。次いで、反応混合物をろ過し、揮発性物質を真空中で除去し、生成物をさらに精製することなく使用した。
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２６ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２６ｂ）の合成
Figure 0006877420
 ３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２６）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２６ｂ）を、化合物（Ｃ−２５）を化合物（Ｃ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４と同様の手順に従って調製し、化合物（Ｃ−２６ａ）および（Ｃ−２６ｂ）の混合物を、これらそれぞれのジアステレオマー（下記の化合物（Ｃ−２６ａＳＲ）、（Ｃ−２６ａＲＲ）、（Ｃ−２６ｂＲＲ）、および（Ｃ−２６ｂＲＲ））として、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。粗製反応混合物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製した。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７４４．４。
Figure 0006877420
 （Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２６ａＳＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２６ａＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２６ｂＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２６ｂＳＲ）。
１−（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−２７）の合成
Figure 0006877420
 ステップ１：丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、２−アジドアセトアルデヒド（４．０当量）、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（３２．０当量）、およびＭｅＯＨ（０．０２Ｍ）を入れた。混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、５−（４−（（４−（２−アジドエチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミンを固形物として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５０７．３。
ステップ２：丸底フラスコに、５−（４−（（４−（２−アジドエチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（１．０当量）、１−（プロパ−２−イン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（２．３当量）、ならびにｔ−ＢｕＯＨおよび水の混合物（２：１、ｖ／ｖ、０．００８Ｍ）を入れた。反応混合物を真空下で脱気し、Ｎ２を５回流し、Ｏ２を除去した。Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム塩（１．１当量、Ｈ２Ｏ ０．５ｍｌ中、真空下で脱気し、Ｎ２を５回流し、Ｏ２を除去した）を、注射筒を使用して反応混合物に添加し、次いで、ＣｕＳＯ４（０．２当量、水０．５ｍｌ中、真空下で脱気し、Ｎ２を５回流し、Ｏ２を除去した）を、注射筒を使用して添加した。次いで、反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、１−（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−２７）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.95 (s, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.02 (d, 1H), 6.86 (s, 2H), 6.79 (d, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.76 (s, 2H), 4.52 (t, 2H), 4.26 (s, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.54 (t, 2H), 2.85 (m, 8H), 2.94 (t, 2H), 1.53 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.18 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６４２．４。
注記：２−アジドアセトアルデヒドは、２−アジドエタノール（１．０当量）、デスマーチンペルヨージナン（１．５当量）、およびＤＣＭ（０．２０Ｍ）を丸底フラスコに添加し、次いで、反応混合物を室温で２時間撹拌することによって調製した。次いで、反応混合物をろ過し、揮発性物質を真空中で除去し、生成物をさらに精製することなく使用した。
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２８ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２８ｂ）の合成
Figure 0006877420
 ３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イルエチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２８ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２８ｂ）を、化合物（Ｃ−２７）を化合物（Ｃ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４と同様の手順に従って調製し、化合物（Ｃ−２８ａ）および（Ｃ−２８ｂ）の混合物を、これらそれぞれのジアステレオマー（下記の化合物（Ｃ−２８ａＳＲ）、（Ｃ−２８ａＲＲ）、（Ｃ−２８ｂＲＲ）、および（Ｃ−２８ｂＲＲ））として、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。粗製反応混合物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製した。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７８１．４。
Figure 0006877420
 （Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２８ａＳＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２８ａＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２８ｂＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（（１−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−２８ｂＳＲ）。
Ｎ−（２１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２１−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコシル）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド（Ｃ−２９）の合成
Figure 0006877420
 Ｎ−（２１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２１−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコシル）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド（Ｃ−２９）を、１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２−ヘキサオキサ−４−アザペンタコサン−２５−酸を３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエートの代わりに使用したことを除いて、実施例１と同様の手順に従って調製し、Ｎ−（２１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２１−オキソ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘンイコシル）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド（Ｃ−２９）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (DMSO): δ 8.00 (t, 1H), 7.42 (d, 1H), 7.38 (s, 3H), 7.20 (s, 1H), 7.00 (s, 2H), 6.95 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.30 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.59 (m, 4H), 3.49 (m, 28H), 3.35 (t, 2H), 3.14 (m, 2H), 2.32 (m, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.21 (m, 2H), 1.09 (m, 2H), 0.81 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝９２４．４。
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（Ｃ−３０）の合成
Figure 0006877420
 ステップ１：丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、ＨＯＡＴ（２．０当量）、ヒューニッヒ塩基（１４．０当量）、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−３−メチル−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート（１．２当量）、およびピリジン：ＤＭＦ（１：４、０．０２Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で４時間撹拌し、次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレートを固形物として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝１０６５．５。
ステップ２：４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレートをＤＭＦ（０．００７Ｍ）に溶解し、ピペリジン（１００．０当量）を添加した。反応物を室温で３０分撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレートを固形物として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝８４３．５
ステップ３：丸底フラスコに、４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１．０当量）、３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパノエート（１．１当量）、ヒューニッヒ塩基（５．０当量）、ＨＡＴＵ（１．０５当量）、およびＤＭＦ（０．００４Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（Ｃ−３０）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝１０３８．５。
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（Ｃ−３１）の合成
Figure 0006877420
ステップ１：丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−４−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、ＨＯＡＴ（２．０当量）、ヒューニッヒ塩基（１４．０当量）、（３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１．２当量）、およびピリジン：ＤＭＦ（１：４、０．０１５Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、（３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートを固形物として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝１２１２．４。
ステップ２：（３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１．０当量）を、ＭｅＯＨ、ＴＨＦ、および水（２：１：０．４）（０．００５Ｍ）に溶解した。次いで、ＬｉＯＨ（８．０当量）を添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−アミノプロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸を固形物として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝８５０．４。
ステップ３：丸底フラスコに、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−アミノプロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（１．０当量）、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（２．０当量）、ヒューニッヒ塩基（６．０当量）、ＨＢＴＵ（１．８当量）、およびＤＭＦ（０．００３Ｍ）を入れた。反応物を室温で１５分間撹拌し続けた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（Ｃ−３１）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝１００１．３。
（Ｓ）−１−（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−３２）の合成
Figure 0006877420
 （Ｓ）−１−（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−３２）を、化合物（Ｉｎｔ−２）を化合物（Ｉｎｔ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例１と同様の手順に従って調製し、（Ｓ）−１−（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−３２）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.49 (d, 2H), 7.21 (d, 1H), 6.82 (s, 2H), 6.77 (d, 1), 6.28 (d, 1H), 5.67 (d, 1H), 5.51 (d, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.18 (s, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.76 (t, 2H), 3.54 (dd, 1H), 3.46 (dd, 1H), 3.16 (m, 4H), 3.05 (m, 4H), 2.71 (t, 2H), 1.48 (m, 1H), 1.26 (m, 3H), 1.05 (m, 1H), 0.84 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６１９．４。
１−（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−３３）の合成
Figure 0006877420
 １−（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−３３）を、化合物（Ｉｎｔ−３）を化合物（Ｉｎｔ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例１と同様の手順に従って調製し、１−（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン（Ｃ−３３）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５８９．３。
３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−３４ａ）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−３４ｂ）の合成
Figure 0006877420
 ３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−３４）および２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−３４ｂ）を、化合物（Ｃ−３３）を化合物（Ｃ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４と同様の手順に従って調製し、化合物（Ｃ−３４ａ）および（Ｃ−３４ｂ）の混合物を、これらそれぞれのジアステレオマー（下記の化合物（Ｃ−３４ａＳＲ）、（Ｃ−３４ａＲＲ）、（Ｃ−３４ｂＲＲ）、および（Ｃ−３４ｂＲＲ））として、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。粗製反応混合物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製した。1H NMR (DMSO): δ 7.51 (s, 2H), 7.39 (m, 2H), 7.27 (d, 1H), 7.15 (d, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.22 (t, 1H), 5.56 (s, 2H), 3.86 (s, 4H), 3.66 (m, 3H), 3.42 (m, 8H), 3.25 (m, 4H), 3.08 (m, 2H), 2.81 (m, 3H), 2.65 (m, 1H), 1.43 (m, 2H), 1.22 (m, 3H), 1.07 (m, 2H), 0.83 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７２８．３。
Figure 0006877420
 （Ｓ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−３４ａＳＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−３−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−３４ａＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｒ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−３４ｂＲＲ）；
Figure 0006877420
 （Ｓ）−２−（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）−４−（（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル）アミノ）−４−オキソブタン酸（Ｃ−３４ｂＳＲ）。
１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−（アミノオキシ）エタノン（Ｃ−３５）の合成
Figure 0006877420
 ステップ１：丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、２−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）オキシ）酢酸（１．１当量）、ＨＡＴＵ（１．０５当量）、ヒューニッヒ塩基（５．０当量）、およびＤＭＦ（０．２Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、次いで、粗製反応混合物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（０〜２０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−オキソエトキシカルバメートを得た。
ステップ２：ＨＣｌ（２０．０当量、ジオキサン中４Ｍ）を、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−オキソエトキシカルバメート（１．０当量）およびＤＣＭ（０．１Ｍ）が入れられた丸底フラスコに０℃で添加した。氷浴を外し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去した。ＭｅＯＨ（８％ＮＨ４ＯＨを含む）を得られた残渣に添加し、揮発性物質を真空中で除去した。これをさらに２回繰り返した。次いで、粗製反応混合物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（０〜１０％ＭｅＯＨ（８％ＮＨ４ＯＨ）：ＤＣＭ）で精製し、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−（アミノオキシ）エタノン（Ｃ−３５）を固形物として得た。1H NMR (CDCl3): δ 7.12 (d, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.69 (d, 1H), 6.38 (d, 1H), 5.52 (t, 1H), 5.30 (s, 2H), 4.35 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.64 (s, 2H), 3.52 (m, 2H), 3.38 (m, 4H), 2.44 (m, 4H), 1.62 (s, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.38 (m, 2H), 1.25 (m, 2H), 1.12 (m, 2H), 0.87 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５１１．４。
１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−アミノエトキシ）プロパン−１−オン（Ｃ−３６）の合成
Figure 0006877420
 １−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−アミノエトキシ）プロパン−１−オン（Ｃ−３６）を、３−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）プロパノエートを２−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）オキシ）酢酸の代わりに使用したことを除いて、実施例３５と同様の手順に従って調製し、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−アミノエトキシ）プロパン−１−オン（Ｃ−３６）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.26 (d, 1H), 7.09 (d, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.59 (d, 1H), 6.13 (d, 1H), 5.43 (s, 2H), 4.57 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.73 (t, 2H), 3.58 (m, 4H), 3.54 (m, 2H), 3.37 (m, 2H), 2.93 (t, 2H), 2.66 (m, 2H), 2.44 (m, 4H), 1.41 (m, 2H), 1.27 (m, 2H), 1.15 (m, 2H), 0.87 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５５３．４。
Ｎ−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−３７）の合成
Figure 0006877420
 Ｎ−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−３７）を、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−アミノエトキシ）プロパン−１−オン（Ｃ−３６）をＩｎｔ−１の代わりに使用したことを除いて、実施例３５と同様の手順に従って調製し、Ｎ−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−３７）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.27 (d, 1H), 7.09 (d, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.59 (d, 1H), 6.13 (d, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.08 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.72 (t, 2H), 3.56 (m, 8H), 3.40 (m, 4H), 2.64 (t, 2H), 2.44 (m, 4H), 1.43 (m, 2H), 1.27 (m, 2H), 1.14 (m, 2H), 0.87 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６２６．４。
（Ｓ）−１−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−（アミノオキシ）エタノン（Ｃ−３８）の合成
Figure 0006877420
 （Ｓ）−１−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−（アミノオキシ）エタノン（Ｃ−３８）を、化合物（Ｉｎｔ−２）を化合物（Ｉｎｔ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例３５と同様の手順に従って調製し、（Ｓ）−１−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−（アミノオキシ）エタノン（Ｃ−３８）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.54 (d, 1), 7.40 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.29 (d, 1H), 5.69 (d, 1H), 5.48 (d, 1H), 4.36 (m, 3H), 3.96 (s, 3H), 3.74 (m, 2H), 3.51 (m, 4H), 2.66 (m, 4H), 1.49 (m, 1H), 1.38 (m, 3H), 1.24 (m, 2H), 0.96 (m, 2H), 0.84 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５４１．３。
（Ｓ）−１−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロパン−１−オン（Ｃ−３９）
Figure 0006877420
 （Ｓ）−１−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロパン−１−オン（Ｃ−３９）を、化合物（Ｉｎｔ−２）を化合物（Ｉｎｔ−１）の代わりに使用し、かつ２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザテトラデカン−１４−酸を２−（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）オキシ）酢酸の代わりに使用したことを除いて、実施例３５と同様の手順に従って調製し、（Ｓ）−１−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）プロパン−１−オン（Ｃ−３９）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.56 (d, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.16 (d, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.31 (d, 1H), 5.71 (d, 1H), 5.50 (d, 1H), 4.38 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.78 (m, 4H), 3.72 (m, 2H), 3.67 (m, 6H), 3.53 (m, 4H), 3.14 (m, 2H), 2.77 (m, 2H), 2.69 (m, 4H), 1.51 (m, 1H), 1.26 (m, 3H), 1.02 (m, 2H), 0.86 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６２７．５。
（Ｓ）−Ｎ−（２−（２−（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−４０）の合成
Figure 0006877420
 （Ｓ）−Ｎ−（２−（２−（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−４０）を、化合物（Ｃ−３９）を化合物（Ｉｎｔ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例３５と同様の手順に従って調製し、（Ｓ）−Ｎ−（２−（２−（３−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−４０）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.54 (d, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.17 (d, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.30 (d, 1H), 5.68 (d, 1H), 5.50 (d, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.09 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.73 (m, 8H), 3.56 (m, 4H), 3.43 (t, 2H), 3.23 (m, 2H), 2.88 (m, 4H), 2.66 (t, 2H), 1.49 (m, 1H), 1.26 (m, 3H), 1.04 (m, 2H), 0.84 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７００．４。
Ｎ−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−４１）の合成
Figure 0006877420
 Ｎ−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−４１）を、化合物（Ｃ−２０）を化合物（Ｉｎｔ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例３５と同様の手順に従って調製し、Ｎ−（２−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−４１）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.25 (d, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.58 (d, 1H), 6.12 (d, 1H), 5.43 (s, 2H), 4.10 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.76 (t, 2H), 3.60 (m, 12H), 3.44 (t, 2H), 3.36 (t, 2H), 2.66 (t, 2H), 2.46 (m, 4H), 1.40 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.15 (m, 2H), 0.89 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６７０．４。
５−（４−（（４−（２−（２−（アミノオキシ）エトキシ）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｃ−４２）の合成
Figure 0006877420
 ステップ１：第１のステップにおいて、丸底フラスコに、ＤＣＥ中の、５−（２−メトキシ−４−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）および２−（２−（（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）オキシ）エトキシ）アセトアルデヒド（１．２当量）（０．０２Ｍ）を入れ、この混合物に酢酸（６．０当量）を添加し、混合物を室温で１５分間撹拌し、次いで、トリアセトキシボロヒドリドナトリウム（３．０当量）を添加した。撹拌を、室温でさらに３時間続けた。次いで、揮発性物質を真空中で除去した。残渣をＭｅＯＨに溶解し、逆相ＨＰＬＣで、Ｃ１８カラム（０．０５％ＴＦＡを含む、１０〜５０％アセトニトリル−Ｈ２Ｏで溶出した）を使用して精製し、２−（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エトキシ）イソインドリン−１，３−ジオンを得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６７１．４０。
ステップ２：丸底フラスコに、２−（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エトキシ）イソインドリン−１，３−ジオン（１．０当量）、ヒドラジン水和物（１０．０当量）、ＭｅＯＨ（０．０２Ｍ）、および水（０．２Ｍ）を入れた。混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を、逆相ＨＰＬＣで、Ｃ１８カラム（０．０５％ＴＦＡを含む、１０〜５０％アセトニトリル−Ｈ２Ｏで溶出した）を使用して精製した。所望の生成物を含むフラクションをプールし、減圧下で濃縮し、次いで、残渣をＭｅＯＨに溶解し、プレコンディショニングされたＳｐｈｅｒｅ ＰＬ−ＨＣＯ３ ＭＰ−樹脂カラムにロードし、ＭｅＯＨで溶出し、溶出液を濃縮し、５−（４−（（４−（２−（２−（アミノオキシ）エトキシ）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｃ−４２）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.22 (d, 1H), 7.08 (d, 1H), 6.83 (d, 1H), 6.56 (d, 1H), 6.10 (d, 1H), 5.40 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.76 (m, 2H), 3.60 (m, 4H), 3.50 (s, 2H), 3.34 (d, 3H), 2.59 (m, 4H), 2.49 (s, 4H), 1.38 (m, 2H), 1.26 (m, 2H), 1.12 (m, 2H), 0.87 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５４１．４０。
注記：２−（２−（（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）オキシ）エトキシ）アセトアルデヒドは、２ステッププロセスで調製した。
ステップ１：ＴＨＦ中の、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド（１．０当量）、ジエチレングリコール（１．０当量）、およびトリフェニルホスフィン（１．３当量）の溶液（０．２Ｍ）に、ＤＥＡＤ（トルエン中の２．２Ｍ溶液、１．３当量）を、０℃で添加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（２０〜７０％ＥｔＯＡ／ヘキサンで溶出した）で精製した。このクロマトグラフィー後、生成物はまだ多少のＰｈ３ＰＯを含み、次いで、これを逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム、２０〜４０〜１００％ＣＨ３ＣＮ／水で溶出した）で精製し、２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）イソインドリン−１，３−ジオンを得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝２５２．１０。
ステップ２：乾燥ＤＣＭ中の、２−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）イソインドリン−１，３−ジオン（１．０当量）および重炭酸ナトリウム（２．０当量）の撹拌混合物（０．０８Ｍ）に、デスマーチンペルヨージナン（２．０当量）を添加し、得られた混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、次いで、１Ｎ ＮａＯＨ溶液および食塩水で洗浄し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空中で蒸発した。粗製混合物を、シリカゲルクロマトグラフィー（３０〜７０％ＥｔＡＯｃ／ヘキサンで溶出した）で精製し、２−（２−（（１，３−ジオキソイソインドリン−２−イル）オキシ）エトキシ）アセトアルデヒドを得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝２５０．１０。
Ｎ−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−４３）の合成
Figure 0006877420
 Ｎ−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−４３）を、化合物（Ｃ−１９）を化合物（Ｉｎｔ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例３５と同様の手順に従って調製し、Ｎ−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−４３）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.12 (d, 1H), 6.98 (d, 1H), 6.73 (d, 1H), 6.45 (d, 1H), 6.00 (d, 1H), 5.30 (s, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.41 (s, 2H), 3.25 (s, 2H), 2.40 (s, 6H), 2.27 (m, 3H), 1.63 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 1.17 (m, 3H), 1.02 (m, 2H), 0.77 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５６８．４０。
５−（４−（（４−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｃ−４４）の合成
Figure 0006877420
 ５−（４−（（４−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｃ−４４）を、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−ブロモエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメートをｔｅｒｔ−ブチル（３−ブロモプロピル）カルバメート）の代わりに使用したことを除いて、実施例１９と同様の手順に従って調製し、５−（４−（（４−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−２−メトキシベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｃ−４４）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 6.73 (d, 1H), 6.21 (s, 1H), 5.51 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.69 (m, 12H), 3.53 (t, 2H), 3.12 (m, 2H), 2.84 (m, 8H), 1.50 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 1.17 (m, 2H), 0.87 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５６９．３。
Ｎ−（２−（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−４５）の合成
Figure 0006877420
 Ｎ−（２−（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−４３）を、化合物（Ｃ−４４）を化合物（Ｉｎｔ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例３５と同様の手順に従って調製し、Ｎ−（２−（２−（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）エトキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−４５）を固形物として得た。1H NMR (CDCl3): δ 7.20 (s, 1H), 6.97 (d, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.76 (d, 1H), 6.56 (d, 1H), 6.17 (d, 1H), 5.84 (s, 2H), 5.21 (s, 2H), 4.69 (m, 2H), 4.07 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.53 (m, 8H), 3.45 (m, 2H), 3.39 (s, 2H), 3.24 (m, 2H), 2.52 (t, 2H), 2.40 (m, 8H), 1.22 (m, 2H), 1.16 (m, 2H), 1.02 (m, 2H), 0.78 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６４２．４。
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−４６）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、ジイソプロピルアミン（１．３当量）、グルタル酸ジスクシンイミジル（１．３当量）、およびＤＭＳＯ（０．１Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−４６）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (DMSO): δ 7.41 (s, 1H), 7.37 (s, 3H), 7.19 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.56 (s, 2H), 4.30 (s, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.44 (m, 4H), 3.35 (m, 2H), 2.92 (m, 2H), 2.80 (m, 8H), 2.71 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.44 (m, 2H), 1.20 (m, 2H), 1.09 (m, 2H), 0.80 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６４９．３。
（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−４７）の合成
Figure 0006877420
 （Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−４７）を、化合物（Ｉｎｔ−２）を化合物（Ｉｎｔ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４６と同様の手順に従って調製し、（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−４７）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (DMSO): δ 7.54 (s, 1H), 7.43 (s, 3H), 7.22 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.28 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.67 (d, 1H), 5.50 (d, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.22 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.36 (m, 4H), 3.28 (m, 2H), 2.92 (m, 2H), 2.82 (m, 8H), 2.72 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.34 (m, 2H), 1.15 (m, 2H), 0.86 (m, 2H), 0.77 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６７９．３。
（Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−４８）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−４７）（１．０当量）、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ（２．０当量）、ＤＩＥＡ（５．０当量）、およびＤＭＦ（３０ｍＭ）を入れた。反応物を室温で１６時間撹拌し、揮発性物質を真空中で除去した。粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）を使用して精製し、（Ｓ）−６−（５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸を得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋１］＝８１０．５。（Ｓ）−６−（５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸を、０．１Ｍ ＤＣＭ中の３０体積％ＴＦＡで処理し、揮発性物質を真空中で除去し、（Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（（（Ｓ）−１−ヒドロキシヘキサン−２−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−４８）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.49 (m, 2H), 7.21 (d, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.29 (d, 1H), 5.68 (d, 1H), 5.50 (d, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.20 (m, 2H), 3.99 (S, 3H), 3.93 (m, 1H), 3.76 (m, 2H), 3.50 (m, 2H), 3.19 (m, 4H), 2.44 (t, 2H), 2.24 (t, 2H), 2.16 (m, 4H), 1.88 (m, 4H), 1.51 (m, 2H), 1.25 (m, 6H), 1.03 (m, 2H), 0.84 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７１０．３。
（Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−４９）の合成
Figure 0006877420
 （Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−４９）を、化合物（Ｃ−４６）を化合物（Ｃ−４７）の代わりに使用したことを除いて、実施例４８と同様の手順に従って調製し、（Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−４９）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.01 (d, 1H), 6.78 (d, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.56 (s, 2H), 4.07 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.79 (m, 1H), 3.73 (m, 2H), 3.55 (m, 2H), 2.98 (m, 4H), 2.43 (t, 2H), 2.23 (t, 2H), 2.04 (m, 4H), 1.89 (m, 4H), 1.54 (m, 6H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６８０．４。
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−５０）の合成
Figure 0006877420
 ２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−５０）を、化合物（Ｃ−１９）を化合物（Ｉｎｔ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４６と同様の手順に従って調製し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）アミノ）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−５０）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (DMSO): δ 8.00 (s, 1H), 7.40 (m, 4H), 7.02 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.55 (d, 1H), 6.21 (d, 1H), 5.53 (s, 2H), 3.83 (, m, 5H), 3.00 (m, 8H), 2.81 (m, 4H), 2.69 (m, 2H), 2.19 (m, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.75 (m, 4H), 1.45 (m, 2H), 1.22 (m, 4H), 1.09 (m, 4H), 0.80 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７０６．４。
（Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）アミノ）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−５１）の合成
Figure 0006877420
 （Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）アミノ）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−５１）を、化合物（Ｃ−５０）を化合物（Ｃ−４７）の代わりに使用したことを除いて、実施例４８と同様の手順に従って調製し、（Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）プロピル）アミノ）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−５１）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.35 (d, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 6.75 (d, 1H), 6.22 (s, 1H), 5.52 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.86 (t, 1H), 3.71 (s, 2H), 3.54 (, m, 2H), 3.22 (m, 8H), 3.05 (m, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.21 (m, 4H), 1.89 (m, 4H), 1.53 (m, 6H), 1.30 (m, 4H), 1.18 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７３７．４。
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−５２）の合成
Figure 0006877420
 ２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−５２）を、化合物（Ｉｎｔ−３）を化合物（Ｉｎｔ−１）の代わりに使用したことを除いて、実施例４６と同様の手順に従って調製し、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−５２）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６４９．４。
（Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−５３）の合成
Figure 0006877420
 （Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−５３）を、化合物（Ｃ−５２）を化合物（Ｃ−４７）の代わりに使用したことを除いて、実施例４８と同様の手順に従って調製し、（Ｓ）−２−アミノ−６−（５−（４−（３−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−４−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−５３）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (DMSO): δ 8.22 (s, 3H), 7.79 (t, 1H), 7.51 (s, 2H), 7.42 (m, 2H), 7.27 (t, 1H), 7.17 (d, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.05 (m, 2H), 3.87 (s, 5H), 3.42 (m, 3H), 3.02 (m, 3H), 2.89 (m, 2H), 2.31 (t, 2H), 2.09 (t, 2H), 1.72 (m, 4H), 1.41 (m, 5H), 1.22 (m, 2H), 1.07 (m, 2H), 0.83 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６８０．４。
ペルフルオロフェニル５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−５４）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−４−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、ＤＩＥＡ（３．０当量）、ビス（ペルフルオロフェニル）グルタレート（２．０当量）、およびＤＭＦ（０．０１Ｍ）を入れた。反応物を室温で２時間撹拌し、次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、ペルフルオロフェニル５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−５−オキソペンタノエート（Ｃ−５４）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋１］＝７１８．４。
注記：ビス（ペルフルオロフェニル）グルタレートは、グルタリルジクロリド（１．０当量）、ＴＨＦ（０．１５Ｍ）、およびトリエチルアミン（２．２当量）を丸底フラスコに入れ、反応混合物を０℃に冷却することによって調製した。ＴＨＦ中の２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェノール（２．１当量）の溶液（１．２Ｍ）をゆっくりと添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物をシリカゲルに通してろ過し、次いで、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムで、ヘキサン−酢酸エチル（９：１）を用い溶出して精製し、濃縮し、ビス（ペルフルオロフェニルグルタレートを固形物として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋２３］＝４８７．２。
ペルフルオロフェニル３−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）プロパノエート（Ｃ−５５）の合成
Figure 0006877420
 ペルフルオロフェニル３−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）プロパノエート（Ｃ−５５）を、ビス（ペルフルオロフェニル）３，３’−オキシジプロパノエートをビス（ペルフルオロフェニル）グルタレートの代わりに使用したことを除いて、実施例５４と同様の手順に従って、固形物として、ＴＦＡ塩として調製した。1H NMR (アセトニトリル-d3) δ 7.33 (d, 1H), 7.30 (d, 1H), 6.95 (d, 1H), 6.73 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 6.06 (m, 1H), 5.43 (s, 2H), 4.18 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.81 (t, 2H), 3.74 (t, 2H), 3.47 (m, 2H), 2.95 (t, 2H), 2.60 (t, 2H), 2.14 (d, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 1.15 (m, 2H), 0.87 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７４８．４。19F NMR (471 MHz, アセトニトリル-d3) δ -154.71 (d, 2F), -160.40 (d, 1F), -164.57 (dd, 2F).
ペルフルオロフェニル３−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）プロパノエート（Ｃ−５６）の合成
Figure 0006877420
 ３−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）プロパノエート（Ｃ−５６）を、ビス（ペルフルオロフェニル３，３’−（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ジプロパノエートをビス（ペルフルオロフェニル）グルタレートの代わりに使用したことを除いて、実施例５４と同様の手順に従って調製し、３−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エトキシ）プロパノエート（Ｃ−５４）を得た。ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７９２．４。
（Ｓ）−２−アミノ−６−（３−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）プロパンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−５７）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、ペルフルオロフェニル３−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）プロパノエート（Ｃ−５５、１．０当量）、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ（２．０当量）、ＤＩＥＡ（５．０当量）、およびＤＭＦ（３０ｍＭ）を入れた。反応物を室温で１６時間撹拌し、揮発性物質を真空中で除去した。粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）を使用して精製し、（Ｓ）−６−（３−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）プロパンアミド）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸を得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋１］＝８１０．５。ｂｏｃで保護された化合物を、０．１Ｍ ＤＣＭ中の３０体積％ＴＦＡで処理し、次いで、揮発性物質を真空中で除去し、（Ｓ）−２−アミノ−６−（３−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）プロパンアミド）ヘキサン酸（Ｃ−５７）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (DMSO): δ 8.18 (m, 3H), 7.80 (s, 1H), 7.41 (m, 4H), 7.18 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 6.59 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.56 (s, 2H), 4.24 (m, 1H), 3.86 (m, 7H), 3.56 (m, 4H), 3.44 (m, 4H), 3.01 (m, 4H), 2.60 (m, 2H), 2.28 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.38 (m, 3H), 1.21 (m, 3H), 1.09 (m, 2H), 0.80 (t, 3H).ＬＣＭＳ［Ｍ＋１］＝７１０．５。
Ｎ−（１５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデシル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾ−ル−４−イル）ペンタンアミド（Ｃ−５８）の合成
Figure 0006877420
 Ｎ−（１５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデシル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾ−ル−４−イル）ペンタンアミド（Ｃ−５８）を、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１７−オキソ−２１−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾ−ル−４−イル）−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザヘンイコサン−１−エート（-azahenicosan-1-oate）をグルタル酸ジスクシンイミジルの代わりに使用したことを除いて、実施例４６と同様の手順に従って調製し、Ｎ−（１５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデシル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド（Ｃ−５８）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (DMSO): δ 7.84 (m, 2H), 7.42 (m, 4H), 7.22 (m, 1H), 6.94 (d, 1H), 6.56 (d, 1H), 6.42 (s, 1H), 6.37 (s, 1H), 6.22 (s, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.29 (m, 2H), 4.11 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.60 (m, 4H), 3.48 (m, 16H), 3.37 (m, 4H), 3.16 (m, 4H), 3.08 (m, 2H), 2.80 (m, 1H), 2.56 (m, 2H), 2.05 (m, 2H), 1.58 (m, 1H), 1.45 (m, 5H), 1.23 (m, 4H), 1.07 (m, 2H), 0.80 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝９１１．６。
４−（（Ｒ）−６−アミノ−２−（（Ｓ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）ヘキサンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（Ｃ−５９）の合成
Figure 0006877420
 ４−（（Ｒ）−６−アミノ−２−（（Ｓ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）ヘキサンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（Ｃ−５９）を、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｒ）−６−アミノ−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソヘキサン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）カルバメートを第１ステップで（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−３−メチル−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートの代わりに使用したことを除いて、実施例（Ｃ−３０）で示されるスキームに従い、固形物として、ＴＦＡ塩として調製した。1H NMR (CD3OD): δ 8.26 (d, 1H), 7.91 (t, 1H), 7.61 (d, 2H), 7.35 (m, 3H), 7.25 (m, 3H), 7.19 (m, 3H), 7.03 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 6.76 (s, 2H), 6.24 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.41 (m, 1H), 4.33 (s, 2H), 3.98 (t, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.70 (m, 3H), 3.54 (t, 2H), 3.24 (m, 4H), 3.10 (m, 1H), 3.02 (m, 1H), 2.83 (m, 1H), 2.47 (t, 2H), 1.92 (m, 2H), 1.52 (m, 4H), 1.42 (m, 2H), 1.30 (m, 3H), 1.18 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝１０１３．５。
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（Ｃ−６０）の合成
Figure 0006877420
 ４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボキシレート（Ｃ−６０）を、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−３−メチル−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートを第１ステップで（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−３−メチル−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートの代わりに使用したことを除いて、実施例（Ｃ−３０）で示されるスキームに従い、固形物として、ＴＦＡ塩として調製した。1H NMR (CD3OD): δ 9.65 (s, 1H), 8.20 (d, 1H), 7.97 (d, 1H), 7.60 (m, 2H), 7.34 (m, 2H), 7.31 (s, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.80 (m, 2H), 6.77 (s, 2H), 6.23 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.48 (t, 1H), 4.31 (s, 3H), 4.15 (t, 1H), 3.95 (m, 4H), 3.68 (m, 4H), 3.62 (m, 2H), 3.53 (m, 8H), 2.49 (t, 2H), 2.11 (m, 1H), 1.52 (m, 2H), 1.44 (d, 3H), 1.28 (m, 2H), 1.18 (m, 2H), 0.98 (m, 6H), 0.87 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝９５２．６。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（Ｃ−６１）の合成
Figure 0006877420
 ステップ１：丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、ＨＯＡＴ（２．０当量）、ヒューニッヒ塩基（１４．０当量）、（３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１．２当量）、およびピリジン：ＤＭＦ（１：４、０．０１５Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、（３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートを固形物として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝１２１２．４。
ステップ２：（３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１．０当量）を、ＭｅＯＨ、ＴＨＦ、および水（２：１：０．４）（０．００５Ｍ）に溶解した。次いで、ＬｉＯＨ（８．０当量）を添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−アミノプロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸を固形物として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝８５０．４。
ステップ３：丸底フラスコに、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−アミノプロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（１．０当量）、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパン酸（２．０当量）、ヒューニッヒ塩基（６．０当量）、ＨＢＴＵ（１．８当量）、およびＤＭＦ（０．００３Ｍ）を入れた。反応物を室温で１５分間撹拌し続けた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（Ｃ−６１）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝１００１．３。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（Ｃ−６２）の合成
Figure 0006877420
 （２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（Ｃ−６２）を、３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパン酸を最後のステップで３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパン酸の代わりに使用したことを除いて、実施例（Ｃ−６１）で示されるスキームに従い、固形物として、ＴＦＡ塩として調製した。1H NMR (CD3OD): δ 8.20 (d, 1H), 7.37 (d, 1H), 7.21 (m, 2H), 7.05 (m, 1H), 6.99 (d, 1H), 6.78 (m, 3H), 6.23 (d, 1H), 5.55 (s, 2H), 5.09 (s, 2H), 3.92 (m, 4H), 4.81 (d, 1H), 4.00 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.89 (d, 1H), 3.62 (m, 9H), 3.53 (m, 8H), 2.90 (m, 3H), 2.66 (t, 2H), 2.37 (t, 2H), 1.51 (m, 2H), 1.29 (m, 2H), 1.17 (m, 2H), 0.87 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝１０４５．４。
Ｎ−（２−（（５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−メチル−５−オキソペンタン−２−イル）ジスルファニル）エチル）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド（Ｃ−６３）の合成
Figure 0006877420
 ステップ１：丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−５−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル４−メチル−４−（メチルジスルファニル）ペンタノエート（１．３当量）、ヒューニッヒ塩基（２０．０当量）、およびＤＭＦ（０．０３Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−Ｃ１８ ＩＳＣＯ（ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ、修飾剤としてＴＦＡを含む）を使用して精製し、次いで、凍結乾燥し、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−４−メチル−４−（メチルジスルファニル）ペンタン−１−オンを、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６１４．３。
ステップ２：丸底フラスコに、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−４−メチル−４−（メチルジスルファニル）ペンタン−１−オン（１．０当量）、（２Ｓ，３Ｓ）−１，４−ジメルカプトブタン−２，３−ジオール（１．０当量）、およびジメチルアセトアミド：Ｈ２Ｏ（１：１、０．０３Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−Ｃ１８ ＩＳＣＯ（ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ、修飾剤としてＴＦＡを含む）を使用して精製し、次いで、凍結乾燥し、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−４−メルカプト−４−メチルペンタン−１−オンを、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５６８．３。
ステップ３：丸底フラスコに、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−４−メルカプト−４−メチルペンタン−１−オン（１．０当量）、２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタン−１−アミンＨＣｌ塩（２．０当量）、ヒューニッヒ塩基（１０．０当量）、およびＴＨＦ：ＰＢＳ（１：１、０．０３Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で１５分撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−Ｃ１８ ＩＳＣＯ（ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ、修飾剤としてＴＦＡを含む）を使用して精製し、次いで、凍結乾燥し、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−４−（（２−アミノエチル）ジスルファニル）−４−メチルペンタン−１−オンを、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝６４３．４。
ステップ４：丸底フラスコに、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−４−（（２−アミノエチル）ジスルファニル）−４−メチルペンタン−１−オン（１．０当量）、３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパン酸（１．０当量）、ヒューニッヒ塩基（５．０当量）、ＨＡＴＵ（１．０当量）、およびＤＭＦ（０．０２Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−Ｃ１８ ＩＳＣＯ（ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ、修飾剤としてＴＦＡを含む）を使用して精製し、次いで、凍結乾燥し、Ｎ−（２−（（５−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−メチル−５−オキソペンタン−２−イル）ジスルファニル）エチル）−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド（Ｃ−６３）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.37 (d, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.08 (m, 1H), 6.83 (d, 1H), 6.81 (s, 2H), 6.24 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.37 (s, 2H), 4.20 (br, 4H), 3.97 (s, 3H), 3.75 (t, 2H), 3.55 (t, 2H), 3.38 (m, 2H), 3.38 (br, 4H), 2.72 (t, 2H), 2.55 (m, 2H), 2.45 (t, 2H), 1.89 (m, 2H), 1.54 (m, 2H), 1.31 (m, 8H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７９４．４。
１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−４−メチル−４−（メチルチオ）ペンタン−１−オン（Ｃ−６４）の合成
Figure 0006877420
 １−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−４−メチル−４−（メチルチオ）ペンタン−１−オン（Ｃ−６３）を、４−メチル−４−（メチルチオ）−１−（ピペラジン−１−イル）ペンタン−１−オンをステップ３でｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレートの代わりに使用したことを除いて、中間体Ｉｎｔ−１で述べられた手順に従い調製した。粗製反応混合物をＲＰ−Ｃ１８ ＩＳＣＯ（ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ、修飾剤としてＴＦＡを含む）を使用して精製し、次いで、凍結乾燥し、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−４−メチル−４−（メチルチオ）ペンタン−１−オン（Ｃ−６４）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.25 (d, 1H), 7.05 (m, 1H), 6.81 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.34 (s, 2H), 3.90 (br, 4H), 3.96 (s, 3H), 3.55 (t, 2H), 3.28 (br, 4H), 2.55 (m, 2H), 1.95 (s, 3H), 1.80 (m, 2H), 1.54 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.27 (s, 6H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５８２．４。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（Ｃ−６５）の合成
Figure 0006877420
 ステップ１：丸底フラスコに、２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オール（Ｃ−６８）（１．０当量）、トリクロロホスファン（３．０当量）、トリエチルアミン（９．０当量）、およびＴＨＦ（０．２Ｍ）を０℃で入れ、１時間撹拌した。次いで、反応物を、氷水をゆっくりと添加することによってクエンチし、ＥｔＯＡｃで３回洗浄した。次いで、所望の生成物を含む水層を凍結乾燥した。２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチルハイドロジェンホスフェートを単離し、さらに精製することなく次のステップで使用した。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝５４６．３。
ステップ２：丸底フラスコに、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１．０当量）、２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エチルハイドロジェンホスフェート（２．０当量）、塩化ピバロイル（４２．０当量）、およびピリジン（０．０３Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。この時点で、ピリジン：Ｈ２Ｏ（１：０．１、０．１４Ｍ）中の二ヨウ化物（１．０６当量）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）を使用して精製し、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテートを、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝１２９２．５。
ステップ３：丸底フラスコに、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１．０当量）、水酸化リチウム−Ｈ２Ｏ（１０．０当量）、およびＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（３：１．５、０．００７Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−Ｃ１８ ＩＳＣＯ（ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ、修飾剤としてＴＦＡを含む）を使用して精製し、次いで、凍結乾燥し、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）メチル）−２−（３−アミノプロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝９３０．４。
ステップ４：丸底フラスコに、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）メチル）−２−（３−アミノプロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（１．０当量）、３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパン酸（１．０当量）、ヒューニッヒ塩基（６．０当量）、ＨＡＴＵ（１．０当量）、およびＤＭＦ（０．００５Ｍ）を入れた。反応物を室温で１５分間撹拌し続けた。次いで、粗製反応混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＡＣＮ中の０．０３５％ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡ、Ｃ１８カラム）で精製し、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）メチル）−２−（３−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）プロパンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（Ｃ−６５）を、固形物として、ＴＦＡ塩として得た。1H NMR (CD3OD): δ 8.19 (s, 1H), 7.37 (d, 1H), 7.14 (m, 3H), 6.79 (s, 2H), 6.77 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.53 (s, 2H), 4.86 (s, 2H), 4.84 (d, 1H), 4.08 (s, 2H), 3.95 (d, 1H), 3.92 (s, 3H), 4.00 (br, 4H), 3.76 (s, 2H), 3.62 (m, 5H), 3.53 (m, 10H), 3.27 (m, 2H), 2.85 (m, 4H), 2.63 (m, 2H), 2.37 (t, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.17 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ／２Ｚ］＝５６３．４。
（２Ｒ，２’Ｒ）−３，３’−（（２−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−オキソエトキシ）イミノ）プロパン−１，３−ジイル）ビス（スルファンジイル））ビス（２−アミノプロパン酸）（Ｃ−６６）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、１−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−（アミノオキシ）エタン−１−オン（Ｃ−３５）（２．４当量）、（２Ｒ，２’Ｒ）−３，３’−（（２−オキソプロパン−１，３−ジイル）ビス（スルファンジイル））ビス（２−アミノプロパン酸）（１．０当量）、およびエタノール（０．０２Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で３０分撹拌した。粗製反応混合物をＲＰ−Ｃ１８ ＩＳＣＯ（ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ、修飾剤としてＴＦＡを含む）を使用して精製し、次いで、凍結乾燥し、（２Ｒ，２’Ｒ）−３，３’−（（２−（（２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−オキソエトキシ）イミノ）プロパン−１，３−ジイル）ビス（スルファンジイル））ビス（２−アミノプロパン酸）（Ｃ−６６）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.35 (d, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.05 (m, 1H), 6.80 (d, 1H), 6.23 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.32 (s, 2H), 4.20 (m, 1H), 4.05 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.81 (m, 4H), 3.55 (m, 2H), 3.44 (m, 2H), 3.20 (m, 4H), 2.96 (m, 1H), 2.88 (m, 1H), 1.53 (m, 2H), 1.31 (m, 2H), 1.18 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝７８９．３。
（Ｒ）−２−アミノ−６−（（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）メチル）−１７−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１０，１７−ジオキソ−８，１４−ジオキサ−４−チア−７，１１−ジアザヘプタデカン−６−酸（Ｃ−６７）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、Ｎ−（２−（３−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロポキシ）エチル）−２−（アミノオキシ）アセトアミド（Ｃ−３７）（２．４当量）、（２Ｒ，２’Ｒ）−３，３’−（（２−オキソプロパン−１，３−ジイル）ビス（スルファンジイル））ビス（２−アミノプロパン酸）（１．０当量）、およびエタノール（０．０２Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で３０分撹拌した。粗製反応混合物をＲＰ−Ｃ１８ ＩＳＣＯ（ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ、修飾剤としてＴＦＡを含む）を使用して精製し、次いで、凍結乾燥し、（Ｒ）−２−アミノ−６−（（（（Ｒ）−２−アミノ−２−カルボキシエチル）チオ）メチル）−１７−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）−１０，１７−ジオキソ−８，１４−ジオキサ−４−チア−７，１１−ジアザヘプタデカン−６−酸（Ｃ−６７）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.36 (d, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.07 (m, 1H), 6.80 (d, 1H), 6.24 (d, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.57 (s, 2H), 4.31 (m, 2H), 4.11 (m, 1H), 4.03 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.86 (br, 4H), 3.73 (t, 2H), 3.54 (m, 6H), 3.40 (m, 2H), 3.20 (m, 8H), 2.96 (m, 2H), 2.67 ( t, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.30 (m, 2H), 1.19 (m, 2H), 0.88 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝９０４．４。
２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オール（Ｃ−６８）の合成
Figure 0006877420
 丸底フラスコに、５−（２−メトキシ−４−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ４−ペンチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン（Ｉｎｔ−１、１．０当量）、２−ブロモエタン−１−オール（１．３当量）、トリエチルアミン（２０．０当量）、およびアセトニトリル（０．０３Ｍ）を入れた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、粗製反応混合物をＩＳＣＯクロマトグラフィー（０〜１０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ勾配）で精製し、２−（４−（４−（（２−アミノ−４−（ペンチルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−５−イル）メチル）−３−メトキシベンジル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オール（Ｃ−６８）を固形物として得た。1H NMR (CD3OD): δ 7.22 (d, 1H), 7.08 (d, 1H), 6.83 (d, 1H), 6.55 (d, 1H), 6.10 (d, 1H), 5.39 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.66 (t, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.32 (m, 2H), 3.20 (s, 1H), 2.51 (m, 10H), 1.37 (m, 2H), 1.27 (m, 2H), 1.25 (s, 1H), 1.12 (m, 2H), 0.86 (t, 3H).ＬＲＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＝４８２．４。
式（Ｉ）の化合物をアッセイし、ｔｏｌｌ様受容体７アゴニストとしてのこれらの活性を測定した。
レポーター遺伝子アッセイ
ヒト胚腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞に、ヒトＴＬＲ７およびＮＦ−κＢ−駆動ルシフェラーゼレポーターベクター（ｐＮｉｆｔｙ−ルシフェラーゼ）を安定にトランスフェクトした。対照用アッセイとして、ｐＮｉｆｔｙ−Ｌｕｃがトランスフェクトされた正常ＨＥＫ２９３を使用した。細胞を、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１０％熱不活性化ＦＢＳ、１％ペニシリンおよびストレプトマイシン、２μｇ／ｍｌピューロマイシン（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ ＃ａｎｔ−ｐｒ−５）、ならびに５μｇ／ｍｌブラストサイジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃４６−１１２０）が添加されたＤＭＥＭで培養した。Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ緩衝液および基質はＰｒｏｍｅｇａ ＃Ｅ２６３Ｂおよび＃Ｅ２６４Ｂ（それぞれアッセイ基質および緩衝液である）から提供された。３８４ウェルクリアボトムプレートは、Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ−ｏｎｅ（＃７８９１６３−Ｇ）から提供され、カスタムバーコードプレートであった。
細胞を、２５，０００細胞／ウェルで３８４ウェルプレートに播種し、培地の最終体積を５０μｌとした。３７℃および５％ＣＯ２で一晩（１８時間）培養した後、細胞をプレートに付着させた。次いで、連続希釈された実験化合物および陽性対照化合物を各ウェルに分注し、３７℃および５％ＣＯ２で７時間インキュベートした。ＤＭＳＯのみで刺激した細胞がまた、陰性対照として与えられた。インキュベート後、３０μｌのプレミックスアッセイ緩衝液および基質緩衝液を、製造者の説明書に従って各ウェルに添加した。発光シグナルを、１プレート当たり２０秒の積分時間でＣＬＩＰＲ装置にて読み取った。
各化合物に対して用量応答曲線を作製し、最大シグナルの５０％が得られる濃度としてＥＣ５０値を決定した。
選択されたアッセイの結果
遊離形態または薬学的に許容される塩の形態のさまざまな式（Ｉ）の化合物は、例えば、本出願に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ試験によって示されるような薬理学的特性を示す。これらの実験におけるＥＣ５０値は、ベースライン応答と最大応答との間の中間の応答を引き起こす、論点の試験化合物の濃度として与えられる。他の例において、式（Ｉ）の化合物のＥＣ５０値は１ｎＭ〜２μＭの範囲である。他の例において、式（Ｉ）の化合物のＥＣ５０値は１ｎＭ〜１μＭの範囲である。他の例において、式（Ｉ）の化合物のＥＣ５０値は１ｎＭ〜５００ｎＭの範囲である。他の例において、式（Ｉ）の化合物のＥＣ５０値は１ｎＭ〜２５０ｎＭの範囲である。他の例において、式（Ｉ）の化合物のＥＣ５０値は１ｎＭ〜１００ｎＭの範囲である。他の例において、式（Ｉ）の化合物のＥＣ５０値は１ｎＭ〜５０ｎＭの範囲である。他の例において、式（Ｉ）の化合物のＥＣ５０値は１ｎＭ〜２５ｎＭの範囲である。他の例において、式（Ｉ）の化合物のＥＣ５０値は１ｎＭ〜１０ｎＭの範囲である。
本発明の化合物のｉｎ−ｖｉｔｒｏ活性を示すために、式（Ｉ）のある特定の化合物によるＴＬＲ−７刺激に関するＥＣ５０値を表２に記載する。システイン付加物は、リソソーム内での分解から生じる、推定上のカタボライトであると考えられている（Bioconjugate Chem. 2006, 17, 114-124）。表２のある特定の化合物は、対応する親化合物をシステインで誘導体化した結果である。
Figure 0006877420
ＴＬＲ７アゴニストを抗ＨＥＲ２抗体突然変異体の特定のシステイン残基にコンジュゲートすることによる、抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートの産生
特定のシステイン（Ｃｙｓ）突然変異を用いた抗ＨＥＲ２抗体の調製
位置特異的システイン突然変異を用いた、抗ＨＥＲ２抗体、例えばトラスツズマブの調製は、国際公開第２０１４／１２４３１６号パンフレットおよび国際公開第２０１５／１３８６１５パンフレットにすでに記載され、これらそれぞれが参照により本明細書に組み込まれるものとする。簡潔には、抗ＨＥＲ２抗体、例えばトラスツズマブの重鎖および軽鎖における可変領域をコードしているＤＮＡを化学合成し、ＩｇＧ１およびヒトカッパ軽鎖の定常領域を含む２つの哺乳動物発現ベクター、ｐＯＧ−ＨＣおよびｐＯＧ−ＬＣにクローニングした。ベクターは、ＣＭＶプロモーターおよびシグナル配列：ＭＫＴＦＩＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＩＦＬＬＰＧＡＴＡ（配列番号２７）を含む。オリゴヌクレオチド指定突然変異誘発を用い、抗ＨＥＲ２抗体のＣｙｓ突然変異体構築物を調製し、Ｃｙｓ突然変異体構築物の配列を、ＤＮＡ塩基配列決定法によって確認した。
例えば、システインを、抗ＨＥＲ２抗体の下記の位置（すべての位置はＥＵナンバリングによる）のうちの１つまたは複数に導入することができる：（ａ）抗体重鎖の位置１５２、３６０、および／または３７５、ならびに（ｂ）抗体軽鎖の位置１０７、１５９、および／または１６５。例えば、システインは、重鎖の位置１５２に導入することができ、抗ＨＥＲ２ ｍＡｂ４が得られ、これは、配列番号１９の軽鎖配列および配列番号３０の重鎖配列を有する。
抗ＨＥＲ２抗体のＣｙｓ突然変異体を、すでに記載されているような一過性遺伝子導入法を使用し、重鎖および軽鎖プラスミドを同時トランスフェクトすることによって、２９３ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）細胞に発現した（Meissner, et al., Biotechnol Bioeng. 75:197-203 (2001)）。発現した抗体を、標準タンパク質Ａアフィニティークロマトグラフィーによって、細胞上澄み液から精製した。
同様の方法を使用し、トラスツズマブの重鎖および軽鎖における可変領域を２つのベクターにクローニングして、ＣＨＯ細胞に発現させた。重鎖ベクターは、ヒトＩｇＧ１抗体の定常領域をコードし、シグナルペプチド（ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡ）（配列番号２８）、重鎖の発現を駆動するＣＭＶプロモーター、ならびにＣＨＯ細胞に安定にトランスフェクトするための、適切なシグナルおよび選択配列を含む。軽鎖ベクターは、ヒトカッパ軽鎖の定常領域をコードし、シグナルペプチド（ＭＳＶＬＴＱＶＬＡＬＬＬＬＷＬＴＧＴＲＣ）（配列番号２９）、軽鎖の発現を駆動するＣＭＶプロモーター、ならびにＣＨＯ細胞に安定にトランスフェクトするための、適切なシグナルおよび選択配列を含む。抗体を生成するために、重鎖ベクターおよび軽鎖ベクターを、ＣＨＯ細胞株に同時トランスフェクトした。細胞を選択し、次いで、安定にトランスフェクトされた細胞を、抗体を生成するのに最適な条件下で培養した。抗体を、標準タンパク質Ａアフィニティークロマトグラフィーによって、細胞上澄み液から精製した。
抗体ベクターの定常領域に対して更なる突然変異を、標準的な突然変異誘発法を使用して行った。
還元、再酸化、およびＣｙｓ突然変異体抗ＨＥＲ２抗体のＴＬＲ７アゴニストへのコンジュゲート
リンカーを含む本発明の式（Ｉ）の化合物を、Junutula JR, et al., Nature Biotechnology 26:925-932 (2008)に記載の方法を使用して、抗体中に操作されたＣｙｓ残基へコンジュゲートした。
哺乳動物細胞で発現した抗体における操作されたＣｙｓ残基は、生合成中に、グルタチオン（ＧＳＨ）および／またはシステインなどの付加物（ジスルフィド）によって修飾されるため（Chen et al. 2009）、最初に発現したときの修飾されたＣｙｓは、マレイミド基、ブロモアセトアミド基、ヨードアセトアミド基などのチオール反応性試薬に対して非反応性である。操作されたＣｙｓ残基にコンジュゲートするために、グルタチオンまたはシステイン付加物を、ジスルフィドを還元することによって除去する必要があり、それには一般的に、発現した抗体のすべてのジスルフィドを還元することを伴う。これは、抗体を、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）などの還元剤に最初に曝露し、続いて、抗体のすべての天然のジスルフィド結合を再酸化し、機能的抗体構造を回復および／または安定化することによって達成することができる。したがって、天然のジスルフィド結合、およびシステインまたはＧＳＨ付加物の操作されたＣｙｓ残基間のジスルフィド結合を還元するために、新しく調製したＤＴＴを、トラスツズマブのあらかじめ精製したＣｙｓ突然変異体に添加し、最終濃度を１０ｍＭまたは２０ｍＭとした。抗体をＤＴＴとともに、３７℃で１時間インキュベートした後、混合物を、緩衝液を毎日交換しながらＰＢＳで３日間透析し、ＤＴＴおよび再酸化された天然のジスルフィド結合を除去した。再酸化プロセスは、抗体四量体を、個々の重鎖および軽鎖分子から分離することが可能な逆相ＨＰＬＣでモニターした。反応物を、８０℃に加熱したＰＲＬＰ−Ｓ ４０００Ａカラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ）で分析し、カラムの溶出を、０．１％ＴＦＡを含む、水中の３０〜６０％アセトニトリル直線勾配で、流速１．５ｍｌ／分で行った。カラムからのタンパク質の溶出を、２８０ｎｍでモニターした。透析を、再酸化が完了するまで続けた。再酸化によって鎖内および鎖間ジスルフィドが回復するが、透析によって、新たに導入されたＣｙｓ残基に連結したシステインおよびグルタチオンを透析除去する。
再酸化後、マレイミド含有化合物を、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）中の再酸化された抗体に、操作されたＣｙｓに対して典型的には１．５：１、２：１、または５：１の比で添加し、インキュベートを１時間行った。典型的には過剰の遊離化合物を、標準的な方法によるタンパク質Ａ樹脂で精製することによって除去し、続いて緩衝液をＰＢＳに交換した。
抗ＨＥＲ２抗体、例えばトラスツズマブのＣｙｓ突然変異体に、還元および再酸化を、オンレジン法を使用して交互に行った。タンパク質Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅビーズ（抗体１０ｍｇ当たり１ｍｌ）を、ＰＢＳ（カルシウム塩またはマグネシウム塩がない）で平衡化し、次いで、抗体試料にバッチモードで添加した。システインＨＣｌ ８５０ｍｇを、ＮａＯＨ３．４ｇを０．５Ｍリン酸ナトリウムｐＨ８．０ ２５０ｍｌに添加することによって調製された溶液１０ｍｌに溶解することによって、０．５Ｍシステイン原液を調製し、次いで、２０ｍＭシステインを抗体／ビーズスラリーに添加し、室温で３０〜６０分間優しく混合した。ビーズを重力カラムにロードし、次いで、ＰＢＳ５０ベッド体積で３０分以内に洗浄し、次いで、カラムに蓋をし、ＰＢＳ１ベッド体積で再懸濁した。再酸化速度を調整するために、５０ｎＭ〜１μＭの塩化銅を任意選択で添加した。再酸化の進行は、少量の樹脂試験試料を取り出し、ＩｇＧ溶出緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ）で溶出し、上述のようにＲＰ−ＨＰＬＣで分析した。所望する再酸化まで完全に進行したら、操作されたシステインよりも２〜３モル過剰の化合物を添加し、混合物を室温で５〜１０分間反応させてから、カラムを少なくとも２０カラム体積のＰＢＳで洗浄することによって、コンジュゲートをただちに開始することができる。抗体コンジュゲートを、ＩｇＧ溶出緩衝液で溶出し、０．１体積の０．５Ｍリン酸ナトリウムｐＨ８．０で中和し、緩衝液をＰＢＳに交換した。あるいは、樹脂上で抗体とのコンジュゲートを開始する代わりに、カラムを、少なくとも２０カラム体積のＰＢＳで洗浄し、抗体をＩｇＧ溶出緩衝液で溶出し、ｐＨ８．０の緩衝液で中和した。次いで、抗体を、コンジュゲート反応に使用するか、更なる使用のために急速凍結した。
抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートの特性
抗体−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートを分析し、コンジュゲートの程度を決定した。化合物対抗体比は、還元されかつ脱グリコシル化された試料のＬＣ−ＭＳデータから推定した。ＬＣ／ＭＳによって、コンジュゲート試料中の抗体に連結したリンカーペイロード（化合物）の分子の平均数が定量化される。ＨＰＬＣによって、抗体が軽鎖および重鎖に分離され、かつ鎖１本当たりのリンカーペイロード基の数に従って重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）を分離する。質量スペクトルデータは、例えば、ＬＣ、ＬＣ＋１、ＬＣ＋２、ＨＣ、ＨＣ＋１、ＨＣ＋２などの混合物中の構成成分種を識別することを可能にする。ＬＣおよびＨＣの鎖の平均担持量から、抗体コンジュゲートに関する化合物対抗体比の平均を算出することができる。所与のコンジュゲート試料に関する化合物対抗体比は、２本の軽鎖および２本の重鎖を含む四量体抗体に連結した化合物（リンカー−ペイロード）分子の平均数を表す。
コンジュゲートはＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １０／３００ ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）および／またはＰｒｏｔｅｉｎ ＫＷ−８０３ ５μｍ ３００×８ｍｍ Ｓｈｏｄｅｘ）カラムの分析的サイズ排除クロマトグラフィー（ＡｎＳＥＣ）を使用してプロファイルし、凝集体は分析的サイズ排除クロマトグラフィーに基づいて分析した。コンジュゲートはまた、Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＬＣシステム（Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣＡ、ＵＳＡ）に設置された、Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｋｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｕｓｓｉａ、ＰＡ、ＵＳＡ）ＴＳＫｇｅｌ Ｂｕｔｙｌ−ＮＰＲカラム（１００ｍｍ×４．６ｍｍ、２．５μｍ）の分析的疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＡｎＨＩＣ）によって、緩衝液Ａ（２０ｍＭ Ｈｉｓ−ＨＣｌ、１．５Ｍ硫酸アンモニウム、ｐＨ６．０）および緩衝液Ｂ（２０ｍＭ Ｈｉｓ−ＨＣｌ、１５％イソプロパノール、ｐＨ６．０）の２成分勾配を使用し、抗体約２０μｇ（最初はＰＢＳ中）を３Ｍ硫酸アンモニウム０．５体積で希釈することによって調製された試料を用いプロファイルした。疎水性インデックスは、疎水性が既知の４つの標準試料の直線回帰に対して算出する。最も大きいピークは疎水性であることが報告される。
化合物対抗体比が高くなった大部分のコンジュゲートは主に単量体であり、かつ低疎水性（高い疎水性インデックスはＨＩＣカラムからの前半の溶出に対応する）を示した。この方法によるコンジュゲートによって、大部分の化合物に関して９５％を超えるコンジュゲート効率が得られる（表３）。コンジュゲートの大部分が、４％未満の二量体およびオリゴマー材料を含む（表３）。０．８０以上の疎水性インデックス（ＨＩ）が、好ましい特徴であると見なされる。コンジュゲートの大部分が０．８０を超えるＨＩ値を示した（表３）。これは、コンジュゲートが効率的に作製され、かつ好ましい特徴を有することができることを示唆する。
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非操作抗ＨＥＲ２抗体の天然のジスルフィド結合を部分的に還元することによる抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートの産生
本発明の一部の化合物をまた、抗体の部分的還元を伴う手順を使用して非操作抗体の天然のシステイン残基にコンジュゲートすることもできる（Doronina, S. O. et al., Nat. Biotechnol. 21, 778-784, 2003）。（５〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度の）抗ＨＥＲ２抗体の鎖間および鎖内ジスルフィド結合は、ＴＣＥＰを添加し、最終濃度を１０ｍＭとし、混合物を３７℃で１時間インキュベートすることによって、２ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ中で最初に部分的に還元した。脱塩し、１％ｗ／ｖ ＰＳ−２０界面活性剤を添加後、部分的に還元された抗体（１〜２ｍｇ／ｍｌ）を、抗体１０ｍｇ当たりＴＬＲ７アゴニスト化合物０．５〜１ｍｇと４℃で一晩反応させた。得られたコンジュゲートを、上述のように、標準的な方法によるタンパク質Ａクロマトグラフィーによって精製し、緩衝液をＰＢＳに交換し、ＭＳ、ＡｎＨＩＣ、およびＡｎＨＩＣによってプロファイルした。抗ＨＥＲ２ ｍＡｂ３を還元し、続いて、化合物Ｃ−１とコンジュゲートすることによって作製された１つのコンジュゲート例に関して測定された化合物対抗体比、凝集挙動、および疎水性のデータを表３に要約する。
非操作抗ＨＥＲ２抗体の天然の鎖間ジスルフィド結合に再連結するための、１，３−ジクロロプロパン−２−オンを使用した、抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートの産生
代替方法において（米国特許出願第２０１５０１５０９９８号明細書）、下記の２ステップを使用し、非操作組換え抗ＨＥＲ２抗体の鎖間ジスルフィド結合を修飾し、本発明のアゴニスト化合物にコンジュゲートすることができる。
スキーム１５
天然のシステイン残基を、１，３ジクロロプロパン−２−オンを使用して架橋し、続いて、導入ケトンに添加するための２ステップコンジュゲート
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 ステップ１：１，３ジクロロプロパン−２−オンを使用した、鎖間ジスルフィド架橋の還元および再架橋
ＴＣＥＰ・ＨＣｌ（１．６３ｍＭ）を、０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．０）中の、抗ＨＥＲ２抗体ｍＡｂ３（１３６μＭ）および１，３−ジクロロプロパン−２−オン（３３ｍＭ）の溶液に４℃で添加した。得られた混合物を、４℃で１６時間優しく撹拌した。次いで、反応混合物を、ＰＤ−１０脱塩カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してＰＢＳに緩衝液交換した。得られた溶液を、５０Ｋ Ａｍｉｃｏｎフィルターを使用して濃縮し、修飾抗ＨＥＲ２抗体を得た。修飾は、ＥＳＩ−ＭＳ（溶出液Ａ：水＋０．１％ギ酸、溶出液Ｂ：アセトニトリル＋０．０４％ギ酸、勾配：２分で３〜８０％Ｂ−流量１．０ｍｌ／分、カラム：Ｐｒｏｓｗｉｆｔ Ｍｏｎｏｌｉｔｈ ４．６＊５０ｍｍ ４０℃）によって確認した。１４５３９８Ｄａ（ＰＮＧａｓｅ Ｆによるグリコシル化後）。
ステップ２：アゴニスト化合物（Ｃ−３７）のコンジュゲート
修飾抗ＨＥＲ２抗体（３０ｍｇ／ｍｌ）を、リンクされたアミノオキシ部分を含む３．０ｍＭ化合物（Ｃ−３７）と、０．１Ｍ酢酸アリニニウム緩衝液（ｐＨ４．６）中で反応させ、最終濃度を１５％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯとした。反応混合物を２３℃で約１６時間インキュベートした。次いで、反応混合物を、５０Ｋ Ａｍｉｃｏｎフィルターを使用してＰＢＳ（ｐＨ７．４）に緩衝液交換し、修飾された抗ＨＥＲ２化合物コンジュゲートを増加させた。
類似のコンジュゲートを、化合物（Ｃ−３５）を使用し、修飾された抗ＨＥＲ２抗体にコンジュゲートして得た。
前述のように、コンジュゲートを、ＭＳ、ＡｎＳＥＣ、およびＡｎＨＩＣによってプロファイルした。測定された、化合物対抗体比、凝集挙動、および疎水性のデータを表３に要約する。化合物対抗体比が高くなった２例のコンジュゲートは主に単量体であり、かつ低疎水性（高疎水性インデックスはＨＩＣカラムからの前半の溶出に対応する）を示した。この方法によるコンジュゲートによって、８５％を超えるコンジュゲート効率が得られる（表３）。コンジュゲートは、２％未満の二量体およびオリゴマー材料を含む（表３）。コンジュゲートは０．８５を超えるＨＩ値を示した（表３）。これは、コンジュゲートが効率的に作製され、かつ好ましい特徴を有することができることを示唆する。
抗ＨＥＲ２抗体の天然のリシン残基にコンジュゲートすることによる、抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートの産生
天然の抗体は、確立された方法により、本発明のある特定の化合物で官能化することができる。例えば、ＰＢＳ、ｐＨ７．２中の、抗ｒａｔＨＥＲ２抗体（７．１６．４、Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨから購入した）４ｍｇ／ｍｌを、７６０μＭの化合物（Ｃ−４７）と混合し、最終ＤＭＳＯ濃度を２０％（ｖ／ｖ）とした。反応物を室温で一晩インキュベートし、次いで、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８でクエンチした。同様の方法を使用し、抗ＨＥＲ２ ｍＡｂ３とのまたはアゴニスト化合物Ｃ−４６およびＣ−５０とのコンジュゲートを作製した。得られた抗体コンジュゲートを、標準的な方法によるタンパク質Ａクロマトグラフィーによって精製し、緩衝液をＰＢＳに交換した。
前述のように、抗体コンジュゲートを、ＭＳ、ＡｎＳＥＣ、およびＡｎＨＩＣによってプロファイルした。測定された、化合物対抗体比、凝集挙動、および疎水性のデータを表３に要約する。いくつかのリシン反応抗体コンジュゲートは、使用したＡｎＳＥＣカラムにおいて、遅い溶出および／またはピークのテーリングを示し、凝集体の検出を困難にするカラム相互作用が示唆された。
Ａ１タグ抗ＨＥＲ２突然変異体抗体の、アミノオキシ反応基を含むアゴニスト化合物との２ステップコンジュゲートを使用した、抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートの産生
翻訳後４’−ホスホパンテテイニル化は、組換えタンパク質を、構造的に異なる小分子で位置特異的に標識化するための汎用的方法である（Yin J, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102:15815-15820, 2005、Zhou Z, et al., ACS Chem. Biol. 2:337-346, 2007）。この酵素によるアプローチは、無差別な４’−ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼ（ＰＰＴａｓｅ）の酵素活性に基づいており、高度に均質な抗体コンジュゲートを調製するために選択された（国際公開第２０１３１８４５１４号パンフレットを参照のこと）。酵素的標識化は、１１または１２量体のＳ６、ｙｂｂＲ、およびＡ１ペプチド配列を、抗体における定常領域のさまざまな位置に組み込むことによって達成される。例えば、配列ＧＤＳＬＤＭＬＥＷＳＬＭ（配列番号３１）のＡ１タグは、抗ＨＥＲ２ ｍＡｂ２の重鎖における残基Ｅ３８８（ＥＵナンバリング）の後に組み込み、配列番号１９の軽鎖配列および配列番号３２の重鎖配列を有する抗ＨＥＲ２ ｍＡｂ５を生成することができる。１つの戦略は、翻訳後４’−ホスホパンテテイニル化によって位置特異的抗体−化合物コンジュゲートを調製するための２ステップ法である（国際公開第２０１３１８４５１４号パンフレットを参照のこと）。このアプローチの第１のステップは、ペプチドタグ抗体の、アジド部分、アルケン部分、アルキン部分、ケトン部分、またはアルデヒド部分などの生体直交基を含むＣｏＡ類似体での、ＰＰＴａｓｅが触媒する標識化に基づく。生体直交型標識化抗体をアフィニティー精製した後、２ステップ法の第２のステップは、反応性の部分を含む化合物を、生体直交基とコンジュゲートすることを伴う。例として、下記の項で、重鎖定常領域内の特異的位置にＡ１タグ挿入を含む抗ＨＥＲ２突然変異体抗体に関する２ステップ法が述べられる。さらに、オキシムライゲーション化学反応に関する２ステップ法が例示されるが、この戦略は、銅不含クリック化学反応を含むクリック化学反応、シュタウディンガーライゲーション、イソニトリル系クリック化学反応、およびテトラジンライゲーションなどの他の生体直交化学反応にまで拡大することができる。
オキシムライゲーション化学反応は、位置特異的タンパク質コンジュゲートを調製するための効率的な生体直交法としていくつかの研究グループによって使用されてきた（Axup JY, et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 109:16101-16106, 2012、Rabuka D, et al., Nat Protoc. 7:1052-1067, 2012）。翻訳後４’−ホスホパンテテイニル化をオキシムライゲーションと組み合わせるために、ケトン修飾ＣｏＡ類似体を、ＣｏＡ生合成酵素ＣｏＡＡ、ＣｏＡＤ、およびＣｏＡＥを使用して、対応するパントテン酸前駆体分子から化学酵素的に調製した（Worthington AS, Burkart MD (2006) Org Biomol Chem. 4:44-46）（Kosa NM, Haushalter RW, Smith AR, Burkart MD (2012) Nat Methods 9:981-984）。次に、ＰＰＴａｓｅ触媒を使用し、生体直交ケトン基を、抗ＨＥＲ２抗体に埋め込まれたＡ１タグに、酵素で位置特異的にコンジュゲートした。具体的には、２．５μＭの抗ＨＥＲ２ ｍＡｂ５を、３０μＭのケトン−ＣｏＡ類似体（化合物Ｃ−６９）（抗体に対して１２モル当量）と、大腸菌（Escherichia coli）由来の約０．５μＭ ＡｃｐＳ ＰＰＴａｓｅ存在下、３７℃で２日間、１２．５ｍＭ ＭｇＣｌ２および２０ｍＭ ＮａＣｌが添加された７５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）中でコンジュゲートした。コンジュゲート反応が完了するよう操作するために、反応混合物に約１μＭ枯草菌（B. subtilius）ＰＰＴａｓｅを添加すると同時に、化合物Ｃ−６９の濃度は約６０μＭに上昇した。反応物は室温でさらに４日間インキュベートした。抗ＨＥＲ２ ｍＡｂ５抗体の、ケトン−ＣｏＡ類似体（化合物Ｃ−６９）による標識化は、還元および脱グリコシル化された試料のデコンボリューションＥＳＩ−ＭＳスペクトルを得ることによって立証された。観察された質量は、対応するケトン官能化重鎖の算出された分子量と一致した。タンパク質Ａアフィニティークロマトグラフィー（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によってＰＰＴａｓｅ酵素および過剰のケトン−ＣｏＡ類似体を除去した後に、ケトン活性化抗体である抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ５−（Ｃ−６９）をＰｉｅｒｃｅ（商標）ＩｇＧ溶出緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で溶出し、続いて、１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）でただちに中和した。中和された抗体溶液をＰＢＳに緩衝液交換し、５０Ｋ Ａｍｉｃｏｎフィルターを使用して濃縮した。
ケトン基の位置特異的連結により、２ステップ法の第２のステップとして、それに続く、アゴニスト化合物をケトン活性化抗ＨＥＲ２ ｍＡｂ５−（Ｃ−６９）にオキシムライゲーションすることが可能になる。４８μＭのケトン官能化抗体を、３０倍モル過剰（１．４ｍＭ）のアミノオキシアゴニストＣ−３５およびＣ−３７と、７％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを含む１００ｍＭ酢酸アニリニウム緩衝液（ｐＨ４．６）中で反応させた。室温でインキュベートしてから１７時間後、過剰のアミノオキシ試薬を５０Ｋ Ａｍｉｃｏｎフィルターを用いた限外ろ過によって除去し、ＰＢＳでの洗浄を繰り返した。抗体コンジュゲートを、ＭＳ、ＡｎＳＥＣ、およびＡｎＨＩＣによってプロファイルした。測定された、化合物対抗体比、凝集挙動、および疎水性のデータを表３に要約する。表３に示されるように、２ステップ法によって、ケトン活性化抗ＨＥＲ２ ｍＡｂ５−（Ｃ−６９）は、アミノオキシアゴニストＣ−３５およびＣ−３７でほぼ定量的に標識化された。
ケトン−コエンザイムＡ類似体（化合物Ｃ−６９）
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 化合物（ｉｎｔ−４）を、５ｍＭの化合物（ｉｎｔ−４）を、２５ｍＭのＡＴＰと、１０μＭ黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）ＣｏＡＡ、２５μＭの大腸菌（Escherichia coli）ＣｏＡＤ、および２０μＭの大腸菌（Escherichia coli）ＣｏＡＥの存在下、３７℃で約１６時間、２０ｍＭ ＭｇＣｌ２を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．０）中で反応させることによってケトン官能化ＣｏＡ類似体（Ｃ６９）に変換した。反応混合物を２０，８１７×ｇで２分間遠心分離した後、可溶性酵素を、１０ｋＤａカットオフのＡｍｉｃｏｎ超遠心フィルターに通し、限外ろ過することによって分離した。化合物（ｉ−４）の、ケトン官能化ＣｏＡ類似体（Ｃ５９）への酵素的変換は、抗ＨＥＲ２ ｍＡｂ５−（Ｃ−６９）−（Ｃ−３５）および抗ＨＥＲ２ ｍＡｂ５−（Ｃ−６９）−（Ｃ−３７）が形成されることによって立証された（表３を参照のこと）。
抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性試験
マレイミド含有ペイロードと抗体のＣｙｓ残基との間に形成された結合の安定性は、この反応で形成されたスクシンイミド環を加水分解することによって促進される。本発明のアゴニスト化合物を用いて調製された抗体コンジュゲートの安定性に対するスクシンイミド環の加水分解効果を、マウス血清中において、ｉｎ ｖｉｔｒｏでインキュベートした後に研究した。ペイロードの脱コンジュゲート、および抗体へコンジュゲートされたマレイミドペイロードにおけるスクシンイミド環の加水分解から生じる質量変化を、ＬＣ−ＭＳによってモニターした。スクシンイミド環の加水分解は、高ｐＨ、高温、または高濃度塩などの特定の条件によって刺激されることが報告されている（J. Am. Chem. Soc. 1955, 77: 3922、Biochemistry 1976, 15: 2836、Biochem. J. 1979, 179: 191-197、J Pharm Sci. 1984, 73:1767-1771、Bioorg. Med. Chem. Lett. 17: 6286-6289, 2007）。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるコンジュゲートの安定性を調査するために、抗ＨＥＲ２抗体ｍＡｂ２コンジュゲートを、５０〜７０％のマウス血清中、３７℃でインキュベートした。５０マイクログラムのコンジュゲート試料を各時点（典型的には０、８、２４、４８、および７２時間）で取り出し、ただちに急速凍結した。その後、プロセスおよび分析用に、試料を解凍した。簡潔には、抗体を、Ｎリンクグリカンを除去するためのＰＮＧａｓｅＦと、重鎖のヒンジ領域付近を切断してＦｃからＦａｂを分離するタンパク質分解酵素とで処理してから、ＤＴＴで還元し、ジスルフィド結合を破壊した。次いで、軽鎖、重鎖Ｆａｂ、および重鎖ＦｃフラグメントをＥＳＩ−ＭＳで分析した。脱コンジュゲートされた抗体、加水分解されたスクシンイミド環を有する連結されたペイロードとのコンジュゲート、および完全なスクシンイミド環を有する連結されたペイロードとのコンジュゲートの相対的な抗体数を、対応するコンジュゲート種の相対的なＭＳ強度から算出した。一部のコンジュゲートに関する、脱コンジュゲートの程度およびスクシンイミド加水分解の程度を表４および表５に示す。一般的に、コンジュゲートは、７２時間のｉｎ ｖｉｔｒｏでのインキュベート中に、担持された化合物の１３％未満が損失し、かつ一般的に、スクシンイミド環の加水分解は、４８時間で８５％超が完全である。マレイミド逆反応により脱コンジュゲートに対して感受性が低く、さらにスクシンイミド環加水分解により安定化されるために、化合物（Ｃ−５）および化合物（Ｃ−２１）により例示された本発明の特定の化合物はコンジュゲート安定性が改善されたことが示される。
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Ｎ８７胃腫瘍異種移植モデルにおける抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートのｉｎ ｖｉｖｏ試験
材料および方法
Ｎ８７胃癌腫異種移植マウスモデルに関しては、６〜８週齢の雌ＳＣＩＤ−ベージュマウス（Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した）を移植に使用した。Ｎ８７細胞（ＡＴＣＣから入手した、Ｃａｔａｌｏｇ＃ＣＲＬ−５８２２、Ｖｅｎｄｏｒ ｌｏｔ＃７６８６２５５）を、滅菌状態で、５％ＣＯ２を含む３７℃のインキュベーター内にて２週間増殖させた。細胞を、１０％ウシ胎仔血清を含むＲＰＭＩ培地で増殖させた。細胞を、３〜４日毎に０．０５％トリプシン／ＥＤＴＡで継代培養した。移植日に、Ｎ８７細胞（４継代培養）を取り出し、１×１０６細胞および５０％マトリゲル／１００μｌの濃度で、ＲＰＭＩ１６４０血清不含培地に再懸濁した。細胞は、これらがマイコプラズマおよびマウスウイルスを有さないことを保証するために試験されたＲａｄｉｌであった。
Ｎ８７細胞を、下脇腹に、２８ｇ針を使用した皮下注射で移植した（１００μｌの注射体積）。移植後、腫瘍が触診可能になった時点で、１週間当たり２回、腫瘍をキャリパーで測定し、マウスの体重を量った。次いで、腫瘍を１週間に２回、２次元で測定した。キャリパー測定値を、（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して算出した。マウスを正常食で飼育し、Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ＡｎｉｍａｌｓおよびＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの規制に従ってＳＰＦ動物施設に収容した。
異種移植腫瘍が約２００ｍｍ３に達したときに、抗ＨＥＲ２抗体または抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲート０．３〜１０ｍｇ／ｋｇを静脈内経路でマウスに投与した。齧歯動物には認められず、かつ抗ＨＥＲ２抗体に関して述べられた同様の方法によりコンジュゲートされた、標的に対する抗体を発現することによって、アイソタイプ対照抗体を産生した。腫瘍を、１週間に２回測定した。平均腫瘍体積を、Ｐｒｉｓｍ ５（ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアを使用してプロットした。有効性研究の終点は、腫瘍サイズが２０００ｍｍ３の体積に達したときに達成される。注射後、マウスを、臨床徴候の消失に関しても厳密にモニターした。何らかの理由でマウスが、呼吸困難、前屈位、活動低下、後肢麻痺、胸水の徴候としての頻呼吸、他の徴候に加えて２０％もしくは１５％近くの体重減少を含む任意の罹患徴候を示した場合、または日常の活動（摂食、歩行）を継続するマウスの能力が欠損した場合、マウスは安楽死させた。
結果
Ｎ８７胃腫瘍異種移植マウスを、化合物（Ｃ−１）が抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ２重鎖のＣｙｓ１５２およびＣｙｓ３７５にコンジュゲートされた抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ２−（Ｃ−１）コンジュゲート１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの単回用量で静脈内処理した。最も低い被験用量である１ｍｇ／ｋｇを含むすべての被験用量で、Ｎ８７異種移植腫瘍の完全な退行が、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ２−（Ｃ−１）コンジュゲートで処理されたマウスに観察された（図１）。未処理の動物と比較して、腫瘍の退行は、非コンジュゲート抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ２単独またはアイソタイプ対照抗体−（Ｃ−１）コンジュゲート１０ｍｇ／ｋｇで処理されたＮ８７異種移植マウスにおいて観察されなかった（図１）。
Ｎ８７胃腫瘍異種移植マウスを、０．３ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ（１群当たりマウス１０匹）のいずれかの、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−１）または抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）による単回用量で処理した。抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−１）１ｍｇ／ｋｇの単回用量処理によって、ヒトＮ８７異種移植腫瘍が完全に退行したが、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−１）０．３ｍｇ／ｋｇでは腫瘍の静止状態が生じた（図２）。同様に、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）１ｍｇ／ｋｇの単回用量処理によって、ヒトＮ８７異種移植腫瘍が完全に退行したが、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）０．３ｍｇ／ｋｇでは腫瘍の静止状態が生じた（図２）。未処理の動物と比較して、Ｎ８７胃腫瘍の退行は、アイソタイプ対照抗体−（Ｃ−５）コンジュゲートで処理されたＮ８７異種移植マウスにおいて観察されなかった。これらのデータによって、低用量、例えば１ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲート（例えば、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−１）または抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ２−（Ｃ−１））の単回処理で腫瘍の退行を達成できることが示された。
別の研究において、Ｎ８７胃腫瘍異種移植マウスを、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、または５ｍｇ／ｋｇ（１群当たりマウス８匹）の単回用量で処理した。この研究において、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）３ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇのいずれかの単回用量処理によって、ヒトＮ８７異種移植腫瘍が完全に退行したが、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）１ｍｇ／ｋｇでは腫瘍の静止状態が生じた（図３）。
さらに、Ｎ８７胃腫瘍異種移植マウスを、１ｍｇ／ｋｇ（１群当たりマウス６匹）の、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−３５）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−３７）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５９）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−６０）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−６１）、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−６２）、または抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−６４）のいずれかの単回用量で処理した。別の化合物がコンジュゲートされた抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１ １ｍｇ／ｋｇの単回用量処理によって腫瘍の静止状態が生じ（図４）、同様のことが抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）１ｍｇ／ｋｇの単回用量処理後に観察された。
ＭＭＣ（ｒａｔＨＥＲ２＋）乳癌同系モデルにおける抗ｒａｔＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートのｉｎ ｖｉｖｏ試験
材料および方法
ＭＭＣ（ｒａｔＨＥＲ２＋）乳癌同系モデルに関しては、Ｖａｌ６６４→Ｇｌｕ６６４突然変異を含む活性化ラットＥｒｂｂ２（ｃ−ｎｅｕ）腫瘍遺伝子を発現している６〜１０週齢の雌ＦＶＢ／Ｎ トランスジェニックマウス（ＦＶＢ−Ｔｇ（ＭＭＴＶ−Ｅｒｂｂ２）ＮＫ１Ｍｕｌ／Ｊ最初にＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入し、室内で飼育した）を移植使用した。ＭＭＣ細胞（ＦＶＢ／Ｎ トランスジェニックマウスから得た腫瘍由来、Ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ Ｎｏｒａ Ｄｉｓｉｓ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎから入手）を、滅菌状態で、５％ＣＯ２を含む３７℃のインキュベーター内にて２週間増殖させた。細胞を、２０％ウシ胎仔血清およびペニシリン／ストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ培地で増殖させた。細胞を、３〜４日毎に０．０５％トリプシン／ＥＤＴＡで継代培養した。移植日に、細胞（４継代培養）を取り出し、２．５×１０６細胞および１０％マトリゲル／１００μｌの濃度で、ＲＰＭＩ１６４０血清不含培地に再懸濁した。細胞は、これらがマイコプラズマおよびマウスウイルスを有さないことを保証するために試験されたＲａｄｉｌであった。
ＭＭＣ細胞を、下脇腹に、２８ゲージ針を使用した皮下注射で移植した（１００μｌの注射体積）。移植後、腫瘍が触診可能になった時点で、１週間当たり２回、腫瘍をキャリパーで測定し、マウスの体重を量った。次いで、腫瘍を１週間に２回、２次元で測定した。キャリパー測定値を、（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して算出した。マウスを正常食で飼育し、Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ＡｎｉｍａｌｓおよびＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの規制に従ってＳＰＦ動物施設に収容した。
腫瘍が約２００ｍｍ３に達したときに、抗ｒａｔＨＥＲ２抗体（７．１６．４、Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨから購入した）１ｍｇ／ｋｇまたは抗ｒａｔＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲート（抗ｒａｔＨＥＲ２−（Ｃ−４６））１ｍｇ／ｋｇを静脈内経路で８匹のマウス群に投与した。腫瘍を、１週間に２回測定した。平均腫瘍体積を、Ｐｒｉｓｍ ５（ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアを使用してプロットした。有効性研究の終点は、腫瘍サイズが２０００ｍｍ３の体積に達したときに達成される。注射後、マウスを、臨床徴候の消失に関しても厳密にモニターした。何らかの理由でマウスが、呼吸困難、前屈位、活動低下、後肢麻痺、胸水の徴候としての頻呼吸、他の徴候に加えて２０％もしくは１５％近くの体重減少を含む任意の罹患徴候を示した場合、または日常の活動（摂食、歩行）を継続するマウスの能力が欠損した場合、マウスは安楽死させた。
結果
ＭＭＣ ｒａｔＨＥＲ２＋乳癌同系モデルにおける抗ｒａｔＨＥＲ２−（Ｃ−４６）コンジュゲートの有効性を試験するために、皮下ＭＭＣ***腫瘍を有するマウスを、抗ｒａｔＨＥＲ２−（Ｃ−４６）コンジュゲートまたは非コンジュゲート抗ｒａｔＨＥＲ２ １ｍｇ／ｋｇ（１群当たりマウス８匹）で静脈内処理した。図５Ａおよび図５Ｂで示されるように、ＭＭＣマウス***腫瘍（ｒａｔＨＥＲ２＋）の完全な退行が、抗ｒａｔＨＥＲ２−（Ｃ−４６）コンジュゲートの単回用量で処理された８匹のマウスのうち７匹に観察された（図５Ａ）が、裸の抗ｒａｔＨＥＲ２抗体で処理された８匹のマウスのうちでは３匹のみで観察された（図５Ｂ）。
これらのデータより、抗ｒａｔＨＥＲ２−（Ｃ−４６）コンジュゲートは非コンジュゲート抗ｒａｔＨＥＲ２抗体単独よりも、ｒａｔＨＥＲ２−陽性同系乳癌に対して治療上有効であることが示唆される。
ＨＣＣ１９５４***腫瘍異種移植モデルにおける抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートのｉｎ ｖｉｖｏ試験
材料および方法
ＨＣＣ１９５４***異種移植マウスモデルに関しては、６〜８週齢の雌ＳＣＩＤ−ベージュマウス（Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した）を移植に使用した。ＨＣＣ１９５４細胞（ＡＴＣＣから入手した、Ｃａｔａｌｏｇ＃ＣＲＬ−２３３８、Ｖｅｎｄｏｒ ｌｏｔ＃５１０７６４３）を、滅菌状態で、５％ＣＯ２を含む３７℃のインキュベーター内にて２週間増殖させた。細胞を、１０％ウシ胎仔血清を含むＲＰＭＩ培地で増殖させた。細胞を、３〜４日毎に０．０５％トリプシン／ＥＤＴＡで継代培養した。移植日に、ＨＣＣ１９５４細胞（１７継代培養）を取り出し（採取し）、１×１０６細胞および５０％マトリゲル／１００μｌの濃度で、ＲＰＭＩ１６４０血清不含培地に再懸濁した。細胞は、これらがマイコプラズマおよびマウスウイルスを有さないことを保証するために試験されたＲａｄｉｌであった。
ＨＣＣ１９５４細胞を、右***脂肪体に、２７Ｇ針を使用した皮下注射で移植した（１００μｌの注射体積）。移植後、腫瘍が触診可能になった時点で、１週間当たり２回、腫瘍をキャリパーで測定し、マウスの体重を量った。次いで、腫瘍を１週間に２回、２次元で測定した。キャリパー測定値を、（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して算出した。マウスを正常食で飼育し、Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ＡｎｉｍａｌｓおよびＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの規制に従ってＳＰＦ動物施設に収容した。
異種移植腫瘍が約２００ｍｍ３に達したときに、抗ＨＥＲ２抗体または抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲート１〜１０ｍｇ／ｋｇを静脈内経路でマウスに投与した。齧歯動物には認められず、かつ抗ＨＥＲ２抗体に関して述べられた同様の方法によりコンジュゲートされた、標的に対する抗体を発現することによって、アイソタイプ対照抗体を産生した。腫瘍を、１週間に２回測定した。平均腫瘍体積を、Ｐｒｉｓｍ ５（ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアを使用してプロットした。有効性研究の終点は、腫瘍サイズが２０００ｍｍ３の体積に達したときに達成される。注射後、マウスを、臨床徴候の消失に関しても厳密にモニターした。何らかの理由でマウスが、呼吸困難、前屈位、活動低下、後肢麻痺、胸水の徴候としての頻呼吸、他の徴候に加えて２０％もしくは１５％近くの体重減少を含む任意の罹患徴候を示した場合、または日常の活動（摂食、歩行）を継続するマウスの能力が欠損した場合、マウスは安楽死させた。
結果
ＨＣＣ１９５４***腫瘍異種移植マウスを、化合物（Ｃ−５）が抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１重鎖のＣｙｓ１５２およびＣｙｓ３７５にコンジュゲートされた抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）コンジュゲート１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（１群当たりマウス８匹）の単回用量で静脈内処理した。抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）１０ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇの単回用量処理によって、ヒトＨＣＣ１９５４異種移植腫瘍が完全に退行したが、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）１ｍｇ／ｋｇでは最初に腫瘍が退行し、続いて腫瘍の静止状態が生じた（図６）。腫瘍の退行は、非コンジュゲート抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ単独１０ｍｇ／ｋｇで処理されたＨＣＣ１９５４異種移植マウスにおいて観察されなかった（図６）。
これらのデータによって、抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲート（抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５））３ｍｇ／ｋｇの単回処理で、高ＨＥＲ２発現ＨＣＣ１９５４***腫瘍異種移植における腫瘍の退行を達成できることが示された。
ＳＫＯＶ３卵巣腫瘍異種移植モデルにおける抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートのｉｎ ｖｉｖｏ試験
材料および方法
ＳＫＯＶ３卵巣異種移植マウスモデルに関しては、６〜８週齢の雌ＳＣＩＤ−ベージュマウス（Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した）を移植に使用した。ＳＫＯＶ３細胞（ＡＴＣＣから入手した、Ｃａｔａｌｏｇ＃ＨＴＢ−７７、Ｖｅｎｄｏｒ ｌｏｔ＃７３４９７６５）を、滅菌状態で、５％ＣＯ２を含む３７℃のインキュベーター内にて２週間増殖させた。細胞を、１０％ウシ胎仔血清を含むＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ培地で増殖させた。細胞を、３〜４日毎に０．０５％トリプシン／ＥＤＴＡで継代培養した。移植日に、ＳＫＯＶ３細胞（１１継代培養）を取り出し（採取し）、５×１０６細胞および５０％マトリゲル／１００μｌの濃度で、ＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ血清不含培地に再懸濁した。細胞は、これらがマイコプラズマおよびマウスウイルスを有さないことを保証するために試験されたＲａｄｉｌであった。
ＳＫＯＶ３細胞を、下脇腹に、２８ １／２Ｇ針を使用した皮下注射で移植した（１００μｌの注射体積）。移植後、腫瘍が触診可能になった時点で、１週間当たり２回、腫瘍をキャリパーで測定し、マウスの体重を量った。次いで、腫瘍を１週間に２回、２次元で測定した。キャリパー測定値を、（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して算出した。マウスを正常食で飼育し、Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ＡｎｉｍａｌｓおよびＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの規制に従ってＳＰＦ動物施設に収容した。
異種移植腫瘍が約２００ｍｍ３に達したときに、抗ＨＥＲ２抗体または抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲート３〜１０ｍｇ／ｋｇを静脈内経路でマウスに投与した。齧歯動物には認められず、かつ抗ＨＥＲ２抗体に関して述べられた同様の方法によりコンジュゲートされた、標的に対する抗体を発現することによって、アイソタイプ対照抗体を産生した。腫瘍を、１週間に２回測定した。平均腫瘍体積を、Ｐｒｉｓｍ ５（ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアを使用してプロットした。有効性研究の終点は、腫瘍サイズが２０００ｍｍ３の体積に達したときに達成される。注射後、マウスを、臨床徴候の消失に関しても厳密にモニターした。何らかの理由でマウスが、呼吸困難、前屈位、活動低下、後肢麻痺、胸水の徴候としての頻呼吸、他の徴候に加えて２０％もしくは１５％近くの体重減少を含む任意の罹患徴候を示した場合、または日常の活動（摂食、歩行）を継続するマウスの能力が欠損した場合、マウスは安楽死させた。
ＨＥＲ２免疫組織化学（ＩＨＣ）については、ＨＥＲ２染色および異種移植ＨＥＲ２スコアリングに関する標準ガイドラインおよび手順を使用した（例えば、English et al., Mol Diagn Ther. 2013 Apr; 17(2): 85-99を参照のこと）。
結果
ＳＫＯＶ３卵巣腫瘍異種移植マウスを、化合物（Ｃ−５）が抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１重鎖のＣｙｓ１５２およびＣｙｓ３７５にコンジュゲートされた抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）コンジュゲート３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの単回用量で静脈内処理した。抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）１０ｍｇ／ｋｇの単回用量処理によって、８匹のマウスのうち７匹でヒトＳＫＯＶ３異種移植腫瘍が完全に退行したが、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５）３ｍｇ／ｋｇでは最初に腫瘍が退行し、続いて腫瘍が再増殖した（図７）。未処理の動物と比較して、腫瘍の退行は、非コンジュゲート抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１単独またはアイソタイプ対照抗体−（Ｃ−５）コンジュゲート１０ｍｇ／ｋｇで処理されたＳＫＯＶ３異種移植マウスにおいて観察されなかった（図７）。
これらのデータによって、抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲート（例えば、抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−１）または抗ＨＥＲ２−ｍＡｂ１−（Ｃ−５））１０ｍｇ／ｋｇの単回処理で、Ｎ８７およびＨＣＣ異種移植モデルと比較してＨｅｒ２が低レベルで発現している異種移植モデルにおける腫瘍の退行を達成できることが示された（図８Ｃ、図８Ａおよび図８Ｂと比較）。ＨＥＲ２発現レベルに基づくと、Ｎ８７およびＨＣＣ１９５４はＩＨＣスコア３＋を有し、ＳＫＯＶ３はＩＨＣスコア２＋を有する。したがって、本明細書に記載の抗ＨＥＲ２−ＴＬＲ７アゴニストコンジュゲートは、高ＨＥＲ２発現腫瘍（例えば、ＩＨＣスコア３＋を有する）だけではなく低ＨＥＲ２発現腫瘍（例えば、ＩＨＣスコア２＋を有する）における腫瘍増殖を抑制することができる。

本発明は以下の態様を含み得る。
［１］
式（ＩＩ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩
Figure 0006877420
 （式中、
Ｒ ５０ は
Figure 0006877420
 であり、 ＊ はＡｂへの連結点を示し、
Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
Ｒ １ は−ＮＨＲ ２ または−ＮＨＣＨＲ ２ Ｒ ３ であり、
Ｒ ２ は−Ｃ ３ 〜Ｃ ６ アルキルまたは−Ｃ ４ 〜Ｃ ６ アルキルであり、
Ｒ ３ はＬ １ ＯＨであり、
Ｌ １ は−（ＣＨ ２ ） ｍ −であり、
Ｌ ２ は−（ＣＨ ２ ） ｎ −、−（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−（ＣＨ ２ ） ｎ Ｘ １ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ ２ ） ｎ −、−（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ 、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ Ｘ １ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ Ｘ １ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ ２ Ｘ ３ Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ ２ Ｘ ３ Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ ２ Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ ２ Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ Ｃ（Ｒ ７ ） ２ −、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ Ｃ（Ｒ ７ ） ２ ＳＳ（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−（ＣＨ ２ ） ｎ Ｘ ２ Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ ２ ） ｎ であり、
Ｒ ４０ は
Figure 0006877420
 、−Ｓ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ ２ −、−Ｓ（＝Ｏ） ２ ＣＨ ２ ＣＨ ２ −、−（ＣＨ ２ ） ２ Ｓ（＝Ｏ） ２ ＣＨ ２ ＣＨ ２ −、−ＮＨＳ（＝Ｏ） ２ ＣＨ ２ ＣＨ ２ −、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ ２ ＣＨ ２ −、−ＣＨ ２ ＮＨＣＨ ２ ＣＨ ２ −、−ＮＨＣＨ ２ ＣＨ ２ −、
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ １ は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ ２ は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ ３ は
Figure 0006877420
 であり、
各Ｒ ７ は独立にＨおよびＣ １ 〜Ｃ ６ アルキルから選択され、
各Ｒ ８ は独立にＨ、Ｃ １ 〜Ｃ ６ アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ ９ は独立にＨ、Ｃ １ 〜Ｃ ６ アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ ２ 、−ＯＣＨ ３ 、−ＯＣＨ ２ ＣＨ ３ 、−Ｎ（ＣＨ ３ ） ２ 、−ＣＮ、−ＮＯ ２ 、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ １０ は独立にＨ、Ｃ １−６ アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ １−４ アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ １−４ アルキルから選択され、
Ｒ １２ はＨ、メチル、またはフェニルであり、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である）。
［２］
Ａｂがトラスツズマブ、ペルツズマブ、マルゲツキシマブ、もしくはＨＴ−１９、またはこれらの位置特異的システイン突然変異体から選択され、前記位置特異的システイン突然変異体が、
（ａ）抗体重鎖の位置１５２、３６０、および３７５、ならびに
（ｂ）抗体軽鎖の位置１０７、１５９、および１６５
の位置（すべての位置はＥＵナンバリングによる）のうちの１つまたは複数においてシステインを含む、請求項１に記載のコンジュゲート。
［３］
Ａｂが、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、
配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、
配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、
配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、
配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および
配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）
を含む抗体、
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、
配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、
配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、
配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および
配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
を含む抗体、
（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体、
（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、
（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、
（ｆ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、または
（ｇ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体
のいずれかから選択される、請求項１に記載のコンジュゲート。
［４］
Ａｂがヒトまたはヒト化抗ＨＥＲ２抗体である、請求項１から３のいずれかに記載のコンジュゲート。
［５］
Ａｂが修飾Ｆｃ領域を含む、請求項１から４のいずれかに記載のコンジュゲート。
［６］
Ａｂが、
（ａ）抗体重鎖の位置１５２、３６０、および３７５、ならびに
（ｂ）抗体軽鎖の位置１０７、１５９、および１６５
の位置（すべての位置はＥＵナンバリングによる）のうちの１つまたは複数においてシステインを含む、請求項１から５のいずれかに記載のコンジュゲート。
［７］
Ａｂが抗体重鎖の位置１５２および３７５（すべての位置はＥＵナンバリングによる）においてシステインを含む、請求項１から６のいずれかに記載のコンジュゲート。
［８］
前記式（ＩＩ）の抗体コンジュゲートが、式（ＩＩａ）または式（ＩＩｂ）の構造を含む、請求項１から７のいずれかに記載のコンジュゲート
Figure 0006877420
 （式中、
Ｒ １ は−ＮＨＲ ２ であり、
Ｒ ２ は−Ｃ ４ 〜Ｃ ６ アルキルであり、
Ｌ ２ は−（ＣＨ ２ ） ｎ −、−（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−（ＣＨ ２ ） ｎ Ｘ １ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ Ｘ １ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ Ｘ １ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ ２ Ｘ ３ Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −、または−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ ２ Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −であり、
Ｒ ４０ は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ １ は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ ２ は
Figure 0006877420
 であり、Ｘ ３ は
Figure 0006877420
 であり、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
ｙは１〜１６の整数である）。
［９］
Ｒ １ は−ＮＨＲ ２ であり、
Ｒ ２ は−Ｃ ４ 〜Ｃ ６ アルキルであり、
Ｌ ２ は−（ＣＨ ２ ） ｎ −または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ であり、
Ｒ ４０ は
Figure 0006877420
 であり、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
ｙは１〜１６の整数である、請求項１から７のいずれかに記載のコンジュゲート。
［１０］
前記コンジュゲートが、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって決定される０．８以上の疎水性インデックスを有する、請求項１から９のいずれかに記載のコンジュゲート。
［１１］
下記の式のいずれかを含むコンジュゲート
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
Figure 0006877420
 （式中、Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ｙは１〜４の整数である）。
［１２］
Ａｂがトラスツズマブ、ペルツズマブ、マルゲツキシマブ、もしくはＨＴ−１９、またはこれらの位置特異的システイン突然変異体から選択され、前記位置特異的システイン突然変異体が、
（ａ）抗体重鎖の位置１５２、３６０、および３７５、ならびに
（ｂ）抗体軽鎖の位置１０７、１５９、および１６５
の位置（すべての位置はＥＵナンバリングによる）のうちの１つまたは複数においてシステインを含む、請求項１１に記載のコンジュゲート。
［１３］
Ａｂが、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、
配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、
配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、
配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、
配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および
配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）
を含む抗体、
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、
配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、
配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、
配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および
配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
を含む抗体、
（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体、
（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、
（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、
（ｆ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、または
（ｇ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体
のいずれかから選択される、請求項１１に記載のコンジュゲート。
［１４］
Ａｂが配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１１に記載のコンジュゲート。
［１５］
前記化合物が抗体重鎖の位置１５２および３７５（すべての位置はＥＵナンバリングによる）においてシステインに連結された、請求項１４に記載のコンジュゲート。
［１６］
ｙが約３〜４である、請求項１１に記載のコンジュゲート。
［１７］
前記コンジュゲートが、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって決定される０．８以上の疎水性インデックスを有する、請求項１１から１６のいずれかに記載のコンジュゲート。
［１８］
請求項１から１７のいずれかに記載の１つまたは複数のコンジュゲート、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
［１９］
それを必要とする対象においてＨＥＲ２陽性癌を治療する方法であって、治療有効量の、請求項１から１７のいずれかに記載のコンジュゲートを前記対象に投与することを含む方法。
［２０］
前記コンジュゲートが、抗ＨＥＲ２抗体単独と比較したときに、長期のＨＥＲ２陽性癌を抑制することおよび／またはＨＥＲ２陽性癌の再発を低下させることが可能である、請求項１９に記載の方法。
［２１］
前記ＨＥＲ２陽性癌が、胃癌、食道癌、胃食道接合部腺癌、結腸癌、直腸癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸管癌、子宮癌、子宮内膜癌、膀胱癌、尿路癌、膵臓癌、肺癌、前立腺癌、骨肉腫、神経芽細胞腫、膠芽腫、および頭頸部癌から選択される、請求項１９に記載の方法。
［２２］
前記コンジュゲートが、静脈内、腫瘍内、または皮下で前記対象に投与される、請求項１９に記載の方法。
［２３］
前記コンジュゲートが、体重１ｋｇ当たり約０．０１〜２０ｍｇの用量で投与される、請求項１９に記載の方法。
［２４］
第２の薬剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１９に記載の方法。
［２５］
それを必要とする対象においてＨＥＲ２陽性癌を治療するための、請求項１から１７のいずれかに記載のコンジュゲートまたは請求項１８に記載の医薬組成物の使用。
［２６］
それを必要とする対象においてＨＥＲ２陽性癌を治療するための医薬の製造における、請求項１から１７のいずれかに記載のコンジュゲートまたは請求項１８に記載の医薬組成物の使用。
［２７］
式（Ｉａ）の構造またはその薬学的に許容される塩を有する化合物
Figure 0006877420
 （式中、
Ｒ Ｄ は
Figure 0006877420
 でありかつＲ Ｅ はＨである、またはＲ Ｅ は
Figure 0006877420
 でありかつＲ Ｄ はＨであり、
Ｒ １ は−ＮＨＲ ２ または−ＮＨＣＨＲ ２ Ｒ ３ であり、
Ｒ ２ は−Ｃ ３ 〜Ｃ ６ アルキルまたは−Ｃ ４ 〜Ｃ ６ アルキルであり、
Ｒ ３ はＬ １ ＯＨであり、
Ｌ １ は−（ＣＨ ２ ） ｍ −であり、
Ｌ ２ は−（ＣＨ ２ ） ｎ −、−（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−（ＣＨ ２ ） ｎ Ｘ １ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ ２ ） ｎ −、−（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ 、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ Ｘ １ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ Ｘ １ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ ２ Ｘ ３ Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ ２ Ｘ ３ Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ ２ Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ ２ Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ Ｃ（Ｒ ７ ） ２ −、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ Ｃ（Ｒ ７ ） ２ ＳＳ（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ −、−（ＣＨ ２ ） ｎ Ｘ ２ Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ ＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ） ｔ （ＣＨ ２ ） ｎ −または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ ２ ） ｎ Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ ２ ） ｎ であり、
Ｒ ４ は
Figure 0006877420
 、−ＯＮＨ ２ 、−ＮＨ ２ 、
Figure 0006877420
 、−Ｎ ３ 、
Figure 0006877420
 、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ ２ 、−ＳＨ、−ＳＲ ７ 、−ＯＨ、−ＳＳＲ ６ 、−Ｓ（＝Ｏ） ２ （ＣＨ＝ＣＨ ２ ）、−（ＣＨ ２ ） ２ Ｓ（＝Ｏ） ２ （ＣＨ＝ＣＨ ２ ）、−ＮＨＳ（＝Ｏ） ２ （ＣＨ＝ＣＨ ２ ）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ ２ Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ ２ Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ ２ 、
Figure 0006877420
 、−ＣＯ ２ Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ ２ 、
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ ５ は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ １ は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ ２ は
Figure 0006877420
 であり、
Ｘ ３ は
Figure 0006877420
 であり、
Ｒ ６ は２−ピリジルまたは４−ピリジルであり、
各Ｒ ７ は独立にＨおよびＣ １ 〜Ｃ ６ アルキルから選択され、
各Ｒ ８ は独立にＨ、Ｃ １ 〜Ｃ ６ アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ ９ は独立にＨ、Ｃ １ 〜Ｃ ６ アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ ２ 、−ＯＣＨ ３ 、−ＯＣＨ ２ ＣＨ ３ 、−Ｎ（ＣＨ ３ ） ２ 、−ＣＮ、−ＮＯ ２ 、および−ＯＨから選択され、
各Ｒ １０ は独立にＨ、Ｃ １−６ アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ １−４ アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ １−４ アルキルから選択され、
各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される）。
［２８］
抗体またはその抗原結合フラグメントに連結された請求項２７に記載の化合物を含むコンジュゲート。

Claims (27)

  1. 式（ＩＩ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩
    Figure 0006877420
     （式中、
    Ｒ５０は
    Figure 0006877420
     であり、＊はＡｂへの連結点を示し、
    Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、
    Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
    Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
    Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
    Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
    Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２ＳＳ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
    Ｒ４０は
    Figure 0006877420
     、−Ｓ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−、
    Figure 0006877420
     であり、
    Ｘ１は
    Figure 0006877420
     であり、
    Ｘ２は
    Figure 0006877420
     であり、
    Ｘ３は
    Figure 0006877420
     であり、
    各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
    各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
    各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
    各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
    Ｒ１２はＨ、メチル、またはフェニルであり、
    各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
    各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
    各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
    ｙは１〜１６の整数である）。
  2. Ａｂがトラスツズマブ、ペルツズマブ、マルゲツキシマブ、もしくはＨＴ−１９、またはこれらの位置特異的システイン突然変異体から選択され、前記位置特異的システイン突然変異体が、
    （ａ）抗体重鎖の位置１５２、３６０、および３７５、ならびに
    （ｂ）抗体軽鎖の位置１０７、１５９、および１６５
    の位置（すべての位置はＥＵナンバリングによる）のうちの１つまたは複数においてシステインを含む、請求項１に記載のコンジュゲート。
  3. Ａｂが、
    （ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、
    配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、
    配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、
    配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、
    配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および
    配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）
    を含む抗体、
    （ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、
    配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、
    配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、
    配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、
    配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および
    配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
    を含む抗体、
    （ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体、
    （ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、
    （ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、
    （ｆ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、または
    （ｇ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体
    のいずれかから選択される、請求項１に記載のコンジュゲート。
  4. Ａｂがヒトまたはヒト化抗ＨＥＲ２抗体である、請求項１から３のいずれかに記載のコンジュゲート。
  5. Ａｂが修飾Ｆｃ領域を含む、請求項１から４のいずれかに記載のコンジュゲート。
  6. Ａｂが、
    （ａ）抗体重鎖の位置１５２、３６０、および３７５、ならびに
    （ｂ）抗体軽鎖の位置１０７、１５９、および１６５
    の位置（すべての位置はＥＵナンバリングによる）のうちの１つまたは複数においてシステインを含む、請求項１から５のいずれかに記載のコンジュゲート。
  7. Ａｂが抗体重鎖の位置１５２および３７５（すべての位置はＥＵナンバリングによる）においてシステインを含む、請求項１から６のいずれかに記載のコンジュゲート。
  8. 前記式（ＩＩ）の抗体コンジュゲートが、式（ＩＩａ）または式（ＩＩｂ）の構造を含む、請求項１から７のいずれかに記載のコンジュゲート
    Figure 0006877420
     （式中、
    Ｒ１は−ＮＨＲ２であり、
    Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
    Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、または−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−であり、
    Ｒ４０は
    Figure 0006877420
     であり、
    Ｘ１は
    Figure 0006877420
     であり、Ｘ２は
    Figure 0006877420
     であり、Ｘ３は
    Figure 0006877420
     であり、
    各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され
    各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択され、
    ｙは１〜１６の整数である）。
  9. Ｒ１は−ＮＨＲ２であり、
    Ｒ２は−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
    Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎであり、
    Ｒ４０は
    Figure 0006877420
     であり、
    各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
    ｙは１〜１６の整数である、請求項１から７のいずれかに記載のコンジュゲート。
  10. 前記コンジュゲートが、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって決定される０．８以上の疎水性インデックスを有する、請求項１から９のいずれかに記載のコンジュゲート。
  11. 下記の式のいずれかを含むコンジュゲート
    Figure 0006877420
    Figure 0006877420
    Figure 0006877420
    Figure 0006877420
    Figure 0006877420
    Figure 0006877420
    Figure 0006877420
    Figure 0006877420
    Figure 0006877420
    Figure 0006877420
    Figure 0006877420
     （式中、Ａｂは、ヒトＨＥＲ２へ特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ｙは１〜４の整数である）。
  12. Ａｂがトラスツズマブ、ペルツズマブ、マルゲツキシマブ、もしくはＨＴ−１９、またはこれらの位置特異的システイン突然変異体から選択され、前記位置特異的システイン突然変異体が、
    （ａ）抗体重鎖の位置１５２、３６０、および３７５、ならびに
    （ｂ）抗体軽鎖の位置１０７、１５９、および１６５
    の位置（すべての位置はＥＵナンバリングによる）のうちの１つまたは複数においてシステインを含む、請求項１１に記載のコンジュゲート。
  13. Ａｂが、
    （ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、
    配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、
    配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、
    配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、
    配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および
    配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）
    を含む抗体、
    （ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、
    配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、
    配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、
    配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、
    配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および
    配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３
    を含む抗体、
    （ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体、
    （ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、
    （ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、
    （ｆ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、または
    （ｇ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体
    のいずれかから選択される、請求項１１に記載のコンジュゲート。
  14. Ａｂが配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１１に記載のコンジュゲート。
  15. 前記化合物が抗体重鎖の位置１５２および３７５（すべての位置はＥＵナンバリングによる）においてシステインに連結された、請求項１４に記載のコンジュゲート。
  16. ｙが約３〜４である、請求項１１に記載のコンジュゲート。
  17. 前記コンジュゲートが、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって決定される０．８以上の疎水性インデックスを有する、請求項１１から１６のいずれかに記載のコンジュゲート。
  18. 請求項１から１７のいずれかに記載の１つまたは複数のコンジュゲート、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  19. 対象におけるＨＥＲ２陽性癌を治療するための、請求項１から１７のいずれかに記載のコンジュゲートを含む、医薬組成物。
  20. 前記コンジュゲートが、抗ＨＥＲ２抗体単独と比較したときに、長期のＨＥＲ２陽性癌を抑制することおよび／またはＨＥＲ２陽性癌の再発を低下させることが可能である、請求項１９に記載の医薬組成物。
  21. 前記ＨＥＲ２陽性癌が、胃癌、食道癌、胃食道接合部腺癌、結腸癌、直腸癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸管癌、子宮癌、子宮内膜癌、膀胱癌、尿路癌、膵臓癌、肺癌、前立腺癌、骨肉腫、神経芽細胞腫、膠芽腫、および頭頸部癌から選択される、請求項１９に記載の医薬組成物。
  22. 前記コンジュゲートが、静脈内、腫瘍内、または皮下で前記対象に投与される、請求項１９に記載の医薬組成物。
  23. 前記コンジュゲートが、体重１ｋｇ当たり約０．０１〜２０ｍｇの用量で投与される、請求項１９に記載の医薬組成物。
  24. 第２の薬剤をさらに含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
  25. それを必要とする対象においてＨＥＲ２陽性癌を治療するための医薬の製造における、請求項１から１７のいずれかに記載のコンジュゲートまたは請求項１８に記載の医薬組成物の使用。
  26. 式（Ｉａ）の構造またはその薬学的に許容される塩を有する化合物
    Figure 0006877420
    （式中、
    ＲＤは
    Figure 0006877420
    でありかつＲＥはＨである、またはＲＥは
    Figure 0006877420
    でありかつＲＤはＨであり、
    Ｒ１は−ＮＨＲ２または−ＮＨＣＨＲ２Ｒ３であり、
    Ｒ２は−Ｃ３〜Ｃ６アルキルまたは−Ｃ４〜Ｃ６アルキルであり、
    Ｒ３はＬ１ＯＨであり、
    Ｌ１は−（ＣＨ２）ｍ−であり、
    Ｌ２は−（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎＸ１（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｒ７）２ＳＳ（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＸ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｎＯ）ｔ（ＣＨ２）ｎ−または−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎであり、
    Ｒ４は
    Figure 0006877420
    、−ＯＮＨ２、−ＮＨ２、
    Figure 0006877420
    、−Ｎ３、
    Figure 0006877420
    、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−ＳＨ、−ＳＲ７、−ＯＨ、−ＳＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＳ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
    Figure 0006877420
    、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、
    Figure 0006877420
    であり、
    Ｒ５は
    Figure 0006877420
    であり、
    Ｘ１は
    Figure 0006877420
    であり、
    Ｘ２は
    Figure 0006877420
    であり、
    Ｘ３は
    Figure 0006877420
    であり、
    Ｒ６は２−ピリジルまたは４−ピリジルであり、
    各Ｒ７は独立にＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
    各Ｒ８は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、および−ＯＨから選択され、
    各Ｒ９は独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、および−ＯＨから選択され、
    各Ｒ１０は独立にＨ、Ｃ１−６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルコキシ、および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１−４アルキルから選択され、
    各ｍは独立に１、２、３、および４から選択され、
    各ｎは独立に１、２、３、および４から選択され、
    各ｔは独立に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、および１８から選択される）。
  27. 抗体またはその抗原結合フラグメントに連結された請求項２６に記載の化合物を含むコンジュゲート。

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