JP6718202B2 - 皮膚外用剤 - Google Patents

Description

本発明は、植物抽出物から得られ、皮膚基底膜の周辺の細胞活性、細胞増殖作用を有する成分を配合してなる皮膚外用剤に関する。

近年、皮膚の構造や、そのメカニズムについて様々な研究が行われており、例えば、真皮におけるコラーゲン及びエラスチン、並びに真皮と表皮との間に存在する基底膜などの細胞外マトリックスは、単なる皮膚の構造を保持するだけではなく、それに接着する細胞の活性や機能性維持にも関与していることが、明らかとなってきた。特に、基底膜は、上皮系の細胞と間葉系の組織の間に存在し、上皮細胞の***や間葉系に存在する細胞の機能性維持への影響が大きいと考えられている。また、基底膜に存在し、皮膚の機能維持に関与する因子としてヘパラン硫酸が知られている。このヘパラン硫酸は、動物組織に分布する糖鎖、すなわち、グルコサミノグリカン（D-グルコサミン、D-グルクロン酸、L-イズロン酸を構成糖とする多糖）の一種であり、動物の細胞表面や細胞外マトリックスでは、コアタンパク質に結合したプロテオグリカンとして存在している。このヘパラン硫酸プロテオグリカンとしては、パールカン、アグリン、XVIII型コラーゲン等が知られており、これらは細胞増殖因子（線維芽細胞増殖因子(FGF)１〜７、上皮成長因子(EGF)、血管内皮細胞増殖因子(VEGF)）と結合して基底膜周辺にそれら因子を貯蔵することで、基底膜周辺の細胞を増殖、活性化することも明らかとなっている（特許文献１、非特許文献１，２）。また、ヘパラン硫酸プロテオグリカンは、サイトカイン類（例えば、IL-2,3,4,8, GM-CSF, TNF-α）と結合することで、表皮と真皮間でのサイトカインの移動を制御することも知られている（非特許文献３）。

以上のような知見の下、ヘパラン硫酸の産生を促進して、皮膚のシワや色素沈着の改善等を行う技術（特許文献１）や、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのヘパラン硫酸鎖を分解するヘパラナーゼの活性を阻害する技術（特許文献２，非特許文献３）が提案されている。

特開２０１３−２０３７２５ ＷＯ２００９／１２３２１５ J.Soc.Cosmet.Chem.Jpn．48(1) 35-40(2014) www.nature.com/reviews/molcellbio AUGUST 2005, VOLUME 6, 646-656 千葉科学大学紀要 ５．６９−７６．２０１２

本発明は、上記背景に鑑みてなされたもので、その課題は、生体安全性にすぐれ、かつ皮膚基底膜に存在するヘパラン硫酸プロテオグリカンの合成を促進する成分を配合した皮膚外用剤を提供することを目的とする。

本発明は、皮膚基底膜におけるヘパラン硫酸プロテオグリカンの合成を促進する物質を含む皮膚外用剤である。
本発明において、ヘパラン硫酸プロテオグリカンは、XVIII型コラーゲンであることが好ましい。

本発明によれば、天然物由来で生体安全性にすぐれ、かつ、ヘパラン硫酸プロテオグリカンの合成促進作用に基づいて、皮膚基底膜周辺の細胞を増殖、かつ活性化する効果を有する皮膚外用剤を提供することができる。

以下、本発明の好ましい実施の形態について詳細に説明する。
本発明は、コメ、モモからなる群より選択される１又は２以上の植物の抽出物又はその加水分解物を有効成分とするである。

本発明において、「コメ」とは、イネ科（Poaceae）イネ属（Oryza）の植物から得られるものであって、本発明においては、玄米、発芽玄米、有色素米（黒米、赤米、紫米、緑米等）、又はそれらから糠を除いた精米、発芽米、或いは玄米、発芽玄米、有色素米を精米する過程で得られる赤糠若しくは白糠の使用が可能である。

また、本発明において、「モモ」とは、バラ科(Rosaceae) サクラ属（Prunus）の植物である。本発明において使用可能な部位としては、その全草、果実、花、種子、葉、茎、根等が挙げられる。また、果実を使用する場合は、未成熟のものも使用可能である。

抽出物の調製は、まず、各植物の使用部位を、必要ならば予め水洗して異物を除いた後、そのまま又は乾燥した上、必要に応じて細切又は粉砕し、抽出溶媒と接触させて抽出を行う方法（例えば、浸漬法、向流抽出法など適宜の手段）により調製することができる。また、超臨界抽出法を用いてもよい。さらに、使用部位（果実など）をそのまま圧搾するか、もしくは使用部位を破砕したのち、その破砕物を圧搾することにより調製してもよい。また、使用部位を乾燥したのち粉砕して乾燥粉砕物とするか、あるいは、使用部位、又は場合によっては搾汁液に凍結乾燥等を施して得られる乾燥粉末を溶媒で抽出することによっても調製することができる。

抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノールなどの低級アルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチルなどのエステル類；アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類；エチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類；ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルムなどの炭化水素系溶媒などが挙げられ、それらは単独で又は二種以上混合して用いられる。

本発明においては、水、低級アルコール類又は多価アルコール類などの親水性溶媒が好適である。この親水性溶媒を用いる場合の好ましい例としては、例えば、水、低級アルコール類（特にエタノール）、又は多価アルコール（特に、１，３−ブチレングリコール）の単独使用、或いは、水と低級アルコール類（特にエタノール）との混合溶媒、又は水と多価アルコール類（特に１，３−ブチレングリコール，グリセリン）との混合溶媒の使用等が挙げられるが、なかでも水単独、又は水と１，３−ブチレングリコールの混合溶媒が特に好ましい。

混合溶媒を用いる場合の混合比は、例えば水と１，３−ブチレングリコールとの混合溶媒であれば、容量比（以下同じ）で１：１０〜２０：１、水とエタノールとの混合溶媒であれば、１：１０〜２５：１、水とグリセリンとの混合溶媒であれば１：１０〜２０：１の範囲とすることが好ましい。

また、各植物の使用部位抽出溶媒との重量比は好ましくは１：１〜１：５０の範囲であり、より好ましくは、１：３〜１：３５の範囲である。

抽出物の調製に際して、そのｐＨに特に限定はないが、一般には３〜９の範囲とすることが好ましい。かかる意味で、必要であれば、前記抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ性調整剤、又はクエン酸、塩酸、リン酸、硫酸などの酸性調整剤を配合し、所望のｐＨとなるように調整してもよい。

抽出温度、抽出時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やｐＨによっても異なるが、例えば、水もしくは１，３−ブチレングリコール、又は水と１，３−ブチレングリコールとの混液を溶媒とする浸漬法の場合であれば、抽出温度は一般に０〜９０℃、好ましくは４℃から８０℃の範囲である。抽出時間は、０．５〜３日間、好ましくは、１〜６時間の範囲である。

なお、本発明の抽出処理に先立って、又は抽出処理と並行して、あるいは抽出処理後、必要に応じて加水分解処理を施してもよい。これによって、抽出物をより有効に利用できる可能性がある。加水処理の方法としては、酸処理、アルカリ処理、酵素処理等が挙げられるが、それらの中でも酵素処理が最も好ましい。使用する酵素としては、蛋白分解酵素、澱粉分解酵素、繊維素分解酵素及び脂肪分解酵素から選ばれた１種又は２種以上が挙げられる。

蛋白分解酵素は、動物由来酵素、植物由来酵素、及び微生物由来の酵素のいずれでも良い。例えば、アクチナーゼ類、ペプシンなどのペプシン類、トリプシンなどのトリプシン類、パパイン、キモパパインなどのパパイン類、グリシルグリシンペプチターゼ、カルボキシペプチターゼ、アミノペプチターゼなどのペプチターゼ類およびブロメラインなどがあげられ、これらの１種以上が用いられる。また、澱粉分解酵素としては、グルコアミラーゼ、α-アミラーゼ等が挙げられる。また、繊維素分解酵素としては、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼ等が挙げられる。また、脂肪分解酵素としてはリパーゼ等が挙げられる。使用する酵素としては、いずれかの酵素群から選ばれた１種又は２種以上を用いても、それらの酵素群からそれぞれ選ばれた１種又は２種以上の酵素を組み合わせて用いてもよい。

酵素の添加量は、各植物の使用部位の固形分に対して、合計で０．０１〜１０重量％の範囲とすることが好ましく、より好ましくは０．１〜２．０重量％の範囲である。

上述のように調製した抽出物は、一般にはｐＨを３〜８に調製した上で、これをそのままの状態で皮膚外用剤配合剤として使用しても良く、又減圧濃縮等により所望の濃度として使用しても良い。また、抽出物はスプレードライ法等の常法により乾燥物としても良い。

上述のように調製した抽出物は、皮膚外用剤（化粧品又は医薬部外品等）の配合成分として適用することができる。

例えば、本発明に係る抽出物を含む化粧品又は医薬部外品としては、乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダー、ほほ紅、白粉、洗顔料、ボディシャンプー、毛髪用シャンプー、石けんなどが挙げられ、また、育毛剤、さらには浴剤等も挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。

皮膚外用剤の配合成分としての本発明の抽出物の配合量は、抽出物の固形分として、０．０００１〜１．０重量％（固形分重量％、以下同じ）が好ましい

本発明に係る抽出物を化粧品又は医薬部外品の配合成分として使用する場合には、必須成分の抽出物のほかに、例えば油性成分、界面活性剤（合成系、天然物系）、保湿剤、増粘剤、乳化剤又は乳化助剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料、その他の生理活性成分等を必要に応じて適宜配合することができる。また、本発明に係る抽出物の有効性、特長を損なわない限り、他の生理活性成分と組み合わせて配合することも何ら差し支えない。

ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、ユズ種子油、柑橘類由来の油、植物由来スクワランなどの植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油などの動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリンなどのロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワランなどの炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、ｃｉｓ−１１−エイコセン酸などの脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコールなどの高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）などの合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。

界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩などのアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩などのカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタインなどの両性界面活性剤等を使用することができる。

なお、乳化剤又は乳化助剤としては、酵素処理ステビアなどのステビア誘導体、サポニン又はその誘導体、カゼイン又はその塩（ナトリウム等）、糖と蛋白質の複合体、ショ糖又はそのエステル、ラクトース、大豆由来の水溶性多糖、大豆由来蛋白質と多糖の複合体、ラノリン又はその誘導体、コレステロール、ステビア誘導体（ステビア酵素処理物等）、ケイ酸塩（アルミニウム、マグネシウム等）、炭酸塩（カルシウム、ナトリウム等）サポニン及びその誘導体、レシチン及びその誘導体（水素添加レシチン等）、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀など）等を配合することもできる。

保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体など）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、シラン根（白及）抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。

増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻又は紅藻由来成分；シラン根（白及）抽出物；ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体、アルカリゲネス産生多糖体等の多糖類；キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体；ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。

防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物、大根発酵液等がある。

粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビなど）のパウダー、豆類（大豆、小豆など）のパウダー等がある。

紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。

抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ビタミンＥ及びその誘導体（例えば、ビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等）、シャクヤク抽出物、シラン根（白及）抽出物等がある。

美白剤としては、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、４−メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン（5,5'−ジプロピル−ビフェニル−2,2’−ジオール）、４−ＨＰＢ（ロドデノール、４−(４−ヒドロキシフェニル）−４−ブタノール））、ヒドロキシ安息香酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、α−ヒドロキシ酸、ＡＭＰ（アデノシンモノホスフェイト、アデノシン１リン酸）が挙げられ、これらを単独で配合しても、複数を組み合わせて配合しても良い。

上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレートなどのコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシ被験者どのコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウムなどのアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシ被験者どのアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基など）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステルなどのＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−Ｏ−パルミテートナトリウム、グリセリルアスコルビン酸又はそのアシル化誘導体、ビスグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸グルセリン誘導体が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド）、α−アルブチン（ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド）等が、トラネキサム酸誘導体としては、トラネキサム酸エステル（例えば、トラネキサム酸ラウリルエステル、トラネキサム酸ヘキサデシルエステル、トラネキサム酸セチルエステル又はその塩）、トラネキサム酸のアミド体（例えば、トラネキサム酸メチルアミド）などが挙げられ、レゾルシノール誘導体としては、例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。

生理活性成分としては、美白成分として、例えば、胎盤抽出液、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、シソ抽出物、白芥子抽出物又はその加水分解物、白芥子の発酵物、ダマスクバラ抽出物、シャクヤク抽出物又はその加水分解物、大豆抽出物又はその加水分解物、乳酸菌醗酵米、ハス種子抽出物又はその加水分解物、ハス種子発酵物、党参抽出物、ハトムギ加水分解物、ハトムギ種子発酵物、ローヤルゼリー発酵物、酒粕発酵物、パンダヌス・アマリリフォリウス(Pandanus amaryllifolius Roxb.)抽出物、アルカンジェリシア・フラバ（Arcangelicia flava Merrilli）抽出物、カミツレ抽出物等が上げられ、抗老化成分として、サンゴ草抽出物、イネの葉の抽出物又はその加水分解物、ナス（水ナス、長ナス、賀茂ナス、米ナス等）抽出物又はその加水分解物、カタメンキリンサイ等の海藻の抽出物、アマモ等の海産顕花植物の抽出物、豆乳発酵物、クラゲ水、米醗酵エキス、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸など）、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、アラントイン、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナ抽出物、甘草抽出物、ニンジン抽出物、アロエ抽出物、ミツイシコンブ抽出物、アナアオサ抽出物、ジュアゼイロ（Zizyphus joazeiro)抽出物、キウイ抽出物、ヘチマ抽出物、ムラサキシキブ抽出物等がある。

次に、製造例、処方例及び試験例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下において、部はすべて重量部を、また％はすべて重量％を意味する。

製造例１．コメ抽出物の調製
精白米２５０gに１０００gの０．１％水酸化ナトリウム水溶液を加え、１日間撹拌抽出した後、ろ布で粗ろ過して残った米の残渣を除去した。その抽出液を希塩酸で中和した後, 液量に対して, 蛋白分解酵素（アクチナーゼＡＳ０．０２％、パパイン０．０２％）を加え, ４０℃で２時間酵素分解処理を行い、その後８０℃で１時間加熱して酵素を失活させ、室温まで冷却した。こうして得られた酵素処理液を精製ろ過し、淡褐色透明の米加水分解物溶液８１０gを得た（固形分濃度：１．７１％）。

製造例２．モモの抽出物の調製
モモ（Prunus persica Batsch）の未成熟果実６０ｇに精製水６００ｇを混合し、静置した状態で、８０℃下において２時間抽出を行い、抽出物溶液４５５．７ｇを得た。その後、得られた抽出物溶液をろ過し、さらに、ろ過した溶液に対して１％の活性炭（和光純薬株式会社製）を添加して活性炭処理を１時間行い、淡褐色のモモの未成熟果実の抽出物溶液４４６．１ｇを得た（pH４．１、固形分濃度３．６１）。

処方例１．化粧水
［Ａ成分］ 部
オリーブ油 １．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルアルコール ５．０
ブチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］ 部
製造例１の抽出物溶液 ５．０
エタノール ５．０
グリセリン ５．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して化粧水を得た。

処方例２．化粧水
処方例１のＢ成分に含まれる製造例１の抽出物溶液に代えて、製造例２の抽出物溶液５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。

処方例３．乳液
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ６．０
ヘキサラン ４．０
ホホバ油 １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート ２．０
大豆レシチン １．５
［Ｂ成分］ 部
製造例２の抽出物溶液 ３．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド ２．０
水酸化カリウム ０．５
グリセリン ３．０
１，３−ブチレングリコール ２．０
カルボキシメチルセルロース ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。

処方例４．乳液
処方例３のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてアルブチン３．０部を用いるほかは処方例１０と同様にして乳液を得た。

処方例５．乳液
処方例３のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてトラネキサム酸２．０部を用いるほかは処方例１０と同様にして乳液を得た。

処方例６．乳液
処方例３のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてニコチン酸アミド３．０部を用いるほかは処方例１０と同様にして乳液を得た。

処方例７．乳液
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ６．０
ヘキサラン ４．０
ホホバ油 １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート ２．０
大豆レシチン １．５
［Ｂ成分］ 部
製造例２の抽出物溶液 ５．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド ２．０
水酸化カリウム ０．５
アルブチン ３．０
グリセリン ３．０
１，３−ブチレングリコール ２．０
カルボキシメチルセルロース ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
精製水 全量が１００部となる量

処方例８．ローション
［成分］ 部
製造例１の抽出物溶液 １０．０
エタノール １０．０
グリセリン ３．０
１、３−ブチレングリコール ２．０
メチルパラベン ０．２
クエン酸 ０．１
クエン酸ナトリウム ０．３
カルボキシビニルポリマー ０．１
香料 適量
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が１００部となる量
上記の成分を混合してローションを得た。

処方例９．エッセンス
［成分］ 部
エタノール ２．０
グリセリン ５．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
メチルパラベン ０．１
ヒアルロン酸 ０．１
製造例２の抽出物溶液 ５．０
クエン酸 ０．３
クエン酸ナトリウム ０．６
精製水 全量が１００部となる量
精製水にヒアルロン酸を溶解させた後、残りの原料を順次加えて攪拌溶解させ、透明のエッセンスを得た。

実施例１０．リキッドファンデーション
［Ａ成分］ 部
ステアリン酸 ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール ２．０
セトステアリルアルコール ０．２
液状ラノリン ２．０
流動パラフィン ３．０
ミリスチン酸イソプロピル ８．５
プロピルパラベン ０．０５
［Ｂ成分］ 部
製造例１の抽出物溶液 ５．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．２
ベントナイト ０．５
プロピレングリコール ４．０
トリエタノールアミン １．１
メチルパラベン ０．１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］ 部
酸化チタン ８．０
タルク ４．０
着色顔料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ加温した後混合攪拌した。これを再加温し、上記のＣ成分を添加して型に流し込み、室温になるまで攪拌してリキッドファンデーションを得た。

処方例１１．ボディシャンプー
［Ａ成分］ 部
Ｎ−ラウロイルメチルアラニンナトリウム ２５．０
ヤシ油脂肪酸カリウム液（４０％） ２６．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ３．０
メチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］ 部
製造例２の抽出物溶液 ５．０
１，３−ブチレングリコール ２．０
精製水 全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してボディシャンプーを得た。

処方例１２．育毛料
［成分］ 部
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１
モノニトログアヤコールナトリウム ０．０２
塩酸ピリドキシン ０．０３
ｌ−メントール ０．８
タマサキツヅラフジ根エキス ０．３
褐藻エキス ０．３
オタネニンジンエキス ０．３
ゲンチアナエキス ２．０
製造例２の抽出物溶液 ３．５
トリメチルグリシン ０．５
乳酸 ０．２
１，３−ブチレングリコール １０．０
フェノキシエタノール ０．２
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ０．４
Ｌ−アルギニン 適量
エタノール ２０
精製水 全量が１００部となる量
上記の成分を十分攪拌混合して育毛料を得た。

処方例１３．ヘアシャンプー
［Ａ成分］ 部
Ｎ−ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム １０．０
ポリオキシエチレン（３）アルキルエーテル硫酸ナトリウム ２０．０
ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン １０．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ４．０
メチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
クエン酸 ０．１
製造例２の抽出物溶液 ２．０
１，３−ブチレングリコール ２．０
精製水 全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してヘアシャンプーを得た。

実施例１４．ヘアコンディショナー
［Ａ成分］ 部
ポリオキシエチレン（１０）硬化ヒマシ油 １．０
塩化ジステアリルジメチルアンモニウム １．５
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム ２．０
２−エチルヘキサン酸グリセリル １．０
セタノール ３．２
ステアリルアルコール １．０
メチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］ 部
製造例２の抽出物溶液 ２．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
精製水 全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してヘアリンスを得た。

試験例１．基底膜におけるヘパラン硫酸プロテオグリカン及び細胞増殖因子の確認試験
培養皮膚三次元モデル（EFT-400；MatTek Corporation）の培地にヘパラナーゼ阻害剤（2-[4-[[3-(4-Bromophenyl)-1-oxo-2-propenyl]amino]-3-fluorophenyl]-5-benzoxazoleacetic acid ; Tocris Bioscience）を１０μｍｏｌ／Ｌ添加して培養を行った。表皮側から本発明に係る製造例１，２の抽出物（試料溶液）を添加し、２週間培養を行った。なお、試料溶液は、その全量対して溶液としての終濃度が２．０％となるように調製した。また、試料溶液に代えて精製水を添加した区を設定し、コントロール区とした。培養終了後、３次元モデルをその表面積が約１ｃｍ^２になるようにカットし、ＯＣＴコンパウンド（Miles社製）を用いて凍結包埋を行った。その後厚さ５μｍの連続皮膚切片を調製した。この連続皮膚切片を、０．２ＭのＨＣｌで１０分間処理した後、ＰＢＳで２回洗浄を行った。さらにプロテアーゼ（sigma F-4658;125μg/ml in H₂O）で３７℃、１０分間処理した後、ＰＢＳで２回洗浄を行った。その後、市販の一次抗体（anti-パールカン抗体、anti-XVIII型コラーゲン抗体、anti-EGF受容体抗体、anti-EGFリン酸化受容体抗体）を室温で２時間反応させた。各種一次抗体をＰＢＳで２回洗浄して除去した後、各種一次抗体に対する二次抗体（sigma；anti rabbit IgG biotin conjugated, PBSで1:300希釈）を室温で３０分間反応させた。その後ＰＢＳで３回洗浄し、ABC kit（Vector Laboratories, Inc）を用いて染色を行った。

試験例１の結果を、使用した抗体ごとに説明する。
まず、一次抗体に、anti-パールカン抗体を用いた時の結果について述べる。染色反応の結果、基底膜においてパールカンの発現が認められたが、コントロール区と試料溶液の添加区との間で、その染色度合いに差はほとんど認められなかった。

次に、一次抗体に、anti-XVIII型コラーゲン抗体を用いた時の結果について述べる。染色反応の結果、基底膜において強い染色反応が観察された。反応の強さは、コントロール区に比べて試料溶液の添加区の方が強く、すなわち、本発明に係る製造例１，２の抽出物によって基底膜のXVIII型コラーゲンの合成促進効果が認められた。

次に、一次抗体にanti-EGF受容体抗体を用いた時の結果について述べる。EGF受容体は、表皮全体と線維芽細胞に染色反応が認められた。しかし、コントロール区と試料溶液の添加区で、その染色度合いに差はほとんど認められなかった。

次に、一次抗体にanti-EGFリン酸化受容体抗体を用いて、活性化したEGF受容体を検出した時の結果について述べる。本抗体を用いると、真皮において基底膜近傍の線維芽細胞でEGF受容体の活性化が認められた。なお、EGFリン酸化抗体は、EGF受容体にリガンドであるEGFが結合し、活性化した受容体を検出するものであることから、本試験系により、XVIII型コラーゲンと活性化したEGF受容体の相関が認められた。

上記試験例１の培養皮膚三次元モデルは、コラーゲンと線維芽細胞からなる真皮と、その上に表皮細胞を重層してなる表皮、さらに空気曝露することで角層を形成するモデルである。この培養皮膚三次元モデルを用いた試験例１の結果、本発明に係る製造例１，２の抽出物を表皮側から添加することによって、基底膜のXVIII型コラーゲンの反応が強くなること、すなわち、XVIII型コラーゲンの合成促進効果が確認された。また、それに伴うEGF受容体の活性化も観察された。さらに、XVIII型コラーゲンは、EGFだけでなく、FGF、PDGF、VGEF等の細胞増殖因子とも結合することから（非特許文献２）、基底膜周辺へこれらの因子を貯蔵することも示唆される。

以上のことから、本発明に係る製造例１，２の抽出物は、基底膜に存在するXVIII型コラーゲンの合成を促進することによって、基底膜成分を補い、細胞増殖因子（EGF、FGF、PDGF、VGEF等）を基底膜周辺へ貯蔵することができる。その結果、基底膜周辺の細胞の増殖、活性化を促し、真皮の線維芽細胞の活性化や表皮のターンオーバーの正常化、これに伴いシワ、肌荒れの改善等を達成できることが示唆される。

Claims (1)

1. バラ科(Rosaceae) サクラ属（Prunus）に属するモモの未成熟果実の抽出物を有効成分とするXVIII型コラーゲン合成促進剤。