JP5930507B2 - ヒアルロン酸産生促進剤 - Google Patents
ヒアルロン酸産生促進剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5930507B2 JP5930507B2 JP2011124791A JP2011124791A JP5930507B2 JP 5930507 B2 JP5930507 B2 JP 5930507B2 JP 2011124791 A JP2011124791 A JP 2011124791A JP 2011124791 A JP2011124791 A JP 2011124791A JP 5930507 B2 JP5930507 B2 JP 5930507B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- taurine
- human
- cells
- gene expression
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims description 63
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims description 62
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims description 62
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 37
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 106
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 claims description 53
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 40
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 33
- 101710128038 Hyaluronan synthase Proteins 0.000 claims description 28
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 12
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 9
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 108090000320 Hyaluronan Synthases Proteins 0.000 claims description 3
- 102000003918 Hyaluronan Synthases Human genes 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 44
- 101710197056 Hyaluronan synthase 2 Proteins 0.000 description 34
- 102100040206 Hyaluronan synthase 2 Human genes 0.000 description 29
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 17
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 15
- 102000018866 Hyaluronan Receptors Human genes 0.000 description 12
- 108010013214 Hyaluronan Receptors Proteins 0.000 description 12
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 101001066129 Homo sapiens Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 102000047486 human GAPDH Human genes 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 8
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 7
- 230000009471 action Effects 0.000 description 7
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 210000002437 synoviocyte Anatomy 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 6
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 6
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 6
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 6
- -1 inhalants Substances 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000008407 joint function Effects 0.000 description 5
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000008591 skin barrier function Effects 0.000 description 4
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101001037187 Homo sapiens Hyaluronan synthase 2 Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 108010029483 alpha 1 Chain Collagen Type I Proteins 0.000 description 3
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 3
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 235000021067 refined food Nutrition 0.000 description 3
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 2
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 2
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000004125 Interleukin-1alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010082786 Interleukin-1alpha Proteins 0.000 description 2
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 2
- 244000294411 Mirabilis expansa Species 0.000 description 2
- 235000015429 Mirabilis expansa Nutrition 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 2
- 102000049894 human HAS2 Human genes 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000013536 miso Nutrition 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 2
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 208000036487 Arthropathies Diseases 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 208000003947 Knee Osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 238000003287 bathing Methods 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 235000021438 curry Nutrition 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 235000015071 dressings Nutrition 0.000 description 1
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000019985 fermented beverage Nutrition 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 239000007888 film coating Substances 0.000 description 1
- 238000009501 film coating Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 235000020510 functional beverage Nutrition 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 1
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000021056 liquid food Nutrition 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000001050 lubricating effect Effects 0.000 description 1
- 235000013310 margarine Nutrition 0.000 description 1
- 239000008268 mayonnaise Substances 0.000 description 1
- 235000010746 mayonnaise Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 235000020124 milk-based beverage Nutrition 0.000 description 1
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 235000021110 pickles Nutrition 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000011505 plaster Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- 210000002374 sebum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000002453 shampoo Substances 0.000 description 1
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036620 skin dryness Effects 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 235000014214 soft drink Nutrition 0.000 description 1
- 235000021055 solid food Nutrition 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 235000015961 tonic Nutrition 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000716 tonics Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
本発明は、タウリンを有効成分とする、皮膚バリアー機能あるいは関節機能を維持および調節するための組成物に関する。
ヒアルロン酸は分子量が107Daにも及ぶ直鎖状のグリコサミノグリカンで、皮膚、血管、関節、眼球硝子体などに広く分布し、その高い水和能から、生体内で細胞間の水分保持や潤滑・緩衝作用を担っている。皮膚のヒアルロン酸は加齢により減少し、皮膚の乾燥、弾性の低下、シワの発生の原因となる。関節では滑膜細胞で産生されるヒアルロン酸が軟骨表面を覆い、関節機能の円滑な作動に役立っているが、変形性膝関節症や関節リウマチなどでは、関節液中のヒアルロン酸量が減少し、関節の機能異常が起こる。
これまで皮膚のしわや関節炎など、ヒアルロン酸の減少に伴う疾患に対して、ヒアルロン酸の外用や経口投与、関節内注射として直接投与する治療方法が取られてきた。しかし、高分子のヒアルロン酸はほとんど経皮吸収されず、消化管では分解されてしまうため、十分な効果は得られない。また、関節内注射は医師の処方が必要であり、日常的に使用できる手法ではない。
ヒアルロン酸産生を増加させる薬剤としてインターロイキン-1（IL-1）（非特許文献１）やインスリン様成長因子-1（IGF-1）（非特許文献２）などのサイトカインが報告されているが、いずれも医薬品や化粧品として簡便に利用できるものではない。そのため、安価で安全性が高く、生体内でヒアルロン酸産生を促進する薬剤の開発が望まれてきた。
Postlethwaite AE et al. (1989) J Clin Invest 83:629-636
Honda A et al. (1989) Biochim Biophys Acta 1014:305-312
本発明は、皮膚バリアー機能や関節機能の維持や調節に有効なヒアルロン酸産生を促進させる素材を提供することを課題とする。
本発明者らはヒトの皮膚を構成する皮膚線維芽細胞と表皮細胞の細胞外マトリックス代謝の観点から、タウリンの作用を検討したところ、タウリンは両細胞においてヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）遺伝子の発現増加に起因するヒアルロン酸の産生促進作用を有することを見出した。タウリンはＩ型コラーゲンαＩのmRNA発現には影響を与えなかったことから、タウリンはヒアルロン酸産生を特異的に促進する可能性が示唆された。男性ホルモンは細胞外マトリックス代謝に影響を与えることが知られているが、ヒト皮膚線維芽細胞においてヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の発現は、男性ホルモンである5α-ジヒドロテストステロン（5α-DHT）により低下した。タウリンはこのHAS-2遺伝子発現の低下を濃度依存的に回復させることから、ヒト皮膚においてヒアルロン酸産生促進因子として機能することが示唆された。
さらに本発明者らは、ヒト関節滑膜細胞の細胞外マトリックス代謝に対するタウリンの作用を検討したところ、皮膚線維芽細胞および表皮細胞と同様、タウリンがヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）遺伝子の発現増加に起因して、ヒアルロン酸の産生促進作用を有することを見出した。
以上の知見から、本発明者らは、タウリンは皮膚や関節のヒアルロン酸産生を促進させることにより、皮膚バリアー機能や関節機能の維持・調節を担う生理活性物質として機能し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
したがって、本発明はタウリンを有効成分とする、ヒアルロン酸の産生を促進するための組成物を提供する。また、本発明は、タウリンを有効成分とする、ヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現を促進するための組成物を提供する。さらに、本発明は、タウリンを有効成分とする、男性ホルモンにより低下したヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現を回復させるための組成物を提供する。
本発明は、好ましい態様において、皮膚外用剤である、上記組成物を提供する。特に好ましい態様において、皮膚外用剤は、医薬組成物または化粧品である。
また、本発明は、他の好ましい態様において、ヒアルロン酸の産生を促進するために用いられる旨の表示を付した、上記組成物を提供する。
タウリンを有効成分とする本発明の組成物は、皮膚細胞や関節細胞におけるヒアルロン酸の産生を促進する作用を有する。本発明の組成物におけるヒアルロン酸産生を促進する作用は、ヒアルロン酸合成酵素であるHAS-2遺伝子の発現促進を通じて発揮することができ、しかも、本発明の組成物は、男性ホルモンである5α-DHTの作用により低下したHAS-2遺伝子の発現を回復させることもできる。したがって、本発明の組成物は、皮膚の水分保持、皮膚の弾力性維持、皮膚老化に伴うシワの発生予防、変形性関節症や関節炎の治療または予防において有用である。
本発明は、タウリンを有効成分とする、ヒアルロン酸の産生を促進するための組成物を提供する。また、本発明は、タウリンを有効成分とする、ヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現を促進するための組成物を提供する。さらに、本発明は、タウリンを有効成分とする、男性ホルモンにより低下したヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現を回復させるための組成物を提供する。なお、ヒトHAS-2は、Accession No. NM_005328.2として登録されている
本発明の組成物は、医薬組成物、化粧品、飲食品、あるいは研究目的（例えば、インビトロやインビボでの実験）に用いられる試薬の形態であり得る。本発明の組成物は、ヒアルロン酸の産生を促進する作用を有するため、例えば、皮膚のヒアルロン酸の産生を促進して、しわや肌荒れを予防若しくは改善するために投与もしくは摂取される医薬組成物や飲食品として、また、塗布などされる化粧品として好適に用いることができる。また、関節のヒアルロン酸の産生を促進して、関節炎、関節痛、変形性関節症、関節リウマチなどの関節障害や関節軟骨損傷を予防、改善、若しくは治療するために投与もしくは摂取される医薬組成物や飲食品として好適に用いることができる。
本発明の組成物は、医薬組成物、化粧品、飲食品、あるいは研究目的（例えば、インビトロやインビボでの実験）に用いられる試薬の形態であり得る。本発明の組成物は、ヒアルロン酸の産生を促進する作用を有するため、例えば、皮膚のヒアルロン酸の産生を促進して、しわや肌荒れを予防若しくは改善するために投与もしくは摂取される医薬組成物や飲食品として、また、塗布などされる化粧品として好適に用いることができる。また、関節のヒアルロン酸の産生を促進して、関節炎、関節痛、変形性関節症、関節リウマチなどの関節障害や関節軟骨損傷を予防、改善、若しくは治療するために投与もしくは摂取される医薬組成物や飲食品として好適に用いることができる。
さらに、本発明の組成物は、実験材料としての細胞や動物に適用して、ヒアルロン酸の産生を促進したりするための試薬としても好適に用いることができる。
本発明の組成物は、公知の製剤学的方法により製剤化することができる。例えば、塗布剤、軟膏剤、硬膏剤、パップ剤、経皮吸収型製剤、ローション剤、吸引剤、エアゾール剤、液剤、ゲル剤、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、フィルムコーティング剤、ペレット剤、トローチ剤、舌下剤、咀嚼剤、バッカル剤、ペースト剤、シロップ剤、懸濁剤、エリキシル剤、乳剤、注射剤、坐剤などとして、非経口的または経口的に使用することができる。
これら製剤化においては、タウリンは、医薬品、化粧品、あるいは飲食品として許容される媒体や担体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、溶剤、基剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、芳香剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤、希釈剤、等張化剤、増量剤、崩壊剤、緩衝剤、コーティング剤、滑沢剤、着色剤、甘味剤、粘稠剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤あるいはその他の添加剤と、その利用目的に応じて適宜選択して、組み合わせることができる。
本発明の組成物が皮膚外用剤の場合には、例えば、塗布剤、軟膏剤、硬膏剤、パップ剤、経皮吸収型製剤、ローション剤、吸引剤、エアゾール剤、液剤、ゲル剤などとして提供することができる。皮膚外用剤の製品としては、例えば、皮脂の過剰産生やヒアルロン酸の減少に起因する症状や疾患の予防、改善、若しくは治療のための、医薬組成物や、ローション、クリーム、乳液、パック、ヘアトニック、シャンプー、リンス、石鹸、入浴剤等の化粧品（いわゆる薬用化粧品などの医薬部外品を含む）等が挙げられる。
本発明の組成物を飲食品として用いる場合、当該飲食品は、例えば、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、病者用食品、あるいは食品添加物、であり得る。飲食品の具体例としては、ドリンク類、スープ類、乳飲料、清涼飲料水、茶飲料、アルコール飲料、ゼリー状飲料、機能性飲料等の液状食品；食用油、ドレッシング、マヨネーズ、マーガリンなどの油分を含む製品；飯類、麺類、パン類等の炭水化物含有食品；ハム、ソーセージ等の畜産加工食品；かまぼこ、干物、塩辛等の水産加工食品；漬物等の野菜加工食品；ゼリー、ヨーグルト等の半固形状食品；みそ、発酵飲料等の発酵食品；洋菓子類、和菓子類、キャンディー類、ガム類、グミ、冷菓、氷菓等の各種菓子類；カレー、あんかけ、中華スープ等のレトルト製品；インスタントスープ、インスタントみそ汁等のインスタント食品や電子レンジ対応食品等が挙げられる。さらには、粉末、穎粒、錠剤、カプセル剤、液状、ペースト状またはゼリー状に調製された健康飲食品も挙げられる。本発明における飲食品の製造は、当該技術分野に公知の製造技術により実施することができる。
本発明の組成物を生体に適用する場合、その適用量は、年齢、体重、症状、健康状態、組成物の種類（医薬品、化粧品、飲食品など）などに応じて、適宜選択される。本発明の組成物におけるタウリンの有効適用量は、通常、成人１日当たり100mg〜6000mgであり、好ましくは500mg〜3000mgである。
本発明は、このように、本発明の組成物を対象に投与もしくは摂取させることを特徴とする、対象におけるヒアルロン酸の産生を促進する方法をも提供するものである。また、本発明の組成物を対象に投与することを特徴とする、対象におけるヒアルロン酸の産生の減少に起因する疾患の予防又は治療の方法をも提供するものである。
本発明の組成物の製品（医薬品、化粧品、飲食品、試薬）またはその説明書は、ヒアルロン酸の産生を促進するために用いられる旨の表示、ヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現を促進するために用いられる旨の表示、男性ホルモンにより低下したヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現を回復させるために用いられる旨の表示を付したものであり得る。ここで「製品または説明書に表示を付した」とは、製品の本体、容器、包装などに表示を付したこと、あるいは製品の情報を開示する説明書、添付文書、宣伝物、その他の印刷物などに表示を付したことを意味する。また、これら表示においては、ヒアルロン酸の産生の減少に起因する疾患の予防又は治療のために用いられることに関する情報を含むことができる。
以下、実施例及び比較例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
[実施例１]ヒト線維芽培養細胞のヒアルロン酸産生に対するタウリンの作用
ヒト線維芽細胞（理化学研究所バイオリソースセンター）を100mmディッシュ（AGCテクノグラス）にて、10%仔ウシ血清（SAFCバイオサイエンス）を含むダルベッコ改変イーグル培地（Dulbecco’s modified Eagle’s medium：DMEM）にて培養した。ディッシュ当たりの細胞占有率が90％以上に達した時点で、0.25%トリプシンおよび0.02%EDTAを含むリン酸緩衝液を用いて細胞を剥離し、48ウェルマルチプレートまたは60mmディッシュ（AGCテクノグラス）にそれぞれ1x104細胞/ウェルまたは3x104細胞/ディッシュの細胞数で播種した。ウェルまたはディッシュ当たりの細胞占有率が90%以上に達した時点で、滅菌蒸留水に溶解したタウリン（最終濃度6.25〜50mM）、またはタウリンと5α-ジヒドロテストステロン（5α-DHT）（最終濃度20μM）を培養液に添加し、24時間培養した。
ヒト線維芽細胞（理化学研究所バイオリソースセンター）を100mmディッシュ（AGCテクノグラス）にて、10%仔ウシ血清（SAFCバイオサイエンス）を含むダルベッコ改変イーグル培地（Dulbecco’s modified Eagle’s medium：DMEM）にて培養した。ディッシュ当たりの細胞占有率が90％以上に達した時点で、0.25%トリプシンおよび0.02%EDTAを含むリン酸緩衝液を用いて細胞を剥離し、48ウェルマルチプレートまたは60mmディッシュ（AGCテクノグラス）にそれぞれ1x104細胞/ウェルまたは3x104細胞/ディッシュの細胞数で播種した。ウェルまたはディッシュ当たりの細胞占有率が90%以上に達した時点で、滅菌蒸留水に溶解したタウリン（最終濃度6.25〜50mM）、またはタウリンと5α-ジヒドロテストステロン（5α-DHT）（最終濃度20μM）を培養液に添加し、24時間培養した。
細胞からの全RNAの抽出は、細胞にアイソジェン（ニッポンジーン）を添加して細胞を溶解することにより実施した。細胞溶解液にクロロホルムを添加して混和し、遠心分離（10,000回転/分にて10分）後、水層を回収し同用量のイソプロパノールを添加して混和した。遠心分離（10,000回転/分にて10分）後、上清を除去し、沈殿したRNAを回収した。RNAには75%エタノールを添加して混和後、上清を除去し、RNAを風乾させた。抽出した全RNAは、核酸分解酵素を含有しない滅菌蒸留水に溶解し、260nmにおける吸光度を測定することにより、RNA量を定量した。
培養液中に分泌されたヒアルロン酸は、ヒアルロン酸ELISAキット（生化学バイオビジネス）により定量した。すなわち、培養液中のヒアルロン酸を、キットのマイクロプレート上に固相化されたヒアルロン酸結合タンパク質（HABP）に結合させた後、ペルオキシダーゼ結合HABPを添加して反応させ、次いでtetramethylbenzidineおよび過酸化水素を加え、450nmにおける吸光度をマイクロプレートリーダーにて測定した。ヒアルロン酸量は標準ヒアルロン酸溶液を用いて同時に作成した検量線より算出した。
細胞におけるヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現はリアルタイムPCR（RT-PCR）にて測定した。逆転写反応はQuantiTectR Reverse Transcription Kit（QIAGEN）を用い、添付の操作法に従い、一本鎖cDNAを合成した。リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（PCR）は、一本鎖cDNAを鋳型とし、ヒトヒアルロン酸合成酵素2（HAS-2）、ヒトI型コラーゲンα1およびヒトグリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素（GAPDH）に特異的なプライマーを用いて実施した。反応終了後、GAPDHを内標準遺伝子として各遺伝子発現量を標準化した。その後、未処理群に対するタウリン処理群の相対的な遺伝子発現量を算出した。なお、PCRに使用したプライマーは以下の通りである：
ヒトHAS-2(Accession No. NM_005328.2)センスプライマー：5’-GACAGGCATCTCACGAACCG-3’／配列番号：１
ヒトHAS-2(Accession No. NM_005328.2)アンチセンスプライマー：5’-CAACGGGTCTGCTGGTTTAGC-3’／配列番号：２
ヒトコラーゲン-Iα1(Accession No. NM_000088.3)センスプライマー：5’-CTCCAGGGCTCCAACGAGAT-3’／配列番号：３
ヒトコラーゲン-Iα1(Accession No. NM_000088.3)アンチセンスプライマー：5’-CAGCCATCGACAGTGACG-3’／配列番号：４
ヒトGAPDH(Accession No. NM_002046.3)センスプライマー：5’-CATCCCTGCCTCTACTGGCG-3’／配列番号：５
ヒトGAPDH(Accession No. NM_002046.3)アンチセンスプライマー：5’-AGCTTCCCGTTCAGCTCAGG-3’／配列番号：６
その結果、ヒト線維芽培養細胞においてタウリンは濃度依存的にヒアルロン酸産生量を増加させ（図１）、同時にヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現も増加させた（図２）。一方、タウリンはヒト線維芽培養細胞のＩ型コラーゲンα1遺伝子発現には影響を与えなかった（図３）。また、ヒト線維芽培養細胞のヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現は男性ホルモンである5α-ジヒドロテストステロン（5α-DHT）により有意に低下したが、タウリンは濃度依存的にHAS-2遺伝子発現を回復させた（図４）。
ヒトHAS-2(Accession No. NM_005328.2)センスプライマー：5’-GACAGGCATCTCACGAACCG-3’／配列番号：１
ヒトHAS-2(Accession No. NM_005328.2)アンチセンスプライマー：5’-CAACGGGTCTGCTGGTTTAGC-3’／配列番号：２
ヒトコラーゲン-Iα1(Accession No. NM_000088.3)センスプライマー：5’-CTCCAGGGCTCCAACGAGAT-3’／配列番号：３
ヒトコラーゲン-Iα1(Accession No. NM_000088.3)アンチセンスプライマー：5’-CAGCCATCGACAGTGACG-3’／配列番号：４
ヒトGAPDH(Accession No. NM_002046.3)センスプライマー：5’-CATCCCTGCCTCTACTGGCG-3’／配列番号：５
ヒトGAPDH(Accession No. NM_002046.3)アンチセンスプライマー：5’-AGCTTCCCGTTCAGCTCAGG-3’／配列番号：６
その結果、ヒト線維芽培養細胞においてタウリンは濃度依存的にヒアルロン酸産生量を増加させ（図１）、同時にヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現も増加させた（図２）。一方、タウリンはヒト線維芽培養細胞のＩ型コラーゲンα1遺伝子発現には影響を与えなかった（図３）。また、ヒト線維芽培養細胞のヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現は男性ホルモンである5α-ジヒドロテストステロン（5α-DHT）により有意に低下したが、タウリンは濃度依存的にHAS-2遺伝子発現を回復させた（図４）。
[実施例２]ヒト表皮角化細胞のヒアルロン酸産生に対するタウリンの作用
ヒト表皮角化細胞（コージンバイオ）を60mmディッシュ（AGCテクノグラス）にて、正常ヒト表皮角化細胞用無血清培地（コージンバイオ）を用いて培養した。ディッシュ当たりの細胞占有率が80％以上に達した時点で、EDTAトリプシン液（コージンバイオ）、D-PBS(-)（コージンバイオ）およびトリプシンインヒビター液（コージンバイオ）を用いて細胞を剥離し、35mmディッシュ（AGCテクノグラス）に1x105細胞/ディッシュで播種した。ディッシュ当たりの細胞占有率が80%以上に達した時点で、タウリン（最終濃度が6.25〜50mM）を含む無血清基本培地にて24時間培養した。
ヒト表皮角化細胞（コージンバイオ）を60mmディッシュ（AGCテクノグラス）にて、正常ヒト表皮角化細胞用無血清培地（コージンバイオ）を用いて培養した。ディッシュ当たりの細胞占有率が80％以上に達した時点で、EDTAトリプシン液（コージンバイオ）、D-PBS(-)（コージンバイオ）およびトリプシンインヒビター液（コージンバイオ）を用いて細胞を剥離し、35mmディッシュ（AGCテクノグラス）に1x105細胞/ディッシュで播種した。ディッシュ当たりの細胞占有率が80%以上に達した時点で、タウリン（最終濃度が6.25〜50mM）を含む無血清基本培地にて24時間培養した。
細胞からの全RNAの抽出は、細胞にアイソジェン（ニッポンジーン）を添加して細胞を溶解することにより実施した。細胞溶解液にクロロホルムを添加して混和し、遠心分離（10,000回転/分にて10分）後、水層を回収し同用量のイソプロパノールを添加して混和した。遠心分離（10,000回転/分にて10分）後、上清を除去し、沈殿したRNAを回収した。RNAには75%エタノールを添加して混和後、上清を除去しRNAを風乾させた。抽出した全RNAは、核酸分解酵素を含有しない滅菌蒸留水に溶解し、260nmにおける吸光度を測定することにより、RNA量を定量した。
培養液中に分泌されたヒアルロン酸は、ヒアルロン酸ELISAキット（生化学バイオビジネス）により定量した。すなわち、培養液中のヒアルロン酸を、キットのマイクロプレート上に固相化されたヒアルロン酸結合タンパク質（HABP）に結合させた後、ペルオキシダーゼ結合HABPを添加して反応させ、次いでtetramethylbenzidineおよび過酸化水素を加え、450nmにおける吸光度をマイクロプレートリーダーにて測定した。ヒアルロン酸量は標準ヒアルロン酸溶液を用いて同時に作成した検量線より算出した。
細胞におけるヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現は、リアルタイムPCR（RT-PCR）にて測定した。逆転写反応においては、QuantiTectR Reverse Transcription Kit（QIAGEN）を用い、添付の操作法に従い、一本鎖cDNAを合成した。リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（PCR）は、一本鎖cDNAを鋳型とし、ヒトヒアルロン酸合成酵素2（HAS-2）およびヒトグリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素（GAPDH）に特異的なプライマーを用いて実施した。反応終了後、GAPDHを内標準遺伝子として各遺伝子発現量を標準化した。その後、未処理群に対するタウリン処理群の相対的な遺伝子発現量を算出した。なお、PCRに使用したプライマーは以下の通りである：
ヒトHAS-2(Accession No. NM_005328.2)センスプライマー：5’-GACAGGCATCTCACGAACCG-3’／配列番号：７
ヒトHAS-2(Accession No. NM_005328.2)アンチセンスプライマー：5’-CAACGGGTCTGCTGGTTTAGC-3’／配列番号：８
ヒトGAPDH(Accession No. NM_002046.3)センスプライマー：5’-CATCCCTGCCTCTACTGGCG-3’／配列番号：９
ヒトGAPDH(Accession No. NM_002046.3)アンチセンスプライマー：5’-AGCTTCCCGTTCAGCTCAGG-3’／配列番号：１０
その結果、ヒト表皮角化細胞において、タウリンはヒアルロン酸産生量を増加させ（図５）、同時にヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現も増加させた（図６）。
ヒトHAS-2(Accession No. NM_005328.2)センスプライマー：5’-GACAGGCATCTCACGAACCG-3’／配列番号：７
ヒトHAS-2(Accession No. NM_005328.2)アンチセンスプライマー：5’-CAACGGGTCTGCTGGTTTAGC-3’／配列番号：８
ヒトGAPDH(Accession No. NM_002046.3)センスプライマー：5’-CATCCCTGCCTCTACTGGCG-3’／配列番号：９
ヒトGAPDH(Accession No. NM_002046.3)アンチセンスプライマー：5’-AGCTTCCCGTTCAGCTCAGG-3’／配列番号：１０
その結果、ヒト表皮角化細胞において、タウリンはヒアルロン酸産生量を増加させ（図５）、同時にヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現も増加させた（図６）。
[実施例３]ヒト関節滑膜細胞のヒアルロン酸産生に対するタウリンの作用
ヒト関節滑膜細胞（大日本製薬）を100mmディッシュ（AGCテクノグラス）にて、10%仔ウシ血清（SAFCバイオサイエンス）含有ダルベッコ改変イーグル培地（Dulbecco’s modified Eagle’s medium：DMEM）にて培養した。ディッシュ当たりの細胞占有率が90％以上に達した時点で、0.25%トリプシンおよび0.02%EDTAを含むリン酸緩衝液を用いて細胞を剥離し、48ウエルマルチプレートまたは60mmディッシュ（AGCテクノグラス）にそれぞれ1x104細胞/ディッシュまたは3x104細胞/ディッシュの細胞数で播種した。ウエルまたはディッシュ当たりの細胞占有率が90%以上に達した時点で、滅菌蒸留水に溶解したタウリンを最終濃度が6.25〜50mMになるように培養液に添加し、24時間培養した。
ヒト関節滑膜細胞（大日本製薬）を100mmディッシュ（AGCテクノグラス）にて、10%仔ウシ血清（SAFCバイオサイエンス）含有ダルベッコ改変イーグル培地（Dulbecco’s modified Eagle’s medium：DMEM）にて培養した。ディッシュ当たりの細胞占有率が90％以上に達した時点で、0.25%トリプシンおよび0.02%EDTAを含むリン酸緩衝液を用いて細胞を剥離し、48ウエルマルチプレートまたは60mmディッシュ（AGCテクノグラス）にそれぞれ1x104細胞/ディッシュまたは3x104細胞/ディッシュの細胞数で播種した。ウエルまたはディッシュ当たりの細胞占有率が90%以上に達した時点で、滅菌蒸留水に溶解したタウリンを最終濃度が6.25〜50mMになるように培養液に添加し、24時間培養した。
細胞からの全RNAの抽出は、細胞にアイソジェン（ニッポンジーン）を添加して細胞を溶解することにより実施した。細胞溶解液にクロロホルムを添加して混和し、遠心分離（10,000回転/分にて10分）後、水層を回収し同用量のイソプロパノールを添加して混和した。遠心分離（10,000回転/分にて10分）後、上清を除去し、沈殿したRNAを回収した。RNAには75%エタノールを添加して混和後、上清を除去しRNAを風乾させた。抽出した全RNAは、核酸分解酵素を含有しない滅菌蒸留水に溶解し、260nmにおける吸光度を測定することにより、RNA量を定量した。
培養液中に分泌されたヒアルロン酸は、ヒアルロン酸ELISAキット（生化学バイオビジネス）により定量した。すなわち、培養液中のヒアルロン酸を、キットのマイクロプレート上に固相化されたヒアルロン酸結合タンパク質（HABP）に結合させた後、ペルオキシダーゼ結合HABPを添加して反応させ、次いでtetramethylbenzidineおよび過酸化水素を加え、450nmにおける吸光度をマイクロプレートリーダーにて測定した。ヒアルロン酸量は標準ヒアルロン酸溶液を用いて同時に作成した検量線より算出した。
細胞におけるヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現は、リアルタイムPCR（RT-PCR）にて測定した。逆転写反応においては、QuantiTectR Reverse Transcription Kit（QIAGEN）を用い、添付の操作法に従い、一本鎖cDNAを合成した。リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（PCR）は、一本鎖cDNAを鋳型とし、ヒトヒアルロン酸合成酵素2（HAS-2）およびヒトグリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素（GAPDH）に特異的なプライマーを用いて実施した。反応終了後、GAPDHを内標準遺伝子として各遺伝子発現量を標準化した。その後、未処理群に対するタウリン処理群の相対的な遺伝子発現量を算出した。なお、PCRに使用したプライマーは以下の通りである：
ヒトHAS-2(Accession No. NM_005328.2)センスプライマー：5’-GACAGGCATCTCACGAACCG-3’／配列番号：１１
ヒトHAS-2(Accession No. NM_005328.2)アンチセンスプライマー：5’-CAACGGGTCTGCTGGTTTAGC-3’／配列番号：１２
ヒトGAPDH(Accession No. NM_002046.3)センスプライマー：5’-CATCCCTGCCTCTACTGGCG-3’／配列番号：１３
ヒトGAPDH(Accession No. NM_002046.3)アンチセンスプライマー：5’-AGCTTCCCGTTCAGCTCAGG-3’／配列番号：１４
その結果、ヒト関節滑膜細胞において、タウリンはヒアルロン酸産生量を増加させ（図７）、同時にヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現も増加させた（図８）。
ヒトHAS-2(Accession No. NM_005328.2)センスプライマー：5’-GACAGGCATCTCACGAACCG-3’／配列番号：１１
ヒトHAS-2(Accession No. NM_005328.2)アンチセンスプライマー：5’-CAACGGGTCTGCTGGTTTAGC-3’／配列番号：１２
ヒトGAPDH(Accession No. NM_002046.3)センスプライマー：5’-CATCCCTGCCTCTACTGGCG-3’／配列番号：１３
ヒトGAPDH(Accession No. NM_002046.3)アンチセンスプライマー：5’-AGCTTCCCGTTCAGCTCAGG-3’／配列番号：１４
その結果、ヒト関節滑膜細胞において、タウリンはヒアルロン酸産生量を増加させ（図７）、同時にヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現も増加させた（図８）。
[実施例４]マウス皮膚ヒアルロン酸量に対するタウリン投与の作用
5週齢のHR-1マウス（日本エスエルシー）を順化後、8週齢から24週齢まで、タウリンを3%溶解した飲水を与えた。対照群には精製水のみを与えた。投与終了後、マウスの背部皮膚を摘出し、組織切片を作製した。次いで組織切片とビオチン標識ヒアルロン酸結合性タンパク質（HABP）（2ng/mlリン酸緩衝液）（生化学バイオビジネス）を反応させた後、リン酸緩衝液にて1000倍希釈したストレプトアビジン-FITC（fluorescein isothiocyanate）（シグマアルドリッチ）を添加し、ヒアルロン酸に結合したHABPを蛍光染色した。組織切片を5から8の計測視野に分け、それぞれの視野における表皮と真皮の単位面積（μm2）当たりの蛍光強度をLumina Vision（三谷商事）により測定した。真皮の蛍光強度に対する表皮の蛍光強度の比を算出して表皮におけるヒアルロン酸量とし、タウリン投与群と非投与群で比較した。
5週齢のHR-1マウス（日本エスエルシー）を順化後、8週齢から24週齢まで、タウリンを3%溶解した飲水を与えた。対照群には精製水のみを与えた。投与終了後、マウスの背部皮膚を摘出し、組織切片を作製した。次いで組織切片とビオチン標識ヒアルロン酸結合性タンパク質（HABP）（2ng/mlリン酸緩衝液）（生化学バイオビジネス）を反応させた後、リン酸緩衝液にて1000倍希釈したストレプトアビジン-FITC（fluorescein isothiocyanate）（シグマアルドリッチ）を添加し、ヒアルロン酸に結合したHABPを蛍光染色した。組織切片を5から8の計測視野に分け、それぞれの視野における表皮と真皮の単位面積（μm2）当たりの蛍光強度をLumina Vision（三谷商事）により測定した。真皮の蛍光強度に対する表皮の蛍光強度の比を算出して表皮におけるヒアルロン酸量とし、タウリン投与群と非投与群で比較した。
その結果、タウリンを投与マウスの表皮において、タウリン非投与対照マウスの表皮と比較し、有意なヒアルロン酸の増加が認められた（図９）。
本発明のタウリンを有効成分とする組成物は、皮膚線維芽細胞や関節滑膜細胞におけるヒアルロン酸の産生を促進する作用を有するため、特に、ヒアルロン酸の産生の減少に起因する症状や疾患（例えば、しわ、肌荒れ、関節障害、関節軟骨損傷）に適用する医薬品や化粧品として有用である。従って、本発明は、医療や美容などの分野において大きく貢献しうるものである。また、本発明の組成物は、皮膚バリアー機能や関節機能の維持や調節におけるタウリンの作用機序を解明するなどの研究開発目的のための試薬としても有用である。
配列番号１〜１４＜２２３＞ 人工的に合成されたプライマーの配列
Claims (5)
- タウリンを有効成分とし、ヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現が低下しているヒトに対して適用される、ヒアルロン酸の産生を促進するための経口用組成物
- タウリンを有効成分とし、ヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現が低下しているヒトに対して適用される、ヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現を促進するための経口用組成物
- タウリンを有効成分とし、男性ホルモンによりヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現が低下しているヒトに対して適用される、男性ホルモンにより低下したヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現を回復させるための経口用組成物
- 医薬組成物である、請求項１〜３のいずれかに記載の経口用組成物
- ヒアルロン酸の産生に用いられる旨の表示、ヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現を促進するために用いられる旨の表示、または男性ホルモンにより低下したヒアルロン酸合成酵素（HAS-2）の遺伝子発現を回復させるために用いられる旨の表示を付した、請求項１〜４のいずれかに記載の経口用組成物
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2011124791A JP5930507B2 (ja) | 2011-06-03 | 2011-06-03 | ヒアルロン酸産生促進剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2011124791A JP5930507B2 (ja) | 2011-06-03 | 2011-06-03 | ヒアルロン酸産生促進剤 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2015231391A Division JP6168485B2 (ja) | 2015-11-27 | 2015-11-27 | ヒアルロン酸産生促進剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2012250934A JP2012250934A (ja) | 2012-12-20 |
| JP5930507B2 true JP5930507B2 (ja) | 2016-06-08 |
Family
ID=47524089
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2011124791A Active JP5930507B2 (ja) | 2011-06-03 | 2011-06-03 | ヒアルロン酸産生促進剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP5930507B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7220457B2 (ja) * | 2018-12-14 | 2023-02-10 | 丸善製薬株式会社 | ヒアルロン酸産生促進剤、関節機能改善剤、及び経口用組成物 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05310548A (ja) * | 1992-05-13 | 1993-11-22 | Taisho Pharmaceut Co Ltd | 皮膚外用剤 |
| JPH05310549A (ja) * | 1992-05-13 | 1993-11-22 | Taisho Pharmaceut Co Ltd | 皮膚外用剤 |
| GB0113348D0 (en) * | 2001-06-01 | 2001-07-25 | Mars Uk Ltd | Skin diet |
| JP5507802B2 (ja) * | 2006-08-10 | 2014-05-28 | 花王株式会社 | 筋肉老化抑制剤 |
-
2011
- 2011-06-03 JP JP2011124791A patent/JP5930507B2/ja active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2012250934A (ja) | 2012-12-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7390755B2 (ja) | 皮膚化粧料、頭髪化粧料および飲食品 | |
| JP2010024200A (ja) | 生体コラーゲン合成促進剤並びに生体コラーゲン合成促進用飲食品、化粧品及び医薬部外品 | |
| WO2007049400A1 (ja) | コラーゲンおよび／またはヒアルロン酸産生促進用組成物 | |
| JP6969067B2 (ja) | 抗炎症剤、抗老化剤および美白剤 | |
| JP2017202990A (ja) | 化粧料および飲食品組成物 | |
| US20230374112A1 (en) | Bioactive Collagen Peptides, Method Of Production Thereof, And Use Thereof | |
| JP2015096476A (ja) | コラーゲン産生促進用組成物、コラーゲン吸収促進用組成物、抗肥満用組成物 | |
| JP7013238B2 (ja) | 筋脂肪化抑制用組成物 | |
| JP6482930B2 (ja) | 皮膚化粧料および飲食品 | |
| JP2024026241A (ja) | エルゴチオネイン、アスコルビン酸２－グルコシド、アスコルビン酸、およびそれらの組み合わせの筋分化促進作用 | |
| JP7379152B2 (ja) | 筋線維化抑制用組成物 | |
| JP5930507B2 (ja) | ヒアルロン酸産生促進剤 | |
| JP6168485B2 (ja) | ヒアルロン酸産生促進剤 | |
| JP2015000038A (ja) | ヒアルロン酸産生促進剤 | |
| JP5980519B2 (ja) | Ａｍｐｋ活性化剤 | |
| JP2004083416A (ja) | 皮膚外用剤並びに飲食品 | |
| JP2015096475A (ja) | コラーゲン産生促進用組成物 | |
| TWI576117B (zh) | 玻尿酸產生促進劑 | |
| WO2020170388A1 (ja) | Ｉ型コラーゲン又はエラスチンの産生促進剤 | |
| JP6944240B2 (ja) | Ｇａｂａを有効成分とする生体組織の線維性構造タンパク質の含有量を維持または増加するための剤 | |
| JP2015229654A (ja) | ヒアルロン酸産生促進剤 | |
| JP2008115163A (ja) | アディポネクチン産生増強・促進剤 | |
| JP6375100B2 (ja) | 抗老化剤、美白剤、皮膚化粧料および飲食品 | |
| CN115919994A (zh) | 亮氨酸衍生物、包含其的组合物及其用途 | |
| CN115023150B (zh) | 硫酸软骨素合成促进用组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20140514 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20140514 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140530 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150413 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150612 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150831 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151127 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20151207 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160203 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160219 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160411 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5930507 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160424 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |