JP5812387B2 - 植物のtan遺伝子およびその用途 - Google Patents
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Inbred Line)、143個体)について、SSRマーカーを用いたラフマッピングの結果から、tan遺伝子が染色体6番に座乗していることを解明した。次いで、F3部分へテロ集団個体(1142個体)について、SSRマーカーSB3751からSB3764の間で組換えのある個体(63個体)を選抜し、圃場にてtan形質の調査を行い、tan遺伝子の存在領域を、約150kbpの領域に絞り込んだ。さらに、ソルガム品種BTx623の塩基配列情報に基づいて見出したCAPSマーカー、SNPマーカーを用いたマッピングを行い、tan遺伝子の存在領域を最終的に約29kbpの領域に絞り込んだ(図3)。
<1> 植物における3-デオキシアントシアニジン合成を抑制するタンパク質をコードする、下記(a)〜(c)のいずれかに記載のDNA。
(a)配列番号:6に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:4または5に記載の塩基配列のコード領域を含むDNA
(c)配列番号:6に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
<2> 植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有するタンパク質をコードする、下記(a)〜(c)のいずれかに記載のDNA。
(a)配列番号:6に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:4または5に記載の塩基配列のコード領域を含むDNA
(c)配列番号:6に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
<3> <1>または<2>に記載のDNAを含むベクター。
<4> <1>または<2>に記載のDNAが導入された植物細胞。
<5> <4>に記載の細胞を含む植物体。
<6> <5>に記載の植物体の子孫またはクローンである、植物体。
<7> <5>または<6>に記載の植物体の繁殖材料。
<8> 植物における下記(a)〜(c)のいずれかに記載のDNAの発現または機能を抑制することを特徴とする、植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する方法。
(a)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:1または2に記載の塩基配列のコード領域を含み、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(c)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
<9> 植物に<2>に記載のDNAを導入し、該植物におけるtan対立遺伝子の双方を当該DNAにする工程を含む、植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する方法。
<10> 植物に下記(a)〜(c)のいずれかに記載のRNAをコードするDNAを導入する工程を含む、植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する方法。
(a)植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有し、かつ下記(i)〜(iii)のいずれかに記載のDNAの転写産物と相補的な二重鎖RNA
(b)植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有し、かつ下記(i)〜(iii)のいずれかに記載のDNAの転写産物と相補的なアンチセンスRNA
(c)植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有し、かつ下記(i)〜(iii)のいずれかに記載のDNAの転写産物を特異的に開裂するリボザイム活性を有するRNA
(i)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(ii)配列番号:1または2に記載の塩基配列のコード領域を含み、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(iii)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
<11> <2>に記載のDNA、または該DNAが挿入されたベクターを含み、植物におけるtan対立遺伝子の双方を前記DNAとすることによって、病原性糸状菌に対する抵抗性を付与するための薬剤。
<12> 下記(a)〜(c)のいずれかに記載のRNAをコードするDNA、または該DNAが挿入されたベクターを含む、病原性糸状菌に対する抵抗性を付与するための薬剤。
(a)植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有し、かつ下記(i)〜(iii)のいずれかに記載のDNAの転写産物と相補的な二重鎖RNA
(b)植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有し、かつ下記(i)〜(iii)のいずれかに記載のDNAの転写産物と相補的なアンチセンスRNA
(c)植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有し、かつ下記(i)〜(iii)のいずれかに記載のDNAの転写産物を特異的に開裂するリボザイム活性を有するRNA
(i)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(ii)配列番号:1または2に記載の塩基配列のコード領域を含み、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(iii)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
<13> 植物における病原性糸状菌に対する感受性または抵抗性を判定する方法であって、被検植物におけるtan遺伝子の塩基配列を解析し、当該塩基配列が下記(a)〜(c)のいずれかに記載のDNAの塩基配列である場合には、被検植物が病原性糸状菌に対する感受性を有する蓋然性が高いと判定し、請求項2に記載のDNAの塩基配列である場合には、被検植物が病原性糸状菌に対する抵抗性を有する蓋然性が高いと判定する方法。
(a)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:1または2に記載の塩基配列のコード領域を含み、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(c)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
<14> 植物における病原性糸状菌に対する感受性または抵抗性を判定する方法であって、被検植物における下記(a)〜(c)のいずれかに記載のDNAまたは<2>に記載のDNAの発現を検出することを特徴とする方法。
(a)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:1または2に記載の塩基配列のコード領域を含み、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(c)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
<15> 病原性糸状菌に対する抵抗性の植物を育種する方法であって、
(a)病原性糸状菌に対する抵抗性の植物品種と任意の植物品種とを交配させる工程、
(b)工程(a)における交配により得られた個体における病原性糸状菌に対する感受性または抵抗性を、<13>または<14>に記載の方法により判定する工程、および
(c)病原性糸状菌に対する抵抗性を有すると判定された品種を選抜する工程、を含む方法。
<16> <15>に記載の方法により育種された植物体。
<17> <16>に記載の植物体の子孫またはクローンである、植物体。
<18> <16>または<17>に記載の植物体の繁殖材料。
turcica、炭疽病をもたらすColletotrichum graminicolaが挙げられる。
本発明は、植物における3-デオキシアントシアニジン合成を誘導するタンパク質をコードするDNA(以下、「合成誘導型DNA」とも称する)を提供する。また、本発明は、植物に、病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA(以下、「感受性型DNA」とも称する)を提供する。本発明者らにより同定された、ソルガムの病虫害を受けた部位が紫色を示す品種であり、すす紋病等に対する感受性品種である那系MS-3B由来のtan cDNAの塩基配列を配列番号:1に、tanゲノムDNAの塩基配列を配列番号:2に、これらDNAがコードするタンパク質のアミノ酸配列を配列番号:3に示す。本発明の合成誘導型DNA又は感受性型DNA(以下、「感受性型DNA等」とも称する)の1つの態様は、配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA(典型的には、配列番号:1または2に記載の塩基配列のコード領域を含むDNA)である。
ACCESSION No. EU956420、EU966048が挙げられる。
また、本発明は、植物の感受性型tan遺伝子(感受性型DNA等)の発現を抑制するために用いるDNAを提供する。これらのDNAの導入により、植物における3-デオキシアントシアニジン合成を抑制し、植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与することが可能である。この意味において、植物の感受性型tan遺伝子の発現を抑制するために用いるDNAは、植物における3-デオキシアントシアニジン合成を抑制するための薬剤であり、植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与するための薬剤である。ここで「tan遺伝子の発現の抑制」には、遺伝子の転写の抑制およびタンパク質への翻訳の抑制の双方が含まれる。また、「発現の抑制」には、発現の完全な停止のみならず発現の減少も含まれる。
III系のような短いRNAを発現し得るプロモーターを連結させたアンチセンスRNA発現カセットとセンスRNA発現カセットをそれぞれ構築し、これらカセットを同方向にあるいは逆方向にベクターに挿入する構成である。
本発明は、また、上記本発明のDNA(合成誘導型DNA、合成抑制型DNA、感受性型DNA、抵抗性型DNA、感受性型tan遺伝子の発現を抑制するためのDNA)を含むベクター、上記本発明のDNAまたはそれを含むベクターが導入された植物細胞(例えば、ソルガム細胞、イネ細胞、トウモロコシ細胞)、該植物細胞を含む植物体(例えば、ソルガム、イネ、トウモロコシ)、該植物体の子孫またはクローンである植物体、および、これら植物体の繁殖材料を提供する。
本発明は、また、植物において、本発明の感受性型DNA(感受性型tan遺伝子)の発現または機能を抑制することを特徴とする、病原性糸状菌に対する抵抗性が付与された植物の作出方法を提供する。本発明において、植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を「付与する」とは、病原性糸状菌に対する抵抗性を全く有しない品種に病原性糸状菌に対する抵抗性を持たせることのみならず、既に、一定の病原性糸状菌に対する抵抗性を有している品種における、病原性糸状菌に対する抵抗性を、さらに増大させることをも含む意である。
本発明は、また、植物における病原性糸状菌に対する感受性または抵抗性を判定する方法を提供する。本発明の判定方法の一つの態様は、植物におけるtan遺伝子の塩基配列を解析し、対照の塩基配列と比較することを特徴とする方法である。
本発明は、また、病原性糸状菌に対する抵抗性の植物を育種する方法を提供する。本発明の育種方法は、(a)病原性糸状菌に対する抵抗性の植物品種と任意の植物品種とを交配させる工程、(b)交配により得られた個体における病原性糸状菌に対する感受性または抵抗性を、上記本発明の判定方法により判定する工程、および(c)病原性糸状菌に対する抵抗性を有すると判定された品種を選抜する工程、を含む。
<ソルガムのtan遺伝子の存在領域の絞り込み>
ソルガムで病障害により紫色を示す品種
那系MS-3Bとtan形質の品種Greenleafとの大規模な交配集団(F3-F5)において、ソルガムのSSRマーカーおよび挿入・欠失マーカーを利用して、tan遺伝子のマッピングを行った(図1、図2、図3)。なお、マッピングに用いた実験方法等については下記の通りである。
tan形質の検定は、温室内ではパンチによる葉色の変化により行った。また、圃場で前記品種のソルガムを栽培することによって自然発生的に発生する病斑や障害、虫害による葉色の変化により検定を行った。また、那系MS-3Bは種子の穎の色が濃紫色であり、Greenleafは赤褐色であることから、この点も指標としてtan形質の検定を行った。
ソルガムの葉からのDNAの抽出は一般的なc-TAB法や破砕による抽出法を用いた。また、多型マーカーを含む塩基配列を増幅するためのPCRにおいては、PCR試薬(GoTaq(登録商標)Green Master Mix)を5μl、蒸留水を4.4μl、DNA(20ng/μl)を0.1μl、プライマー(10p)を0.5μl含む、計10μlの反応液を調製した。そして、1反応当たり、そのうち9.5μlを使用し、94度で2分、「94度で1分→55℃で1分→72度で2分」を35サイクル、72度で10分の条件でPCR反応を行った。また、後述のマッピングに用いたCAPSマーカー及びSNPマーカーを解析するためのプライマーの情報を表1に示す。なお、表1に記載の「SB25792」は解析対象のSSRマーカーの名称であり、「Sb06g029510.1 」及び「Sb06g029530.1」は解析対象のCAPSマーカー及びSNPマーカーが各々座乗している遺伝子の名称である。
後述のラフマッピングには、Yonemaru J,ら、DNA Res、2009年、16巻、187〜193ページの記載のSSRマーカーを用いた。また、前述の通り、表1に示したプライマーを用いて、CAPSマーカー及びSNPマーカーの解析を行った。
<Greenleaf及び那系MS-3B間のtan遺伝子の比較>
次に、本発明者らは、前記絞り込んだ領域における遺伝子のアノテーションをデーターベースで調査したところ、この領域はトウモロコシのロイコアントシアニジンレダクターゼに相同性を持つ遺伝子がクラスターを作っていることが判明した。すなわち、この絞り込んだ領域内にはトウモロコシのロイコアントシアニジンレダクターゼに相同性を持つ4つの候補遺伝子が存在していた。そして、この4つの遺伝子の発現をRT-PCRにて調査したところ、候補遺伝子のうち、特定の候補遺伝子(以下、「tan遺伝子」と称する)の発現パターンのみが、ソルガムが病障害により紫色を呈するときに遺伝子の発現が増加することを見出した(図4)。なお、残りの遺伝子の発現はRT-PCRでは確認されなかった。このことから、この遺伝子が着色の原因遺伝子であると推測された。なお、RT-PCRは、Kikuchi R.ら、Plant Physiol、2009年、149巻、1341〜1353ページ、及びShimada S.ら、Plant J.、2009年、58巻、668〜681ページの記載に沿って行った。また、RT-PCRに用いたプライマー(配列番号:13〜24に記載の塩基配列からなるプライマー)の配列は表2に示す。
<Greenleaf及び那系MS-3Bの葉におけるアントシアニンの生成誘導についての分析>
那系MS-3B及びGreenleafの葉を5mm幅に細断し、水寒天の上で26℃でインキュベートした。そして、インキュベート開始時、インキュベート開始してから2日目、4日目、6日目に前記葉を各々回収した。次いで、得られた葉(生重量0.01g)から、1mlのメタノールにて4℃で24時間かけて抽出液を得た。そして、該抽出液の吸光度(波長493nm)を測定した。得られた結果を図6に示す。
<Greenleaf、那系MS-3B及びBTx623の葉における、3-デオキシアントシアニジン生成についての分析>
病斑を示したBTx623、那系MS-3B及びGreenleafの葉1gから各々0.01%塩酸メタノールにて色素を抽出した。得られた色素を2N塩酸にて100℃、1時間かけ、加水分解した後、酢酸エチルにて脂質を除去し、イソアミルアルコールで色素を抽出した。抽出した色素を風乾させた後、メタノールに溶解して、TLCシートにスポッティングした。なお、薄層クラマトグラフィー(TLC)の展開は、酢酸/水/塩酸 溶媒(酢酸:水:塩=30:10:3 v/v(体積比))を用いて行った。また、TLCシートはMerck社製、TLCcelluloseFを用い、アントシアニン(アピゲニニジン、ルテオリニジン)の標準品は、Fluka社製のものを用いた。得られた結果を図7に示す。
<外的障害を受けたGreenleafの葉に蓄積される色素の同定>
実施例4において示唆された、外的障害を受けたGreenleafの葉において生成される色素の同定を試みた。すなわち、前記同様に、カットしたGreenleafの葉を水寒天の上でインキュベートした。そして、3日間のインキュベーションにおいて誘導された色素をメタノールで抽出し、HPLC-MSを用いて分析した。得られた結果を図8に示す。
<tan形質と病原性糸状菌等に対する抵抗性との相関についての検証>
前述の通り、変異型のtan遺伝子を有するtan形質と病原性糸状菌等に対する抵抗性との相関を確認するため、QTL解析を行った。すなわち、那系MS-3BとGreenleafとを交配して得られたF5のRILのうち、染色体6番が部分ヘテロとなっているRIL 112を選択し、各々の植物個体から前記同様、DNAを抽出し、SSRマーカーを用いてこの領域のタイピングを行った。
<223> 人工的に合成されたプライマーの塩基配列
Claims (18)
- 植物における3-デオキシアントシアニジン合成を抑制するタンパク質をコードする、下記(a)〜(c)のいずれかに記載のDNA。
(a)配列番号:6に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:4または5に記載の塩基配列のコード領域を含むDNA
(c)配列番号:6に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA - 植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有するタンパク質をコードする、下記(a)〜(c)のいずれかに記載のDNA。
(a)配列番号:6に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:4または5に記載の塩基配列のコード領域を含むDNA
(c)配列番号:6に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするDNA - 請求項1または2に記載のDNAを含むベクター。
- 請求項1または2に記載のDNAが導入された植物細胞。
- 請求項4に記載の細胞を含む植物体。
- 請求項5に記載の植物体の子孫またはクローンである、植物体。
- 請求項5または6に記載の植物体の繁殖材料。
- 植物における下記(a)〜(c)のいずれかに記載のDNAの発現または機能を抑制することを特徴とする、植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する方法。
(a)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:1または2に記載の塩基配列のコード領域を含み、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(c)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA - 植物に請求項2に記載のDNAを導入し、該植物におけるtan対立遺伝子の双方を当該DNAにする工程を含む、植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する方法。
- 植物に下記(a)〜(c)のいずれかに記載のRNAをコードするDNAを導入する工程を含む、植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する方法。
(a)植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有し、かつ下記(i)〜(iii)のいずれかに記載のDNAの転写産物と相補的な二重鎖RNA
(b)植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有し、かつ下記(i)〜(iii)のいずれかに記載のDNAの転写産物と相補的なアンチセンスRNA
(c)植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有し、かつ下記(i)〜(iii)のいずれかに記載のDNAの転写産物を特異的に開裂するリボザイム活性を有するRNA
(i)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(ii)配列番号:1または2に記載の塩基配列のコード領域を含み、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(iii)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA - 請求項2に記載のDNA、または該DNAが挿入されたベクターを含み、植物におけるtan対立遺伝子の双方を前記DNAとすることによって、病原性糸状菌に対する抵抗性を付与するための薬剤。
- 下記(a)〜(c)のいずれかに記載のRNAをコードするDNA、または該DNAが挿入されたベクターを含む、病原性糸状菌に対する抵抗性を付与するための薬剤。
(a)植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有し、かつ下記(i)〜(iii)のいずれかに記載のDNAの転写産物と相補的な二重鎖RNA
(b)植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有し、かつ下記(i)〜(iii)のいずれかに記載のDNAの転写産物と相補的なアンチセンスRNA
(c)植物に病原性糸状菌に対する抵抗性を付与する活性を有し、かつ下記(i)〜(iii)のいずれかに記載のDNAの転写産物を特異的に開裂するリボザイム活性を有するRNA
(i)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(ii)配列番号:1または2に記載の塩基配列のコード領域を含み、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(iii)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA - 植物における病原性糸状菌に対する感受性または抵抗性を判定する方法であって、被検植物におけるtan遺伝子の塩基配列を解析し、当該塩基配列が下記(a)〜(c)のいずれかに記載のDNAの塩基配列である場合には、被検植物が病原性糸状菌に対する感受性を有する蓋然性が高いと判定し、請求項2に記載のDNAの塩基配列である場合には、被検植物が病原性糸状菌に対する抵抗性を有する蓋然性が高いと判定する方法。
(a)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:1または2に記載の塩基配列のコード領域を含み、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(c)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA - 植物における病原性糸状菌に対する感受性または抵抗性を判定する方法であって、被検植物における下記(a)〜(c)のいずれかに記載のDNAまたは請求項2に記載のDNAの発現を検出することを特徴とする方法。
(a)配列番号:3に記載のアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(b)配列番号:1または2に記載の塩基配列のコード領域を含み、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA
(c)配列番号:3に記載のアミノ酸配列において1〜10のアミノ酸が置換、欠失、付加、および/または挿入されたアミノ酸配列からなり、植物に病原性糸状菌に対する感受性を付与する活性を有するタンパク質をコードするDNA - 病原性糸状菌に対する抵抗性の植物を育種する方法であって、
(a)病原性糸状菌に対する抵抗性の植物品種と任意の植物品種とを交配させる工程、
(b)工程(a)における交配により得られた個体における病原性糸状菌に対する感受性または抵抗性を、請求項13または14に記載の方法により判定する工程、および
(c)病原性糸状菌に対する抵抗性を有すると判定された品種を選抜する工程、を含む方法。 - 請求項15に記載の方法により育種された植物体。
- 請求項16に記載の植物体の子孫またはクローンである、植物体。
- 請求項16または17に記載の植物体の繁殖材料。
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