JP5331127B2 - 榛の木抽出物を含有する抗ウイルス組成物 - Google Patents
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Description
本発明の他の目的は、前記方法によって製造された榛の木の樹皮または幹抽出物を含むインフルエンザウイルス感染の予防、または改善用食品組成物を提供することである。
1−1:抽出溶媒及び温度毎の抽出物の製造
ギョンドン市場(ソウル所在)で購入した韓国産榛の木の樹皮を常温で24時間乾燥させて細切及び破砕した。前記細切及び破砕させた榛の木の切片1kgに95%エタノール10リットルを加えて、各40℃、60℃及び80℃で8時間還流抽出するか、水10リットルを加えて、100℃で4時間還流抽出してから、真空ろ過した後、上澄液を回収して、榛の木の有用性分を溶出した。前記溶出された成分を真空で24時間乾燥させて榛の木の粉末100gを得た。これを99.9%のDMSO(dimethyl sulfoxide)溶液に20mg/mLになるよう溶解して、下記実験に使った。
ギョンドン市場で購入した韓国産榛の木の樹皮、幹及び中国延辺市場で購入した中国産榛の木の樹皮を常温で24時間乾燥させて細切及び破砕した。前記細切及び破砕させた榛の木の切片1kgに各80%、95%エタノール10リットルを加えて、40℃で還流抽出してから、真空ろ過した後、上澄液を回収して、真空の有用性分を溶出した。前記溶出された成分を真空で24時間乾燥させて、100gの榛の木の粉末を取得し、これを99.9%のDMSO(dimethyl sulfoxide)溶液に20mg/mLになるよう溶解して下記実験に使った。
2−1:KBNP−0028の製造
実験に使った鳥インフルエンザウイルスは、2000年韓国内で分離したA/chicken/Korea/SNU0028/2000(H9N2)ウイルスをニワトリ胚で継代してクローニングした、増殖性の優れたKBNP−0028(韓国特許出願番号2006−0026591)を使った。即ち、SNU0028[A/chicken/Korea/SNU0028/00(H9N2);国立獣医科学検疫院分離申告、2005年5月9日]は、斃死及び産卵低下を示す肉用種鶏から分離したH9N2亜型の低病原性鳥インフルエンザウイルスで、前記ウイルスは2000年1月28日韓国全羅北道に所在する肉用種鶏農場から分離した。その分離方法は、感染鶏の腎臓と器官試料を乳剤にし燐酸緩衝溶液に浮遊して、直径0.45μmのろ過紙にろ過した後、各試料をSPF発育卵(Sunrise Co., NY)3個の尿膜腔(allantoic cavity)に接種してから、37℃で培養した後、尿膜液(allantoic fluid)を得た。前記尿膜液20μLとSPF発育卵(Sunrise Co., NY)を孵化させた鶏から抽出した0.1%鶏赤血球20μLをガラス平板に滴下後、混合して、平板血球凝集検査を行った。
10〜11日齢のSPF種卵(Sunrise Co., NY)の卵殻を70%エタノールで洗浄した後、ニワトリ胚と全ての体液を除去した。卵殻の内面に付いた絨毛尿膜が落ちないように横約8mm×縦約8mmの大きさで切って、24ウェル培養容器に1個ずつ入れた。培養培地は199培地(GIBCO-BRL, NY, USA)とF10培地(GIBCO-BRL, NY, USA)を1:1で混合した後、重炭酸ソーダ0.075%及びゲンタマイシン(gentamicin)100μg/mLを添加して製造した。
前記2−2で7日間培養された各濃度毎の榛の木抽出物が添加されたウイルス感染液の培養液を採取して、平板血球凝集検査を行った。培養液25μLと洗浄鶏赤血球(0.1%)25μLをガラス板の上に同量添加し、混和して、ガラス板を上下左右に動かして、2分以内血球凝集塊の形成有無でウイルスの増殖有無を確認した。
榛の木抽出物20mg
乳糖100mg
タルク10mg
前記成分を混合して気密パックに充填して散剤を製造した。
榛の木抽出物10mg
トウモロコシ澱粉100mg
乳糖100mg
ステアリン酸マグネシウム2mg
前記成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法により打錠して錠剤を製造した。
榛の木抽出物20mg
結晶性セルロース13.3mg
ラクトース65.8mg
マグネシウムステアレート0.9mg
通常のカプセル剤製造方法により前記成分を混合してゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
榛の木抽出物10mg
マンニトール180mg
注射用滅菌蒸溜水2,974mg
Na2HPO4・12H2O26mg
通常の注射剤の製造方法により1アンプル当(3mL)前記成分含有量で製造した。
榛の木抽出物20mg
異性化糖10g
マンニトール5g
精製水適量
通常の液剤の製造方法により精製水に各々の成分を加えて溶解させ、レモン香を適量加え、前記成分を混合した後、精製水を加え、全体100mLに調節した後、茶瓶に充填し滅菌させて液剤を製造した。
以上詳細に説明した通り、本発明による榛の木の樹皮または幹抽出物は正常細胞である絨毛尿膜細胞(漿尿膜細胞)(chorioallantoic cells)に対する毒性が低く、低濃度で投与する場合にも抗ウイルス効果が優れているため、これを含む組成物はインフルエンザウイルス感染の予防及び治療に有用である。
Claims (1)
- (a)榛の木の樹皮を95%エタノールで、40℃で抽出する段階、及び
(b)前記抽出液を同一温度で真空濃縮及び乾燥して回収する段階、
を含む、榛の木の樹皮抽出物を含有する抗インフルエンザウイルス用組成物の製造方法。
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