JP5022367B2 - 抗ｉｌ−２３抗体 - Google Patents

Description

本発明は、医学分野に用いられる、特に抗インターロイキン２３（ＩＬ−２３）モノクローナル抗体に関する。具体的には本発明は、自己免疫疾患の治療用の、抗ＩＬ−２３中和モノクローナル抗体に関する。

ＩＬ−２３は、慢性炎症の誘導に必要な様々な炎症細胞の活性化に重要であると考えられているサイトカインである。ＩＬ−２３は、ＩＬ−１２とは異なるがＩＬ−１２と補完的な機能を有し、共有結合により連結したｐ４０及びｐ３５サブユニットからなる７０ＫＤａのヘテロ二量体サイトカインである。ＩＬ−２３は、ＩＬ−１２と同じｐ４０サブユニットから構成されるが、ｐ１９サブユニットと共有結合している（Ｌａｎｇｒｉｓｈら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２０２：９６−１０５，２００４）。

更に、ＩＬ−２３は、活性化Ｔ細胞からの炎症誘発性サイトカインＩＬ−１７の分泌を促進することによって、メモリー／病原性Ｔ細胞応答において重要な役割を果たす。ＩＬ−１７レベルの上昇と、慢性関節リウマチ、乾癬及び多発性硬化症などの自己免疫、炎症性疾患との関連性を裏付ける研究結果が近年得られている（Ａｇｇａｒｗａｌら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２７８（３）：１９１０−１９１４、２００３）。すなわち、抗ＩＬ−２３中和抗体は、ＩＬ−１７の分泌及び炎症誘発作用、ひいては炎症性疾患に対するＩＬ−１７の作用を阻害する。

ヒトＩＬ−２３に対する抗体がこれまで報告されているにもかかわらず、ｐ１９サブユニット上の特定のエピトープを認識する高親和性のヒトＩＬ−２３中和抗体に関する開示はなされていない。自己免疫疾患の治療のための疾患修飾療法に対するニーズが存在することは疑いがない。

従って、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合してＩＬ−１７の炎症誘発作用をブロックする高親和性中和抗体に対するニーズが存在し、それは治療薬として利用である。また抗体を静脈注射ではなく、むしろ皮下投与で患者に投与できるという点でも、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合する高親和性抗体は望ましい。また、最小限の有効治療量を有する治療用抗ＩＬ−２３抗体を作製するために、ＩＬ−２３阻害アッセイにおいて低いＩＣ₅₀値でＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合する抗体のニーズが存在する。本発明はこれらのニーズを満たし、関連する有利性を提供し、それにより自己免疫疾患の有効な治療を可能にする。

本発明の一態様は、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合し、ＩＬ−２３活性を中和し、約１６０ｐＭ未満のＫ_Dを有し、そして２０ｐＭ未満のＩＣ₅₀を有する、抗体又はその抗原結合部分である。

本発明のさらなる態様は、配列番号６０に示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１２９〜１５９の範囲のＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと結合する、抗体またはその抗原結合部分である。

本発明のさらなる態様は、配列番号５２に示される重鎖可変領域と、配列番号５７に示される軽鎖可変領域と、配列番号６２に示される重鎖定常領域と、配列番号６３に示される軽鎖定常領域を含んでなる、抗体またはその抗原結合部分である。

本発明のさらなる態様は、配列番号４４〜５５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号５６〜５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含んでなる、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を包含する。

本発明のさらなる態様は、配列番号５７で示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、配列番号４８、４９又は５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含んでなる、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分である。

本発明のさらなる態様において、本発明の抗ＩＬ−２３モノクローナル抗体のＬＣＶＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３について、それぞれ（ａ）配列番号２６〜３５、（ｂ）配列番号３７〜３８、及び（ｃ）配列番号４０に示される配列を有するペプチドからなる群から選択される１、２または３のペプチドを含んでなる（すなわち前記３つのペプチドを含んでなる抗体では、（ａ）からの１つのペプチド、（ｂ）からの１つのペプチド、及び（ｃ）からの１つのペプチドを有する）。

さらなる態様では、本発明の抗ＩＬ−２３モノクローナル抗体のＨＣＶＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３について、それぞれ（ａ）配列番号１〜４、（ｂ）配列番号５〜１１、及び（ｃ）配列番号１３〜２１に示される配列を有するペプチドからなる群から選択される１、２または３のペプチドを含んでなる（すなわち前記３つのペプチドを含んでなる抗体では、（ａ）からの１つのペプチド、（ｂ）からの１つのペプチド、及び（ｃ）からの１つのペプチドを有する）。

本発明は更に、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３について、それぞれ（ａ）配列番号：２６〜３５、（ｂ）配列番号：３７〜３８、（ｃ）配列番号４０、（ｄ）配列番号：１〜４、（ｅ）配列番号：５〜１１、及び（ｆ）配列番号：１３〜２１で示される配列を有するペプチドからなる群から選択される６つのペプチド（すなわち、（ａ）〜（ｆ）各々から１つのペプチド）を含んでなる抗ＩＬ−２３モノクローナル抗体を提供する。

本発明は更に、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３について、それぞれ配列番号４１、４２及び４３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３について、それぞれ配列番号２２、２３及び２４に示される配列を有する６つのペプチドを含んでなる抗ＩＬ−２３モノクローナル抗体を提供する。

本発明のさらなる態様は、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットのアミノ酸残基１２９〜１５９（配列番号６０の残基１２９〜１５９）を含んでなる特定のエピトープに結合し、ＩＬ−２３又はその部分に関連する少なくとも１つのインビトロまたはインビボでの生物活性をアンタゴナイズまたは中和する、ヒト化抗ＩＬ−２３モノクローナル抗体およびその抗原結合部分を提供する。

別の態様では、本発明の抗体は、実施例１に記載するインビトロマウス脾細胞アッセイにおいて、約１００ｐＭ、７５ｐＭ、５０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１３ｐＭ、１０ｐＭ、８ｐＭ、５ｐＭ、２ｐＭまたは１ｐＭ以下のＩＣ₅₀を有する。好ましくは、本発明の抗体は約２０ｐＭ以下のＩＣ₅₀を有する。

他の態様では、本発明の抗体は、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに対する強い結合親和性（Ｋ_D）（すなわち約１６０ｐＭ、１００ｐＭ、７５ｐＭ、５０ｐＭ又は２５ｐＭ未満）によって特徴づけられる。好ましくは、本発明の抗体は約１００ｐＭ未満のＫ_Dを有する。更に、本発明の抗体は、４×１０^-4ｓ^-1未満の、ヒトＩＬ−２３ｐ１９サブユニットからのｋ_offによって更に特徴づけられる。

本発明の他の態様は、単離された、上記態様のいずれかに記載の単離された抗体が包含され、該抗体は、完全長の抗体、実質的にインタクトな抗体、キメラ抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）₂フラグメント又は単鎖Ｆｖフラグメントであってよい。好ましくは、上記態様のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合部分は、ヒト化抗体である。

本発明は、本明細書及び請求項に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含んでなる単離された核酸を包含する。本発明はまた、本明細書及び請求項記載の抗体を発現するこれらポリヌクレオチドを含んでなるベクターでトランスフェクションされた宿主細胞を包含する。

本発明は、本明細書および請求項記載の抗体を患者に有効量投与することを含んでなる、自己免疫疾患の治療方法を包含する。好ましくは、治療される自己免疫疾患は多発性硬化症である。

最後に、本発明は、それが必要な患者の自己免疫疾患の治療のための医薬の製造のための、抗体の使用を包含する。

発明の詳細な記載
本発明は、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合し、自己免疫疾患の治療に有用である、単離されたヒト抗体またはその抗原結合部分のアミノ酸配列を提供する。

本発明の理解をより容易にするため、特定の用語に関して最初に定義する。

ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットは、２１アミノ酸のリーダー配列を含んでなる１８９アミノ酸のポリペプチドである［配列番号６０］。

本明細書で用いられる用語「抗体」とは、ジスルフィド結合によって相互に結合する４つのポリペプチド鎖（２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖）を含んでなる免疫グロブリン分子を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ又はＶＨとして本明細書に略記する）及び重鎖定常領域（ＨＣＣＲ又はＣＨとして本明細書に略記する）を含んでなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）を含んでなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ又はＶＬとして本明細書に略記する）及び軽鎖定常領域（ＬＣＣＲとして本明細書に略記する）を含んでなる。軽鎖定常領域は１つのドメイン（ＣＬ）を含んでなる。

ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲ領域はさらに、相補性決定領域（「ＣＤＲｓ」）と称される超可変領域と、その間に存在するフレームワーク領域（「ＦＲ」）と称するより保存的な領域に分類される。ＨＣＶＲとＬＣＶＲはそれぞれ、３つのＣＤＲｓと４つのＦＲｓから構成され、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に向けて配列している。本明細書では、重鎖の３つのＣＤＲｓを「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３」と称し、軽鎖の３つのＣＤＲｓを「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３」と称する。ＣＤＲｓは、抗原との特異的な相互作用をもたらす大部分の残基を含んでなる。ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲ領域のＣＤＲアミノ酸残基の番号と位置は、周知のＫａｂａｔの付番規則に従う。

軽鎖はκ及びλに分類される。重鎖はγ、μ、α、δ又はεに分類され、それぞれ抗体のアイソタイプをＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥとして定義する。軽鎖及び重鎖において、可変部及び定常領域は約１２以上のアミノ酸からなる「Ｊ」領域により連結し、重鎖は約３つ以上のアミノ酸からなる「Ｄ」領域をさらに含む。

本明細書において使用する、抗体の「抗原結合部分」とは、抗原（例えばＩＬ−２３のｐ１９サブユニット）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１以上のフラグメントを意味する。完全長の抗体のフラグメントにより抗体の抗原結合機能が発揮されうることは明らかにされている。抗体の「抗原結合部分」なる用語に包含される結合フラグメントの例としては、（ｉ）Ｆａｂフラグメント（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメント）、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）₂フラグメント（ヒンジ部位でジスルフィド架橋により連結した２つのＦａｂフラグメントを含んでなる二価フラグメント）、（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント（ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなる）、（ｉｖ）Ｆｖフラグメント（抗体の単腕のＶＬ及びＶＨドメインからなる）、（ｖ）ｄＡｂフラグメント（ＶＨ領域からなる）、及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。更に、Ｆｖフラグメントの２つの領域、ＶＬ及びＶＨ、が別々の遺伝子によってコードされているが、それらを組換え法を使用して、ＶＬ及びＶＨ領域が対になって一価の分子を形成している単一タンパク質鎖として作製することが可能な合成リンカーによって連結できる（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）。そのような単鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合部分」なる用語に包含されるものと意図する。単鎖抗体の他の形態として、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）なども包含される。ｄｉａｂｏｄｙは、二価の二重特異性の抗体であり、同じ鎖上の２つの領域間で対合するには短過ぎるリンカーを使用してＶＨ及びＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖に発現しており、その結果、それらドメインが別の鎖の相補的なドメインと対合するように働いて２つの抗原結合部位を形成している。

本発明の抗体の抗原結合領域のＣＤＲｓは、全体的にまたは実質的にマウス起源であり、場合により、抗体の特定の特性（例えばＫ_D、ｋ_off、ＩＣ₅₀）を最適化するために変更された特定のアミノ酸残基（例えば異なるアミノ酸残基で置換された）（例えば表１及び２を参照）を有する。他の態様では、本発明のＩＬ−２３抗体の抗原結合領域は、ウサギ、ラットまたはハムスターが挙げられるがこれに限定されない、ヒト以外の種に由来してもよい。あるいは、抗原結合領域はヒト配列に由来してもよい。

本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術により産生される抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」とは、例えば真核生物、原核生物又はファージクローンを含む、単一のコピー又はクローンに由来する抗体を指し、それを生産する方法を指すわけではない。「モノクローナル抗体」は、インタクトな抗体（完全なまたは完全長のＦｃ領域を含む）、実質的にインタクトな抗体、又は抗原結合部分（例えばマウス抗体のＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント又はＦ（ａｂ’）₂フラグメント）を含んでなる抗体のフラグメント、又はキメラ、ヒト化若しくはヒト抗体のフラグメントであってもよい。

用語「ヒト化抗体」は、ヒト抗体生殖細胞系又は再編成された配列に由来するアミノ酸配列の部分又は全部から構成される抗体を意味し、それは非ヒト（好ましくはマウスモノクローナル抗体）相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する抗体の配列を変更することによって作製される。可変領域のフレームワーク領域は、対応するヒトフレームワーク領域（又はその相当若しくは実質的な部分（すなわち少なくとも約９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）、カバット付番に従う）により置換され、核酸配列としてコードされ、前記抗体がヒト細胞において産生されるか否かに関わらず、ヒト生殖細胞系の免疫グロブリン領域、又はその組換えまたは変異体として得られる。

ヒト化抗体のＣＤＲｓは非ヒト親抗体のＣＤＲｓを基に改変又は最適化してもよく、それにより所望の特性（例えば特異性、親和性及び／又は優先的な結合）を付与してもよい。親ＣＤＲｓを変異若しくは最適化するためにＣＤＲｓにアミノ酸置換、付加及び／又は欠失を行ってもよく、好ましくは６つのＣＤＲ領域中の１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０アミノ酸について行ってもよい。例えば、配列番号：４４〜５９中のＣＤＲｓのアミノ酸位は、Ｍａｂ３Ａ８について示すように、そのＣＤＲｓから改変されている部分である。あるいは、マウス抗体Ｍａｂ３Ａ８を、本発明の抗体のＣＤＲｓの比較用の親抗体としてもよい。本明細書に述べられるように、ヒト化抗体に関連する抗体は完全長の抗体に限定されず、そのフラグメント及び単鎖も包含される。

本明細書で用いられる用語「組換えヒト抗体」とは、組換え技術によって調製、発現、作製または単離された全てのヒト抗体を含むものと意図され、例えば、宿主細胞にトランスフェクションした組換え発現ベクターを使用して発現された抗体、組換え若しくはコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子によるトランスジェニック動物（例えばマウス）から単離された抗体、又はヒト免疫グロブリン遺伝子配列をスプライシングして他のＤＮＡ配列に形成する他の任意の手段によって調製、発現、作製または単離された抗体が挙げられる。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を含んでなる。但し、一態様においては、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発に付し、それにより組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列を、ヒト生殖細胞系ＶＨ及びＶＬ配列に由来するが、インビボでヒト抗体生殖細胞系レパートリー中には存在しえない配列としてもよい。

本明細書で用いられる「単離された抗体」とは、異なる抗原特性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体のことを指す（例えば、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原（例えば他の種に由来するＩＬ−２３分子）と交差反応性を有することがありえる。更に、単離された抗体は他の細胞内物質及び／又は化学物質を実質的に含まなくてもよい。

本明細書で用いられる「中和抗体」とは、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットとの結合がヒトＩＬ−２３の生物学的活性の阻害をもたらす抗体のことを指す。マウス脾細胞生物学的アッセイ［実施例１］又はヒトＩＬ−２３中和アッセイ［実施例２］のいずれかを用いて測定されるように、ＩＬ−２３生物学的活性の１つ以上の指標を測定することにより、ヒトＩＬ−２３の生物学的活性のこの阻害を評価できる。

「変異型」抗体とは、本明細書では親抗体配列への１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失及び／又は置換によって、「親」抗体アミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有する分子のことを指す。好ましい態様では、該変異型抗体は、親抗体の中のＣＤＲ領域の少なくとも１つのアミノ酸（例えば１〜約１０、好ましくは２、３、４、５、６、７又は８）の付加、欠失及び／又は置換を有する。変異型抗体配列に関する同一性又はホモロジーは、変異型抗体配列のアミノ酸残基のパーセンテージとして本明細書に定義され、それは、配列を整列配置して、必要に応じてギャップを導入して親抗体の残基と同一に揃えたときの、最大の配列同一性（パーセント）として算出する。変異型抗体は抗原又は好ましくは親抗体が結合するエピトープと結合する能力を有し、好ましくは、親抗体のそれより優れた少なくとも１つの特性又は生物活性を有する。例えば、変異型抗体は好ましくはより強い結合親和性、遅い解離速度、低いＩＣ₅₀又は、親抗体よりも強化された抗原に対する生物活性阻害能力を有する。本明細書に特に関連がある変異型抗体は、親抗体と比較して抗体としての特性又は生物活性の少なくとも約２倍、好ましくは少なくとも５倍、１０倍又は２０倍の増大を示すものである。

本明細書の「親」抗体とは、変異型抗体の調製に使用するアミノ酸配列を含むものを指す。親抗体はマウス由来のフレームワーク配列を有してもよいが、好ましくは、フレームワーク配列は全体的又は実質的にヒト由来である。親抗体はマウス、キメラ、ヒト化又はヒト抗体であってもよい。

「特異的に結合する」抗体は、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと結合するが、ヒトＩＬ−２３のｐ４０サブユニットとは結合しない。ヒトＩＬ−２３と特異的に結合する抗体は、他の種由来のＩＬ−２３と多少の交差反応性を示すこともある。

「エピトープ」という用語は、抗体の抗原結合領域の１つ以上により認識され、それと結合する分子の部分を指す。エピトープは、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の表面の化学的に活性な基から構成され、特異的な三次元構造の特徴、並びに特異的な荷電特性を有する。「阻害エピトープ」及び／又は「中和エピトープ」とは、インビボ、インビトロ又は当該分子を含む生物体内において、インタクトな抗原分子の場合において、そしてエピトープに特異的な抗体と結合した場合に、生物学的活性の喪失若しくは減弱をもたらすエピトープのことを指す。本明細書で用いられる用語「抗原性エピトープ」とは、抗体が特異的に結合できるポリペプチドの部分として定義され、公知技術のいかなる方法（例えば従来のイムノアッセイ）によって決定できる。「非線形エピトープ」又は「立体構造エピトープ」には、エピトープに特異的な抗体が結合する抗原性タンパク質内に隣接しないポリペプチド（又はアミノ酸）を含んでなる。

本明細書で用いられる用語「ｋ_on」は、正反応または複合体形成反応における会合速度定数または特異的反応速度であり、Ｍ^-1秒^-1を単位として表される。

本明細書で用いられる用語「ｋ_off」は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離に関する、解離速度定数または特異的反応速度であり、秒^-1を単位として表される。

本明細書で用いられる用語「Ｋ_D」は、特定の抗体−抗原相互作用の解離定数を指し、以下の式により算出される。
ｋ_off／ｋ_on＝Ｋ_D

本発明の抗体は高親和性抗体であり、通常低いｋ_off値を示す。本明細書における開示において、用語「高親和性」とは、１．６×１０^-10Ｍ〜約４．５×１０^-11Ｍの親和性又はＫ_Dのことを指す。

用語「力価」は、生物学的活性の測定値であってＩＣ₅₀、即ち実施例１に記載のバイオアッセイにおいて、マウス脾細胞に対するＩＬ−２３生物活性の５０％を中和するのに必要な抗体の有効濃度として表すこともできる。

本明細書で用いられる用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を包含する。核酸分子は一本鎖又は二本鎖であってもよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。

「単離された核酸分子」の用語は、ヒトＩＬ−２３を結合する抗体又は抗体部分（例えばＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ３）をコードする核酸を参照して本明細書で用いられるように、ヒトＩＬ−２３以外の抗原と結合する抗体または抗体部分をコードする他のヌクレオチド配列を含まない、抗体若しくは抗体部分をコードするヌクレオチド配列のことを指し、当該他の配列はヒトゲノムＤＮＡの核酸中に存在していてもよい。すなわち、例えば、抗ヒトＩＬ−２３のＶＨ領域をコードする本発明の単離された核酸抗体は、ヒトＩＬ−２３以外の抗原が結合する他のＶＨ領域をコードする他のいかなる配列も含まない。

本明細書で用いられる用語「ベクター」は、連結された他の核酸を輸送できる核酸分子のことを指す。ベクターの１つのタイプは「プラスミド」であり、それはさらなるＤＮＡ断片がライゲーションした環状の二重鎖ＤＮＡループのことを指す。ベクターの他のタイプはウィルスベクターであり、さらなるＤＮＡ断片がウィルスゲノムにライゲーションしている。

本明細書で用いられる用語「組換え宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」）は、組換え発現ベクターが導入された細胞のことを指す。

モノクローナル抗体３Ａ８は、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニット上のエピトープと特異的に結合するマウスモノクローナル抗体（ＭＡｂ３Ａ８）である。ＭＡｂ３Ａ８は、ヒト化および最適化することにより、強力なＩＬ−２３中和活性を有し、ＩＬ−２３のｐ４０サブユニットでなくｐ１９サブユニットと特異的に結合する高親和性抗体として得られた。

本発明の好ましい抗体又はその抗原結合性部分は、ＭＡｂ３Ａ８と同じエピトープとの高い親和性（低いＫ_D値）を有し、ＭＡｂ３Ａ８で観察されるよりも高い結合アフィニティを有する。本発明の抗体として定義される結合特性は、抗体（より詳しくは抗体のＣＤＲ領域）の可変領域に専ら存在する。

他の種に由来する抗体をヒト化する主な動機は、ヒト患者へ医薬として注射した場合に、抗体が免疫反応を引き起こすという可能性を減らすことである。ヒト化抗体に使用される配列がよりヒトに近い程、免疫原性としての危険性は低くなる。更に、注射されたヒト化抗体は通常、注射された非ヒト化抗体よりも循環の際に長い半減期を有する。更に、エフェクター機能が要求される場合、エフェクター部分がヒト由来であるため、ヒト免疫系の他の構成要素とより良好に相互作用しうる。抗体の生物学的特性に顕著な影響を及ぼすことなく、適切な重鎖及び軽鎖領域として本明細書に記載されている配列に適宜変更を加えてもよい。これは、抗体の定常領域及びＣＤＲｓのＩＬ−２３との結合能力に影響を及ぼさない可変領域の部分について特に当てはまる。

更に、本明細書に記載するように、ヒトフレームワーク可変領域及びその変異型を本発明に使用してもよい。しかしながら、選択されるフレームワークに関わらず、免疫原性の危険性を低下させることが目的であるなら、選択したヒトフレームワークに対する変化の数は最小限にする。

本発明のヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系軽鎖フレームワークを含んでもよく、これに由来するものでよい。具体的な態様においては、軽鎖生殖細胞系配列は、Ａ１、Ａ１０、Ａ１１、Ａ１４、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２、Ａ２０、Ａ２３、Ａ２６、Ａ２７、Ａ３、Ａ３０、Ａ５、Ａ７、Ｂ２、Ｂ３、Ｌ１、Ｌ１０、Ｌ１１、Ｌ１２、Ｌ１４、Ｌ１５、Ｌ１６、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｌ２、Ｌ２０、Ｌ２２、Ｌ２３、Ｌ２４、Ｌ２５、Ｌ４／１８ａ、Ｌ５、Ｌ６、Ｌ８、Ｌ９、Ｏ１、Ｏ１１、Ｏ１２、Ｏ１４、Ｏ１８、Ｏ２、Ｏ４及びＯ８が挙げられるがこれらに限定されないヒトＶＫ配列から選択される。ある特定の態様では、このヒト生殖細胞系軽鎖フレームワークは、Ｖ１−１１、Ｖ１−１３、Ｖ１−１６、Ｖ１−１７、Ｖ１−１８、Ｖ１−１９、Ｖ１−２、Ｖ１−２０、Ｖ１−２２、Ｖ１−３、Ｖ１−４、Ｖ１−５、Ｖ１−７、Ｖ１−９、Ｖ２−１、Ｖ２−１１、Ｖ２−１３、Ｖ２−１４、Ｖ２−１５、Ｖ２−１７、Ｖ２−１９、Ｖ２−６、Ｖ２−７、Ｖ２−８、Ｖ３−２、Ｖ３−３、Ｖ３−４、Ｖ４−１、Ｖ４−２、Ｖ４−３、Ｖ４−４、Ｖ４−６、Ｖ５−１、Ｖ５−２、Ｖ５−４及びＶ５−６から選択される。

他の態様では、本発明のヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系重鎖フレームワークを含んでもよく、又はそれに由来してもよい。具体的態様では、このヒト生殖細胞系重鎖フレームワークは、ＶＨ１−１８、ＶＨ１−２、ＶＨ１−２４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−４５、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−５８、ＶＨ１−６９、ＶＨ１−８、ＶＨ２−２６、ＶＨ２−５、ＶＨ２−７０、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１６、ＶＨ３−２０、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−３０、ＶＨ３−３３、ＶＨ３−３５、ＶＨ３−３８、ＶＨ３−４３、ＶＨ３−４８、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−５３、ＶＨ３−６４、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−７、ＶＨ３−７２、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−９、ＶＨ４−２８、ＶＨ４−３１、ＶＨ４−３４、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−４、ＶＨ４−５９、ＶＨ４−６１、ＶＨ５−５１、ＶＨ６−１及びＶＨ７−８１から選択される。

具体的態様では、軽鎖可変領域及び／又は重鎖可変領域は、フレームワーク領域又は少なくともフレームワーク領域の一部（例えば、ＦＲ２及びＦＲ３などの２または３のサブ領域）を含んでなる。ある特定の態様では、少なくともＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３又はＦＲＬ４は完全にヒト由来である。他の態様では、少なくともＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３又はＦＲＨ４は完全にヒト由来である。幾つかの態様では、少なくともＦＲＬ１、ＦＲＬ２、ＦＲＬ３又はＦＲＬ４は、生殖細胞系配列（例えばヒト生殖細胞系）であるか、又は特定のフレームワークにおけるヒトコンセンサス配列を含んでなる。他の態様では、少なくともＦＲＨ１、ＦＲＨ２、ＦＲＨ３又はＦＲＨ４は生殖細胞系配列（例えばヒト生殖細胞系）であるか、又は特定のフレームワークにおけるヒトコンセンサス配列を含んでなる。好ましい態様では、フレームワーク領域の全てがヒトフレームワーク領域である。

本発明のヒト化抗体の好ましいヒト重鎖定常領域アミノ酸配列は、ＩｇＧ１定常領域ＩｇＧ１［配列番号６１］又はＩｇＧ４定常領域［配列番号６２］を含んでなる。本発明のヒト化抗体の好ましいヒト軽鎖定常領域アミノ酸配列は、カッパ鎖定常領域［配列番号６３］である。

更に、好ましいヒト可変重鎖領域フレームワークはＶＨ１−２４［配列番号６４］であり、好ましいヒト可変軽鎖領域フレームワークはＡ１７［配列番号６５］である。配列番号６４及び６５は、天然のＣＤＲｓを有するヒト生殖細胞系配列を意味する。ＭＡｂ３Ａ８由来のＣＤＲｓを最適なヒトＪ領域とともに付加することにより、完全な可変領域を形成する。上記以外の更なるヒト重鎖または軽鎖定常領域、及び可変領域フレームワーク配列も本発明について企図され、当分野において知られていると理解される。

本発明は、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニット上のエピトープと特異的に結合し、ＩＬ−２３の活性を中和する抗体又はその抗原結合部分を包含する。すなわち、本明細書に記載されているＣＤＲｓ及び重鎖及び軽鎖可変領域を使用することにより、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに特異的なＣＤＲｓを利用するタンパク質の結合親和性を維持する、完全長の抗体並びにその機能性フラグメント及びアナログを調製できる。

ＭＡｂ３Ａ８の結合親和性は、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標））を用いて測定する。これらの実験では、抗体がＢＩＡｃｏｒｅ（商標）チップ上でタンパク質Ａまたは抗Ｆｃ抗体のいずれかによって低い密度で捕捉され、リガンドは通過する。チップの表面の質量増加を測定する。この分析法により、オン／オフの両方の速度をリアルタイムに測定でき、それにより結合親和性（Ｋ_D）の算出が可能となる。ＭＡｂ３Ａ８は約３００ｐＭのＫ_Dを有する。本発明のヒト化抗体は約４５〜約１６０ｐＭ、約４５〜約１５０ｐＭ、約４５〜約１００ｐＭ、約５０〜約９５ｐＭ、約６０〜約８５ｐＭ、及び約７０〜約８０ｐＭのＫ_Dを有する。好ましくは、本発明のヒト化抗体は約１００ｐＭ未満のＫ_Dを有する。

本発明の抗体又はその抗原結合部分は、ＩＬ−２３の生物学的活性を中和する。２つのアッセイを利用して、ＭＡｂ３Ａ８及び本発明の好ましい抗体のＩＬ−２３活性中和能力を試験できる［実施例１及び２を参照］。

本発明はまた、発現した場合にヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合する抗体をコードする、組み換えＤＮＡに関する。好ましくは、該ＤＮＡは、発現した場合に本発明の重鎖及び軽鎖ＣＤＲｓの１つ以上を含んでなる抗体をコードする［表１及び２］。

表１：ＣＤＲ配列−重鎖可変領域（ＨＣＤＲ）

＊Ｘ₁はＴ、Ｆ、Ｗ又はＹである。Ｘ₂はＮ、Ｔ、Ｓ、Ｒ，Ｙ又はＧである。Ｘ₃はＳ又はＰである。Ｘ₄はＥ又はＰである。Ｘ₅はＦ又はＹである。Ｘ₆はＡ又はＧである。Ｘ₇はＤ、Ｈ、Ａ、Ｋ、Ｑ、Ｅ又はＴである。Ｘ₈はＹ、Ｈ、Ｑ又はＤである。

表２：ＣＤＲ配列−軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）

＊＊Ｘ₉はＫ、Ｑ又はＲである。Ｘ₁₀はＤ又はＩである。Ｘ₁₁はＤ又はＧである。Ｘ₁₂はＫ、Ｎ又はＰである。Ｘ₁₃はＬ又はＫである。Ｘ₁₄はＳ又はＱである。Ｘ₁₅はＨ又はＹである。

本発明には、配列番号４１、４２及び４３に示される軽鎖ＣＤＲｓについてのコンセンサス配列、並びに配列番号２２、２３及び２４に示される重鎖ＣＤＲｓについてのコンセンサス配列を含んでなる抗体が含まれる。ＶＨフレームワークのＶＨ１−２４を利用している本発明の好ましい抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列の例を、配列番号４４〜５５として表す。ＶＬフレームワークのＡ１７を利用している本発明の好ましい抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列の例を、配列番号５６〜５９として表す。配列番号５８及び５９のアミノ酸残基４１を、この位置に存在するマウスの残基に変更される。更に、本発明の抗体の例は、配列番号６２に示される重鎖定常領域及び配列番号６３で示される軽鎖定常領域で表される。

すなわち、本発明の典型的な抗体は次の群から選択される。
（ａ）配列番号５７に示されるＬＣＶＲ、配列番号４７に示されるＨＣＶＲ、配列番号６３に示されるＬＣＣＲ及び配列番号６２に示されるＨＣＣＲを有する抗体、
（ｂ）配列番号５７に示されるＬＣＶＲを有する抗体、配列番号４８に示されるＨＣＶＲ、配列番号６３に示されるＬＣＣＲ及び配列番号６２に示されるＨＣＣＲ、
（ｃ）配列番号５７に示されるＬＣＶＲを有する抗体、配列番号４９に示されるＨＣＶＲ、配列番号６３に示されるＬＣＣＲ及び配列番号６２に示されるＨＣＣＲ、
（ｄ）配列番号５７に示されるＬＣＶＲを有する抗体、配列番号５１に示されるＨＣＶＲ、配列番号６３に示されるＬＣＣＲ及び配列番号６２に示されるＨＣＣＲ、
（ｅ）配列番号５７に示されるＬＣＶＲを有する抗体、配列番号５２に示されるＨＣＶＲ、配列番号６３に示されるＬＣＣＲ及び配列番号６２に示されるＨＣＣＲ、
（ｆ）配列番号５７に示されるＬＣＶＲを有する抗体、配列番号５３に示されるＨＣＶＲ、配列番号６３に示されるＬＣＣＲ及び配列番号６２に示されるＨＣＣＲ、並びに、
（ｇ）配列番号５７に示されるＬＣＶＲを有する抗体、配列番号５５に示されるＨＣＶＲ、配列番号６３に示されるＬＣＣＲ及び配列番号６２に示されるＨＣＣＲ。

本発明の中和抗体は、ヌクレオチド配列を適切に配置し、適切な細胞系でこれらを発現させることにより、適当な抗体遺伝子配列（すなわちアミノ酸配列）を生じることによって達成される。コドンベースの突然変異導入法を使用し、所望のヌクレオチド配列を作成してもよい。かかる方法により、オリゴヌクレオチドの範囲内でいかなる所望のコドン位置に対応するアミノ酸残基おいても、任意の頻度で任意のアミノ酸を導入することができる。すなわち、所望の位置で２０アミノ酸のいずれかで完全にランダム置換を行うことができる。あるいは、このプロセスを実施することにより、アミノ酸鎖（例えば本発明による新規なＣＤＲ配列）内の所望の部位を特定のアミノ酸とすることもできる。要するに、任意の必要なアミノ酸配列に対応する適当なヌクレオチド配列を容易に利用することができ、かかる方法を用いて本発明の新規なＣＤＲ配列を再構成できる。これにより、いかなる所望のアミノ酸配列を有するポリペプチド（例えば抗体）を合成することが可能となる。例えば、選択した抗体中のあらゆる所望の領域のアミノ酸配列を決定し、任意に、他の所望のアミノ酸で１つ以上のアミノ酸を置換された相補的な鎖を調製し、一定範囲の置換アナログを提供することができる。

かかる方法の適用において、遺伝暗号の縮重のため、かかるランダムなオリゴヌクレオチドの合成方法及び部分的に縮重したオリゴヌクレオチドの合成方法により、特定の部位の特定のアミノ酸残基に対応するコドンの重複が生じると考えられるが、かかる方法は全ての可能なアミノ酸配列のマスターセットを提供し、最適な機能を提供する抗体構造、又は他の目的における解析に使用できる。あるいは、かかる抗体配列を、化学合成若しくは当業者に周知の他の方法で作成することができる。

本明細書に開示された発明によれば、増大した高い効力を有する抗体は、単一のポリペプチド構造において、各々独立に増大した効力又は生物学的活性をもたらすことが示された、本明細書に記載の新規のＣＤＲ配列を組み合わせることによって作製することができる。このように、幾つかの新しいアミノ酸配列を同じまたは異なるＣＤＲｓにおいて１つの抗体内に組合せ、生物学的活性の望ましいレベルを有する抗体を産生することもできる。アミノ酸の変化により前記抗体のｋ_offを減少させ、好ましくは抗体親和性を強化させる効果が得られる。親和性が同じか多少減少を示す場合であっても、より低いｋ_off値によってより高い効力が達成される。そのような抗体は、最も好適には必要なポリペプチド鎖の合成によって調製され、その調製は、改変されたＣＤＲ部分を含んでなる必要なポリペプチド鎖をコードする適切なヌクレオチド配列を組み込んで作成した適切な組換え細胞において行われる。非限定的な例として、そのような新規なＣＤＲ配列を使用し、特定の抗原性構造（例えばヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニット）に対してその抗体が高い親和性を示す本明細書記載の脾細胞バイオアッセイまたはヒトＩＬ−２３中和プロトコルを使用して、得られる抗体の効力または生物学的活性をスクリーニングする。

逆に、特定の位置でのあらゆる種類の置換が有用でも好ましくなくもあり得るという点で、異なる抗体ドメインの配列において全ての位置が同等であるというわけではないことも考慮する必要がある。更に、特定の位置での特定の種類のアミノ酸の置換は、親和性に関して同様に増減し得る。例えば、所定の位置について可能性のある全ての疎水性アミノ酸を試す必要はないかもしれない。任意の疎水性アミノ酸が同様の挙動を示し得る。一方、所定の位置での酸性または塩基性アミノ酸により、親和性の測定値が大きく変動することがありうる。

すでに記載したように、Ｋ_Dはｋ_on及びｋ_off定数の比として算出される。例えば、３．１×１０⁷（Ｍ^-1ｓ^-1）のｋ_on及び０．９×１０^-4（ｓ^-1）のｋ_offから２．９×１０^-12ＭのＫ_Dが算出される。すなわち、親和性はｋ_onを増加させるか又はｋ_offを減少させることにより増強できる。即ち、本発明の抗体のｋ_offを減少させることにより、より有効な治療薬が得られると考えられる。

前述によれば、本発明の抗体は高親和性のモノクローナル抗体である。しかしながら、そのような抗体は、それらが単一の細胞種のクローンに由来しうるという点においてのみ、単クローン性といえる。すなわち、それが特定の供給源に由来する態様に限定されるわけではない。かかる抗体は、通常抗体（例えばＣＨＯ、ＮＳ０又はＣＯＳ細胞）を生産しない細胞においても容易に産生させることができる。更に、かかる抗体は他のタイプの細胞（特に哺乳類、また細菌及び植物細胞でもよい）において産生させてもよく、例えば遺伝組換え技術によって、軽鎖及び重鎖のポリペプチドをかかる細胞中で発現させ、集合させ、抗体生成物として形成させることにより調製できる。更に、かかる鎖を化学的に合成してもよいが、それらは所定の抗原決定基に対して特異的であるため、依然として「単クローン」抗体として用いられる用語の趣旨を脱するわけではない。すなわち、本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」とは、単に前記抗体の産生のために用いられるメカニズムよりも、むしろ抗体分子の特性及び純度の意味におけるものと理解すべきである。

また、本明細書で用いられる効力なる用語は、抗体をその意図された治療目的に利用する際の、その抗体濃度に対するその効果の依存性を記述することを意図する。すなわち、効力とは所定の抗原に関する生物学的活性を意味する。非限定的な例として、効力、生物学的活性または生物学的効果は、本明細書に記載の脾細胞バイオアッセイまたはヒトＩＬ−２３中和プロトコルによって、抗ＩＬ−２３抗体に関して測定される。本発明の方法に従って製造される抗体の相対的効力（ＩＣ₅₀に指定される）は、典型的には１ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ、または約１ｐＭ〜約２５ｐＭの範囲である。好ましくは、ＩＣ₅₀は約２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１３ｐＭ、１０ｐＭ、８ｐＭ、５ｐＭ、２ｐＭ又は１ｐＭである。最も好ましくは、本発明の抗体は約２０ｐＭのＩＣ₅₀を有する。

逆にいえば、抗原に対する抗体の親和性は、単にｋ_offに対するｋ_onの比で表される数学的尺度である。更に、本発明の方法に従って製造される抗体のＫ_Dは典型的には約２×１０^-10Ｍ〜約２５×１０^-12Ｍの範囲であり、好ましくは約１６０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、７５ｐＭ未満、５０ｐＭ未満又は２５ｐＭ未満である。最も好ましくは、本発明の抗体は約１００ｐＭ未満のＫ_Dを有する。

一態様では、本発明の抗体又はその抗原結合部分は通常、哺乳類（好ましくはヒト）の定常領域及び可変領域を含んでなり、該可変領域は重鎖及び軽鎖フレームワーク領域並びに重鎖及び軽鎖ＣＤＲｓを含んでなり、該重鎖及び軽鎖フレームワーク領域は哺乳類の抗体（好ましくはヒト抗体）の配列の特徴を有し、該ＣＤＲ配列は、ヒト以外の幾つかの種（好ましくはマウス）の抗体のそれらと類似する。

本発明の一態様では、約１６０ｐＭ未満のＫ_Dを有するヒトＩＬ−２３に対する中和抗体Ｆａｂフラグメントを使用し、１×１０^-3ｓ^-1未満、好ましくは、５×１０^-4ｓ^-1未満、より好ましくは１×１０^-4ｓ^-1未満にｋ_off値を減少させることによって結合能力を強化することができる。かかるＦａｂフラグメントのＣＤＲｓに存在するアミノ酸を表１及び２に示す。

具体的な態様では、本発明は、約１６０ｐＭ以下のＫ_Dを有し、ｋ_offが１×１０^-3ｓ^-1未満、好ましくは５×１０^-4ｓ^-1未満、最も好ましくは１×１０^-4ｓ^-1未満（それらの全ての組み合わせを含む）である単離された抗体に関する。すなわち、好ましい本発明の抗体は、約１６０ｐＭ以下のＫ_Dで成熟したヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと結合し、ｋ_off速度定数が１×１０^-3ｓ^-1以下であり、ヒトＩＬ−２３活性を中和する。

本発明の抗体をコードするＤＮＡは、典型的には、抗体コード配列に作動可能なように連結した、天然に付随するまたはヘテロローガスなプロモーター領域を含む発現制御ポリヌクレオチド配列を含んでなる。好ましくは、発現制御配列は、真核生物宿主細胞を形質転換またはトランスフェクションできるベクター内の真核生物プロモーターシステムであるが、原核生物宿主用の制御配列を用いてもよい。ベクターを適当な宿主細胞系に導入したら、宿主細胞をヌクレオチド配列の発現に適する条件下、また必要に応じて軽鎖、重鎖、軽／重鎖二量体もしくは完全抗体、結合フラグメント又は他の免疫グロブリン形態の回収及び精製に適する条件下で増殖させる。

最終的に所望の抗体を発現できる本発明の核酸配列は、様々な公知技術のいずれかを用いて、様々なポリヌクレオチド（ゲノム又はｃＤＮＡ、ＲＮＡ、合成オリゴヌクレオチドなど）及び構成要素（例えばＶ、Ｊ、Ｄ及びＣ領域）から形成することができる。適当なゲノム及び合成配列を結合することは一般的な製造技術であるが、ｃＤＮＡ配列を利用してもよい。

ヒト定常領域のＤＮＡ配列は、様々なヒト細胞から、周知の方法に従って単離できるが、好ましくは不死化Ｂ細胞から単離する。ポリヌクレオチド配列の適切な供給源となる細胞、及び免疫グロブリン発現及び分泌のための宿主細胞は、従来技術において周知の多くの供給源から入手可能である。

本明細書に記載されているように、本明細書に具体的に記載されている抗体に加えて、他の「実質的にホモローガスな」修飾抗体を、当業者に周知の様々な組み換えＤＮＡ技術を利用して容易に設計し、製造することができる。例えば、フレームワーク領域の幾つかのアミノ酸の置換、末端及び中間部における挿入及び欠失により、一次構造レベルで天然の配列から改変を行うことができる。更に、他の様々なヒトフレームワーク領域を単独又は組み合わせで使用し、本発明のヒト化免疫グロブリンのベースとしてもよい。一般に、遺伝子の修飾は、様々な周知技術（例えば部位特異的突然変異導入など）によって容易に実施できる。

あるいは、主となる抗体構造の一部だけを含んでなる、１つ以上の免疫グロブリン機能（例えば補体結合活性）を有するポリペプチドフラグメントを作製してもよい。これらのポリペプチドフラグメントを、公知技術の方法によって完全な抗体タンパク質の分解によって調製してもよく、又は部位特異的突然変異導入を利用してベクターの所望の部位で停止コドンを挿入してもよく、例えばＣＨ１の後にＦａｂフラグメントを作製し、又はヒンジ部位の後にＦ（ａｂ’）₂フラグメントを作製してもよい。単鎖抗体は、ＤＮＡリンカーでＶＬとＶＨを連結することによって作製できる。

前述のように、ポリヌクレオチド配列を発現制御配列に作動可能なように連結（すなわち確実にする機能するように配置する）した後、宿主中で発現させることができる。これらの発現ベクターは、典型的には、エピソームとして、又は宿主染色体ＤＮＡに統合された部分として、宿主生物において複製される。通常、発現ベクターは選択マーカー（例えばテトラサイクリン、ネオマイシン及びジヒドロ葉酸還元酵素）を含んでなり、所望のＤＮＡ配列によってその細胞形質転換を検出できるようにする。

大腸菌は、本発明のポリヌクレオチドのクローニングに特に有用な原核生物宿主である。使用に適している他の微生物宿主としては、細菌（例えばバチルスズブティリス）及び他の腸内細菌（例えばサルモネラ属、セラチア属及び様々なシュードモナス属の種）が挙げられる。これらの原核宿主において発現ベクターを構築でき、それは通常宿主細胞と適合性を有する発現制御配列（例えば複製開始点）を有する。更に、ラクトースプロモーターシステム、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーターシステム、ベータラクタマーゼプロモーターシステム又はラムダファージプロモーターシステムなどの多くの周知のプロモーターを任意に存在させてもよい。プロモーターは、典型的には、転写及び翻訳の開始および完了のため、場合によりオペレーター配列と共に発現を制御し、リボソーム結合部位配列などを有する。

バクテリアに加え、他の微生物（例えば酵母）を発現に用いてもよい。ピキア・パストリスは好ましい宿主であり、発現制御配列（例えばプロモータ（３−ホスホグリセリン酸塩キナーゼ又は他の解糖酵素を含む）、及び複製開始点、終結配列など）を有する適切なベクターを導入して用いる。

哺乳類の組織培養細胞を用いて、本発明のポリペプチドを発現・産生させてもよい。真核生物細胞が実際には好ましいが、その理由として、完全な免疫グロブリンを分泌できる多くの適切な宿主細胞系が従来技術において開発されていることが挙げられ、その例としてはＣＨＯ細胞系、様々なＣＯＳ細胞系、ヒーラー細胞、骨髄腫細胞系、形質転換Ｂ細胞、ヒト胚腎臓細胞系又はハイブリドーマなどが挙げられる。好ましい細胞系はＣＨＯ及び骨髄腫細胞系（例えばＳＰ２／０及びＮＳ０）である。

これらの細胞用の発現ベクターには、発現制御配列（例えば複製開始点、プロモーター、エンハンサー）及び必要なプロセシング情報部位（例えばリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位及び転写ターミネーター配列）を含めてもよい。好ましい発現制御配列は、免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシ乳頭腫ウイルス、サイトメガロウイルスなどに由来するプロモーターである。好ましいポリアデニル化部位としては、ＳＶ４０及びウシ成長ホルモンに由来する配列が挙げられる。

目的のポリヌクレオチド配列（例えば重鎖及び軽鎖をコードする配列及び発現制御配列）を含んでなるベクターを用いて周知の方法によって宿主細胞を形質転換でき、宿主細胞のタイプに応じてその方法を変化させてもよい。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションを原核細胞の場合に利用し、リン酸カルシウム処理又はエレクトロポーレーションを他の細胞宿主の場合に利用してもよい。

発現後、硫酸アンモニウム沈殿、イオン交換、アフィニティ（例えばプロテインＡ）、逆相、疎水的相互作用カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などの標準的方法に従って抗体を精製できる。少なくとも約９０〜９５％の純度を有する実質的に純粋な免疫グロブリンが好適であり、製薬用途では９８〜９９％以上の純度が最も好適である。用途に応じて部分的又は均一に精製した後、本明細書に記載するように当該ポリペプチドを治療的または予防的用途に用いてもよい。

本明細書に記載されているように、本発明の抗体は治療、予防、診断及び研究用として有用である。本発明の抗体は、ヒトＩＬ−２３の発現を伴う障害又は疾患の診断に用いてもよい。同様にして、本発明の抗体を用いて、ＩＬ−２３に関連する症状に関する試験を受けている患者のＩＬ−２３レベルをモニターするためのアッセイを行うことができる。研究用としては、サンプル（例えばヒト体液又は細胞または組織抽出物）のＩＬ−２３の検出用に本発明の抗体及びラベルを利用する方法が挙げられる。本発明の抗体は、修飾の有無にかかわらず使用でき、また検出可能部分を共有結合若しくは非共有結合で結合させることにより標識する。検出可能部分は、直接又は間接的に、検出可能なシグナルを生成する能力を有する任意のものであってもよい。

ＩＬ−２３測定のための様々な慣用のプロトコル（例えばＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ及びＦＡＣＳを含む）は、当分野において知られており、ＩＬ−２３の発現レベルの変化または異常を診断するための基礎を提供する。正常または標準的発現の値は、任意の当分野で公知の技術を使用して、例えばＩＬ−２３ポリペプチドを含有するサンプルを、例えば抗体と、抗原：抗体複合体の形成に適切な条件下で混合することにより、達成することができる。抗体を直接または間接的に検出可能な物質で標識して、結合または結合しなかった抗体の検出を容易にする。好適な検出可能な物質としては、様々な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料及び放射性物質などが挙げられる。

便宜上、本発明の抗体を、診断分析を実施するための指示書と共に、予め定められた量の試薬を組み合せて包装されたキットにおいて提供してもよい。抗体が酵素ラベルを有する場合、キットには基質及び酵素が必要とする補因子（例えば検出可能な発色団又はフルオロフォアを提供する基質前駆体）が含まれる。更に、他の添加剤として、安定化剤、バッファー（例えばブロッキングバッファー又は溶解バッファー）などを含めてもよい。種々の試薬の相対量を幅広く変化させ、実質的にアッセイの感度が最適化する試薬の溶液濃度としてもよい。特に、試薬を、一般に凍結乾燥された、溶解時に適当な濃度を有する試薬溶液となるように添加剤を含有する、乾燥粉末として提供することができる。

本発明はまた、ＩＬ−２３で媒介される炎症性障害に罹患するヒトを治療する方法に関し、当該方法は、ヒトＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに特異的な抗体の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含んでなる。本発明の抗体は、結合してＩＬ−２３を中和する。ＩＬ−２３で媒介される様々な障害として、多発性硬化症、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、移植片対宿主病、乾癬、クローン病、並びにその他の炎症性腸疾患及び癌が挙げられる。好ましくは、本発明に含まれるＩＬ−２３抗体は、再発寛解型の多発性硬化症（もっとも一般的な多発性硬化症）の治療に用いる。

抗体又はその抗原結合部分は、本発明の薬理的に許容できる希釈剤又は添加剤中に懸濁された本発明の抗体を含有する組成物の形態であってよい。これらの医薬組成物は、自己免疫疾患（好ましくは多発性硬化症）を治療するための一般に意図される目的を達成する、当分野において知られている任意の手段によって投与することができる。好ましい投与経路は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下及び関節内注射及び注入などが挙げられる投与様式を意味するものとして本明細書に定義される、非経口投与経路である。より好ましくは、投与経路は皮下投与であり、１週間に１回投与する。投与量は、受容者の年齢、健康状態及び体重、併用治療の種類（行っている場合）、治療頻度、及び所望の効果の性質などに依存する。

本発明の範囲の組成物は、抗体又は抗原結合部分が多発性硬化症の治療のための所望の医学的効果を達成するのに有効な量で存在する、全ての組成物を包含する。個々のニーズは患者ごとに異なるが、全ての成分についての有効量の最適な範囲の判断は、臨床医の通常の技量の範囲内である。

投与される医薬組成物は、選択された投与様式に適合するように設計され、製薬的に許容し得る添加剤、例えばバッファー、界面活性剤、防腐剤、可溶化剤、等張剤、安定化剤、担体などが適宜用いられる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ、最新版（本発明に援用される）は当業者に一般に知られている製剤技術が解説されている。

製剤中のＩＬ−２３抗体の濃度は、約０．１％〜１５又は２０重量％であってもよく、選択される投与様式に応じて、液体の体積、粘度、安定性などに基づいて主に選択される。ＩＬ−２３抗体の好ましい濃度は通常、１〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲である。好ましくは１０〜約５０ｍｇ／ｍＬである。

製剤中にバッファーを含有させてもよい。好ましくは、バッファーはクエン酸バッファー又はリン酸バッファー又はそれらの組み合わせである。通常、製剤のｐＨは約４〜約８の間である。好ましくは、ｐＨは約５〜約７．５の間である。製剤のｐＨは、投与する際の患者における抗体安定性（化学及び物理的）及び快適さのバランスをとるように選択することができる。製剤には塩（例えばＮａＣｌ）を含有させてもよい。更に、製剤には凝集を防止するための界面活性剤や、安定性を維持するための助剤を含有させてもよい。

製剤の調製後に滅菌濾過、又はさもなければ微生物学的に許容できる態様にしてもよい。ｍ−クレゾール又はフェノールなどの防腐剤又はその混合物を添加し、微生物の増殖及び汚染を防止してもよい。

静脈内点滴のための典型的組成物は、例えば無菌のリンガー溶液等の流体２５０ｍＬ、及び１ｍＬあたり１〜１００ｍｇ又はそれ以上の抗体濃度とすることができる。本発明の治療薬は、保存のため凍結または凍結乾燥することができ、使用前に適切な無菌担体中にて再調製することができる。凍結乾燥及び再調製によって抗体活性の損失の程度に変化する（例えば従来の免疫グロブリンの場合、ＩｇＭ抗体はＩｇＧ抗体よりも活性損失が大きい傾向がある）こともある。それを補償するように投与量を調整してもよい。

前述の方法は、例えばヒト化抗体などのタンパク質の投与に最も便利及び最適であるであると考えられるが、適切な製剤として調製された場合には、適切な調整を行うことにより、経皮投与及び経口投与などの他の投与技術を使用できる。更に、生物分解性フィルム及びマトリックス、又は浸透圧ミニポンプ、又はデキストランビーズ、アルギン酸またはコラーゲンを主成分とした輸送システムを使用して徐放性製剤とするのが望ましい場合もある。要約すると、製剤は、本発明の抗体を投与するために利用可能であり、様々なオプションから選択することができる。

典型的な投与量は、標準的な臨床技術を使用して最適化することができ、投与様式及び患者の症状に依存する。通常、投与量は１０μg／ｋｇ／月〜１０ｍｇ／ｋｇ／月の範囲である。

別の態様では、自己免疫疾患の治療のための医薬としての使用のための本発明の抗体又はその抗原結合部分が意図される。

更に他の態様では、上記の障害又は症状の治療又は予防に有用な材料を含有する製品を提供する。製品は容器とラベルを含んでなる。好ましい容器として、例えばボトル、バイアル、シリンジ及び試験管が挙げられる。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な材料で形成してもよい。容器は、障害又は症状を予防又は治療するのに効果的な本発明の抗体の組成物を保持し、無菌のアクセスポートを有してもよい（例えば容器は皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内注入用溶液バッグ又はバイアルであってもよい）。組成物の活性成分は本発明の抗ＩＬ−２３抗体である。容器に表示した、または容器に添付したラベルには、組成物が選択された症状の治療に使用されることが示される。製品は更に、製薬的に許容し得るバッファー（例えばリン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液及びデキストリン溶液）を含んでなる第二の容器を含んでいてよい。商業的観点及びユーザーの観点から見て望ましい他の材料、例えば他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、シリンジ及び使用説明を付したパッケージ内容物など、を更に含んでいてもよい。

本発明を以下の実施例で例示するが、本発明を何ら限定するものではない。

実施例１
ＩＬ−２３阻害アッセイ
マウス脾細胞アッセイを用い、マウス脾臓細胞からのＩＬ−１７分泌を促進するＩＬ−２３の能力に基づいて、ＩＬ−２３活性の阻害を解析した。本発明の抗体を、ＭＡｂ３Ａ８、及び商業的に入手可能なマウスモノクローナル抗体ＭＡＢ１２９０（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と比較した。

基本的なプロトコルは、以下の通りである。１匹のＢＡＬＢ／ｃ又はＣ５７ＢＬ／６マウスから脾臓を摘出し、脾細胞を回収し、単細胞懸濁液を調製した。脾細胞を洗浄し、完全ＲＰＭＩ培地（１％の非必須アミノ酸、１％のピルビン酸ナトリウム、２．５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１％のＬ−グルタミン、０．０００３５％の２−メルカプトエタノール、１％のペニシリン／ストレプトマイシン、１０％の熱不活化ＦＣＳ及び５０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を含有）中に再懸濁した。次いで脾細胞を１００μＬ量で、９６穴培養プレートに５００，０００細胞／ウェルで播種した。

１０ｐＭの濃度のヒトＩＬ−２３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を、３倍ずつ連続希釈して０．００１〜５４μｇ／ｍＬの範囲とした試験抗体とプレインキュベートした。３７℃で９０分間、５％のＣＯ₂の条件で、別々のアッセイプレートにおいてインキュベートを実施した。

次いで各プレインキュベートしたサンプル１００μＬを、脾細胞を含む培養プレートに添加し、３７℃、５％のＣＯ₂の条件で４８〜７２時間インキュベートした。マウスＩＬ−２３サンドイッチＥＬＩＳＡキット（Ｍ１７００、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用い、各培養上清のＩＬ−２３量を測定した。ＩＣ₅₀は、マウス脾細胞上でＩＬ−２３の生物活性の５０％を中和するのに必要な抗体量である。

マウス脾細胞アッセイにおける、ＭＡＢ１２９０と比較したＭＡｂ３Ａ８及び本発明の抗体のＩＣ₅₀を表３に示す。例示した抗体（ＭＡｂＱＦ２０及びＭＡｂＱＦ３７）では、２０ｐＭ未満のＩＣ₅₀値でＩＬ−２３刺激によるマウス脾臓細胞からのＩＬ−１７分泌を有意に中和した。
表３：げっ歯類脾細胞のＩＣ₅₀測定値

実施例２
ヒトＩＬ−２３の中和
ＩＬ−２と共にマウスに注入したヒトＩＬ−２３は、脾臓細胞においてマウスＩＬ−１７産生を刺激することができる。ＩＬ−１７のこの刺激は、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットに対する中和抗体によりブロックされ、ＩＬ−１７産生のｅｘ ｖｉｖｏ測定値とともに以下のｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルとして示す。

Ｃ５７ＢＬ／６マウスにマウスＩＬ−２（ｍＩＬ−２）を注入し、２２時間後にｍＩＬ−２及びヒトＩＬ−２３でマウスを刺激した。ｍＩＬ−２及びｈＩＬ−２３による刺激の２時間前に、マウスに本発明の高親和性ヒト化抗体又はアイソタイプ適合（ＩｇＧ４）コントロール抗体を注射した。

次いで以下の群を設定した。時間＝０：ｍＩＬ−２（５μｇ）のみ、又はｍＩＬ−２（５μｇ）＋ヒトＩＬ−２３（１０μｇ）をｉ．ｐ．注入。７時間：ｍＩＬ−２（１０μｇ）のみ、又はｍＩＬ−２（１０μｇ）＋ヒトＩＬ−２３（１０μｇ）をｉ．ｐ．注入。２３時間：ｍＩＬ−２（５μｇ）のみ、又はｍＩＬ−２（５μｇ）＋ヒトＩＬ−２３（１０μｇ）をｉ．ｐ注入。

３０時間後マウスを殺し、脾臓を摘出し、脾細胞を回収し、単一の細胞懸濁液を調製した。脾細胞を完全ＲＰＭＩ培地（１％の非必須アミノ酸、１％のピルビン酸ナトリウム、２．５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１％のＬ−グルタミン、０．０００３５％の２−メルカプトエタノール、１％のペニシリン／ストレプトマイシン、１０％の熱不活化ＦＣＳを含有）中で洗浄し、２００，０００細胞／２００μＬ／ウェルにて、ハムスター抗マウスＣＤ３ｅ抗体でプレコート（ＰＢＳ中５μｇ／ｍｌ、４℃で一晩）した９６ウェル培養プレートに播種した。次いで、９６穴プレートを３７℃、５％ＣＯ₂で４８〜７２時間インキュベートした。

マウスＩＬ−１７サンドイッチＥＬＩＳＡキット（Ｍ１７００、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用い、各培養上清のＩＬ−１７量を測定した。表４に示すように、ＭＡｂＱＦ２０及びＭＡｂＱＦ３７はＩＬ−２３を中和し、ＩＬ−１７刺激を有意にブロックした。
表４

実施例３
結合親和性
ＭＡｂ３Ａ８及び本発明の抗体の親和性を、ＢＩＡｃｏｒｅ測定法を使用して測定した（表３）。ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）は、分子相互作用を測定する自動化されたバイオセンサーシステムである（Ｋａｒｌｓｓｏｎら、（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １４５：２２９−２４０）。これらの実験では、抗体はＢＩＡｃｏｒｅ（商標）チップ上の表面に低密度で捕獲される。エチル−ジメチルアミノプロピル−カルボジイミド（ＥＤＣ）を用い、カルボキシメチル（ＣＭ５）ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）センサーチップのフローセルに、プロテインＡに対する反応性アミノ基をカップリングさせた。プロテインＡを酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ４．５）で希釈し、ＥＤＣを使用してＣＭ５チップのフローセルに固定し、１０００反応単位とした。未反応部分をエタノールアミンでブロッキングした。流速は６０μL／分とした。本発明の抗体２ｇ／ｍＬの溶液を１０Ｌ、次いで各サイクルごとにヒトＩＬ−２３を減少する濃度（例えば１５００、７５０、３７５、１８８、９４、４７、２３．５、１２及び０ｐＭ）で注入することにより、複数回の結合／溶出サイクルを実施した。溶出はグリシン−ＨＣｌ（ｐＨ１．５）により行った。ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（商標）を用い、動力学的データを解析した。

ＭＡｂ３Ａ８のＫ_Dを、本発明の抗体、及び商業的に入手可能な抗ＩＬ−２３中和モノクローナル抗体ＭＡｂ１２９０と比較した（表５）。結果は、例示した抗体（ＭＡｂＱＦ２０及びＭＡｂＱＦ３７）が約１６０ｐＭ未満のＫ_D値を有し、ＭＡｂ３Ａ８よりも２〜６倍小さい親和性定数であることを示した。
表５：ＢＩＡｃｏｒｅ（ＨＢＳ−ＥＰバッファー、２５℃、ｐＨ７．４）で測定した、ヒトＩＬ−２３に対する抗ＩＬ−２３抗体の結合特性

＊抗ヒトＩＬ−２３モノクローナル抗体、マウス（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）

実施例４
ＩＬ−２３のエピトープマッピング
本発明のヒト化抗体により認識されるＩＬ−２３のｐ１９サブユニットのエピトープは、配列番号６０のアミノ酸残基１２９〜１５９の範囲に含まれる。エピトープは、Ａｍｉｄｅ Ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＤＸＭＳ）を用いて決定した。

ＤＸＭＳは、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと本発明のヒト化抗体との間のタンパク質−タンパク質相互作用の測定に有用である。モデル結合フラグメントとして、ＭＡｂ３Ａ８のＦａｂフラグメントを用いた。この方法で幾つかのエピトープを同定し、配列番号６０の残基１２９−１５９に加えて、残基１２９−１５２、１５１−１５９及び１３４−１５２（全ての残基位置は配列番号６０に基づく）を含めた。

本発明のヒト化抗体がＭＡｂ３Ａ８と同じエピトープを結合することを調べるために標準的な競合ＥＬＩＳＡアッセイを用いた。ヒト化抗体の候補は、濃度依存的方法でビオチン化ＭＡｂ３Ａ８によりアッセイした。濃度依存的競合は、競合する抗体が成熟ＩＬ−２３上の同じエピトープと結合することを示す。従って、本発明のヒト化抗体は、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットの上記の同定されたエピトープと結合し、ＩＬ−２３の活性を中和し、それにより自己免疫疾患（好ましくは多発性硬化症）などのＩＬ−２３発現に関連する炎症性障害の治療に有用であることが示された。

実施例５
多発性硬化症のＥＡＥモデル
ＥＡＥは、ＣＤ４＋Ｔ細胞が介在する中枢神経系（ＣＮＳ）の脱髄疾患であり、ヒトのＭＳのモデルとなっている。ＥＡＥ進行の病理学的メカニズムは、抗原特異的Ｔ細胞活性化及びＴｈ１分化、並びにそれに続くＣＮＳへのＴ細胞及びマクロファージ浸潤が含まれる。ＩＬ−２３はＴ細胞からのＩＬ−１７の分泌を促進し、ＩＬ−１７は多発性硬化症（ＭＳ）の病理に関与する。高いレベルのＩＬ−２３がＭＳ患者の血清において確認され、ヒト患者のＭＳ病巣のマイクロアレイ分析によりＩＬ−１７の増加が示されている（Ｌｏｃｋら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：５００−５０８，２００２）。血液及び脳脊髄液中のＩＬ−１７ｍＲＮＡ発現単核細胞（ＭＮＣ）は、ＭＳ患者においてその数が有意に上昇し、増大した数のＩＬ−１７ｍＲＮＡ発現血中ＭＮＣが、ＭＳ緩解時と比較してＭＳ悪化の際に検出されている（Ｍａｔｕｓｅｖｉｃｉｕｓら、Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、５：１−１−１０４（１９９９））。

本実施例では、抗マウスＩＬ−２３抗体がＴ細胞からのＩＬ−１７の分泌を阻害し、それにより活性なＥＡＥモデルにおいてＥＡＥスコアを減少させる、再発寛解型ＥＡＥモデルにおける抗ＩＬ−２３抗体の効果を示す。疾患を誘導するため、０日目に８〜９週齢のＳＪＬ／Ｊマウスを、５０μｇのＰＬＰ１３９−１５１と結核菌Ｈ３７ＲＡ２００μｇを含有するフロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）１００μｌで、２つの部位に皮下注射した。第１の緩解日（２３〜２６日）に、マウスを次の３つの治療群にランダムに分けた。
（ｉ）担体（ＰＢＳ）、
（ｉｉ）ＩｇＧ₁アイソタイプコントロール抗体、１０ｍｇ／ｋｇ、及び
（ｉｉｉ）マウス 抗マウスＩＬ−２３モノクローナルＩｇＧ₁抗体、１０ｍｇ／ｋｇ。
動物への０．２ｍｌの注射（ｉ．ｐ．）は、第１の緩解日から開始し、毎週１回、６週間にわたり行った。

マウスの麻痺のレベルを、７日目〜６０日目に渡って記録した。最後の処置の１週間後にマウスをと殺した。疾患の臨床徴候は、１２日目から１５日目にかけて現れ、１７日目から２２日目付近で疾患のピークが観察された。個々の動物に関し、治療群のアイデンティティを盲検化して、少なくとも２人のスコアラーに独立して臨床的なＣＮＳの重症度に従い主観的にスコア化させた。
等級０：正常。
等級０．５：末端跛行又は尾部痙攣。
等級１：完全な尾部跛行。
等級１．５：尾部跛行及び後肢虚弱。
等級２．０：片側後肢の部分的な麻痺。
等級２．５：両側後肢の部分的な麻痺。
等級３．０：両側後肢の完全な麻痺。
等級３．５：両側後肢の麻痺、及び片側前肢の部分的な麻痺。
等級４．０：前肢後肢の全体的な麻痺。
等級５．０：瀕死又は死。
ＩＬ−２３抗体治療群は、アイソタイプコントロール群と比較して有意に低い疾患スコアであった。

各治療群のマウスの脾臓を摘出し、脾細胞の単一の細胞懸濁液を調製した。脾細胞を、ＰＬＰ（ＥＡＥ発症の誘導に用いたペプチド、すなわちｅｘ ｖｉｖｏにおける免疫細胞母集団の再刺激）の存在下で２日間培養した。２日後に、培養上清を２２のサイトカイン／ケモカインの濃縮液についてアッセイした（Ｌｉｎｃｏ社製の標準化されたキットを利用）。アイソタイプコントロールＭＡｂで処理した群からの培養上清では、約４５０ｐｇ／ｍＬのＩＬ−１７濃度であったが、抗ＩＬ−２３ＭＡｂで処理した群からの培養上清では、約１７５ｐｇ／ｍＬのＩＬ−１７濃度であった。このように、マウスＩＬ−１７の濃度の有意な減少（ｐ＜０．００２）が、抗ＩＬ−２３ＭＡｂで処理した群において観察された。

Claims (4)

1. ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合し、以下からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）ポリペプチドおよび重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）ポリペプチドを含んでなるヒト化抗体：
   （ａ）配列番号５７に示されるＬＣＶＲ、および配列番号４８に示されるＨＣＶＲ；および
   （ｂ）配列番号５７に示されるＬＣＶＲ、および配列番号５２に示されるＨＣＶＲ。
2. ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合し、配列番号５７に示される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）ポリペプチド、配列番号５２に示される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）ポリペプチド、配列番号６３に示される軽鎖定常領域（ＬＣＣＲ）および配列番号６２に示される重鎖定常領域（ＨＣＣＲ）を含んでなるヒト化抗体。
3. ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットと特異的に結合し、配列番号５７に示される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）ポリペプチド、配列番号４８に示される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）ポリペプチド、配列番号６３に示される軽鎖定常領域（ＬＣＣＲ）および配列番号６２に示される重鎖定常領域（ＨＣＣＲ）を含んでなるヒト化抗体。
4. 再発寛解型多発性硬化症の患者の治療のための医薬の製造のための、請求項１から３のいずれか１項記載の抗体の使用。