CN101248088A - 抗il-23抗体 - Google Patents

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CN101248088A CNA2006800310995A CN200680031099A CN101248088A CN 101248088 A CN101248088 A CN 101248088A CN A2006800310995 A CNA2006800310995 A CN A2006800310995A CN 200680031099 A CN200680031099 A CN 200680031099A CN 101248088 A CN101248088 A CN 101248088A
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Abstract

本发明包括与IL－23的p19亚基特异性结合的分离的抗体或其抗原结合部分。这些抗体或抗原结合部分为高亲和力的中和性抗体，可用于治疗自身免疫疾病。

Description

抗IL-23抗体
发明领域
本发明属于医学领域，具体属于抗白介素23(IL-23)单克隆抗体领域。本发明更具体地涉及用于治疗自身免疫疾病的中和性抗IL-23单克隆抗体。
发明背景
据信IL-23为对于诱导慢性炎症所需的大量炎症细胞的激活至关重要的一种细胞因子。IL-23具有不同于IL-12但与之互补的功能，IL-12为70KDa的杂二聚体细胞因子，由共价连接的p40和p35亚基组成。IL-23由与IL-12相同的p40亚基构成，但该亚基与p19亚基共价配对(Langrish等人《免疫学综述》(Immunological Reviews)202：96-105，2004)。
此外，IL-23通过促进活化T细胞分泌促炎细胞因子IL-17而牵涉到在记忆/致病T细胞应答中起着重要作用。有越来越多的证明表明高水平的IL-17与自身免疫疾病、炎症疾病相关，包括类风湿性关节炎、银屑病和多发性硬化症(Aggarwal等人，J.Biol.Chem 278(3)：1910-1914，2003)。因此，IL-23的中和性抗体将抑制IL-17的分泌和促炎作用，以及终端的IL-17对于炎症疾病的作用。
虽然人IL-23抗体以前已有报道，但是识别p19亚基上的特异性表位的高亲和力中和性人IL-23抗体尚未有公开。毫无疑问，在治疗自身免疫疾病方面需要改良的疾病疗法。
相应地，需要特异性结合IL-23p19亚基由此封闭IL-17促炎作用的高亲和力中和性抗体，其可用作为治疗剂。之所以需要特异性结合IL-23p19亚基的高亲和力抗体，原因还在于所述抗体能够对患者进行皮下施用而非静脉内施用。还需要在IL-23抑制测定法中以低IC50值特异性结合IL-23p19亚基的抗体，以产生具有最低有效治疗剂量的抗IL-23抗体。本发明满足了这些需求，并提供了相关的优点，因此提供了自身免疫疾病的有用治疗法。
发明概述
本发明的一个实施方案为抗体或其抗原结合部分，其特异性结合IL-23p19亚基，中和IL-23活性，KD值低于大约160pM，IC50值低于大约20pM。
另一实施方案为抗体或其抗原结合部分，其结合位于SEQ ID NO：60所示氨基酸序列氨基酸残基129-159内的IL-23p19亚基。
本发明的另一实施方案为抗体或其抗原结合部分，包含SEQ ID NO：52所示的重链可变区，SEQ ID NO：57所示的轻链可变区，SEQ ID NO：62所示的重链恒定区以及SEQ ID NO：63所示的轻链恒定区。
本发明的另一实施方案包括抗体或其抗原结合部分，其特异性结合IL-23p19亚基，包含的重链可变区含有选自SEQ ID NO：44-55的氨基酸序列，而轻链可变区含有选自SEQ ID NO：56-59的氨基酸序列。
本发明的另一实施方案为抗体或其抗原结合部分，其特异性结合IL-23p19亚基，包含的轻链可变区含有SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列，而重链可变区含有选自SEQ ID NO：48、49或52的氨基酸序列。
在另一实施方案中，本发明抗IL-23单克隆抗体的LCVR在LCDR1、LCDR2和LCDR3处分别含有选自下组的1、2或3条肽：具有(a)SEQ IDNO：26-35；(b)SEQ ID NO：37-38和(c)SEQ ID NO：40所示序列的肽(即，对于含有所述3条肽的抗体而言，一条肽选自(a)，一条肽选自(b)，而一条肽选自(c))。
在另一实施方案中，本发明抗IL-23单克隆抗体的HCVR在HCDR1、HCDR2和HCDR3处分别含有选自下组的1、2或3条肽：具有(a)SEQ IDNO：1-4；(b)SEQ ID NO：5-11和(c)SEQ ID NO：13-21所示序列的肽(即，对于含有所述3条肽的抗体而言，一条肽选自(a)，一条肽选自(b)，而一条肽选自(c))。
本发明还提供了抗IL-23单克隆抗体，其在LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2和HCDR3处分别含有选自下组的6条肽：具有(a)SEQID NO：26-35；(b)SEQ ID NO：37-38；(c)SEQ ID NO：40；(d)SEQ ID NO：1-4；(e)SEQ ID NO：5-11和(f)SEQ ID NO：13-21所示序列的肽(即从(a-f)中各选一条肽)。
本发明还提供了抗IL-23单克隆抗体，含有6条肽：在LCDR1、LCDR2和LCDR3处分别为具有SEQ ID NO：41、42、43所示序列的肽，而在HCDR1、HCDR2和HCDR3处分别为具有SEQ ID NO：22、23和24所示序列的肽。
本发明的另一实施方案提供了人源化的抗IL-23单克隆抗体及其抗原结合部分，其结合包含IL-23p19亚基氨基酸残基129-159(SEQ ID NO：60残基129-159)的特异性表位，并拮抗或中和至少一种与IL-23或其部分相关的体外或体内生物活性。
在另一实施方案中，在如实施例1所述的体外小鼠脾细胞测定法中，本发明抗体的IC50值低于或等于约100pM、75pM、50pM、25pM、20pM、15pM、13pM、10pM、8pM、5pM、2pM或1pM。优选本发明抗体的IC50值低于或等于约20pM。
在另一实施方案中，本发明抗体的特征在于对人IL-23p19亚基的强结合亲和力(KD)，即低于约160pM、100pM、75pM、50pM或25pM。优选本发明抗体的KD值低于约100pM。而且，发明抗体的特征还在于从人IL-23p19亚基的解离速率(koff)低于4×10-4s-1。
本发明的另一实施方案包括任一上述实施方案的分离的抗体，其中所述抗体为全长抗体、基本上完整的抗体、嵌合抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或单链Fv片段。优选任一上述实施方案的分离的抗体或其抗原结合部分为人源化抗体。
本发明包括分离的核酸，其包含的多核苷酸编码本文所描述和要求保护的抗体。本发明还包括用含有这些多核苷酸且表达本文所描述和要求保护的抗体的载体转化的宿主细胞。
本发明包括治疗自身免疫疾病的方法，包括向受试者施用有效量本文所描述和要求保护的抗体。优选所治疗的自身免疫疾病为多发性硬化症。
最后，本发明包括抗体在制备对需要的受试者治疗自身免疫疾病的药物中的用途。
发明详述
本发明提供了分离的人抗体或其抗原结合部分的氨基酸序列，所述抗体或其抗原结合部分特异性结合IL-23的p19亚基，并可用于治疗自身免疫疾病。
为使本发明更容易理解，首先对某些术语进行定义。
人IL-23的p19亚基为189个氨基酸的多肽，含有21个氨基酸的前导序列[SEQ ID NO：60]。
如本文所用，术语“抗体”旨在表示包含4条多肽链即通过二硫键彼此连接的两条重(H)链和两条轻(L)链的免疫球蛋白分子。每条重链包括重链可变区(文中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区(文中缩写为HCCR或CH)。重链恒定区包括3个结构域：CH1、CH2和CH3。每条轻链包括轻链可变区(文中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区(文中缩写为LCCR)。轻链恒定区包括1个结构域CL。
HCVR和LCVR区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(“CDR”)，其间散置着更为保守的区域，称为框架区(“FR”)。每一个HCVR和LCVR包括3个CDR和4个FR，从氨基末端到羧基末端按如下顺序排布：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。文中重链的3个CDR称为“HCDR1、HCDR2和HCDR3”，而轻链的3个CDR称为“LCDR1、LCDR2和LCDR3”。CDR含有与抗原构成特异性相互作用的大部分残基。HCVR和LCVR区内CDR氨基酸残基的编号和定位依据众所周知的Kabat编号惯例。
轻链分为κ链和λ链。重链分为γ、μ、α、δ、ε，并将抗体同种型分别定义为IgG(亚类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)、IgM、IgA、IgD和IgE。在轻链和重链内部，可变区和恒定区通过大约12个或更多个氨基酸的“J”区连接在一起，其中重链还包括大约3个或更多个氨基酸的“D”区。
如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”是指一个或多个保留了特异性结合抗原(如IL-23的p19亚基)的能力的抗体片段。已经证明，全长抗体的片段能够执行抗体的抗原结合功能。术语抗体的“抗原结合部分”所涵盖的结合片段的实例包括(i)Fab片段，即包括VL、VH、CL和CH1结构域的单价片段；(ii)F(ab′)2片段，即包括两个Fab片段的双价片段，所述Fab片段通过铰链区的二硫桥连接；(iii)包括VH和CH1结构域的Fd片段；(iv)包括单个抗体臂的VL和VH结构域的Fv片段；(v)dAb片段，其包括VH结构域；和(vi)单独的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域即VL和VH是由不同的基因编码的，它们可以利用重组方法通过合成接头连接在一起，使得它们制备为单条蛋白质链，其中VL和VH区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv))。这样的单链抗体也旨在包括在术语抗体的“抗原结合部分”中。也包括其他形式的单链抗体如双体抗体(diabody)。双体抗体是双价双特异性抗体，其中VH和VL结构域表达在单条多肽链上，但使用的接头太短，从而无法使同一链上的这两个结构域之间配对，由此迫使所述结构域与其他链上的互补结构域配对，并产生两个抗原结合位点。
本发明抗体的抗原结合区域的CDR完全或基本上是小鼠来源的，任选地改变某些氨基酸残基，例如，用不同的氨基酸残基取代(参见例如表1和2)，以优化抗体的特定性能，如KD、koff、IC50。在其他实施方案中，本发明IL-23抗体的抗原结合区域可来源于其他非人物种，包括但不限于：兔、大鼠或仓鼠。可选地，抗原结合区域可以来源于人序列。
如本文所用的术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术生产的抗体。“单克隆抗体”是指来源于单个拷贝或克隆的抗体，包括例如真核、原核或噬菌体克隆，而不是指其生产方法。“单克隆抗体”可以是完整抗体(包括全部或全长Fc区)，基本上完整的抗体，或者包含抗原结合部分的抗体的部分或片段，例如小鼠抗体或嵌合、人源化或人抗体的Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。
术语“人源化抗体”表示抗体部分或全部由来源于人抗体生殖系的氨基酸序列或重排序列构成，并通过改变非人抗体(优选小鼠单克隆抗体)互补决定区(CDR)的序列予以制备。可变区的框架区由相应的人框架区(或其相当大的部分或大部分，即至少约90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，按照Kabat编号)取代，并由存在于人生殖系免疫球蛋白区域中的核酸序列信息或其重组或突变形式编码，而不管所述抗体是否在人细胞中生产。
人源化抗体的CDR可自其所来源的非人亲本抗体的CDR进行改变或优化，以产生期望的性能，如特异性、亲和力和/或优先结合。与亲本CDR相比，经改变或优化的CDR可以具有氨基酸取代、添加和/或缺失，优选在六个CDR结构域中总计有大约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个这样的氨基酸取代、添加和/或缺失。例如，SEQ ID NO：44-59中的CDR氨基酸位置是由Mab3A8所示CDR经改变了的位置。可选地，小鼠抗体Mab3A8可以是用于比较本发明抗体CDR的亲本抗体。如本文所讨论的那样，就人源化抗体而言的抗体不局限于全长抗体，并且可以包括片段和单链形式。
如本文所用，术语“重组人抗体”旨在包括通过重组手段制备、表达、创建或分离的所有人抗体，例如利用转染至宿主细胞的重组表达载体表达的抗体，由重组的组合人抗体文库分离的抗体，由人免疫球蛋白基因转基因的动物(如小鼠)分离的抗体；或者通过包括将人免疫球蛋白基因剪接至其他DNA序列的任何其他手段制备、表达、创建或分离的抗体。这样的重组人抗体具有来源于人生殖系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。不过，在某些实施方案中，对这样的重组人抗体进行体外诱变，从而所述重组抗体VH和VL区的氨基酸序列是这样的序列，其虽然来源于人生殖系VH和VL序列并与之有关，但在体内可能不天然地存在于人抗体生殖系库中。
如本文所用，“分离的抗体”旨在表示不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(如特异性结合人IL-23p19亚基的分离的抗体基本上不含特异性结合其他抗原的抗体)。不过，特异性结合人IL-23p19亚基的分离的抗体与其他抗原如来自其他物种的IL-23分子具有交叉反应性。而且，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学品。
如本文所用，“中和性抗体”旨在表示这样的抗体，其与人IL-23p19亚基的结合导致抑制人IL-23的生物活性。
如小鼠脾细胞生物测定法[实施例1]或人IL-23中和测定法[实施例2]中所测定的那样，通过测量IL-23生物活性的一个或多个指标，能够评估这种人IL-23生物活性的抑制作用。
“变体”抗体在文中指这样的分子，由于在亲本抗体序列中添加、缺失和/或取代一个或多个氨基酸残基，而在氨基酸序列上有别于“亲本”抗体氨基酸序列。在优选的实施方案中，变体抗体包含亲本抗体CDR区中的至少一个氨基酸添加、缺失和/或取代(例如，1个至大约10个，优选2、3、4、5、6、7或8个)。就变体抗体序列而言的同一性或同源性在文中定义为经比对序列以及若必要引入空位以获得最大序列同一性百分比之后，变体抗体序列中与亲本抗体残基相同的氨基酸残基百分比。变体抗体保留与亲本抗体所结合的抗原或优选表位相结合的能力，并且优选具有至少一个优于亲本抗体的性能或生物活性。例如，与亲本抗体相比，变体抗体优选具有更强的结合亲和力、更低的解离速率、更低的IC50或增强的抑制抗原生物活性的能力。文中特别关注的变体抗体是这样的抗体，当与亲本抗体相比较时，其性能或生物活性增强至少大约2倍，优选至少大约5倍、10倍或20倍。
文中的“亲本”抗体含有用于制备变体抗体的氨基酸序列。亲本抗体可以具有小鼠来源的框架序列，但优选框架序列全部或基本上是人来源的。亲本抗体可以是小鼠、嵌合、人源化或人抗体。
“特异性结合”的抗体结合人IL-23p19亚基，但不结合人IL-23p40亚基。特异性结合人IL-23的抗体可以与来自其他物种的IL-23表现出一些交叉反应性。
术语“表位”是指分子的一部分，其能够被抗体识别，并为抗体的一个或多个抗原结合区域所结合。表位通常由化学活性的表面分子群如氨基酸或糖侧链构成，并具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。“抑制性表位”和/或“中和性表位”旨在表示这样的表位，在完整抗原分子的情况下，当被特异于所述表位的抗体结合时，导致体内或体外或含所述分子的生物体中所述分子的生物活性丧失或降低。如本文所用，术语“抗原性表位”定义为多肽的一部分，抗体能与之特异性结合，如本领域众所周知的任一方法所测定的那样，例如常规的免疫测定法。“非线性表位”或“构象表位”包括抗原性蛋白质中不连续的多肽(或氨基酸)，特异于所述表位的抗体与之结合。
如本文所用的术语“kon”旨在表示结合常数或结合速率常数，或正向反应或复合物形成反应的比反应速率，度量单位：M-1sec-1。
如本文所用，术语“koff”旨在表示解离常数或解离速率常数，或抗体自抗体/抗原复合物解离的比反应速率，度量单位：sec-1。
如本文所用，术语“KD”旨在表示特定抗体-抗原相互作用的解离常数。其计算公式如下：
koff/kon＝KD
本发明抗体为高亲和力抗体，一般表现出低koff值。为本发明公开目的计，术语“高亲和力”表示1.6×10-10M至约4.5×10-11M的亲和力或KD值。
术语“效价”为生物活性的度量单位，并表示为IC50，或在实施例1所述的生物测定法中为中和小鼠脾细胞上50％IL-23生物活性所需的抗体有效浓度。
如本文所用，术语“核酸分子”旨在包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链的或双链的，但优选为双链DNA。
如本文所用，就编码结合人IL-23的抗体或抗体部分(如VH、VL、CDR3)的核酸而言的术语“分离的核酸分子”，旨在表示这样的核酸分子，其中编码所述抗体或抗体部分的核苷酸序列不含编码结合不同于人IL-23的抗原的抗体或抗体部分的其他核苷酸序列，其中所述其他序列可天然侧接于人基因组DNA中的核酸。从而，例如，编码抗人IL-23抗体VH区的本发明分离的核酸不含编码结合不同于人IL-23的抗原的其他VH区的其他序列。
如本文所用，术语“载体”旨在表示能够转运与之相连的其他核酸的核酸分子。一类载体为“质粒”，是指环状的双链DNA环，其中可连入附加的DNA区段。另一类载体为病毒载体，其中可向病毒基因组中连入附加的DNA区段。
如本文所用，术语“重组宿主细胞”(或仅仅是“宿主细胞”)旨在表示已向其中引入了重组表达载体的细胞。
单克隆抗体3A8为小鼠单克隆抗体(MAb3A8)，其特异性结合人IL-23p19亚基上的表位。MAb3A8被人源化和优化，产生更高亲和力的抗体，具有强IL-23中和活性，并高度特异于IL-23的p19亚基而非p40亚基。
本发明优选的抗体或其抗原结合部分对MAb3A8的相同表位表现出高亲和力(低KD值)，且结合亲和力优于MAb3A8中所观察到的。定义本发明抗体的结合性能完全在于抗体的可变区，更具体地为抗体的CDR区。
自其他物种人源化抗体的首要推动力在于当将抗体作为治疗剂注射到人类患者中时降低其引发免疫应答的可能性。人源化抗体中采用的人序列越多，免疫原性的风险越低。另外，注射的人源化抗体通常比注射的非人抗体具有更长的循环半衰期。此外，如果期望效应物功能，由于所述效应物部分为人，人源化抗体能够与人免疫***的其他部分更佳地相互作用。可对本文所述的序列优选重链和轻链区进行改变，而不会显著影响抗体的生物性能。这对于抗体恒定区以及可变区中不影响CDR结合IL-23能力的部分而言尤其正确。
此外，如本文所讨论的那样，人框架可变区及其变体可用于本发明。不过，不论所选的框架如何，如果焦点是降低免疫原性风险，则使相对于所选人框架的变化数量最小化。
本发明的人源化抗体可包含或来源于人生殖系轻链框架。在特定实施方案中，所述轻链生殖系序列选自人VK序列，包括但不限于：A1、A10、A11、A14、A17、A18、A19、A2、A20、A23、A26、A27、A3、A30、A5、A7、B2、B3、L1、L10、L11、L12、L14、L15、L16、L18、L19、L2、L20、L22、L23、L24、L25、L4/18a、L5、L6、L8、L9、O1、O11、O12、O14、O18、O2、O4和O8。在某些实施方案中，此轻链人生殖系框架选自V1-11、V1-13、V1-16、V1-17、V1-18、V1-19、V1-2、V1-20、V1-22、V1-3、V1-4、V1-5、V1-7、V1-9、V2-1、V2-11、V2-13、V2-14、V2-15、V2-17、V2-19、V2-6、V2-7、V2-8、V3-2、V3-3、V3-4、V4-1、V4-2、V4-3、V4-4、V4-6、V5-1、V5-2、V5-4和V5-6。
在其他实施方案中，本发明的人源化抗体可以包含或来源于人生殖系重链框架。在特定实施方案中，此重链人生殖系框架选自VH1-18、VH1-2、VH1-24、VH1-3、VH1-45、VH1-46、VH1-58、VH1-69、VH1-8、VH2-26、VH2-5、VH2-70、VH3-11、VH3-13、VH3-15、VH3-16、VH3-20、VH3-21、VH3-23、VH3-30、VH3-33、VH3-35、VH3-38、VH3-43、VH3-48、VH3-49、VH3-53、VH3-64、VH3-66、VH3-7、VH3-72、VH3-73、VH3-74、VH3-9、VH4-28、VH4-31、VH4-34、VH4-39、VH4-4、VH4-59、VH4-61、VH5-51、VH6-1和VH7-81。
在特定实施方案中，轻链可变区和/或重链可变区包含框架区或至少部分框架区(如，含有2个或3个亚区域，如FR2和FR3)。在某些实施方案中，至少FRL1、FRL2、FRL3或FRL4完全是人的。在其他实施方案中，至少FRH1、FRH2、FRH3或FRH4完全是人的。在有些实施方案中，至少FRL1、FRL2、FRL3或FRL4是生殖系序列(如人生殖系)或包含所述特定框架的人共有序列。在其他实施方案中，至少FRH1、FRH2、FRH3或FRH4是生殖系序列(如人生殖系)或包含所述特定框架的人共有序列。在优选的实施方案中，所有的框架区为人框架区。
本发明人源化抗体优选的人重链恒定区氨基酸序列包括IgG1恒定区IgG1[SEQ ID NO：61]或IgG4恒定区[SEQ ID NO：62]。本发明人源化抗体优选的人轻链恒定区氨基酸序列为κ链恒定区[SEQ ID NO：63]。
此外，优选的人重链可变区框架为VH1-24[SEQ ID NO：64]，而优选的人轻链可变区框架为A17[SEQ ID NO：65]。SEQ ID NO：64和65代表具有天然CDR的人生殖系序列。添加了来自MAb3A8的CDR连同最佳匹配的人J区，以形成完整的可变区。应理解，除了上文所述那些之外的其他人重链或轻链恒定区和可变区框架序列，也考虑用于本发明并且是本领域公知的。
本发明包括抗体或其抗原结合部分，其结合IL-23p19亚基上的特异性表位，并中和IL-23活性。从而，利用本文所述的CDR及重链和轻链可变区来制备全长抗体以及功能性片段和类似物，所述片段和类似物维持针对采用特异于IL-23p19亚基的CDR的蛋白质的结合亲和力。
MAb3A8的结合亲和力利用表面胞质团共振(BIAcoreTM)来确定。在这些实验中，BIAcoreTM芯片上的蛋白质A或抗Fc抗体以低密度捕获抗体，并使配体流过芯片。测量芯片表面上质量的增加。这种分析方法能够实时确定结合速率和解离速率，以获得有关结合的亲和力(KD)。MAb3A8的KD值大约300pM(皮摩尔)。本发明人源化抗体的KD值大约45至大约160pM；大约45至大约150pM；大约45至大约100pM；大约50至大约95pM；大约60至大约85pM；以及大约70至大约80pM。优选本发明人源化抗体的KD值低于大约100pM。
本发明抗体或其抗原结合部分中和IL-23的生物活性。利用两种测定法测试了MAb3A8和本发明优选抗体中和IL-23活性的能力[参见实施例1和2]。
本发明还涉及编码抗体的重组DNA，当所述抗体表达时特异性结合人IL-23p19亚基。优选所述DNA编码这样的抗体，当其表达时包含一个或多个本发明的重链和轻链CDR[表1和2]。
表1CDR序列-重链可变区(HCDR)
  FAb   HCDR1   HCDR2   HCDR3
  3A8   GKTFTSYGIN(SEQ ID NO：1)  YIYIGNGYTESNEKFKG(SEQ ID NO：5)  IGAYYGNFDY(SEQ ID NO：12)
  FAb   HCDR1   HCDR2   HCDR3
  1   GKTFFSYGIN(SEQ ID NO：2)   YIYIGGGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：6)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  2   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO.3)   YIYIGGGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO.6)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  3   GKTFFSYGIN(SEQ ID NO：2)   YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  4   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)   YIYIGGGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO.6)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  5   GKTFFSYGIN(SEQ ID NO：2)   YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  6   GKTFYSYGIN(SEQ ID NO.4)   YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  7   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)   YIYIGGGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：6)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  8   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)   YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  9   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)   YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  10   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)   YIYIGGGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：6)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  11   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)   YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  12   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)   YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  13   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)   YIYIGGGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：6)  IGGYYGNFDD(SEQ ID NO.14)
  14   GKTFWSYGIN   YIYIGNGYTEPNPKYKG  IGGYYGNFTD
  FAb   HCDR1   HCDR2   HCDR3
  (SEQ ID NO：3)  (SEQ ID NO：7)  (SEQ ID NO：13)
  15   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGGGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：6)  IG GYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  16   GKTFTSYGIN(SEQ ID NO：1)  YIYIGGGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：6)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  17   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGGGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：6)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  18   GKTFFSYGIN(SEQ ID NO：2)  YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFDD(SEQ ID NO.14)
  19   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGGGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：6)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  20   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFDD(SEQ ID NO.14)
  21   GKTFFSYGIN(SEQ ID NO：2)  YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  22   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFDD(SEQ ID NO.14)
  23   GKTFFSYGIN(SEQ ID NO：2)  YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  24   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  25   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  26   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGGGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：6)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  27   GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFDD(SEQ ID NO.14)
  FAb   HCDR1  HCDR2   HCDR3
  28  GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFTD(SEQ ID NO：13)
  29  GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGGGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：6)  IGGYYGNFDD(SEQ ID NO.14)
  30  GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGNGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：7)  IGGYYGNFHD(SEQ ID NO.15)
  31  GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGT GYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：8)  IGGYYGNFAD(SEQ ID NO：16)
  32  GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGSGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：9)  IGGYYGNFHD(SEQ ID NO：15)
  33  GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGTGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：8)  IGGYYGNFKD(SEQ ID NO：17)
  34  GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGTGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：8)  IGGYYGNFDH(SEQ ID NO：18)
  35  GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGTGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：8)  IGGYYGNFDQ(SEQ ID NO：19)
  36  GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGRGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：10)  IGGYYGNFQD(SEQ ID NO：20)
  37  GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGYGYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：11)  IGGYYGNFED(SEQ ID NO：21)
  38  GKTFWSYGIN(SEQ ID NO：3)  YIYIGT GYTEPNPKYKG(SEQ ID NO：8)  IGGYYGNFED(SEQ ID NO：21)
  共有序列＊  GKTFX1SYGIN(SEQ ID NO：22)  YIYIGX2GYTEX3NX4KX5KG(SEQ ID NO：23)  IGX6YYGNFX7X8(SEQ ID NO：24)
＊X1为T、F、W或Y；X2为N、T、S、R、Y或G；X3为S或P；X4为E或P；X5为F或Y；X6为A或G；X7为D、H、A、K、Q、E或T；而X8为Y、H、Q或D。
表2CDR序列-轻链可变区(LCVR)
  FAb   LCDR1   LCDR2   LCDR3
MAb3A8   KSSQSLLDSDGKTYLN(SEQ ID NO：25)  LVSKLDS(SEQ ID NO：36)  WQGTHFPLT(SEQ ID NO：39)
1   QSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：26)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
2   QSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：27)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
3   QSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：26)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
4   QSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：26)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
5   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
6   QSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：26)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
7   QSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：27)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
8   QSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：26)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40
9   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
10   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
11   RSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：29)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
  12   KSSQSLLISGGNTYLN  LVSKLDQ  WQGTYFPLT
  EAb   LCDR1  LCDR2   LCDR3
  (SEQ ID NO：30)  (SEQ ID NO：37)  (SEQ ID NO：40)
13   KSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：31)  KVSKLDQ(SEQ ID NO：38)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
14   QSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：27)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
15   KSSQ SLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：31)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
16   RSSQSLLISGGPTYLN(SEQ ID NO：32)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
17   RSSQSLLISGGPTYLN(SEQ ID NO：32)  KVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
18   KSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：31)  KVSKLDQ(SEQ ID NO：38)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
19   KSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：31)  KVSKLDQ(SEQ ID NO：38)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
20   KSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：31)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
21   KSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：31)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
22   KSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：31)  KVSKLDQ(SEQ ID NO：38)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
23   QSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：27)  KVSKLDQ(SEQ ID NO：38)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
24   KSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：31)  KVSKLDQ(SEQ ID NO：38)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
25   QSSQSLLISGGPTYLN(SEQ ID NO：33)  KVSKLDQ(SEQ ID NO：38)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
FAb   LCDR1   LCDR2   LCDR3
26   KSSQSLLISGGPTYLN(SEQ ID NO：34)  KVSKLDQ(SEQ ID NO：38)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
27   KSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：35)  KVSKLDQ(SEQ ID NO：38)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
28   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
29   KSSQSLLISGGKTYLN(SEQ ID NO：31)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
30   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
31   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
32   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
33   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
34   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
35   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
36   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
37   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
38   RSSQSLLISGGNTYLN(SEQ ID NO：28)  LVSKLDQ(SEQ ID NO：37)  WQGTYFPLT(SEQ ID NO：40)
共有序列＊＊   X9SSQSLLX10SX11GX12TYLN  X13VSKLDX14  WQGTX15FPLT
  FAb  LCDR1  LCDR2  LCDR3
 (SEQ ID NO：41)  (SEQ ID NO：42)  (SEQ ID NO：43)
＊＊X9为K、Q或R；X10为D或I；X11为D或G；X12为K、N或P；X13为L或K；X14为S或Q；而X15为H或Y。
本发明包括这样的抗体，其包含SEQ ID NO：41、42和43所示的轻链CDR共有序列，以及SEQ ID NO：22、23和24所示的重链CDR共有序列。利用VH框架VH1-24的本发明优选抗体的例示性重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：44-55所示。利用VL框架A17的本发明优选抗体的例示性轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：56-59所示。SEQ ID NO：58和59的氨基酸残基41改变成位于此位点的小鼠残基。而且，本发明的例示性抗体代表如下：SEQ ID NO：62所示的重链恒定区以及SEQ ID NO：63所示的轻链恒定区。
从而，本发明的例示性抗体选自下组：
(a)具有SEQ ID NO：57所示的LCVR、SEQ ID NO：47所示的HCVR、SEQ ID NO：63所示的LCCR以及SEQ ID NO：62所示的HCCR的抗体；
(b)具有SEQ ID NO：57所示的LCVR、SEQ ID NO：48所示的HCVR、SEQ ID NO：63所示的LCCR以及SEQ ID NO：62所示的HCCR的抗体；
(c)具有SEQ ID NO：57所示的LCVR、SEQ ID NO：49所示的HCVR、SEQ ID NO：63所示的LCCR以及SEQ ID NO：62所示的HCCR的抗体；
(d)具有SEQ ID NO：57所示的LCVR、SEQ ID NO：51所示的HCVR、SEQ ID NO：63所示的LCCR以及SEQ ID NO：62所示的HCCR的抗体；
(e)具有SEQ ID NO：57所示的LCVR、SEQ ID NO：52所示的HCVR、SEQ ID NO：63所示的LCCR以及SEQ ID NO：62所示的HCCR的抗体；
(f)具有SEQ ID NO：57所示的LCVR、SEQ ID NO：53所示的HCVR、SEQ ID NO：63所示的LCCR以及SEQ ID NO：62所示的HCCR的抗体；和
(g)具有SEQ ID NO：57所示的LCVR、SEQ ID NO：55所示的HCVR、SEQ ID NO：63所示的LCCR以及SEQ ID NO：62所示的HCCR的抗体。
本发明的中和性抗体通过排列合适的核苷酸序列并在合适的细胞系中表达这些序列，产生合适的抗体基因序列即氨基酸序列而实现。期望的核苷酸序列可利用基于密码子的诱变方法产生。这样的方法允许在寡核苷酸内任何期望的密码子位置处产生任何和所有频率的氨基酸残基。这可以包括期望位置处完全随机的任意20个氨基酸的取代。可选地，可实施此方法，从而在氨基酸链如本发明新CDR序列内的期望位点上获得特定的氨基酸。大体上，可以容易地获得表达任何期望氨基酸序列的合适核苷酸序列，并且利用这样的方法能够再现本发明的新CDR序列。这使得我们能够合成具有任何期望氨基酸序列的多肽如抗体。例如，目前有可能确定所选抗体任何期望结构域的氨基酸序列，并任选地制备其中一个或多个氨基酸被替换为其他期望氨基酸的同源链，以提供大量取代的类似物。
在应用这样的方法时，应理解由于遗传密码的简并性，诸如随机寡核苷酸合成和部分简并寡核苷酸合成的方法将引入有关规定特定位置上特定氨基酸残基的密码子冗余现象，尽管这样的方法可用于提供所有可能氨基酸序列的主集，并筛选作为抗体结构的最佳功能或用于其他目的。可选地，这样的抗体序列可以化学合成或以本领域技术人员熟知的其他方式产生。
根据本文公开的发明，可通过在单条多肽结构中组合一个或多个本文公开的新CDR序列来产生增强的高效价抗体，其中每个CDR经证明独立地导致增强的效价或生物活性。以这种方式，可将多个新氨基酸序列组合进一个抗体的相同或不同CDR中，以产生具有期望水平生物活性的抗体。所述氨基酸编码具有的效应能使所述抗体的koff降低，优选伴随抗体亲和力的增加。更高的效价可以通过更低的koff值实现，即使亲和力保持相同或者在某种程度上降低。这样的抗体最好通过在合适的工程细胞中合成所需的多肽链来生产，其中所述细胞中已掺入编码含有改变的CDR区段的所需多肽链的合适核苷酸序列。作为非限制性的实例，可采用这样的新CDR序列，并利用本文所述的脾细胞生物测定法或人IL-23中和方案对所产生的抗体进行效价或生物活性筛选，在这些方法中抗体对特定抗原性结构如人IL-23p19亚基表现出高亲和力。
与此相反，必须理解并非不同抗体结构域序列内的所有位点都是等同的，因为特定位点上任意类型的取代可能是有益的，也可能是有害的。另外，某些位点上某些类型的氨基酸取代就亲和力而言同样可能是或正或负的。例如，在给定位置上可能无需尝试所有可能的疏水氨基酸。还可能是任何疏水氨基酸都可以。另一方面，给定位点上的酸性或碱性氨基酸可能在测量的亲和力方面提供大幅的摆动。
如已经描述过的那样，KD通过kon与koff常数的比值来测量。例如，3.1×107(M-1s-1)的kon与0.9×10-4(s-1)的koff组合将得到2.9×10-12M的KD。从而，亲和力可通过提高kon或降低koff予以提高。相应地，本发明抗体koff的降低很可能会产生更为有效的治疗剂。
根据前述内容可知，本发明抗体为高亲和力单克隆抗体。不过，这样的抗体仅在其可以来源于克隆或单个细胞类型的意义上是单克隆的。不过，这并不意味指其局限于特定的来源。这样的抗体可以容易地在通常并不产生抗体的细胞如CHO、NSO或COS细胞中进行生产。另外，这样的抗体可在其他类型细胞特别是哺乳动物甚至是细菌和植物细胞中进行生产，遗传改造这样的细胞，以表达并装配形成抗体产物的多肽轻链和重链。另外，可以化学合成这样的链，但是由于它们特异于给定的抗原决定簇，在该术语的使用精神下，仍将构成“单克隆”抗体。从而，如本文所用，术语单克隆抗体更旨在表示抗体分子的特异性和纯度，而不仅仅是用于生产所述抗体的机制。
同样如本文所用，术语效价旨在描述当用于目的治疗用途时，抗体效果对于这样的抗体浓度的依赖性。从而，效价表示就给定抗原而言的生物活性。作为非限制性的实例，通过本文描述的脾细胞生物测定法或人IL-23中和方案来测量抗IL-23抗体的效价或生物活性或生物效应。根据本发明方法生产的抗体的相对效价命名为IC50，通常范围约1pM至约100pM、约1pM至约50pM；约1pM至约25pM。优选IC50约25pM、20pM、15pM、13pM、10pM、8pM、5pM、2pM或1pM。最优选本发明抗体的IC50约20pM。
与此相反，抗体对抗原的亲和力仅仅是kon与koff之比的数学度量。另外，根据本发明方法生产的抗体的KD通常范围约2×10-10M至约25×10-12M，优选低于约160pM、100pM、75pM、50pM或25pM。最优选本发明抗体的KD低于约100pM。
在一个实施方案中，本发明抗体或其抗原结合部分通常含有哺乳动物优选人恒定区和可变区，所述可变区含有重链和轻链框架区以及重链和轻链CDR，其中重链和轻链框架区具有哺乳动物抗体优选人抗体所特有的序列，且其中CDR序列与不同于人的一些物种优选小鼠抗体的CDR相似。
在本发明的一个实施方案中，利用KD值低于约160pM的抗人IL-23中和性抗体Fab片段来增强效价，并将koff值降至低于约1×10-3s-1，优选低于约5×10-4s-1，更优选低于约1×10-4s-1。这样的Fab片段的CDR中存在的氨基酸如表1和2所示。
在具体的实施方案中，本发明涉及KD值低于约160pM的分离的抗体，其中koff值低于约1×10-3s-1，优选低于约5×10-4s-1，且最优选低于约1×10-4s-1(包括其所有组合)。从而，本发明优选的抗体结合成熟人IL-23p19亚基，KD值约160pM或更低，koff速率常数1×10-3s-1或更低，并中和人IL-23活性。
编码本发明抗体的DNA通常包括有效连接于抗体编码序列的表达调控多核苷酸序列，这包括天然结合的或异源的启动子区。优选表达调控序列为能够转化或转染真核宿主细胞的载体中的真核启动子***，但也可以使用原核宿主的调控序列。一旦载体已掺入到合适的宿主细胞系中，则在适于表达核苷酸序列的条件下，以及如果期望的话，在适于回收和纯化轻链、重链、轻/重链二聚体或完整抗体、结合片段或其他免疫球蛋白形式的条件下增殖宿主细胞。
能够最终表达期望抗体的本发明核酸序列可以利用多种熟知技术中的任何技术由多种不同多核苷酸(基因组或cDNA、RNA、合成的寡核苷酸等)和组分(如V、J、D和C区)构成。连接合适的基因组和合成序列是常用的生产方法，但也可以使用cDNA序列。
人恒定区DNA序列可以根据熟知的方法从多种人细胞中分离，但优选从永生化的B细胞中分离。多核苷酸序列的合适来源细胞以及用于免疫球蛋白表达和分泌的宿主细胞可从许多本领域众所周知的来源获得。
如本文所述，除了本文具体描述的抗体之外，可以设计其他“基本上同源的”修饰抗体并利用多种本领域技术人员熟知的重组DNA技术进行生产。例如，框架区可以因几个氨基酸取代、末端及中间添加和缺失等等而与天然序列不同。而且，可以单独或组合利用多种不同的人框架区作为本发明人源化免疫球蛋白的基础。通常，基因修饰可以通过多种熟知的技术如定点诱变而容易地实现。
可选地，可以生产仅包含主要抗体结构的一部分的多肽片段，所述片段拥有一个或多个免疫球蛋白活性(如补体固定活性)。这些多肽片段可由本领域众所周知的方法通过蛋白水解切割完整抗体来生产，或利用定点诱变技术在载体中期望的位点***终止密码子，例如在CH1之后以产生Fab片段，或在铰链区之后以产生F(ab′)2片段。单链抗体可通过以DNA接头连接VL和VH来产生。
如先前所述，在将多核苷酸序列有效连接于(即排布以确保其行使功能)表达调控序列之后，将会在宿主中表达。这些表达载体通常在宿主生物体中可复制，或者作为附加体，或者作为宿主染色体DNA的整合部分。一般而言，表达载体含有选择标记，如四环素、新霉素和二氢叶酸还原酶，以允许检测用期望DNA序列转化了的那些细胞。
大肠杆菌(E.coli)尤其是可用于克隆本发明多核苷酸的原核宿主。其他适于使用的微生物宿主包括杆菌，如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilus)，以及其他肠杆菌科(enterobacteriaceae)，如沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷氏菌属(Serratia)和多种假单胞菌属(Pseudomonas)物种。在这些原核宿主中，人们也可以制备表达载体，所述载体通常含有与宿主细胞相容的表达调控序列(如复制起点)。另外，可以存在任何多种熟知的启动子，如乳糖启动子***、色氨酸(trp)启动子***、β-内酰胺酶启动子***或来自λ噬菌体的启动子***。启动子通常调控表达，任选地具有操纵子序列，并具有核糖体结合位点序列等等，以起始并完成转录和翻译。
除了细菌，其他微生物如酵母也可以用于表达。巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)为优选的宿主，连同合适的载体，具有期望的表达调控序列，如启动子，包括3-磷酸甘油酸激酶或其他糖酵解酶，以及复制起点、终止序列等等。
哺乳动物组织细胞培养物也可用于表达和生产本发明的多肽。实际上优选真核细胞，因为本领域已经开发了许多能够分泌完整免疫球蛋白的合适的宿主细胞系，并且包括CHO细胞系、多种COS细胞系、HeLa细胞、骨髓瘤细胞系、转化的B细胞、人胚肾细胞系或杂交瘤。优选的细胞系为CHO和骨髓瘤细胞系如SP2/0和NS0。
用于这些细胞的表达载体可以包括表达调控序列，如复制起点、启动子、增强子，和必要的加工信息位点，如核糖体结合位点、RNA剪接位点、多聚腺苷酸化位点，以及转录终止子序列。优选的表达调控序列有来源于免疫球蛋白基因、SV40、腺病毒、牛***瘤病毒、巨细胞病毒等的启动子。优选的多聚腺苷酸化位点包括来源于SV40和牛生长激素的序列。
含目的多核苷酸序列(如重链和轻链编码序列和表达调控序列)的载体可通过熟知的方法转染进宿主细胞，这依据细胞宿主的类型而变。例如，氯化钙转染通常用于原核细胞，而磷酸钙处理或电穿孔可用于其他细胞宿主。
抗体一经表达，可以根据标准方法纯化，包括硫酸铵沉淀、离子交换、亲和(如蛋白质A)、反相、疏水相互作用柱层析、凝胶电泳等等。对于药物应用而言，优选纯度至少约90-95％的基本上纯的免疫球蛋白，最优选98-99％或更高的纯度。多肽一经纯化，按照需要可以是部分纯化或均质，则可以如本文所教导的那样在治疗上或预防上应用。
本发明的抗体可如本文所述用于治疗、预防、诊断和研究应用。本发明的抗体可用于诊断与人IL-23表达相关的紊乱或疾病。以相似的方式，本发明的抗体可用于测定，以监测正测试其IL-23相关病症的受试者的IL-23水平。研究应用包括利用本发明抗体和标记以检测样品如人体液或者细胞或组织提取物中IL-23的方法。本发明的抗体可修饰或不经修饰使用，且通过共价或非共价附着可检测部分而予以标记。可检测部分可以是任何能够直接或间接产生可检测信号的部分。
用于测量IL-23的多种常规方法，包括例如ELISA、RIA和FACS，为本领域公知，并为诊断IL-23表达水平改变或异常提供了基础。正常或标准表达值利用任何本领域公知的技术确立，例如，通过通过将含IL-23多肽的样品与例如抗体在适于形成抗原：抗体复合物的条件下混合。抗体直接或间接地由可检测的物质标记，以促进结合或未结合抗体的检测。合适的可检测物质包括多种酶、辅基、荧光物质、发光物质和放射性物质。
为方便起见，本发明的抗体可提供为试剂盒，即预定量试剂的包装组合，并带有实施诊断测定的说明书。在抗体由酶标记的情况下，试剂盒将包括酶所需的底物和辅因子(如提供可检测发色团或荧光团的底物前体)。另外，可包括其他添加剂，如稳定剂、缓冲剂(如封闭缓冲液或裂解缓冲液)等等。多种试剂的相对量可大幅地变动，以提供充分优选测定灵敏度的试剂溶液浓度。特别地，试剂可提供为粉剂形式，通常是冻干粉剂，包括赋形剂，当溶解时将提供适当浓度的试剂溶液。
本发明还涉及治疗经历IL-23介导的炎症紊乱的人的方法，包括向需要的患者施用有效量的特异于人IL-23p19亚基的抗体。本发明的抗体结合并中和IL-23。多种IL-23介导的紊乱包括多发性硬化症、类风湿性关节炎(RA)、移植物抗宿主病、银屑病、克罗恩病(Crohn’s disease)、其他炎症性肠病和癌症。优选本发明涵盖的IL-23抗体用于治疗复发缓解型多发性硬化症，最常见形式的多发性硬化症。
本发明的抗体或其抗原结合部分可以是组合物的形式，所述组合物包括悬浮于可药用稀释剂或赋形剂中的本发明抗体。这些药物组合物可通过本领域公知的实现用于治疗自身免疫疾病、优选多发性硬化症的一般目的用途的任何手段来施用。优选的施用途径为肠胃外，其在文中定义为这样的施用方式：包括静脉内、肌内、腹膜内、胸骨内(intrasternal)、皮下以及关节内注射和输注。更优选施用途径为皮下且每周一次施用。施用剂量将取决于受体的年龄、健康和体重，同步治疗的类型[如果有的话]，治疗频率以及期望效果的性质。
本发明范围内的组合物包括所有这样的组合物，其中抗体或其抗原结合部分的存在量有效地实现治疗多发性硬化症所期望的医学效果。尽管个体需求可能会因患者不同而不同，但是所有组分最佳范围有效量的确定落入具有普通技术的临床医师的能力范围之内。
设计药物组合物以使之适于所选的施用方式，并在适当的情况下使用可药用的赋形剂如缓冲剂、表面活性剂、防腐剂、增溶剂、等渗剂、稳定剂、载体等等。如从业者一般所知晓的那样，《雷氏药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，Mack Publishing Co.，Easton PA，最新版，并入本文作为参考，提供了有关配制技术的概述。
制剂中IL-23抗体的浓度以重量计可以从低至大约0.1％到高至15或20％，并根据所选的具体施用方式主要基于液体体积、粘度、稳定性等进行选择。优选的IL-23抗体浓度范围通常为1至大约100mg/mL。优选10至大约50mg/mL。
制剂可以包括缓冲液。优选缓冲液为柠檬酸缓冲液或磷酸缓冲液或其组合。通常制剂的pH为约4至约8。优选pH为约5至约7.5。可选择制剂的pH以平衡抗体稳定性(化学的和物理的)，并在施用时使患者舒适。制剂也可以包括盐如NaCl。另外，制剂可以包括去垢剂，以防止聚集并有助于维持稳定性。
制剂可以在制备制剂之后进行无菌过滤，或以其他方式使之在微生物学上可接受。可添加防腐剂如间甲酚或苯酚或其混合物，以防止微生物生长和污染。
用于静脉内输注的典型组合物可以具有高达250mL的液体体积如无菌Ringer溶液，以及1-100mg/mL或更高的抗体浓度。本发明的治疗剂可以冷冻或冻干贮存，并在用前在合适的无菌载体中重构。冻干和重构能够导致程度不等的抗体活性损失(如对于常规免疫球蛋白，IgM抗体往往比IgG抗体具有更大的活性损失)。作为补偿可能需要调整剂量。
尽管前述方法似乎最为便利且最适合于施用蛋白质如人源化抗体，但是其他施用技术如透皮施用和口服施用经合适的改造，也可以采用，只要设计合适的制剂即可。另外，可能期望利用生物可降解膜和基质或微型渗透泵或基于葡聚糖珠、藻酸盐或胶原的递药***而采用控制释放制剂。总而言之，存在可用于施用本发明抗体的制剂，并且可根据多种选项予以选择。
可利用标准临床技术优化典型的剂量水平，并且这将取决于施用方式和患者的情况。通常，剂量范围将是10μg/kg/月至10mg/kg/月。
在另一方面，考虑利用本发明的抗体或其抗原结合部分作为药物用于治疗自身免疫疾病。
又在另一方面，还提供了含有用于治疗或预防上述紊乱或病症的物质的制品。所述制品包括容器和标记。例如，合适的容器包括瓶、小瓶、注射器和试管。容器可由多种材料制成，如玻璃或塑料。容器盛有有效预防或治疗紊乱或病症的本发明抗体组合物，并且可以具有无菌入口(例如，容器可以是静脉内溶液袋或带塞子的小瓶，所述塞子可被皮下注射针刺穿)。组合物中的活性药剂为本发明的抗IL-23抗体。容器上或附着在其上的标记表明所述组合物用于治疗所选的病症。所述制品可进一步包括第二容器，其含有可药用缓冲液如磷酸缓冲盐水、Ringer溶液和葡聚糖溶液。所述制品可进一步包括商业或用户角度所期望的其他物质，包括其他缓冲剂、稀释剂、滤器、针、注射器以及带有用途说明的药品说明书(package insert)。
本发明通过如下实施例举例说明，并非旨在以任何方式进行限制。
实施例1
IL-23抑制测定
基于IL-23刺激小鼠脾细胞分泌IL-17的能力，利用小鼠脾细胞测定法来检测IL-23活性的抑制。将本发明的抗体与MAb3A8以及可商购的小鼠单克隆抗体MAB1290(安迪生物科技(R&D Systems))进行比较。
基本方案如下：从1BALB/c或C57BL/6小鼠中取出脾脏，收获脾细胞，并制备单细胞悬液。脾细胞以完全RPMI(含1％非必需氨基酸、1％丙酮酸钠、2.5mM HEPES、1％L-谷氨酸、0.00035％2-巯基乙醇、1％青霉素/链霉素、10％热灭活的血清FCS和50ng/mL人IL-2(安迪生物科技))洗涤和重悬。然后将脾细胞按照500,000细胞/孔接种于96孔培养板，体积100μl。
将浓度10pM的人IL-23(安迪生物科技)与3倍系列稀释的、范围0.001-54μg/mL的测试抗体一起进行预孵育。在另外的测定板中于37℃、5％CO2中进行孵育，为期90分钟。
然后将100μl预孵育的各样品添加至含脾细胞的培养板中，并于37℃、5％CO2中孵育48-72小时。利用小鼠IL-23夹心ELISA试剂盒(M1700，安迪生物科技)测量各培养物上清液中IL-23的量。IC50是中和小鼠脾细胞上50％IL-23生物活性所需的抗体量。
表3显示了小鼠脾细胞测定法(Murine Splenocyte Assay)中与MAB1290相比的MAb3A8和本发明抗体的IC50。作为举例说明的抗体MAbQF20和MAbQF37显著地中和IL-23对小鼠脾细胞分泌IL-17的刺激，IC50值低于20pM。
表3：小鼠脾细胞测定法中测量的IC50
  样品   SEQ ID NOHCVR/LCVR   SEQ ID NOHCCR/LCCR   IC50pM
  MAb3A8   4
  MAB1290   2800
  MAbQF20   48/57   62/63   2
  MAbQF37   52/57   62/63   2
实施例2
人IL-23的中和
将人IL-23与IL-2一起注射到小鼠中，能够刺激脾细胞产生小鼠IL-17。针对IL-23p19亚基的中和性抗体阻断这种IL-17刺激作用，这在如下体内小鼠模型中由先体外后体内(ex vivo)的IL-17产量读出得到证实。
在用小鼠IL-2(mIL-2)加人IL-23(hIL-23)刺激C57BL/6小鼠前22小时，通过注射mIL-2致敏小鼠。在用mIL-2和hIL-23刺激前2小时，向小鼠注射本发明高亲和力的人源化抗体或同种型匹配的(IgG4)对照抗体。
然后设置如下组别：
0时间点，仅腹膜内(i.p.)注射mIL-2(5μg)或mIL-2(5μg)加人IL-23(10μg)
7小时处，仅腹膜内注射mIL-2(10μg)或mIL-2(10μg)加人IL-23(10μg)
23小时处，仅腹膜内注射mIL-2(5μg)或mIL-2(5μg)加人IL-23(10μg)
30小时处，处死小鼠，取出脾脏，收获脾细胞，并制备单细胞悬液。以完全RPMI (含1％非必需氨基酸、1％丙酮酸钠、2.5mM HEPES、1％L-谷氨酸、0.00035％2-巯基乙醇、1％青霉素/链霉素、10％热灭活的胎牛血清)洗涤脾细胞，并按照200,000细胞/200μl/孔接种于用仓鼠抗小鼠CD3e抗体(5μg/ml PBS溶液，4℃过夜)预包被的96孔培养板。然后将96孔板于37℃、5％CO2中孵育48-72小时
利用小鼠IL-17夹心ELISA试剂盒(M1700，安迪生物科技)测量各培养物上清液中IL-17的量。如表4所示，MAbQF20和MAbQF37中和IL-23，并显著阻断IL-17刺激作用。
表4
  抗体/刺激   IL-17水平(pg/mL)实验1   IL-17水平(pg/mL)实验2
  同种型对照/IL-2/IL-23   4100   4500
  MAbQF20/IL-2/IL-23   1600   1500
  MAbQF37/IL-2/IL-23   1600   1700
实施例3
结合亲和力
利用BIAcore测量***检测MAb3A8和本发明抗体的亲和力(表3)。BIAcoreTM是测量分子相互作用的自动化生物传感器***(Karlsson等人(1991)《免疫学方法杂志》(J.Immunol. Methods)145：229-240)。在这些实验中，将抗体以低密度捕获到BIAcoreTM芯片的表面上。利用乙基二甲基氨基丙基碳化二亚胺(EDC)的活性氨基将蛋白质A偶联至羧甲基(CM5)BIAcoreTM传感器芯片的流动池。将蛋白质A在pH 4.5的醋酸钠缓冲液中稀释，并利用EDC固定至CM5芯片的流动池，产生1000响应单元。未反应的位点用乙醇胺封闭。使用流速60μl/min。每个循环注射10μl 2μg/mL本发明的抗体溶液、接着注射浓度逐渐降低的人IL-23(如1500、750、375、188、94、47、23.5、12和0pm)，从而进行多个结合/洗脱循环。用pH 1.5的甘氨酸盐酸盐进行洗脱。利用BIAevaluationTM分析动力学数据。
将MAb3A8的KD值与本发明的抗体以及可商购的抗IL23中和性单克隆抗体MAb1290进行比较(表5)。结果表明作为举例说明的抗体MAbQF20和MAbQF37的亲和力常数比MAb3A8低2-6倍，这些抗体的KD值远远低于约160pM。
表5.抗IL-23抗体对人IL-23的结合性能
由BIAcore(HBS-EP缓冲液，pH 7.4于25℃)测定
 ANTIBODY   kon(M-1s-1)   koff(s-1)   KD(pM)
 MAb3A8   3.0×105   9.12×10-5   300
 MAb1290＊   3.68×104   7.68×10-4   21,400
 MAbQF20   1.55×106   1.15×10-4   74
 MAbQF37   1.55×106   1.53×10-4   98
＊抗人IL-23单克隆抗体，小鼠(安迪生物科技)
实施例4
IL-23表位作图
本发明的人源化抗体所识别的IL-23p19亚基的表位包含在SEQ IDNO：60的氨基酸残基129-159中。通过氨基化合物氘交换质谱(DXMS)来检测表位。
DXMS可用于检测IL-23p19亚基与本发明人源化抗体之间的蛋白质-蛋白质相互作用。利用MAb3A8的Fab片段作为模式结合片段。用此方法鉴定到多个表位，除了SEQ ID NO：60的残基129-159，还包括残基129-152、151-159和134-152，其中所有残基位置均基于SEQ ID NO：60。
利用标准ELISA竞争测定法来确定本发明的人源化抗体与MAb3A8结合相同的表位。候选的人源化抗体用生物素化的MAb3A8以浓度依赖性的方式进行测定。浓度依赖性的竞争表明了相互竞争的抗体结合成熟IL-23上相同的表位。从而，本发明的人源化抗体结合上文所鉴定的IL-23p19亚基表位并中和IL-23活性，由此可用于治疗与IL-23表达相关的炎症紊乱，如自身免疫疾病，优选多发性硬化症。
实施例5
多发性硬化症的EAE模型
EAE是CD4+T细胞介导的中枢神经***(CNS)脱髓鞘疾病，用作为人MS模型。EAE发展的致病机制包括抗原特异性T细胞活化和Th1分化，接着是T细胞和巨噬细胞浸润CNS。IL-23刺激T细胞分泌IL-17，而IL-17促成了多发性硬化症(MS)的病理学。已在MS患者血清中鉴定到水平升高的IL-23，且人类患者MS病变的微阵列分析已表明IL-17增加(Lock等人《自然医学》(Nat.Med.)8：500-508，2002)。许多MS患者血液和脑脊髓液中表达IL-17mRNA的单核细胞(MNC)显著升高，并且与缓解期相比，在MS临床恶化期检测到更高数量的表达IL-17mRNA的血液MNC(Matusevicius等人《多发性硬化症》(Multiple Sclerosis)，5：1-1-104，1999)。
此处描述的实施例表明了抗IL-23抗体在复发缓解型EAE模型中的效果，其中抗小鼠IL-23抗体抑制T细胞分泌IL-17，从而降低活跃EAE模型中的EAE得分。为诱发疾病，在第0天用含50μg PLP 139-151和200μg结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)H37RA的100μl完全弗氏佐剂(CFA)对8-9周龄的SJL/J小鼠于胁腹的两处进行皮下注射。在第一缓解期当天(第23-26天)，随机将小鼠分成3个治疗组：(i)载体(PBS)、(ii)IgG1同种型对照抗体，10mg/kg，和(iii)小鼠抗小鼠IL-23单克隆IgG1抗体，10mg/kg。从第一缓解期当天开始，对动物进行0.2ml腹膜内注射，然后每周一次，为期6周。
从第7天起一直到第60天对小鼠的瘫痪水平进行评分。末次处理后一周处死小鼠。疾病的临床症状于大约第12天至第15天发展，疾病高峰期出现在大约第17天至第22天。由至少两名不了解治疗组特征的记分员根据临床CNS疾病严重程度独立地对个体动物进行主观评分。0分为正常；0.5分：尾部远端无力或痉挛；1分：整个尾部无力；1.5分：尾部无力和后肢虚弱；2.0分：单侧部分后肢瘫痪；2.5分：双侧部分后肢瘫痪；3.0分：双侧整个后肢瘫痪；3.5分：整个后肢和单侧部分前肢瘫痪；4.0分：前肢和后肢全部瘫痪；5.0分：垂死或死亡。与同种型对照组相比，IL-23抗体治疗组疾病得分显著更低。
取出各治疗组小鼠的脾脏，并分别制备脾细胞的单细胞悬液。脾细胞在PLP(用于诱导EAE发作的肽，从而在先体外后体内的实验设置下重新刺激免疫细胞群)的存在下培养2天。2天后，测定培养物上清液中22种细胞因子/趋化因子的浓度(使用林可有限公司(Linco，Inc.)的标准化试剂盒)。同种型对照MAb处理组培养物上清液的IL-17浓度约为450pg/ml，而抗IL-23MAb处理组培养物上清液的IL-17浓度约为175pg/ml。因而在抗IL-23MAb处理组中观察到小鼠IL-17浓度的显著降低(p＜0.002)。
序列表
<110>伊莱利利公司
<120>抗IL-23抗体
<130>X17070
<150>60/711336
<151>2005-08-25
<150>60/772355
<151>2006-02-10
<160>65
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>10
<212>PRT
<213>智人(homo sapiens)
<400>1
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1               5                   10
<210>2
<211>10
<212>PRT
<213>智人
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<210>3
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<212>PRT
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<210>21
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<212>PRT
<213>智人
<400>21
Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe Glu Asp
1               5                   10
<210>22
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<212>PRT
<213>智人
<220>
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<222>(5)..(5)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400>22
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<213>智人
<220>
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<222>(6)..(6)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(11)..(11)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(13)..(13)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(15)..(15)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400>23
Tyr Ile Tyr Ile Gly Xaa Gly Tyr Thr Glu Xaa Asn Xaa Lys Xaa Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>24
<211>10
<212>PRT
<213>智人
<220>
<221>misc_feature
<222>(3)..(3)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(9)..(10)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400>24
Ile Gly Xaa Tyr Tyr Gly Asn Phe Xaa Xaa
1               5                   10
<210>25
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>25
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>26
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>26
Gln Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>27
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>27
Gln Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser Gly Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>28
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>28
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>29
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>29
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser Gly Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>30
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>30
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>31
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>31
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser Gly Gly Lys Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>32
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>32
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser Gly Gly Pro Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>33
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>33
Gln Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser Gly Gly Pro Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>34
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>34
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser Gly Gly Pro Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>35
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<400>35
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>36
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>36
Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser
1               5
<210>37
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>37
Leu Val Ser Lys Leu Asp Gln
1               5
<210>38
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<400>38
Lys Val Ser Lys Leu Asp Gln
1               5
<210>39
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>39
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Leu Thr
1               5
<210>40
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<400>40
Trp Gln Gly Thr Tyr Phe Pro Leu Thr
1               5
<210>41
<211>16
<212>PRT
<213>智人
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(1)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(8)..(8)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(10)..(10)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(12)..(12)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400>41
Xaa Ser Ser Gln Ser Leu Leu Xaa Ser Xaa Gly Xaa Thr Tyr Leu Asn
1               5                   10                  15
<210>42
<211>7
<212>PRT
<213>智人
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(1)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(7)..(7)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400>42
Xaa Val Ser Lys Leu Asp Xaa
1               5
<210>43
<211>9
<212>PRT
<213>智人
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(5)
<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400>43
Trp Gln Gly Thr Xaa Phe Pro Leu Thr
1               5
<210>44
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Lys Thr Phe Trp Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Tyr Thr Glu Pro Asn Pro Lys Tyr
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe Thr Asp Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>45
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>45
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Lys Thr Phe Trp Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                 45
Gly Tyr Ile Tyr Ile Gly Asn Gly Tyr Thr Glu Pro Asn Pro Lys Tyr
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe Thr Asp Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>46
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>46
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Lys Thr Phe Phe Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Ile Gly Asn Gly Tyr Thr Glu Pro Asn Pro Lys Tyr
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe Thr Asp Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>47
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>47
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Lys Thr Phe Trp Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Ile Gly Asn Gly Tyr Thr Glu Pro Asn Pro Lys Tyr
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe His Asp Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>48
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>48
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Lys Thr Phe Trp Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Ile Gly Thr Gly Tyr Thr Glu Pro Asn Pro Lys Tyr
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe Ala Asp Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>49
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>49
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Lys Thr Phe Trp Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Ile Gly Ser Gly Tyr Thr Glu Pro Asn Pro Lys Tyr
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe His Asp Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>50
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>50
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Lys Thr Phe Trp Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Ile Gly Thr Gly Tyr Thr Glu Pro Asn Pro Lys Tyr
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe Lys Asp Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>51
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>51
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Lys Thr Phe Trp Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Ile Gly Thr Gly Tyr Thr Glu Pro Asn Pro Lys Tyr
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
           100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>52
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Lys Thr Phe Trp Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Ile Gly Thr Gly Tyr Thr Glu Pro Asn Pro Lys Tyr
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe Asp Gln Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>53
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>53
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Lys Thr Phe Trp Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Ile Gly Arg Gly Tyr Thr Glu Pro Asn Pro Lys Tyr
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe Gln Asp Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>54
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>54
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Lys Thr Phe Trp Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Ile Gly Tyr Gly Tyr Thr Glu Pro Asn Pro Lys Tyr
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe Glu Asp Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>55
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Lys Thr Phe Trp Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Ile Gly Thr Gly Tyr Thr Glu Pro Asn Pro Lys Tyr
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Phe Glu Asp Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>56
<211>112
<212>PRT
<213>智人
<400>56
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser
            20                  25                  30
Gly Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Gln Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
                85                  90                  95
Thr Tyr Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>57
<211>112
<212>PRT
<213>智人
<400>57
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser
            20                  25                  30
Gly Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Gln Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
                85                  90                  95
Thr Tyr Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
        100                 105                 110
<210>58
<211>112
<212>PRT
<213>智人
<400>58
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Lys Leu Asp Gln Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
                85                  90                  95
Thr Tyr Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>59
<211>112
<212>PRT
<213>智人
<400>59
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ile Ser
            20                  25                  30
Gly Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Gln Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
                85                  90                  95
Thr Tyr Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210>60
<211>189
<212>PRT
<213>智人
<400>60
Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr
1               5                   10                  15
Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln
            20                  25                  30
Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His
        35                  40                  45
Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr
    50                  55                  60
Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln
65                  70                  75                  80
Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly
                85                  90                  95
Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu
            100                 105                 110
Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu
        115                 120                 125
Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr
    130                 135                 140
Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu
145                 150                 155                 160
Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala
                165                 170                 175
Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro
            180                 185
<210>61
<211>329
<212>PRT
<213>智人
<400>61
Ala Ser Phe Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100                 105                 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
        115                 120                 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
    130                 135                 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                165                 170                 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            180                 185                 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        195                 200                 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    210                 215                 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225                 230                 235                 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                245                 250                 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            260                 265                 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Glu Trp Glu Thr Trp Arg Arg
        275                 280                 285
Leu Tyr Trp Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
    290                 295                 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                325
<210>62
<211>329
<212>PRT
<213>智人
<400>62
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
            100                 105                 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
        115                 120                 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
    130                 135                 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                165                 170                 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
            180                 185                 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
        195                 200                 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
    210                 215                 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225                 230                 235                 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                245                 250                 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
            260                 265                 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
        275                 280                 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
    290                 295                 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                325
<210>63
<211>107
<212>PRT
<213>智人
<400>63
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1               5                   10                  15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
            20                  25                  30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Pro Arg Thr Leu Gln
        35                  40                  45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
    50                  55                  60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65                  70                  75                  80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
                85                  90                  95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
            100                 105
<210>64
<211>119
<212>PRT
<213>智人
<400>64
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu
            20                  25                  30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Ile Gly Ala Tyr Tyr Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>65
<211>112
<212>PRT
<213>智人
<400>65
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
            20                  25                  30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly
                85                  90                  95
Thr His Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110

Claims (11)

1. 抗体或其抗原结合部分，其特异性结合IL-23p19亚基，中和IL-23活性，KD值约45pM至约160pM，IC50值约1pM至约20pM。
2. 权利要求1的抗体或其抗原结合部分，其结合位于SEQ ID NO：60所示氨基酸序列氨基酸残基129-159内的IL-23p19亚基。
3. 权利要求1-2中任一项的抗体或其抗原结合部分，为人源化抗体。
4. 权利要求1-3中任一项的抗体或其抗原结合部分，包含选自SEQ IDNO：44-55的重链可变区以及选自SEQ ID NO：56-59的轻链可变区。
5. 权利要求1-4中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体的重链具有选自如下的恒定区：人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定区。
6. 抗体或其抗原结合部分，包含SEQ ID NO：52所示的重链可变区以及SEQ ID NO：57所示的轻链可变区。
7. 权利要求6的抗体，其中所述抗体的重链具有SEQ ID NO：62所示的恒定区，而所述抗体的轻链具有SEQ ID NO：63所示的恒定区。
8. 药物组合物，包括：
(a)根据权利要求1至7中任一项的抗体或其抗原结合部分；和
(b)可药用载体。
9. 对需要的患者进行复发缓解型多发性硬化症治疗的方法，包括向所述患者施用有效量的权利要求1至7中任一项的抗体或其抗原结合部分。
10. 根据权利要求1至7中任一项的抗体或其抗原结合部分，用作药物。
11. 权利要求1至7中任一项的抗体或其抗原结合部分在制备治疗复发缓解型多发性硬化症患者的药物中的用途。
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