JP4879185B2 - 膜のコーティング方法 - Google Patents
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Description
1 湿式コーティング膜についての測定曲線
2 乾式コーティング膜についての測定曲線
R 相対反射率
t 時間
c 濃度
反応性フィルムを血液分離膜に塗布する方法および全血中のトリグリセリドを検出するための対応する試験デバイス
1. コーティングペーストの調製
a) Gantrez溶液:
35.5 gの水を58.5 gの85 mM リン酸緩衝液(pH 7.5)に加える。1.7 gのMgSO4を添加した後、5.2 gのGantrez S 97 (メチルビニルエーテルと無水マレイン酸のコポリマー、GAF Corporation 化学部門)を小分けして加え、Gantrezが完全に膨潤するまで3時間撹拌する。その後4.5 gの32% NaOH溶液を加えて、さらに30分撹拌した後、0.6 gのPVP (ポリビニルピロリドン25,000)を振りかけ、それが完全に溶解するまでさらに20分撹拌する。続いて、ペースト調製物のpHを32% NaOHでpH 6.7〜7.0に調整する。
1.3 gのSymperonic F68 (ポリオキシエチレン-コ-オキシプロピレン、ICI)を5.3 gの水に溶解させるが、その間20分撹拌する。
1.7 gのRefloblau (4-(4-ジメチルアミノフェニル)-5-メチル-2-(3,5-ジメトキシ-4-ヒドロキシフェニル)-イミダゾール二塩酸塩、Roche Diagnostics)を、光を遮断して、23.3 gの35℃温水中に、磁気撹拌機上で15分撹拌することにより溶解する。
光を遮断しながら、最初に22.5 gの85 mM リン酸緩衝液(pH 7.5)を加え、4.3 gのTiO2 (RN 56、Kronos Titan)を450 rpmの溶解撹拌機を使って5分以内で振りかけ、その後さらに5分撹拌する。次いで、d)で調製したRefloblau溶液25 gをTiO2懸濁液に5分以内で添加し、さらに30分撹拌する。その後、使用するまでTiO2/Refloblau部分調製物を遮光して冷蔵庫内に保管する。
1.7 gのATP(アデノシン三リン酸; 二ナトリウム塩)を3.3 gの水に溶解する。
1.3 g DONS(スルホコハク酸ジオクチルナトリウム)を5.3 gのアセトンに溶解する。
0.03 gのMPSC(メチルフェニルセミカルバジド)を遮光しながら0.6 gの1-メトキシ-2-プロパノールに溶解する。
下記の酵素(凍結乾燥品として提供)を15.9 gの85 mM リン酸緩衝液(pH 7.5)中に順次溶解する。その際のそれぞれの酵素の重さ(量)は用いた酵素バッチの比活性により決まる:
40キロ単位(約1.8 g)のグリセロキナーゼ(EC 2.7.1.30、Bacillus stearothermophilus由来; Roche Diagnostics、カタログ番号0 717 398)
34キロ単位(約2.4 g)のコレステロールエステラーゼ(EC 3.1.1.13、Candida cylindracea由来; Roche Diagnostics、カタログ番号0 129 046)
28.9キロ単位(約0.12 g)のペルオキシダーゼ(EC 1.11.1.7、セイヨウワサビ由来; Roche Diagnostics、カタログ番号0 121 606)
27.8キロ単位(約0.44 g)のL-α-グリセロールリン酸オキシダーゼ(EC 1.1.3.21; 組換え体, Roche Diagnostics、カタログ番号1 582 003)。
6.6 gのDONS溶液、g)で調製したもの
5.0 gのATP溶液、f)で調製したもの
51.8 gのTiO2/Refloblau懸濁液、e)で調製したもの
7.0 gの水、TiO2/Refloblau溶液をすすぐためのもの
11.8 gのCelatom MW 25
0.63 gのMPSC溶液、h)で調製したもの
20.66 gの酵素溶液、i)で調製したもの
2.2 gの85 mM リン酸緩衝液、酵素溶液をすすぐためのもの。
反応性フィルムを作製するために以下に記載する方法を用いて、セクション1に記載のように調製したコーティングペーストを血液分離膜(BTS-SP-300型; 物品番号955 00 12 0953、Pall GmbH社(63303 Dreieich)から入手)にコーティングする。
両面接着テープを両側に貼り付けた厚さ約200μmのポリエステルフォイル(いわゆるスペーサー層)を幅5 mm、長さ78 mmの支持フォイル(Melinex)に接着させる。該ポリエステルフォイルから幅1.5 mmの毛細管(毛細管の長さ35 mm)が後続の試験片まで長軸方向に走行する。該試験片はカッティングプロッター(Aristomat 1310型、ARISTO Graphic Systems社製; 22525 Hamburg)を用いて「キスカット」により5.0 mm間隔で前もって切断しておく。メッシュ幅250μmの5 mm×25 mm ポリエステルネット(Petex 07-98/34型、Sefar社製; CH-9410 Heiden)をこのスペーサー/毛細管層に貼り付けて、一方では、毛細管に対する上部境界を形成するようにし、他方では、サンプル/血液が確実に毛細管から上層のアナライト検出ゾーンに送られるようにする。
25μlの血液を試験片機能性モデル上のサンプル点着ゾーン(Scrynellネットの前の毛細管領域)に点着させる。このモデルは反射光度測定により上から(膜の反応性フィルムの面から)測定するもので、主波長660 nmのLEDを装備した光学測定システムを用いて3分間にわたり10秒間隔で測定する。
サンプルを点着させる前に、反応していない各反応性フィルムの反射率を得るために、周囲の光を遮断しながら試験片を一回測定する。このようにして得られた試験片の「ブランク値」を、その後のサンプル物質の存在下での動的測定のための100%相対反射率(R)と設定する。
Claims (11)
- マイクロポーラス構造で吸収性の血液分離膜に、固形分を含む反応性フィルムを塗布する方法であって、前記固形分を含む反応性フィルムは、耐水性、水不溶性のフィルムであり、フィルム形成剤の疎水性マトリックス中に検出すべきアナライトのための検出試薬の少なくとも一部を含み、かつフィルム形成剤の量に基づいて高割合の充填剤を含有するものであり、最初に該膜を水または水溶液で湿らせ、それがまだ湿っているうちに該膜に固形分を含む反応性フィルムを塗布することを特徴とする、上記方法。
- 前記反応性フィルムがフィルム形成剤、フィルム開孔剤としての無機または有機粒状充填剤、および任意成分としての遮光性顔料を含有することを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- フィルム開孔剤とフィルム形成剤の質量比が10:1〜1:1であることを特徴とする、請求項1または2に記載の方法。
- 前記反応性フィルムを前記膜に、湿らせた後、直接塗布することを特徴とする、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記膜を浴含浸により湿らせることを特徴とする、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記水または水溶液が界面活性剤を含有することを特徴とする、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 前記反応性フィルムをナイフコーティングまたはスロットダイコーティングにより塗布することを特徴とする、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法によって得ることができる、固形分を含む反応性フィルムをコーティングしたマイクロポーラス構造で吸収性の血液分離膜であって、前記固形分を含む反応性フィルムは耐水性、水不溶性のフィルムであり、フィルム形成剤の疎水性マトリックス中に検出すべきアナライトのための検出試薬の全部または少なくとも一部を含み、かつフィルム形成剤の量に基づいて高割合の充填剤を含有するものである、上記膜。
- 上部に反応性フィルムをコーティングしたマイクロポーラス構造で吸収性の血液分離膜であって、前記反応性フィルムは耐水性、水不溶性のフィルムであり、該フィルムは、(a)フィルム形成剤の疎水性マトリックス中に検出すべきアナライトのための検出試薬の全部または少なくとも一部を含み、かつ(b)無機または有機粒状で水不溶性、湿潤性の充填剤であって、本質的に光を散乱させず、大分子や細胞が該反応性フィルム中に入り込むのを可能にする充填剤からなるフィルム開孔剤を含み、フィルム開孔剤とフィルム形成剤の質量比が10:1〜1:1であることを特徴とする、上記膜。
- フィルム開孔剤とフィルム形成剤の質量比が5:1〜2:1であることを特徴とする、請求項9に記載の膜。
- 請求項8〜10のいずれか1項に記載の反応性フィルムをコーティングした膜を含む、体液の成分を検出するための診断用エレメント。
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