JP4848755B2 - 凍結保存容器、その製造方法並びに生物試料の凍結保存方法 - Google Patents
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Description
・保存対象が組織である場合、ポートを備えたバッグではバッグ内に組織を無菌的に収容することが困難である。
・保存対象が数少ない***及び卵子である場合、バッグ内における***及び卵子の位置の特定が困難である。
・保存対象が付着性細胞及び微生物である場合、細胞をバッグのポートに結合されたチューブからバッグ内に収容する時に、細胞及び微生物がチューブの内壁に付着する場合があり、細胞をバッグ内に収容させる作業が困難である。
・バッグを構成するフィルムが可撓性であるために、外力の影響などによりバッグ内部の生物試料が損傷するおそれがある。
[1] 生物試料を凍結保存するための容器であって、
口部及び底部を備え、耐寒性プラスチックで構成された容器基部と、
内腔を備え、耐寒性フィルムで構成された封止部を含み、
前記封止部は、前記封止部の上端部が前記口部よりも上に突出し、前記内腔と前記口部が連通するように前記容器基部の口部に結合した
凍結保存容器、
[2] 耐寒性プラスチックの曲げ弾性率が、800〜2000MPaである[1]に記載の凍結保存容器、
[3] 耐寒性フィルムの膜厚が、25〜500μmである[1]に記載の凍結保存容器、
[4] 耐寒性プラスチックの材料がポリプロピレンであり、
耐寒性フィルムが、
低密度ポリエチレン、中密度ポリエチレン、エチレン−酢酸ビニル共重合体及びエチレン−メタクリル酸エステルからなる群より選択されるいずれか1つの高分子層と、
超高分子量ポリエチレンの層
を含むポリエチレン積層系フィルム
である[1]に記載の凍結保存容器、
[5] 耐寒性プラスチックの材料がポリテトラフルオロエチレンであり、
耐寒性フィルムが少なくとも含フッ素高分子層を含む含フッ素高分子系フィルム
である[1]に記載の凍結保存容器、
[6] 含フッ素高分子系フィルムが、さらにポリイミド層を含む[5]に記載の凍結保存容器、
[7] 生物試料を凍結保存するための容器の製造方法であって、
(I) 口部及び底部を備え、耐寒性プラスチックで構成された容器基部を準備する工程;
(II) 内腔を備え、耐寒性フィルムで構成された筒状体を準備する工程;及び
(III) 前記筒状体を、前記筒状体の上端部が前記口部よりも上に突出し、前記内腔と前記口部が連通するように前記容器基部の口部に結合することにより封止部を形成する工程
を含む凍結保存容器の製造方法、
[8] 生物試料を凍結保存するための容器の製造方法であって、
(i) 口部及び底部を備え、耐寒性プラスチックで構成された容器基部を準備する工程;
(ii) 少なくとも1枚の耐寒性フィルムを、前記少なくとも1枚の耐寒性フィルムの一部が前記口部よりも上に突出するように前記容器基部の口部に結合させる工程;及び
(iii) 前記結合された耐寒性フィルムを、前記口部と連通するように内腔を形成することにより封止部を形成する工程
を含む[7]に記載の凍結保存容器の製造方法、
[9] 生物試料を凍結保存容器内に凍結保存する方法であって、
前記凍結保存容器は、
口部及び底部を備え、耐寒性プラスチックで構成された容器基部と、
内腔を備え、耐寒性フィルムで構成された封止部を含み、
前記封止部は、前記封止部の上端部が前記口部よりも上に突出し、前記内腔と前記口部が連通するように前記容器基部の口部に結合した容器であり、
前記方法は、
1)前記生物試料を前記容器基部内に収納する工程;
2)前記封止部を溶着することにより前記容器基部内を密封する工程;及び
3)凍結保存する工程
を含む生物試料の凍結保存方法、
[10] 前記生物試料が、ES細胞、間葉系幹細胞、***細胞又は卵子細胞である[9]に記載の生物試料の凍結保存方法、
並びに、[11] 前記生物試料が、***、卵子、膵島、粘膜上皮組織、角膜上皮組織及び培養角膜組織である[9]に記載の生物試料の凍結保存方法に関する。
(A) 二枚の同形状の長方形フィルムを重ね、重なった二枚のフィルムの平行する二辺を溶着することで内腔を形成した形状(図1);及び
(B) 一枚の長方形フィルムの平行する二辺を重ね、重なった二辺を溶着することで内腔を形成した形状(図2)
などが挙げられる。これらの形状の中でも密封する時の溶着が容易である観点から、(A) 二枚の同形状の長方形フィルムを重ね、重なった二枚のフィルムの平行する二辺を溶着することで内腔を形成した形状が好ましいが、本発明の封止部の形状はこれらの記載に限定されるものではない。
(I) 口部及び底部を備え、耐寒性プラスチックで構成された容器基部を準備する工程;
(II) 内腔を備え、耐寒性フィルムで構成された筒状体を準備する工程;及び
(III) 前記筒状体を、前記筒状体の上端部が前記口部よりも上に突出し、前記内腔と前記口部が連通するように前記容器基部の口部に結合することにより封止部を形成する工程。
(i)口部及び底部を備え、耐寒性プラスチックで構成された容器基部を準備する工程;
(ii)少なくとも1枚の耐寒性フィルムを、前記少なくとも1枚の耐寒性フィルムの一部が前記口部よりも上に突出するように前記容器基部の口部に結合する工程;及び
(iii)前記結合された耐寒性フィルムを、前記口部と連通するように内腔を形成することにより封止部を形成する工程。
1)前記生物試料を前記容器基部内に収納する工程;
2)前記封止部を溶着することにより前記容器基部内を密封する工程;及び
3)凍結保存する工程。
図1の凍結保存容器を製造した。具体的には、まずポリプロピレンを射出成形により口部11及び底部12を備えた円柱形の容器基部1を製造した。射出成形における溶融温度は約210度であった。容器基部1の口部11の外径は約10mm、高さ40mm、容器基部1の内容積は、2.0mlとした。また、この時のポリプロピレンの曲げ弾性率は、約1500MPaであった。
図2の凍結保存容器を製造した。具体的には、まずポリテトラフルオロエチレンを射出成形により口部11及び底部12を備えた円柱形の容器基部1を製造した。射出成形における溶融温度は約300度であった。容器基部1の口部11の外径は約10mm、高さ40mm、容器基部1の内容積は、2.0mlとした。また、この時のポリテトラフルオロエチレンの曲げ弾性率は、約1800MPaであった。
市販のポリプロピレン製のクライオバイアルを用いた。このクライオバイアルは、図6に示すような容器本体に螺合するキャップを備える一般的なバイアルである。
次に実施例1及び2で製造した凍結保存容器並びに比較例1の凍結保存容器を用いて凍結試験を行った。具体的には、実施例1及び2の凍結保存容器内にジメチルスルホキシド(DMSO)5容量%の水溶液2.0mlを注入し、封止部を熱溶着することで内部を密封した。この時の熱溶着温度は、約170度とした。これに対して、比較例1のクライオバイアルはキャップを螺合することにより蓋をした。その後、これらの凍結保存容器を液体窒素に浸漬し、3日間凍結保存を行った。その後、凍結保存容器を取り出し、約37〜40℃の温浴中で解凍作業を行った。これらの一連の作業を各5回ずつ行い、各作業時における凍結保存容器の様子を目視観察した。
11 口部
12 底部
2 封止部
21 内腔
31 容器基部と封止部との結合の際に形成された溶着しろ
32 封止部形成の際に形成された溶着しろ
33 凍結保存容器の封止の際に形成された溶着しろ
4 キャップ
41 螺合溝
5 デバイス
Claims (11)
- 生物試料を凍結保存するための容器であって、
口部及び底部を備え、耐寒性プラスチックで構成された容器基部と、
内腔を備える筒形状で、耐寒性フィルムで構成された封止部を含み、
前記封止部の下端部は、前記内腔と前記口部が連通するように前記容器基部の口部の内壁、壁中及び外壁のいずれかに結合し、
前記封止部は、前記封止部の上端部が前記口部よりも上に突出した溶着しろを有する
凍結保存容器。 - 耐寒性プラスチックの曲げ弾性率が、800〜2000MPaである請求項1に記載の凍結保存容器。
- 耐寒性フィルムの膜厚が、25〜500μmである請求項1に記載の凍結保存容器。
- 耐寒性プラスチックの材料がポリプロピレンであり、
耐寒性フィルムが、
低密度ポリエチレン、中密度ポリエチレン、エチレン−酢酸ビニル共重合体及びエチレン−メタクリル酸エステルからなる群より選択されるいずれか1つの高分子層と、
超高分子量ポリエチレンの層
を含むポリエチレン積層系フィルム
である請求項1に記載の凍結保存容器。 - 耐寒性プラスチックの材料がポリテトラフルオロエチレンであり、
耐寒性フィルムが少なくとも含フッ素高分子層を含む含フッ素高分子系フィルム
である請求項1に記載の凍結保存容器。 - 含フッ素高分子系フィルムが、さらにポリイミド層を含む請求項5に記載の凍結保存容器。
- 生物試料を凍結保存するための容器の製造方法であって、
(I)口部及び底部を備え、耐寒性プラスチックで構成された容器基部を準備する工程;
(II)内腔を備え筒形状の筒状体を準備する工程;及び
(III)前記筒状体の下端部を、前記内腔と前記口部が連通するように前記容器基部の口部の内壁、壁中及び外壁のいずれかに結合し、前記封止部の上端部が前記口部よりも上に突出した溶着しろを有する封止部を形成する工程
を含む凍結保存容器の製造方法。 - 生物試料を凍結保存するための容器の製造方法であって、
(i)口部及び底部を備え、耐寒性プラスチックで構成された容器基部を準備する工程;
(ii)少なくとも1枚の耐寒性フィルムを、前記少なくとも1枚の耐寒性フィルムの一部が前記口部よりも上に突出するように、前記少なくとも1枚の耐寒性フィルムの下端部が前記容器基部の口部の内壁、壁中及び外壁のいずれかに結合させる工程;及び
(iii)前記結合された耐寒性フィルムを、前記口部と連通するように内腔を備える筒形状に形成し、上端部が口部よりも上に突出した溶着しろを有する封止部を形成する工程
を含む凍結保存容器の製造方法。 - 生物試料を凍結保存容器内に凍結保存する方法であって、
前記凍結保存容器は、
口部及び底部を備え、耐寒性プラスチックで構成された容器基部と、
内腔を備える筒形状で、耐寒性フィルムで構成された封止部を含み、
前記封止部の下端部は、前記内腔と前記口部が連通するように前記容器基部の口部の内壁、壁中及び外壁のいずれかに結合され、
前記封止部は、前記封止部の上端部が前記口部よりも上に突出した溶着しろを有する容器であり、
前記方法は、
1)前記生物試料を前記容器基部内に収納する工程;
2)前記封止部の溶着しろを溶着することにより前記容器基部内を密封する工程;及び
3)凍結保存する工程
を含む生物試料の凍結保存方法。 - 前記生物試料が、ES細胞、間葉系幹細胞、***細胞又は卵子細胞である請求項9に記載の生物試料の凍結保存方法。
- 前記生物試料が、***、卵子、膵島、粘膜上皮組織、角膜上皮組織及び培養角膜組織である請求項9に記載の生物試料の凍結保存方法。
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