JP4768224B2 - 1つの試料について複数の測定を実施する方法及び装置 - Google Patents
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Description
(a)前記混合物を、その上に固定された1つ又は複数の脂質/タンパク質層を含む1つ又は複数のアッセイ電極と、好ましくは電極誘導発光アッセイ(好ましくは、電気化学発光アッセイ)に適合したマルチウェルプレートに前記混合物を添加することによって接触させるステップであって、プレートのウェルがアッセイ電極を備えるステップと、
(b)発光を誘発させるのに十分な電圧又は電流を電極に適用するステップと、
(c)放出された発光を測定するステップとを含む。
(a)好ましくは前記混合物を電極誘導発光(好ましくは、電気化学発光)アッセイに適合したマルチウェルプレート中に導入することによって、前記混合物を1つ又は複数のアッセイ電極に接触させるステップであって、前記プレートが1つ又は複数のアッセイ電極を備える複数のウェルを有するステップと、
(b)発光を誘発させるのに十分な電圧又は電流を電極に適用するステップと、
(c)放出された発光を測定するステップとを含む。
(a)好ましくは電極誘導発光(好ましくは、電気化学発光)アッセイに適合したマルチウェルプレート中に前記試料を導入することによって、前記試料をアッセイ電極と接触させるステップであって、前記プレートが1つ又は複数のアッセイ電極を備える複数のウェルを有するステップと、
(b)発光を誘発させるのに十分な電圧又は電流を電極に適用するステップと、
(c)放出された発光を測定するステップとを含む。
(a)多数の試験用化合物を選択するステップと、
(b)(上述したマルチウェルプレート及び/又は装置のどれか1つを用いて)前記多数の化合物を生物活性についてスクリーニングして、1つ又は複数の生物活性化合物を見出すステップと、
(c)前記1つ又は複数の生物活性化合物を改変して毒性を低減し、かつ/又は生物活性を高め、それによって1つ又は複数の改変生物活性化合物を形成するステップとを含む。
以下の実施例は、本発明の範囲内にある電極、プレート、キット及び方法のいくつかを説明するものである。これらの実施例が、決して本発明を限定するものと考えるべきでないことは言うまでもない。本発明に関する多数の変更形態及び改変形態が、当業者によって不必要な実験をすることなくなされ得る。
多層プレートの底部を、0.007”厚みのMylarポリエステルシート上に電極及び電気接点をスクリーン印刷することによって調製した。Mylarシートを、まずCO2レーザで切断して、導電性スルーホール(すなわち、その後導電性インクを充填して導電性にされる穴)、及びプレート底部をプレート上部と整列させるために使用した整列ホールを形成した。適切にパターン形成された銀インク層(Acheson 479ss)及びカーボンインク上層(Acheson 407c)をスクリーン印刷して、Mylarシートの底部に電気接点を形成させた。カーボンインク層を銀インク層よりもわずかに(0.03cm(0.01インチ))大きくして銀フィルムの縁部が露出するのを防止した。3層のカーボンインクを用いて確実に銀が露出しないようにした以外は同様にしてMylarフィルム上部に作用電極及び対電極を形成させた。導電性スルーホールは、これらのスクリーン印刷ステップ中に導電性インクで充たされた。続いて、誘電体インクを電極層上に印刷して、作用電極の活性露出表面を画成した。一般に、9つのプレートの底部を、18”×12”のMylarシート上に同時に印刷した。スクリーン印刷ステップ中の典型的な見当合わせ許容誤差(registrational tolerance)は、基板上部で+/−0.018〜0.020cm(0.007〜0.008インチ)であり、底部で+/−0.03cm(0.010インチ)であった。印刷された対電極帯と作用電極帯の間隔を>0.025cm(0.010インチ)に維持して短絡が形成されるのを防止した。場合によっては、パターン形成されたプレート底部を、大面積の平面電極で改変されたプラズマチャンバ(Series B、Advanced Plasma Systems、St.Petersburg、FL)中で酸素プラズマ(2000W、200mtorr)で5分間処理して、作用電極をコンディショニングした。
個々の正方形セクターに電気的に接触するように設計された機器でプレートを読み取った。セクターから放出されたECLを画像化するために用いた冷却CCDカメラ(VersArray:1300F、Princeton Instruments)に連結された(直径が4.1”のフロントエレメントを有する)テレセントリックレンズを用いて、機器と電気的に接触しているセクターの位置を合わせた。カメラには、寸法がほぼ2.6cm×2.6cmで1340×1300ピクセルのCCDチップを使用した。ピクセルサイズは、0.02mm×0.022mmであった。光路中に光学的バンドパスフィルターを用いて、ルテニウム−トリス−ビピリジンの放出プロファイルに一致する光を選択した。6つのセクターすべてを読み取りできるように平行移動テーブルを用いてプレートをテレセントリックレンズの下に平行移動させた。画像分析ソフトウエアを用いて、ウェル又はウェル内のアッセイドメインを確認し、特定のウェル又はドメインからのECLを定量した。特に示さない限り、およそ2〜5Vで3秒間の線形電圧スキャンを用いてスクリーン印刷炭素作用電極を有するプレートからECLを誘発させた。ECLは、(バックグラウンド光レベル及び検出器オフセットが補正された後)電圧スキャン期間にわたって測定された全積分光シグナルとして記録される。
多数の核酸プロセシング酵素が、核酸合成(例えば、ポリメラーゼ又はリガーゼ)活性とヌクレアーゼ活性の両方を有する。一例は、RNA依存性DNAポリメラーゼ(RDDP)活性とリボヌクレアーゼH活性の両方を有する酵素であるHIV逆転写酵素(RT)である。以下の例に、MDMWプレートの1つのウェル中で両方のHIV RT活性を測定するECLアッセイを示す。
ECL測定用に構成され、各ウェル中に露出した作用電極表面上に4つの流体封じ込め領域を有するMDMWプレート(実施例1のプレートC)を、4つの呼吸器疾患に特異的な抗体、すなわち、インフルエンザA、インフルエンザB、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)、及びStreptococcus Pyogenes(Strep A)で被覆した。各抗体で被覆された1つのアッセイドメインを各ウェルが含むように、捕捉抗体溶液(リン酸緩衝食塩水PBS中50ug/ml)を、BioDotディスペンサを用いてウェル内の流体封じ込め領域に分注した(250nl/スポット)。溶液を乾燥させ、5%BSA溶液を添加し(200ul/ウェル)、プレートを終夜冷蔵した。プレートをPBSで洗浄してから使用した(4×250ul/ウェル)。
この実施例では、ECL測定用に構成され、各ウェル中に露出した作用電極表面上に4つの流体封じ込め領域を有するMDMWプレート(実施例1のプレートC)を用いた。以下の溶液、すなわち、0.0075%Tritonを含むPBS緩衝液に希釈した1mg/mlポリ−Glu:Tyr(4:1)(PGT)、0.0075%Tritonを含むPBS緩衝液に希釈した1mg/mlミエリン塩基性タンパク質(MBP)、0.0075%Tritonを含むPBS緩衝液に希釈した0.5mg/mlアビジン、5%BSAのPBS溶液のうち1つの250nLを各流体封じ込め領域に入れた。次いで、プレートを終夜乾燥させ、5%BSA溶液中4℃で2日間ブロックした。プレートを洗浄して遮断薬を除去したから使用した。
この実施例において、出願人らは、結合ドメイン面積の関数として、ビオチン及びRu(bpy)3のスルホン化誘導体で標識されたウシIgG(タンパク質1つ当たり約2.3標識)のECL測定の検出限界を測定した。結合ドメインを、電極の1つ又は複数の露出領域(流体封じ込め領域)上にアビジンを被覆することによって(電極表面にアビジン溶液を微量分注し、乾燥させることによって)形成させた。以下の5つのプレートタイプを準備した。
標準96:アビジンで被覆された単一の大きな結合ドメインを有する実施例1のプレートタイプB。
4−スポット−1:3つがアビジンで被覆されて結合ドメインを形成している4つの小さな流体封じ込め領域を有する実施例1のプレートタイプC。
4−スポット−3:1つのみがアビジンで被覆されて結合ドメインを形成している4つの小さな流体封じ込め領域を有する実施例1のプレートタイプC。
7−スポット−1:3つがアビジンで被覆されて結合ドメインを形成している7つのより小さな流体封じ込め領域を有する実施例1のプレートタイプD。
7−スポット−3:1つのみがアビジンで被覆されて結合ドメインを形成している7つのより小さな流体封じ込め領域を有する実施例1のプレートタイプD。
4種の異なるサイトカイン−インターロイキン1β(IL−1β)、インターロイキン6(IL−6)、インターフェロンγ(IFN−γ)及び腫瘍壊死因子α(TNF−α)−のサンドイッチイムノアッセイを、実施例1のプレートCに対して記載した設計及び手順に従って作製されたプレートのウェルにおいて、同時に実施した。各ウェル内の流体封じ込め領域上に抗体溶液を微量分注することによって別個のアッセイドメイン中に(目的分析物の1つにそれぞれ選択的である)4つの捕捉抗体をパターン形成させ(領域1つ当たり1つの抗体)、作用電極表面に抗体を吸着させた。(IL−1β及びTNF−αの場合32ug/mL、IL−6及びIFN−γの場合64ug/mLの濃度で)抗体を含有する溶液(0.25uL)及び0.1%BSAのリン酸緩衝食塩水溶液を、ソレノイドバルブ制御マイクロディスペンサ(Biodot Dispensor、Cartesian Technologies)を用いて流体封じ込め領域上に分注し、蒸発乾燥させた。この体積の抗体は、流体封じ込め領域内の露出電極表面全体に拡散するのに十分であるが、誘電体層によって形成される境界を超えて拡散しないのに十分な少なさであった。作用電極上の抗体溶液を乾燥後、プレート上部を取り付け、5%(w/v)ウシ血清アルブミン(BSA)を含有するリン酸緩衝食塩水(PBS)溶液をウェルに充填することによって、余分な未結合抗体を取り除いた(及び被覆されていない表面をブロックした)。プレートをブロッキング溶液と共に終夜4℃でインキュベートし、次いで、PBSで洗浄した。
この実施例では、MDMWプレートの1つのウェルにおいて全(リン酸化及び非リン酸化)EGF受容体(T−EGFR)及びリン酸化EGF受容体(P−EGFR)を測定するECLアッセイを示す。
1.A−431細胞を150mm組織培養皿で培養し、血清を終夜飢餓状態においた(1%ペニシリン−ストレプトマイシン及び1%ピルビン酸ナトリウムを補充したDMEM)。
2.無血清培地で2回すすいだ後、1枚の皿に、無血清培地中200nM EGFで15分間室温で刺激を与えた。刺激を与えないプレートには、無血清培地のみを加えた。
3.細胞を2体積のPBSですすいだ。
4.改変RIPA緩衝液(アッセイ初期に添加した新しいオルトバナジン酸ナトリウム)2mlを皿に添加した。RIPA緩衝液には、緩衝液10mL当たり1錠の新しいプロテアーゼ阻害錠剤を含む水中に、1mM純粋オルトバナジン酸ナトリウム、150mM NaCl、50mM Tris、6mMデオキシコレート、0.5%NP40が含まれていた)。細胞をRIPAと共に10分間氷上でインキュベートした。
5.上清を収集し、Pierce BCAタンパク質アッセイによって定量した。
1.(EGFRの細胞質ドメインに特異的な)T−EGFRのビオチン標識抗体及びP−EGFR(抗ホスホチロシン)を、予め1当量のアビジンと結合させ(1時間)、MDMWプレート(実施例1のプレートC)の各ウェルにおける4つの流体封じ込め領域のうちの2つに分注して(領域1つ当たり1つの抗体、0.5pmol/領域0.25uL)付着させた。残り2つの流体封じ込め領域を、非特異的結合及び交差反応の対照として用いた。1つの領域は、アビジンのみで被覆された。他の領域は、露出したままであったが、最終的にBSAでブロックした。
2.抗体を乾燥させた。次いで、ウェル1つ当たり200μlの5%BSA水溶液で1時間室温でウェルをブロックした。
3.プレートをdH20で4回洗浄した。
4.溶解物50μg/ウェルを96ウェルプレートの各ウェルに添加し、1時間断続的に振とうさせた。
5.プレートをdH20で4回洗浄した。
6.Sulfo−Tag(商標)標識α−EGFR抗体(33nM50uL)を添加し、結合反応を1時間室温で振とうさせながら進めた。プレートをdH20で4回洗浄した。
7.400mM gly−glyアッセイ緩衝液を含むウェル1つ当たり100μlの100mM TPAをECL分析直前に添加した。
8.ECL検出によってプレートを分析した。
この実施例では、非リン酸化EGF受容体とチロシン1173がリン酸化されているEGF受容体との両方をMDMWプレートの単一のウェルにおいて測定するECLアッセイを示す。
1.チロシン1173が自己リン酸化されているEGF受容体に特異的な抗体(pY1173)及びチロシン1173がリン酸化されていないEGF受容体に特異的な抗体(Y1173)を、MDMWプレート(実施例1のプレートC)の各ウェルにおける4つの流体封じ込め領域のうち2つに微量分注し(領域1つ当たり1つの抗体、0.2pmol/領域0.25uL)、受動吸着させて付着させた。残り2つの流体封じ込め領域を、非特異的結合及び交差反応の対照として用いた。これらの領域は露出したままであったが、最終的にBSAでブロックした。
2.抗体を終夜乾燥させた。次いで、ウェル1つ当たり200μlの5%BSA水溶液で1時間室温でウェルをブロックした。
3.プレートをPBSで洗浄した。
4.溶解物5μg/ウェルを96ウェルプレートの各ウェルに添加し、プレートを3時間断続的に振とうさせた。
5.プレートをPBSで洗浄した。
6.受容体の細胞外ドメインに対するSulfo−TAG標識α−EGFR抗体(33nM溶液50uL)を添加し、結合反応を1時間室温で振とうさせながら進めた。プレートをPBSで4回洗浄した。
7.400mM gly−glyアッセイ緩衝液を含む100mM TPAを、ECL分析直前にウェル1つ当たり150μl添加した。
8.Sector HTS(商標)プレートリーダー(Meso Scale Discovery)を用いたECL検出によってプレートを分析した。
この実施例では、ECL測定用に構成され、各ウェル中に露出した作用電極表面上に4つの流体封じ込め領域を有するMDMWプレート(実施例1のプレートC)を用いた。4つの以下の溶液、すなわち、(i)0.015%Tritonを含むPBS緩衝液に希釈した0.5mg/mlポリ−Glu:Tyr(4:1)(PGT)、(ii)0.015%Tritonを含むPBS緩衝液に希釈した0.2mg/mlミエリン塩基性タンパク質(MBP)、(iii)0.015%Tritonを含むPBS緩衝液に希釈した0.3mg/mlストレプトアビジン、(iv)0.15%Tritonを含むPBS緩衝液に希釈した0.3mg/mlBSA溶液のうち1つの250nLを4つの流体封じ込め領域の各々に入れた。次いで、プレートを、周囲条件で1〜1.5時間乾燥させ、0.1%Tritonを含有するPBSで強力に洗浄し、水で洗浄し、5%BSA溶液中で少なくとも2時間室温でブロックした。洗浄には、ウェル中に洗浄溶液の一定の流れを形成し、余分なペプチド/タンパク質を電極表面から極めて効率的に洗浄除去可能であるBiotechの96ウェルプレートウォッシャーを用いた底部洗浄が含まれる。Triton含有溶液を用いて洗浄した後に3回洗浄して痕跡量のTritonを除去した。ブロッキング後、プレートを再度洗浄して遮断薬を除去してから使用した。
(1) 本発明の一実施態様では、複数のアッセイドメインを含む発光アッセイを実施するためのアッセイモジュールであって、前記アッセイドメインが、第1の試薬を有する第1のアッセイドメインと第2の試薬を有する第2のアッセイドメインとを含み、前記第1のアッセイドメインが前記第2のアッセイドメインの少なくとも10倍明るい発光を生成可能であり、前記第1のアッセイドメインと前記第2のアッセイドメインが隣接しておらずかつ/又は少なくとも1つの他のアッセイドメインによって分離されて、前記第1のアッセイドメインから放出される発光と前記第2のアッセイドメインから放出される発光との干渉が低減されたアッセイモジュールが提供される。
(2) また、本発明の他の実施態様では、複数のアッセイドメインを含むアッセイモジュールにおいて複数の分析物のアッセイを実施する方法であって、前記アッセイドメインが、第1の分析物を測定するための第1の試薬を有する第1のアッセイドメインと第2の分析物を測定するための第2の試薬を有する第2のアッセイドメインとを含み、前記第1のアッセイドメインが前記第2のアッセイドメインの少なくとも10倍明るい発光を生成可能であり、前記第1のアッセイドメインと前記第2のアッセイドメインが隣接しておらずかつ/又は少なくとも1つの他のアッセイドメインによって分離されて、前記第1のアッセイドメインから放出される発光と前記第2のアッセイドメインから放出される発光との干渉が低減されたアッセイモジュールが提供される。
(3) 前記第1のアッセイドメインが前記第2のアッセイドメインの少なくとも10倍の捕捉試薬を含む、(1)に記載の方法。
(4) 前記第1のアッセイドメインが前記第2のアッセイドメインの少なくとも10倍多い試薬を含む、(2)に記載の方法。
(5) 前記第1のアッセイドメインが前記第2のアッセイドメインの少なくとも100倍明るい発光を生成可能である、(1)に記載のアッセイモジュール。
(6) 前記第1のアッセイドメインが前記第2のアッセイドメインの少なくとも1,000倍明るい発光を生成可能である、(1)に記載のアッセイモジュール。
(7) 前記第2のアッセイドメインが、放出された発光を減少させる1つ又は複数の特性を有する、(1)、(3)、(5)又は(6)に記載のアッセイモジュール。
(8) 前記1つ又は複数の特性が、放出された発光を減少させる捕捉試薬及び/又は放出された発光を減少させる標的分析物を含む、(7)に記載のアッセイモジュール。
(9) 前記第1のアッセイドメインが少なくとも1つの他のアッセイドメインによって前記第2のアッセイドメインから分離されている、(1)、(3)、(5)、(6)、(7)又は(8)に記載のアッセイモジュール。
(10) 前記第1のアッセイドメインと前記第2のアッセイドメインが別個に指定可能である、(1)、(3)、(5)、(6)、(7)、(8)又は(9)に記載のアッセイモジュール。
(11) 前記アッセイモジュールが、複数のウェルを備えるマルチウェルプレートであって、前記ウェルの各々が前記複数のアッセイドメインのコピーを有する、(1)、(3)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)又は(10)に記載のアッセイモジュール。
(12) 複数のアッセイドメインを含む発光アッセイを実施するためのアッセイモジュールを作製する方法であって、前記アッセイドメイン間の干渉が低減するように構成されたパターンで前記アッセイドメインを形成するステップを含む方法。
(13) 前記パターンが、前記アッセイドメインから放出される発光間の干渉が低減するように構成されている、(12)に記載の方法。
(14) 前記パターンが、前記アッセイドメインにおいて起こる反応間の干渉が低減するように構成されている、(12)又は(13)に記載の方法。
(15) 前記アッセイドメインを形成する前記ステップが、第2のアッセイドメインに隣接しないように第1のアッセイドメインを配置するステップを含む、(12)、(13)又は(14)に記載の方法。
(16) 前記アッセイドメインを形成する前記ステップが、第2のアッセイドメインに隣接しないように第1のアッセイドメインを配置するステップを含み、前記第1のアッセイドメインにおいて起こる反応又は前記第1のアッセイドメインに固定された試薬が、(i)前記第2のアッセイドメインにおいて生成される発光、(ii)前記第2のアッセイドメインにおいて起こる反応、及び/又は(iii)前記第2のアッセイドメインに固定された試薬と干渉する、(12)、(13)又は(14)に記載の方法。
(17) 前記パターンが前記発光アッセイの性能を最適化するように構成されている、(12)、(13)、(14)、(15)又は(16)に記載の方法。
(18) 前記パターンが前記アッセイドメインの配列、間隔、サイズ及び濃度を含む、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)又は(17)に記載の方法。
(19) パネルの分析物を測定するための複数のアッセイドメインを含むアッセイモジュールであって、前記パネルがサイトカイン及び/又はそれらの受容体;成長因子及び/又はそれらの受容体;セカンドメッセンジャー;乱用薬物;治療薬物;自己抗体;アレルゲン特異的抗体;腫瘍マーカー;心臓マーカー;止血に関連するマーカー;急性ウイルス肝炎感染マーカー;アルツハイマー病マーカー;骨粗しょう症マーカー;受胎能マーカー;うっ血性心不全マーカー;甲状腺障害マーカー;前立腺癌のマーカー;サイトカイン、成長因子、アポトーシス経路の成分、P450酵素の発現、腫瘍関連遺伝子の発現をコードするmRNAのmRNAレベルを測定するための核酸アレイ;個体、病原体、腫瘍細胞の遺伝形質を決定するための核酸アレイから選択される分析物カテゴリの成分である複数の分析物を含むアッセイモジュール。
(20) 前記アッセイドメインが、(i)分析物又は分析物アナログ、(ii)分析物に結合する結合試薬、及び/又は(iii)分析物の触媒活性基質を含む、(19)に記載のアッセイモジュール。
(21) アッセイモジュールを用いて複数の分析物のアッセイを実施する方法であって、
(a)前記アッセイモジュール内の複数のアッセイドメインと試料を接触させるステップであって、前記複数のアッセイドメインによってパネルの分析物を測定することが可能であり、前記パネルが、サイトカイン及び/又はそれらの受容体;成長因子及び/又はそれらの受容体;セカンドメッセンジャー;乱用薬物;治療薬物;自己抗体;アレルゲン特異的抗体;腫瘍マーカー;心臓マーカー;止血に関連するマーカー;急性ウイルス肝炎感染マーカー;アルツハイマー病マーカー;骨粗しょう症マーカー;受胎能マーカー;うっ血性心不全マーカー;甲状腺障害マーカー;前立腺癌のマーカー;サイトカイン、成長因子、アポトーシス経路の成分、P450酵素の発現、腫瘍関連遺伝子の発現をコードするmRNAのmRNAレベルを測定するための核酸アレイ;個体、病原体、腫瘍細胞の遺伝形質を決定するための核酸アレイから選択される分析物カテゴリの成分である複数の分析物を含むステップと、
(b)前記アッセイドメインにおいて前記分析物を測定するステップとを含む方法。
(22) 電気化学発光アッセイモジュールを用いて電気化学発光アッセイを実施する方法であって、
(a)前記モジュール内の複数のアッセイドメインと試料を接触させるステップであって、前記複数のアッセイドメインによってパネルの分析物を測定することが可能であり、前記パネルがサイトカイン及び/又はそれらの受容体;成長因子及び/又はそれらの受容体;セカンドメッセンジャー;乱用薬物;治療薬物;自己抗体;アレルゲン特異的抗体;腫瘍マーカー;心臓マーカー;止血に関連するマーカー;急性ウイルス肝炎感染マーカー;アルツハイマー病マーカー;骨粗しょう症マーカー;受胎能マーカー;うっ血性心不全マーカー;甲状腺障害マーカー;前立腺癌のマーカー;サイトカイン、成長因子、アポトーシス経路の成分、P450酵素の発現、腫瘍関連遺伝子の発現をコードするmRNAのmRNAレベルを測定するための核酸アレイ;個体、病原体、腫瘍細胞の遺伝形質を決定するための核酸アレイから選択される分析物カテゴリの成分である複数の分析物を含み、前記アッセイドメインが1つ又は複数の作用電極を備え又はそれに隣接しているステップと、
(b)前記複数のアッセイドメインにおいて電気化学発光を誘発させるステップと、
(c)放出された電気化学発光を検出するステップと、を含む方法。
(23) パネルの分析物を測定する複数の結合ドメインを含むアッセイモジュールにおいてリガンドの特異的結合アッセイを実施する方法であって、前記パネルがサイトカイン及び/又はそれらの受容体;成長因子及び/又はそれらの受容体;セカンドメッセンジャー;乱用薬物;治療薬物;自己抗体;アレルゲン特異的抗体;腫瘍マーカー;心臓マーカー;止血に関連するマーカー;急性ウイルス肝炎感染マーカー;アルツハイマー病マーカー;骨粗しょう症マーカー;受胎能マーカー;うっ血性心不全マーカー;甲状腺障害マーカー;前立腺癌のマーカー;サイトカイン、成長因子、アポトーシス経路の成分、P450酵素の発現、腫瘍関連遺伝子の発現をコードするmRNAのmRNAレベルを測定するための核酸アレイ;個体、病原体、腫瘍細胞の遺伝形質を決定するための核酸アレイから選択される分析物カテゴリの成分である複数の分析物を含む方法。
(24) 前記パネルが成長因子受容体のパネルである、(23)に記載の方法。
(25) 複数のアッセイドメインを含むアッセイモジュールであって、前記アッセイドメインが、分析物の第1の形態に結合可能な第1の試薬を含む第1のアッセイドメインと前記分析物の第2の形態に結合可能な第2の試薬を含む第2のアッセイドメインとを含むアッセイモジュール。
(26) 2つの形態の分析物を測定する方法であって、
(a)複数のアッセイドメインを含むアッセイモジュールに試料を導入するステップであって、第1のアッセイドメインが、分析物の第1の形態に結合可能な第1の試薬を含み、第2のアッセイドメインが、前記分析物の第2の形態に結合可能である第2の試薬を含むステップと、
(b)前記第1のアッセイドメイン及び前記第2のアッセイドメインへの分析物の結合を測定して前記第1の形態及び第2の形態の量を測定するステップとを含む方法。
(27) 前記第2の形態が前記第1の形態の切断された一部である、(26)に記載の方法。
(28) 前記第2の形態が前記第1の形態の切断された一部である、(25)に記載のアッセイモジュール。
(29) 前記第2の形態が前記第1の形態のユビキチン結合した形態である、(25)に記載のアッセイモジュール。
(30) 前記分析物の前記第2の形態が前記第1の形態のリン酸化体である、(25)に記載のアッセイモジュール。
(31) 前記第2の形態が前記第1の形態の結合体(bound form)である、
(25)に記載のアッセイモジュール。
(32) 前記第2のアッセイドメインが前記第1の形態にも結合可能である、(25)に記載のアッセイモジュール。
(33) 前記第1の形態が非グリコシル化タンパク質であり、前記第2の形態がグリコシル化タンパク質である、(25)に記載のアッセイモジュール。
(34) 前記第1の形態が遊離PSAであり、前記分析物の前記第2の形態が結合PSAである、(25)に記載のアッセイモジュール。
(35) 前記第1の形態及び前記第2の形態と結合可能である検出試薬をさらに含む、(25)、(26)、(27)、(28)、(29)、(30)、(31)、(32)、(33)又は(34)に記載のアッセイモジュール。
(36) アッセイを実施するためのアッセイモジュールであって、
(a)第1の分析物に結合可能である第1の試薬を有する第1のアッセイドメインと、
(b)前記第1の分析物の改変形態に結合可能である第2の試薬を有する第2のアッセイドメインと、
(c)第2の分析物に結合可能である第3の試薬を有する第3のアッセイドメインと、
(d)前記第2の分析物の改変形態に結合可能である第4の試薬を有する第4のアッセイドメインとを含むアッセイモジュール。
(37) 前記アッセイモジュールが、さらに、前記第1の分析物、前記第1の分析物の前記改変形態、前記第2の分析物、及び前記第2の分析物の改変形態に結合可能である標識試薬を含む、(36)に記載のアッセイモジュール。
(38) 前記分析物の第1の形態に結合可能である第1の試薬を含む第1のアッセイドメインと前記分析物の第2の形態に結合可能である第2の試薬を含む第2のアッセイドメインとを有するアッセイモジュールにおいて単一試料中の2つ以上の分析物形態を測定する方法であって、
(a)前記試料を、前記第1のアッセイドメイン及び前記第2のアッセイドメイン、並びに前記分析物の前記第1の形態及び前記第2の形態に結合可能である標識試薬と接触させるステップと、
(b)前記標識試薬から放出されたシグナルを検出するステップとを含む方法。
(39) 未結合標識試薬を除去する洗浄ステップをさらに含む、(38)に記載の方法。
(40) アッセイを実施するためのアッセイモジュールであって、
(a)第1の分析物に結合可能である第1の試薬を有する第1のアッセイドメインと、
(b)前記第1の分析物の改変形態に結合可能である第2の試薬を有する第2のアッセイドメインと、
(c)第2の分析物に結合可能である第3の試薬を有する第3のアッセイドメインと、
(d)前記第2の分析物の改変形態に結合可能である第4の試薬を有する第4のアッセイドメインとを含むアッセイモジュール。
(41) 前記アッセイモジュールが、さらに、前記第1の分析物、前記第1の分析物の前記改変形態、前記第2の分析物、及び前記第2の分析物の改変形態に結合可能である標識試薬を含む、(40)に記載のアッセイモジュール。
(42) 前記分析物の第1の形態に結合可能である第1の試薬を含む第1のアッセイドメインと前記分析物の第2の形態に結合可能である第2の試薬を含む第2のアッセイドメインとを有するアッセイモジュールにおいて単一試料中の2つ以上の分析物形態を測定する方法であって、
(a)前記試料を、前記第1のアッセイドメイン及び前記第2のアッセイドメイン、並びに前記分析物の前記第1の形態及び前記第2の形態に結合可能である標識試薬と接触させるステップと、
(b)前記標識試薬から放出されたシグナルを検出するステップとを含む方法。
(43) 未結合標識試薬を除去する洗浄ステップをさらに含む、(42)に記載の方法。
(44) 前記分析物の第1のエピトープに結合可能である第1の試薬を含む第1のアッセイドメインと前記分析物の第2のエピトープに結合可能である第2の試薬を含む第2のアッセイドメインとを有するアッセイモジュールにおいて単一試料中の分析物の2つ以上のエピトープを測定する方法であって、前記試料を、前記第1のアッセイドメイン及び前記第2のアッセイドメインと接触させるステップを含む方法。
(45) 前記試料を、前記分析物に結合可能である1つ又は複数の標識と接触させるステップと、前記1つ又は複数の標識によって放出されるシグナルを検出するステップとをさらに含む、(44)に記載の方法。
(46) 分析物のアッセイを実施するためのアッセイモジュールであって、
(a)前記分析物に結合可能である第1の試薬を含む第1のアッセイドメインと、
(b)前記分析物に結合可能である前記第1の試薬又は第2の試薬を含む第2のアッセイドメインとを含み、
前記第1のアッセイドメインと前記第2のアッセイドメインが異なる特性を有し、前記異なる特性が表面積、試薬濃度、熱安定性、pH感度、ぬれ性、エピトープ特異性、結合動力学、非特異的結合特性及び結合定数からなる群から選択されるアッセイモジュール。
(47) 分析物のアッセイを実施するためのアッセイドメインの設計を最適化するためのアッセイモジュールであって、
(a)前記分析物に結合可能である第1の試薬を含む第1のアッセイドメインと、
(b)前記第1の試薬を含む第2のアッセイドメインとを含み、
前記第1のアッセイドメインと前記第2のアッセイドメインが異なる諸特性を有し、前記異なる諸特性が表面積、試薬濃度、熱安定性、pH安定性、疎水性又は親水性、共反応物、エピトープ特異性、結合動力学、非特異的結合特性、結合定数及び/又は熱力学からなる群から選択されるアッセイモジュール。
(48) 分析物のアッセイにおけるアッセイ誤差源を検出又は補正する方法であって、
(a)分析物を含む試料を、
(i)前記分析物に結合可能である第1の試薬を含む第1のアッセイドメインと、
(ii)前記第1の試薬を含む第2のアッセイドメインとを含むアッセイモジュールに導入するステップであって、
前記第1のアッセイドメインと前記第2のアッセイドメインが異なる諸特性を有し、前記異なる諸特性が表面積、試薬濃度、熱安定性、pH安定性、疎水性又は親水性、共反応物、エピトープ特異性、結合動力学、非特異的結合特性、結合定数及び/又は熱力学からなる群から選択されるステップと、
(b)第1のアッセイドメインと第2のアッセイドメインへの分析物の結合性を比較してアッセイ誤差源を検出又は補正するステップとを含む方法。
(49) 生物学的材料を同定するためのアッセイモジュールであって、
(a)第1の生物学的材料の成分及び第2の生物学的材料の成分に結合可能である試薬を含む第1のアッセイドメインと、
(b)前記第1の生物学的材料の前記成分及び前記第2の生物学的材料の前記成分に結合可能である第2の試薬を含む第2のアッセイドメインとを含み、
前記第2のアッセイドメインに対する前記第1のアッセイドメインへの結合比によって前記生物学的材料のアイデンティティが示されるアッセイモジュール。
(50) 生物学的材料を同定する方法であって、
(a)前記生物学的材料の試料を、
(i)第1の生物学的材料の第1の成分及び第2の生物学的材料の第1の成分に結合可能である試薬を含む第1のアッセイドメインと、
(b)前記第1の生物学的材料の第2の成分及び前記第2の生物学的材料の第2の成分に結合可能である第2の試薬を含む第2のアッセイドメインとを含むアッセイモジュールに導入するステップであって、
前記第2のアッセイドメインに対する前記第1のアッセイドメインへの結合比によって前記生物学的材料のアイデンティティが示されるステップと、
(b)前記第1のアッセイドメインと前記第2のアッセイドメインへの前記生物学的材料の結合比を測定して前記生物学的材料のアイデンティティを決定するステップとを含む方法。
(51) 類似した諸特性を有する2つ以上の病原体のアッセイを実施するための方法であって、
(a)前記第1の病原体及び前記第2の病原体に結合可能である試薬を含む第1のアッセイドメインと前記第1の病原体及び前記第2の病原体に結合可能である第2の試薬を含む第2のアッセイドメインとを有するアッセイモジュールに試料を導入するステップであって、前記第1の病原体が存在することによって前記第1のアッセイドメインが前記第2のアッセイドメインよりも大きなシグナルを放出するステップと、
(b)前記第1のアッセイドメインから放出された第1のシグナル及び前記第2のアッセイドメインから放出された第2のシグナルを検出するステップとを含む方法。
(52) 前記第1のシグナル及び前記第2のシグナルから前記第1の病原体及び前記第2の病原体の量を解析するステップをさらに含む、(51)に記載の方法。
(53) (a)分析物に結合可能である試薬を含む第1のアッセイドメインと、
(b)前記分析物に結合可能である前記試薬を含む第2のアッセイドメインとを含み、
前記第1のアッセイドメインと前記第2のアッセイドメインが実質的に同じ濃度の前記試薬を含み、かつそれぞれ独立に指定可能であるアッセイモジュール。
(54) 反応速度を決定する方法であって、
(a)複数のアッセイドメインを有するアッセイモジュールと試料を接触させるステップであって、前記アッセイドメインの各々が、分析物に結合可能なある濃度の試薬を含み、かつそれぞれ独立に指定可能であるステップと、
(b)前記アッセイドメインからのシグナルを順次指定し検出するステップとを含む方法。
(55) 前記反応が酵素反応である、(54)に記載の方法。
(56) 前記ドメインが酵素反応産物に対する結合試薬を含む、(55)に記載の方法。
(57) 前記反応が2つの結合相手の結合反応であり、前記ドメインが前記結合相手の1つを含む、(54)に記載の方法。
(58) 1つ又は複数の分析物を検出するのに使用するアッセイモジュールの作製を最適化する方法であって、
(a)複数のアッセイドメインを有するプロトタイプのアッセイモジュールを形成するステップであって、前記複数のアッセイドメインが前記1つ又は複数の分析物と結合可能であり、異なるパラメータを有することが可能であり、前記異なるパラメータが(i)結合試薬、(ii)共反応物、(iii)pH、(iv)ウェル内の位置、(v)試薬濃度、(vi)ドメイン位置、(vii)アッセイ試薬親和性、(viii)アッセイ試薬特異性、(ix)干渉物質に対する感度、及び(x)光学的ひずみに対する感度からなる群から選択されるステップと、
(b)前記1つ又は複数の分析物を含有する試験試料を用いて前記プロトタイプアッセイモジュールによって試験アッセイを実施するステップと、
(c)最高性能が得られるアッセイドメインを決定するステップとを含む方法。
(59) 第1の分析物及び/又は第2の分析物を検出するためのアッセイモジュールであって、
(a)前記第1の分析物及び前記第2の分析物に結合するが、前記第2の分析物よりも前記第1の分析物により良好に結合する第1のアッセイドメインと、
(b)前記第1の分析物及び前記第2の分析物に結合するが、前記第1の分析物よりも前記第2の分析物により良好に結合する第2のアッセイドメインとを含むアッセイモジュール。
(60) 試料中の少なくとも第1の分析物及び第2の分析物を検出する方法であって、前記第1の分析物及び前記第2の分析物が類似の結合特性を有し、前記方法が、
(a)第1のアッセイドメイン及び第2のアッセイドメインと前記試料を接触させるステップであって、前記第1のアッセイドメインは前記第1の分析物及び前記第2の分析物に結合するが、前記第2の分析物よりも前記第1の分析物により良好に結合し、前記第2のアッセイドメインは前記第1の分析物及び前記第2の分析物に結合するが、前記第1の分析物よりも前記第2の分析物により良好に結合するステップと、
(b)前記第1のアッセイドメインを誘発してシグナルを放出させるステップと、
(c)前記第1のアッセイドメインからの前記シグナルを測定するステップと、
(d)前記第1の分析物及び/又は前記第2の分析物の量を解析するステップとを含む方法。
(61) 前記第2のアッセイドメインが前記第2の分析物を隔離する、(60)に記載の方法。
(62) 前記第2のアッセイドメインからのシグナルを測定するステップをさらに含む、(60)又は(61)に記載の方法。
(63) 分析物と少なくとも1つの干渉物質を含む試料のアッセイを実施するためのアッセイモジュールであって、
(a)前記分析物に結合可能であるアッセイドメインと、
(b)前記干渉物質に結合可能である隔離ドメインとを含むアッセイモジュール。
(64) 前記モジュールが、前記隔離ドメインに結合する前記干渉物質を測定するようになされた、(63)に記載のアッセイモジュール。
(65) 干渉物質の存在下で分析物を測定する方法であって、
(a)試料を、
(i)前記分析物に結合可能であるアッセイドメインと、
(ii)前記干渉物質に結合可能である隔離ドメインとを含むアッセイモジュールに導入するステップと、
(b)前記アッセイドメインへの前記分析物の結合を検出するステップとを含む方法。
(66) 酵素反応を測定するアッセイモジュールであって、
(a)前記酵素の基質に結合可能である第1のアッセイドメインと、
(b)前記基質に対する前記酵素の作用によって形成される産物に結合可能である第2のアッセイドメインとを含むアッセイモジュール。
Claims (5)
- 目的分析物を分析する方法であって、
(a)前記分析物を含む試料を、前記分析物に結合する第1の成分を含む第1のドメイン(i)と前記分析物と競合する第2の成分を含む第2のドメイン(ii)との少なくとも2つのアッセイドメインを含むアッセイモジュールに導入するステップと、
(b)前記アッセイモジュールにおいてサンドイッチアッセイ及び競合アッセイを実施し、前記分析物の量が前記サンドイッチアッセイ及び前記競合アッセイにおいて別々に定量されるステップと、
(c)前記サンドイッチアッセイ及び前記競合アッセイにおいてステップ(b)において同定された前記分析物の量を比較し、前記サンドイッチアッセイのダイナミックレンジを超えたかどうかを求めるステップと
を含み、
前記アッセイモジュールが複数のウェルを含むマルチウェルプレートであり、前記少なくとも2つのアッセイドメインが前記複数のウェルの同じウェル中にある方法。 - 前記第1のアッセイドメインが前記分析物とサンドイッチ複合体を形成し得る結合試薬を含み、前記第2のアッセイドメインが前記分析物と競合する結合試薬を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記第2のアッセイドメインが、前記分析物、前記分析物のアナログ及びこれらの組み合わせからなる群より選択される成分を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記競合アッセイにおける前記結合試薬が前記分析物のアナログを含み、前記アナログが、前記サンドイッチアッセイにおける前記結合試薬によって認識されるエピトープを含まない、請求項2に記載の方法。
- 前記アッセイモジュールが複数の粒子を含む多孔質電極を含み、
前記粒子は、その上に固定化された、前記第1の成分、前記第2の成分及びそれらの組合せからなる群より選択される成分と複合体を形成し得る結合試薬を有し、
前記結合試薬は前記少なくとも2つのアッセイドメインを形成するように分散されている、請求項1に記載の方法。
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