JP4159103B2 - 細胞培養構造体、細胞培養容器、スフェロイド付き構造体、スフェロイド付き容器およびこれらの製造方法 - Google Patents
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Description
200 加工対象物
201 多角形
202 線
203 溝
210 細胞培養容器
211 穴
212 筒状部材
213 基板
215 シール部材
220 細胞培養構造体
<1>細胞培養構造体
本発明の細胞培養構造体は、図1に示すように、セル間の幅が3μm以下、深さが10nm以上で平面方向の形状が多角形であると共に最小内径が3μm以下のセルを複数連続して形成された細胞接着面として機能する凹凸構造を有するものである。これにより、細胞が二次元方向(平面方向)に広がった単層細胞に成長するのを阻害し、三次元状のスフェロイドに成長させることができる。この際、凹凸構造の平面方向の形状は正多角形のものが良く、更に平面方向へ等方的に連続して形成できる正三角形、正方形、正六角形のものが好ましい。これにより、等方的に均一な構造上でスフェロイドを成長させることができる。
<2>細胞培養容器
本発明の細胞培養容器210は、細胞を培養するための容器であって、上述した本発明の細胞培養構造体を有するものである。
<3>スフェロイド付き構造体、スフェロイド付き容器
次に、細胞培養構造体上又は細胞培養容器上で培養したスフェロイドを有するスフェロイド付き構造体、スフェロイド付き容器について説明する。
スフェロイドを形成する培養細胞を固定し、界面活性剤等で処理を行い、細胞を溶解させ、更にBSA(Bovine serum alubumin)等でブロッキングする。この様にして調整したサンプルに、抗アクチン抗体等を結合させて、結合した抗体に対して例えば蛍光物質等の標識物質でラベルした二次抗体等を結合させ、この標識物質等を検出、定量することでアクチンを測定できる。
Claims (32)
- セル間の幅が3μm以下、深さが10nm以上で平面方向の形状が多角形であると共に最小内径が3μm以下のセルを複数連続して形成された細胞接着面として機能する凹凸構造を有することを特徴とする細胞培養構造体。
- ポリスチレン、ポリイミド、アクリル樹脂、環状オレフィン系熱可塑性樹脂、酸化アルミニウム、ガラス、石英ガラス、シリコンのいずれか1以上により形成されていることを特徴とする請求項1記載の細胞培養構造体。
- 前記凹凸構造は、ナノインプリント技術を用いて形成されたものであることを特徴とする請求項1又は2記載の細胞培養構造体。
- 前記凹凸構造は、平面方向の形状が正多角形であることを特徴とする請求項1ないし3のいずれかに記載の細胞培養構造体。
- 前記凹凸構造は、平面方向の形状が正三角形、正方形、正六角形のいずれかであるセルからなり、等方的に均一な構造であることを特徴とする請求項1ないし4のいずれかに記載の細胞培養構造体。
- 1mm以下のフィルム状であることを特徴とする請求項1ないし5のいずれかに記載の細胞培養構造体。
- 前記セルは、最大内径が3μm以下であることを特徴とする請求項1ないし6のいずれかに記載の細胞培養構造体。
- 平面方向の面積が細胞を培養する容器の底面の面積よりも大きく形成されていることを特徴とする請求項1ないし7のいずれかに記載の細胞培養構造体。
- 平面方向の面積がマルチウェルプレートの底面の面積よりも大きく形成されていることを特徴とする請求項1ないし7のいずれかに記載の細胞培養構造体。
- 細胞接着面として機能する凹凸構造を有する細胞培養構造体の製造方法であって、
ナノインプリント技術を用いて、加工対象物にセル間の幅が3μm以下、深さが10nm以上で平面方向の形状が多角形であると共に最小内径が3μm以下のセルを複数連続した前記凹凸構造を形成することを特徴とする細胞培養構造体の製造方法。 - 前記凹凸構造は、平面方向の形状が正三角形、正方形、正六角形のいずれかであるセルからなり、等方的に均一な構造であることを特徴とする請求項10記載の細胞培養構造体の製造方法。
- 前記加工対象物は、ポリスチレン、ポリイミド、環状オレフィン系熱可塑性樹脂、アクリル樹脂、酸化アルミニウム、ガラス、石英ガラス、シリコンのいずれか1以上により形成されたものであることを特徴とする請求項10又は11記載の細胞培養構造体の製造方法。
- 前記加工対象物は、1mm以下のフィルム状であることを特徴とする請求項10ないし12のいずれかに記載の細胞培養構造体の製造方法。
- 前記セルは、最大内径が3μm以下であることを特徴とする請求項10ないし13のいずれかに記載の細胞培養構造体の製造方法。
- 前記加工対象物は、平面方向の面積が細胞を培養する容器の底面の面積よりも大きいことを特徴とする請求項10ないし14のいずれかに記載の細胞培養構造体の製造方法。
- 前記加工対象物は、平面方向の面積がマルチウェルプレートの底面の面積よりも大きいことを特徴とする請求項10ないし14のいずれかに記載の細胞培養構造体の製造方法。
- セル間の幅が3μm以下、深さが10nm以上で平面方向の形状が多角形であると共に最小内径が3μm以下のセルを複数連続して形成された細胞接着面として機能する凹凸構造を有する細胞培養構造体上に、この細胞培養構造体上で培養されたスフェロイドが固定されていることを特徴とするスフェロイド付き構造体。
- 凹凸構造上に、周囲の単位長さ当たりの仮足の数が0.1本/μm以上である細胞から形成されたスフェロイドが固定されていることを特徴とする請求項17記 載のスフェロイド付き構造体。
- 前記スフェロイドは、癌細胞から培養されたものであることを特徴とする請求項17又は18記載のスフェロイド付き構造体。
- 前記スフェロイドは、直径が10μm以上の大きさであることを特徴とする請求項17ないし19のいずれかに記載のスフェロイド付き構造体。
- セル間の幅が3μm以下、深さが10nm以上で平面方向の形状が多角形であると共に最小内径が3μm以下のセルを複数連続して形成された細胞接着面として機能する凹凸構造を有する細胞培養構造体上に細胞を播種すると共に培養し、スフェロイドを形成することを特徴とするスフェロイド付き構造体の製造方法。
- 細胞を培養するための細胞培養容器であって、
請求項1ないし9のいずれかに記載の細胞培養構造体を有することを特徴とする細胞培養容器。 - 細胞を培養するための細胞培養容器であって、
請求項1ないし9のいずれかに記載の細胞培養構造体と、
1以上の穴を有すると共に、前記細胞培養構造体を底板として結合可能な筒状部材と、
を具備することを特徴とする細胞培養容器。 - 細胞を培養するための細胞培養容器であって、
請求項1ないし9のいずれかに記載の細胞培養構造体と、
1以上の穴を有する筒状部材と、
前記細胞培養構造体を前記筒状部材と共に挟持する底板と、
を具備することを特徴とする細胞培養容器。 - 請求項1ないし9のいずれかに記載の細胞培養構造体を組み込んで細胞を培養するための細胞培養容器であって、
1以上の穴を有する筒状部材と、
前記細胞培養構造体を前記筒状部材と共に挟持する底板と、
を具備することを特徴とする細胞培養容器。 - 前記筒状部材と前記細胞培養構造体との間を密封するシール部材を具備することを特徴とする請求項23ないし25のいずれかに記載の細胞培養容器。
- 細胞を培養するための容器に、請求項1ないし9のいずれかに記載の細胞培養構造体を固着することを特徴とする細胞培養容器の製造方法。
- 請求項1ないし9のいずれかに記載の細胞培養構造体と、1以上の穴を有する筒状部材と、を嵌合することを特徴とする細胞培養容器の製造方法。
- 請求項1ないし9のいずれかに記載の細胞培養構造体を、1以上の穴を有する筒状部材と、前記筒状部材の底部に配置される底板とで挟み込んで嵌合することを特徴とする細胞培養容器の製造方法。
- 前記筒状部材と前記細胞培養構造体との間にシール部材を配置することを特徴とする請求項28又は29記載の細胞培養容器の製造方法。
- 請求項22ないし26のいずれかに記載の細胞培養容器に、この細胞培養容器内で培養したスフェロイドが固定されていることを特徴とするスフェロイド付き容器。
- 請求項22ないし26のいずれかに記載の細胞培養構容器内に細胞を播種し培養することを特徴とするスフェロイド付き容器の製造方法。
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