JP4011107B2 - アラビノヌクレオシドの製法 - Google Patents

Description

本発明は、一般式ＩＩ：

[式中、Ｘは、水素原子又はフッ素原子であり、かつ
基Ａｃは、それぞれアセチル基を表す]のトリアセテートから、一般式Ｉ：

[式中、Ｘは、水素原子又はフッ素原子である]のアラビノヌクレオシドを製造する方法に関し、これは、一般式ＩＩの化合物にエステラーゼ又はリパーゼを作用させることを特徴とする。
公知のように、一般式Ｉのアラビノヌクレオシド、９β−Ｄ−アラビノフラノシル−９Ｈ−プリン−６−アミン(＝ビダラビン)及び９β−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオル−９Ｈ−プリン−６−アミン（＝フルダラビン(Fludarabin)）は、抗ウイルス性及び細胞増殖抑制作用において優れた薬理学的に有用な物質である（ヨーロッパ特許（ＥＰ−Ａ）第３１７７２８号明細書及び国際公開ＷＯ/９２０９６０４号明細書）。
公知の従来技術により、一般式ＩＩのトリアセテートから、この化合物は製造することができ、その際、一般式ＩＩのトリアセテートにアンモニアエタノール溶液を作用させる(J.Org.Chem.33.1968.432ff;Can.J.Chem.59,1981,2608ff及びNucleic Acids Symp.Ser.1981,9,61ff)。しかし、この方法は、かなりの費用がかかるだけではなく、更に、殊にフルダラビンの合成の際に、著しく不純な反応生成物が得られるという欠点もある。
これに対して、本発明の方法は、比較的僅かな費用で実施することができ、かつ所望の反応生成物を高い純度でもたらす。
一般式ＩＩのトリアセテートの酵素による加水分解は、高い基質濃度でも定量的に進行する。このことは、多価アルコールのアセテートは、酵素的には部分的にのみけん化されることが多いことが広く公知であるので、当業者には意外である(Tetrahedron46,1990,6587-6611)。
本発明の方法は、市販のカルボン酸エステラーゼもしくはリパーゼを用いて実施することができる。このようなものは、例えば、
約１３０Ｕ／タンパク質ｍｇを有するブタ肝臓に由来するエステラーゼ（Fluka AG社; Ch-9470 Buche；１Ｕは、２５℃及びｐＨ８．０で、酪酸エチルエステル１μモルを変換する酵素量に相当)、
約１３０Ｕ／タンパク質ｍｇを有するブタ肝臓に由来するエステラーゼ(Boehringer-Mannheim社）、
約２３０Ｕ／タンパク質ｍｇを有するブタ肝臓に由来するエステラーゼ(Sigma Corp.社St.Luis USA)、
０．５Ｕ／固体ｍｇを有するアスペルギルス メレウス(Aspergillus melleus)に由来するアシラーゼＩ(Sigma Corp社）、
約１１０〜２２０Ｕ／タンパク質ｍｇを有するブタすい臓に由来するリパーゼタイプＩＩ(Sigma Corp社；基質オリーブ油）及び
ムコールsp.に由来するリパーゼＦ７(Eurymatic Ltd.社,Cambridge)である。
本発明の方法の実施のために、基質及び酵素を、好適な緩衝液（クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、トリス緩衝液等）中に溶かし、かつ反応が完全に達成されるまで３０〜４２℃で振盪するか、又は撹拌する。この反応の際に、通常、１リットル当たり、基質１〜１０ｇ及び酵素１〜１００ｍｇを使用する。反応の終了（クロマトグラフィー、例えばＨＰＬＣ−又はＤＣ−クロマトグラフィーによる簡単な方法で、測定することができる）後に、反応生成物の単離を、反応混合物の濃縮による簡単な方法で実施することができる。
エステラーゼを繰り返し使用するために、これらを既に公知の方法で固定するか(Tetrahedron 26(no4)pp407-410(1985))、又は反応の実施のために市販の固定化エステラーゼ（例えば、Eupergit▲Ｒ▼（Fluka AG社のブタ肝臓に由来する固定化エステラーゼ）を使用するのが有利である。
次の実施例で、本発明の方法を詳述する。
例１
ｐＨ８．７の０．２５モル水性トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン／ＨＣｌ緩衝液１００ｍｌに、（２′，３′，５′−トリ−０−アセチル−９β−Ｄ−アラビノフラノシル）−２−フルオル−９Ｈ−プリン−６−アミン０．５００ｇ及びブタ肝臓−エステラーゼ０．１ｍｇ（Boehringer Mannheim;１３０Ｕ／タンパク質ｍｇ）を添加し、かつ３７℃で７０時間撹拌する。
ＨＰＬＣの後に、得られた反応溶液は、実質的に９β−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオル−９Ｈ−プリン−６−アミンモノアセテート又は９β−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオル−９Ｈ−プリン−６−アミンジアセテートを有さない。これを、最高５０℃の浴温度で、約５ｍｌまで濃縮させ、沈殿した生成物を吸引濾過し、水で洗浄し、かつ真空下、１００℃で乾燥させる。こうして、定量的収量の９β−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオル−９Ｈ−プリン−６−アミンが得られる。
例２
例１の条件下に、（２′，３′，５′−トリス−０−アセチル−９β−Ｄ−アラビノフラノシル）−２−フルオル−９Ｈ−プリン−６−アミン０．５００ｇ及びブタ肝臓エステラーゼ０．１ｍｇ（Sigma, Chem.,St.Luis, USA２３０Ｕ／タンパク質ｍｇ）を反応させ、後処理すると、同様に定量的収量で、９β−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオル−９Ｈ−プリン−６−アミンが得られる。
例３
例１の条件下に、但し、（２′，３′，５′−トリス−０−アセチル−９β−Ｄ−アラビノフラノシル）−２−フルオル−９Ｈ−プリン−６−アミン１．００ｇの添加下に、２００時間インキュベーションする。反応溶液を、例１の記載と同様に後処理すると、同様に定量的収量で９β−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオル−９Ｈ−プリン−６−アミンが得られる。
例４
ａ）Eupergit▲Ｒ▼(Fluka AG)を、１０：１の比で、ブタ肝臓−エステラーゼ(Boehringer Mannheim;１３０Ｕ／タンパク質ｍｇ）及びｐＨ７．５の１モル水性リン酸緩衝液と混合し、かつ３日間室温でインキュベーションする。次いで、生成物を濾過し、かつリン酸緩衝液及び蒸留水で洗浄し、かつ安息香酸エチルエステル０．０５％を有するｐＨ７．５の１モルリン酸緩衝液中に貯蔵する。
ｂ）ｐＨ７．５の０．５モル水性トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン／ＨＣｌ緩衝液１００ｍｌに、（２′，３′，５′−トリ−０−アセチル−９β−Ｄ−アラビノフラノシル）−２−フルオル−９Ｈ−プリン−６−アミン５００ｍｇ及び例ａで製造された固定化ブタ肝臓−エステラーゼ０．５ｍｇを添加し、かつ３７℃で１００時間インキュベーションする。この時間の後に、出発物質の約８５％が変換された。固定化物を分離除去し、かつ３０回まで再使用することができる。

Claims (1)

1. 一般式ＩＩ：
   

   

   [式中、Ｘは、水素原子又はフッ素原子であり、かつ
   基Ａｃは、それぞれアセチル基を表す]のトリアセテートから、一般式Ｉ：
   

   

   [式中、Ｘは、水素原子又はフッ素原子である]のアラビノヌクレオシドを製造する方法において、一般式ＩＩの化合物をエステラーゼ又はリパーゼの作用下で反応させることを特徴とする、一般式Ｉのアラビノヌクレオシドの製法。