JP3522798B2 - 糖修飾蛋白質の製造法 - Google Patents
糖修飾蛋白質の製造法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、人工的に合成される糖
修飾蛋白質に関し、特に糖修飾生理活性蛋白質に関する
ものである。
修飾蛋白質に関し、特に糖修飾生理活性蛋白質に関する
ものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、生体由来の生理活性を有する蛋白
質あるいは糖蛋白質を医薬あるいは診断薬として利用す
る試みがなされている。しかし、有効かつ特異的に利用
するために、生体内での安定性を高めたり、代謝におけ
るシグナル作用、細胞内局所でのシグナル作用、レセプ
タ−や標的細胞に対する認識としてのシグナル作用を強
めたり発現させたりすることが必須となってきている。
その方法として、化学的に蛋白質を修飾することによ
り、該蛋白質の血中安定性を高めること、シグナル作用
を高め、標的細胞あるいは標的臓器への取り込みを促進
させること、蛋白質の生理活性を増大させること、さら
には新たな生理活性を付与することなどが期待されてい
る。
質あるいは糖蛋白質を医薬あるいは診断薬として利用す
る試みがなされている。しかし、有効かつ特異的に利用
するために、生体内での安定性を高めたり、代謝におけ
るシグナル作用、細胞内局所でのシグナル作用、レセプ
タ−や標的細胞に対する認識としてのシグナル作用を強
めたり発現させたりすることが必須となってきている。
その方法として、化学的に蛋白質を修飾することによ
り、該蛋白質の血中安定性を高めること、シグナル作用
を高め、標的細胞あるいは標的臓器への取り込みを促進
させること、蛋白質の生理活性を増大させること、さら
には新たな生理活性を付与することなどが期待されてい
る。
【０００３】標的臓器としての肝臓への集積性に関連し
て、肝臓とガラクト−スとの親和性が報告されている
（Kawasaki.T ＆ Ashwell.G., J.Biol.Chem., 251,129
6,1976及びLee.Y.C.et al., J.Biol.Chem.,258,199,198
3）。この知見に基づいて肝癌、肝硬変、肝炎などの肝
疾患に有効な生理活性を有する蛋白質に、末端にガラク
ト−スを有する糖を結合させることにより、効率的に肝
臓への蛋白質の取り込みを増大させ、治療効果を高める
ことができる。
て、肝臓とガラクト−スとの親和性が報告されている
（Kawasaki.T ＆ Ashwell.G., J.Biol.Chem., 251,129
6,1976及びLee.Y.C.et al., J.Biol.Chem.,258,199,198
3）。この知見に基づいて肝癌、肝硬変、肝炎などの肝
疾患に有効な生理活性を有する蛋白質に、末端にガラク
ト−スを有する糖を結合させることにより、効率的に肝
臓への蛋白質の取り込みを増大させ、治療効果を高める
ことができる。
【０００４】例えば、β−Ｄ−ガラクトピラノシルポリ
エチレングリコールで修飾された生理活性蛋白質などが
知られている（特開昭６３−１５２３９３）。また、末
端にガラクトース・ガラクトースの結合を有する糖鎖を
多量に含む糖蛋白質を遺伝子操作で製造する技術も知ら
れている（特開平１−１０２０９９）。しかし、従来の
技術は複雑な製造工程、生理活性蛋白質を変性させる可
能性のある反応条件等が必要であったり、特殊な真核細
胞を用いて糖蛋白質として発現させる必要があり、十分
満足な結果は得られていないし、実用化もされていな
い。
エチレングリコールで修飾された生理活性蛋白質などが
知られている（特開昭６３−１５２３９３）。また、末
端にガラクトース・ガラクトースの結合を有する糖鎖を
多量に含む糖蛋白質を遺伝子操作で製造する技術も知ら
れている（特開平１−１０２０９９）。しかし、従来の
技術は複雑な製造工程、生理活性蛋白質を変性させる可
能性のある反応条件等が必要であったり、特殊な真核細
胞を用いて糖蛋白質として発現させる必要があり、十分
満足な結果は得られていないし、実用化もされていな
い。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、簡便
で汎用性のある化学的な方法によって糖修飾蛋白質を提
供することであり、特に生理活性蛋白質を糖修飾するこ
とにより、肝臓集積性および生理活性を高めた糖修飾蛋
白質を提供することである。
で汎用性のある化学的な方法によって糖修飾蛋白質を提
供することであり、特に生理活性蛋白質を糖修飾するこ
とにより、肝臓集積性および生理活性を高めた糖修飾蛋
白質を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、以上の課
題を解決するために鋭意検討した結果、以下の手段によ
って蛋白質にガラクトースが導入された糖修飾蛋白質を
得ることができ、かつ糖修飾による生理活性蛋白質の活
性の減少を防ぐことができ、得られた糖修飾蛋白質の肝
臓集積性が極めて高いことを見出し、本発明を完成し
た。
題を解決するために鋭意検討した結果、以下の手段によ
って蛋白質にガラクトースが導入された糖修飾蛋白質を
得ることができ、かつ糖修飾による生理活性蛋白質の活
性の減少を防ぐことができ、得られた糖修飾蛋白質の肝
臓集積性が極めて高いことを見出し、本発明を完成し
た。
【０００７】すなわち、本発明はラクトースラクトンと
蛋白質とを水性溶媒中、０〜４５℃で反応させ、ラクト
ースラクトンが開環して生じるガラクトース誘導体に存
在するカルボキシル基と、蛋白質分子中に存在するリジ
ン残基のε−アミノ基または蛋白質Ｎ末端のアミノ基間
でのアミド結合反応させることを特徴とする糖修飾蛋白
質の製造法である。また、本発明は下式（ａ）で示され
るラクトースラクトンと下式（ｂ）で示される蛋白質
（インターフェロン−αを除く）とを上記製造法により
アミド結合反応させて得られる式（ｃ）で示されること
を特徴とする糖修飾蛋白質である。
蛋白質とを水性溶媒中、０〜４５℃で反応させ、ラクト
ースラクトンが開環して生じるガラクトース誘導体に存
在するカルボキシル基と、蛋白質分子中に存在するリジ
ン残基のε−アミノ基または蛋白質Ｎ末端のアミノ基間
でのアミド結合反応させることを特徴とする糖修飾蛋白
質の製造法である。また、本発明は下式（ａ）で示され
るラクトースラクトンと下式（ｂ）で示される蛋白質
（インターフェロン−αを除く）とを上記製造法により
アミド結合反応させて得られる式（ｃ）で示されること
を特徴とする糖修飾蛋白質である。
【化２】
（式中、ｍは、蛋白質の第１級アミノ基の数、ｎはアミ
ド結合数、Ｒは、蛋白質骨格、またｍ≧ｎである。）以
下本発明を詳細に説明する。
ド結合数、Ｒは、蛋白質骨格、またｍ≧ｎである。）以
下本発明を詳細に説明する。
【０００８】ラクトースラクトンは公知物質であり、以
下の方法によって製造することができる。ラクトースを
低級アルコール（例、メタノール）中、ヨウ素等の酸化
剤で酸化し、還元末端のグルコピラノースを開環してラ
クタネート（lactanate）とし、次いで強酸性陽イオン
交換樹脂（例、ダウエックス(Dowex) ５０(H+)）等を
用いて酸性条件とすることによって脱水閉環し、ラクト
ースラクトンを得ることができる(Polymer Journal,17,
(4),567-575(1985))。
下の方法によって製造することができる。ラクトースを
低級アルコール（例、メタノール）中、ヨウ素等の酸化
剤で酸化し、還元末端のグルコピラノースを開環してラ
クタネート（lactanate）とし、次いで強酸性陽イオン
交換樹脂（例、ダウエックス(Dowex) ５０(H+)）等を
用いて酸性条件とすることによって脱水閉環し、ラクト
ースラクトンを得ることができる(Polymer Journal,17,
(4),567-575(1985))。
【０００９】ラクトースラクトンと反応させる蛋白質
は、特に制限なくラクトースラクトンと結合反応する官
能基を少なくとも１個有していればよい。また、反応に
用いる蛋白質の構造は、アミノ酸の他、糖鎖、その他の
修飾基を有した蛋白質誘導体でもよい。本発明において
は、反応に使用する蛋白質は、特に生理活性を有する蛋
白質が有用である。
は、特に制限なくラクトースラクトンと結合反応する官
能基を少なくとも１個有していればよい。また、反応に
用いる蛋白質の構造は、アミノ酸の他、糖鎖、その他の
修飾基を有した蛋白質誘導体でもよい。本発明において
は、反応に使用する蛋白質は、特に生理活性を有する蛋
白質が有用である。
【００１０】該官能基としては、ラクトースラクトンが
開環して生じるガラクトース誘導体に存在するカルボキ
シル基と反応するものであれば特に制限はないが、一般
的には第１級アミノ基等が例示できる。本発明の反応に
よってラクトースラクトンと該官能基が反応し、蛋白質
分子中および／または蛋白質分子末端にガラクトース残
基を有する糖修飾蛋白質を極めて効率よく製造すること
ができる。
開環して生じるガラクトース誘導体に存在するカルボキ
シル基と反応するものであれば特に制限はないが、一般
的には第１級アミノ基等が例示できる。本発明の反応に
よってラクトースラクトンと該官能基が反応し、蛋白質
分子中および／または蛋白質分子末端にガラクトース残
基を有する糖修飾蛋白質を極めて効率よく製造すること
ができる。
【００１１】蛋白質の糖修飾率、即ち、ガラクトース残
基結合率は、蛋白質に対するラクトースラクトンの使用
量、反応時間等の反応条件によって変動するが、本発明
の糖修飾蛋白質は、蛋白質分子中に少なくとも一個以上
該糖が修飾されていればよく、使用目的に応じて種々選
定できる。例えば、糖修飾蛋白質を生理活性物質として
使用する場合は、一般的には、蛋白質分子中の第１級ア
ミノ基の７０％以下、好ましくは１０〜５０％が該糖に
より修飾されることが望ましい。
基結合率は、蛋白質に対するラクトースラクトンの使用
量、反応時間等の反応条件によって変動するが、本発明
の糖修飾蛋白質は、蛋白質分子中に少なくとも一個以上
該糖が修飾されていればよく、使用目的に応じて種々選
定できる。例えば、糖修飾蛋白質を生理活性物質として
使用する場合は、一般的には、蛋白質分子中の第１級ア
ミノ基の７０％以下、好ましくは１０〜５０％が該糖に
より修飾されることが望ましい。
【００１２】第１級アミノ基としては、リジン残基のε
−アミノ基または蛋白質Ｎ末端のアミノ基が挙げられ
る。例えば、ラクトースラクトンとこの第１級アミノ基
を有した蛋白質とが、アミド結合反応のみにより糖修飾
蛋白質を生成した場合の反応式は以下の通りである。
−アミノ基または蛋白質Ｎ末端のアミノ基が挙げられ
る。例えば、ラクトースラクトンとこの第１級アミノ基
を有した蛋白質とが、アミド結合反応のみにより糖修飾
蛋白質を生成した場合の反応式は以下の通りである。
【００１３】
【化１】
【００１４】式中、（ａ）はラクトースラクトンの構造
を、（ｂ）は蛋白質の一般式を、（ｃ）は生成した糖修
飾蛋白質の一般式を示す。また、ｍは、蛋白質の第１級
アミノ基の数、ｎはアミド結合数、Ｒは、蛋白質骨格、
またｍ≧ｎである。１００ｎ／ｍは、糖修飾率を示す。
本発明の糖修飾蛋白質の合成は、ラクトースラクトンと
蛋白質の反応を水性溶媒中、０〜４５℃で行うことが好
ましい。反応溶媒としては、水または緩衝液（例、ほう
酸塩緩衝液、りん酸塩緩衝液、りん酸緩衝生理食塩水
等）の水性溶媒が使用される。反応温度は蛋白質が変性
または失活しない温度であればよいが、通常約０〜４５
℃の範囲、特に室温付近が好ましい。反応のｐＨは約３
〜１０の広い範囲でありうるが、中性付近が望ましい。
反応時間は約０．５〜１００時間程度、好ましくは２０
〜５０時間であればよい。反応に際して、ラクトースラ
クトンおよび蛋白質それぞれの使用量は、所望の糖修飾
率により適宜選定されるが、蛋白質が生理活性物質の場
合は、生成する糖修飾蛋白質の生理活性を指標として予
備実験によって決定することができる。通常、生理活性
蛋白質中の第１級アミノ基に対して約０．５〜５０倍モ
ルである。
を、（ｂ）は蛋白質の一般式を、（ｃ）は生成した糖修
飾蛋白質の一般式を示す。また、ｍは、蛋白質の第１級
アミノ基の数、ｎはアミド結合数、Ｒは、蛋白質骨格、
またｍ≧ｎである。１００ｎ／ｍは、糖修飾率を示す。
本発明の糖修飾蛋白質の合成は、ラクトースラクトンと
蛋白質の反応を水性溶媒中、０〜４５℃で行うことが好
ましい。反応溶媒としては、水または緩衝液（例、ほう
酸塩緩衝液、りん酸塩緩衝液、りん酸緩衝生理食塩水
等）の水性溶媒が使用される。反応温度は蛋白質が変性
または失活しない温度であればよいが、通常約０〜４５
℃の範囲、特に室温付近が好ましい。反応のｐＨは約３
〜１０の広い範囲でありうるが、中性付近が望ましい。
反応時間は約０．５〜１００時間程度、好ましくは２０
〜５０時間であればよい。反応に際して、ラクトースラ
クトンおよび蛋白質それぞれの使用量は、所望の糖修飾
率により適宜選定されるが、蛋白質が生理活性物質の場
合は、生成する糖修飾蛋白質の生理活性を指標として予
備実験によって決定することができる。通常、生理活性
蛋白質中の第１級アミノ基に対して約０．５〜５０倍モ
ルである。
【００１５】上記反応後、反応液を透析、塩析、限外濾
過、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、ＨＰＬ
Ｃ、電気泳動等通常の蛋白質の精製法で精製し、目的の
糖修飾蛋白質の精製物を得ることができる。本発明の糖
修飾蛋白質には、蛋白質にガラクトース残基が導入され
ているためガラクト−スに親和性を持つ肝実質細胞の特
性を利用して選択的にまた効率的に生理活性蛋白質を肝
組織に到達させることが可能であり、肝癌、肝硬変、肝
炎等の肝疾患の治療または予防に特に有効性を発揮す
る。さらに、本発明の糖修飾蛋白質は生体内での半減期
も延長されており、持続性を有している。
過、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、ＨＰＬ
Ｃ、電気泳動等通常の蛋白質の精製法で精製し、目的の
糖修飾蛋白質の精製物を得ることができる。本発明の糖
修飾蛋白質には、蛋白質にガラクトース残基が導入され
ているためガラクト−スに親和性を持つ肝実質細胞の特
性を利用して選択的にまた効率的に生理活性蛋白質を肝
組織に到達させることが可能であり、肝癌、肝硬変、肝
炎等の肝疾患の治療または予防に特に有効性を発揮す
る。さらに、本発明の糖修飾蛋白質は生体内での半減期
も延長されており、持続性を有している。
【００１６】本発明の糖修飾蛋白質を、通常自体公知の
担体、希釈剤等を用いて適宜の医薬品組成物（例、注射
剤、錠剤、カプセル剤）として非経口的または経口的に
ヒトを含む哺乳動物に投与することができる。例えば、
本発明による糖修飾蛋白質の蛋白質としてスーパーオキ
シドジスムターゼ（以下「ＳＯＤ」と略す）を使用した
糖修飾ＳＯＤを抗炎症剤として用いるには、例えば注射
剤、錠剤等の形態で、ＳＯＤの量として約０．１〜５ｍ
ｇ／ｋｇ／１日の投与量で患者に投与することができ
る。
担体、希釈剤等を用いて適宜の医薬品組成物（例、注射
剤、錠剤、カプセル剤）として非経口的または経口的に
ヒトを含む哺乳動物に投与することができる。例えば、
本発明による糖修飾蛋白質の蛋白質としてスーパーオキ
シドジスムターゼ（以下「ＳＯＤ」と略す）を使用した
糖修飾ＳＯＤを抗炎症剤として用いるには、例えば注射
剤、錠剤等の形態で、ＳＯＤの量として約０．１〜５ｍ
ｇ／ｋｇ／１日の投与量で患者に投与することができ
る。
【００１７】その他、本発明の糖修飾蛋白質に使用でき
る蛋白質としては、ヒトを含む各種動物由来（細胞培養
によるものを含む）のもの、微生物由来のもの、植物由
来のもの、遺伝子工学産物、合成品のいずれでもよい。
例えば、サイトカイン｛例、インターフェロン−β、イ
ンターフェロン−γ、インターロイキン２等｝、ホルモ
ン｛例、成長ホルモン、インスリン｝、酵素｛例、アス
パラギナーゼ、各種プロテアーゼ、各種ペプチダーゼ
等｝、免疫グロブリン、プロテアーゼインヒビター、各
種チトクローム等が挙げられる。とりわけ好ましい生理
活性蛋白質としては、ヒトを含む各種動物由来、微生物
由来、植物由来または遺伝子組換え技術で生産されたＳ
ＯＤ（ヒトＣｕ、Ｚｎ型−ＳＯＤ、Ｍｎ型−ＳＯＤ、Ｆ
ｅ型−ＳＯＤ等）等が挙げられる。
る蛋白質としては、ヒトを含む各種動物由来（細胞培養
によるものを含む）のもの、微生物由来のもの、植物由
来のもの、遺伝子工学産物、合成品のいずれでもよい。
例えば、サイトカイン｛例、インターフェロン−β、イ
ンターフェロン−γ、インターロイキン２等｝、ホルモ
ン｛例、成長ホルモン、インスリン｝、酵素｛例、アス
パラギナーゼ、各種プロテアーゼ、各種ペプチダーゼ
等｝、免疫グロブリン、プロテアーゼインヒビター、各
種チトクローム等が挙げられる。とりわけ好ましい生理
活性蛋白質としては、ヒトを含む各種動物由来、微生物
由来、植物由来または遺伝子組換え技術で生産されたＳ
ＯＤ（ヒトＣｕ、Ｚｎ型−ＳＯＤ、Ｍｎ型−ＳＯＤ、Ｆ
ｅ型−ＳＯＤ等）等が挙げられる。
【００１８】
【実施例】以下、本発明の具体的実施例を説明するが、
本発明は、これに限定されるものではない。なお、実施
例において、ガラクト−ス糖鎖はヒドラジン分解法（続
生化学実験講座，第４巻，１４２頁）により分析した。
また、糖修飾率はＴＮＢＳ（2,4,6-トリニトロベンゼン
スルホン酸）法（A.F.S.A.HABEEB.,Anal.Biochem.,14,3
28(1966)）により測定した。
本発明は、これに限定されるものではない。なお、実施
例において、ガラクト−ス糖鎖はヒドラジン分解法（続
生化学実験講座，第４巻，１４２頁）により分析した。
また、糖修飾率はＴＮＢＳ（2,4,6-トリニトロベンゼン
スルホン酸）法（A.F.S.A.HABEEB.,Anal.Biochem.,14,3
28(1966)）により測定した。
【００１９】参考例：ラクト−スラクトンの製造
（１）ラクタネートの製造
ラクトース２６ｇを水４５０ｍｌに溶解し、メタノール
３５ｍｌを加え、さらにヨウ素３７．４５ｇを含むメタ
ノール６００ｍｌを４０℃で加え、次いで４％水酸化カ
リウム溶液（３５．２ｇ／８７５ｍｌ）を加えて４０℃
で６０分反応させた。ヨウ素の色が消失したら氷冷し、
メタノール１０００ｍｌを加え、沈澱を濾取し、冷メタ
ノールとエーテルで洗浄し、水１５０ｍｌに溶解してメ
タノールを添加し、沈澱を濾取してラクトースのグルコ
ースが開環し、その１位がカルボキシル基のカリウム塩
である化合物（ラクタネート）１８ｇを得た。 （２）ラクトースラクトンの製造 （１）で製造したラクタネート１０ｇを水２００ｍｌに
溶解し、ダウエックス(Dowex) ５０(H+)カラムに通過
させて、遊離型とし、これを濃縮し、メタノールを加え
て濃縮した。メタノールを溜去し、生成した沈澱にエタ
ノールを加え、沈澱を濾取してラクトースラクトンを得
た。
３５ｍｌを加え、さらにヨウ素３７．４５ｇを含むメタ
ノール６００ｍｌを４０℃で加え、次いで４％水酸化カ
リウム溶液（３５．２ｇ／８７５ｍｌ）を加えて４０℃
で６０分反応させた。ヨウ素の色が消失したら氷冷し、
メタノール１０００ｍｌを加え、沈澱を濾取し、冷メタ
ノールとエーテルで洗浄し、水１５０ｍｌに溶解してメ
タノールを添加し、沈澱を濾取してラクトースのグルコ
ースが開環し、その１位がカルボキシル基のカリウム塩
である化合物（ラクタネート）１８ｇを得た。 （２）ラクトースラクトンの製造 （１）で製造したラクタネート１０ｇを水２００ｍｌに
溶解し、ダウエックス(Dowex) ５０(H+)カラムに通過
させて、遊離型とし、これを濃縮し、メタノールを加え
て濃縮した。メタノールを溜去し、生成した沈澱にエタ
ノールを加え、沈澱を濾取してラクトースラクトンを得
た。
【００２０】実施例１：ＳＯＤのラクト−スラクトンに
よる修飾 （製造）牛の赤血球由来のＳＯＤ（分子量32000；アミ
ノ基２２個；3000 units/mg 蛋白質）5mg（0.156μmol;
第１級アミノ基として3.44μmol）を水1mlに溶解し、ラ
クト−スラクトンを6mg(16.76μmol)、15mg(41.9μmol)
および30mg(83.8μmol)ずつ加えて室温で48時間反応し
た。反応液を水に対して透析し、凍結乾燥した。
よる修飾 （製造）牛の赤血球由来のＳＯＤ（分子量32000；アミ
ノ基２２個；3000 units/mg 蛋白質）5mg（0.156μmol;
第１級アミノ基として3.44μmol）を水1mlに溶解し、ラ
クト−スラクトンを6mg(16.76μmol)、15mg(41.9μmol)
および30mg(83.8μmol)ずつ加えて室温で48時間反応し
た。反応液を水に対して透析し、凍結乾燥した。
【００２１】それぞれ上記ラクト−スラクトンの使用量
の順番に生成した糖修飾ＳＯＤの各ロットをLL-SOD-1、
2および3とした。収量、糖修飾率（糖で修飾された第１
級アミノ基の個数はそれぞれ４個、８個及び１２個）、
活性、イオン交換樹脂を用いた高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）（DEAE 5PW）による溶出時間を表１
に、アセチルセルロ−ス電気泳動｛溶媒：0.1M ピリジ
ン／ギ酸（pH3.0）、泳動：30分（0.5mA/cm）、クーマ
シ−ブル−染色｝を図１に示した。
の順番に生成した糖修飾ＳＯＤの各ロットをLL-SOD-1、
2および3とした。収量、糖修飾率（糖で修飾された第１
級アミノ基の個数はそれぞれ４個、８個及び１２個）、
活性、イオン交換樹脂を用いた高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）（DEAE 5PW）による溶出時間を表１
に、アセチルセルロ−ス電気泳動｛溶媒：0.1M ピリジ
ン／ギ酸（pH3.0）、泳動：30分（0.5mA/cm）、クーマ
シ−ブル−染色｝を図１に示した。
【００２２】
【表１】
【００２３】（体内動態）ロットLL-SOD-3及びSODを
［2,3-3H］スクシンイミジルプロピオネート（succinim
idyl propionate ）で標識し、2500kBq/mgの3H-LL-SOD-
3及び2500kBq/mgの3H-SODを調製した。雄性C3H/HeN 6
週齢マウス尾静脈から10μg 蛋白質相当を投与し、投与
後経時的に動物を屠殺し、血液及び各臓器の放射活性を
測定して体内動態を調べた。その結果を表２に示した。
［2,3-3H］スクシンイミジルプロピオネート（succinim
idyl propionate ）で標識し、2500kBq/mgの3H-LL-SOD-
3及び2500kBq/mgの3H-SODを調製した。雄性C3H/HeN 6
週齢マウス尾静脈から10μg 蛋白質相当を投与し、投与
後経時的に動物を屠殺し、血液及び各臓器の放射活性を
測定して体内動態を調べた。その結果を表２に示した。
【００２４】
【表２】
【００２５】
【発明の効果】本発明の糖修飾蛋白質は、未修飾の蛋白
質に比べて肝臓への集積性が極めて高く、生体内での半
減期が延長されている。このため、肝癌、肝硬変、肝炎
等の肝疾患の治療または予防に該蛋白質を使用すると、
未修飾の蛋白質を使用した場合に比べて極めて高い治療
効果または予防効果をあげることができる。
質に比べて肝臓への集積性が極めて高く、生体内での半
減期が延長されている。このため、肝癌、肝硬変、肝炎
等の肝疾患の治療または予防に該蛋白質を使用すると、
未修飾の蛋白質を使用した場合に比べて極めて高い治療
効果または予防効果をあげることができる。
【００２６】本発明の糖修飾蛋白質の製造法は、蛋白質
が過酷な反応条件に晒されないために、化学的修飾によ
る生理活性の低下を防ぐことができ、高い生理活性を有
する糖修飾蛋白質を得ることができる極めて優れた方法
である。また、本発明は、種々の機能を有する蛋白質を
種々の糖修飾率の糖修飾蛋白質とすることができるの
で、目的に応じて種々の機能性蛋白質を製造できる。
が過酷な反応条件に晒されないために、化学的修飾によ
る生理活性の低下を防ぐことができ、高い生理活性を有
する糖修飾蛋白質を得ることができる極めて優れた方法
である。また、本発明は、種々の機能を有する蛋白質を
種々の糖修飾率の糖修飾蛋白質とすることができるの
で、目的に応じて種々の機能性蛋白質を製造できる。
【図１】本発明による糖修飾ＳＯＤと未処理のＳＯＤの
アセチルセルロ−ス電気泳動による泳動図を示すもので
ある。
アセチルセルロ−ス電気泳動による泳動図を示すもので
ある。
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(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C07K 1/00 - 19/00
ＰｕｂＭｅｄ
ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (2)
- 【請求項１】 ラクトースラクトンと蛋白質とを水性溶
媒中、０〜４５℃で反応させ、ラクトースラクトンが開
環して生じるガラクトース誘導体に存在するカルボキシ
ル基と、蛋白質分子中に存在するリジン残基のε−アミ
ノ基または蛋白質Ｎ末端のアミノ基間でのアミド結合反
応させることを特徴とする糖修飾蛋白質の製造法。 - 【請求項２】 下式（ａ）で示されるラクトースラクト
ンと下式（ｂ）で示される蛋白質（インターフェロン−
αを除く）とを請求項１記載の製造法によりアミド結合
反応させて得られる式（ｃ）で示されることを特徴とす
る糖修飾蛋白質。 【化１】 （式中、ｍは、蛋白質の第１級アミノ基の数、ｎはアミ
ド結合数、Ｒは、蛋白質骨格、またｍ≧ｎである。）
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22781593A JP3522798B2 (ja) | 1993-08-23 | 1993-08-23 | 糖修飾蛋白質の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22781593A JP3522798B2 (ja) | 1993-08-23 | 1993-08-23 | 糖修飾蛋白質の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0761999A JPH0761999A (ja) | 1995-03-07 |
| JP3522798B2 true JP3522798B2 (ja) | 2004-04-26 |
Family
ID=16866817
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22781593A Expired - Fee Related JP3522798B2 (ja) | 1993-08-23 | 1993-08-23 | 糖修飾蛋白質の製造法 |
Country Status (1)
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Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| WO2000038735A1 (en) * | 1998-12-24 | 2000-07-06 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Pharmaceutical preparation |
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| JPS63152393A (ja) * | 1986-07-03 | 1988-06-24 | Takeda Chem Ind Ltd | グリコシル誘導体 |
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-
1993
- 1993-08-23 JP JP22781593A patent/JP3522798B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ，１９９３年 ８月１７日，ｖｏｌ．８， ｎｏ．５，ｐ．３８２ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0761999A (ja) | 1995-03-07 |
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