JP2811789B2

JP2811789B2 - 異化ヘモグロビン分離用担体

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Publication number: JP2811789B2
Application number: JP21986789A
Authority: JP
Inventors: 高光森田; 秀明木庭; 明弘志村; 雅彦安中
Original assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Priority date: 1989-08-25
Filing date: 1989-08-25
Publication date: 1998-10-15
Anticipated expiration: 2013-10-15
Also published as: JPH0382963A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、異化ヘモグロビン分離用担体に関する。

詳しくは、特定の構造を有し、粒径分布の標準偏差が
小さく、小粒径であって、しかも、架橋度が高いため
に、機械的強度及び分離段数が高い、異化ヘモグロビン
分離用担体に関する。

〔従来の技術〕

血液中のヘモグロビン、特に異化ヘモグロビンを分離
定量することにより種々の病気の病態を推定できること
は従来知られている。このためのクロマトグラフィー担
体として、合成ポリマーやシリカゲルを基剤とした分離
用担体が使用されている。

ポリマー系担体としては、例えば、特公平１−15024
号公報において、カルボキシル基を有するアクリル系担
体に関する記述があり、異化ヘモグロビンを短時間で、
精度良く分離、定量できる方法が開示されている。しか
し、該担体は懸濁重合法で製造されており、小粒径で、
しかも粒径分布の狭い担体を製造することが困難であっ
て、結果として分離の段数に劣るという欠点を有してい
た。

一方、シリカゲル系担体は、機械的強度が高く、分離
の段数も高いという利点を有するものの、各種異化ヘモ
グロビンの短時間分離に関しては、性能的に不満足であ
るという欠点を有していた。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明は、上記欠点を改良し、異化ヘモグロビンを、
短時間で精度良く分離、定量できるクロマトグラフィー
担体の提供を目的とする。

〔課題を解決するための手段〕

即ち、本発明は、（１）グリシジルメタクリレートから誘導される下記
式で示される単位の重量分率が少なくとも３％、（R¹及びR²は水素原子及び／又は陽イオン交換基を有す
る有機基を表わす。）多価アルコールと１分子中に少なくとも１個の重合性
２重結合を有するカルボン酸とのポリエステルを含む架
橋性モノマー（以下モノマーＡと称す）から誘導される
単位の重量分率が80〜97％、グリシジルメタクリレート
以外の１分子中に重合性２重結合を１個持つモノマー
（以下モノマーＢと称す）から誘導される単位の重量分
率が０〜５％であり、交換容量が乾燥重量当り0.1〜0.5
ミリ当量である陽イオン交換樹脂からなることを特徴と
する異化ヘモグロビン分離用担体、更には（２）下記各工程により製造される上記異化ヘモグロ
ビン分離用担体をその要旨とする。

第１工程グリシジルメタクリレートの重量分率が85〜100％、
上記モノマーＡの重量分率が０〜１％、上記モノマーＢ
の重量分率が０〜15％であるモノマー混合物を、これら
のモノマー混合物を溶解するが生成するポリマーは溶解
しない媒体の存在下に分散重合することによりシードポ
リマーを製造する。

第２工程第１工程において製造したシードポリマーに、該シー
ドポリマーの２〜20重量倍の重合性モノマーを添加後、
シード重合して原料エポキシポリマーを製造する。

但し、上記重合性モノマーは、該重合性モノマー中、
95〜100重量％の上記モノマーＡと、０〜５重量％のグ
リシジルメタクリレート及び／又は上記モノマーＢを含
有する。

第３工程第２工程において、製造した原料エポキシポリマーを
使用して乾燥重量1g当たり0.1〜0.5ミリ当量の陽イオン
交換基を導入する。

以下本発明を詳細に説明する。

本発明の担体のグリシジルメタクリレートから誘導さ
れる単位としてはその重量分率が少なくとも３％、好ま
しくは３％ないし20％の範囲であり、前記式中におい
て、R¹及びR²としては水素原子の他、カルボキシル基あ
るいはスルホニル基等の陽イオン交換基を有する有機基
が挙げられる。

このような有機基の具体例としてはカルボキシメチル
基、カルボキシエチル基等のカルボキシアルキル基；ス
ルホニルプロピル基等のスルホニルアルキル基；−CH₂C
H₂Ｏ−CH₂CH₂ _mOCH₂ _ｎ−COOH,−CH₂CH₂Ｏ−CH
₂CH₂ _mOCH₂ _ｎ−SO₃H（ｍは０以上、好ましくは０
ないし５の数を表わし、ｎは１以上、好ましくは１ない
し４の数を表わす）が挙げられる。

尚、グリシジルメタクリレートから誘導される単位と
しては、製造条件によっては、R¹とR²が同時に水素原子
を示すもの、R¹とR²の少なくとも一方が陽イオン交換基
を有する有機基を表わすものを同時に含むことがある。

本発明で用いるモノマーＡは、多価アルコールと１分
子中に少なくとも１個の重合性二重結合を有するカルボ
ン酸とのポリエステルを含む架橋性モノマーである。該
多価アルコールとしては、テトラメチロールメタン、テ
トラメチロールエタン、トリメチロールプロパン、ジペ
ンタエリスリトール、エチレングリコール、ポリエチレ
ングリコール、プロピレングリコール、ポリプロピレン
グリコール等を挙げることができ、これらの多価アルコ
ールと１分子中に少なくとも１個の重合性２重結合を有
するカルボン酸のポリエステルであるモノマーの一例と
して、エチレングリコールジアクリレート（又はジメタ
クリレート）、グリセリンジアクリレート（又はジメタ
クリレート）、グリセリントリアクリレート（又はトリ
メタクリレート）、トリメチロールプロパントリアクリ
レート（又はトリメタクリレート）、ジエチレングリコ
ールジアクリレート（又はジメタクリレート）等のアク
リル系架橋性モノマーを挙げることができる。これらは
単独で用いても、混合して用いてもよい。これらの多価
アルコールとカルボン酸とのポリエステルであるモノマ
ーはモノマーＡ成分中少なくとも50％含まれているのが
好ましい。ここで、モノマーＡの種類、量、及び希釈剤
との組合せ等によりシード重合して得られるエポキシポ
リマーの多孔度物性（細孔容積、細孔半径、表面積等）
を変化させることができる。また、上記以外のモノマー
Ａとして、ジビニルベンゼン等のポリビニル化合物をモ
ノマーＡ成分のうち30重量％以下となるように添加し、
併用することによって得られる原料エポキシポリマーの
疎水性を制御して異化ヘモグロビンの保持力を調節する
ことも可能である。

本発明においてモノマーＢ成分を用いることにより、
原料エポキシポリマーの多孔度物性や疎水性を微妙に変
化させ、異化ヘモグロビンの保持挙動を調節することが
できる。モノマーＢは、グリシジルメタクリレート以外
の１分子中に重合性２重結合を１個有するモノマーであ
り、親水性のモノマーから疎水性のモノマーまで種々用
いることができる。この一例として、グリシジルアクリ
レート、２−ヒドロキシエチルアクリレート（又はメタ
クリレート）、グリセリンモノアクリレート（又はメタ
クリレート）、メチルアクリレート（又はメタクリレー
ト）、２−エチルヘキシルアクリレート（又はメタクリ
レート）等が挙げられる。また、陽イオン交換基を有す
るモノマー、例えばアクリル酸、メタクリル酸、クロト
ン酸、マレイン酸等も用いられる。更にモノマーＢはこ
れら例示されたモノマーを単独で用いても、混合して用
いても良い。

次に本発明の異化ヘモグロビン分離用担体を製造する
方法について説明する。

異化ヘモグロビン分離用担体は、第１工程において、
分散重合によりシードポリマーを製造し、第２工程にお
いて、第１工程で製造したシードポリマーに、架橋性モ
ノマーを多く含む重合性モノマーを含浸後、重合（シー
ド重合）させることにより肥大化させ、次いで第３工程
により、第２工程で製造した肥大化ポリマー（原料エポ
キシポリマー）に陽イオン交換基を導入する各工程によ
り製造する。

第１工程では、グリシジルメタクリレートを分散重合
することによりシードポリマーを製造するが、所望の粒
径を有するポリマー粒子を得るためには用いる媒体を選
択する必要がある。

乃ち用いる媒体としてはモノマーは溶解するが生成す
るポリマーが溶解しない媒体（生成するポリマーに対し
て貧溶媒）を用いる。

具体的にはメタノール、エタノール、２−プロパノー
ル、２−メチル−２−プロパノール等のアルコール類、
さらにこれらアルコール類と２−メトキシ−エタノール
等のエーテル／アルコール類、テトラヒドロフラン、ジ
オキサン等のエーテル類、さらにこれらの各種溶剤と水
との混合物等を挙げることができる。

また、これらの溶媒のうち、生成するポリマーに対す
る貧溶媒としての性質が強い程、ポリマーの粒径が小さ
くなる傾向がある。

更に、上記のような貧溶媒を主体とする媒体中に良溶
媒を少量添加することによってポリマーの粒径が大きく
なる傾向にある。

この様な溶媒の種々の性質を利用して、所望の粒径を
得られるように溶媒を適宜選択し、これらを単独あるい
は混合して媒体として使用する。

一方、生成するポリマーの粒径に影響を与える他の要
因としては、仕込みのモノマーの濃度が挙げられる。こ
の濃度が高いと粒径は大きくなり、濃度が低いと粒径は
小さくなる傾向がある。

分散重合の際、生成するポリマー粒子の凝集、変形、
融着を防ぎ、その分散安定性を増すために分散安定剤を
用いることが好ましい。分散安定剤としては各種ホモポ
リマー、コポリマー、グラフトポリマー、ブロックポリ
マー等の合成高分子化合物、さらに天然高分子化合物及
びその誘導体等を用いることができる。具体的にはポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリエ
チレンイミン、ポリアクリル酸、ビニルアルコール−酢
酸ビニルコポリマー、エチルセルロース、ヒドロキシプ
ロピルセルロース等を挙げることができる。特に用いる
媒体に対して溶解するものが好ましい。

さらに分散重合に際して、より重合を安定に進行さ
せ、分散安定性を高めるために、上記分散安定剤に加え
て補助安定剤を用いることもできる。このような補助安
定剤としてはアニオン性界面活性剤、ノニオン性界面活
性剤、４級アンモニウム塩、長鎖アルコール等が用いら
れる。具体的にはジ（２−エチルヘキシル）スルホコハ
ク酸ナトリウム、ノニルフェノキシポリエトキシエタノ
ール、メチルトリカプリリルアンモニウムクロリド、セ
チルアルコール等を挙げることができる。

また、分散重合において好ましく用いることのできる
重合開始剤としては、2,2′−アゾビスイソブチロニト
リル、4,4′−アゾビス−（４−シアノペンタン酸）、
2,2′−アゾビス−（２−メチルブチロニトリル）、2,
2′−アゾビス−（2,4−ジメチルバレロニトリル）等の
アゾ系重合開始剤、又は、過酸化ベンゾイル等の過酸化
物を挙げることができる。

また本発明における分散重合の際の重合温度としては
40℃〜90℃、好ましくは60℃〜80℃を挙げることができ
る。

シードポリマーの粒径は、目的とする肥大化ポリマー
の粒径の1/3以上、2/3以下の範囲が好ましいが、具体的
には0.5μｍ〜５μｍであり、更に好ましくは１μｍ〜
４μｍである。

本発明の第２工程において用いることのできる重合開
始剤としては、2,2′−アゾビスイソブチロニトリル、
4,4′−アゾビス−（４−シアノペンタン酸）、2,2′−
アゾビス−（２−メチルブチロニトリル）、2,2′−ア
ゾビス−（2,4−ジメチルバレロニトリル）等のアゾ系
重合開始剤、又は過酸化ベンゾイル、ラウロイルパーオ
キシド、オクタノイルパーオキシド、3,3′,5−トリメ
チルヘキサノイルパーオキシド等の過酸化物等を挙げる
ことができる。

さらに、シード重合の際適当な希釈剤をモノマー相に
添加することにより多孔性のポリマー粒子を得ることが
できる。多孔性にすることによって、導入できる官能基
量が増加し、異化ヘモグロビン分離用担体としての性能
が向上し、また表面積が増える為に、樹脂が汚染される
速度が遅くなり、耐久性が向上する。希釈剤としてはハ
ロゲン化炭化水素が好適に用いられ、脂肪族あるいは芳
香族の炭化水素や、そのエステル、ケトン、エーテル等
も使用できる。またモノマー分散液の調製においては、
分散性を高めるために分散安定剤を用いることが好まし
い。このような分散安定剤としては公知のものを用いる
ことができるが、モノマーを微分散安定化するものがよ
く、具体的にはドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウ
ム、ラウリル硫酸ナトリウム、ジアルキルスルホコハク
酸ナトリウム等のアニオン系界面活性剤を挙げることが
でき、更にポリオキシエチレンノニルフェニルエーテ
ル、ポリエチレングリコールモノステアレート、ソルビ
タンモノステアレート等の非イオン系界面活性剤、ポリ
ビニルピロリドン、ポリエチレンイミン、ビニルアルコ
ール−酢酸ビニルコポリマー等の合成高分子を併用する
ことができる。

第２工程で含浸させる重合性モノマーの量はシードポ
リマーに対して２〜20重量倍であり、好ましくは４〜10
重量倍である。この重合性モノマーの主たる成分である
モノマーＡの含浸量が低すぎる場合には、シード重合で
得られる原料エポキシポリマーの架橋密度が低くなり、
機械的強度が低下するので、高流速での通液が困難とな
り、迅速な異化ヘモグロビンの分離が不可能となるた
め、臨床分析には適さない。また、第１工程で生成した
グリシジルメタクリレートを主成分とするポリマーが抽
出除去される割合が多くなり好ましくない。一方、モノ
マーＡの含浸量が高すぎる場合には、原料エポキシポリ
マーにおけるグリシジルメタクリレート成分の重量分率
が低くなるため、導入される陽イオン交換基量が低くな
り過ぎ好ましくない。

本発明においてはシード重合の際、重合開始剤及び重
合性モノマーを吸収して肥大化したシードポリマーが凝
集、変形、融着することを防止して、その分散安定性を
増すために分散安定剤を用いることが好ましい。このよ
うな分散安定剤としては公知のアニオン系、ノニオン系
の界面活性剤、及びポリビニルピロリドン、ポリエチレ
ンイミン、ビニルアルコール−酢酸ビニルコポリマー等
の合成高分子が使用できる。

本発明のシード重合における重合温度としては通常40
℃〜90℃、好ましくは50℃〜80℃である。

第２工程で得られる肥大化ポリマー（原料エポキシポ
リマー）の好ましい粒径範囲は1.5μｍ〜７μｍであ
り、さらに好ましくは２μｍ〜５μｍである。

また、90％以上の粒子が平均粒径±１μｍの範囲にあ
ることが好ましい。

次いで、第３工程により陽イオン交換基を導入する。
その導入方法としては、グリシジルメタクリレート由来
のエポキシ基を、水、グリセリン、エチレングリコール
等により開環変性し生成した水酸基に陽イオン交換基を
結合させる方法（例えばモノハロゲノアルキルカルボン
酸、モノハロゲノアルキルスルホン酸等を反応させてカ
ルボキシアルキル基又はスルホニルアルキル基を結合さ
せる方法、具体的には、モノクロロ酢酸を反応させてカ
ルボキシメチル基を結合させる等）、あるいは該エポキ
シ基に直接あるいはスペーサーを介して陽イオン交換基
を結合させる方法（例えばヒドロキシアルキルカルボン
酸、具体的にはグリコール酸を反応させ、開環したエポ
キシ基に直接カルボキシメチル基を結合する、或いはエ
ポキシ基にエチレングリコール又はポリ（２〜６程度
の）エチレングリコールを反応し、スペーサを形成した
後でモノハロゲノアルキルカルボン酸、モノハロゲノア
ルキルスルホン酸を反応させる等）等を挙げることがで
きる。

陽イオン交換基としては強酸性及び弱酸性の交換基が
挙げられ、なかでもカルボキシル基が好ましい。ここで
グリシジルメタクリレート由来のエポキシ基が開環変性
して生成する２つの水酸基の少なくとも１つは有機基が
導入される。陽イオン交換基の導入量、即ち、交換容量
は樹脂の滴定により求めることができるが、良好な分離
を得る為には乾燥重量1g当たり0.1〜0.5ミリ当量である
ことが好ましい。交換容量を上記範囲とする為には、原
料エポキシポリマーに占めるグリシジルメタクリレート
から誘導される単位の重量分率が少なくとも３％である
ことが必要である。

以上の工程により製造した本発明の異化ヘモグロビン
分離用担体において、グリシジルメタクリレートから誘
導される単位、モノマーＡから誘導される単位、モノマ
ーＢから誘導される単位の各々の重量分率は、熱分解ガ
スクロマトグラフィー等の分析手段により推定すること
ができる。特に、シード重合時に重合性モノマーをシー
ドポリマーの４重量倍以上含浸させ、その重合転化率が
70％以上である場合は、生成ポリマーの各モノマーから
誘導される単位の重量分率は、該原料モノマーの仕込み
比に近いことが認められる。

〔作用及び効果〕

本発明の異化ヘモグロビン分離用担体は、異化ヘモグ
ロビンの分離に適した担体である。特定の製造方法によ
り製造することにより、シードポリマーの性質を肥大化
ポリマーに反映させた担体である。即ち、シードポリマ
ーの粒径が均一である為、得られる肥大化ポリマーの粒
径の均一性が高い。この為、従来の同じ平均粒径の担体
を用いたよりも高速で溶離液を流す事ができ、分離パタ
ーンもシャープで理論段数も高い。また、極性の高いモ
ノマー（グリシジルメタクリレート）単位を多く含むシ
ードポリマーに、極性の低い架橋性モノマー（モノマー
Ａ）を主たる成分とする重合性モノマーを吸収させ重合
する為に、単純な共重合とは異なり、極性の高いモノマ
ー単位から成るシードポリマー成分が肥大化ポリマー粒
子の表層に集まりやすく、その結果、架橋度が高いにも
拘わらず、陽イオン交換基導入率が高い異化ヘモグロビ
ン分離用担体を得ることができ、優れた分離性能を発現
する。

また、この異化ヘモグロビン分離用担体は、架橋度が
高い為に、機械的強度に優れ、溶離液を高速で流すこと
ができ、迅速な分析が可能となる。さらに、溶離液の濃
度を変化させても膨潤収縮が少なく、グラジエントモー
ドでの溶離に適している。また、該モノマーＡから誘導
される重量分率を80〜97％と高い割合にするため、本発
明の担体を異化ヘモグロビンの分離に用いる時、イオン
交換作用のみならず、疎水性相互作用も組み合わされる
ので、分析が良好に行なえるものである。このような本
発明の異化ヘモグロビンの分離用担体の特徴は従来にな
いものである。また、本発明の担体は特定の方法で製造
されるためその小粒化が可能であり、その結果、低い測
定圧力と優れた分離性能を与えるものであり、異化ヘモ
グロビンの分離を極めて迅速に効率良く行なうことがで
きる。

〔実施例〕

以下、本発明を実施例により説明するが、本発明はこ
れら実施例に限定されるものではない。

実施例１（１）原料エポキシポリマーの製造ポリビニルピロリドン（商品名Ｋ−30:東京化成株式
会社製、平均分子量40,000）7.2g、グリシジルメタクリ
レート50g及び2,2′−アゾビスイソブチロニトリル0.5g
をエタノール342g中に溶解させ、窒素ガスで溶存酵素を
置換後70℃で８時間分散重合を行なった。放冷後、ポリ
マー粒子を単離し、水で洗浄した。この重合における重
合転化率は90％であり、また、走査電子顕微鏡で観察し
たところ、粒径が1.4〜1.5μｍの極めて粒度分布の狭い
球状粒子であることが確認された。これをシードポリマ
ーとして以下の操作を行なった。

まず、2,2′−アゾビスイソブチロニトリル0.7g、エ
チレングリコールジメタクリレート70g、1,2−ジクロロ
メタン70g、ドデシル硫酸ナトリウム1.31g及び水560g
を、大部分の油滴の粒径が、0.1〜３μｍの範囲となる
ように微分散し、乳化液を調製した。次いで、この乳化
液を、先の分散重合で得られたシードポリマー10g、ド
デシル硫酸ナトリウム0.1g及び水100gから成る水性分散
液に、室温にて２時間かけて滴下し、そのままの温度で
13時間ゆっくり撹拌しながら油滴をシードポリマーに吸
収させた。次いで、これに２％ポリビニルアルコール水
溶液263gを加え、70℃で８時間シード重合を行なった。
放冷後、遠心分離して単離し、水、及びメタノールで洗
浄した。乾燥後の収率は80％であった。この重合で得ら
れたポリマー粒子は、走査電子顕微鏡により観察したと
ころ、平均粒径3.0μｍであり、90％以上の粒子が平均
粒径±１μｍ以内にあることが確認された。熱分解ガス
クロマトグラフィーにより組成分析を行なったところ、
グリシジルメタクリレート単位の重量分率は5.9％、エ
チレングリコールジメタクリレート単位の重量分率は9
4.1％と推定された。また、BET法により比表面積を推定
したところ、10.5m²/gの多孔質粒子であった。

（２）陽イオン交換基の導入（１）で得られた原料エポキシポリマー50gを10％H₂S
O₄水溶液535g中、50℃の温度下で５時間加熱することに
より加水分解を行ない、エポキシ環の開環反応を行なっ
た。反応終了後、ポリマーをろ別し、脱塩水にて十分に
洗浄し、乾燥した。こうして得られた水酸基を有するポ
リマー50gに24％NaOH水溶液190mlを添加し、室温にて30
分間撹拌した。次いで、モノクロロ酢酸80gの２−プロ
パノール溶液200mlを50℃にて撹拌下に滴下し、その
後、90℃にて5.5時間反応させた。反応終了後、ポリマ
ーをろ別し脱塩水2500g、1N−HCl250mlで洗浄し、更に
洗浄液が中性になるまで脱塩水で洗浄を行ないカルボキ
シメチル基を有する樹脂を得、更に熱水で洗浄し精製し
た。得られた樹脂の陽イオン交換容量は乾燥重量1g当た
り0.26ミリ当量であった。

（３）異化ヘモグロビンの分離評価（２）で得られたカルボキシメチル基を有する樹脂2.
1g（湿潤状態）を定圧ポンプにて内径6mm、長さ40mmの
ステンレス製カラムに充填し、得られた充填カラムを島
津社製高速液体クロマトグラフLC−6Aシステムに接続し
た。試料としてはヘモグロビンAlc標準サンプル（米国B
IO−RAD社製）を所定量の蒸留水と混合して調製し、そ
の試料10μをカラムに導入して異化ヘモグロビンの分
離評価を行なった。溶離液としては70ミリモルのりん酸
緩衝液（pH6.2）を用い、イソクラチックモードで溶出
させた。溶離液の送液流速は毎分1.5mlに設定した。検
出は415nmの可視光吸収で行なった。得られたクロマト
グラムを第１図に示す。Alc成分が0.66分、Ao成分が2.7
1分に溶出し極めて迅速な分離が可能であった。

実施例２ポリビニルピロリドンＫ−30（商品名）3.6g、グリシ
ジルメタクリレート60g及び2,2′−アゾビスイソブチロ
ニトリル0.3gをエタノール145.9gに溶解させ、窒素ガス
で溶存酸素を置換後70℃で12時間分散重合を行なった。
放冷後、ポリマー粒子を単離し、水で洗浄した。この重
合における重合転化率は88％であり、また、走査電子顕
微鏡で観察したところ、粒径が2.5〜2.7μｍの極めて粒
度分布の狭い球状粒子であることが確認された。次に、
これをシードポリマーとして実施例１と同様にして、シ
ード重合を行なった。まず2,2′−アゾビスイソブチロ
ニトリル0.7g、ジエチレングリコールジメタクリレート
70g、1,2−ジクロロエタン28g、トルエン28g、ドデシル
硫酸ナトリウム1.31g及び水560gを、大部分の油滴の粒
径が、0.1〜３μｍの範囲となるように微分散し、乳化
液を調製した。次いで、この乳化液を、先の分散重合で
得られたシードポリマー10g、ドデシル硫酸ナトリウム
0.1g及び水100gから成る水性分散液に、室温にて２時間
かけて滴下し、そのままの温度で13時間ゆっくり撹拌し
ながら油滴をシードポリマーに吸収させた。

次いで、これに２％ポリビニルアルコール水溶液263g
を加え、70℃で８時間シード重合を行なった。放冷後、
遠心分離して単離し、水及びメタノールで洗浄した。乾
燥後の収率は85％であった。この重合で得られたポリマ
ー粒子は、走査電子顕微鏡により観察したところ、平均
粒径5.0μｍであり、90％以上の粒子が平均粒径±１μ
ｍ以内にあることが確認された。また、熱分解ガスクロ
マトグラフィーにより組成分析を行なったところ、グリ
シジルメタクリレート単位の重量分率は8.6％、ジエチ
レングリコールジメタクリレート単位の重量分率は91.4
％であった。

次いで、得られた原料エポキシポリマーを実施例１と
同様の方法で処理してカルボキシメチル基を有する樹脂
を得、更に熱水で洗浄し精製した。得られた樹脂の陽イ
オン交換容量は乾燥重量1g当たり0.34ミリ当量であっ
た。

得られたカルボキシメチル基を有する樹脂2.2g（湿潤
状態）を定圧ポンプにて内径4.6mm、長さ70mmのステン
レス製カラムに充填した。得られた充填カラムを実施例
１と全く同様にして、異化ヘモグロビンの分離評価を行
なった。溶離液の送液流速は毎分1.5mlに設定した。Alc
成分が1.71分、Ao成分が5.90分に溶出し迅速な分離が可
能であった。

実施例３ポリビニルピロリドンＫ−30（商品名）5.2g、グリシ
ジルメタクリレート45g、２−ヒドロキシエチルメタク
リレート5g及び2,2′−アゾビスイソブチロニトリル0.5
gをエタノール230gに溶解させ、窒素ガスで溶存酸素を
置換後70℃で４時間分散重合を行ない、その後、0.1％
ドデシル硫酸ナトリウム水溶液230gを加え、減圧下で水
を含むエタノールを約280ml留去した。得られた水性分
散液からポリマー粒子を一部取り出し、洗浄後、走査電
子顕微鏡で観察したところ、粒径が1.7〜1.8μｍの極め
て粒度分布の狭い球状粒子であることが確認された。次
に、このポリマー粒子の水性分散液をそのまま用いてシ
ード重合を行なった。まず2,2′−アゾビスイソブチロ
ニトリル0.7g、エチレングリコールジメタクリレート70
g、1,2−ジクロロエタン28g、トルエン28g、ドテシル硫
酸ナトリウム1.31g及び水560gを、大部分の油滴の粒径
が、0.1〜３μｍの範囲となるように微分散し、乳化液
を調製した。次いで、この乳化液を、先の分散重合で得
られたシードポリマーの水性分散液110gに、室温にて２
時間かけて滴下し、そのままの温度で13時間ゆっくり撹
拌しながら油滴をシードポリマーに吸収させた。次い
で、これに２％ポリビニルアルコール水溶液263gを加
え、70℃で８時間シード重合を行なった。放冷後、遠心
分離して単離し、水、アセトン及びメタノールで洗浄し
た。乾燥後の収率は82％であった。

この重合で得られたポリマー粒子は、走査電子顕微鏡
により観察したところ、平均粒径3.5μｍであり、90％
以上の粒子が平均粒径±１μｍ以内にあることが確認さ
れた。また、熱分解ガスクロマトグラフィーにより組成
分析を行なったところ、グリシジルメタクリレート単位
の重量分率は10.6％、エチレングリコールジメタクリレ
ート単位の重量分率は88.4％であり、２−ヒドロキシエ
チルメタクリレートの重量分率は1.0％と推定された。

次いで、得られた原料エポキシポリマーを実施例１と
同様の方法で処理してカルボキシメチル基を有する樹脂
を得、更に熱水で洗浄し精製した。得られた樹脂の陽イ
オン交換容量は乾燥重量1g当たり0.30ミリ当量であっ
た。

得られたカルボキシメチル基を有する樹脂2.1g（湿潤
状態）を定圧ポンプにて内径6mm、長さ40mmのステンレ
ス製カラムに充填した。得られた充填カラムを実施例１
と全く同様にして、異化ヘモグロビンの分離評価を行な
った。溶離液の送液流速は毎分1.5mlに設定した。Alc成
分が1.02分、Ao成分が3.83分に溶出し迅速な分離が可能
であった。

実施例４ポリビニルピロリドンＫ−30（商品名）4.5g、グリシ
ジルメタクリレート42.5g、グリシジルアクリレート5.0
g、ステアリルメタクリレート2.5g、及び2,2′−アゾビ
スイソブチロニトリル0.5gをエタノール195gに溶解さ
せ、窒素ガスで溶存酸素を置換後70℃で６時間分散重合
を行ない、実施例１と同様に後処理を行なった。得られ
たポリマー粒子を走査電子顕微鏡で観察したところ、粒
径が1.9〜2.1μｍの極めて粒度分布の狭い球状粒子であ
ることが確認された。次に、これをシードポリマーとし
て実施例１と同様にして、シード重合を行なった。まず
2,2′−アゾビスイソブチロニトリル0.5g、エチレング
リコールジメタクリレート50g、1,2−ジクロロエタン50
g、ドデシル硫酸ナトリウム0.94g及び水400gを、大部分
の油滴の粒径が、0.1〜３μｍの範囲となるように微分
散し、乳化液を調製した。次いで、この乳化液を、先の
分散重合で得られたシードポリマー10g、ドデシル硫酸
ナトリウム0.1g及び水100gから成る水性分散液に、室温
にて２時間かけて滴下し、そのままの温度で13時間ゆっ
くり撹拌しながら油滴をシードポリマーに吸収させた。
次いで、これに２％ポリビニルアルコール水溶液188gを
加え、70℃で８時間シード重合を行なった。放冷後、遠
心分離して単離し、水及びメタノールで洗浄した。乾燥
後の収率は88％であった。この重合で得られたポリマー
粒子は、走査電子顕微鏡により観察したところ、平均粒
径3.6μｍであり、90％以上の粒子が平均粒径±１μｍ
以内にあることが確認された。また、熱分解ガスクロマ
トグラフィーにより組成分析を行なったところ、グリシ
ジルメタクリレート単位の重量分率は13.2％、エチレン
グリコールジメタクリレート単位の重量分率は84.4％で
あり、この結果よりグリシジルアクリレート及びステア
リルメタクリレート単位の合計の重量分率は2.4％と推
定された。次いで、得られた原料エポキシポリマーを実
施例１と同様の方法で処理してカルボキシメチル基を有
する樹脂を得、更に熱水で洗浄し精製した。得られた樹
脂の陽イオン交換容量は乾燥重量1g当たり0.45ミリ当量
であった。

得られたカルボキシメチル基を有する樹脂2.1g（湿潤
状態）を定圧ポンプにて内径6mm、長さ40mmのステンレ
ス製カラムに充填した。得られた充填カラムを実施例１
と全く同様にして、異化ヘモグロビンの分離評価を行な
った。溶離液の送液流速は毎分1.5mlに設定した。Alc成
分が1.14分、Ao成分が10.51分に溶出し迅速な分離が可
能であった。

実施例５ポリビニルピロリドンＫ−30（商品名）7.2g、グリシ
ジルメタクリレート49.85g、エチレングリコールジメタ
クリレート0.15g及び2,2′−アゾビスイソブチロニトリ
ル0.5gをエタノール342gに溶解させ、窒素ガスで溶存酸
素を置換後70℃で６時間分散重合を行ない、実施例１と
同様に後処理を行なった。得られたポリマー粒子を走査
電子顕微鏡で観察したところ、粒径が1.4〜1.5μｍの極
めて粒度分布の狭い球状粒子であることが確認された。
次に、これをシードポリマーとして実施例１と全く同様
にして、シード重合を行なった。まず2,2′−アゾビス
イソブチロニトリル0.5g、エチレングリコールジメタク
リレート50g、1,2−ジクロロエタン60g、ドデシル硫酸
ナトリウム0.94g及び水400gを、大部分の油滴の粒径
が、0.1〜３μｍの範囲となるように微分散し、乳化液
を調製した。次いで、この乳化液を、先の分散重合で得
られたシードポリマー12.5g、ドデシル硫酸ナトリウム
0.125g及び水125gから成る水性分散液に、室温にて２時
間かけて滴下し、そのままの温度で13時間ゆっくり撹拌
しながら油滴をシードポリマーに吸収させた。次いで、
これに２％ポリビニルアルコール水溶液200gを加え、70
℃で８時間シード重合を行なった。放冷後、遠心分離し
て単離し、水、アセトン及びメタノールで洗浄した。乾
燥後の収率は94％であった。この重合で得られたポリマ
ー粒子は、走査電子顕微鏡により観察したところ、平均
粒径2.3μｍであり、90％以上の粒子が平均粒径±１μ
ｍ以内にあることが確認された。また、熱分解ガスクロ
マトグラフィーにより組成分析を行なったところ、グリ
シジルメタクリレート単位の重量分率は18.8％、エチレ
ングリコールジメタクリレート単位の重量分率は81.2％
であった。次いで、得られた原料エポキシポリマーを実
施例１と同様の方法にしてカルボキシメチル基を有する
樹脂を得、更に熱水で洗浄し精製した。得られた樹脂の
陽イオン交換容量は乾燥重量1g当たり0.43ミリ当量であ
った。

得られたカルボキシメチル基を有する樹脂2.1g（湿潤
状態）を定圧ポンプにて内径6mm、長さ40mmのステンレ
ス製カラムに充填した。得られた充填カラムを実施例１
と全く同様にして、異化ヘモグロビンの分離評価を行な
った。溶離液の送液流速は毎分1.5mlに設定した。Alc成
分が0.74分、Ao成分が2.92分に溶出し迅速な分離が可能
であった。

実施例６実施例１と全く同様の処方で分散重合を行ないポリマ
ー粒子を得た。次に、得られたポリマー粒子をシードポ
リマーとして実施例１と同様の方法でシード重合を行な
った。まず2,2′−アゾビスイソブチロニトリル0.7g、
エチレングリコールジメタクリレート66.5g、グリシジ
ルメタクリレート3.5g、1,2−ジクロロエタン70g、ドデ
シル硫酸ナトリウム1.31g及び水560gを、大部分の油滴
の粒径が、0.1〜３μｍの範囲となるように微分散し、
乳化液を調製した。次いで、この乳化液を、先の分散重
合で得られたシードポリマー10g、ドデシル硫酸ナトリ
ウム0.1g及び水100gから成る水性分散液に、室温にて２
時間かけて滴下し、そのままの温度で13時間ゆっくり撹
拌しながら油滴をシードポリマーに吸収させた。次い
で、これに２％ポリビニルアルコール水溶液263gを加
え、70℃で８時間シード重合を行なった。放冷後、遠心
分離して単離し、水、アセトン及びメタノールで洗浄し
た。乾燥後の収率は81％であった。この重合で得られた
ポリマー粒子は、走査電子顕微鏡により観察したとこ
ろ、平均粒径3.1μｍであり、90％以上の粒子が平均粒
径±１μｍ以内にあることが確認された。また、熱分解
ガスクロマトグラフィーにより組成分析を行なったとこ
ろ、グリシジルメタクリレート単位の重量分率は10.3
％、エチレングリコールジメタクリレート単位の重量分
率は89.7％と推定された。次いで、得られた原料エポキ
シポリマーを実施例１と同様の方法で処理し、カルボキ
シメチル基を有する樹脂を得た。得られた樹脂の陽イオ
ン交換容量は乾燥重量1g当たり0.35ミリ当量であった。
得られたカルボキシメチル基を有する樹脂2.1g（湿潤状
態）を定圧ポンプにて内径6mm、長さ40mmのステンレス
製カラムに充填した。得られた充填カラムを実施例１と
全く同様にして、異化ヘモグロビンの分離評価を行なっ
た。溶離液の送液流速は毎分1.5mlに設定した。Alc成分
が1.22分、Ao成分が10.74分に溶出し迅速な分離が可能
であった。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の分離用担体を用いて異化ヘモグロビン
を分離した際のクロマトグラムを示す図である。１……Alo、２……Ao

フロントページの続き (72)発明者安中雅彦神奈川県横浜市緑区鴨志田町1000番地三菱化成株式会社総合研究所内 (56)参考文献特開昭58−760（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) G01N 33/72 G01N 30/88

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】グリシジルメタクリレートから誘導される
下記式で示される単位の重量分率が少なくとも３％、（R¹及びR²は水素原子及び／又は陽イオン交換基を有す
る有機基を表わす。）多価アルコールと１分子中に少なくとも１個の重合性２
重結合を有するカルボン酸とのポリエステルを含む架橋
性モノマーから誘導される単位の重量分率が80〜97％、
グリシジルメタクリレート以外の１分子中に重合性２重
結合を１個持つモノマーから誘導される単位の重量分率
が０〜５％であり、交換容量が乾燥重量当り0.1〜0.5ミ
リ当量である陽イオン交換樹脂からなることを特徴とす
る異化ヘモグロビン分離用担体。
【請求項２】下記各工程により製造される請求項（１）
に記載の異化ヘモグロビン分離用担体。第１工程グリシジルメタクリレートの重量分率が85〜100％、多
価アルコールと１分子中に少なくとも１個の重合性２重
結合を有するカルボン酸とのポリエステルを含む架橋性
モノマーの重量分率が０〜１％、グリシジルメタクリレ
ート以外の１分子中に重合性２重結合を１個持つモノマ
ーの重量分率が０〜15％であるモノマー混合物を、これ
らのモノマー混合物を溶解するが生成するポリマーは溶
解しない媒体の存在下に分散重合することによりシード
ポリマーを製造する。第２工程第１工程において製造したシードポリマーに、該シード
ポリマーの２〜20重量倍の重合性モノマーを添加後、シ
ード重合して原料エポキシポリマーを製造する。但し、上記重合性モノマーは、該重合性モノマー中、95
〜100重量％の多価アルコールと１分子中に少なくとも
１個の重合性２重結合を有するカルボン酸とのポリエス
テルを含む架橋性モノマーと、０〜５重量％のグリシジ
ルメタクリレート及び／又はグリシジルメタクリレート
以外の１分子中に重合性２重結合を１個持つモノマーを
含有する。第３工程第２工程において、製造した原料エポキシポリマーを使
用して乾燥重量1g当たり0.1〜0.5ミリ当量の陽イオン交
換基を導入する。