JP2682859B2 - レセプター膜 - Google Patents
レセプター膜Info
- Publication number
- JP2682859B2 JP2682859B2 JP63506329A JP50632988A JP2682859B2 JP 2682859 B2 JP2682859 B2 JP 2682859B2 JP 63506329 A JP63506329 A JP 63506329A JP 50632988 A JP50632988 A JP 50632988A JP 2682859 B2 JP2682859 B2 JP 2682859B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- molecule
- receptor
- membrane
- membrane according
- receptor molecule
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000012528 membrane Substances 0.000 title claims abstract description 98
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 claims abstract description 73
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims abstract description 25
- 230000008859 change Effects 0.000 claims abstract description 19
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 111
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 111
- 108010026389 Gramicidin Proteins 0.000 claims description 59
- 229960004905 gramicidin Drugs 0.000 claims description 34
- ZWCXYZRRTRDGQE-SORVKSEFSA-N gramicidina Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)NCCO)=CNC2=C1 ZWCXYZRRTRDGQE-SORVKSEFSA-N 0.000 claims description 31
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 29
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 28
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 28
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 26
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 26
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- -1 antibodies Proteins 0.000 claims description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 22
- ZWCXYZRRTRDGQE-LUPIJMBPSA-N valyl gramicidin a Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)NCCO)=CNC2=C1 ZWCXYZRRTRDGQE-LUPIJMBPSA-N 0.000 claims description 22
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 19
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 19
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 19
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 15
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 9
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 9
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 8
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 6
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 claims description 6
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 claims description 5
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 5
- 239000002523 lectin Substances 0.000 claims description 5
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims description 4
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 claims description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 3
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 claims 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims 1
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 abstract description 59
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 description 27
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 20
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 12
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 10
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 10
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 8
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 7
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 7
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 239000002555 ionophore Substances 0.000 description 7
- 230000000236 ionophoric effect Effects 0.000 description 7
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 7
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 4
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 4
- WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N (2s)-3-(1h-indol-2-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC2=C1 WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000002847 impedance measurement Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JAMNSIXSLVPNLC-UHFFFAOYSA-N (4-ethenylphenyl) acetate Chemical compound CC(=O)OC1=CC=C(C=C)C=C1 JAMNSIXSLVPNLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AGYUOJIYYGGHKV-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(2-chloroethoxy)ethane Chemical compound ClCCOCCOCCCl AGYUOJIYYGGHKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TXFPEBPIARQUIG-UHFFFAOYSA-N 4'-hydroxyacetophenone Chemical compound CC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 TXFPEBPIARQUIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000002715 bioenergetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 239000002739 cryptand Substances 0.000 description 2
- DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N decane Chemical compound CCCCCCCCCC DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N dodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 2
- 230000010220 ion permeability Effects 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- HIGSLXSBYYMVKI-UHFFFAOYSA-N pralidoxime chloride Chemical compound [Cl-].C[N+]1=CC=CC=C1\C=N\O HIGSLXSBYYMVKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 125000000297 undecanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- MDXGYYOJGPFFJL-MRVPVSSYSA-N (2r)-4-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUGYGGDSWSUORM-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxystyrene Chemical compound OC1=CC=C(C=C)C=C1 FUGYGGDSWSUORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000193764 Brevibacillus brevis Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 1
- 244000026610 Cynodon dactylon var. affinis Species 0.000 description 1
- 102000016955 Erythrocyte Anion Exchange Protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010014384 Erythrocyte Anion Exchange Protein 1 Proteins 0.000 description 1
- LQSMEVHEYXACJP-DSHASFMGSA-N Gramicidin B Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCCO)C1=CC=CC=C1 LQSMEVHEYXACJP-DSHASFMGSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 108010036176 Melitten Proteins 0.000 description 1
- 241000100287 Membras Species 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-O Methylammonium ion Chemical compound [NH3+]C BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108010013381 Porins Proteins 0.000 description 1
- 102000017033 Porins Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 150000001491 aromatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical group OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006231 channel black Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- NDAYQJDHGXTBJL-MWWSRJDJSA-N chembl557217 Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)NCCO)=CNC2=C1 NDAYQJDHGXTBJL-MWWSRJDJSA-N 0.000 description 1
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 1
- DIWKDXFZXXCDLF-UHFFFAOYSA-N chloroethyne Chemical compound ClC#C DIWKDXFZXXCDLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002484 cyclic voltammetry Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- OGQYPPBGSLZBEG-UHFFFAOYSA-N dimethyl(dioctadecyl)azanium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OGQYPPBGSLZBEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNAHIZMDSQCWRP-UHFFFAOYSA-N dodecane-1-thiol Chemical compound CCCCCCCCCCCCS WNAHIZMDSQCWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012039 electrophile Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- RIZMRRKBZQXFOY-UHFFFAOYSA-N ethion Chemical compound CCOP(=S)(OCC)SCSP(=S)(OCC)OCC RIZMRRKBZQXFOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- IUAYMJGZBVDSGL-XNNAEKOYSA-N gramicidin S Chemical compound C([C@@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1)C(C)C)=O)CC(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 IUAYMJGZBVDSGL-XNNAEKOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 229910052741 iridium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002462 isocyano group Chemical group *[N+]#[C-] 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- VDXZNPDIRNWWCW-JFTDCZMZSA-N melittin Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(N)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 VDXZNPDIRNWWCW-JFTDCZMZSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M potassium bisulfate Chemical compound [K+].OS([O-])(=O)=O CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000343 potassium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000001028 reflection method Methods 0.000 description 1
- 238000009774 resonance method Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 1
- 231100000489 sensitizer Toxicity 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000006884 silylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 125000003011 styrenyl group Chemical group [H]\C(*)=C(/[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010897 surface acoustic wave method Methods 0.000 description 1
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y30/00—Nanotechnology for materials or surface science, e.g. nanocomposites
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D69/00—Semi-permeable membranes for separation processes or apparatus characterised by their form, structure or properties; Manufacturing processes specially adapted therefor
- B01D69/02—Semi-permeable membranes for separation processes or apparatus characterised by their form, structure or properties; Manufacturing processes specially adapted therefor characterised by their properties
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D69/00—Semi-permeable membranes for separation processes or apparatus characterised by their form, structure or properties; Manufacturing processes specially adapted therefor
- B01D69/12—Composite membranes; Ultra-thin membranes
- B01D69/122—Separate manufacturing of ultra-thin membranes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D69/00—Semi-permeable membranes for separation processes or apparatus characterised by their form, structure or properties; Manufacturing processes specially adapted therefor
- B01D69/14—Dynamic membranes
- B01D69/141—Heterogeneous membranes, e.g. containing dispersed material; Mixed matrix membranes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y15/00—Nanotechnology for interacting, sensing or actuating, e.g. quantum dots as markers in protein assays or molecular motors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/001—Enzyme electrodes
- C12Q1/002—Electrode membranes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/5432—Liposomes or microcapsules
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54373—Apparatus specially adapted for solid-phase testing involving physiochemical end-point determination, e.g. wave-guides, FETS, gratings
- G01N33/5438—Electrodes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/817—Enzyme or microbe electrode
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Condensed Matter Physics & Semiconductors (AREA)
- Composite Materials (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は受容体(レセプター)分子および(または)
イオンチャンネルを取り込んだ膜に関するものである。
イオンチャンネルを取り込んだ膜に関するものである。
従来技術 両親媒性分子(amphiphilic molecules)は溶液中に
おいて凝集し、例えば、単層、ミセル、黒膜、そして一
つ又は複数のコンパートメントからなるマルチラメラタ
イプのベシクル又はリポソームのような、2次元あるい
は3次元の配列を形成することが知られている。また、
このような両親媒性分子は架橋結合可能な部分(cross
−linkable moieties)を伴って形成されることが知ら
れている。例えば紫外線照射又は電離性放射線のような
適当な刺激を与えると、あたかも架橋結合可能な部分は
両親媒性分子が2次元もしくは3次元に適切に配列され
た後に重合される。さらに、最適なレセプター分子は両
親媒性分子の秩序だった配列の中に含まれることが知ら
れている。
おいて凝集し、例えば、単層、ミセル、黒膜、そして一
つ又は複数のコンパートメントからなるマルチラメラタ
イプのベシクル又はリポソームのような、2次元あるい
は3次元の配列を形成することが知られている。また、
このような両親媒性分子は架橋結合可能な部分(cross
−linkable moieties)を伴って形成されることが知ら
れている。例えば紫外線照射又は電離性放射線のような
適当な刺激を与えると、あたかも架橋結合可能な部分は
両親媒性分子が2次元もしくは3次元に適切に配列され
た後に重合される。さらに、最適なレセプター分子は両
親媒性分子の秩序だった配列の中に含まれることが知ら
れている。
膜のイオン選択性又はイオンの膜透過性は、膜が有す
る孔またはチャンネルの数、大きさおよび化学的構造に
依存する。膜を透過する透過性溶質分子は前記孔または
前記チャンネルを通る。
る孔またはチャンネルの数、大きさおよび化学的構造に
依存する。膜を透過する透過性溶質分子は前記孔または
前記チャンネルを通る。
膜のイオン透過性を高めるイオノホアと呼ばれるある
群の分子は膜に取り込まれることが知られている。イオ
ンチャンネルはイオノホアの特別な一形態をなすもの
で、この用語の意味するところはチャンネルを通ること
によってイオンが膜を透過するということである。
群の分子は膜に取り込まれることが知られている。イオ
ンチャンネルはイオノホアの特別な一形態をなすもの
で、この用語の意味するところはチャンネルを通ること
によってイオンが膜を透過するということである。
イオノホアを取り込んだ膜は自然界において存在し、
また人工的にも作ることができる。オーストラリア特許
出願第40123/85号はバイオセンサーにイオノホアを取り
込んだ膜を利用したことが開示されている。この文献に
挙げられたイオノホアはアセチルコリン受容体である。
アセチルコリン受容体はアセチルコリン存在下において
開閉イオノホア(gated ionophore)として機能するこ
とによって、イオン膜が透過することを促進させること
ができる。このようなことは、神経シナプスにおいて見
られることと同じである。
また人工的にも作ることができる。オーストラリア特許
出願第40123/85号はバイオセンサーにイオノホアを取り
込んだ膜を利用したことが開示されている。この文献に
挙げられたイオノホアはアセチルコリン受容体である。
アセチルコリン受容体はアセチルコリン存在下において
開閉イオノホア(gated ionophore)として機能するこ
とによって、イオン膜が透過することを促進させること
ができる。このようなことは、神経シナプスにおいて見
られることと同じである。
本発明は、両親媒性分子の自己凝集(self−assembli
ng)による密閉配列(closely packed array)からな
り、かつ膜が以下の特徴を有する。すなわち、(1)膜
はヘリックス又はそれらの凝集体を形成可能なペプチ
ド、ポダンド(podands)、コロナンド(coronands)、
クリプタンド(cryptands)およびそれらの組合物から
なる群から選択された複数のイオンチャンネルを含み、
かつ(2)少なくとも自己凝集両親媒性分子の一部部分
が支持部(suporting entity)に結合したレセプター分
子からなり、該レセプター分子はレセプター部位(rece
ptor site)を有し、免疫グロブリン、抗体、抗体断
片、色素、酵素およびレクチンからなる群から選択され
たものである。前記支持部は脂質の頭群(lipid head g
roup)、炭水化物鎖(hydrocarbon chajin(s))、架
橋結合可能な分子(cross−linkable molecule)および
膜タンパク質(membraneprotein)からなる群から選択
されたものである。この支持部はレセプター分子のレセ
プター部位から離れた端に結合している。
ng)による密閉配列(closely packed array)からな
り、かつ膜が以下の特徴を有する。すなわち、(1)膜
はヘリックス又はそれらの凝集体を形成可能なペプチ
ド、ポダンド(podands)、コロナンド(coronands)、
クリプタンド(cryptands)およびそれらの組合物から
なる群から選択された複数のイオンチャンネルを含み、
かつ(2)少なくとも自己凝集両親媒性分子の一部部分
が支持部(suporting entity)に結合したレセプター分
子からなり、該レセプター分子はレセプター部位(rece
ptor site)を有し、免疫グロブリン、抗体、抗体断
片、色素、酵素およびレクチンからなる群から選択され
たものである。前記支持部は脂質の頭群(lipid head g
roup)、炭水化物鎖(hydrocarbon chajin(s))、架
橋結合可能な分子(cross−linkable molecule)および
膜タンパク質(membraneprotein)からなる群から選択
されたものである。この支持部はレセプター分子のレセ
プター部位から離れた端に結合している。
両親媒性分子は、通常は親水性の「頭」部と疎水性の
「尾」部を持つ界面活性剤分子(surfactant molecule
s)である。界面活性剤は、陽イオン性(例えば4級ア
ンモニア塩)、陰イオン性(例えば、有機スルホン酸
塩)、両性イオン性(例えば、ホスホチジルコリン、ホ
スホチジルエタノールアミン)、膜スパン脂質(membra
ne spanning lipid)または非イオン性(例えば、ポリ
エステル原料)のような既知のものである。両親媒性分
子は好ましくはそれらが架橋結合してなるものである。
そのために、ビニル、メタクリレート、ジアセチレー
ト、イソシアノまたはスチレン基のような架橋結合可能
な部分を頭部または尾部に含まなくてはならない。その
ような基は、好ましくは福田らが米国化学学会誌(J.Am
er.Chem.Soc.2321−2327 108,1986)に発表したような
スペーサー基を介して両親媒性分子に結合するものであ
る。重合は、フリーラジカルイニシエーター存在下又は
非存在下における加熱、および増感剤(sensitiser)又
はイニシエーター存在下もしくは非存在下における放射
処理を含む不飽和単量体の重合に用いられる方法のどれ
でも行なうことが可能である。
「尾」部を持つ界面活性剤分子(surfactant molecule
s)である。界面活性剤は、陽イオン性(例えば4級ア
ンモニア塩)、陰イオン性(例えば、有機スルホン酸
塩)、両性イオン性(例えば、ホスホチジルコリン、ホ
スホチジルエタノールアミン)、膜スパン脂質(membra
ne spanning lipid)または非イオン性(例えば、ポリ
エステル原料)のような既知のものである。両親媒性分
子は好ましくはそれらが架橋結合してなるものである。
そのために、ビニル、メタクリレート、ジアセチレー
ト、イソシアノまたはスチレン基のような架橋結合可能
な部分を頭部または尾部に含まなくてはならない。その
ような基は、好ましくは福田らが米国化学学会誌(J.Am
er.Chem.Soc.2321−2327 108,1986)に発表したような
スペーサー基を介して両親媒性分子に結合するものであ
る。重合は、フリーラジカルイニシエーター存在下又は
非存在下における加熱、および増感剤(sensitiser)又
はイニシエーター存在下もしくは非存在下における放射
処理を含む不飽和単量体の重合に用いられる方法のどれ
でも行なうことが可能である。
発明の開示 本発明の好まし実施態様では、レセプター分子を含ま
ない両親媒性分子は、他の分子の相補的な部分と架橋結
合する部分を含有あるいは付加したものである。より好
ましい実施態様では、支持部(suporting entity)と共
有結合的に結合(covalently linked)されたイオンチ
ャンネルおよび(または)レセプター分子もまた、他の
分子の相補的な部分と架橋結合する部分を含有あるいは
装飾されている。
ない両親媒性分子は、他の分子の相補的な部分と架橋結
合する部分を含有あるいは付加したものである。より好
ましい実施態様では、支持部(suporting entity)と共
有結合的に結合(covalently linked)されたイオンチ
ャンネルおよび(または)レセプター分子もまた、他の
分子の相補的な部分と架橋結合する部分を含有あるいは
装飾されている。
上記したように、本発明において用いられるイオンチ
ャンネルはヘリックスおよびそれらの凝集体を形成可能
なペプチド、ポダンド、コロナンドおよびクリプタンド
からなる群から選らばれたものである。しかしながら、
イオンチャンネルはヘリックス又はその凝集体を形成す
ることが可能なひとつのペプチドからなるものが好まし
い。
ャンネルはヘリックスおよびそれらの凝集体を形成可能
なペプチド、ポダンド、コロナンドおよびクリプタンド
からなる群から選らばれたものである。しかしながら、
イオンチャンネルはヘリックス又はその凝集体を形成す
ることが可能なひとつのペプチドからなるものが好まし
い。
ポダンド、クプリタンドおよびコロナンドについては
すでに科学系の文献、例えば、化学学会誌化学情報(V.
F.Kragtenら:J.Chem.;Soc.Chem.Commun.,1275,1985)、
米国化学学会誌(O.E.Sielckenら:J.Amer.Chem.Soc.,42
61 109,1987)、テトラヘドロンレターズ(J.G.Neevel
ら:Tetrahedron Letters,2263 25,1984)に記載されて
いる。
すでに科学系の文献、例えば、化学学会誌化学情報(V.
F.Kragtenら:J.Chem.;Soc.Chem.Commun.,1275,1985)、
米国化学学会誌(O.E.Sielckenら:J.Amer.Chem.Soc.,42
61 109,1987)、テトラヘドロンレターズ(J.G.Neevel
ら:Tetrahedron Letters,2263 25,1984)に記載されて
いる。
α−ヘリックスを形成するペプチドは、一般にイオン
チャンネルを形成するために凝集体として存在する必要
がある。一般的には、α−ヘリックスはイオンチャンネ
ルが凝集体を貫通するようにして凝集体を形成する。
チャンネルを形成するために凝集体として存在する必要
がある。一般的には、α−ヘリックスはイオンチャンネ
ルが凝集体を貫通するようにして凝集体を形成する。
イオンチャンネルはβ−ヘリックスを形成するペプチ
ドであることが望ましい。そのようなポリペプチドとし
ては例えばグラミシジンAがある。グラミシジンAの一
次配列は第1図に示した。この分子は詳細に研究されて
おり、詳しくは「生体膜と生体エネルギー学(Biomembr
anes and Bioenergetics)」(B.A.コーネル著、1987年
655−676ページ)を見よ。イオンチャンネルとしてのグ
ラミシジンAは非極性生体膜を貫通する極性チャンネル
として機能する。グラミシジンAは合成によるか、また
は細菌(Bacillus brevis)からの抽出によって生産さ
れる。リン脂質二重層においてはグラミシジンAは、リ
ン脂質二重層に実質的に分配されたヘリックス二量体と
して存在する。
ドであることが望ましい。そのようなポリペプチドとし
ては例えばグラミシジンAがある。グラミシジンAの一
次配列は第1図に示した。この分子は詳細に研究されて
おり、詳しくは「生体膜と生体エネルギー学(Biomembr
anes and Bioenergetics)」(B.A.コーネル著、1987年
655−676ページ)を見よ。イオンチャンネルとしてのグ
ラミシジンAは非極性生体膜を貫通する極性チャンネル
として機能する。グラミシジンAは合成によるか、また
は細菌(Bacillus brevis)からの抽出によって生産さ
れる。リン脂質二重層においてはグラミシジンAは、リ
ン脂質二重層に実質的に分配されたヘリックス二量体と
して存在する。
両親媒性分子とグラミシジンAとの架橋結合を考える
と、グラミシジンAは1、2、3あるいは4個のトリプ
トファンとスチレンのような重合可能な基とが置換する
ことによって修飾される。重合可能な基はネイテイブな
グラミシジンAの第9、11、13および(または)15番目
のアミノ酸残基のα位炭素に付着する。
と、グラミシジンAは1、2、3あるいは4個のトリプ
トファンとスチレンのような重合可能な基とが置換する
ことによって修飾される。重合可能な基はネイテイブな
グラミシジンAの第9、11、13および(または)15番目
のアミノ酸残基のα位炭素に付着する。
さらに本発明においてイオンチャネルとして用いられ
る分子には、グラミシジンB、グラミシジンC、グラミ
シジンD、グラミシジンGT、グラミシジンGM、グラミシ
ジンGM-、グラミシジンGN-、グラミシジンA′(デユボ
ス;Dubos)、バンド3タンパク質、バクテリオドロプシ
ン、メリチン、アラメチン、アラメチン類似化合物、ポ
ーリン、チロシジン、およびチロスリシンが含まれる。
る分子には、グラミシジンB、グラミシジンC、グラミ
シジンD、グラミシジンGT、グラミシジンGM、グラミシ
ジンGM-、グラミシジンGN-、グラミシジンA′(デユボ
ス;Dubos)、バンド3タンパク質、バクテリオドロプシ
ン、メリチン、アラメチン、アラメチン類似化合物、ポ
ーリン、チロシジン、およびチロスリシンが含まれる。
以後、これらのグラミシジンを単純なグラミシンとし
て見做して言及する。
て見做して言及する。
グラミシンの特別な例として、膜が単層の場合、グラ
ミシジンAの単量体をイオンチャンネルとして用いるこ
とができる。膜が二重層である場合は、グラミシジンA
二重体の合成類似化合物をイオンチャンネルとして用い
ることができる。この合成類似化合物は最適な架橋結合
部分を与える。さらに、膜が二重層である場合はイオン
チャンネルは2つのグラミシジンA単量体とすることも
考えられ、それぞれの単量体はそれぞれ異なる層にあ
る。この場合、グラミシジンA単量体はそれらの層を拡
散して通ることが可能で、2つの単量体が一列に並んだ
ときに、二重層にイオンチャンネルが形成される。
ミシジンAの単量体をイオンチャンネルとして用いるこ
とができる。膜が二重層である場合は、グラミシジンA
二重体の合成類似化合物をイオンチャンネルとして用い
ることができる。この合成類似化合物は最適な架橋結合
部分を与える。さらに、膜が二重層である場合はイオン
チャンネルは2つのグラミシジンA単量体とすることも
考えられ、それぞれの単量体はそれぞれ異なる層にあ
る。この場合、グラミシジンA単量体はそれらの層を拡
散して通ることが可能で、2つの単量体が一列に並んだ
ときに、二重層にイオンチャンネルが形成される。
高いコンダクタンスを有する膜コートとしてイオンチ
ャンネルを取り込んだ本発明の膜を利用する可能性があ
る一方、多くの場合においてアナライト(analyte)の
存在に反応する膜コンダクタンスが必要である。よっ
て、本発明の好ましい実施態様では、イオンチャンネル
は該イオンチャンネルの一端に結合もしくは付着したレ
セプター部分(receptor moiety)によって開閉される
もので、普通に存在する場合、レセプター部分は第1状
態にあり、アナライトが結合すると第2状態になる。こ
のような状態の変化はイオンチャンネルのイオン透過性
に変化を及ぼす。
ャンネルを取り込んだ本発明の膜を利用する可能性があ
る一方、多くの場合においてアナライト(analyte)の
存在に反応する膜コンダクタンスが必要である。よっ
て、本発明の好ましい実施態様では、イオンチャンネル
は該イオンチャンネルの一端に結合もしくは付着したレ
セプター部分(receptor moiety)によって開閉される
もので、普通に存在する場合、レセプター部分は第1状
態にあり、アナライトが結合すると第2状態になる。こ
のような状態の変化はイオンチャンネルのイオン透過性
に変化を及ぼす。
第1状態にあるレセプター部分は通常、イオンチャン
ネルのイオン透過が遮られているか、妨害されている。
レセプターへのアナライトの付着によってレセプターを
第2状態にすることによって、イオンチャンネルをイオ
ンが透過できるようにする。上述のようにすることによ
り、イオンチャンネルは、一分子のアナライトのように
少ないものを検知するのに用いることができる。一分子
のアナライトの付着により、イオンチャンネルが開か
れ、イオン流が膜を通過する。このイオンの漏れが一定
時間続くことによって、該漏れがレセプターへアナライ
トが結合するシグナルとして確認できよう。一つのイオ
ンチャンネルによて生ずる膜を横切る電流を測定してみ
ると、通常1つのチャンネルにつき4pAの電流が流れる
ことがわかる。
ネルのイオン透過が遮られているか、妨害されている。
レセプターへのアナライトの付着によってレセプターを
第2状態にすることによって、イオンチャンネルをイオ
ンが透過できるようにする。上述のようにすることによ
り、イオンチャンネルは、一分子のアナライトのように
少ないものを検知するのに用いることができる。一分子
のアナライトの付着により、イオンチャンネルが開か
れ、イオン流が膜を通過する。このイオンの漏れが一定
時間続くことによって、該漏れがレセプターへアナライ
トが結合するシグナルとして確認できよう。一つのイオ
ンチャンネルによて生ずる膜を横切る電流を測定してみ
ると、通常1つのチャンネルにつき4pAの電流が流れる
ことがわかる。
当業者によって容易に理解されるように、レセプター
部分が第1状態である場合、イオンはイオンチャンネル
を通過可能となり、そして第2状態にある場合に、イオ
ンのイオンチャンネルの透過は遮られるか、もしくは妨
害される。
部分が第1状態である場合、イオンはイオンチャンネル
を通過可能となり、そして第2状態にある場合に、イオ
ンのイオンチャンネルの透過は遮られるか、もしくは妨
害される。
レセプター部分は要求するアナライトに結合する能力
を有し、かつアナライトを結合することによってイオン
チャンネルを第1状態から第2状態に変える能力を有す
る何らかの化学的なもの(chemical entity)である可
能性がある。レセプター部分は他の分子を識別すること
のできる何らかの化合物あるいは合成物である。天然の
レセプターには抗体、酵素、レクチン、染料などがあ
る。例えば、抗原に対する受容体は抗体で、一方、抗体
に対するレセプターは抗抗体、または、好ましくほかな
らなぬ抗体によって認識される抗原のどちらかである。
を有し、かつアナライトを結合することによってイオン
チャンネルを第1状態から第2状態に変える能力を有す
る何らかの化学的なもの(chemical entity)である可
能性がある。レセプター部分は他の分子を識別すること
のできる何らかの化合物あるいは合成物である。天然の
レセプターには抗体、酵素、レクチン、染料などがあ
る。例えば、抗原に対する受容体は抗体で、一方、抗体
に対するレセプターは抗抗体、または、好ましくほかな
らなぬ抗体によって認識される抗原のどちらかである。
レセプター部分の好ましい実施態様は、イオンチャン
ネルに付着するもので、好ましくはポリペプチドイオン
チャンネルのペプチド末端配列を含むもので、該末端配
列は抗体に結合できる。抗体の結合は末端配列の形を変
え、イオンがイオンチャンネルを通過できるようにす
る。レセプター部分は適当な方法のどれかによってイオ
ンチャンネルに付着する可能性があり、付着は完全なも
のである必要はない。よって、レセプターは共有結合的
(covalently)に、あるいは非共有結合的(non−covel
ently)にイオンチャンネルに結合する。
ネルに付着するもので、好ましくはポリペプチドイオン
チャンネルのペプチド末端配列を含むもので、該末端配
列は抗体に結合できる。抗体の結合は末端配列の形を変
え、イオンがイオンチャンネルを通過できるようにす
る。レセプター部分は適当な方法のどれかによってイオ
ンチャンネルに付着する可能性があり、付着は完全なも
のである必要はない。よって、レセプターは共有結合的
(covalently)に、あるいは非共有結合的(non−covel
ently)にイオンチャンネルに結合する。
アナライトはレセプター部分に結合し、さらに、位置
の変化、立体像の変化、またはイオンチャンネルを第1
から第2の状態に変換するような変化を引き起こす何ら
かの適当な分子もしくは分子の集りであろう。もし、レ
セプターがペプチドであるならば、アナライトは抗体も
しくは免疫グロブリン、酵素または細胞表層レセプター
であろう。しかし、もしレセプターが抗体または酵素で
あるならば、アナライトはそれに結合するような何らか
の分子であろう。
の変化、立体像の変化、またはイオンチャンネルを第1
から第2の状態に変換するような変化を引き起こす何ら
かの適当な分子もしくは分子の集りであろう。もし、レ
セプターがペプチドであるならば、アナライトは抗体も
しくは免疫グロブリン、酵素または細胞表層レセプター
であろう。しかし、もしレセプターが抗体または酵素で
あるならば、アナライトはそれに結合するような何らか
の分子であろう。
上記の実施例において、第1状態にあるレセプター部
分は効果的にイオンチャンネルを塞ぐ。この開閉方法
(method of gating)の種々の変形例はイオンチャンネ
ルに“プラグ(plugging)”されることが可能な化合物
をレセプター部分に与えることによって行なわれる。こ
の実施例においてレセプター部分へのアナライトの結合
はイオンチャンネルにプラグされた化合物を効果的に引
きだすものであることから、アナライトの結合によって
イオンがチャンネルを通過することが可能となる。プラ
グとして用いられる化合物としては、レセプター自身ま
たはより小さな分子、例えば、エチルアンモニウムイオ
ン、およびカルシウムカオチンのような2価イオンと同
様にイオンチャンネルを全体的に阻害するメチルアンモ
ニウムイオンがある。さらに、グアノジニウムイオンは
イオンチャンネルを部分的に阻害するもので、一方、フ
ェノール、エタノールアミン、そしてアンモニウムイオ
ンのより長い鎖のものもまた、プラグとして用いること
が可能な化合物であろう。
分は効果的にイオンチャンネルを塞ぐ。この開閉方法
(method of gating)の種々の変形例はイオンチャンネ
ルに“プラグ(plugging)”されることが可能な化合物
をレセプター部分に与えることによって行なわれる。こ
の実施例においてレセプター部分へのアナライトの結合
はイオンチャンネルにプラグされた化合物を効果的に引
きだすものであることから、アナライトの結合によって
イオンがチャンネルを通過することが可能となる。プラ
グとして用いられる化合物としては、レセプター自身ま
たはより小さな分子、例えば、エチルアンモニウムイオ
ン、およびカルシウムカオチンのような2価イオンと同
様にイオンチャンネルを全体的に阻害するメチルアンモ
ニウムイオンがある。さらに、グアノジニウムイオンは
イオンチャンネルを部分的に阻害するもので、一方、フ
ェノール、エタノールアミン、そしてアンモニウムイオ
ンのより長い鎖のものもまた、プラグとして用いること
が可能な化合物であろう。
一般的には、イオン直径が4ないし6オングストロー
ムの正に荷電されたものが、イオンチャンネルに対して
イオンの流入を許し、かつチャンネルに“プラグ”され
るに十分なフレッキシビリテイを持ってレセプター部分
に付着するものとして利用可能であると考えられてい
る。
ムの正に荷電されたものが、イオンチャンネルに対して
イオンの流入を許し、かつチャンネルに“プラグ”され
るに十分なフレッキシビリテイを持ってレセプター部分
に付着するものとして利用可能であると考えられてい
る。
より好ましい実施態様において、レセプター部分は抗
体、または好ましくは、少なくとも一つのFabフラグメ
ント(以下、Fabと呼ぶ)を含む抗体断片からなるもの
である。この取り合わせにおいて、Fabは第1状態下で
はイオンのチャンネル通過を許し、第2状態下ではイオ
ンの通過を遮断する。即ち、科学的理論に合うことを望
むまでもなく、イオンチャンネルが2価のグラミシジン
Aで、かつレセプターがイオンチャンネルに付着したFa
bからなる場合は、イオンのチャンネル通過は2価のグ
ラミシジンA骨格の***(disruption)による、あるい
はFabた結合した2価のグラミシジンのヘリックス部分
の***によるアナライトへのFabの結合(即ち、第2状
態)によって阻害されることが一般的には知られてい
る。
体、または好ましくは、少なくとも一つのFabフラグメ
ント(以下、Fabと呼ぶ)を含む抗体断片からなるもの
である。この取り合わせにおいて、Fabは第1状態下で
はイオンのチャンネル通過を許し、第2状態下ではイオ
ンの通過を遮断する。即ち、科学的理論に合うことを望
むまでもなく、イオンチャンネルが2価のグラミシジン
Aで、かつレセプターがイオンチャンネルに付着したFa
bからなる場合は、イオンのチャンネル通過は2価のグ
ラミシジンA骨格の***(disruption)による、あるい
はFabた結合した2価のグラミシジンのヘリックス部分
の***によるアナライトへのFabの結合(即ち、第2状
態)によって阻害されることが一般的には知られてい
る。
本発明では、少なくとも支持部(suporting entity)
に結合したレセプター部からなる両親媒性分子からな
り、レセプター分子および支持部はともに新たな両親媒
性体(amphiphile)を形成する。このことは、高密度の
レセプター部位(receptor site)を有する膜の形成を
可能とする。原理的には、レセプター部位の密度は単独
に、個々のレセプター分子間の立体的障害物(steric h
indrance)を考慮することによって限定される。本発明
のより好ましい実施態様によれば、レセプター分子が抗
体断片である場合、この抗体断片は少なくともひとつの
Fabフラグメントを含むものである。本発明のより好ま
しい実施態様によれば、支持部は架橋結合可能な分子ま
たは膜タンパク質のどちらかであり、かつ好ましくは架
橋結合可能な分子は両機能的(bi−functional)なもの
である。本発明における他の好ましい実施態様として、
抗体断片は2つのFabフラグメントからなり、それぞれ
のFabは異なる抗原を認識する。さらに他の好ましい実
施態様では、抗体断片はひとつのFabフラグメントを単
に含む。
に結合したレセプター部からなる両親媒性分子からな
り、レセプター分子および支持部はともに新たな両親媒
性体(amphiphile)を形成する。このことは、高密度の
レセプター部位(receptor site)を有する膜の形成を
可能とする。原理的には、レセプター部位の密度は単独
に、個々のレセプター分子間の立体的障害物(steric h
indrance)を考慮することによって限定される。本発明
のより好ましい実施態様によれば、レセプター分子が抗
体断片である場合、この抗体断片は少なくともひとつの
Fabフラグメントを含むものである。本発明のより好ま
しい実施態様によれば、支持部は架橋結合可能な分子ま
たは膜タンパク質のどちらかであり、かつ好ましくは架
橋結合可能な分子は両機能的(bi−functional)なもの
である。本発明における他の好ましい実施態様として、
抗体断片は2つのFabフラグメントからなり、それぞれ
のFabは異なる抗原を認識する。さらに他の好ましい実
施態様では、抗体断片はひとつのFabフラグメントを単
に含む。
本発明のさらなる好ましい実施態様では、両親媒性分
子からなる部分が支持部に結合したレセプター分子を含
む場合、膜は異なる分子または抗原決定因子(antigeni
c determinat)に反応する複数のレセプターを含むであ
ろう。例えば、複数のレセプター分子が2つの異なるFa
bの混合物からなる場合、その半数のレセプターがひと
つの抗原決定因子に向けられ、他の半数レセプターは他
の抗原決定因子に向けられることが可能である。
子からなる部分が支持部に結合したレセプター分子を含
む場合、膜は異なる分子または抗原決定因子(antigeni
c determinat)に反応する複数のレセプターを含むであ
ろう。例えば、複数のレセプター分子が2つの異なるFa
bの混合物からなる場合、その半数のレセプターがひと
つの抗原決定因子に向けられ、他の半数レセプターは他
の抗原決定因子に向けられることが可能である。
免疫グロブリンは4つのポリペプチド鎖(2つのL鎖
および2つのH鎖)がジスルフィド結合することによっ
て構成されたY字形分子である。LおよびHポリペプチ
ド鎖はドメインと呼ばれる球状領域に包まれている。H
鎖のCγ1およびCγ2ドメインの間にあるヒンジ領域
として知られている部分(D.S.スミスおよびS.ウツミ
(1967)ネイチャー(Nature)第216巻332ページ)はタ
ンパク質分解酵素によって切断される。酵素のパパイン
による切断はY形分子の両腕を離すもので、即ち、Fab
フラグメントをFc枝部から離す(S.ザッパコスタら(19
68)免疫学雑誌(J.Immunol.)第100巻1268ページ)。F
abフラグメントはイオン交換クロマトグラフィ(A.L.ノ
ッキンスら(1968)免疫学雑誌(J.Immunol.)第100巻3
14ページ)およびアフィニテイクロマトズラフィ(F.デ
ユラファルグラ(1976)免疫学雑誌(J.Immunol.)第12
3巻247ページ)によって精製される。本発明の他の好ま
しい実施態様ではFabフラグメントは脂質の頭部群、炭
化水素鎖、両機能形性架橋結合可能な分子、および膜タ
ンパク質からなる群から選択された支持部(entity)に
共有結合によって連結する。この共有結合による連結
(covalant linkage)はFabタンパクにおいて用いられ
る種々の連結部位(linkage site)に利用される。シス
テイン残基のスルフィドリル基、リジン残基のα−アミ
ノ、ε−アミノ基、チロシン残基のヒドロキシフェノー
ル基およびヒシヂン残基のイミダゾール基は上記に挙げ
た支持部のどれとでも結合させることができる。後者の
分子に一度結合すると、新しい両親媒性分子(amphiphi
le)が形成されることによって、Fabフラグメントが膜
につなぎとめられ、その結果、該Fabフラグメントは膜
表面に存在するどのような選ばれた抗体に対してでも高
感受性及および安定性を有する検知手段(detector)と
して作用する。
および2つのH鎖)がジスルフィド結合することによっ
て構成されたY字形分子である。LおよびHポリペプチ
ド鎖はドメインと呼ばれる球状領域に包まれている。H
鎖のCγ1およびCγ2ドメインの間にあるヒンジ領域
として知られている部分(D.S.スミスおよびS.ウツミ
(1967)ネイチャー(Nature)第216巻332ページ)はタ
ンパク質分解酵素によって切断される。酵素のパパイン
による切断はY形分子の両腕を離すもので、即ち、Fab
フラグメントをFc枝部から離す(S.ザッパコスタら(19
68)免疫学雑誌(J.Immunol.)第100巻1268ページ)。F
abフラグメントはイオン交換クロマトグラフィ(A.L.ノ
ッキンスら(1968)免疫学雑誌(J.Immunol.)第100巻3
14ページ)およびアフィニテイクロマトズラフィ(F.デ
ユラファルグラ(1976)免疫学雑誌(J.Immunol.)第12
3巻247ページ)によって精製される。本発明の他の好ま
しい実施態様ではFabフラグメントは脂質の頭部群、炭
化水素鎖、両機能形性架橋結合可能な分子、および膜タ
ンパク質からなる群から選択された支持部(entity)に
共有結合によって連結する。この共有結合による連結
(covalant linkage)はFabタンパクにおいて用いられ
る種々の連結部位(linkage site)に利用される。シス
テイン残基のスルフィドリル基、リジン残基のα−アミ
ノ、ε−アミノ基、チロシン残基のヒドロキシフェノー
ル基およびヒシヂン残基のイミダゾール基は上記に挙げ
た支持部のどれとでも結合させることができる。後者の
分子に一度結合すると、新しい両親媒性分子(amphiphi
le)が形成されることによって、Fabフラグメントが膜
につなぎとめられ、その結果、該Fabフラグメントは膜
表面に存在するどのような選ばれた抗体に対してでも高
感受性及および安定性を有する検知手段(detector)と
して作用する。
特に好ましい膜タンパク質はポリペプチドのグラミシ
ジンAである。このポリペプチドは普通、膜内において
2価として存在する。
ジンAである。このポリペプチドは普通、膜内において
2価として存在する。
当業者に理解されるように、膜タンパク−レセプター
結合の調製において組み換えDNA技術は便利なものであ
る。
結合の調製において組み換えDNA技術は便利なものであ
る。
本発明の他のより好ましい実施態様は両親媒性分子に
少なくとも一部分が炭化水素と共有的に結合したレセプ
ター分子からなることを特長とする。好ましくは、レセ
プター分子はFabフラグメントである。炭化水素鎖の数
を変えることによって膜相(membrane phase)が変化す
る。炭化水素鎖の数の変化によってなされる膜相として
は、膜が外側が極性で内側が疎水性である管を形成する
ヘキサゴナルI(HI)相、および膜が外側で疎水性で内
側が親水性である管を形成するヘキサゴナルII(HII)
相がある。形成される他の膜構造としては、ラメラおよ
びミセルである。
少なくとも一部分が炭化水素と共有的に結合したレセプ
ター分子からなることを特長とする。好ましくは、レセ
プター分子はFabフラグメントである。炭化水素鎖の数
を変えることによって膜相(membrane phase)が変化す
る。炭化水素鎖の数の変化によってなされる膜相として
は、膜が外側が極性で内側が疎水性である管を形成する
ヘキサゴナルI(HI)相、および膜が外側で疎水性で内
側が親水性である管を形成するヘキサゴナルII(HII)
相がある。形成される他の膜構造としては、ラメラおよ
びミセルである。
炭化水素鎖はまた、バイオセンサーの形式においては
炭化水素鎖自身が固表面(sojid surface)、例えばセ
ラミック、オキサイド、ハイドロゲル、シリコン、ポリ
マー、および遷移金属への膜の結合に関与する。好まし
い遷移金属としてはパラジウム、金およびプラチナがあ
る。これは非共有結合または共有結合反応によってなさ
れる。よって、固体基質上のビニル基はビニル処理され
た脂質と共重合され、流化処理された脂質は金属(例え
ば金またはパラジウム)基質に付着することができ、ま
たは縮合または付加反応は脂質を固定することに利用で
きよう。もし必要とあれば、固体基質の修飾はシリカ表
面のシリレーションのような既知の技術によって達成さ
れよう。
炭化水素鎖自身が固表面(sojid surface)、例えばセ
ラミック、オキサイド、ハイドロゲル、シリコン、ポリ
マー、および遷移金属への膜の結合に関与する。好まし
い遷移金属としてはパラジウム、金およびプラチナがあ
る。これは非共有結合または共有結合反応によってなさ
れる。よって、固体基質上のビニル基はビニル処理され
た脂質と共重合され、流化処理された脂質は金属(例え
ば金またはパラジウム)基質に付着することができ、ま
たは縮合または付加反応は脂質を固定することに利用で
きよう。もし必要とあれば、固体基質の修飾はシリカ表
面のシリレーションのような既知の技術によって達成さ
れよう。
前記したように、本発明は高密度のレセプター部位を
有する膜を提供するものである。この場合、レセプター
分子はFabフラグメントである。レセプター分子としてF
abフラグメントを用いる場合、両親媒性分子の2%にFa
bフラグメントを含ませることができる。好ましくは、
1%から2%の両親媒性分子にFabフラグメントが含ま
れる。
有する膜を提供するものである。この場合、レセプター
分子はFabフラグメントである。レセプター分子としてF
abフラグメントを用いる場合、両親媒性分子の2%にFa
bフラグメントを含ませることができる。好ましくは、
1%から2%の両親媒性分子にFabフラグメントが含ま
れる。
支持部に結合したレセプター分子を含む両親媒性分子
の少なくとも一部分を有する本発明に基づく膜は、特に
バイオセンサーとして利用可能である。それらの膜は高
選択結合表面として目的とする分子を結合する。目的と
する分子の結合は既知の方法のどれかによって記録され
る。この既知の方法としては、 (a)円二色法、 (b)蛍光偏光法、 (c)内部反射法、 (d)光散乱法、 (e)表面プラズマ共振法、 (f)表面音波修飾法、 (g)電位効果法、例えば電圧変化、 (h)アンペア効果法、例えば電流変化、 (i)温熱効果法、例えば温度変化または熱の流動、 (j)反射される量または密度の変化、例えば圧電装置
の振動周波数変化、 (k)膜相変化の測定、 (l)ラジオイムノアッセイ、および (m)エンザイムイムノアッセイである。
の少なくとも一部分を有する本発明に基づく膜は、特に
バイオセンサーとして利用可能である。それらの膜は高
選択結合表面として目的とする分子を結合する。目的と
する分子の結合は既知の方法のどれかによって記録され
る。この既知の方法としては、 (a)円二色法、 (b)蛍光偏光法、 (c)内部反射法、 (d)光散乱法、 (e)表面プラズマ共振法、 (f)表面音波修飾法、 (g)電位効果法、例えば電圧変化、 (h)アンペア効果法、例えば電流変化、 (i)温熱効果法、例えば温度変化または熱の流動、 (j)反射される量または密度の変化、例えば圧電装置
の振動周波数変化、 (k)膜相変化の測定、 (l)ラジオイムノアッセイ、および (m)エンザイムイムノアッセイである。
膜にイオンチャンネルが含まれ、かつ自己凝集両親媒
性分子の少なくとも一部分が支持部に結合したレセプタ
ー分子を含むような状態では、イオンチャンネルはグラ
ミシジンAであることが好ましく、そして好ましくはレ
セプター分子は抗体または少なくとも一部分がFabフラ
グメントが含まれる抗体断片からなる。
性分子の少なくとも一部分が支持部に結合したレセプタ
ー分子を含むような状態では、イオンチャンネルはグラ
ミシジンAであることが好ましく、そして好ましくはレ
セプター分子は抗体または少なくとも一部分がFabフラ
グメントが含まれる抗体断片からなる。
本発明のより好ましい実施態様ではイオンは開閉する
(gated)。このチャンネルの実施態様では、膜は支持
部に付着したレセプターを含む両親媒性分子に非常に接
近してアナライトに結合したイオンチャンネルを含み、
レセプターはアナライトに結合することができる。未結
合のアナライト非存在下、イオンチャンネルに結合した
アナライトはレセプターに付着することによってイオン
チャンネルをイオンが通過できるようにする。未結合の
アナライトを加えることによって、レセプターに対する
競合が起こり、レセプターからイオンチャンネルに結合
したアナライトの遊離が起こり、イオンチャンネルにお
けるイオンの通過が阻害される。レセプター部位に対す
るアナライトの結合は、レセプター部位の変化を引き起
こし、イオンチャンネルの遮断を解除することによって
イオンの通過を許す。この実施態様においては、膜が二
重層であることが望ましく、イオンチャンネルは2つの
グラミシジン単体または共有的に結合した二量体で、か
つレセプター部分がFabフラグメントである。
(gated)。このチャンネルの実施態様では、膜は支持
部に付着したレセプターを含む両親媒性分子に非常に接
近してアナライトに結合したイオンチャンネルを含み、
レセプターはアナライトに結合することができる。未結
合のアナライト非存在下、イオンチャンネルに結合した
アナライトはレセプターに付着することによってイオン
チャンネルをイオンが通過できるようにする。未結合の
アナライトを加えることによって、レセプターに対する
競合が起こり、レセプターからイオンチャンネルに結合
したアナライトの遊離が起こり、イオンチャンネルにお
けるイオンの通過が阻害される。レセプター部位に対す
るアナライトの結合は、レセプター部位の変化を引き起
こし、イオンチャンネルの遮断を解除することによって
イオンの通過を許す。この実施態様においては、膜が二
重層であることが望ましく、イオンチャンネルは2つの
グラミシジン単体または共有的に結合した二量体で、か
つレセプター部分がFabフラグメントである。
よりこのましい実施態様において結合基(リンカー;l
inker group)はレセプター分子と支持部との間および
(または)イオンチャンネルとレセプター部分との間に
与えられる。脂質の頭部群に結合したリンカーは、脂質
それ自身に近接して起こる立体障害の減少によるレセプ
ター分子の反応を起こすのに十分な通さのものでなくて
はならない。
inker group)はレセプター分子と支持部との間および
(または)イオンチャンネルとレセプター部分との間に
与えられる。脂質の頭部群に結合したリンカーは、脂質
それ自身に近接して起こる立体障害の減少によるレセプ
ター分子の反応を起こすのに十分な通さのものでなくて
はならない。
リンカーは好ましくは疎水性のものでないことが望ま
しく、それによって水性レセプター分子方向に延びて、
レセプター分子への付着を余儀なくされる基によってそ
の延長が止められる。例えば、Fabのチオール基は、リ
ンカー結合マレイミド基に結合するのに適し、またはハ
ロゲン化アルキルのような求電子試薬(electrophile
s)に適している。同様な問題がグラミシジンAのよう
なイオンチャンネルに対するレセプター部分の付着のた
めのリンカー基の***に見られる。
しく、それによって水性レセプター分子方向に延びて、
レセプター分子への付着を余儀なくされる基によってそ
の延長が止められる。例えば、Fabのチオール基は、リ
ンカー結合マレイミド基に結合するのに適し、またはハ
ロゲン化アルキルのような求電子試薬(electrophile
s)に適している。同様な問題がグラミシジンAのよう
なイオンチャンネルに対するレセプター部分の付着のた
めのリンカー基の***に見られる。
本発明の膜は、特にバイオセンサーの生産において利
用できる。従って、本発明の好ましい実施態様は本発明
の膜に取り込まれたバイオセンサーを提供する。イオノ
ホア存在および非存在下における自己凝集膜のコンダク
タンスの変化の測定方法は、科学的文献によって詳細に
記載されており、黒膜チェンバー、穴の開いた膜、ポリ
マーまたはセラミックスを被覆するために作られた単
層、二重層または積み重なった脂質における電極、およ
び微小電極に支持された単層または二重層に取り込まれ
たおよそ1ないし10個のイオンチャンネルを含むパッチ
クランプ法がある。信号解析の方法は2、3、または4
つのターミナルインピーダンス測定方法が用いられる。
即ち、周波数特性、ノイズスペクトル、サイクリックボ
ルタンメタリーまたはイオンチャンネル固有の生成また
は破壊の統計が膜全体のコンダクタンスの変化の特長を
つかむために用いられる。
用できる。従って、本発明の好ましい実施態様は本発明
の膜に取り込まれたバイオセンサーを提供する。イオノ
ホア存在および非存在下における自己凝集膜のコンダク
タンスの変化の測定方法は、科学的文献によって詳細に
記載されており、黒膜チェンバー、穴の開いた膜、ポリ
マーまたはセラミックスを被覆するために作られた単
層、二重層または積み重なった脂質における電極、およ
び微小電極に支持された単層または二重層に取り込まれ
たおよそ1ないし10個のイオンチャンネルを含むパッチ
クランプ法がある。信号解析の方法は2、3、または4
つのターミナルインピーダンス測定方法が用いられる。
即ち、周波数特性、ノイズスペクトル、サイクリックボ
ルタンメタリーまたはイオンチャンネル固有の生成また
は破壊の統計が膜全体のコンダクタンスの変化の特長を
つかむために用いられる。
バイオセンサーの形成における膜の利用において主要
な問題点の一つは膜のもろさである。本発明者はこの問
題点を克服して固表面の上に本発明の膜を形成し、かつ
この膜が丈夫なものであることを発見した。
な問題点の一つは膜のもろさである。本発明者はこの問
題点を克服して固表面の上に本発明の膜を形成し、かつ
この膜が丈夫なものであることを発見した。
この方法は互いに反応し合う膜と固表面とを提供する
ことを含む。好ましい固表面として、ヒドロゲル、セラ
ミックス、オキシサイド、シリコン、ポリマーおよび遷
移金属を含む。好ましい遷移金属としては、金、プラチ
ナおよびパラジウムがある。バイオセンサーを作るにあ
たって好ましい固表面はパラジウム被覆されたガラス電
極である。
ことを含む。好ましい固表面として、ヒドロゲル、セラ
ミックス、オキシサイド、シリコン、ポリマーおよび遷
移金属を含む。好ましい遷移金属としては、金、プラチ
ナおよびパラジウムがある。バイオセンサーを作るにあ
たって好ましい固表面はパラジウム被覆されたガラス電
極である。
好ましい実施態様において、本発明は固表面に付着し
た膜二重層からなり、二重層は上層および下層を有し、
下層は固表面に隣接し、固表面またはその上に設けられ
た基と反応する基を提供する。即ち、二重層の各層は自
己凝集性の両親媒性分子およびグラミシジン単体からな
り、上層の両親媒性分子の一部分は支持部に結合したレ
セプター分子を含み、該レセプター分子は免疫グロブリ
ン、抗体、抗体断片、色素、酵素およびレクチンからな
る群から選択されたレセプター分子からなり、該支持部
は脂質頭部、炭化水素鎖、交差結合性分子、および膜タ
ンパクからなる群から選択された支持部からなる。支持
部はレセプター分子上のレセプター部位から離れた端に
結合されている。
た膜二重層からなり、二重層は上層および下層を有し、
下層は固表面に隣接し、固表面またはその上に設けられ
た基と反応する基を提供する。即ち、二重層の各層は自
己凝集性の両親媒性分子およびグラミシジン単体からな
り、上層の両親媒性分子の一部分は支持部に結合したレ
セプター分子を含み、該レセプター分子は免疫グロブリ
ン、抗体、抗体断片、色素、酵素およびレクチンからな
る群から選択されたレセプター分子からなり、該支持部
は脂質頭部、炭化水素鎖、交差結合性分子、および膜タ
ンパクからなる群から選択された支持部からなる。支持
部はレセプター分子上のレセプター部位から離れた端に
結合されている。
この実施態様では、レセプター分子は抗体断片である
ことが望ましく、かつFabフラグメントであることが望
ましい。また、固表面はパラジウム被覆されたガラス電
極であることが望ましい。
ことが望ましく、かつFabフラグメントであることが望
ましい。また、固表面はパラジウム被覆されたガラス電
極であることが望ましい。
より好ましい実施態様では、固表面に付着した膜二重
層からなるバイオセンサーを提供することで、該二重層
は上層および下層を有し、該下層は固表面に隣接し、か
つ固表面またはその上に設けられた基と反応する基を提
供する。即ち、二重層の各層は自己凝集性の両親媒性分
子およびグラミシジン単体からなり、レセプター部分は
上層においてグラミシジン単体に付着している。
層からなるバイオセンサーを提供することで、該二重層
は上層および下層を有し、該下層は固表面に隣接し、か
つ固表面またはその上に設けられた基と反応する基を提
供する。即ち、二重層の各層は自己凝集性の両親媒性分
子およびグラミシジン単体からなり、レセプター部分は
上層においてグラミシジン単体に付着している。
バイオセンサーに関する当業者において理解されるよ
うに、膜の部分を少なくすることによって、シグナルダ
イナミックスレンジおよびバンド幅を改良によるセンサ
ーの感受性および選択性が増加するだろう。
うに、膜の部分を少なくすることによって、シグナルダ
イナミックスレンジおよびバンド幅を改良によるセンサ
ーの感受性および選択性が増加するだろう。
図面の簡単な説明 本発明を以下の図を参照しながら説明する。
第1図はグラミシジンAの構造を示すものである。
第2図はイオンチャンネル開閉の説明図である。
第3図ないし第5図は種々の膜相が得られることを示
す図である。
す図である。
第6図は実施例8において形成されるような本発明の
膜バイオセンサーを用いたアナライトの検出を示すグラ
フである。
膜バイオセンサーを用いたアナライトの検出を示すグラ
フである。
第3図ないし第5図において、10はレセター分子を示
しており、11は炭化水素を示し、8炭素から25炭素の種
々の長さの非極性部分はメチレン、アルケン、アルキル
または置換芳香化合物を含む。Xはレセプター部分10に
結合あるいは付着した炭化水素基の数を示すものであ
る。この数は極性基の層の集まりに依存している。抗体
断片では、Xは平面状膜を作るのに必要なおよそ50に等
しい。よって、幾何学的図式は凝集した両親媒性物によ
って形成された長い範囲の構造を示す。第3図に示すよ
うに炭化水素基の数が大きい場合、ヘキサゴナル相II層
が作られる。第4図は炭化水素基の数がおよそ50の時、
ラメラ相膜が作られ、一方、第5図に示すように炭化水
素基の数が小さい場合、ミセル相膜が作られる。
しており、11は炭化水素を示し、8炭素から25炭素の種
々の長さの非極性部分はメチレン、アルケン、アルキル
または置換芳香化合物を含む。Xはレセプター部分10に
結合あるいは付着した炭化水素基の数を示すものであ
る。この数は極性基の層の集まりに依存している。抗体
断片では、Xは平面状膜を作るのに必要なおよそ50に等
しい。よって、幾何学的図式は凝集した両親媒性物によ
って形成された長い範囲の構造を示す。第3図に示すよ
うに炭化水素基の数が大きい場合、ヘキサゴナル相II層
が作られる。第4図は炭化水素基の数がおよそ50の時、
ラメラ相膜が作られ、一方、第5図に示すように炭化水
素基の数が小さい場合、ミセル相膜が作られる。
発明を実施するための最良の形態 本発明を実施例に基づいて以下説明する。
実施例1 架橋結合可能な部分の合成 (イ)p−ヒドロキシスチレンの合成 p−ヒドロキシアセトフェノンを1−(p−アセトフ
ェニル)エタノールに変換した後、コーソンらの方法
(有機化学雑誌(J.Org.Chem)1958年、第23巻 544ペ
ージ)によってp−アセトキシスチレンを生産するため
に硫酸水素カリウムの存在下における液相脱水によって
脱水した。25℃において水(14ml)に水酸化カリウム
(1.4g)加えた撹拌溶液にp−アセトキシスチレン(1.
6g)を加えた。撹拌は0〜5℃において2時間続けた。
その後、混成物はエタノールで洗い、液相は飽和炭酸水
素ナトリウム溶液で中和した。ロウ固形物として固化さ
れた濁油(0.7g)を産出するために、産物はジクロルメ
ンタン中に抽出し、溶液を乾燥して無水塩化カルシウム
にして溶媒を取り除いた。
ェニル)エタノールに変換した後、コーソンらの方法
(有機化学雑誌(J.Org.Chem)1958年、第23巻 544ペ
ージ)によってp−アセトキシスチレンを生産するため
に硫酸水素カリウムの存在下における液相脱水によって
脱水した。25℃において水(14ml)に水酸化カリウム
(1.4g)加えた撹拌溶液にp−アセトキシスチレン(1.
6g)を加えた。撹拌は0〜5℃において2時間続けた。
その後、混成物はエタノールで洗い、液相は飽和炭酸水
素ナトリウム溶液で中和した。ロウ固形物として固化さ
れた濁油(0.7g)を産出するために、産物はジクロルメ
ンタン中に抽出し、溶液を乾燥して無水塩化カルシウム
にして溶媒を取り除いた。
(ロ)メチル11−(p−ビニルPヘキシル)ウンデカ酸
の合成 室温において1時間、塩化水素ガスを11−ブロモウン
デカ酸(2.6g)含有メタノール(20ml)からなる撹拌溶
液中に泡立たせた。その後、溶媒を取り除き、エーテル
中の残滓を水で洗い、乾燥させて無水硫酸ナトリウムに
し、溶媒を取り除いた。残滓ペールオイル(pale oil)
(2.8g,100%)はメチル11−ブロモウンデカ酸として同
定された。
の合成 室温において1時間、塩化水素ガスを11−ブロモウン
デカ酸(2.6g)含有メタノール(20ml)からなる撹拌溶
液中に泡立たせた。その後、溶媒を取り除き、エーテル
中の残滓を水で洗い、乾燥させて無水硫酸ナトリウムに
し、溶媒を取り除いた。残滓ペールオイル(pale oil)
(2.8g,100%)はメチル11−ブロモウンデカ酸として同
定された。
これを、ハセガワらの方法(Polym.Bull.,1985年、第
14巻、31ページ)によって11−(p−ビニルPヘノキ
シ)ウンデカ酸に変換した。
14巻、31ページ)によって11−(p−ビニルPヘノキ
シ)ウンデカ酸に変換した。
(ハ)1−O−(11−(P−ビニルフェノキシ)ウンデ
カノイル)−2−O−オクタジシルグリセロールの合成 ハセガワらの方法(Polym.Bull.,1985年、第14巻、31
ページ)を追試して行なったが、濃縮段階は5日間反応
させ、産物はシリカゲルクロマトグラフィにかけた。溶
離はエーテル/軽油(1:3)でおこなった。0.92gの11−
(ビニルPフェノキシ)ウンデカ酸から得られる産物の
全体量は1.25(66%)であった。
カノイル)−2−O−オクタジシルグリセロールの合成 ハセガワらの方法(Polym.Bull.,1985年、第14巻、31
ページ)を追試して行なったが、濃縮段階は5日間反応
させ、産物はシリカゲルクロマトグラフィにかけた。溶
離はエーテル/軽油(1:3)でおこなった。0.92gの11−
(ビニルPフェノキシ)ウンデカ酸から得られる産物の
全体量は1.25(66%)であった。
実施例2 イオンチャンネルまたは脂質に付着するための結合基の
合成 (イ)11−クロロ−3,6,9−トリオキサウンデカン−1
−オールJ.C.ペダーセン(アメリカ化学学会誌(J.Aem.
Chem.Soc.)1967年、第89巻、7017ページ)の方法、沸
点121−122℃/15mm Hgによって、トリエチレングリコー
ル、チオニルクロライドおよびピリジンから1,8−ジク
ロロ−3,6−ジオキサオクタンを調製した。1,8−ジクロ
ロ−3,6−ジオキサオクタン(40g)および水酸化カリウ
ム(11.8g)を含むエチレングリコール(100ml)からな
る溶液を100℃、18時間の条件下で撹拌した。その後、
混成物を冷やし、濾過して残滓をアセトン(2x35ml)で
洗った。集められた濾過液を蒸留してクリアオイル(1
3.5g,30%)、沸点120−122℃/0.2mm Hg、I.r.(液状
膜)3430cm-1、を生産した。
合成 (イ)11−クロロ−3,6,9−トリオキサウンデカン−1
−オールJ.C.ペダーセン(アメリカ化学学会誌(J.Aem.
Chem.Soc.)1967年、第89巻、7017ページ)の方法、沸
点121−122℃/15mm Hgによって、トリエチレングリコー
ル、チオニルクロライドおよびピリジンから1,8−ジク
ロロ−3,6−ジオキサオクタンを調製した。1,8−ジクロ
ロ−3,6−ジオキサオクタン(40g)および水酸化カリウ
ム(11.8g)を含むエチレングリコール(100ml)からな
る溶液を100℃、18時間の条件下で撹拌した。その後、
混成物を冷やし、濾過して残滓をアセトン(2x35ml)で
洗った。集められた濾過液を蒸留してクリアオイル(1
3.5g,30%)、沸点120−122℃/0.2mm Hg、I.r.(液状
膜)3430cm-1、を生産した。
(ロ)11−クロロ−3,6,9−トリオキサウンデク−1−
イルサクシネート 11−クロロ−3,6,9−トリオキサウンデク−1−オル
(200g)、無水コハク酸(0.941g)、ピリジン(0.10m
l)およびジメチルアミノピリジン(0.02g)を含むテト
ラヒドロフラン(10ml)からなる溶液を24時間、還流し
た。混成物を冷却し、クリアオイル(2.9g,100%)、I.
r.(液状膜)3000(b,CO2H)、1730(C=O)cm-1、を
生産した。
イルサクシネート 11−クロロ−3,6,9−トリオキサウンデク−1−オル
(200g)、無水コハク酸(0.941g)、ピリジン(0.10m
l)およびジメチルアミノピリジン(0.02g)を含むテト
ラヒドロフラン(10ml)からなる溶液を24時間、還流し
た。混成物を冷却し、クリアオイル(2.9g,100%)、I.
r.(液状膜)3000(b,CO2H)、1730(C=O)cm-1、を
生産した。
実施例3 脂質に対する結合基の付着 (イ)1−O−(11−(p−ビニルフェノキシ)ウンデ
カノイル)−2−O−オクタデシル−3−O−(11−ク
ロロ−3,6,9−トリオキサウンデク−1−イルサクシネ
ートイル)グリセロール 11−クロロ−3,6,9−トリオキサウンデク−1−イル
サクシネート(0.60g)を塩化エチニル(5ml)に溶解
し、3時間還流した。余剰塩化チオニルを除去し、トル
エン(5ml)を加え、かつペールイエローオイル((0.6
4g,100%)、I.r.(液状膜)1785年(COCl)、1730(C
=O)cm-1)として塩化カルボン酸を生産するために0.
1mmHgにおいて除去した。塩化カルボン酸(0.15g)を含
むテトラヒドロフラン(0.5ml)を、1−O−(11−
(p−ビニルフェノキシ)ウンデカノイル)−2−0−
オクタデシルグリセロール(0.300g)およびピリジン
(0.01ml)を含むテトラヒドロフラン(5ml)に滴加し
た。混成物は室温で18時間撹拌した後、水(75ml)に注
いだ。集めたクロロホルム抽出物を硫酸(5%,50ml)
および塩類溶液(50ml)で洗い、乾燥(MgSO4)させて
蒸発させた。粗生成物を、エチルアセテーット/軽油、
40:60v/vを溶離液として用いたシリカゲルクロマトグラ
フイにかけて固化((0.25g,49%)、I.r.(液状膜)17
30(C=O)cm-1))したクリアオイルの産物を生産し
た。以下、この化合物をリンカー脂質と呼ぶ。
カノイル)−2−O−オクタデシル−3−O−(11−ク
ロロ−3,6,9−トリオキサウンデク−1−イルサクシネ
ートイル)グリセロール 11−クロロ−3,6,9−トリオキサウンデク−1−イル
サクシネート(0.60g)を塩化エチニル(5ml)に溶解
し、3時間還流した。余剰塩化チオニルを除去し、トル
エン(5ml)を加え、かつペールイエローオイル((0.6
4g,100%)、I.r.(液状膜)1785年(COCl)、1730(C
=O)cm-1)として塩化カルボン酸を生産するために0.
1mmHgにおいて除去した。塩化カルボン酸(0.15g)を含
むテトラヒドロフラン(0.5ml)を、1−O−(11−
(p−ビニルフェノキシ)ウンデカノイル)−2−0−
オクタデシルグリセロール(0.300g)およびピリジン
(0.01ml)を含むテトラヒドロフラン(5ml)に滴加し
た。混成物は室温で18時間撹拌した後、水(75ml)に注
いだ。集めたクロロホルム抽出物を硫酸(5%,50ml)
および塩類溶液(50ml)で洗い、乾燥(MgSO4)させて
蒸発させた。粗生成物を、エチルアセテーット/軽油、
40:60v/vを溶離液として用いたシリカゲルクロマトグラ
フイにかけて固化((0.25g,49%)、I.r.(液状膜)17
30(C=O)cm-1))したクリアオイルの産物を生産し
た。以下、この化合物をリンカー脂質と呼ぶ。
(ロ)1−O−(11−(p−ビニルフェノキシ)ウンデ
カノイル)−2−O−オクダデシル−3−O−アセトイ
ルグリセロール 1−O−(11−(p−ビニルフェノキシ)ウンデカノ
イル)−2−O−オクダデシルグリセロール(0.20
g)、再蒸留した無水酢酸(3ml)およびピリジン(0.2m
l)を室温で18時間、撹拌した。過剰な無水酢酸は蒸留
して残滓をクロロホルム(40ml)に取った。クロロホル
ムは炭化水素ナトリウム(5%,2 x50ml)、塩酸(5
%,5ml)水(50ml)で洗い、乾燥(MgSO4)させ、かつ
t.l.c.IR1735cm-1(c=0)によって均質化された無色
の油(0.16g、74%)として産物を得るために蒸発させ
た。以下、この化合物をアセテート脂質と呼ぶ。
カノイル)−2−O−オクダデシル−3−O−アセトイ
ルグリセロール 1−O−(11−(p−ビニルフェノキシ)ウンデカノ
イル)−2−O−オクダデシルグリセロール(0.20
g)、再蒸留した無水酢酸(3ml)およびピリジン(0.2m
l)を室温で18時間、撹拌した。過剰な無水酢酸は蒸留
して残滓をクロロホルム(40ml)に取った。クロロホル
ムは炭化水素ナトリウム(5%,2 x50ml)、塩酸(5
%,5ml)水(50ml)で洗い、乾燥(MgSO4)させ、かつ
t.l.c.IR1735cm-1(c=0)によって均質化された無色
の油(0.16g、74%)として産物を得るために蒸発させ
た。以下、この化合物をアセテート脂質と呼ぶ。
実施例4 グラミシジンAに対する結合基の付着 グラミシジンA(0.0633g)、11−クロロ−3,6,9−ト
リオキサウンデク−1−イルサクシネート(0.032g)、
ジシクロヘキシルジイミド(0.021g)およびジメチルア
ミノピリジン(0.20g)を含むジクロロメタンを室温で2
4時間撹拌した。その後、混成物は水(4 x 50ml)で洗
い、乾燥(MgSO4)させ、かつ蒸発させた。白色固体0.3
0g I.R.1725(CO2)1625(CONH)cm-1としてグラミシジ
ン類似化合物(以下、グラミシジンRと呼ぶ)を産生す
るためにジオキサンを溶離液として用いた予備層(prep
arative layer)クロマトグラフィによって粗生成物を
精製した。
リオキサウンデク−1−イルサクシネート(0.032g)、
ジシクロヘキシルジイミド(0.021g)およびジメチルア
ミノピリジン(0.20g)を含むジクロロメタンを室温で2
4時間撹拌した。その後、混成物は水(4 x 50ml)で洗
い、乾燥(MgSO4)させ、かつ蒸発させた。白色固体0.3
0g I.R.1725(CO2)1625(CONH)cm-1としてグラミシジ
ン類似化合物(以下、グラミシジンRと呼ぶ)を産生す
るためにジオキサンを溶離液として用いた予備層(prep
arative layer)クロマトグラフィによって粗生成物を
精製した。
実施例5 Fabフラグメントの調製、単離および特性記述 IgG抗体はプロテインAに対するクロマトグラフィに
よって腹水からSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動の
シングルバンドとして精製される。Fab2フラグメントは
ペプシン消化(1:100 酸素:抗体重量比)pH4.2、30分
によって精製抗体から調製され、SDSポリアクリルアミ
ドゲル電気カオチン交換クロマトグラフィはにおいてm.
w.100,000のシンクルバンドとして確立された精製活性F
ab2フラグメントをカチオン交換クロマトグラフィによ
って得た。還元状態における電気泳動では、Fab2フラグ
メントの二つのFab′のコンポーネントのL−鎖および
H−鎖に該当するm.w.25,000のバンドを示した。
よって腹水からSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動の
シングルバンドとして精製される。Fab2フラグメントは
ペプシン消化(1:100 酸素:抗体重量比)pH4.2、30分
によって精製抗体から調製され、SDSポリアクリルアミ
ドゲル電気カオチン交換クロマトグラフィはにおいてm.
w.100,000のシンクルバンドとして確立された精製活性F
ab2フラグメントをカチオン交換クロマトグラフィによ
って得た。還元状態における電気泳動では、Fab2フラグ
メントの二つのFab′のコンポーネントのL−鎖および
H−鎖に該当するm.w.25,000のバンドを示した。
Fab′はF.J.マーチンらの方法(生化学(Biochemistr
y)1981年、第20巻、4229−38ページ)によってFab2の
修飾により得ることができる。Fab2はpH5.5、室温3時
間の条件下で20mMジチオスレイトルによって還元した。
ジチオスレイトルはm.w.30,000の分子をカットオフする
膜による超微細濾過によって取り除いた。Fab′はFab2
に対する同等の抗体結合活性を有し、SDS電気泳動にお
いて非還元状態もしくは還元状態でそれぞれm.w.50,000
のマーカーの部分にシングルバンドとして認められる。
Fab′フラグメントは両親媒性単層に結合する前に新鮮
な状態で調製された。
y)1981年、第20巻、4229−38ページ)によってFab2の
修飾により得ることができる。Fab2はpH5.5、室温3時
間の条件下で20mMジチオスレイトルによって還元した。
ジチオスレイトルはm.w.30,000の分子をカットオフする
膜による超微細濾過によって取り除いた。Fab′はFab2
に対する同等の抗体結合活性を有し、SDS電気泳動にお
いて非還元状態もしくは還元状態でそれぞれm.w.50,000
のマーカーの部分にシングルバンドとして認められる。
Fab′フラグメントは両親媒性単層に結合する前に新鮮
な状態で調製された。
Fab2をクロラミンT方法によって108cpm/mgの特異的
活性を示すように125Iで放射性標識した。125IFab2を未
標識Fab2に対して1x104cpm/mgの特異的活性を示すよう
に未標識Fab2中に取り込ませ、Fab2フラグメントは上記
のようにして調製した。
活性を示すように125Iで放射性標識した。125IFab2を未
標識Fab2に対して1x104cpm/mgの特異的活性を示すよう
に未標識Fab2中に取り込ませ、Fab2フラグメントは上記
のようにして調製した。
脂質に対するFabの共有結合および結合アッセイ 抗体のペプシン消化およびそれに続くFab′フラグト
へのFab2フラグメントの還元によってFab′のカルボキ
シル末端においてひとつの単活性チオール基を生産す
る。脂質分子に体するこのチオール基のカップリングは
重合可能な脂質分子に付着したポリエチレンオキシド状
の末端塩素との反応を経て達成される。
へのFab2フラグメントの還元によってFab′のカルボキ
シル末端においてひとつの単活性チオール基を生産す
る。脂質分子に体するこのチオール基のカップリングは
重合可能な脂質分子に付着したポリエチレンオキシド状
の末端塩素との反応を経て達成される。
誘導脂質(derivatised lipid)の単層はデカン溶液
中の拡散脂質によってラングミュアブロジェット溝の空
気−水界面上に形成される。事前に表面を疏水性にした
ナイロンペグ基質を界面に浸したので、脂質の炭化水素
鎖は基質の表面と相互作用した。
中の拡散脂質によってラングミュアブロジェット溝の空
気−水界面上に形成される。事前に表面を疏水性にした
ナイロンペグ基質を界面に浸したので、脂質の炭化水素
鎖は基質の表面と相互作用した。
溝の表面は事前に脂質を取り除かれており、基質を素
早く引き上げてFab′溶液に移した。
早く引き上げてFab′溶液に移した。
脂質を被覆した基質は0.1から1.0mg/mlのリン酸緩衝
液(pH8)からなるFab′の水溶液に浸した。Fab′上の
特異的チオールと脂質ポリエチレン酸化物結合基の塩素
とをN2中において室温で3ないし20時間反応させた。脂
質を被覆した基質においてなされる反応のマーカーとし
て125IFab′を用いた。
液(pH8)からなるFab′の水溶液に浸した。Fab′上の
特異的チオールと脂質ポリエチレン酸化物結合基の塩素
とをN2中において室温で3ないし20時間反応させた。脂
質を被覆した基質においてなされる反応のマーカーとし
て125IFab′を用いた。
そして、Fab′結合脂質被覆基質は1ないし5mg/ml(p
H7.4)の125I−hCGを含むマイクロタイターウエルに移
した。基質全体の放射活性は15分間のインキュベーショ
ン後に測定した。マイクロタイターウエルに同量の抗体
を用いた従来のイムノアッセイと比較してみると、Fab
−脂質被覆基質を用いることによって、少なくとも感受
性が2倍に改善された。
H7.4)の125I−hCGを含むマイクロタイターウエルに移
した。基質全体の放射活性は15分間のインキュベーショ
ン後に測定した。マイクロタイターウエルに同量の抗体
を用いた従来のイムノアッセイと比較してみると、Fab
−脂質被覆基質を用いることによって、少なくとも感受
性が2倍に改善された。
同様な処理をパラジウム被覆されたガラススライド基
質に行なうと、従来のイムノアッセイ技術に比べ、感受
性が3倍に上がった。125I−Fabの放射性測定からの計
算によると、少なくともcm2当たり1011Fab分子の被覆は
インキュベーション10時間以上で達成された。
質に行なうと、従来のイムノアッセイ技術に比べ、感受
性が3倍に上がった。125I−Fabの放射性測定からの計
算によると、少なくともcm2当たり1011Fab分子の被覆は
インキュベーション10時間以上で達成された。
ヒトのコリオゴナドトロピン(LCG)上の2つの異な
る面に結合する2種類のモノクローナルFabフラグメン
トは、ひとつのFabのみの場合と比べて感受性が50%増
加した。
る面に結合する2種類のモノクローナルFabフラグメン
トは、ひとつのFabのみの場合と比べて感受性が50%増
加した。
実施例6 グラミシジン二量体の合成 HC−Trp−D−Leu−Trp−D−Leu−Trp−D−Leu−Tr
p−D−Val−Val−D−Val−Ala−D−Leu−Ala−Gly−
Val−Gly−Ala−1−13C−D−Leu−Ala−D−Val−D
−Val−Trp−D−Leu−Trp−D−Leu−Trp−D−Leu−T
rp−NHCH2CH2OHの配列を有し、かつGA分子の頭と頭とが
共有結合的に結合した二量体が得られた。
p−D−Val−Val−D−Val−Ala−D−Leu−Ala−Gly−
Val−Gly−Ala−1−13C−D−Leu−Ala−D−Val−D
−Val−Trp−D−Leu−Trp−D−Leu−Trp−D−Leu−T
rp−NHCH2CH2OHの配列を有し、かつGA分子の頭と頭とが
共有結合的に結合した二量体が得られた。
ケミカルズ: BOC−Trp(CHO)を保護する側鎖および他のBOCアミノ
酸は日本のペプチド研究所株式会社より購買した。1−
13C−DL−ロイシンはケンブリッジアイソトープ研究所
(マサチューセッツ州、ウオバーン)から入手した。BO
C−Trp(CHO)OCH2PAMレシン(0.69mmol/g)はアプライ
ドバイオシステムズから入手した。
酸は日本のペプチド研究所株式会社より購買した。1−
13C−DL−ロイシンはケンブリッジアイソトープ研究所
(マサチューセッツ州、ウオバーン)から入手した。BO
C−Trp(CHO)OCH2PAMレシン(0.69mmol/g)はアプライ
ドバイオシステムズから入手した。
合成: プラサドらの方法(国際雑誌ペプチドタンパク研究
(Int.J.Peptide Protein Res.)第19巻、1982年、162
−171ページ)によって、開始物質ある1−13C−DL−ロ
イシンを余り変化させることなく、BOC−1−13C−D−
ロイシンを合成した。
(Int.J.Peptide Protein Res.)第19巻、1982年、162
−171ページ)によって、開始物質ある1−13C−DL−ロ
イシンを余り変化させることなく、BOC−1−13C−D−
ロイシンを合成した。
1−13標識−D−ロイシンを除くすべてのアミノ酸を
マニュアルどおりに加えて430ペプチド合成装置(アプ
ライドバイオシステムズ)を用いて1−13C−DL−Leu18
二量体は固相法によって合成した。
マニュアルどおりに加えて430ペプチド合成装置(アプ
ライドバイオシステムズ)を用いて1−13C−DL−Leu18
二量体は固相法によって合成した。
0.5mmolのBOC−Trp(CHO)を含むBOC−Trp(CHO)OCH
2PAMレシン(0.72g)によって開始される合成は1%交
差結合ポリスチレンをエステル化した。
2PAMレシン(0.72g)によって開始される合成は1%交
差結合ポリスチレンをエステル化した。
最初の6サイクルはBOCアミノ酸のシングルカップリ
ングで、残りのすべてのサイクルではダブルカップリン
グである。最初のカップリングはDMF中においてなさ
れ、かつDCM溶媒と再カップリングされる。
ングで、残りのすべてのサイクルではダブルカップリン
グである。最初のカップリングはDMF中においてなさ
れ、かつDCM溶媒と再カップリングされる。
それぞれのアミノ酸は以下の段階で加えられる。
1. DCM中でのレシン洗浄。
2. 50%TFA/DCM 18.5分処理後、DCM中において33%TFA
80秒処理によるBOC基の除去。
80秒処理によるBOC基の除去。
3. 3 DCM洗浄。
4. DMF中において10%ジイソプロピルエチルアミン(D
IEA)2x1分処理による中性化。
IEA)2x1分処理による中性化。
5. 5 DMF洗浄。
6. 2mmol BOCアミノ酸およびジシクロヘキシルカルボ
ンイミド(DCC)を用いたアミノ酸無水物(2倍量の無
水物)を経るDMF中における26分のカップリングサイク
ル。
ンイミド(DCC)を用いたアミノ酸無水物(2倍量の無
水物)を経るDMF中における26分のカップリングサイク
ル。
7. 5 DCM洗浄。
再カップリングサイクル: 1. カップリング溶媒(DCM)中において1洗浄。
2. 10% DIEA含有DCM30秒。
3. 5 DCM洗浄。
4. DCM中における再カップリング30分。
5. 1 DMF洗浄。
6. 5 DCM洗浄。
手作業で1−13C−標識−D−ロイシンをペプチドに
加えた。レジンはこのサイクルの第5段階(中性化およ
び洗浄)後においてシ合成装置反応多容器から取り除い
た。
加えた。レジンはこのサイクルの第5段階(中性化およ
び洗浄)後においてシ合成装置反応多容器から取り除い
た。
一当量(0.5mmol)のBOC 1−13C−D−ロイシンを2ml
DMFに加え、10分間撹拌した。その後、一当量のDCMを含
有した2mlDMFを加え、室温で一晩反応させた。
DMFに加え、10分間撹拌した。その後、一当量のDCMを含
有した2mlDMFを加え、室温で一晩反応させた。
その後レジンを合成装置に戻し、該合成装置において
レジンの洗浄とそれに続く未標識のBOC−D−ロイシン
とを上記の再カップリングサイクルにより再カップリン
グさせた。
レジンの洗浄とそれに続く未標識のBOC−D−ロイシン
とを上記の再カップリングサイクルにより再カップリン
グさせた。
合成の各サイクルの完了時にレジン試料を取って、定
量的ニンヒドリンアッセイ(サリンらによる。分析生化
学(Analytical Biochemistry)第117巻 147−157ペー
ジ、1981年)により、カップリングの程度を決定した。
量的ニンヒドリンアッセイ(サリンらによる。分析生化
学(Analytical Biochemistry)第117巻 147−157ペー
ジ、1981年)により、カップリングの程度を決定した。
プラサドらの方法(1982)にもとづくフォルミレーシ
ョン反応後、末端エタノールアミド部分を与えるために
エタノールアミンと反応させることによって完全なペプ
チドを取り除いた。
ョン反応後、末端エタノールアミド部分を与えるために
エタノールアミンと反応させることによって完全なペプ
チドを取り除いた。
粗ペプチドの最初の精製はセファデックスLH20カラム
(ファルマシア)100cm x3.2cm idを用いてエタノール
で濾過した。
(ファルマシア)100cm x3.2cm idを用いてエタノール
で濾過した。
このカラムからフラクションを集め、均等MeOH溶媒
(92%MeOH)または92%−100%勾配のMeOHを用いたラ
ジアルコンプレッションカラム(8mm id x 10cm)での
逆相HPLCによって解析した。
(92%MeOH)または92%−100%勾配のMeOHを用いたラ
ジアルコンプレッションカラム(8mm id x 10cm)での
逆相HPLCによって解析した。
TLCによる解析はシリカゲルプレート(メルク キエ
ゼルゲル60F−254)によって行ない、溶媒はクロロホル
ム/MeOH/氷酢酸(90:10:3)およびCHCl/MeOH/H2O(65:2
5:4)で、パンドは紫外線光で可視化した。
ゼルゲル60F−254)によって行ない、溶媒はクロロホル
ム/MeOH/氷酢酸(90:10:3)およびCHCl/MeOH/H2O(65:2
5:4)で、パンドは紫外線光で可視化した。
以下の例は金属電極に付着した両親媒性物質−イオン
チャンネル表面から作られたバイオセンサーに関するも
のである。レセプター分子は両親媒性物質−イオンチャ
ネルコートに共有結合的に結合している。レセプター分
子へのリガンドの結合は開閉機構として作用し、イオン
チャンネルのコンダクタンスを変化させる。以下の実施
例に示すように、開閉機構はイオンチャンネル濃度およ
びレセプター濃度と関連している。
チャンネル表面から作られたバイオセンサーに関するも
のである。レセプター分子は両親媒性物質−イオンチャ
ネルコートに共有結合的に結合している。レセプター分
子へのリガンドの結合は開閉機構として作用し、イオン
チャンネルのコンダクタンスを変化させる。以下の実施
例に示すように、開閉機構はイオンチャンネル濃度およ
びレセプター濃度と関連している。
実施例7 バイオセンサーの合成 脂質グラミシジン表面は実施例5の記載と同様にして
パラジウム被覆されたガラス電極の上に調製された。第
1の単層はドデカン−チオル:グラミシジン(比30対
1)からなり、第2の単層はアセテート脂質:グラミシ
ジンR(比100対1)からなるものであった。グラミシ
ジンRの形成は実施例4の記憶にもとづいた。
パラジウム被覆されたガラス電極の上に調製された。第
1の単層はドデカン−チオル:グラミシジン(比30対
1)からなり、第2の単層はアセテート脂質:グラミシ
ジンR(比100対1)からなるものであった。グラミシ
ジンRの形成は実施例4の記憶にもとづいた。
hCG分子の2つの離れた部位に結合するhCGに対する2
つのモノクローナル抗体から調製されたFabを含むFab溶
液中に電極をインキュベートした。2つのタイプのFab
の比は1:1であった。Fabの全濃度はリン酸緩衝液(pH
8)中において0.1ないし1.0mg/mlであった。電極は室温
で3ないし19時間インキュベートした。電極の電気的イ
ンピーダンスは3電極システム、「ソラートロン1250FR
A」インピーダンスアナライザーおよび電気−化学イン
ターフェイス増幅器を用いて1ミリヘルツから5ミリヘ
ルツの周波数範囲において測定した。脂質グラミシジン
二重層のインピーダンスは1.6x 106の伝導性グラミシジ
ンチャンネルに相当する10ミリヘルツにおいて104.95オ
ームであった(伝導性チャンネルの数の推定はすべて10
11オーム/チャンネルの黒脂質膜におけるグラミシジン
抵抗にもとづく)。
つのモノクローナル抗体から調製されたFabを含むFab溶
液中に電極をインキュベートした。2つのタイプのFab
の比は1:1であった。Fabの全濃度はリン酸緩衝液(pH
8)中において0.1ないし1.0mg/mlであった。電極は室温
で3ないし19時間インキュベートした。電極の電気的イ
ンピーダンスは3電極システム、「ソラートロン1250FR
A」インピーダンスアナライザーおよび電気−化学イン
ターフェイス増幅器を用いて1ミリヘルツから5ミリヘ
ルツの周波数範囲において測定した。脂質グラミシジン
二重層のインピーダンスは1.6x 106の伝導性グラミシジ
ンチャンネルに相当する10ミリヘルツにおいて104.95オ
ームであった(伝導性チャンネルの数の推定はすべて10
11オーム/チャンネルの黒脂質膜におけるグラミシジン
抵抗にもとづく)。
光学的なインキュベーション時間はFab溶液において1
2時間であり、これによって、5.9x 104の伝導性グラミ
シジンチャンネル(1ミリヘルツで測定)から10ミリヘ
ルツにおいて106.15オームの上昇したインピーダンスが
測定された。流れ出ている水で電極を洗うことおよび蒸
留水に48時間浸すことは電極のインピーダンスを変えな
かった。
2時間であり、これによって、5.9x 104の伝導性グラミ
シジンチャンネル(1ミリヘルツで測定)から10ミリヘ
ルツにおいて106.15オームの上昇したインピーダンスが
測定された。流れ出ている水で電極を洗うことおよび蒸
留水に48時間浸すことは電極のインピーダンスを変えな
かった。
電極はhCG含有0.1M NaCl中において37℃、15分間イン
キュベートした。蒸留水での洗浄後、電極は0.1M NaCl
セルに戻し、そのインピーダンスを測定した。Fab溶液
において12時間インキュベートすることが、hCG結合に
対するインピーダンスのもっとも感受性の高い変化をも
たらした。
キュベートした。蒸留水での洗浄後、電極は0.1M NaCl
セルに戻し、そのインピーダンスを測定した。Fab溶液
において12時間インキュベートすることが、hCG結合に
対するインピーダンスのもっとも感受性の高い変化をも
たらした。
1ml当たり0.96ナノグラムのhCGによって、10ミリヘル
ツにおいて106.20オームの増加インピーダンスが得られ
た。これは1ミリヘルツで測定された4.8x104個の伝導
性グラミシジンチャンネルに相当するものである。
ツにおいて106.20オームの増加インピーダンスが得られ
た。これは1ミリヘルツで測定された4.8x104個の伝導
性グラミシジンチャンネルに相当するものである。
蒸留水またはエタノールによる洗浄はインピーダンス
を変えることはなかった。蒸留水または0.1M NaClにに
電極を浸すこともまた、インピーダンスを変えることは
なかった。
を変えることはなかった。蒸留水または0.1M NaClにに
電極を浸すこともまた、インピーダンスを変えることは
なかった。
実施例8 パラジウム被覆されたガラス電極は実施例7に記載し
た方法によって被覆した。第1の単層は実施例7に記載
されている通りであり、第2の単層は全脂質:グラミジ
ンの比が100:1になるようにして構成され、ここにおい
て全脂質はアセテート脂質:リンカー脂質(実施例1な
いし3を見よ)の比が100:1になるようにして構成され
ている。
た方法によって被覆した。第1の単層は実施例7に記載
されている通りであり、第2の単層は全脂質:グラミジ
ンの比が100:1になるようにして構成され、ここにおい
て全脂質はアセテート脂質:リンカー脂質(実施例1な
いし3を見よ)の比が100:1になるようにして構成され
ている。
電極のインピーダンスは実施例7に記載したとおりに
測定した。電極はFab溶液に実施例7に示したように5
ないし10時間インキュベートした。Fab溶液において5.5
時間インキュベーション後に脂質−Fab電極によって測
定したところ、1.9x105個の伝導性グラミシジンチャン
ネルに相当する10ミリヘルツにおけるインピーダンスは
105.4オームであり、一方において脂質−グラミシジン
のみの二重層では10ミリヘルツにおけるインピーダンス
は104.6オームであった。
測定した。電極はFab溶液に実施例7に示したように5
ないし10時間インキュベートした。Fab溶液において5.5
時間インキュベーション後に脂質−Fab電極によって測
定したところ、1.9x105個の伝導性グラミシジンチャン
ネルに相当する10ミリヘルツにおけるインピーダンスは
105.4オームであり、一方において脂質−グラミシジン
のみの二重層では10ミリヘルツにおけるインピーダンス
は104.6オームであった。
hCGは実施例7に記載したようにしてFab被覆脂質−グ
ラミシジン被覆電極とともにインキュペートした。Fab
溶液における5.5時間のインキュペーションによってhCG
結合に対して最も感受性の高い変化が認められた。1ml
当たり0.96ナノグラムのhCGの添加によって1.2x105個の
伝導性グラミシジンチャンネルに相当する、10ミリヘル
ツにおけるインピーダンスは105.55オームであった。全
濃度が2.56ng/mlのところへさらにhCGを添加するとによ
って、5.6x105個の伝導性グラミシジンチャンネルに相
当する、10ミリヘルツにおけるインピーダンスは105.93
オームであった。
ラミシジン被覆電極とともにインキュペートした。Fab
溶液における5.5時間のインキュペーションによってhCG
結合に対して最も感受性の高い変化が認められた。1ml
当たり0.96ナノグラムのhCGの添加によって1.2x105個の
伝導性グラミシジンチャンネルに相当する、10ミリヘル
ツにおけるインピーダンスは105.55オームであった。全
濃度が2.56ng/mlのところへさらにhCGを添加するとによ
って、5.6x105個の伝導性グラミシジンチャンネルに相
当する、10ミリヘルツにおけるインピーダンスは105.93
オームであった。
上記と同様の塗装(コート)を施した他の電極では、
5.5時間のFabインキュペーションにより10ミリヘルツに
おけるインピーダンスは105.8オームであり、また1ml当
たり0.96ナノグラムのhCGの添加による10ミリヘルツに
おけるインピーダンスは106.15オームであった。対照と
して、hCG(すなわち、1.92x10-14mol/ml)の変わりに
同量の牛血清アルブミンを添加すると、10ミリヘルツに
おけるインピーダンスは105.80オームであり、hCGを除
く脂質−Fab被覆電極と等価である。
5.5時間のFabインキュペーションにより10ミリヘルツに
おけるインピーダンスは105.8オームであり、また1ml当
たり0.96ナノグラムのhCGの添加による10ミリヘルツに
おけるインピーダンスは106.15オームであった。対照と
して、hCG(すなわち、1.92x10-14mol/ml)の変わりに
同量の牛血清アルブミンを添加すると、10ミリヘルツに
おけるインピーダンスは105.80オームであり、hCGを除
く脂質−Fab被覆電極と等価である。
実施例9 パラジウム被覆されたガラス電極は実施例7に記載さ
れた方法を用いて塗装(コート)した。第1の単層はド
デカンエチオール:グラミシジンA(10:1)で、第2の
単層は脂質:グラミシジンリンカー(2:1)から構成さ
れた。インピーダンス測定は実施例7の記載にしたがっ
て行なった。
れた方法を用いて塗装(コート)した。第1の単層はド
デカンエチオール:グラミシジンA(10:1)で、第2の
単層は脂質:グラミシジンリンカー(2:1)から構成さ
れた。インピーダンス測定は実施例7の記載にしたがっ
て行なった。
二重層のインピーダンスは1mHzにおいて105.85オーム
であった。実施例7に記載されたようにしてFab溶液に1
6時間インキュペートすると、1mHzにおけるインピーダ
ンスは106.9オームであった。hCGを0.08ng/ml添加する
と、1mHzにおけるインピーダンスは106.56オームであっ
た。
であった。実施例7に記載されたようにしてFab溶液に1
6時間インキュペートすると、1mHzにおけるインピーダ
ンスは106.9オームであった。hCGを0.08ng/ml添加する
と、1mHzにおけるインピーダンスは106.56オームであっ
た。
実施例10 Ca2+イオンはグラミシジンチャンネルを特異的に阻害
する。Ca2+のガラミシジン阻害能を調べるためにCa2+イ
オンを脂質−グラミシジンリンカー被覆電極に添加し
た。
する。Ca2+のガラミシジン阻害能を調べるためにCa2+イ
オンを脂質−グラミシジンリンカー被覆電極に添加し
た。
パラジウム被覆されたガラス電極は実施例6に記載さ
れた方法によって制作し、かつ第1の単層はドアカンエ
チオール:グラミシジンA(10:1)からなり、第2の単
層はジミリストイルホスファチジルエタノールアミン:
グラミシジンR(1:1)からなるようにした。インピー
ダンス測定は実施例7に記載された方法によって行なっ
た。二重層は10mHzにおけるインピーダンスが105.05オ
ームであった。測定中のセルに50mMのCa2+イオンを添加
すると、10mHzにおけるインピーダンスが105.35オーム
まで増加し、このことは伝導性グラミシジンチャンネル
の数が減少したことを示している。
れた方法によって制作し、かつ第1の単層はドアカンエ
チオール:グラミシジンA(10:1)からなり、第2の単
層はジミリストイルホスファチジルエタノールアミン:
グラミシジンR(1:1)からなるようにした。インピー
ダンス測定は実施例7に記載された方法によって行なっ
た。二重層は10mHzにおけるインピーダンスが105.05オ
ームであった。測定中のセルに50mMのCa2+イオンを添加
すると、10mHzにおけるインピーダンスが105.35オーム
まで増加し、このことは伝導性グラミシジンチャンネル
の数が減少したことを示している。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号 PI4478 (32)優先日 1987年9月21日 (33)優先権主張国 オーストラリア(AU) (72)発明者 ブラアク マクスヴィテス,ヴィジョレ タ ルシジャ ブロニスラヴァ オーストラリア国 ニュー サウス ウ ェールズ 2023 ベルビュー ヒル ビ リガ ロード 11/39 (56)参考文献 特開 昭62−11158(JP,A) 特開 昭61−2055(JP,A) 特開 平2−78946(JP,A) 特開 昭60−78350(JP,A) 特表 平4−504714(JP,A) 米国特許4661442(US,A) 米国特許4444878(US,A) 教育社 「細胞の分子生物学 第2 版」 中村桂子他監修 P.300−323
Claims (38)
- 【請求項1】自己凝集両親媒性分子の密集配列からなる
膜であって、 (1)前記膜が、ヘリックスおよびその凝集体を形成す
ることが可能なペプチド、ポダンド、コロナンド、クリ
プタンおよびこれらの組み合わせからなる群から選択さ
れた複数のイオンチャンネルを含み、かつ、 (2)少なくとも所定の割合の自己凝集両親媒性分子
が、支持部に結合したレセプター分子を含み、 前記レセプター分子は、レセプター部位を具備し、免疫
グロブリン、抗体、抗体断片、色素、酵素、およびレク
チンからなる群から選択され、 前記支持部は、脂質頭部、炭化水素鎖、架橋結合可能な
分子および膜タンパク質からなる群から選択され、 前記支持部と前記レセプター分子とが、前記レセプター
分子のレセプター部位からかけ離れた末端において結合
したことを特徴とする膜。 - 【請求項2】イオンチャンネルが、α−ヘリックスのペ
プチドの凝集体であることを特徴とする請求項1記載の
膜。 - 【請求項3】イオンチャンネルが、β−シートを形成す
るペプチドであることを特徴とする請求項1記載の膜。 - 【請求項4】イオンチャンネルが、グラミシジンまたは
その類似化合物であることを特徴とする請求項3記載の
膜。 - 【請求項5】イオンチャンネルが、グラミシジンAまた
はその類似化合物であることを特徴とする請求項3記載
の膜。 - 【請求項6】レセプター分子が、その末端において、イ
オンチャンネルに付着または結合しており、該レセプタ
ー分子は、通常は第1状態にあるが、アナライトと結合
すると第2状態となり、このレセプター分子の状態変化
によって、イオンがイオンチャンネルを通過する能力に
変化が引き起こされることを特徴とする、請求項1ない
し5のいずれか一項に記載の膜。 - 【請求項7】レセプター分子が、その末端においてイオ
ンチャンネルに結合したことを特徴とする請求項6記載
の膜。 - 【請求項8】レセプターが分子が抗原であることを特徴
とする請求項6または7記載の膜。 - 【請求項9】レセプター分子が抗体または抗体断片であ
ることを特徴とする請求項6または7記載の膜。 - 【請求項10】抗体断片が少なくとも一つのFab断片を
含むことを特徴とする請求項9記載の膜。 - 【請求項11】レセプター分子がFab断片であることを
特徴とする請求項10記載の膜。 - 【請求項12】レセプター分子に結合した支持部が、架
橋結合可能な分子または膜タンパク質であることを特徴
とする請求項1ないし5のいずれか一項に記載の膜。 - 【請求項13】架橋結合可能な分子が、二価性であるこ
とを特徴とする、請求項1ないし5または請求項12のい
ずれか一項に記載の膜。 - 【請求項14】レセプター分子が、抗体または抗体断片
であることを特徴とする請求項1ないし5のいずれか一
項に記載の膜。 - 【請求項15】レセプター分子が、少なくとも一つのFa
b断片を含む抗体断片であることを特徴とする請求項14
記載の膜。 - 【請求項16】レセプター分子がFab断片であることを
特徴とする請求項15記載の膜。 - 【請求項17】Fab断片が炭化水素鎖に取り付けられ、
膜の2%までの両親媒性分子が炭化水素鎖に取り付けら
れたFab断片を具備することを特徴とする請求項16記載
の膜。 - 【請求項18】膜の1%〜2%の両親媒性分子が、炭化
水素鎖に取り付けられたFab断片を含むことを特徴とす
る請求項17記載の膜。 - 【請求項19】所定の割合の両親媒性分子が支持部に結
合したレセプター分子を含み、各レセプター分子が異な
る分子または抗原決定基と反応することを特徴とする、
請求項1ないし5もしくは12ないし18のいずれか一項に
記載の膜。 - 【請求項20】レセプター分子が、異なる抗原決定基を
認識する二つのFab断片であることを特徴とする請求項1
9記載の膜。 - 【請求項21】少なくとも一つのFab断片を含む抗体ま
たは抗体断片と反応する抗原が、イオンチャンネルに取
り付けられ、抗原が抗体または抗体断片と結合するとイ
オンがイオンチャンネルを通過することを特徴とする請
求項1ないし5もしくは12ないし20のいずれか一項に記
載の膜。 - 【請求項22】イオンチャンネルが、支持部に結合した
レセプター分子を含む両親媒性分子の近傍に存在し、レ
セプター分子へのアナライトの結合によって、レセプタ
ー分子が、イオンのイオンチャンネル通過能力に変化を
引き起こすことを特徴とする、請求項1ないし5もしく
は12ないし20のいずれか一項に記載の膜。 - 【請求項23】レセプター分子が、少なくとも一つのFa
b断片を含む抗体または抗体断片であることを特徴とす
る請求項22記載の膜。 - 【請求項24】レセプター分子がFab断片であることを
特徴とする請求項23記載の膜。 - 【請求項25】イオンチャンネルがグラミシジンである
ことを特徴とする請求項22ないし24のいずれか一項に記
載の膜。 - 【請求項26】膜が二重層であって、イオンチャンネル
が二つのグラミシジンモノマーまたは共有結合したダイ
マーであることを特徴とする請求項22ないし25のいずれ
か一項に記載の膜。 - 【請求項27】両親媒性分子が、レセプター分子に含ま
ずに、他方の分子と対応する少なくとも一つの分子と架
橋結合した少なくとも一つの分子を含むか、もしくはそ
の分子で修飾されていることを特徴とする、請求項1な
いし26のいずれか一項に記載の膜。 - 【請求項28】イオンチャンネルおよび/または支持部
に結合したレセプター分子を含む一定の割合の両親媒性
分子が、他方の分子と対応する少なくとも一つの分子と
架橋結合した少なくとも一つの分子を含むか、もしくは
その分子で修飾されていることを特徴とする請求項1な
いし27のいずれか一項に記載の膜。 - 【請求項29】固体表面またはその上に配された基と反
応し得る、膜に配された基によって、固体表面に取り付
けられたことを特徴とする、請求項1または28のいずれ
か一項に記載の膜。 - 【請求項30】固体表面が、ハイドロゲル、セラミック
ス酸化物、シリコン、プラスチックおよび遷移金属から
なる群から選択されたことを特徴とする、請求項29記載
の膜。 - 【請求項31】遷移金属が、金、プラチナおよびパラジ
ウムからなる群から選択されたことを特徴とする、請求
項30記載の膜。 - 【請求項32】固体表面に取り付けられた膜二重層を含
むバイオセンサーであって、二重層は上層と下層とを備
え、下層は固体表面に隣接し、固体表面またはその上に
配された基と反応する基が配され;二重層の各層は、自
己凝集両親媒性分子およびグラミシジンモノマーからな
り、上層の所定の割合の両親媒性分子は、支持部に結合
したレセプター分子を含み、レセプター分子はレセプタ
ー部位を備え、レセプター分子は、免疫グロブリン、抗
体、抗体断片、色素、酵素、およびレクチンからなる群
から選択され、支持部は、脂質頭部、炭化水素鎖、架橋
結合可能な分子および膜タンパク質からなる群から選択
され、前記支持部と前記レセプター分子とが、前記レセ
プター分子のレセプター部位からかけ離れた末端におい
て結合したことを特徴とするバイオセンサー。 - 【請求項33】レセプター分子が、少なくとも一つのFa
b断片を含む抗体断片であることを特徴とする請求項32
記載のバイオセンサー。 - 【請求項34】レセプター分子がFab断片であることを
特徴とする請求項32または33記載のバイオセンサー。 - 【請求項35】固体表面が、パラジウム被覆されたガラ
ス電極であることを特徴とする、請求項32ないし34のい
ずれか一項に記載のバイオセンサー。 - 【請求項36】固体表面に膜二重層が付着されたバイオ
センサーであって、二重層が上層および下層を備え、上
層は固体表面に隣接し、固体表面もしくはその上に配さ
れた基と反応し得る基が配され、二重層の各層は自己凝
集両親媒性分子およびグラミシジン分子からなり、レセ
プター分子が上層のグラミシジン分子に取り付けられて
いることを特徴とするバイオセンサー。 - 【請求項37】レセプター分子が、Fab断片であること
を特徴とする請求項36記載のバイオセンサー。 - 【請求項38】固体表面が、パラジウム被覆されたガラ
ス電極であることを特徴とする請求項36または37記載の
バイオセンサー。
Applications Claiming Priority (8)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AU3346 | 1982-03-29 | ||
AU4478 | 1986-02-06 | ||
AUPI334887 | 1987-07-27 | ||
AU3348 | 1987-07-27 | ||
AUPI334687 | 1987-07-27 | ||
AU3453 | 1987-07-31 | ||
AUPI345387 | 1987-07-31 | ||
AUPI447887 | 1987-09-21 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH03503209A JPH03503209A (ja) | 1991-07-18 |
JP2682859B2 true JP2682859B2 (ja) | 1997-11-26 |
Family
ID=27424216
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63506329A Expired - Fee Related JP2682859B2 (ja) | 1987-07-27 | 1988-07-27 | レセプター膜 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US5436170A (ja) |
EP (1) | EP0382736B1 (ja) |
JP (1) | JP2682859B2 (ja) |
AT (1) | ATE113724T1 (ja) |
CA (1) | CA1335879C (ja) |
DE (1) | DE3852036T2 (ja) |
WO (1) | WO1989001159A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008018631A1 (fr) * | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Nihon University | Complexe de liposome, réseau de liposome, et procédé de détection d'un analyte |
Families Citing this family (96)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5766960A (en) * | 1987-07-27 | 1998-06-16 | Australian Membrane And Biotechnology Research Institute | Receptor membranes |
JP2632956B2 (ja) * | 1988-08-26 | 1997-07-23 | キヤノン株式会社 | 平面膜の形成方法 |
ES2102364T3 (es) | 1989-01-27 | 1997-08-01 | Au Membrane & Biotech Res Inst | Membranas receptoras y control del paso a su traves por medio de ionoforos. |
US5874316A (en) * | 1989-01-27 | 1999-02-23 | Australian Membrane Biotechnology Research Institute | Receptor membranes and ionophore gating |
IL93020A (en) * | 1990-01-09 | 1995-06-29 | Yeda Res & Dev | Biosensors comprising a lipid bilayer doped with ion channels anchored to a recording electrode by bridging molecules |
US5328847A (en) * | 1990-02-20 | 1994-07-12 | Case George D | Thin membrane sensor with biochemical switch |
WO1992017788A1 (en) * | 1991-03-27 | 1992-10-15 | Australian Membrane And Biotechnology Research Institute | Ionic reservoir at electrode surface |
US6569382B1 (en) | 1991-11-07 | 2003-05-27 | Nanogen, Inc. | Methods apparatus for the electronic, homogeneous assembly and fabrication of devices |
US6051380A (en) * | 1993-11-01 | 2000-04-18 | Nanogen, Inc. | Methods and procedures for molecular biological analysis and diagnostics |
US6017696A (en) | 1993-11-01 | 2000-01-25 | Nanogen, Inc. | Methods for electronic stringency control for molecular biological analysis and diagnostics |
US5849486A (en) | 1993-11-01 | 1998-12-15 | Nanogen, Inc. | Methods for hybridization analysis utilizing electrically controlled hybridization |
US6048690A (en) * | 1991-11-07 | 2000-04-11 | Nanogen, Inc. | Methods for electronic fluorescent perturbation for analysis and electronic perturbation catalysis for synthesis |
US5632957A (en) | 1993-11-01 | 1997-05-27 | Nanogen | Molecular biological diagnostic systems including electrodes |
US6652808B1 (en) | 1991-11-07 | 2003-11-25 | Nanotronics, Inc. | Methods for the electronic assembly and fabrication of devices |
US5605662A (en) * | 1993-11-01 | 1997-02-25 | Nanogen, Inc. | Active programmable electronic devices for molecular biological analysis and diagnostics |
FR2688065B1 (fr) * | 1992-02-28 | 1994-12-23 | Thomson Csf | Capteur moleculaire. |
EP0637384B1 (en) * | 1992-04-22 | 1996-10-02 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne | Lipid membrane sensors |
JP2782695B2 (ja) * | 1992-09-11 | 1998-08-06 | ダムビノヴァ,スヴェトラーナ・アレクサンドロフナ | 神経症および精神病の診断用免疫吸着剤およびその実際的用途 |
US5674698A (en) * | 1992-09-14 | 1997-10-07 | Sri International | Up-converting reporters for biological and other assays using laser excitation techniques |
US6093391A (en) * | 1992-10-08 | 2000-07-25 | Supratek Pharma, Inc. | Peptide copolymer compositions |
US6277410B1 (en) | 1992-10-08 | 2001-08-21 | Supratek Pharma Inc. | Copolymer compositions for oral delivery |
US6153193A (en) * | 1993-04-28 | 2000-11-28 | Supratek Pharma Inc. | Compositions for targeting biological agents |
EP0672251A4 (en) * | 1992-12-03 | 1998-05-20 | Au Membrane & Biotech Res Inst | DETECTION OF ANALYZES BY COMPETETIVE INHIBITION OF THE PENTNESSITY OF ION CHANNELS. |
CA2161084C (en) * | 1993-04-21 | 2005-01-25 | Bruce Andrew Cornell | Surface amplifier |
WO1994028414A1 (en) * | 1993-05-29 | 1994-12-08 | Cambridge Life Sciences Plc | Sensors based on polymer transformation |
WO1995008637A1 (en) * | 1993-09-21 | 1995-03-30 | Washington State University Research Foundation | Immunoassay comprising ligand-conjugated, ion channel receptor immobilized in lipid film |
US6254827B1 (en) | 1993-11-01 | 2001-07-03 | Nanogen, Inc. | Methods for fabricating multi-component devices for molecular biological analysis and diagnostics |
US7582421B2 (en) | 1993-11-01 | 2009-09-01 | Nanogen, Inc. | Methods for determination of single nucleic acid polymorphisms using a bioelectronic microchip |
US7172864B1 (en) | 1993-11-01 | 2007-02-06 | Nanogen | Methods for electronically-controlled enzymatic reactions |
US6331274B1 (en) | 1993-11-01 | 2001-12-18 | Nanogen, Inc. | Advanced active circuits and devices for molecular biological analysis and diagnostics |
US6309602B1 (en) | 1993-11-01 | 2001-10-30 | Nanogen, Inc. | Stacked, reconfigurable system for electrophoretic transport of charged materials |
US6375899B1 (en) | 1993-11-01 | 2002-04-23 | Nanogen, Inc. | Electrophoretic buss for transport of charged materials in a multi-chamber system |
US7101661B1 (en) | 1993-11-01 | 2006-09-05 | Nanogen, Inc. | Apparatus for active programmable matrix devices |
US6726880B1 (en) | 1993-11-01 | 2004-04-27 | Nanogen, Inc. | Electronic device for performing active biological operations and method of using same |
US6319472B1 (en) | 1993-11-01 | 2001-11-20 | Nanogen, Inc. | System including functionally separated regions in electrophoretic system |
US6315953B1 (en) | 1993-11-01 | 2001-11-13 | Nanogen, Inc. | Devices for molecular biological analysis and diagnostics including waveguides |
US6068818A (en) * | 1993-11-01 | 2000-05-30 | Nanogen, Inc. | Multicomponent devices for molecular biological analysis and diagnostics |
US6287517B1 (en) | 1993-11-01 | 2001-09-11 | Nanogen, Inc. | Laminated assembly for active bioelectronic devices |
US6638482B1 (en) | 1993-11-01 | 2003-10-28 | Nanogen, Inc. | Reconfigurable detection and analysis apparatus and method |
US7314708B1 (en) | 1998-08-04 | 2008-01-01 | Nanogen, Inc. | Method and apparatus for electronic synthesis of molecular structures |
US6403367B1 (en) | 1994-07-07 | 2002-06-11 | Nanogen, Inc. | Integrated portable biological detection system |
AT402935B (de) * | 1994-10-19 | 1997-09-25 | Pittner Fritz | Biorekognitions-gesteuerter, ionenfluss-modulirender biosensor |
US6353055B1 (en) * | 1994-11-18 | 2002-03-05 | Supratek Pharma Inc. | Polynucleotide compositions |
AUPN366995A0 (en) * | 1995-06-20 | 1995-07-13 | Australian Membrane And Biotechnology Research Institute | Self-assembly of bilayer membrane sensors |
AUPN366895A0 (en) * | 1995-06-20 | 1995-07-13 | Australian Membrane And Biotechnology Research Institute | Detection of small analytes |
US5879878A (en) * | 1995-06-20 | 1999-03-09 | Australian Membrane And Biotechnology Research Institute | Method of producing a first layer electrode membrane for a biosensor |
WO1997020203A1 (de) * | 1995-11-28 | 1997-06-05 | Thomas Schalkhammer | Neuartige membranen und membran-dna/rna-sensoren |
AU708021B2 (en) * | 1996-02-08 | 1999-07-29 | Ambri Limited | Enzyme detection biosensors |
DE19607279A1 (de) * | 1996-02-27 | 1997-08-28 | Bayer Ag | Durch Festkörper unterstützte Membran-Biosensoren |
US6130037A (en) * | 1996-04-25 | 2000-10-10 | Pence And Mcgill University | Biosensor device and method |
CA2251674C (en) * | 1996-04-25 | 2004-12-14 | Pence, Inc. | Biosensor device and method |
US5955379A (en) * | 1996-04-25 | 1999-09-21 | Mcgill University | Biosensor device and method |
US6165335A (en) * | 1996-04-25 | 2000-12-26 | Pence And Mcgill University | Biosensor device and method |
US6107080A (en) * | 1996-04-25 | 2000-08-22 | Mcgill University | Biosensor device and method |
US6136311A (en) | 1996-05-06 | 2000-10-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Treatment and diagnosis of cancer |
AUPN980796A0 (en) | 1996-05-13 | 1996-06-06 | Australian Membrane And Biotechnology Research Institute | Improved reservoir components |
US6503452B1 (en) * | 1996-11-29 | 2003-01-07 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Biosensor arrays and methods |
US6706473B1 (en) | 1996-12-06 | 2004-03-16 | Nanogen, Inc. | Systems and devices for photoelectrophoretic transport and hybridization of oligonucleotides |
GB9712386D0 (en) * | 1997-06-14 | 1997-08-13 | Univ Coventry | Biosensor |
SE9703314D0 (sv) * | 1997-09-15 | 1997-09-15 | Sangtec Medical Ab | Capacity affinity sensor |
DE19741715A1 (de) | 1997-09-22 | 1999-03-25 | Hoechst Ag | Pentopyranosyl-Nucleosid, seine Herstellung und Verwendung |
US6048692A (en) * | 1997-10-07 | 2000-04-11 | Motorola, Inc. | Sensors for electrically sensing binding events for supported molecular receptors |
GB9801120D0 (en) * | 1998-01-21 | 1998-03-18 | Secr Defence | Detection system |
WO1999048927A1 (en) * | 1998-03-25 | 1999-09-30 | Cornell Research Foundation, Inc. | Methods for designing specific ion channel blockers |
GB9812783D0 (en) * | 1998-06-12 | 1998-08-12 | Cenes Ltd | High throuoghput screen |
US6297059B1 (en) | 1998-06-22 | 2001-10-02 | The Regents Of The University Of California | Triggered optical biosensor |
US6500571B2 (en) | 1998-08-19 | 2002-12-31 | Powerzyme, Inc. | Enzymatic fuel cell |
JP4335460B2 (ja) | 1998-12-05 | 2009-09-30 | ゼンション ディスカバリー リミティド | 界面パッチクランプ |
US6300141B1 (en) * | 1999-03-02 | 2001-10-09 | Helix Biopharma Corporation | Card-based biosensor device |
AU2898500A (en) | 1999-03-02 | 2000-09-21 | Helix Biopharma Corporation | Biosensor device and method |
US6218256B1 (en) * | 1999-04-13 | 2001-04-17 | Micron Technology, Inc. | Electrode and capacitor structure for a semiconductor device and associated methods of manufacture |
US7256180B2 (en) | 2000-04-28 | 2007-08-14 | Supratek Pharma Inc. | Compositions and methods for inducing activation of dendritic cells |
AU2001264685A1 (en) * | 2000-05-18 | 2001-11-26 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Lipid bilayer array methods and devices |
US7354721B2 (en) * | 2000-09-22 | 2008-04-08 | Clontech Laboratories, Inc. | Highly sensitive proteomic analysis methods, and kits and systems for practicing the same |
WO2003050524A1 (en) * | 2001-05-23 | 2003-06-19 | Spiridon Kintzios | Method for identifying biochemical material |
EP1269993A1 (en) * | 2001-06-21 | 2003-01-02 | Applied NanoSystems B.V. | Delivery of small hydrophilic molecules packaged into lipid vesicles |
US20030215881A1 (en) * | 2002-05-10 | 2003-11-20 | Hagan Bayley | Stochastic sensing through covalent interactions |
GB0214553D0 (en) * | 2002-06-25 | 2002-08-07 | Univ Leeds | Reporter module molecules having active ion channel activity |
US9701754B1 (en) | 2002-10-23 | 2017-07-11 | City Of Hope | Covalent disulfide-linked diabodies and uses thereof |
US7371585B2 (en) * | 2003-12-31 | 2008-05-13 | Genencor International, Inc. | Membranes incorporating recognition moieties |
US7828954B2 (en) * | 2004-09-21 | 2010-11-09 | Gamida For Life B.V. | Electrode based patterning of thin film self-assembled nanoparticles |
US7314542B2 (en) * | 2004-09-23 | 2008-01-01 | Nanogen, Inc. | Methods and materials for optimization of electronic transportation and hybridization reactions |
WO2007061981A2 (en) | 2005-11-21 | 2007-05-31 | Lumera Corporation | Surface plasmon resonance spectrometer with an actuator-driven angle scanning mechanism |
US7463358B2 (en) * | 2005-12-06 | 2008-12-09 | Lumera Corporation | Highly stable surface plasmon resonance plates, microarrays, and methods |
US8940871B2 (en) | 2006-03-20 | 2015-01-27 | The Regents Of The University Of California | Engineered anti-prostate stem cell antigen (PSCA) antibodies for cancer targeting |
US20070224637A1 (en) * | 2006-03-24 | 2007-09-27 | Mcauliffe Joseph C | Oxidative protection of lipid layer biosensors |
US20100003189A1 (en) | 2006-07-14 | 2010-01-07 | The Regents Of The University Of California | Cancer biomarkers and methods of use thereof |
JP6126773B2 (ja) | 2007-09-04 | 2017-05-10 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 癌のターゲッティングおよび検出のための高親和性抗前立腺幹細胞抗原(psca)抗体 |
US8004669B1 (en) | 2007-12-18 | 2011-08-23 | Plexera Llc | SPR apparatus with a high performance fluid delivery system |
ES2712732T3 (es) | 2009-02-17 | 2019-05-14 | Cornell Res Foundation Inc | Métodos y kits para el diagnóstico de cáncer y la predicción de valor terapéutico |
EP2506876B1 (en) | 2009-12-02 | 2016-10-12 | Imaginab, Inc. | J591 minibodies and cys-diabodies for targeting human prostate specific membrane antigen (psma) and methods for their use |
US20120003639A1 (en) | 2010-04-27 | 2012-01-05 | Prelude, Inc. | Cancer biomarkers and methods of use thereof |
WO2013071049A1 (en) | 2011-11-10 | 2013-05-16 | Trustees Of Boston College | Gramicidin a mutants that function as antibiotics with improved solubility and reduced toxicity |
EP4137158A1 (en) | 2015-08-07 | 2023-02-22 | Imaginab, Inc. | Antigen binding constructs to target molecules |
WO2018147960A1 (en) | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Imaginab, Inc. | Extension sequences for diabodies |
JP2020153695A (ja) * | 2019-03-18 | 2020-09-24 | 株式会社東芝 | イオンセンサ、イオンセンサキット及びイオン検出方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4444878A (en) | 1981-12-21 | 1984-04-24 | Boston Biomedical Research Institute, Inc. | Bispecific antibody determinants |
US4661442A (en) | 1984-06-20 | 1987-04-28 | Irt Corporation | Producing lipid-protein membranes for chemical detection |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US444878A (en) * | 1891-01-20 | Louis de loria | ||
DE3107527A1 (de) * | 1981-02-27 | 1982-09-16 | Klaus Prof. Dr. 8400 Regensburg Heckmann | Hyperfiltrationsmembranen mit trennschichten aus monomolekularen filmen von tensiden |
US4517303A (en) * | 1982-10-20 | 1985-05-14 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Specific binding assays utilizing analyte-cytolysin conjugates |
US4490216A (en) * | 1983-02-03 | 1984-12-25 | Molecular Devices Corporation | Lipid membrane electroanalytical elements and method of analysis therewith |
US4713324A (en) * | 1983-09-01 | 1987-12-15 | Technicon Instruments Corporation | Inverted latency specific binding assay |
CA1223039A (en) * | 1984-03-26 | 1987-06-16 | Michael Thompson | Chemical selective sensors utilizing admittance modulated membranes |
US4661235A (en) * | 1984-08-03 | 1987-04-28 | Krull Ulrich J | Chemo-receptive lipid based membrane transducers |
GB8622788D0 (en) * | 1986-09-22 | 1986-10-29 | Atomic Energy Authority Uk | Sensor |
ES2102364T3 (es) * | 1989-01-27 | 1997-08-01 | Au Membrane & Biotech Res Inst | Membranas receptoras y control del paso a su traves por medio de ionoforos. |
-
1988
- 1988-07-27 EP EP88907164A patent/EP0382736B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-27 US US07/473,932 patent/US5436170A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-27 WO PCT/AU1988/000273 patent/WO1989001159A1/en active IP Right Grant
- 1988-07-27 DE DE3852036T patent/DE3852036T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-07-27 CA CA000573217A patent/CA1335879C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-07-27 AT AT88907164T patent/ATE113724T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-07-27 JP JP63506329A patent/JP2682859B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-05-23 US US08/447,569 patent/US5693477A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-23 US US08/448,178 patent/US5741712A/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4444878A (en) | 1981-12-21 | 1984-04-24 | Boston Biomedical Research Institute, Inc. | Bispecific antibody determinants |
US4661442A (en) | 1984-06-20 | 1987-04-28 | Irt Corporation | Producing lipid-protein membranes for chemical detection |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
教育社 「細胞の分子生物学 第2版」 中村桂子他監修 P.300−323 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008018631A1 (fr) * | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Nihon University | Complexe de liposome, réseau de liposome, et procédé de détection d'un analyte |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO1989001159A1 (en) | 1989-02-09 |
EP0382736A1 (en) | 1990-08-22 |
JPH03503209A (ja) | 1991-07-18 |
US5741712A (en) | 1998-04-21 |
CA1335879C (en) | 1995-06-13 |
DE3852036T2 (de) | 1995-03-09 |
EP0382736B1 (en) | 1994-11-02 |
EP0382736A4 (en) | 1990-12-05 |
US5693477A (en) | 1997-12-02 |
ATE113724T1 (de) | 1994-11-15 |
DE3852036D1 (de) | 1994-12-08 |
US5436170A (en) | 1995-07-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2682859B2 (ja) | レセプター膜 | |
US5766960A (en) | Receptor membranes | |
US5234566A (en) | Sensitivity and selectivity of ion channel biosensor membranes | |
JP2927942B2 (ja) | 受容体膜およびイオノホアのゲーテイング | |
US5874316A (en) | Receptor membranes and ionophore gating | |
JP2000502437A (ja) | 複合膜センサー | |
AU617687B2 (en) | Receptor membranes | |
US20050282237A1 (en) | Immunological analysis carrier and an immunological analysis method using the same | |
JP4174016B2 (ja) | 競合法によるサイロシン類のイムノクロマトグラフィー検出法及びテストキット | |
US6316273B1 (en) | Biosensor for detection of small molecule analytes | |
JP3316816B2 (ja) | イオンチャンネル通門の競合阻害によるアナライト検出 | |
Porter et al. | An electro-active system of immuno-assay (EASI assay) utilising self assembled monolayer modified electrodes | |
AU5033490A (en) | Receptor membranes and ionophore gating | |
Connell et al. | Electroimmunoassay. A new competitive protein-binding assay using antibody-sensitive electrodes | |
Dzantiev et al. | A new visual enzyme immunoassay of methamphetamine using linear water-soluble polyelectrolytes | |
US6537441B1 (en) | Biosensor involving the use of optically sensitive moieties | |
AU692107B2 (en) | Detection of small analytes | |
AU779295B2 (en) | Improved biosensor involving the use of optically sensitive moieties | |
JP2004184125A (ja) | 免疫学的検出試薬、該試薬を用いた検出方法及び該試薬の製造方法 | |
DE3328832A1 (de) | Reagenz und verfahren zur quantitativen bestimmung von antikoerpern | |
AU7751098A (en) | Improved biosensor involving the use of optically sensitive moieties | |
AU2918302A (en) | Improved biosensor involving the use of optically sensitive moieties |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
S201 | Request for registration of exclusive licence |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R314201 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |