JP2023500269A - フルクトース-6-リン酸3-エピマー化酵素およびその用途 - Google Patents
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Abstract
Description
[数式1]
アルロース最大転換率(%)=(アルロース生成量(g/L)/フルクトース-6-リン酸投与量g/L)*(アルロース分子量/フルクトース-6-リン酸分子量)*100
[数式2]
前記アルロース生成比率(重量%)=アルロース生成量/(果糖生成量+アルロース生成量)*100
フルクトース-6-リン酸3-エピマー化酵素として機能すると予想される候補酵素をスクリーニングして、最も優れた効果を示すと予想される酵素としてClostridium lundense DSM 17049菌株に由来する酵素(ClFP3E)のアミノ酸配列(配列番号1)をコードするポリヌクレオチド(配列番号2)をIDT gene合成を通じて遺伝子合成依頼して確保した。合成された配列番号2のClFP3E DNA塩基配列を基本にしてプライマー(primer)を考案し、PCRを実施して当該遺伝子の塩基配列を増幅した。PCR増幅に使用された順方向配列と逆方向プライマー配列は下記のとおりである。
4mlのLB培地で種培養後、100mlのLB培地で本培養を行い、培養条件は37℃で200rpm条件で600nmで吸光度値0.6になる時まで培養後、IPTG 0.1mMを添加して目的タンパク質の発現を誘導した。誘導(induction)後、25℃で約16時間程度菌株培養後、遠心分離して菌体を回収した。前記回収された菌体はライシスバッファー(lysis buffer)(50mMリン酸ナトリウムバッファー(sodium phosphate buffer)(pH7.0)、300mM NaCl、10mMイミダゾール(imidazole))に懸濁して、ビードビーター(beadbeater)を利用して細胞破砕し、細胞破砕溶液から目的タンパク質ClFP3Eの過発現をSDS-PAGE gel分析を通じて確認した。前記目的タンパク質ClFP3Eの過発現分析結果を図1に示す。SDS-PAGE gel分析を通じて確認したClFP3Eの分子量は約28KDaであった。
また、細胞ペレット(pellet)を除去した後、細胞上清液のみを得てNi-NTAカラム(Ni-NTA superflow、Qiagen)に結合(binding)させた後、洗浄バッファー(washing buffer)(50mMリン酸ナトリウムバッファー(sodium phosphate buffer)(pH7.0)、300mM NaCl、20mMイミダゾール(imidazole))でカラムに結合(binding)されないタンパク質を除去し、最後の過程で溶出バッファー(elution buffer)(50mMリン酸ナトリウムバッファー(sodium phosphate buffer)(pH7.0)、300mM NaCl、200mMイミダゾール(imidazole))で目的タンパク質を溶出した。最終的に確保したタンパク質は、50mMリン酸ナトリウムバッファー(sodium phosphate buffer)(pH7.0)で転換して以降の使用のために保管した。
実施例1で得られた精製されたClFP3E酵素0.1mg/mlを、50mMリン酸ナトリウムバッファー(sodium phosphate buffer)(pH7.0)に20g/Lのフルクトース-6-リン酸を溶解した溶解液に添加して50℃で酵素反応を行った。
酵素反応液の分析は、Bio-LC分析を通じて基質と比較して新規に生成された物質を確認したが、アルロース-6-リン酸標準物質が存在せず、正確な確認が不可であり、追加的にアルロース-6-リン酸(A6PP)の脱リン酸化酵素を処理した後、生成されたアルロースを最終的に確認した。Bio-LC分析を通じてはClFP3E酵素反応時、F6Pの減少とA6Pと考えられる新たなピーク(peak)が生成されることを確認した。前記Bio-LC分析結果を下記図2に示す。
A6PP酵素反応を通じて反応液のリン酸化糖を脱リン酸化させた後、LCで分析した結果は次のとおりである。Aminex HPX-87C columnを使用して80℃温度で0.6ml/minの流速条件で分析し、その結果を図3に示す。前記分析結果、果糖とアルロースを確認することができた。
アルロース-6-リン酸フォスファターゼ(A6PP)酵素反応を通じて脱リン酸化させた反応液の最終産物であるアルロースの生成量を定量して計算したClFP3Eの最終転換率は34.3%と計算された。本実施例の反応生成物は、酵素反応を16時間行って得たClFP3Eの最終転換率であり、アルロース最大転換率は、下記数式により計算される。
[数式1]
アルロース最大転換率(%)=(アルロース生成量(g/L)/フルクトース-6-リン酸投与量(g/L))*(アルロース分子量/フルクトース-6-リン酸分子量)*100
ClFP3E酵素活性に温度が及ぼす影響を確認するために、50mMリン酸ナトリウムバッファー(sodium phosphate buffer)(pH7.0)に10g/Lのフルクトース-6-リン酸を溶解した後、0.01mg/mlのClFP3E精製タンパク質を添加して40~80℃の間の多様な温度条件で5分間反応を進行した。
その後、A6PP酵素を添加して全ての反応組成物を脱リン酸化させた後、HPLC分析を通じてアルロース生成量を定量分析した。前記反応温度による酵素の相対活性を最も活性が高く測定された60℃の活性を基準にして図4に示した。
ClFP3E酵素活性にpHが及ぼす影響を確認するために、pH5.0~8.5の間の緩衝溶液(pH5.0~6.5、クエン酸ナトリウム/pH6.5~8.5、Tris-HCl)に10g/Lのフルクトース-6-リン酸を溶解した後、0.01mg/mlのClFP3E精製タンパク質を添加して60℃温度で5分の条件で酵素反応を進行した。その後、A6PP酵素を添加して全ての反応組成物を脱リン酸化させた後、HPLC分析を通じてアルロース生成量を定量分析した。前記反応pHによる酵素活性の結果は最も活性が良かったpH7.5を基準にして相対活性で図5に示す。
反応時に添加する金属イオンの種類によるClFP3Eの活性を確認するために、50mMリン酸ナトリウムバッファー(sodium phosphate buffer)(pH7.0)に10g/Lのフルクトース-6-リン酸を溶解した後、それぞれの金属イオン(MgCl2、MnCl2、CaCl2、CoCl2、CuCl2、NiSO4、FeSO4、ZeSO4)5mMを添加した。各金属イオンを含む反応バッファーに0.01mg/mlのClFP3E生成たんぱく質を添加して60℃温度で5分間反応を進行した。
その後、A6PP酵素を添加して全ての反応組成物を脱リン酸化させた後、HPLC分析を通じてアルロース生成量を定量分析した。前記金属イオンの種類による酵素の相対活性を金属イオンを入れない実験群を基準にして図6に示す。
Ruminococcus sp. AF14-10由来ribulose-phosphate 3-epimerase(RuFP3E:アミノ酸配列-配列番号5および核酸配列-配列番号6)、Clostridium sp. DL-VIII由来ribulose-phosphate 3-epimerase(CDFP3E:アミノ酸配列-配列番号7および核酸配列-配列番号8)、Paenibacillus kribbensis由来ribulose-phosphate 3-epimerase(PkFP3E:アミノ酸配列-配列番号9および核酸配列-配列番号10)のポリヌクレオチドを遺伝子合成依頼して確保した。
前記Clostridium lundense DSM 17049菌株に由来するフルクトース-6-リン酸3-エピマー化酵素(ClFP3E)のアミノ酸配列(配列番号1)とアミノ酸配列相同性を分析した結果、配列番号5のアミノ酸配列を有するRuFP3Eとアミノ酸配列同一性は59.05%であり、配列番号7のアミノ酸配列を有するCDFP3Eとアミノ酸配列同一性は63%であり、配列番号9のアミノ酸配列を有するPkFP3Eとアミノ酸配列同一性は60.96%であった。
合成された配列番号2のClFP3EのDNA塩基配列を基本にして、前記実施例1と実質的に同様な方法で大量で遺伝子を得た。実施例1と実質的に同様な方法で、前記得られた遺伝子をE.coliに導入して発現させた後に目的タンパク質を溶出した。最終的に確保したタンパク質は50mMリン酸ナトリウムバッファー(sodium phosphate buffer)(pH7.0)で転換して以降の使用のために保管した。
フルクトース6-リン酸からアルロース6-リン酸への転換活性を分析するために、実施例2と同様な方法で、前記得られた酵素を利用してフルクトース-6-リン酸を基質で使用した酵素反応を行った。前記酵素反応後に、アルロース-6-リン酸フォスファターゼ(A6PP)酵素を利用した脱リン酸化反応を行った後、前記反応産物液を高性能液体クロマトグラフィー(High-Performance Liquid Chromatography、HPLC)を使用してアルロース生成量で測定した。
HPLC分析条件は、Aminex HPX-87Cカラム(BIO-RAD)が装着されたHPLC(Agilent、USA)のRID(Refractive Index Detector Agilent 1260 RID)を利用した。移動相溶媒は水を使用し、温度は80℃、流速は0.6ml/minにして行った。前記HPLC分析結果を図7aおよび7bに示す。本実施例の反応生成物は、酵素反応を4時間行って得られた酵素のアルロース転換率を得たものであり、FP3E候補群酵素に対してスクリーニング(screening)をするための実験で、アルロース生成の中間工程で反応を停止した反応液を分析した結果である。図7aおよび7bでClFP3Eのアルロース転換率は16%と確認され、実施例2で得られた最大転換率と比較して約50%水準に反応進行された。本実施例のClFP3Eの全体生成物のうち、アルロース生成比率は75重量%であり、アルロース生成比率は下記数式により計算される。
[数式2]
前記アルロース生成比率(重量%)=アルロース生成量/(果糖生成量+アルロース生成量)×100
Claims (13)
- 配列番号1のアミノ酸配列と70%以上のアミノ酸配列相同性(identity)を有し、フルクトース-6-リン酸(Fructose-6-phosphate)をアルロース-6-リン酸(allulose-6-phosphate)に転換させるフルクトース-6-リン酸(fructose6-phosphate)エピマー化酵素タンパク質。
- 前記酵素は、配列番号2のヌクレオチド配列と80%以上のヌクレオチド配列同一性(identity)を有するヌクレオチド配列によりコードされるものである、請求項1に記載の酵素タンパク質。
- 前記酵素は、Clostridium lundenseに由来し、40~70℃の酵素反応温度およびpH6~8の酵素反応pHを有するものである、請求項1に記載の酵素タンパク質。
- 前記酵素は、マンガンイオン、コバルトイオンまたはニッケルイオンにより活性が増加するものである、請求項1に記載の酵素タンパク質。
- 請求項1~4のいずれか一項に記載のフルクトース-6-リン酸エピマー化酵素、前記酵素タンパク質を発現する微生物、前記酵素タンパク質を発現する形質転換微生物、前記微生物の菌体、前記微生物の菌体破砕物、前記微生物の培養物、前記微生物の培養上清液、前記微生物の培養上清液の濃縮物およびこれらの粉末からなる群より選択された1種以上を含む、アルロース生産用組成物。
- 前記組成物は、アルロース6-リン酸の脱リン酸化酵素、これを発現する微生物または前記微生物の培養物を追加的に含む、請求項5に記載のアルロース生産用組成物。
- 前記組成物は、マンガンイオン、コバルトイオンおよびニッケルイオンからなる群より選択された1種以上の金属イオンを追加的に含むものである、請求項5に記載のアルロース生産用組成物。
- 前記組成物は、ブドウ糖6-リン酸をフルクトース-6-リン酸に転換する異性化酵素、これを発現する微生物または前記微生物の培養物を追加的に含む、請求項5に記載のアルロース生産用組成物。
- 前記組成物は、(a)(i)デンプン、マルトデキストリン、スクロースまたはその組み合わせ;(ii)リン酸(phosphate);(iii)アルロース-6-リン酸脱リン酸化酵素;(iv)ブドウ糖-6-リン酸-異性化酵素;(v)ホスホグルコムターゼまたはブドウ糖リン酸化酵素;および(vi)α-グルカノホスホリラーゼ、デンプンホスホリラーゼ、マルトデキストリンホスホリラーゼ、スクロースホスホリラーゼ、α-アミラーゼ、プルラナーゼ、イソアミラーゼ、グルコアミラーゼまたはスクラーゼ;または
(b)前記項目(a)の酵素を発現する微生物または前記微生物の培養物を追加的に含む、アルロース6-リン酸の脱リン酸化酵素を追加的に含む、請求項5に記載のアルロース生産用組成物。 - 請求項1~4のいずれか一項に記載のフルクトース-6-リン酸エピマー化酵素を利用して、フルクトース-6-リン酸をアルロース-6-リン酸に転換させる工程を含む、アルロースを製造する方法。
- 前記アルロース-6-リン酸にフィターゼ(phytase)、これを発現する微生物、または前記微生物の培養物を接触させることで、前記アルロース-6-リン酸をアルロースに転換する工程を追加的に含む、請求項10に記載の方法。
- 前記フルクトース-6-リン酸をアルロース-6-リン酸に転換させる工程は、40~70℃の反応温度およびpH6~8の反応pHで行われるものである、請求項10に記載の方法。
- ヘキソキナーゼ(hexokinase)を利用して、果糖または果糖含有物質からフルクトース-6-リン酸を製造する工程を追加的に行うものである、請求項10に記載の方法。
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Citations (5)
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WO2017002978A1 (ja) * | 2015-07-02 | 2017-01-05 | 協和発酵バイオ株式会社 | 希少糖の製造法 |
WO2018112139A1 (en) * | 2016-12-14 | 2018-06-21 | Bonumose Llc | Enzymatic production of d-allulose |
WO2018169957A1 (en) * | 2017-03-13 | 2018-09-20 | Bonumose Llc | Enzymatic production of hexoses |
JP2019522477A (ja) * | 2016-06-30 | 2019-08-15 | シージェイ チェイルジェダン コーポレイション | 新規な耐熱性のフルクトース−6−リン酸−3−エピメラーゼ及びそれを用いたアルロース製造方法 |
JP2022522693A (ja) * | 2019-05-21 | 2022-04-20 | シージェイ チェイルジェダン コーポレーション | 副反応性が低いリブロースリン酸3-エピメラーゼのモチーフ及びそれを含む酵素 |
Family Cites Families (3)
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---|---|---|---|---|
KR101318422B1 (ko) * | 2013-04-09 | 2013-10-15 | 주식회사 삼양제넥스 | D-사이코스 에피머화 효소, 및 이를 이용하는 사이코스 생산방법 |
KR102063908B1 (ko) * | 2017-12-27 | 2020-01-08 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규 내열성 과당-6-인산 3-에피머화 효소 및 이를 이용한 알룰로스 제조방법 |
KR102055875B1 (ko) * | 2017-12-27 | 2019-12-13 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규 내열성 과당-6-인산 3-에피머화 효소 및 이를 이용한 알룰로스 제조방법 |
-
2020
- 2020-10-28 WO PCT/KR2020/014808 patent/WO2021086010A1/ko unknown
- 2020-10-28 JP JP2022525218A patent/JP2023500269A/ja active Pending
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017002978A1 (ja) * | 2015-07-02 | 2017-01-05 | 協和発酵バイオ株式会社 | 希少糖の製造法 |
JP2019522477A (ja) * | 2016-06-30 | 2019-08-15 | シージェイ チェイルジェダン コーポレイション | 新規な耐熱性のフルクトース−6−リン酸−3−エピメラーゼ及びそれを用いたアルロース製造方法 |
WO2018112139A1 (en) * | 2016-12-14 | 2018-06-21 | Bonumose Llc | Enzymatic production of d-allulose |
WO2018169957A1 (en) * | 2017-03-13 | 2018-09-20 | Bonumose Llc | Enzymatic production of hexoses |
JP2022522693A (ja) * | 2019-05-21 | 2022-04-20 | シージェイ チェイルジェダン コーポレーション | 副反応性が低いリブロースリン酸3-エピメラーゼのモチーフ及びそれを含む酵素 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
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D9TQJ4_THETC, JPN6023020604, 8 May 2019 (2019-05-08), ISSN: 0005175750 * |
RIBULOSE-PHOSPHATE 3-EPIMERASE [CLOSTRIDIUM LUNDENSE] NCBI REFERENCE SEQUENCE: WP_027625682.1, JPN6023020605, 2 June 2019 (2019-06-02), ISSN: 0005175749 * |
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